Javascript ayeuna ditumpurkeun dina panyungsi anjeun. Sababaraha fitur dina halaman wéb ieu moal tiasa dianggo nalika javascript ditumpurkeun.
Daftar nganggo data khusus anjeun sareng obat khusus anu dipikaresep teras kami bakal cocogkeun inpormasi anu anjeun pasihan sareng artikel dina database kami anu lengkep sareng langsung ngirim salinan PDF ka anjeun via email.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 1 Universitas Kedokteran, 1, 7 Livia Catania, Catania, 95123, Italia;2 Puseur pikeun Onkologi Experimental na Hematology, AOU Policlinico "G.Rodolico - San Marco", Catania , 95123, Italia; 3 Onkologi médis, AOU Policlinico "G. Rodolico - San Marco", Catania, 95123, Italia; 4 Médis genetik, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italia; 5 Genetika Kedokteran, ASP, Syracuse, 96100, Italia; 6 Departemen Élmu Biomédis sareng Biotéhnologi, Universitas Catania, Genetika Médis, Catania, Italia, 95123; 7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italia Komunikasi: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected]; [email protected] Tujuan: Mutasi germline dina BRCA1 sareng BRCA2 sareng kanker payudara (BC) anu parantos ditetepkeun, ovarium (OC) sareng anu sanésna anu aya hubunganana sareng résiko kanker salami hirup. Tés pikeun gén BRCA mangrupikeun konci pikeun meunteun résiko individu, ogé pikeun mendakan metode pencegahan dina pamawa séhat sareng nyaluyukeun pangobatan dina pasien kanker. Prévalénsi parobahan BRCA1 sareng BRCA2 rupa-rupa pisan di sakumna daérah géografis, sareng sanaos data aya ngeunaan varian patogén BRCA dina kulawarga Sisilia, panilitian anu khusus narékahan populasi di Sisilia wétan masih kurang. Tujuan panilitian kami nyaéta pikeun nalungtik insiden sareng distribusi parobahan germline patogén BRCA dina kohort pasien BC ti Sisilia wétan sareng pikeun meunteun hubunganana sareng sipat BC khusus nganggo sekuensing generasi salajengna. Ayana parobahan anu aya hubunganana sareng tingkat tumor sareng indéks proliferasi. HASIL: Sacara umum, 35 pasien (9%) ngagaduhan varian patogén BRCA, 17 (49%) dina BRCA1 sareng 18 (51%) dina BRCA2. Parobihan BRCA1 nyebar dina pasien BC triple-negatif, sedengkeun mutasi BRCA2 langkung umum dina pasien BC luminal. Dibandingkeun sareng non-panyabab, subjek anu gaduh varian BRCA1 ngagaduhan tingkat tumor sareng indéks proliferatif anu langkung luhur sacara signifikan. Kacindekan: Panemuan kami nyayogikeun tinjauan status mutasi BRCA dina pasien BC ti Sisilia wétan sareng mastikeun peran analisis NGS dina ngaidentipikasi pasien anu gaduh BC turun-tumurun. Sacara umum, data ieu saluyu sareng bukti sateuacana anu ngadukung skrining BRCA pikeun pencegahan sareng pengobatan kanker anu leres dina pamawa mutasi.
Kanker payudara (BC) nyaéta panyakit ganas anu paling umum di sakumna dunya sareng kanker anu paling mematikan dina awéwé.1 Fitur biologis anu nangtukeun prognosis BC sareng paripolah klinis parantos dikaji sacara éksténsif sareng sabagian dijelaskeun kana waktosna. Nyatana, sababaraha pananda surogat ayeuna dianggo pikeun ngaklasifikasikeun BC kana subtipe molekuler anu béda. Éta nyaéta éstrogén (ER) sareng/atanapi reséptor progesteron (PgR), amplifikasi reséptor faktor pertumbuhan épidermal manusa 2 (HER2), indéks proliferasi Ki-67 sareng tingkat tumor (G).2 Kombinasi variabel ieu ngaidentipikasi kategori BC ieu: 1) Tumor luminal, anu nunjukkeun éksprési ER sareng/atanapi PgR, nyumbang 75% tina BC. Tumor ieu salajengna dibagi kana Luminal A, nalika Ki-67 di handap 20% sareng HER2 négatip, sareng Luminal B, nalika Ki-67 sami sareng atanapi di luhur 20% sareng ayana amplifikasi HER2, henteu paduli indéks proliferasi; 2) Tumor HER2+ anu ER sareng PgR négatip tapi nunjukkeun amplifikasi HER2. Grup ieu nyumbang 10% tina sadaya tumor payudara; 3) Kanker payudara triple-negative (TNBC), anu henteu némbongkeun éksprési ER sareng PgR sareng amplifikasi HER2, nyumbang sakitar 15% tina kanker payudara.2-4
Di antara subtipe BC ieu, tingkat tumor sareng indéks proliferasi ngagambarkeun biomarker cross-sectional anu sacara langsung sareng mandiri aya hubunganana sareng agresivitas tumor sareng prognosis.5,6
Salian ti fitur biologis anu kasebat di luhur, peran parobahan genetik turunan anu ngarah kana kamekaran BC parantos janten beuki penting salami sababaraha taun ka pengker.7 Sakitar 1 ti 10 tumor payudara diwariskeun kusabab parobahan germline dina gén khusus.8 Dua studi epidemiologis ageung anu ngalibetkeun langkung ti 180.000 awéwé nembe ngaidentipikasi sakelompok dalapan gén (nyaéta, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, sareng RAD51D) anu utamina tanggung jawab pikeun BC turunan. Di antara gén-gén ieu, BRCA1 sareng BRCA2 (salajengna disebut BRCA1/2) nunjukkeun korélasi anu paling kuat sareng kamekaran tumor payudara.9-12 Kanyataanna, mutasi germline BRCA1/2 sacara signifikan ningkatkeun résiko BC salami hirup ogé malignansi sanésna, kalebet ovarium, prostat, pankréas, kolorektal, sareng melanoma. Ti umur 13 dugi ka 80 taun, insiden kumulatif BC nyaéta 72% dina awéwé anu gaduh varian patogén BRCA1 (PV) sareng 69% dina awéwé anu gaduh BRCA2. PV.14
Anu penting, hiji publikasi anyar nunjukkeun yén résiko BC gumantung kana jinis PV. Kanyataanna, dibandingkeun sareng varian truncating patogén, varian missense anu mencolok, khususna dina gén BRCA1, aya hubunganana sareng turunna résiko BC, khususna dina awéwé anu langkung sepuh.15
Ayana BRCA1 atanapi BRCA2 PV aya hubunganana sareng fitur biologis sareng klinikopatologis anu béda.16,17 BC anu aya hubunganana sareng BRCA1 condong sacara klinis agrésif, kirang diferensiasi, sareng proliferatif pisan. Tumor ieu biasana triple negative sareng gaduh umur awal. Tumor anu lumangsung dina pasien anu dimutasi BRCA2 biasana nunjukkeun tingkatan anu sedeng dugi ka diferensiasi anu saé sareng indéks proliferatif variabel. Tumor ieu langkung umum dina lumen B sareng biasana lumangsung dina déwasa anu langkung sepuh.16-18 Anu penting, mutasi dina BRCA1 sareng BRCA2 ningkatkeun sensitivitas kana perlakuan khusus, kalebet uyah platinum sareng ubar anu dituju sapertos poli (ADP-ribosa) inhibitor polimérase (PARPi).19,20
Salila sababaraha taun ka pengker, palaksanaan sekuensing generasi salajengna (NGS) dina prakték klinis parantos ngamungkinkeun ningkatna jumlah pasien BC pikeun ngalaman tés molekuler pikeun sindrom karentanan kanker, kalebet BRCA1/2.21 Dina waktos anu sami, definisi dumasar kana kriteria anu tepat ngeunaan riwayat kulawarga, démografi, sareng karakteristik klinikopatologis pikeun langkung ngaidentipikasi individu anu pantes diuji BRCA1/2.22,23 Dina kontéks ieu, bukti akumulasi dina skrining BRCA1/2 dina populasi khusus, nyorot bédana di sakumna daérah géografis.24–27 Sanaos aya laporan ngeunaan kohort BC di Sisilia kulon, langkung sakedik data anu sayogi ngeunaan skrining BRCA1/2 dina populasi Sisilia wétan.28,29
Di dieu kami ngajelaskeun hasil skrining germline BRCA1/2 dina pasien BC ti Sisilia wétan, anu langkung ngahubungkeun ayana mutasi BRCA1 atanapi BRCA2 sareng fitur klinikopatologis utama tumor ieu.
Hiji studi rétrospéktif dilaksanakeun di "Pusat Onkologi sareng Hematologi Ékspériméntal" di Rumah Sakit Policlinico. Rodolico - San Marco di Catania. Ti Januari 2017 dugi ka Maret 2021, total 455 pasien anu ngagaduhan kanker payudara sareng ovarium, melanoma, pankreas atanapi prostat dirujuk ka laboratorium diagnostik molekuler kami pikeun tés genetik BRCA/2. Panilitian ieu dilaksanakeun saluyu sareng Déklarasi Helsinki, sareng sadaya pamilon masihan idin tinulis sateuacan analisis molekuler.
Ciri-ciri histologis sareng biologis (ER, PgR, status HER2, Ki-67, sareng tingkatan) BC dipeunteun dina biopsi inti atanapi sampel bedah, ngan ukur mertimbangkeun komponén tumor anu agrésif. Dumasar kana ciri-ciri ieu, BC diklasifikasikeun sapertos kieu: luminal A (ER+ sareng/atanapi PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ sareng/atanapi PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER sareng/atanapi PgR+, HER2+), HER2+ (ER sareng PgR-, HER2+) atanapi triple negative (ER sareng PgR-, HER2-).
Sateuacan meunteun status mutasi BRCA1 sareng BRCA2, tim multidisiplin anu kalebet ahli onkologi, ahli genetika, sareng psikolog ngalaksanakeun konsultasi genetika tumor pikeun unggal pasien pikeun nangtukeun ayana BRCA1 sareng/atanapi BRCA1. atanapi individu anu résiko luhur PV dina gén BRCA2. Seleksi pasien dilaksanakeun numutkeun pedoman Italian Society of Medical Oncology (AIOM) sareng rekomendasi lokal Sisilia.30,31 Kriteria ieu kalebet: (i) riwayat kulawarga varian patogén anu dipikanyaho dina gén susceptibility (contona, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) lalaki anu gaduh BC; (iii) anu gaduh BC sareng OC; (iv) awéwé anu gaduh BC <36 taun, TNBC <60 taun, atanapi BC bilateral <50 taun; (v) riwayat médis pribadi BC <50 taun sareng sahenteuna hiji dulur tingkat kahiji: (a) BC <50 taun; (b) OC non-mucinous sareng non-borderline tina sagala umur; (c) BC bilateral; (d) BC lalaki; (e) kanker pankreas; (f) kanker prostat; (vi) dua atanapi langkung Riwayat pribadi BC > 50 taun sareng riwayat kulawarga BC, OC, atanapi kanker pankreas pikeun baraya anu dulur tingkat kahiji silih (kalebet baraya anu dulur tingkat kahiji sareng anjeunna); (vii) Riwayat pribadi OC sareng sahenteuna hiji baraya tingkat kahiji: (a) BC <50 taun; (b) NOC; (c) BC bilateral; (d) BC lalaki; (vii) awéwé kalayan OC serous tingkat luhur.
Sampel getih periferal 20 mL dicandak ti unggal pasien teras dikumpulkeun kana tabung EDTA (BD Biosciences). DNA genomik diisolasi tina sampel getih lengkep 0,7 mL nganggo QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italia) numutkeun pitunjuk produsén sareng dialirkeun kana Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Ngalakukeun kuantifikasi. Pangayaan target sareng persiapan perpustakaan dilaksanakeun ku Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, siap dimuat kana Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit pikeun persiapan perpustakaan otomatis numutkeun pitunjuk produsén. Kit ieu diwangun ku dua kolam primer PCR multipleks anu tiasa dianggo pikeun nalungtik sadaya gén BRCA1 (NM_007300.3) sareng BRCA2 (NM_000059.3). Sacara singget, 15 µL tina unggal DNA sampel anu diéncérkeun (10 ng) ditambahkeun kana pelat barcode pikeun persiapan perpustakaan sareng sadaya réagen sareng bahan habis pakai dimuat dina instrumen Ion Chef™. Persiapan perpustakaan otomatis sareng pangumpulan perpustakaan sampel barcode teras dilaksanakeun dina instrumen Ion Chef™. Jumlah perpustakaan anu disiapkeun teras dipeunteun ku Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) numutkeun pitunjuk produsén. Pamungkas, perpustakaan digabungkeun dina babandingan equimolar dina tabung sampel perpustakaan Ion Chef™ (tabung barcoded). sareng dimuat kana instrumen Ion Chef™. Sekuensing dilaksanakeun nganggo instrumen Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) nganggo Chip Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Analisis data dilaksanakeun ku Amplicon Suite (SmartSeq srl) sareng Ion Reporter Software.
Sadaya nomenklatur varian nuturkeun pedoman ayeuna tina Human Genome Variation Consortium, anu sayogi online (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Signifikansi klinis tina varian BRCA1/2 ditetepkeun nganggo klasifikasi International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) sareng konsultasi ka database anu béda sapertos ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, sareng UMD. Klasifikasi ieu ngawengku lima kategori résiko anu béda: jinak (kategori I), kamungkinan jinak (kategori II), varian anu teu pasti (VUS, kategori III), kamungkinan patogén (kategori IV), sareng patogén (kategori V). VarSome ogé nganalisis pangaruh mutasi kana struktur sareng fungsi protéin, alat informatif kalayan aksés ka 30 database.32
Pikeun nangtukeun poténsi signifikansi klinis pikeun unggal VUS, algoritma prediksi protéin komputasi ieu dianggo: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) sareng Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Varian anu diklasifikasikeun salaku kelas 1 sareng 2 dianggap tipe liar.
Sekuensing Sanger mastikeun ayana unggal varian patogén. Sacara singget, sapasang primer spésifik dirancang pikeun unggal varian anu dideteksi ku ngagunakeun runtuyan rujukan gén BRCA1 sareng BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 sareng NG_012772.3, NM_000059.3, masing-masing). Ku alatan éta, PCR anu ditujukeun dilaksanakeun dituturkeun ku sekuensing Sanger.
Pasén anu hasil tésna négatif pikeun gén BRCA1/2 diuji ku amplifikasi probe anu gumantung kana ligasi multipleks (MLPA) numutkeun pitunjuk produsén pikeun meunteun ayana pangaturan ulang génomik anu ageung (LGR). Sacara singget, sampel DNA didenaturasi sareng dugi ka 60 probe spésifik gén BRCA1 sareng BRCA2 dianggo, masing-masing ngadeteksi runtuyan DNA spésifik anu panjangna sakitar 60 nukléotida. Produk amplifikasi probe, anu diwangun ku sakumpulan amplikon PCR anu unik, teras dianalisis ku éléktroforésis kapiler sareng ku parangkat lunak Cofalyser.Net digabungkeun sareng tabel Cofalyser spésifik angkatan anu pas (www.mrcholland.com).
Variabel klinikopatologis anu dipilih (tingkatan histologis sareng indéks proliferasi Ki-67%) dikaitkeun sareng ayana BRCA1/2 PV, diitung nganggo parangkat lunak Prism v. 8.4 nganggo uji pasti Fisher kalayan nganggap nilai-p <0,05 signifikan.
Antara Januari 2017 sareng Maret 2021, 455 pasien disaring pikeun mutasi germline BRCA1/2. Tés mutasi dilaksanakeun di Pusat Onkologi sareng Hematologi Ékspériméntal Rumah Sakit Policlinico. Numutkeun pedoman Sisilia (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), Rodolico of Catania - San Marco ”sacara umum, 389 pasien Aya kanker payudara, 37 kanker ovarium, 16 kanker pankreas, 8 kanker prostat sareng 5 melanoma. Distribusi pasien numutkeun jinis kanker sareng hasil analisis dipidangkeun dina Gambar 1.
Gambar 1 nunjukkeun bagan alir anu nunjukkeun tinjauan umum panilitian. Pasén anu ngagaduhan tumor payudara, melanoma, pankréas, prostat, atanapi ovarium diuji pikeun mutasi dina gén BRCA1 sareng BRCA2.
Singgetan: PV, varian patogén; VUS, varian anu teu pasti pentingna; WT, runtuyan BRCA1/2 tipe liar.
Kami sacara selektif museurkeun panilitian kami kana kohort kanker payudara. Pasén-pasén éta gaduh umur rata-rata 49 taun (rentang 23-89) sareng didominasi ku awéwé (n = 376, atanapi 97%).
Ti subjék ieu, 64 (17%) ngagaduhan mutasi BRCA1/2 sareng sadayana awéwé. Tilu puluh lima (9%) ngagaduhan PV sareng 29 (7,5%) ngagaduhan VUS. Tujuh belas (48,6%) tina 35 varian patogén lumangsung dina BRCA1 sareng 18 (51,4%) dina BRCA2, sedengkeun 5 VUS lumangsung dina BRCA1 (17,2%) sareng 24 (82,8%) dina BRCA2 (Gambar 1 sareng 2). LGR henteu aya dina analisis MLPA.
Gambar 2. Analisis mutasi BRCA1 sareng BRCA2 dina 389 pasien kanker payudara. (A) Distribusi varian patogén (PV) (beureum), varian anu teu pasti pentingna (VUS) (oranyeu), sareng WT (biru) dina 389 pasien kanker payudara; (B) 389 pasien kanker payudara Tilu puluh lima (9%) ngagaduhan varian patogén BRCA1/2 (PV). Di antarana, 17 (48,6%) mangrupikeun pamawa BRCA1 PV (beureum poék) sareng 18 (51,4%) mangrupikeun pamawa BRCA2 (beureum ngora); (C) 29 (7,5%) tina 389 subjek mawa VUS, 5 (17,2%) gén BRCA1 (oranyeu poék) sareng 24 (82,8%) gén BRCA2 (oranyeu ngora).
Singgetan: PV, varian patogén; VUS, varian anu teu pasti pentingna; WT, runtuyan BRCA1/2 tipe liar.
Salajengna, urang nalungtik Prévalénsi subtipe molekuler BC dina pasien anu ngagaduhan BRCA1/2 PV. Distribusi na kalebet 2 (5,7%) luminal A, 15 (42,9%) luminal B, 3 (8,6%) luminal B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ sareng 13 (37,1%) pasien TNBC. Di antara pasien BRCA1-positip, 5 (29,4%) ngagaduhan luminal B BC, 2 (11,8%) ngagaduhan panyakit HER2+, sareng 10 (58,8%) ngagaduhan TNBC. Tumor tanpa mutasi BRCA1 boh luminal A atanapi luminal B-HER2+ (Gambar 3). Dina subkelompok BRCA2-positip, 10 (55,6%) tumor nyaéta luminal B, 3 (16,7%) nyaéta luminal B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC sareng 2 (11,1%) nyaéta luminal A (Gambar 3). Teu aya tumor HER2+. aya dina grup ieu. Ku kituna, mutasi BRCA1 nyebar dina pasien TNBC, sedengkeun parobahan BRCA2 dominan dina individu lumen B.
Gambar 3 Prévalénsi subtipe kanker payudara dina pasien anu ngagaduhan varian patogén dina BRCA1 sareng BRCA2. Histogram nunjukkeun distribusi PV BRCA1- (beureum poék) sareng BRCA2- (beureum ngora) di antara subtipe molekuler pasien kanker payudara. Angka anu dilaporkeun dina unggal kotak ngagambarkeun perséntase pasien anu ngagaduhan PV BRCA1 sareng BRCA2 pikeun unggal subtipe kanker payudara.
Singgetan: PV, varian patogén; HER2+, reséptor faktor pertumbuhan épidermal manusa 2 positif; TNBC, kanker payudara triple-negatif.
Salajengna, urang meunteun jinis sareng lokalisasi gén tina PV BRCA1 sareng BRCA2. Dina PV BRCA1, urang niténan 7 varian nukléotida tunggal (SNV), 6 delesi, 3 duplikasi sareng 1 sisipan. Ngan hiji mutasi (c.5522delG) ngawakilan pamanggihan énggal. PV BRCA1 anu paling umum dideteksi dina duanana subjek nyaéta c.5035_5039delCTAAT. Parobihan ieu ngalibatkeun delesi lima nukléotida (CTAAT) dina ékson BRCA1 15, anu ngahasilkeun substitusi asam amino leusin ku tirosin dina kodon 1679, sareng kusabab frameshift translasi sareng kodon eureun alternatif anu diprediksi nyababkeun pangurangan protéin prématur. Sadaya parobihan sanésna dideteksi ngan ukur dina hiji kasus. Anu penting, salah sahiji PV anu dilaporkeun ayana di daérah konsensus situs sambatan (c.4357 + 1G>T) (Tabel 1).
Ngeunaan BRCA2 PV, urang niténan 6 delesi, 6 SNV sareng 2 duplikasi. Teu aya parobahan anu kapanggih anu anyar. Tilu mutasi kambuh dina populasi urang, c.428dup sareng c.8487+1G>A anu dititénan dina 3 subjek, dituturkeun ku c.5851_5854delAGTT anu dicandak dina dua kasus. Parobahan c.428dup ngalibatkeun pangulangan C dina ékson 5 BRCA2, anu diprediksi bakal ngodekeun protéin anu dipotong sareng henteu fungsional. Mutasi c.8487+1G>A lumangsung di daérah intron intron 19 BRCA2 (± 1,2) sareng mangaruhan runtuyan konsensus splicing, ngahasilkeun splicing anu dirobih anu ngahasilkeun protéin anu teu normal atanapi teu aya. Varian patogén c.5851_5854delAGTT disababkeun ku delesi 4-nukléotida tina posisi nukléotida 5851 dugi ka 5854 dina ékson kode 10 tina gén BRCA2 sareng ngahasilkeun hiji frameshift translasi kalayan kodon eureun alternatif anu diprediksi (p.S1951WfsTer). Anu penting, sapertos anu dilaporkeun sateuacanna, duanana parobahan c.631G>A sareng c.7008-2A>T dideteksi dina pasien anu sami.34 Mutasi anu munggaran ngalibatkeun panggantian adénosin (A) dina ékson BRCA2 7 ku nukléotida anu ngandung guanin (G) anu ngahasilkeun parobahan valin ka isoleusin dina kodon 211, isoleusin Asam amino mangrupikeun asam amino kalayan sipat anu sami pisan. Parobihan ieu mangaruhan splicing mRNA normal. Varian kadua ayana di daérah intron sareng ngahasilkeun substitusi A ganda ka timin (T) sateuacan ékson 13 tina gén anu ngodekeun BRCA2. Parobihan c.7008-2A>T tiasa ngahasilkeun sababaraha transkrip kalayan panjang anu béda. Salajengna, dina kelompok PV BRCA2, 4 tina 18 parobahan (22,2%) nyaéta intron.
Teras urang memetakan mutasi anu ngabahayakeun BRCA1/2 dina domain fungsional sareng daérah anu ngabeungkeut protéin (Gambar 4). Dina gén BRCA1, 50% PV aya di daérah klaster kanker payudara (BCCR), sedengkeun 22% mutasi aya di daérah klaster kanker ovarium (OCCR) (Gambar 4A). Dina PV BRCA2, 35,7% varian aya di daérah BCCR sareng 42,8% mutasi aya di OCCR (Gambar 4B). Salajengna, urang meunteun lokasi PV dina domain protéin BRCA1 sareng BRCA2. Pikeun protéin BRCA1, urang mendakan tilu PV dina domain loop sareng coil coil, sareng dua mutasi dina domain BRCT (Gambar 4A). Pikeun protéin BRCA2, 4 PV dipetakan kana domain pangulangan BRC, sedengkeun 3 parobahan intron sareng 3 éksonik dideteksi dina domain oligo/oligosakarida-ngabeungkeut (OB) sareng menara (T) (Gambar 4B).
Gambar 4. Gambar skematis tina protéin BRCA1 sareng BRCA2 sareng lokalisasi varian patogén. Gambar ieu nunjukkeun distribusi varian patogén BRCA1 (A) sareng BRCA2 (B) dina pasien kanker payudara. Mutasi éksonik dipidangkeun dina warna biru, sedengkeun varian intron dipidangkeun dina warna oranyeu. Jangkungna bar ngagambarkeun jumlah kasus. Protéin BRCA1 sareng BRCA2 sareng domain fungsionalna dilaporkeun. (A) Protéin BRCA1 ngandung domain loop (RING) sareng sekuen lokalisasi nuklir (NLS), domain coiled-coil, domain klaster SQ/TQ (SCD), sareng domain C-terminal BRCA1 (BRCT). (B) Protéin BRCA2 ngandung dalapan pangulangan BRC, domain pangiket DNA kalayan domain héliks (Hélical), tilu lipatan pangiket oligonukleotida/oligosakarida (OB), domain menara (T), sareng An NLS di sisi C. Daérah anu disebut Daérah Klaster Kanker Payudara (BCCR) sareng Daérah Klaster Kanker Ovarium (OCCR) dipidangkeun di handap. *Ngagambarkeun mutasi anu nangtukeun eureun kodon.
Teras kami nalungtik fitur klinikopatologis BC anu tiasa aya hubunganana sareng ayana BRCA1/2 PV. Catetan klinis lengkep sayogi pikeun 181 pasien BRCA1/2-negatif (non-carrier) sareng sadaya carrier (n = 35). Aya korélasi antara laju proliferasi tumor sareng tingkatna.
Kami ngitung distribusi Ki-67 dumasar kana median kohort kami (25%, rentang <10-90%). Subjék anu gaduh Ki-67 < 25% dihartikeun salaku "Ki-67 handap", sedengkeun individu anu gaduh nilai ≥ 25% dianggap "Ki-67 luhur". Béda Ki-67 anu signifikan (p <0,01) kapanggih antara anu henteu gaduh pamawa sareng pamawa PV BRCA1 (Gambar 5A).
Gambar 5 Korélasi Ki-67 sareng distribusi kelas dina awéwé kanker payudara kalayan sareng tanpa BRCA1 sareng BRCA2 PV. (A) Boxplot anu nunjukkeun nilai median Ki-67 dina 181 pasien BC non-carrier dibandingkeun pasien BRCA1 (18) atanapi BRCA2 (17) PV. Nilai P di handap 0,5 dianggap signifikan sacara statistik. (B) Histogram anu ngagambarkeun panempatan pasien kanker BC kana kelompok kelas histologis (G2 sareng G3) numutkeun status mutasi BRCA1 sareng BRCA2 (subjék WT, operator BRCA1 sareng BRCA2 PV).
Kitu ogé, urang nalungtik naha tingkat tumor aya hubunganana sareng ayana BRCA1/2 PV. Kusabab G1 BC teu aya dina populasi urang, urang ngabagi pasien kana dua kelompok (G2 atanapi G3). Saluyu sareng hasil Ki-67, analisis ngungkabkeun korélasi anu signifikan sacara statistik antara tingkat tumor sareng mutasi BRCA1, kalayan proporsi tumor G3 anu langkung luhur dina pamawa BRCA1 dibandingkeun sareng anu sanés pamawa (p <0,005) (Gambar 5B).
Kamajuan dina téknologi sekuensing DNA parantos ngamungkinkeun kamajuan anu teu acan pernah aya dina uji genetik BRCA1/2, kalayan implikasi anu penting pikeun pasien anu gaduh riwayat kulawarga kanker. Nepi ka ayeuna, sakitar 20.000 varian BRCA1/2 parantos diidentifikasi sareng diklasifikasikeun numutkeun American Society of Medical Genetics 35 sareng sistem ENIGMA.35,36 Éta dipikanyaho umum yén spéktrum mutasi BRCA1/2 rupa-rupa pisan di sakumna daérah géografis.37 Di Italia, laju PV BRCA1/2 mimitian ti 8% dugi ka 37%, nunjukkeun variabilitas intra-nagara anu lega.38,39 Kalayan populasi ampir 5 juta, Sisilia mangrupikeun daérah kalima panggedéna di Italia dina hal jumlah penduduk. Sanaos aya data ngeunaan distribusi BRCA1/2 di Sisilia kulon, teu aya bukti anu éksténsif di bagian wétan pulo éta.
Panilitian kami mangrupikeun salah sahiji laporan munggaran ngeunaan insiden BRCA1/2 PV dina pasien BC di Sisilia wétan.28 Kami museurkeun analisis kami kana BC, sabab ieu mangrupikeun panyakit anu paling umum dina kohort kami.
Nalika nguji 389 pasien BC, 9% mawa PV BRCA1/2, anu disebarkeun rata antara BRCA1 sareng BRCA2. Hasil ieu saluyu sareng anu dilaporkeun sateuacanna dina populasi Italia.28 Anu pikaresepeun, 3% (13/389) tina kohort kami nyaéta lalaki. Tingkat ieu langkung luhur tibatan anu dipiharep pikeun kanker payudara lalaki (1% tina sadaya BC),40 ngagambarkeun pilihan populasi kami dumasar kana résiko mutasi BRCA1/2. Nanging, teu aya lalaki ieu anu ngembangkeun PV BRCA1/2, janten aranjeunna calon pikeun analisis molekuler salajengna pikeun ngaluarkeun ayana mutasi anu kirang umum sapertos PALB2, RAD51C sareng D, diantarana. Varian anu teu pasti pentingna dicandak dina 7% subjek dimana BRCA2 VUS katingali. Bahkan hasil ieu saluyu sareng bukti anu tos aya.28,41,42
Nalika urang nganalisis distribusi subtipe molekuler BC dina awéwé mutan BRCA1/2, urang mastikeun hubungan anu dipikanyaho antara TNBC sareng BRCA1 PV (58,8%) sareng antara luminal B BC sareng BRCA2 PV (55,6%).16,43 Tumor luminal A sareng HER2+ dina pamawa BRCA1 sareng BRCA2 PV saluyu sareng data literatur anu aya.16,43
Teras urang fokus kana jinis sareng lokasi PV BRCA1/2. Dina kohort urang, PV BRCA1 anu paling umum nyaéta c.5035_5039delCTAAT. Sanaos Incorvaia et al. henteu ngajelaskeun varian ieu dina kohort Sisilia maranéhanana, pangarang séjén parantos ngalaporkeun éta salaku germline BRCA1 PV.34 Sababaraha PV BRCA1 kapanggih dina kohort urang - contona c.181T>G, c.514del, c.3253dupA sareng c.5266dupC - anu parantos dititénan di Sisilia.28 Tina ieu, dua mutasi pangadeg BRCA1 (c.181T>G sareng c.5266dupC) umumna kapanggih dina urang Yahudi Ashkenazi di Éropa Wétan sareng Tengah (Polandia, Céko), Slovenia, Austria, Hungaria, Bélarusia sareng Jerman), 44,45 sareng, di Amérika Serikat sareng Argentina, nembe didefinisikeun salaku "varian germline recurrent" dina pasien Italia kalayan BC sareng OC. Varian 34c.514del sateuacanna diidentifikasi dina 8 pasien kanker payudara ti Sisilia kalér di Palermo sareng Messina. Anu pikaresepeun, bahkan Incorvaia et al. mendakan varian c.3253dupA dina sababaraha kulawarga di Catania.28 PV BRCA2 anu paling representatif nyaéta c.428dup, c.5851_5854delAGTT sareng varian intronik c.8487+1G>A, anu parantos dilaporkeun langkung rinci 28 dina pasien di Palermo kalayan c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV dititénan di rumah tangga di Sisilia kalér-kulon, utamina di daérah Trapani sareng Palermo, sedengkeun c.5851_5854delAGTT PV dititénan di rumah tangga di Sisilia kalér-kulon. Varian 8487+1G>A langkung umum dina subjek ti Messina, Palermo, sareng Caltanissetta.28 Rebbeck et al. sateuacanna parantos ngajelaskeun parobahan c.5851_5854delAGTT di Kolombia.37 PV BRCA2 anu sanés, c.631+1G>A, parantos kapendak dina pasien BC sareng OC ti Sisilia (Agrigento, Siracusa sareng Ragusa).28 Anu penting, urang niténan ayana dua varian BRCA2 (BRCA2 c.631G>A sareng c.7008-2A>T) dina pasien anu sami, anu urang anggap dipisahkeun dina mode cis, sapertos anu dilaporkeun sateuacanna sapertos kitu.34,46 Mutasi BRCA2 ieu memang sering dititénan di daérah Italia sareng parantos kapendak ngenalkeun kodon eureun prématur, mangaruhan panyambungan RNA utusan sareng nyababkeun protéin BRCA2 gagal.47,48
Kami ogé memetakan PV BRCA1 sareng BRCA2 di daérah OCCR sareng BCCR putatif tina domain protéin sareng gén. Daérah ieu dijelaskeun ku Rebbeck et al. salaku daérah résiko pikeun ngembangkeun kanker ovarium sareng payudara, masing-masing.49 Nanging, bukti ngeunaan hubungan antara lokasi varian germline sareng résiko kanker payudara atanapi ovarium tetep kontroversial.28,50-52 Dina populasi kami, PV BRCA1 utamina ayana di daérah BCCR, sedengkeun PV BRCA2 utamina ayana di daérah OCCR. Nanging, kami henteu tiasa mendakan hubungan antara daérah OCCR sareng BCCR putatif sareng fitur BC. Ieu tiasa disababkeun ku jumlah pasien anu terbatas kalayan mutasi BRCA1/2. Tina sudut pandang domain protéin, PV BRCA1 disebarkeun sapanjang sakumna protéin, sareng parobahan BRCA2 langkung dipikaresep kapanggih dina domain pangulangan BRC.
Pamungkas, urang ngahubungkeun fitur klinikopatologis BC sareng BRCA1/2 PV. Kusabab jumlah pasien anu kawates, urang ngan ukur mendakan korelasi anu signifikan antara Ki-67 sareng tingkat tumor. Sanaos penilaian sareng interpretasi Ki-67 tetep rada kontroversial, pastina yén tingkat proliferatif anu luhur aya hubunganana sareng ningkatna résiko kambuh panyakit sareng turunna survival. Dugi ka ayeuna, cutoff pikeun ngabédakeun antara Ki-67 "luhur" sareng "handap" nyaéta 20%. Nanging, ambang batas ieu henteu lumaku pikeun populasi pasien mutasi BRCA1/2 urang, anu gaduh nilai median Ki-67 25%. Trend dina tingkat Ki-67 anu luhur ieu tiasa dijelaskeun ku Prévalénsi dina kohort luminal B sareng TNBC urang, anu sababaraha tumor luminal A aya. Nanging, sababaraha bukti sigana nunjukkeun yén cutoff Ki-67 anu langkung luhur (25-30%) tiasa langkung saé ngastratifikasi pasien numutkeun prognosisna.53,54 Tina hasil analisis urang, korelasi anu signifikan henteu anéh. Kajadian antara Ki-67 anu luhur sareng tingkat sareng ayana BRCA1 PV. Kanyataanna, tumor anu aya hubunganana sareng BRCA1 mangrupikeun ciri khas TNBC sareng nunjukkeun fitur anu langkung agrésif.16,17
Dina kacindekanana, panilitian ieu nyayogikeun laporan ngeunaan status mutasi BRCA1/2 dina kohort BC ti Sisilia wétan. Sacara umum, panemuan kami saluyu sareng bukti anu tos aya, boh dina hal prévalénsi mutasi sareng fitur klinikopatologis dina BC. Langkung seueur panilitian dina populasi anu langkung ageung tina pasien BC mutan BRCA1/2, sapertos nganggo analisis mutasi anu dimekarkeun multigenome, diperyogikeun pikeun meunteun ayana PV anu béda sareng kirang sering tibatan BRCA1/2. Ieu bakal ngamungkinkeun idéntifikasi sareng manajemen anu leres pikeun ningkatna jumlah subjek anu résiko kanker kusabab mutasi genetik.
Kami mastikeun yén pasién parantos nandatanganan idin anu diinformasikeun pikeun ngaleupaskeun sampel tumorna sacara anonim pikeun tujuan panalungtikan. Sadaya pasién parantos nandatanganan idin anu diinformasikeun sacara tinulis numutkeun Déklarasi Helsinki. Numutkeun kawijakan AOU Policlinico "G.Rodolico - S.Marco", panilitian ieu dibébaskeun tina tinjauan étika sabab analisis BRCA1/2 dilaksanakeun numutkeun prakték klinis sareng sadaya pasién masihan idin anu diinformasikeun sacara tinulis. Pasién ogé satuju kana panggunaan datana pikeun tujuan panalungtikan.
Simkuring ngahaturkeun nuhun ka Prof. Paolo Vigneri kanggo bantosanna dina perawatan pasien kanker payudara sapertos anu dipénta ku Komite Étika.
Federica Martorana ngalaporkeun honoraria ti Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Pangarang anu sanésna nyatakeun teu aya konflik kapentingan dina karya ieu.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Statistik Kanker Global 2020: GLOBOCAN ngira-ngira insiden sareng mortalitas 36 kanker di 185 nagara di sakumna dunya. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660