Javascript kini dilumpuhkan dalam pelayar anda. Sesetengah ciri laman web ini tidak akan berfungsi apabila javascript dilumpuhkan.
Daftar dengan butiran khusus dan ubat khusus yang anda minati dan kami akan memadankan maklumat yang anda berikan dengan artikel dalam pangkalan data kami yang luas dan segera menghantar salinan PDF kepada anda melalui e-mel.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Klinik Perubatan Universiti Manzella, 6, 7 Livia Catania, Catania, 95123, Itali;2 Pusat Onkologi Eksperimen dan Hematologi, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Itali; 3 Onkologi Perubatan, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Itali; 4 Genetik Perubatan, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Itali; 5 Genetik Perubatan, ASP, Syracuse, 96100, Itali; 6 Jabatan Sains Bioperubatan dan Bioteknologi, Universiti Catania, Genetik Perubatan, Catania, Itali, 95123; 7 Institut Penyelidikan Oasi-IRCCS, Troina, 94018, Itali Komunikasi: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, emel [email protected]; [email protected] Tujuan: Mutasi germinal dalam BRCA1 dan BRCA2 dan kanser payudara (BC), ovari (OC) yang telah dikenal pasti dan lain-lain yang berkaitan dengan risiko kanser seumur hidup. Ujian untuk gen BRCA adalah kunci untuk menilai risiko individu, serta untuk mencari kaedah pencegahan dalam pembawa yang sihat dan menyesuaikan rawatan dalam pesakit kanser. Prevalens perubahan BRCA1 dan BRCA2 berbeza-beza secara meluas di seluruh wilayah geografi, dan walaupun data wujud mengenai varian patogen BRCA dalam keluarga Sicily, kajian yang menyasarkan populasi secara khusus di timur Sicily masih kurang. Tujuan kajian kami adalah untuk menyiasat kejadian dan taburan perubahan germinal patogen BRCA dalam kohort pesakit BC dari timur Sicily dan untuk menilai kaitannya dengan sifat BC tertentu menggunakan penjujukan generasi akan datang. Kehadiran perubahan berkorelasi dengan gred tumor dan indeks percambahan. KEPUTUSAN: Secara keseluruhan, 35 pesakit (9%) mempunyai varian patogen BRCA, 17 (49%) dalam BRCA1 dan 18 (51%) dalam BRCA2. Perubahan BRCA1 lazim dalam pesakit BC triple-negatif, manakala mutasi BRCA2 lebih biasa dalam pesakit BC luminal. Berbanding dengan bukan pembawa, subjek dengan varian BRCA1 mempunyai gred tumor dan indeks proliferatif yang jauh lebih tinggi. Kesimpulan: Penemuan kami memberikan gambaran keseluruhan status mutasi BRCA dalam pesakit BC dari timur Sicily dan mengesahkan peranan analisis NGS dalam mengenal pasti pesakit dengan BC keturunan. Secara keseluruhan, data ini selaras dengan bukti terdahulu yang menyokong saringan BRCA untuk pencegahan dan rawatan kanser yang betul dalam pembawa mutasi.
Kanser payudara (BC) merupakan keganasan yang paling biasa di seluruh dunia dan kanser paling berbahaya dalam kalangan wanita.1 Ciri-ciri biologi yang menentukan prognosis BC dan tingkah laku klinikal telah dikaji secara meluas dan sebahagiannya dijelaskan dari semasa ke semasa. Malah, beberapa penanda pengganti kini digunakan untuk mengklasifikasikan BC kepada subjenis molekul yang berbeza. Ia adalah reseptor estrogen (ER) dan/atau progesteron (PgR), amplifikasi reseptor faktor pertumbuhan epidermis manusia 2 (HER2), indeks percambahan Ki-67 dan gred tumor (G).2 Gabungan pembolehubah ini mengenal pasti kategori BC berikut: 1) Tumor luminal, yang menunjukkan ekspresi ER dan/atau PgR, menyumbang 75% daripada BC. Tumor ini dibahagikan lagi kepada Luminal A, apabila Ki-67 berada di bawah 20% dan HER2 negatif, dan Luminal B, apabila Ki-67 bersamaan atau melebihi 20% dan dengan kehadiran amplifikasi HER2, tanpa mengira indeks percambahan; 2) Tumor HER2+ yang ER dan PgR negatif tetapi menunjukkan amplifikasi HER2. Kumpulan ini menyumbang 10% daripada semua tumor payudara; 3) Kanser payudara tiga kali ganda negatif (TNBC), yang tidak menunjukkan ekspresi ER dan PgR serta amplifikasi HER2, menyumbang kira-kira 15% daripada kanser payudara.2-4
Antara subjenis BC ini, gred tumor dan indeks percambahan mewakili biomarker keratan rentas yang secara langsung dan bebas dikaitkan dengan keagresifan tumor dan prognosis.5,6
Selain ciri-ciri biologi yang dinyatakan di atas, peranan perubahan genetik yang diwarisi yang membawa kepada perkembangan BC telah menjadi semakin penting sejak beberapa tahun kebelakangan ini.7 Kira-kira 1 daripada 10 tumor payudara diwarisi disebabkan oleh perubahan germinal dalam gen tertentu.8 Dua kajian epidemiologi besar yang melibatkan lebih daripada 180,000 wanita baru-baru ini mengenal pasti sekumpulan lapan gen (iaitu, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, dan RAD51D) yang terutamanya bertanggungjawab untuk BC keturunan. Antara gen ini, BRCA1 dan BRCA2 (selepas ini dirujuk sebagai BRCA1/2) menunjukkan korelasi terkuat dengan perkembangan tumor payudara.9-12 Malah, mutasi germinal BRCA1/2 meningkatkan risiko BC sepanjang hayat serta keganasan lain dengan ketara, termasuk ovari, prostat, pankreas, kolorektal, dan melanoma. Dari umur 13 hingga 80 tahun, kejadian kumulatif BC adalah 72% pada wanita dengan varian patogenik BRCA1 (PV) dan 69% pada wanita dengan BRCA2 PV.14
Terutamanya, satu penerbitan baru-baru ini mencadangkan bahawa risiko BC bergantung pada jenis PV. Malah, berbanding dengan varian pemotongan patogenik, varian missense yang ketara, terutamanya dalam gen BRCA1, dikaitkan dengan pengurangan risiko BC, terutamanya pada wanita yang lebih tua.15
Kehadiran BRCA1 atau BRCA2 PV dikaitkan dengan ciri-ciri biologi dan klinikopatologi yang berbeza.16,17 BC yang berkaitan dengan BRCA1 cenderung secara klinikal agresif, kurang dibezakan, dan sangat proliferatif. Tumor ini biasanya triple negatif dan mempunyai usia permulaan yang awal. Tumor yang berlaku pada pesakit yang bermutasi BRCA2 biasanya menunjukkan gred sederhana hingga dibezakan dengan baik dan indeks proliferatif yang berubah-ubah. Tumor ini lebih biasa dalam lumen B dan biasanya berlaku pada orang dewasa yang lebih tua.16-18 Terutamanya, mutasi dalam BRCA1 dan BRCA2 meningkatkan kepekaan terhadap rawatan tertentu, termasuk garam platinum dan ubat yang disasarkan seperti perencat poli(ADP-ribosa) polimerase (PARPi).19,20
Sejak beberapa tahun kebelakangan ini, pelaksanaan penjujukan generasi akan datang (NGS) dalam amalan klinikal telah membolehkan peningkatan bilangan pesakit BC menjalani ujian molekul untuk sindrom kerentanan kanser, termasuk BRCA1/2.21 Pada masa yang sama, definisi berdasarkan kriteria yang tepat mengenai sejarah keluarga, demografi dan ciri-ciri klinikopatologi untuk mengenal pasti individu yang layak menjalani ujian BRCA1/2 dengan lebih baik.22,23 Dalam konteks ini, bukti terkumpul mengenai saringan BRCA1/2 dalam populasi tertentu, menonjolkan perbezaan merentasi kawasan geografi.24–27 Walaupun terdapat laporan mengenai kohort BC di barat Sicily, lebih sedikit data yang tersedia mengenai saringan BRCA1/2 dalam populasi timur Sicily.28,29
Kami huraikan di sini keputusan saringan germline BRCA1/2 dalam kalangan pesakit BC dari timur Sicily, yang seterusnya mengaitkan kehadiran mutasi BRCA1 atau BRCA2 dengan ciri klinikopatologi utama tumor ini.
Satu kajian retrospektif telah dijalankan di "Pusat Onkologi dan Hematologi Eksperimen" di Hospital Policlinico. Rodolico – San Marco di Catania. Dari Januari 2017 hingga Mac 2021, sejumlah 455 pesakit dengan kanser payudara dan ovari, melanoma, pankreas atau prostat telah dirujuk ke makmal diagnostik molekul kami untuk ujian genetik BRCA/2. Kajian ini dijalankan mengikut Deklarasi Helsinki, dan semua peserta memberikan persetujuan bertulis sebelum analisis molekul.
Ciri-ciri histologi dan biologi (ER, PgR, status HER2, Ki-67, dan gred) BC dinilai pada biopsi teras atau sampel pembedahan, dengan hanya mempertimbangkan komponen tumor yang agresif. Berdasarkan ciri-ciri ini, BC dikelaskan seperti berikut: luminal A (ER+ dan/atau PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ dan/atau PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER dan/atau PgR+, HER2+), HER2+ (ER dan PgR-, HER2+) atau triple negative (ER dan PgR-, HER2-).
Sebelum menilai status mutasi BRCA1 dan BRCA2, satu pasukan pelbagai disiplin termasuk pakar onkologi, pakar genetik dan ahli psikologi telah menjalankan rundingan genetik tumor untuk setiap pesakit bagi menentukan kehadiran BRCA1 dan/atau BRCA1, atau individu yang mempunyai risiko PV yang tinggi dalam gen BRCA2. Pemilihan pesakit telah dilakukan mengikut garis panduan Persatuan Onkologi Perubatan Itali (AIOM) dan cadangan tempatan Sicily.30,31 Kriteria ini termasuk: (i) sejarah keluarga varian patogen yang diketahui dalam gen kerentanan (contohnya, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) lelaki dengan BC; (iii) mereka yang mempunyai BC dan OC; (iv) wanita dengan BC <36 tahun, TNBC <60 tahun, atau BC bilateral <50 tahun; (v) sejarah perubatan peribadi BC <50 tahun dan sekurang-kurangnya seorang saudara darjah pertama: (a) BC <50 tahun; (b) OC bukan mucinous dan bukan sempadan bagi sebarang umur; (c) BC bilateral; (d) BC lelaki; (e) kanser pankreas; (f) kanser prostat; (vi) dua atau lebih Sejarah peribadi BC > 50 tahun dan sejarah keluarga BC, OC, atau kanser pankreas bagi saudara mara yang merupakan saudara darjah pertama antara satu sama lain (termasuk saudara mara yang dengannya dia merupakan saudara darjah pertama); (vii) Sejarah peribadi OC dan sekurang-kurangnya seorang saudara darjah pertama: (a) BC <50 tahun; (b) NOC; (c) BC bilateral; (d) BC lelaki; (vii) perempuan dengan OC serous gred tinggi.
Sampel darah periferal 20 mL telah diperoleh daripada setiap pesakit dan dikumpulkan ke dalam tiub EDTA (BD Biosciences). DNA genomik telah diasingkan daripada sampel darah penuh 0.7 mL menggunakan Kit Pengasingan QIAsymphony DSP DNA Midi (QIAGEN, Hilden, Itali) mengikut arahan pengilang dan diluluskan melalui Fluorometer Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Lakukan kuantifikasi. Pengayaan sasaran dan penyediaan pustaka dilakukan oleh Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, sedia untuk dimuatkan ke dalam Kit Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 untuk penyediaan pustaka automatik mengikut arahan pengilang. Kit ini terdiri daripada dua kolam primer PCR multipleks yang boleh digunakan untuk mengkaji semua gen BRCA1 (NM_007300.3) dan BRCA2 (NM_000059.3). Secara ringkasnya, 15 µL setiap DNA sampel yang dicairkan (10 ng) telah ditambahkan pada plat berkod untuk penyediaan pustaka dan semua reagen dan bahan habis pakai telah dimuatkan pada instrumen Ion Chef™. Penyediaan pustaka automatik dan pengumpulan pustaka sampel berkod kemudiannya dilakukan pada instrumen Ion Chef™. Bilangan pustaka yang disediakan kemudiannya dinilai oleh Fluorometer Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) mengikut arahan pengilang. Akhir sekali, pustaka digabungkan dalam nisbah equimolar dalam tiub sampel pustaka Ion Chef™ (tiub berkod). dan dimuatkan ke dalam instrumen Ion Chef™. Penjujukan telah dilakukan menggunakan instrumen Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) menggunakan Cip Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Analisis data telah dilakukan oleh Amplicon Suite (SmartSeq srl) dan Perisian Ion Reporter.
Semua tatanama varian mengikuti garis panduan semasa Konsortium Variasi Genom Manusia, yang tersedia dalam talian (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Kepentingan klinikal varian BRCA1/2 ditakrifkan menggunakan klasifikasi Konsortium Antarabangsa ENIGMA (Rangkaian Berasaskan Bukti untuk Mentafsir Alel Mutan Germinal, https://enigmaconsortium.org/) dan merujuk pangkalan data yang berbeza seperti ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, dan UMD. Klasifikasi ini merangkumi lima kategori risiko yang berbeza: jinak (kategori I), mungkin jinak (kategori II), varian yang tidak pasti kepentingannya (VUS, kategori III), mungkin patogenik (kategori IV), dan patogenik (kategori V). VarSome juga menganalisis kesan mutasi pada struktur dan fungsi protein, alat bermaklumat dengan akses kepada 30 pangkalan data.32
Untuk memberikan potensi kepentingan klinikal kepada setiap VUS, algoritma ramalan protein pengiraan berikut telah digunakan: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) dan Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Varian yang dikelaskan sebagai kelas 1 dan 2 dianggap jenis liar.
Penjujukan Sanger mengesahkan kehadiran setiap varian patogen. Secara ringkasnya, sepasang primer khusus direka bentuk untuk setiap varian yang dikesan dengan menggunakan jujukan rujukan gen BRCA1 dan BRCA2 (masing-masing NG_005905.2, NM_007294.3 dan NG_012772.3, NM_000059.3). Oleh itu, PCR yang disasarkan telah dijalankan diikuti dengan penjujukan Sanger.
Pesakit yang diuji negatif untuk gen BRCA1/2 telah diuji melalui amplifikasi prob yang bergantung kepada ligasi multipleks (MLPA) mengikut arahan pengilang untuk menilai kehadiran penyusunan semula genomik yang besar (LGR). Secara ringkasnya, sampel DNA dinyahnatur dan sehingga 60 prob khusus gen BRCA1 dan BRCA2 digunakan, setiap satu mengesan jujukan DNA tertentu dengan panjang kira-kira 60 nukleotida. Produk amplifikasi prob, yang terdiri daripada satu set amplikon PCR yang unik, kemudiannya dianalisis melalui elektroforesis kapilari dan oleh perisian Cofalyser.Net bersama-sama dengan jadual Cofalyser khusus kelompok yang sesuai (www.mrcholland.com).
Pembolehubah klinikopatologi yang dipilih (gred histologi dan indeks percambahan Ki-67%) dikaitkan dengan kehadiran BRCA1/2 PV, dikira menggunakan perisian Prism v. 8.4 menggunakan ujian tepat Fisher dengan mengandaikan nilai-p <0.05 adalah signifikan.
Antara Januari 2017 dan Mac 2021, 455 pesakit telah disaring untuk mutasi germinal BRCA1/2. Ujian mutasi telah dijalankan di Pusat Onkologi Eksperimental dan Hematologi Hospital Policlinico. Mengikut garis panduan Sicily (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), Rodolico of Catania – San Marco” secara keseluruhan, terdapat 389 pesakit. Terdapat kanser payudara, 37 kanser ovari, 16 kanser pankreas, 8 kanser prostat dan 5 melanoma. Taburan pesakit mengikut jenis kanser dan keputusan analisis ditunjukkan dalam Rajah 1.
Rajah 1 menunjukkan carta alir yang menunjukkan gambaran keseluruhan kajian. Pesakit dengan tumor payudara, melanoma, pankreas, prostat atau ovari telah diuji untuk mutasi dalam gen BRCA1 dan BRCA2.
Singkatan: PV, varian patogen; VUS, varian yang tidak menentu kepentingannya; WT, jujukan BRCA1/2 jenis liar.
Kami secara selektif memfokuskan kajian kami pada kohort kanser payudara. Pesakit mempunyai umur median 49 tahun (julat 23-89) dan kebanyakannya wanita (n=376, atau 97%).
Daripada subjek ini, 64 (17%) mempunyai mutasi BRCA1/2 dan semuanya perempuan. Tiga puluh lima (9%) mempunyai PV dan 29 (7.5%) mempunyai VUS. Tujuh belas (48.6%) daripada 35 varian patogen berlaku dalam BRCA1 dan 18 (51.4%) dalam BRCA2, manakala 5 VUS berlaku dalam BRCA1 (17.2%) dan 24 (82.8%) dalam BRCA2 (Rajah 1 dan 2). LGR tidak terdapat dalam analisis MLPA.
Rajah 2. Analisis mutasi BRCA1 dan BRCA2 dalam 389 pesakit kanser payudara.(A) Taburan varian patogen (PV) (merah), varian yang tidak pasti kepentingannya (VUS) (oren), dan WT (biru) dalam 389 pesakit kanser payudara; (B) 389 pesakit kanser payudara Tiga puluh lima (9%) mempunyai varian patogen BRCA1/2 (PV). Antaranya, 17 (48.6%) adalah pembawa BRCA1 PV (merah gelap) dan 18 (51.4%) adalah pembawa BRCA2 (merah muda); (C) 29 (7.5%) daripada 389 subjek membawa VUS, 5 (17.2%) gen BRCA1 (oren gelap) dan 24 (82.8%) gen BRCA2 (oren muda).
Singkatan: PV, varian patogen; VUS, varian yang tidak menentu kepentingannya; WT, jujukan BRCA1/2 jenis liar.
Seterusnya, kami mengkaji prevalens subjenis molekul BC dalam pesakit dengan BRCA1/2 PV. Taburan tersebut merangkumi 2 (5.7%) luminal A, 15 (42.9%) luminal B, 3 (8.6%) luminal B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ dan 13 (37.1%) pesakit TNBC. Antara pesakit positif BRCA1, 5 (29.4%) mempunyai luminal B BC, 2 (11.8%) mempunyai penyakit HER2+, dan 10 (58.8%) mempunyai TNBC. Tumor tanpa mutasi BRCA1 sama ada luminal A atau luminal B-HER2+ (Rajah 3). Dalam subkumpulan positif BRCA2, 10 (55.6%) tumor adalah luminal B, 3 (16.7%) adalah luminal B-HER2+, 3 (16.7%) TNBC dan 2 (11.1%) adalah luminal A (Rajah 3). Tiada tumor HER2+. terdapat dalam kumpulan ini. Oleh itu, mutasi BRCA1 adalah lazim dalam pesakit TNBC, manakala perubahan BRCA2 adalah dominan dalam individu lumen B.
Rajah 3 Prevalens subjenis kanser payudara dalam pesakit dengan varian patogen dalam BRCA1 dan BRCA2. Histogram menunjukkan taburan PV BRCA1- (merah gelap) dan BRCA2- (merah muda) antara subjenis molekul pesakit kanser payudara. Nombor yang dilaporkan dalam setiap kotak mewakili peratusan pesakit dengan PV BRCA1 dan BRCA2 untuk setiap subjenis kanser payudara.
Singkatan: PV, varian patogen; HER2+, reseptor faktor pertumbuhan epidermis manusia 2 positif; TNBC, kanser payudara tiga-negatif.
Seterusnya, kami menilai jenis dan penyetempatan gen PV BRCA1 dan BRCA2. Dalam PV BRCA1, kami memerhatikan 7 varian nukleotida tunggal (SNV), 6 penghapusan, 3 penduaan dan 1 penyisipan. Hanya satu mutasi (c.5522delG) mewakili penemuan baharu. PV BRCA1 yang paling biasa dikesan dalam kedua-dua subjek ialah c.5035_5039delCTAAT. Perubahan ini melibatkan penghapusan lima nukleotida (CTAAT) dalam ekson BRCA1 15, mengakibatkan penggantian asid amino leusin oleh tirosin pada kodon 1679, dan disebabkan oleh anjakan bingkai terjemahan dengan kodon hentian alternatif yang diramalkan menyebabkan pemotongan protein pramatang. Semua perubahan lain dikesan hanya dalam satu kes. Terutamanya, salah satu PV yang dilaporkan terletak di kawasan konsensus tapak sambatan (c.4357+1G>T) (Jadual 1).
Berkenaan BRCA2 PV, kami memerhatikan 6 penghapusan, 6 SNV dan 2 penduaan. Tiada satu pun perubahan yang ditemui adalah baharu. Tiga mutasi berulang dalam populasi kami, c.428dup dan c.8487+1G>A diperhatikan dalam 3 subjek, diikuti oleh c.5851_5854delAGTT yang diambil dalam dua kes. Perubahan c.428dup melibatkan pengulangan C dalam ekson 5 BRCA2, yang diramalkan akan mengekod protein terpotong dan tidak berfungsi. Mutasi c.8487+1G>A berlaku di kawasan intron intron 19 BRCA2 (± 1,2) dan mempengaruhi urutan konsensus penyambungan, mengakibatkan penyambungan yang diubah yang mengakibatkan protein yang tidak normal atau tiada. Varian patogenik c.5851_5854delAGTT adalah disebabkan oleh penghapusan 4-nukleotida daripada kedudukan nukleotida 5851 hingga 5854 dalam ekson pengekodan 10 gen BRCA2 dan mengakibatkan anjakan bingkai translasi dengan kodon hentian alternatif yang diramalkan (hlm.S1951WfsTer). Terutamanya, seperti yang dilaporkan sebelum ini, kedua-dua perubahan c.631G>A dan c.7008-2A>T dikesan dalam pesakit yang sama.34 Mutasi pertama melibatkan penggantian adenosina (A) dalam ekson 7 BRCA2 dengan nukleotida yang mengandungi guanina (G) yang mengakibatkan perubahan valin kepada isoleusin pada kodon 211, isoleusin Asid amino ialah asid amino dengan sifat yang sangat serupa. Perubahan ini menjejaskan penyambungan mRNA biasa. Varian kedua terletak di kawasan intron dan mengakibatkan penggantian A berganda kepada timina (T) sebelum ekson 13 gen yang mengekod BRCA2. Perubahan c.7008-2A>T boleh menghasilkan berbilang transkrip dengan panjang yang berbeza. Tambahan pula, dalam kumpulan PV BRCA2, 4 daripada 18 perubahan (22.2%) adalah intron.
Kemudian, kami memetakan mutasi berbahaya BRCA1/2 dalam domain berfungsi dan kawasan pengikat protein (Rajah 4). Dalam gen BRCA1, 50% PV terletak di kawasan kluster kanser payudara (BCCR), manakala 22% mutasi terletak di kawasan kluster kanser ovari (OCCR) (Rajah 4A). Dalam PV BRCA2, 35.7% varian terletak di kawasan BCCR dan 42.8% mutasi terletak di OCCR (Rajah 4B). Seterusnya, kami menilai lokasi PV dalam domain protein BRCA1 dan BRCA2. Bagi protein BRCA1, kami menemui tiga PV dalam domain gelung dan gelung bergelung, dan dua mutasi dalam domain BRCT (Rajah 4A). Bagi protein BRCA2, 4 PV dipetakan ke domain ulangan BRC, manakala 3 perubahan intron dan 3 perubahan eksonik dikesan dalam domain pengikat oligo/oligosakarida (OB) dan menara (T) (Rajah 4B).
Rajah 4 Perwakilan skematik protein BRCA1 dan BRCA2 dan penyetempatan varian patogen. Rajah ini menunjukkan taburan varian patogen BRCA1 (A) dan BRCA2 (B) dalam pesakit kanser payudara. Mutasi eksonik ditunjukkan dalam warna biru, manakala varian intron ditunjukkan dalam warna oren. Ketinggian bar mewakili bilangan kes. Protein BRCA1 dan BRCA2 dan domain fungsinya dilaporkan.(A) Protein BRCA1 mengandungi domain gelung (RING) dan jujukan penyetempatan nuklear (NLS), domain gegelung bergelung, domain kluster SQ/TQ (SCD), dan domain C-terminal BRCA1 (BRCT).(B) Protein BRCA2 mengandungi lapan ulangan BRC, domain pengikat DNA dengan domain heliks (Heliks), tiga lipatan pengikat oligonukleotida/oligosakarida (OB), domain menara (T), dan An NLS di bahagian C. Kawasan yang dipanggil Wilayah Kluster Kanser Payudara (BCCR) dan Wilayah Kluster Kanser Ovari (OCCR) ditunjukkan di bahagian bawah.*Mewakili mutasi yang menentukan hentian kodon.
Kemudian, kami mengkaji ciri-ciri klinikopatologi BC yang mungkin berkorelasi dengan kehadiran BRCA1/2 PV. Rekod klinikal lengkap tersedia untuk 181 pesakit BRCA1/2-negatif (bukan pembawa) dan semua pembawa (n = 35). Terdapat korelasi antara kadar percambahan tumor dan gred.
Kami mengira taburan Ki-67 berdasarkan median kohort kami (25%, julat <10-90%). Subjek dengan Ki-67 < 25% ditakrifkan sebagai "Ki-67 rendah", manakala individu dengan nilai ≥ 25% dianggap "Ki-67 tinggi". Perbezaan Ki-67 yang ketara (p<0.01) ditemui antara bukan pembawa dan pembawa PV BRCA1 (Rajah 5A).
Rajah 5 Korelasi Ki-67 dengan taburan gred dalam kalangan wanita kanser payudara dengan dan tanpa BRCA1 dan BRCA2 PV.(A) Plot kotak menunjukkan nilai median Ki-67 dalam 181 pesakit BC bukan pembawa berbanding pesakit BRCA1 (18) atau BRCA2 (17) PV. Nilai P di bawah 0.5 dianggap signifikan secara statistik.(B) Histogram mewakili pengagihan pesakit kanser BC ke dalam kumpulan gred histologi (G2 dan G3) mengikut status mutasi BRCA1 dan BRCA2 (subjek WT, pembawa BRCA1 dan BRCA2 PV).
Begitu juga, kami mengkaji sama ada gred tumor berkorelasi dengan kehadiran BRCA1/2 PV. Oleh kerana G1 BC tidak wujud dalam populasi kami, kami membahagikan pesakit kepada dua kumpulan (G2 atau G3). Selaras dengan keputusan Ki-67, analisis menunjukkan korelasi yang signifikan secara statistik antara gred tumor dan mutasi BRCA1, dengan kadar tumor G3 yang lebih tinggi dalam pembawa BRCA1 berbanding bukan pembawa (p<0.005) (Rajah 5B).
Kemajuan dalam teknologi penjujukan DNA telah membolehkan kemajuan yang belum pernah terjadi sebelumnya dalam ujian genetik BRCA1/2, dengan implikasi penting untuk pesakit yang mempunyai sejarah keluarga menghidap kanser. Sehingga kini, kira-kira 20,000 varian BRCA1/2 telah dikenal pasti dan dikelaskan mengikut Persatuan Genetik Perubatan Amerika 35 dan sistem ENIGMA.35,36 Telah diketahui umum bahawa spektrum mutasi BRCA1/2 berbeza-beza secara meluas merentasi kawasan geografi.37 Di Itali, kadar PV BRCA1/2 adalah antara 8% hingga 37%, menunjukkan kepelbagaian intra-negara yang luas.38,39 Dengan populasi hampir 5 juta, Sicily merupakan wilayah kelima terbesar di Itali dari segi bilangan penduduk. Walaupun terdapat data mengenai taburan BRCA1/2 di barat Sicily, tiada bukti yang meluas di bahagian timur pulau itu.
Kajian kami merupakan salah satu laporan pertama tentang kejadian BRCA1/2 PV dalam kalangan pesakit BC di timur Sicily.28 Kami memfokuskan analisis kami pada BC, kerana setakat ini ini merupakan penyakit yang paling biasa dalam kohort kami.
Semasa menguji 389 pesakit BC, 9% membawa PV BRCA1/2, yang diagihkan secara sama rata antara BRCA1 dan BRCA2. Keputusan ini selaras dengan yang dilaporkan sebelum ini dalam populasi Itali.28 Menariknya, 3% (13/389) daripada kohort kami adalah lelaki. Kadar ini lebih tinggi daripada yang dijangkakan untuk kanser payudara lelaki (1% daripada semua BC),40 mencerminkan pemilihan populasi kami berdasarkan risiko mutasi BRCA1/2. Walau bagaimanapun, tiada seorang pun daripada lelaki ini yang menghidap PV BRCA1/2, jadi mereka adalah calon untuk analisis molekul selanjutnya bagi menolak kehadiran mutasi yang kurang biasa seperti PALB2, RAD51C dan D, antara lain. Varian yang tidak menentu kepentingannya telah diambil dalam 7% subjek di mana BRCA2 VUS terbukti. Malah keputusan ini selaras dengan bukti sedia ada.28,41,42
Apabila kami menganalisis taburan subjenis molekul BC dalam wanita mutan BRCA1/2, kami mengesahkan perkaitan yang diketahui antara TNBC dan BRCA1 PV (58.8%) dan antara luminal B BC dan BRCA2 PV (55.6%).16,43 Tumor luminal A dan HER2+ dalam pembawa BRCA1 dan BRCA2 PV adalah konsisten dengan data literatur sedia ada.16,43
Kemudian kami memberi tumpuan kepada jenis dan lokasi PV BRCA1/2. Dalam kohort kami, PV BRCA1 yang paling biasa ialah c.5035_5039delCTAAT. Walaupun Incorvaia et al. tidak menggambarkan varian ini dalam kohort Sicily mereka, penulis lain telah melaporkannya sebagai PV BRCA1 germinal.34 Beberapa PV BRCA1 ditemui dalam kohort kami – contohnya c.181T>G, c.514del, c.3253dupA dan c.5266dupC – yang telah diperhatikan di Sicily.28 Daripada jumlah ini, dua mutasi pengasas BRCA1 (c.181T>G dan c.5266dupC) biasanya ditemui dalam kalangan Yahudi Ashkenazi di Eropah Timur dan Tengah (Poland, Czech), Slovenia, Austria, Hungary, Belarus dan Jerman), 44,45 dan, di Amerika Syarikat dan Argentina, baru-baru ini ditakrifkan sebagai "varian germinal berulang" dalam pesakit Itali dengan BC dan OC. Varian 34c.514del sebelum ini dikenal pasti dalam 8 pesakit kanser payudara dari utara Sicily di Palermo dan Messina. Menariknya, walaupun Incorvaia et al. menemui varian c.3253dupA dalam beberapa keluarga di Catania.28 PV BRCA2 yang paling representatif ialah c.428dup, c.5851_5854delAGTT dan varian intronik c.8487+1G>A, yang telah dilaporkan dengan lebih terperinci 28 pada pesakit di Palermo dengan c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV diperhatikan dalam isi rumah di barat laut Sicily, terutamanya di wilayah Trapani dan Palermo, manakala PV c.5851_5854delAGTT diperhatikan dalam isi rumah di barat laut Sicily. Varian 8487+1G>A lebih biasa dalam subjek dari Messina, Palermo, dan Caltanissetta.28 Rebbeck et al. sebelum ini telah menerangkan perubahan c.5851_5854delAGTT di Colombia.37 Satu lagi PV BRCA2, c.631+1G>A, telah ditemui pada pesakit BC dan OC dari Sicily (Agrigento, Siracusa dan Ragusa).28 Terutamanya, kami memerhatikan kewujudan bersama dua varian BRCA2 (BRCA2 c.631G>A dan c.7008-2A>T) dalam pesakit yang sama, yang kami anggap diasingkan dalam mod cis, seperti yang dilaporkan sebelum ini seperti itu.34,46 Mutasi mutasi BRCA2 ini sememangnya kerap diperhatikan di rantau Itali dan didapati memperkenalkan kodon henti pramatang, yang menjejaskan penyambungan RNA utusan dan menyebabkan protein BRCA2 gagal.47,48
Kami juga memetakan PV BRCA1 dan BRCA2 dalam kawasan OCCR dan BCCR yang diandaikan bagi domain dan gen protein. Kawasan-kawasan ini digambarkan oleh Rebbeck et al. sebagai kawasan risiko untuk menghidap kanser ovari dan payudara.49 Walau bagaimanapun, bukti mengenai hubungan antara lokasi varian germinal dan risiko kanser payudara atau ovari masih kontroversi.28,50-52 Dalam populasi kami, PV BRCA1 kebanyakannya terletak di kawasan BCCR, manakala PV BRCA2 kebanyakannya terletak di kawasan OCCR. Walau bagaimanapun, kami tidak dapat menemui sebarang hubungan antara kawasan OCCR dan BCCR yang diandaikan dan ciri BC. Ini mungkin disebabkan oleh bilangan pesakit yang terhad dengan mutasi BRCA1/2. Dari perspektif domain protein, PV BRCA1 diedarkan di sepanjang keseluruhan protein, dan perubahan BRCA2 lebih disukai ditemui dalam domain ulangan BRC.
Akhirnya, kami mengaitkan ciri-ciri klinikopatologi BC dengan BRCA1/2 PV. Disebabkan bilangan pesakit yang terhad, kami hanya menemui korelasi yang ketara antara Ki-67 dan gred tumor. Walaupun penilaian dan tafsiran Ki-67 masih agak kontroversi, sudah pasti kadar proliferatif yang tinggi dikaitkan dengan peningkatan risiko penyakit berulang dan penurunan kadar survival. Sehingga kini, had untuk membezakan antara Ki-67 "tinggi" dan "rendah" ialah 20%. Walau bagaimanapun, ambang ini tidak terpakai kepada populasi pesakit mutasi BRCA1/2 kami, yang mempunyai nilai median Ki-67 sebanyak 25%. Trend dalam kadar Ki-67 yang tinggi ini boleh dijelaskan oleh kelaziman dalam kohort luminal B dan TNBC kami, yang mana hanya terdapat sedikit tumor luminal A. Walau bagaimanapun, beberapa bukti seolah-olah menunjukkan bahawa had Ki-67 yang lebih tinggi (25–30%) mungkin mengstratifikasikan pesakit dengan lebih baik mengikut prognosis mereka.53,54 Daripada hasil analisis kami, korelasi yang ketara tidak mengejutkan. Berlaku antara Ki-67 yang tinggi dan gred dan kehadiran BRCA1 PV. Malah, tumor berkaitan BRCA1 adalah tipikal bagi TNBC dan mempamerkan ciri-ciri yang lebih agresif.16,17
Kesimpulannya, kajian ini menyediakan laporan tentang status mutasi BRCA1/2 dalam kohort BC dari timur Sicily. Secara keseluruhan, penemuan kami selaras dengan bukti sedia ada, baik dari segi kelaziman mutasi dan ciri klinikopatologi di BC. Lebih banyak kajian dalam populasi pesakit BC mutan BRCA1/2 yang lebih besar, seperti menggunakan analisis mutasi diperluas multigenom, adalah wajar untuk menilai kehadiran PV yang berbeza dan kurang kerap daripada BRCA1/2. Ini akan membolehkan pengenalpastian dan pengurusan yang betul terhadap peningkatan bilangan subjek yang berisiko tinggi menghidap kanser akibat mutasi genetik.
Kami mengesahkan bahawa pesakit telah menandatangani persetujuan termaklum untuk melepaskan sampel tumor mereka secara anonim untuk tujuan penyelidikan. Semua pesakit menandatangani persetujuan termaklum bertulis mengikut Deklarasi Helsinki. Mengikut dasar AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco”, kajian ini dikecualikan daripada semakan etika kerana analisis BRCA1/2 telah dijalankan mengikut amalan klinikal dan semua pesakit telah memberikan persetujuan termaklum bertulis. Pesakit juga bersetuju dengan penggunaan data mereka untuk tujuan penyelidikan.
Kami mengucapkan terima kasih kepada Prof. Paolo Vigneri atas bantuan beliau dalam penjagaan pesakit kanser payudara seperti yang diminta oleh Jawatankuasa Etika.
Federica Martorana melaporkan honorarium daripada Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Penulis lain mengisytiharkan tiada konflik kepentingan dalam karya ini.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, dkk. Statistik Kanser Global 2020: GLOBOCAN menganggarkan kejadian dan kematian 36 jenis kanser di 185 negara di seluruh dunia. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660