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著者 ステラ S、ヴィターレ SR、マルトラーナ F、マッシミノ M、パヴォーネ G、ランザファーム K、ビアンカ S、バローネ C、ゴルゴーネ C、フィケラ M、マンゼラ L
ステファニア・ステラ、1,2 シルヴィア・リタ・ヴィターレ、1,2 フェデリカ・マルトラーナ、1,2 ミケーレ・マッシミノ、1,2 ジュリアナ・パヴォーネ、3 カティア・ランザファメ、3 セバスティアーノ・ビアンカ、4 キアラ・バローネ、5 クリスティーナ・ゴルゴーネ、6 マルコ・フィチェラ、6、7 リヴィア・マンゼラ1,21実験医学、カターニア大学、カターニア、95123、イタリア;2 実験腫瘍学および血液学センター、AOU ポリクリニコ「G.ロドリコ – サンマルコ」、カターニア、95123、イタリア。 3 腫瘍内科、AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”、カターニア、95123、イタリア; 4 医学遺伝学、ARNAS Garibaldi、カターニア、95123、イタリア。5 医学遺伝学、ASP、シラキュース、96100、イタリア。6 カターニア大学、生物医学およびバイオテクノロジー科学部、医学遺伝学、カターニア、イタリア、95123。7 Oasi Research Institute-IRCCS、トロイナ、94018、イタリア 連絡先: Stefania Stella、電話 +39 095 378 1946、電子メール [email protected]。 [email protected] 目的: BRCA1 および BRCA2 の生殖細胞系列変異と、乳がん (BC)、卵巣がん (OC)、およびその他のがんの生涯リスクとの関連性。BRCA 遺伝子検査は、個人のリスク評価、健康な保因者における予防法の発見、がん患者の治療法のカスタマイズに重要です。BRCA1 および BRCA2 の変異の有病率は地域によって大きく異なり、シチリアの家族における BRCA 病原性変異に関するデータは存在するものの、シチリア島東部の集団を特に対象とした研究は不足しています。本研究の目的は、シチリア島東部の BC 患者コホートにおける BRCA 病原性生殖細胞系列変異の発生率と分布を調査し、次世代シーケンシングを使用して特定の BC 形質との関連性を評価することです。変異の存在は、腫瘍のグレードおよび増殖指数と相関していました。結果: 全体で 35 人の患者 (9%) に BRCA 病原性変異があり、17 人 (49%) BRCA1では18（51％）、BRCA2では18（51％）でした。BRCA1の変化はトリプルネガティブBC患者によく見られますが、BRCA2の変異はルミナルBC患者でより一般的です。非保因者と比較して、BRCA1変異を持つ被験者は、有意に高い腫瘍グレードと増殖指数を示しました。結論：私たちの研究結果は、シチリア島東部のBC患者のBRCA変異状態の概要を提供し、遺伝性BC患者を特定する上でのNGS分析の役割を確認しています。全体として、これらのデータは、変異保因者の癌の適切な予防と治療のためのBRCAスクリーニングを支持するこれまでの証拠と一致しています。
乳がん (BC) は世界中で最も一般的な悪性腫瘍であり、女性では最も致命的な癌です。1 乳がんの予後と臨床挙動を決定する生物学的特徴は広範囲に研究され、時間の経過とともに部分的に解明されてきました。実際、現在、BC を異なる分子サブタイプに分類するためにいくつかの代替マーカーが使用されています。それらは、エストロゲン (ER) および/またはプロゲステロン受容体 (PgR)、ヒト上皮成長因子受容体 2 (HER2) 増幅、増殖指数 Ki-67 および腫瘍悪性度 (G) です。2 これらの変数の組み合わせにより、次の BC カテゴリーが識別されました。1) ER および/または PgR 発現を示す管腔腫瘍が BC の 75% を占めました。これらの腫瘍は、Ki-67 が 20% 未満で HER2 陰性の場合には管腔 A に、増殖指数に関係なく、Ki-67 が 20% 以上で HER2 増幅2) ERおよびPgR陰性だがHER2増幅を示すHER2+腫瘍。このグループは乳がん全体の10％を占めます。3) ERおよびPgR発現およびHER2増幅を示さないトリプルネガティブ乳がん（TNBC）は、乳がんの約15％を占めます。2-4
これらの BC サブタイプのうち、腫瘍のグレードと増殖指数は、腫瘍の攻撃性および予後と直接的かつ独立して関連する横断的バイオマーカーを表しています。5,6
前述の生物学的特徴に加えて、乳がんの発症につながる遺伝的遺伝子変異の役割は、ここ数年でますます重要になっています。7 乳がんの約10分の1は、特定の遺伝子の生殖細胞系列変異が原因で遺伝します。8 18万人以上の女性を対象とした2つの大規模な疫学研究により、遺伝性乳がんの主な原因となる8つの遺伝子（ATM、BARD1、BRCA1、BRCA2、CHK2、PALB2、RAD51C、RAD51D）が最近特定されました。これらの遺伝子の中で、BRCA1とBRCA2（以下、BRCA1/2）は、乳がんの発症と最も強い相関関係を示しました。9-12 実際、生殖細胞系列BRCA1/2変異は、乳がんだけでなく、卵巣がん、前立腺がん、膵臓がん、結腸直腸がん、黒色腫などの他の悪性腫瘍の生涯リスクを大幅に増加させます。13歳から80歳まで、乳がんの累積発生率は、BRCA1病原性変異（PV）を持つ女性では72％、BRCA2病原性変異（PV）を持つ女性では69％です。14
特に、最近の出版物では、BC のリスクは PV の種類によって異なることが示唆されています。実際、病原性の切断変異と比較して、特に BRCA1 遺伝子における明らかなミスセンス変異は、特に高齢の女性において BC のリスク低下と関連しています。15
BRCA1 または BRCA2 PV の存在は、異なる生物学的特徴および臨床病理学的特徴と関連していました。16,17 BRCA1 関連乳がんは、臨床的に悪性度が高く、分化度が低く、増殖性が高い傾向があります。これらの腫瘍は通常、トリプルネガティブで、発症年齢が若いです。BRCA2 変異患者に発生する腫瘍は、通常、中等度から高分化度を示し、増殖指数は変動します。これらの腫瘍は、ルーメン B でより一般的であり、通常は高齢者に発生します。16-18 特に、BRCA1 および BRCA2 の変異は、白金塩やポリ (ADP-リボース) ポリメラーゼ阻害剤 (PARPi) などの標的薬を含む特定の治療に対する感受性を高めます。19,20
過去数年間、臨床現場での次世代シーケンシング（NGS）の導入により、BRCA1/2を含むがん感受性症候群の分子検査を受けるBC患者数が増加しました。21 同時に、家族歴、人口統計学的、臨床病理学的特徴に関する正確な基準に基づいた定義により、BRCA1/2検査を受ける価値のある個人をより適切に特定できるようになりました。22,23 このような状況で、特定の集団におけるBRCA1/2スクリーニングに関するエビデンスが蓄積され、地理的地域による違いが浮き彫りになっています。24–27 シチリア島西部のBCコホートに関する報告はあるものの、シチリア島東部の集団におけるBRCA1/2スクリーニングに関するデータは少ないです。28,29
ここでは、シチリア島東部の乳がん患者における生殖細胞系 BRCA1/2 スクリーニングの結果について説明し、さらに BRCA1 または BRCA2 変異の存在とこれらの腫瘍の主な臨床病理学的特徴との相関関係を明らかにします。
カターニアのロドリコ・サン・マルコにあるポリクリニコ病院の「実験腫瘍学および血液学センター」で、後ろ向き研究が実施されました。2017年1月から2021年3月の間に、乳がん、卵巣がん、黒色腫、膵臓がん、または前立腺がんを患う合計455人の患者が、BRCA/2遺伝子検査のために当院の分子診断研究所に紹介されました。この研究はヘルシンキ宣言に従って実施され、すべての参加者は分子分析の前に書面によるインフォームドコンセントに同意を表明しました。
BC の組織学的および生物学的特徴 (ER、PgR、HER2 状態、Ki-67、およびグレード) は、悪性腫瘍成分のみを考慮してコア生検または手術サンプルで評価されました。これらの特徴に基づいて、BC は次のように分類されました: ルミナル A (ER+ および/または PgR+、HER2-、Ki-67 < 20%)、ルミナル B (ER+ および/または PgR+、HER2-、Ki-67 ≥ 20%)、ルミナル B-HER2+ (ER および/または PgR+、HER2+)、HER2+ (ER および PgR-、HER2+)、またはトリプルネガティブ (ER および PgR-、HER2-)。
BRCA1 および BRCA2 の変異状態を評価する前に、腫瘍専門医、遺伝専門医、心理学者を含む学際的チームが各患者について腫瘍遺伝学相談を実施し、BRCA1 および/または BRCA1 の存在、または BRCA2 遺伝子で PV のリスクが高い個人を特定しました。患者の選択は、イタリア臨床腫瘍学会 (AIOM) のガイドラインと地元シチリアの推奨事項に従って実施されました。30,31 これらの基準には以下が含まれます。(i) 感受性遺伝子 (例: BRCA1、BRCA2、TP53、PTEN) の既知の病原性変異体の家族歴。(ii) BC の男性。(iii) BC および OC の患者。(iv) BC <36 歳、TNBC <60 歳、または両側 BC <50 歳の女性。(v) BC の個人的病歴 <50 年および少なくとも 1 人の第一度近親者: (a) BC < 50 歳。 (b) 年齢を問わない非粘液性かつ非境界性 OC、(c) 両側性 BC、(d) 男性 BC、(e) 膵臓がん、(f) 前立腺がん、(vi) 50 年を超える BC の個人歴が 2 件以上あり、互いに第一度近親者である親族 (彼女と第一度近親者である親族を含む) に BC、OC、または膵臓がんの家族歴がある、(vii) OC の個人歴があり、第一度近親者のうち少なくとも 1 人が以下のいずれかである: (a) 50 年未満の BC、(b) NOC、(c) 両側性 BC、(d) 男性 BC、(vii) 高悪性度漿液性 OC の女性。
各患者から20 mLの末梢血サンプルを採取し、EDTAチューブ（BD Biosciences）に集めました。QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit（QIAGEN、イタリア、ヒルデン）を使用して、メーカーの指示に従って0.7 mLの全血サンプルからゲノムDNAを分離し、Qubit® 3.0 Fluorometer（Thermo Fisher Scientific、米国マサチューセッツ州ウォルサム）に通して定量化を行いました。ターゲットエンリッチメントとライブラリ調製は、Oncomine™ BRCA Research Assay Chefによって実行され、メーカーの指示に従って自動ライブラリ調製のためにIon AmpliSeq™ Chef Reagents DL8キットにロードする準備ができています。このキットは、すべてのBRCA1（NM_007300.3）およびBRCA2（NM_000059.3）遺伝子の研究に使用できる2つのマルチプレックスPCRプライマープールで構成されています。簡単に言うと、各希釈サンプルDNA（10 ng）の15 µLをライブラリ調製用のバーコードプレートに加え、すべての試薬と消耗品をIon Chef™装置にロードしました。次に、自動ライブラリ調製とバーコードサンプルライブラリプーリングをIon Chef™装置で実行しました。その後、製造元の指示に従って、Qubit® 3.0蛍光計（Thermo Fisher Scientific、マサチューセッツ州ウォルサム、米国）で調製されたライブラリの数を評価しました。最後に、ライブラリは等モル比で Ion Chef™ ライブラリ サンプル チューブ (バーコード付きチューブ) に分注し、Ion Chef™ 装置にロードしました。シーケンスは、Ion 510 チップ (Thermo Fisher Scientific) を使用した Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) 装置を使用して実行されました。データ解析は、Amplicon Suite (SmartSeq srl) および Ion Reporter ソフトウェアによって実行されました。
すべての変異体の命名法は、オンラインで入手可能な Human Genome Variation Consortium の現在のガイドライン (HGVS、http://www.hgvs.org/mutnomen) に従っています。BRCA1/2 変異体の臨床的意義は、国際コンソーシアム ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles、https://enigmaconsortium.org/) の分類を使用し、ARUP、BRCAEXCHANGE、ClinVar、IARC_LOVD、UMD などのさまざまなデータベースを参照して定義されました。分類には、良性 (カテゴリ I)、おそらく良性 (カテゴリ II)、意義不明の変異体 (VUS、カテゴリ III)、おそらく病原性 (カテゴリ IV)、病原性 (カテゴリ V) の 5 つの異なるリスク カテゴリが含まれます。VarSome は、30 のデータベースにアクセスできる情報ツールで、変異がタンパク質の構造と機能に及ぼす影響を分析しました。32
各 VUS に潜在的な臨床的意義を割り当てるために、次の計算タンパク質予測アルゴリズムが使用されました：MUTATION TASTER、33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php)、POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/)、および Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php)。クラス 1 および 2 に分類された変異は野生型と見なされました。
サンガー配列決定により、各病原性変異体の存在が確認されました。簡単に言うと、BRCA1 および BRCA2 遺伝子参照配列 (それぞれ NG_005905.2、NM_007294.3 および NG_012772.3、NM_000059.3) を使用して、検出された変異体ごとに特定のプライマーのペアが設計されました。その後、ターゲット PCR を実行し、サンガー配列決定を行いました。
BRCA1/2 遺伝子検査が陰性であった患者は、製造元の指示に従って、マルチプレックスライゲーション依存性プローブ増幅 (MLPA) 法で検査され、大規模なゲノム再編成 (LGR) の存在が評価されました。簡単に言うと、DNA サンプルは変性され、最大 60 個の BRCA1 および BRCA2 遺伝子固有のプローブが使用され、それぞれが約 60 ヌクレオチド長の特定の DNA 配列を検出します。その後、PCR アンプリコンの固有のセットで構成されるプローブ増幅産物が、キャピラリー電気泳動と、適切なバッチ固有の Cofalyser テーブル (www.mrcholland.com) と組み合わせた Cofalyser.Net ソフトウェアによって分析されました。
選択された臨床病理学的変数 (組織学的グレードおよび Ki-67% 増殖指数) は BRCA1/2 PV の存在と関連しており、p 値 <0.05 を有意と仮定して、Prism ソフトウェア v. 8.4 の Fisher の正確検定を使用して計算されました。
2017年1月から2021年3月の間に、455人の患者が生殖細胞系列BRCA1/2変異のスクリーニングを受けました。変異検査は、ポリクリニコ病院の実験腫瘍学・血液学センターで実施されました。シチリア州のガイドライン（http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm、2020年1月10日Venerdì N. 02-Venerdì）によると、「カターニア・サン・マルコのロドリコ」全体では389人の患者が乳がん、37人が卵巣がん、16人が膵臓がん、8人が前立腺がん、5人が悪性黒色腫と診断されました。がんの種類別の患者分布と分析結果は図1に示されています。
図 1 は、研究の概要を示すフローチャートです。乳がん、黒色腫、膵臓がん、前立腺がん、または卵巣がんの患者を対象に、BRCA1 遺伝子と BRCA2 遺伝子の変異の検査が行われました。
略語: PV、病原性変異体、VUS、意義不明の変異体、WT、野生型 BRCA1/2 配列。
私たちは乳がんコホートに重点的に研究を行いました。患者の平均年齢は49歳（範囲23～89歳）で、大部分が女性でした（n=376、97%）。
これらの被験者のうち、64 人 (17%) に BRCA1/2 変異があり、全員が女性でした。35 人 (9%) に PV、29 人 (7.5%) に VUS がありました。35 の病原性変異のうち 17 人 (48.6%) が BRCA1 で発生し、18 人 (51.4%) が BRCA2 で発生しました。一方、VUS は BRCA1 で 5 人 (17.2%)、BRCA2 で 24 人 (82.8%) 発生しました (図 1 および 2)。LGR は MLPA 分析では存在しませんでした。
図 2。389 人の乳がん患者における BRCA1 および BRCA2 変異の分析。(A) 389 人の乳がん患者における病的変異 (PV) (赤)、意義不明の変異 (VUS) (オレンジ)、WT (青) の分布。(B) 389 人の乳がん患者 35 人 (9%) に BRCA1/2 病的変異 (PV) が認められました。そのうち 17 人 (48.6%) が BRCA1 PV キャリア (濃い赤)、18 人 (51.4%) が BRCA2 キャリア (薄い赤) でした。(C) 389 人のうち 29 人 (7.5%) が VUS、5 人 (17.2%) が BRCA1 遺伝子 (濃いオレンジ)、24 人 (82.8%) が BRCA2 遺伝子 (薄いオレンジ) を保有していました。
略語: PV、病原性変異体、VUS、意義不明の変異体、WT、野生型 BRCA1/2 配列。
次に、BRCA1/2 PV患者におけるBC分子サブタイプの有病率を調査しました。分布は、ルミナルAが2人（5.7％）、ルミナルBが15人（42.9％）、ルミナルB-HER2+が3人（8.6％）、HER2+が2人（5.7％）、TNBCが13人（37.1％）でした。BRCA1陽性患者のうち、5人（29.4％）がルミナルB BC、2人（11.8％）がHER2+疾患、10人（58.8％）がTNBCでした。BRCA1変異のない腫瘍は、ルミナルAまたはルミナルB-HER2+でした（図3）。BRCA2陽性サブグループでは、10人（55.6％）の腫瘍がルミナルB、3人（16.7％）がルミナルB-HER2+、3人（16.7％）がルミナルB-HER2+でした。 TNBC は 2 例 (11.1%) で、ルミナール A でした (図 3)。このグループには HER2+ 腫瘍は存在しませんでした。したがって、BRCA1 変異は TNBC 患者に多く見られ、BRCA2 変化はルミナール B の個人に多く見られます。
図 3 BRCA1 および BRCA2 の病原性変異を持つ患者における乳がんサブタイプの有病率。乳がん患者の分子サブタイプにおける BRCA1- (暗赤色) および BRCA2- (淡赤色) PV の分布を示すヒストグラム。各ボックス内に報告されている数値は、各乳がんサブタイプの BRCA1 および BRCA2 PV を持つ患者の割合を表しています。
略語: PV、病原性変異、HER2+、ヒト上皮成長因子受容体2陽性、TNBC、トリプルネガティブ乳がん。
続いて、BRCA1 および BRCA2 PV のタイプと遺伝子の局在を評価しました。BRCA1 PV では、7 つの一塩基変異 (SNV)、6 つの欠失、3 つの重複、および 1 つの挿入が観察されました。1 つの変異 (c.5522delG) のみが新しい発見です。両方の被験者で検出された最も一般的な BRCA1 PV は、c.5035_5039delCTAAT でした。この変化は、BRCA1 エクソン 15 の 5 つのヌクレオチドの欠失 (CTAAT) を伴い、コドン 1679 でアミノ酸ロイシンがチロシンに置換され、予測される代替終止コドンとの翻訳フレームシフトにより、未熟なタンパク質切断を引き起こします。その他のすべての変化は 1 つのケースでのみ検出されました。
BRCA2 PVに関しては、6つの欠失、6つのSNV、2つの重複が認められました。発見された変異はいずれも新規ではありません。本集団では3つの変異が繰り返し認められ、c.428dupとc.8487+1G>Aが3名で観察され、続いてc.5851_5854delAGTTが2例で認められました。c.428dupの変異は、BRCA2のエクソン5のCの繰り返しに関与しており、短縮された非機能タンパク質をコードすると予測されます。c.8487+1G>A変異は、BRCA2イントロン19（±1,2）のイントロン領域で発生し、スプライシングコンセンサス配列に影響を与え、その結果、スプライシングが変化し、異常なタンパク質またはタンパク質が欠失します。c.5851_5854delAGTT病原性変異は、コード領域のヌクレオチド位置5851から5854までの4ヌクレオチドの欠失によるものです。 BRCA2遺伝子のエクソン10に変異が生じ、予測される代替終止コドン（p.S1951WfsTer）を伴う翻訳フレームシフトが生じる。特に、以前に報告されているように、c.631G>Aとc.7008-2A>Tの両方の変異が同一患者で検出された。34 最初の変異は、BRCA2エクソン7のアデノシン（A）がグアニン（G）を含むヌクレオチドに置換され、コドン211のバリンからイソロイシンに変化する。イソロイシンは、非常に類似した特性を持つアミノ酸である。この変化は、正常なmRNAスプライシングに影響を与える。2番目の変異はイントロン領域に位置し、BRCA2をコードする遺伝子のエクソン13の前で、二重のAからチミン（T）への置換を引き起こす。c.7008-2A>Tの変化は、異なる長さの複数の転写産物を生成する可能性がある。さらに、BRCA2 PV群では、 18 の変化のうち 22.2% はイントロンでした。
次に、BRCA1/2の有害変異を機能ドメインとタンパク質結合領域にマッピングしました（図4）。BRCA1遺伝子では、PVの50％が乳がんクラスター領域（BCCR）に位置し、22％の変異が卵巣がんクラスター領域（OCCR）に位置していました（図4A）。BRCA2 PVでは、バリアントの35.7％がBCCR領域に位置し、42.8％の変異がOCCRに位置していました（図4B）。次に、BRCA1およびBRCA2タンパク質ドメイン内でのPVの位置を評価しました。BRCA1タンパク質では、ループおよびコイルドコイルドメインに3つのPV、BRCTドメインに2つの変異が見つかりました（図4A）。BRCA2タンパク質では、4つのPVがBRCリピートドメインにマッピングされ、3つのイントロンと3つのエクソンの変化がBRCリピートドメインに検出されました。オリゴ/オリゴ糖結合（OB）ドメインとタワー（T）ドメイン（図4B）。
図4 BRCA1およびBRCA2タンパク質の模式図と病原性変異の局在。この図は、乳がん患者におけるBRCA1（A）およびBRCA2（B）病原性変異の分布を示している。エクソン変異は青色で、イントロン変異はオレンジ色で示されている。バーの高さは症例数を表す。BRCA1およびBRCA2タンパク質とその機能ドメインが示されている。（A）BRCA1タンパク質は、ループドメイン（RING）と核局在配列（NLS）、コイルドコイルドメイン、SQ/TQクラスタードメイン（SCD）、およびBRCA1 C末端ドメイン（BRCT）を含む。（B）BRCA2タンパク質は、8つのBRCリピート、ヘリカルドメイン（Helical）を含むDNA結合ドメイン、3つのオリゴヌクレオチド/オリゴ糖結合（OB）フォールド、タワードメイン（T）、およびC末端のNLSを含む。乳がんクラスター領域と呼ばれる領域(BCCR) および卵巣がんクラスター領域 (OCCR) が下部に表示されます。*終止コドンを決定する変異を表します。
次に、BRCA1/2 PVの存在と相関する可能性のあるBCの臨床病理学的特徴を調査しました。181人のBRCA1/2陰性患者（非保因者）とすべての保因者（n = 35）の完全な臨床記録が利用可能でした。腫瘍の増殖率とグレードには相関関係がありました。
私たちのコホートの中央値（25％、範囲<10-90％）に基づいてKi-67の分布を計算しました。Ki-67が25％未満の被験者は「低Ki-67」と定義され、値が25％以上の個人は「高Ki-67」とみなされました。非保因者とBRCA1 PV保因者の間には有意なKi-67の差（p<0.01）が見つかりました（図5A）。
図5 BRCA1およびBRCA2 PVの有無にかかわらず乳がん女性のKi-67とグレード分布の相関。(A) 181人の非保因者BC患者とBRCA1 (18)またはBRCA2 (17) PV患者におけるKi-67値の中央値を示すボックスプロット。0.5未満のP値は統計的に有意であると判断しました。(B) BRCA1およびBRCA2の変異状態（WT被験者、BRCA1およびBRCA2 PV保因者）に従ってBCがん患者を組織学的グレードグループ（G2およびG3）に割り当てたことを表すヒストグラム。
同様に、腫瘍のグレードが BRCA1/2 PV の存在と相関しているかどうかも調べました。私たちの集団には G1 BC が存在しなかったため、患者を 2 つのグループ (G2 または G3) に分けました。Ki-67 の結果と一致して、解析により腫瘍のグレードと BRCA1 変異の間に統計的に有意な相関関係があることが明らかになり、BRCA1 キャリアでは非キャリアと比較して G3 腫瘍の割合が高くなりました (p < 0.005) (図 5B)。
DNA シーケンシング技術の進歩によって、BRCA1/2 遺伝子検査がこれまでにないほど進歩し、がんの家族歴がある患者にとって重要な意味を持ちます。現在までに、約 20,000 個の BRCA1/2 変異体が特定され、米国臨床遺伝学会 35 および ENIGMA システム 35,36 に従って分類されています。BRCA1/2 変異スペクトルは、地理的地域によって大きく異なることがよく知られています。37 イタリア国内では、BRCA1/2 PV の割合は 8% ～ 37% の範囲で、国内で大きなばらつきが見られます。38,39 人口が約 500 万人のシチリア島は、居住者数でイタリアで 5 番目に大きな地域です。シチリア島西部の BRCA1/2 の分布に関するデータは存在しますが、島の東部では広範な証拠はありません。
私たちの研究は、シチリア島東部の乳がん患者におけるBRCA1/2 PVの発生率に関する最初の報告の1つです。28 私たちのコホートでは、これまでのところ最も一般的な疾患である乳がんに焦点を合わせました。
389人の乳がん患者を検査したところ、9%がBRCA1/2 PVを有しており、BRCA1とBRCA2が均等に分布していました。これらの結果は、以前にイタリアの人口で報告されたものと一致しています。28 興味深いことに、私たちのコホートの3%（13/389）は男性でした。この割合は、男性の乳がん患者（全乳がん患者の1%）の予想よりも高く40、BRCA1/2変異リスクに基づいて人口を選択したことを反映しています。しかし、これらの男性はいずれもBRCA1/2 PVを発症していなかったため、PALB2、RAD51C、Dなどのあまり一般的ではない変異の存在を除外するためのさらなる分子分析の候補となりました。BRCA2 VUSが明らかな被験者の7%で、意義不明の変異が検出されました。この結果も、既存の証拠と一致しています。28,41,42
BRCA1/2変異女性のBC分子サブタイプの分布を分析したところ、TNBCとBRCA1 PV（58.8％）、およびルミナルB BCとBRCA2 PV（55.6％）の間に既知の関連性が確認されました。16,43 BRCA1およびBRCA2 PVキャリアのルミナルAおよびHER2 +腫瘍は、既存の文献データと一致しています。16,43
次に、BRCA1/2 PV の種類と位置に焦点を当てます。私たちのコホートでは、最も一般的な BRCA1 PV は c.5035_5039delCTAAT でした。Incorvaia らは、シチリアのコホートではこの変異は報告されていないが、他の著者らはこれを生殖細胞系列BRCA1 PVとして報告している。34 我々のコホートでは、シチリアで観察されているいくつかのBRCA1 PV（例えば、c.181T>G、c.514del、c.3253dupA、c.5266dupC）が見つかった。28 これらのうち、2つのBRCA1創始者突然変異（c.181T>Gとc.5266dupC）は、東ヨーロッパと中央ヨーロッパ（ポーランド、チェコ）、スロベニア人、オーストリア、ハンガリー、ベラルーシ、ドイツ）のアシュケナージ系ユダヤ人によく見られ、44,45 米国とアルゼンチンでは、最近、BCとOCのイタリア人患者の「再発性生殖細胞系列変異」として定義された。34c.514del変異は、パレルモとシカゴの北シチリアの8人の乳がん患者で以前に特定された。メッシーナ。興味深いことに、Incorvaia らもカターニアのいくつかの家族で c.3253dupA 変異体を発見しました。28 最も代表的な BRCA2 PV は c.428dup、c.5851_5854delAGTT、およびイントロン変異体 c.8487+1G>A で、これらはより詳細に報告されています。28 c.428dup、c.5851_5854delAGTT PV はシチリア島北西部、主にトラパニおよびパレルモ地域の家庭で観察され、c.5851_5854delAGTT PV はシチリア島北西部の家庭で観察されました。8487+1G>A 変異体は、メッシーナ、パレルモ、およびカルタニッセッタの被験者でより一般的でした。28 Rebbeck ら以前コロンビアで c.5851_5854delAGTT 変異が報告されている。37 別の BRCA2 PV、c.631+1G>A は、シチリア島（アグリジェント、シラクーサ、ラグーザ）の BC および OC 患者で発見されている。28 特に注目すべきは、同じ患者に 2 つの BRCA2 変異（BRCA2 c.631G>A と c.7008-2A>T）が共存しているのを観察したことで、以前の報告と同様に、シスモードで分離していると推測した。34,46 これらの BRCA2 の unble 変異は実際にイタリア地域で頻繁に観察されており、未熟な終止コドンを導入してメッセンジャー RNA スプライシングに影響を与え、BRCA2 タンパク質の機能不全を引き起こすことがわかっている。47,48
我々はまた、タンパク質ドメインおよび遺伝子の推定上の OCCR および BCCR 領域に BRCA1 および BRCA2 PV をマッピングしました。これらの領域は、それぞれ Rebbeck らによって卵巣がんおよび乳がんを発症するリスク領域として説明されました。49 しかし、生殖細胞系列変異体の位置と乳がんまたは卵巣がんのリスクとの関連性に関する証拠は、依然として議論の的となっています。28,50-52 私たちの集団では、BRCA1 PV は主に BCCR 領域に位置し、BRCA2 PV は主に OCCR 領域に位置していました。ただし、推定上の OCCR および BCCR 領域と BC の特徴との関連性は見つかりませんでした。これは、BRCA1/2 変異を持つ患者数が限られているためと考えられます。タンパク質ドメインの観点からは、BRCA1 PV はタンパク質全体に沿って分布しており、BRCA2 の変化は BRC 繰り返しドメインで優先的に見つかります。
最後に、乳がんの臨床病理学的特徴とBRCA1/2 PVとの相関関係を調べました。対象患者数が限られていたため、Ki-67と腫瘍のグレードとの間には有意な相関が見られました。Ki-67の評価と解釈につ​​いては依然として議論の余地がありますが、高い増殖率は再発リスクの増加と生存率の低下と関連していることは確かです。現在、Ki-67の「高」と「低」を区別するためのカットオフ値は20%です。しかし、この閾値は、Ki-67値の中央値が25%であるBRCA1/2変異患者集団には適用されません。Ki-67値が高い傾向は、ルミナルBおよびTNBCコホートで多く見られ、ルミナルA腫瘍はほとんど見られなかったことで説明できます。しかし、いくつかのエビデンスから、Ki-67のカットオフ値（25～30%）を高く設定することで、患者の予後をより適切に分類できる可能性があるようです。53,54私たちの分析では、有意な相関関係が見られましたが、これは驚くべきことではありません。Ki-67値の高さとグレード、そしてBRCA1 PVの存在との間に相関関係が見られます。実際、BRCA1関連腫瘍はTNBCの典型であり、より攻撃的な特徴を示します。16,17
結論として、本研究は、シチリア島東部のBCコホートにおけるBRCA1/2の変異状態に関する報告を提供するものである。全体的に、我々の研究結果は、BCにおける変異の蔓延と臨床病理学的特徴の両方の点で、既存の証拠と一致している。BRCA1/2とは異なり頻度の低いPVの存在を評価するには、マルチゲノム拡張変異解析などを使用するなど、BRCA1/2変異BC患者のより大規模な集団でのさらなる研究が必要である。これにより、遺伝子変異による癌リスクが増大する対象者の増加を特定し、適切に管理することができるようになる。
患者が研究目的で腫瘍サンプルを匿名で提供することに同意したことを確認しました。ヘルシンキ宣言に従い、すべての患者が書面によるインフォームドコンセントに署名しました。AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco” の方針に従い、BRCA1/2 分析は臨床慣行に従って実施され、すべての患者が書面によるインフォームドコンセントに同意するため、本研究は倫理審査を免除されました。患者はまた、研究目的でのデータの使用にも同意しました。
倫理委員会の要請に応じて乳がん患者のケアに協力してくださったパオロ・ヴィグネリ教授に感謝します。
Federica Martorana は、Istituto Gentili、Eli Lilly、Novartis、Pfizer から謝礼を受け取っています。その他の著者は、この研究において利益相反がないことを宣言しています。
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCANは世界185カ国における36種類のがんの発生率と死亡率を推定している。CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660