Javascript está desactivado no teu navegador. Algunhas funcións deste sitio web non funcionarán cando Javascript estea desactivado.
Rexístrate cos teus datos específicos e o medicamento específico que che interese e nós combinaremos a información que nos proporciones cos artigos da nosa extensa base de datos e enviarémosche inmediatamente unha copia en PDF por correo electrónico.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella 1,21 Departamento de Medicina de Catania, Universidade de Catania e Catania. 95123, Italia; 2 Centro de Oncoloxía e Hematoloxía Experimental, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Italia; 3 Oncoloxía Médica, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italia; 4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italia; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italia; 6 Departamento de Ciencias Biomédicas e Biotecnolóxicas, Universidade de Catania, Xenética Médica, Catania, Italia, 95123; 7Instituto de Investigación Oasi-IRCCS, Troina, 94018, Italia Comunicacións: Stefania Stella, tel. +39 095 378 1946, correo electrónico [email protected]; [email protected] Obxectivo: Mutacións na liña xerminal en BRCA1 e BRCA2 e cancro de mama (CM), ovario (CO) e outros establecidos asociados cun risco de cancro ao longo da vida. A proba do xene BRCA é clave para avaliar o risco individual, así como para atopar métodos de prevención en portadores sans e adaptar os tratamentos en pacientes con cancro. A prevalencia das alteracións de BRCA1 e BRCA2 varía moito entre as rexións xeográficas e, aínda que existen datos sobre variantes patóxenas de BRCA en familias sicilianas, faltan estudos dirixidos especificamente ás poboacións do leste de Sicilia. O obxectivo do noso estudo foi investigar a incidencia e a distribución das alteracións na liña xerminal patóxenas de BRCA nunha cohorte de pacientes con CM do leste de Sicilia e avaliar a súa asociación con trazos específicos do CM mediante secuenciación de nova xeración. A presenza de alteracións correlacionouse co grao tumoral e o índice de proliferación. RESULTADOS: En total, 35 pacientes (9 %) tiñan unha variante patóxena de BRCA, 17 (49 %) en BRCA1 e 18 (51 %) en BRCA2. As alteracións de BRCA1 son prevalentes en pacientes con CM triplo negativo, mentres que as mutacións de BRCA2 son máis comúns en pacientes con CM luminal. Comparado Cos non portadores, os suxeitos con variantes de BRCA1 tiveron un grao tumoral e un índice proliferativo significativamente maiores. Conclusións: Os nosos achados proporcionan unha visión xeral do estado mutacional de BRCA en pacientes con cancro de mama do leste de Sicilia e confirman o papel da análise de NGS na identificación de pacientes con cancro de mama hereditario. En xeral, estes datos son consistentes coas evidencias previas que apoian o cribado de BRCA para a prevención e o tratamento axeitados do cancro en portadores de mutacións.
O cancro de mama (CM) é a neoplasia maligna máis común en todo o mundo e o cancro máis mortal nas mulleres.1 As características biolóxicas que determinan o prognóstico e o comportamento clínico do CM foron estudadas amplamente e dilucidadas parcialmente ao longo do tempo. De feito, actualmente utilízanse varios marcadores substitutivos para clasificar o CM en diferentes subtipos moleculares. Son o receptor de estróxenos (RE) e/ou proxesterona (PgR), a amplificación do receptor 2 do factor de crecemento epidérmico humano (HER2), o índice de proliferación Ki-67 e o grao tumoral (G).2 A combinación destas variables identificou as seguintes categorías de CM: 1) Os tumores luminais, que mostran expresión de RE e/ou PgR, representaron o 75 % dos CM. Estes tumores dividíronse á súa vez en Luminal A, cando o Ki-67 era inferior ao 20 % e HER2 negativo, e Luminal B, cando o Ki-67 era igual ou superior ao 20 % e en presenza de amplificación de HER2, independentemente do índice de proliferación; 2) Tumores HER2+ que son ER e PgR negativos pero mostran amplificación de HER2. Este grupo representa o 10 % de todos os tumores de mama; 3) Cancro de mama triplo negativo (TNBC), que non mostra expresión de ER e PgR nin amplificación de HER2, representa aproximadamente o 15 % dos cancros de mama.2-4
Entre estes subtipos de cancro de mama, o grao tumoral e o índice de proliferación representan biomarcadores transversais que están asociados directa e independentemente coa agresividade e o prognóstico tumoral.5,6
Ademais das características biolóxicas mencionadas anteriormente, o papel das alteracións xenéticas herdadas que levan ao desenvolvemento do cancro de mama (CM) volveuse cada vez máis importante nos últimos anos.7 Aproximadamente 1 de cada 10 tumores de mama hérdanse debido a alteracións da liña xerminal en xenes específicos.8 Dous grandes estudos epidemiolóxicos nos que participaron máis de 180.000 mulleres identificaron recentemente un grupo de oito xenes (é dicir, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C e RAD51D) principalmente responsables do CM hereditario. Entre estes xenes, BRCA1 e BRCA2 (en diante denominados BRCA1/2) mostraron a correlación máis forte co desenvolvemento de tumores de mama.9-12 De feito, as mutacións da liña xerminal BRCA1/2 aumentan significativamente o risco de CM ao longo da vida, así como outras neoplasias malignas, como as de ovario, próstata, páncreas, colorrectal e melanoma. De 13 a 80 anos, a incidencia acumulada de CM é do 72 % en mulleres cunha variante patóxena (VP) de BRCA1 e do 69 % en mulleres cunha variante patóxena de BRCA2. PV.14
Cabe destacar que unha publicación recente suxire que o risco de cancro de mama depende do tipo de PV. De feito, en comparación coas variantes truncantes patóxenas, as variantes de sentido erróneo evidentes, especialmente no xene BRCA1, están asociadas cun risco reducido de cancro de mama, especialmente en mulleres maiores.15
A presenza de células parva (PV) de BRCA1 ou BRCA2 asociouse con diferentes características biolóxicas e clinicopatolóxicas.16,17 Os cancros de mama asociados a BRCA1 tenden a ser clinicamente agresivos, pouco diferenciados e altamente proliferativos. Estes tumores adoitan ser triplo negativos e teñen unha idade de inicio temperá. Os tumores que se producen en pacientes con mutacións en BRCA2 adoitan presentar graos de moderados a ben diferenciados e índices proliferativos variables. Estes tumores son máis frecuentes no lumen B e adoitan producirse en adultos maiores.16-18 É importante destacar que as mutacións en BRCA1 e BRCA2 aumentan a sensibilidade a tratamentos específicos, como os sales de platino e os fármacos dirixidos, como os inhibidores da poli(ADP-ribosa) polimerase (PARPi).19,20
Nos últimos anos, a implementación da secuenciación de nova xeración (NGS) na práctica clínica permitiu que un número crecente de pacientes con cancro de mama se sometesen a probas moleculares para síndromes de susceptibilidade ao cancro, incluíndo BRCA1/2.21 Ao mesmo tempo, as definicións baseadas en criterios precisos sobre antecedentes familiares, características demográficas e clinicopatolóxicas permiten identificar mellor os individuos dignos de probas de BRCA1/2.22,23 Neste contexto, están a acumularse evidencias sobre o cribado de BRCA1/2 en poboacións específicas, o que destaca as diferenzas entre as rexións xeográficas.24–27 Aínda que existen informes sobre a cohorte de cancro de mama no oeste de Sicilia, hai menos datos dispoñibles sobre o cribado de BRCA1/2 na poboación do leste de Sicilia.28,29
Describimos aquí os resultados do cribado de BRCA1/2 na liña xerminal en pacientes con cancro de mama do leste de Sicilia, correlacionando aínda máis a presenza de mutacións BRCA1 ou BRCA2 coas principais características clinicopatolóxicas destes tumores.
Realizouse un estudo retrospectivo no «Centro de Oncoloxía e Hematoloxía Experimental» do Hospital Policlinico Rodolico – San Marco de Catania. De xaneiro de 2017 a marzo de 2021, un total de 455 pacientes con cancro de mama e ovario, melanoma, páncreas ou próstata foron derivados ao noso laboratorio de diagnóstico molecular para probas xenéticas BRCA/2. Este estudo realizouse de acordo coa Declaración de Helsinqui e todos os participantes proporcionaron o seu consentimento informado por escrito antes da análise molecular.
As características histolóxicas e biolóxicas (RE, PgR, estado de HER2, Ki-67 e grao) dos cancros de mama avaliáronse en biopsias básicas ou mostras cirúrxicas, considerando só os compoñentes tumorais agresivos. En función destas características, os cancros de mama clasificáronse do seguinte xeito: luminal A (RE+ e/ou PgR+, HER2-, Ki-67 <20%), luminal B (RE+ e/ou PgR+, HER2-, Ki-67 ≥20%), luminal B-HER2+ (RE e/ou PgR+, HER2+), HER2+ (RE e PgR-, HER2+) ou triplo negativo (RE e PgR-, HER2-).
Antes de avaliar o estado das mutacións de BRCA1 e BRCA2, un equipo multidisciplinar que incluía un oncólogo, un xenetista e un psicólogo realizou unha consulta de xenética tumoral para cada paciente para determinar a presenza de BRCA1 e/ou BRCA1 ou individuos con alto risco de PV no xene BRCA2. A selección de pacientes realizouse segundo as directrices da Sociedade Italiana de Oncoloxía Médica (AIOM) e as recomendacións locais sicilianas.30,31 Estes criterios inclúen: (i) antecedentes familiares de variantes patóxenas coñecidas en xenes de susceptibilidade (por exemplo, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) homes con cancro de mama; (iii) aqueles con cancro de mama e carcinoma ocular (CO); (iv) mulleres con cancro de mama <36 anos, cancro de mama tripla <60 anos ou cancro de mama bilateral <50 anos; (v) antecedentes médicos persoais de cancro de mama <50 anos e polo menos un familiar de primeiro grao: (a) cancro de mama <50 anos; (b) CO non mucinoso e non limítrofe de calquera idade; (c) cancro de mama bilateral; (d) cancro de mama masculino; (e) cancro de páncreas; (f) cancro de próstata; (vi) dous ou máis antecedentes persoais de cancro de mama > 50 anos e antecedentes familiares de cancro de mama, cancro orzoide ou cancro de páncreas para os parentes que sexan parentes de primeiro grao entre si (incluídos os parentes cos que sexa parente de primeiro grao); (vii) Antecedentes persoais de cancro orzoide e polo menos un familiar de primeiro grao: (a) cancro de mama <50 anos; (b) cancro no nacemento; (c) cancro orzoide bilateral; (d) cancro orzoide masculino; (vii) muller con cancro orzoide seroso de alto grao.
Obtívose unha mostra de sangue periférico de 20 mL de cada paciente e recolleuse en tubos con EDTA (BD Biosciences). O ADN xenómico illouse de mostras de sangue enteiro de 0,7 mL utilizando o kit de illamento QIAsymphony DSP DNA Midi (QIAGEN, Hilden, Italia) segundo as instrucións do fabricante e pasouse a través dun fluorómetro Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA). Realizause a cuantificación. O enriquecemento de dianas e a preparación da biblioteca realízanse co Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, listo para ser cargado no kit Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 para a preparación automatizada da biblioteca segundo as instrucións do fabricante. O kit consta de dous conxuntos de cebadores de PCR multiplex que se poden usar para estudar todos os xenes BRCA1 (NM_007300.3) e BRCA2 (NM_000059.3). En resumo, engadíronse 15 µL de cada mostra de ADN diluída (10 ng) a placas con código de barras para a preparación da biblioteca e todos os reactivos e consumibles cargáronse no instrumento Ion Chef™. A continuación, realizouse a preparación automatizada da biblioteca e a agrupación da biblioteca de mostras con código de barras no instrumento Ion Chef™. O número de bibliotecas preparadas avaliouse cun fluorómetro Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA) segundo as instrucións do fabricante. Finalmente, as bibliotecas combínanse en proporcións equimolares en tubos de mostra da biblioteca Ion Chef™ (tubos con código de barras) e cárganse. no instrumento Ion Chef™. A secuenciación realizouse cun instrumento Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) usando un chip Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). A análise de datos realizouse mediante Amplicon Suite (SmartSeq srl) e o software Ion Reporter.
Toda a nomenclatura das variantes seguiu as directrices actuais do Consorcio de Variación do Xenoma Humano, dispoñible en liña (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). A importancia clínica das variantes BRCA1/2 definiuse mediante a clasificación do Consorcio Internacional ENIGMA (Rede baseada en evidencias para a interpretación de alelos mutantes da liña xerminal, https://enigmaconsortium.org/) e consultando diferentes bases de datos como ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD e UMD. A clasificación inclúe cinco categorías de risco distintas: benigna (categoría I), probablemente benigna (categoría II), variante de importancia incerta (VUS, categoría III), probablemente patóxena (categoría IV) e patóxena (categoría V). VarSome tamén analizou o efecto das mutacións na estrutura e función das proteínas, unha ferramenta informativa con acceso a 30 bases de datos.32
Para asignarlle significado clínico potencial a cada VUS, empregáronse os seguintes algoritmos computacionais de predición de proteínas: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) e Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). As variantes clasificadas como de clase 1 e 2 consideráronse de tipo salvaxe.
A secuenciación de Sanger confirmou a presenza de cada variante patóxena. En resumo, deseñouse un par de cebadores específicos para cada variante detectada utilizando as secuencias de referencia dos xenes BRCA1 e BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 e NG_012772.3, NM_000059.3, respectivamente). Polo tanto, realizouse unha PCR dirixida seguida da secuenciación de Sanger.
As pacientes que deron negativo para o xene BRCA1/2 foron sometidas a probas de amplificación con sonda dependente da ligación múltiple (MLPA) segundo as instrucións do fabricante para avaliar a presenza de grandes rearranxos xenómicos (LGR). En resumo, as mostras de ADN desnaturalízanse e utilízanse ata 60 sondas específicas dos xenes BRCA1 e BRCA2, cada unha das cales detecta unha secuencia de ADN específica de aproximadamente 60 nucleótidos de lonxitude. Os produtos de amplificación da sonda, que consisten nun conxunto único de amplicóns de PCR, analizáronse mediante electroforese capilar e co software Cofalyser.Net xunto coas táboas Cofalyser específicas do lote axeitadas (www.mrcholland.com).
As variables clinicopatolóxicas seleccionadas (grao histolóxico e índice de proliferación Ki-67%) asociáronse coa presenza de PV BRCA1/2, calculadas mediante o software Prism v. 8.4 usando a proba exacta de Fisher asumindo un valor p <0,05 como significativo.
Entre xaneiro de 2017 e marzo de 2021, realizáronse probas de mutacións xerminais en BRCA1/2 en 455 pacientes. As probas de mutación realizáronse no Centro de Oncoloxía e Hematoloxía Experimental do Hospital Policlinico. Segundo a guía siciliana (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), no Rodolico de Catania – San Marco, observáronse un total de 389 pacientes: cancro de mama, 37 cancro de ovario, 16 cancro de páncreas, 8 cancro de próstata e 5 melanoma. A distribución dos pacientes segundo o tipo de cancro e os resultados da análise móstrase na Figura 1.
A figura 1 mostra un diagrama de fluxo que ofrece unha visión xeral do estudo. As pacientes con tumores de mama, melanoma, páncreas, próstata ou ovario foron examinadas para detectar mutacións nos xenes BRCA1 e BRCA2.
Abreviaturas: PVs, variante patóxena; VUS, variante de significado incerto; WT, secuencia BRCA1/2 de tipo salvaxe.
Centramos os nosos estudos selectivamente en cohortes de cancro de mama. As pacientes tiñan unha mediana de idade de 49 anos (rango 23-89) e eran predominantemente mulleres (n = 376, ou 97 %).
Destes suxeitos, 64 (17 %) tiñan mutacións BRCA1/2 e eran todas mulleres. Trinta e cinco (9 %) tiñan PV e 29 (7,5 %) tiñan VUS. Dezasete (48,6 %) das 35 variantes patóxenas producíronse en BRCA1 e 18 (51,4 %) en BRCA2, mentres que 5 VUS producíronse en BRCA1 (17,2 %) e 24 (82,8 %) en BRCA2 (figuras 1 e 2). A LGR non estaba presente na análise MLPA.
Figura 2. Análise das mutacións BRCA1 e BRCA2 en 389 pacientes con cancro de mama. (A) Distribución das variantes patóxenas (PV) (vermello), variantes de significado incerto (VUS) (laranxa) e WT (azul) en 389 pacientes con cancro de mama; (B) 389 pacientes con cancro de mama. Trinta e cinco (9 %) tiñan variantes patóxenas (PV) BRCA1/2. Entre elas, 17 (48,6 %) eran portadoras de PV BRCA1 (vermello escuro) e 18 (51,4 %) eran portadoras de BRCA2 (vermello claro); (C) 29 (7,5 %) de 389 suxeitos portaban VUS, 5 (17,2 %) xenes BRCA1 (laranxa escuro) e 24 (82,8 %) xenes BRCA2 (laranxa claro).
Abreviaturas: PVs, variante patóxena; VUS, variante de significado incerto; WT, secuencia BRCA1/2 de tipo salvaxe.
A continuación, investigamos a prevalencia dos subtipos moleculares de cancro de mama en pacientes con tumores poliquísticos BRCA1/2. A distribución incluíu 2 (5,7 %) pacientes con tumor luminal A, 15 (42,9 %) pacientes con tumor luminal B, 3 (8,6 %) pacientes con tumor luminal B-HER2+, 2 (5,7 %) pacientes con tumor trigástrico trigástrico (TNBC). Entre as pacientes con BRCA1 positivo, 5 (29,4 %) tiñan tumor luminal B, 2 (11,8 %) tiñan enfermidade HER2+ e 10 (58,8 %) tiñan tumor trigástrico trigástrico. Os tumores sen mutacións BRCA1 eran luminal A ou luminal B-HER2+ (Figura 3). No subgrupo BRCA2 positivo, 10 (55,6 %) tumores eran luminal B, 3 (16,7 %) eran luminal B-HER2+, 3 (16,7 %) tumores trigástricos trigástricos e 2 (11,1 %) eran luminal A (Figura). 3). Non se atoparon tumores HER2+ neste grupo. Polo tanto, as mutacións de BRCA1 son prevalentes en pacientes con TNBC, mentres que as alteracións de BRCA2 son predominantes en individuos con lumen B.
Figura 3 Prevalencia de subtipos de cancro de mama en pacientes con variantes patóxenas en BRCA1 e BRCA2. Histogramas que mostran a distribución das VP BRCA1- (vermello escuro) e BRCA2- (vermello claro) entre os subtipos moleculares de pacientes con cancro de mama. Os números indicados dentro de cada cadro representan a porcentaxe de pacientes con VP BRCA1 e BRCA2 para cada subtipo de cancro de mama.
Abreviaturas: PV, variante patóxena; HER2+, receptor 2 do factor de crecemento epidérmico humano positivo; TNBC, cancro de mama triplo negativo.
Posteriormente, avaliamos o tipo e a localización xénica das PV de BRCA1 e BRCA2. Nas PV de BRCA1, observamos 7 variantes dun só nucleótido (SNV), 6 delecións, 3 duplicacións e 1 inserción. Só unha mutación (c.5522delG) representa un novo descubrimento. A PV de BRCA1 máis común detectada en ambos os suxeitos foi c.5035_5039delCTAAT. Esta alteración implica unha deleción de cinco nucleótidos (CTAAT) no exón 15 de BRCA1, o que resulta na substitución do aminoácido leucina por tirosina no codón 1679 e, debido a un cambio de marco de lectura da tradución cun codón de terminación alternativo previsto, leva a un truncamento prematuro da proteína. Todos os demais cambios detéctanse só nun caso. Cabe destacar que unha das PV informadas estaba localizada na rexión de consenso do sitio de empalme (c.4357+1G>T) (Táboa 1).
En canto á variante paraventricular (PV) de BRCA2, observamos 6 delecións, 6 SNV e 2 duplicacións. Ningún dos cambios atopados é novo. Recorreron tres mutacións na nosa poboación, c.428dup e c.8487+1G>A observadas en 3 suxeitos, seguidas de c.5851_5854delAGTT recuperado en dous casos. A alteración c.428dup implica unha repetición de C no exón 5 de BRCA2, que se prevé que codifica unha proteína truncada e non funcional. A mutación c.8487+1G>A ocorre na rexión intrónica do intrón 19 de BRCA2 (± 1,2) e afecta á secuencia de consenso de empalme, o que resulta nun empalme alterado que resulta nunha proteína anormal ou ausente. A variante patóxena c.5851_5854delAGTT débese a unha deleción de 4 nucleótidos das posicións de nucleótidos 5851 a 5854 no exón codificante 10 do xene BRCA2 e resulta nun... cambio de marco de lectura traducional cun codón de terminación alternativo previsto (p.S1951WfsTer). Cabe destacar que, como se informou anteriormente, detectáronse no mesmo paciente as alteracións c.631G>A e c.7008-2A>T.34 A primeira mutación implica a substitución da adenosina (A) no exón 7 de BRCA2 por un nucleótido que contén guanina (G), o que resulta nun cambio de valina a isoleucina no codón 211, o aminoácido isoleucina é un aminoácido con propiedades moi similares. Este cambio afecta o empalme normal do ARNm. A segunda variante está situada nunha rexión intrónica e resulta nunha dobre substitución de A a timina (T) antes do exón 13 do xene que codifica BRCA2. O cambio c.7008-2A>T pode xerar múltiples transcritos de diferentes lonxitudes. Ademais, no grupo de PV de BRCA2, 4 de 18 cambios (22,2 %) foron intrónicos.
Despois mapeamos as mutacións deletéreas de BRCA1/2 en dominios funcionais e rexións de unión a proteínas (Fig. 4). No xene BRCA1, o 50 % das variantes parasitadas (PV) estaban localizadas na rexión do clúster do cancro de mama (BCCR), mentres que o 22 % das mutacións estaban localizadas na rexión do clúster do cancro de ovario (OCCR) (Fig. 4A). Nas PV de BRCA2, o 35,7 % das variantes estaban localizadas na rexión BCCR e o 42,8 % das mutacións estaban localizadas na OCCR (Fig. 4B). A continuación, avaliamos a localización das PV dentro dos dominios proteicos BRCA1 e BRCA2. Para a proteína BRCA1, atopamos tres PV nos dominios en bucle e en espiral, e dúas mutacións no dominio BRCT (Fig. 4A). Para a proteína BRCA2, 4 PV mapeáronse no dominio de repetición BRC, mentres que se detectaron 3 cambios intrónicos e 3 exónicos nos dominios de unión a oligo/oligosacáridos (OB) e torre (T) (Figura 4B).
Figura 4 Representación esquemática das proteínas BRCA1 e BRCA2 e localización das variantes patóxenas. Esta figura mostra a distribución das variantes patóxenas BRCA1 (A) e BRCA2 (B) en pacientes con cancro de mama. As mutacións exónicas móstranse en azul, mentres que as variantes intrónicas móstranse en laranxa. A altura da barra representa o número de casos. Indícanse as proteínas BRCA1 e BRCA2 e os seus dominios funcionais. (A) A proteína BRCA1 contén un dominio en bucle (RING) e unha secuencia de localización nuclear (NLS), un dominio en espiral, un dominio de clúster SQ/TQ (SCD) e un dominio C-terminal de BRCA1 (BRCT). (B) A proteína BRCA2 contén oito repeticións BRC, un dominio de unión ao ADN cun dominio helicoidal (Helical), tres pregamentos de unión a oligonucleótidos/oligosacáridos (OB), un dominio de torre (T) e un NLS no lado C. As áreas chamadas Rexión do Clúster do Cancro de Mama (BCCR) e Rexión do Clúster do Cancro de Ovario (OCCR) móstranse na parte inferior. *Representa mutacións que determinar os codóns de terminación.
A continuación, investigamos as características clinicopatolóxicas do cancro de mama que poderían correlacionarse coa presenza de VP BRCA1/2. Dispoñíase de rexistros clínicos completos de 181 pacientes BRCA1/2 negativas (non portadoras) e de todas as portadoras (n = 35). Observouse unha correlación entre a taxa de proliferación tumoral e o grao.
Calculamos a distribución de Ki-67 baseándonos na mediana da nosa cohorte (25 %, rango <10-90 %). Os suxeitos con Ki-67 < 25 % definíronse como "Ki-67 baixo", mentres que os individuos con valores ≥ 25 % consideráronse "Ki-67 alto". Atopáronse diferenzas significativas de Ki-67 (p <0,01) entre as non portadoras e as portadoras de PV BRCA1 (Fig. 5A).
Figura 5 Correlación de Ki-67 coa distribución de graos en mulleres con cancro de mama con e sen PV de BRCA1 e BRCA2. (A) Diagrama de caixa que mostra os valores medios de Ki-67 en 181 pacientes con cancro de mama non portadoras fronte a pacientes con PV de BRCA1 (18) ou BRCA2 (17). Os valores de p por debaixo de 0,5 consideráronse estatisticamente significativos. (B) Histograma que representa a asignación de pacientes con cancro de mama en grupos de grao histolóxico (G2 e G3) segundo o estado da mutación de BRCA1 e BRCA2 (suxeitos de tipo WT, portadoras de PV de BRCA1 e BRCA2).
Do mesmo xeito, examinamos se o grao tumoral se correlacionaba coa presenza de VP de BRCA1/2. Dado que o CB G1 estaba ausente na nosa poboación, dividimos as pacientes en dous grupos (G2 ou G3). En consonancia cos resultados de Ki-67, a análise revelou unha correlación estatisticamente significativa entre o grao tumoral e a mutación BRCA1, cunha maior proporción de tumores G3 en portadoras de BRCA1 en comparación coas non portadoras (p <0,005) (Figura 5B).
Os avances na tecnoloxía de secuenciación do ADN permitiron avances sen precedentes nas probas xenéticas de BRCA1/2, con implicacións cruciais para os pacientes con antecedentes familiares de cancro. Ata a data, identificáronse e clasificáronse aproximadamente 20 000 variantes de BRCA1/2 segundo a Sociedade Americana de Xenética Médica 35 e o sistema ENIGMA. 35,36 É ben sabido que o espectro mutacional de BRCA1/2 varía amplamente entre as rexións xeográficas. 37 Dentro de Italia, a taxa de variantes varía entre o 8 % e o 37 %, o que mostra unha ampla variabilidade dentro do país. 38,39 Cunha poboación de case 5 millóns, Sicilia é a quinta rexión máis grande de Italia en termos de número de habitantes. Aínda que existen datos sobre a distribución de BRCA1/2 no oeste de Sicilia, non hai probas exhaustivas na parte oriental da illa.
O noso estudo é un dos primeiros informes sobre a incidencia da poliplastiasis BRCA1/2 en pacientes con cancro de mama no leste de Sicilia.28 Centramos a nosa análise no cancro de mama, xa que é, con moita diferenza, a enfermidade máis común na nosa cohorte.
Ao realizar as análises a 389 pacientes con cancro de mama, o 9 % presentaban mutacións vaxinais (VP) de BRCA1/2, distribuídas uniformemente entre BRCA1 e BRCA2. Estes resultados concordan cos descritos anteriormente na poboación italiana.28 É interesante que o 3 % (13/389) da nosa cohorte fosen homes. Esta taxa é maior do esperado para o cancro de mama masculino (1 % de todos os CP),40 o que reflicte a nosa selección de poboacións baseada no risco de mutación de BRCA1/2. Non obstante, ningún destes homes desenvolveu unha VP de BRCA1/2, polo que eran candidatos para unha análise molecular adicional para descartar a presenza de mutacións menos comúns como PALB2, RAD51C e D, entre outras. Recuperáronse variantes de significado incerto no 7 % dos suxeitos nos que se evidenciaba unha mutación vaxinal de BRCA2. Mesmo este resultado concorda coa evidencia preexistente.28,41,42
Cando analizamos a distribución dos subtipos moleculares de cancro de mama en mulleres con mutacións BRCA1/2, confirmamos as asociacións coñecidas entre o cancro de mama tripla (TNBC) e a fase pulmonar BRCA1 (58,8 %) e entre o cancro de mama luminal B e a fase pulmonar BRCA2 (55,6 %).16,43 Os tumores luminais A e HER2+ en portadoras de fase pulmonar BRCA1 e BRCA2 coinciden cos datos da literatura existente.16,43
Despois centrámonos no tipo e na localización do PV BRCA1/2. Na nosa cohorte, o PV BRCA1 máis común foi c.5035_5039delCTAAT. Aínda que Incorvaia et al. non describiron esta variante na súa cohorte siciliana, outros autores informárona como unha variante xerminal de BRCA1.34 Atopáronse varias variantes xerminais de BRCA1 na nosa cohorte (por exemplo, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA e c.5266dupC), que se observaron en Sicilia.28 Delas, dúas mutacións fundadoras de BRCA1 (c.181T>G e c.5266dupC) atópanse habitualmente en xudeus asquenacís de Europa do Leste e Central (Polonia, República Checa), eslovenos, austríacos, húngaros, bielorrusos e alemáns) e, nos Estados Unidos e na Arxentina, definiuse recentemente como unha "variante xerminal recorrente" en pacientes italianas con cancro de mama e cancro de mama coleóptero. A variante 34c.514del identificouse previamente en 8 pacientes con cancro de mama do norte de Sicilia, en Palermo e Messina. Curiosamente, mesmo Incorvaia et al. atoparon a variante c.3253dupA nalgunhas familias de Catania.28 As VP de BRCA2 máis representativas son c.428dup, c.5851_5854delAGTT e a variante intrónica c.8487+1G>A, que foron descritas con máis detalle 28 nun paciente de Palermo con VP c.428dup, c.5851_5854delAGTT observouse en fogares do noroeste de Sicilia, principalmente nas rexións de Trapani e Palermo, mentres que a VP c.5851_5854delAGTT observouse en fogares do noroeste de Sicilia. A variante 8487+1G>A foi máis común en suxeitos de Messina, Palermo e Caltanissetta.28 Rebbeck et al. describiuse previamente a alteración c.5851_5854delAGTT en Colombia.37 Atopouse outra variante viral de BRCA2, c.631+1G>A, en pacientes con cancro de mama e ortigas de Sicilia (Agrigento, Siracusa e Ragusa).28 Cabe destacar que observamos a coexistencia de dúas variantes de BRCA2 (BRCA2 c.631G>A e c.7008-2A>T) na mesma paciente, que asumimos que estaba segregada en modo cis, como se informou anteriormente dese xeito.34,46 Estas mutacións variables de BRCA2 obsérvanse con frecuencia na rexión italiana e descubriuse que introducen codóns de terminación prematuros, o que afecta ao empalme do ARN mensaxeiro e provoca o fallo da proteína BRCA2.47,48
Tamén mapeamos as PV de BRCA1 e BRCA2 en putativas rexións OCCR e BCCR de dominios proteicos e xenes. Estas rexións foron descritas por Rebbeck et al. como áreas de risco para desenvolver cancro de ovario e de mama, respectivamente.49 Non obstante, as evidencias sobre a asociación entre a localización das variantes xerminais e o risco de cancro de mama ou de ovario seguen sendo controvertidas.28,50-52 Na nosa poboación, as PV de BRCA1 estaban localizadas predominantemente na rexión BCCR, mentres que as PV de BRCA2 estaban localizadas predominantemente na rexión OCCR. Non obstante, non puidemos atopar ningunha asociación entre as putativas rexións OCCR e BCCR e as características do BC. Isto pode deberse ao número limitado de pacientes con mutacións BRCA1/2. Desde a perspectiva do dominio proteico, as PV de BRCA1 están distribuídas ao longo de toda a proteína e as alteracións de BRCA2 atópanse preferentemente no dominio de repetición BRC.
Finalmente, correlacionamos as características clinicopatolóxicas do cancro de mama coa varicela pulmonar (VP) de BRCA1/2. Debido ao número limitado de pacientes incluídas, só atopamos unha correlación significativa entre o Ki-67 e o grao tumoral. Aínda que a avaliación e interpretación do Ki-67 segue sendo algo controvertida, é certo que as altas taxas proliferativas están asociadas a un maior risco de recorrencia da enfermidade e a unha diminución da supervivencia. Ata a data, o límite para distinguir entre o Ki-67 "alto" e o "baixo" é do 20 %. Non obstante, este límite non se aplica á nosa poboación de pacientes con mutacións de BRCA1/2, que ten un valor medio de Ki-67 do 25 %. Esta tendencia nas altas taxas de Ki-67 pódese explicar pola prevalencia nas nosas cohortes luminais B e TNBC, das cales había poucos tumores luminais A presentes. Non obstante, algunhas evidencias parecen suxerir que un límite de Ki-67 máis alto (25-30 %) pode estratificar mellor os pacientes segundo o seu prognóstico.53,54 A partir dos resultados da nosa análise, non é sorprendente unha correlación significativa. Prodúcese entre os graos altos de Ki-67 e a presenza de VP BRCA1. De feito, os tumores relacionados con BRCA1 son típicos do TNBC e presentan características máis agresivas.16,17
En conclusión, este estudo proporciona un informe sobre o estado mutacional de BRCA1/2 nunha cohorte de cancro de mama do leste de Sicilia. En xeral, os nosos achados son consistentes coas evidencias preexistentes, tanto en termos de prevalencia de mutacións como de características clinicopatolóxicas no cancro de mama. Xustifícanse máis estudos en poboacións máis grandes de pacientes con cancro de mama con mutacións BRCA1/2, como o uso da análise mutacional expandida multixenoma, para avaliar a presenza de PV que son distintas e menos frecuentes que BRCA1/2. Isto permitirá a identificación e o tratamento axeitado do número crecente de suxeitos con maior risco de cancro debido a mutacións xenéticas.
Confirmamos que os pacientes asinaron o seu consentimento informado para liberar as súas mostras tumorais de forma anónima con fins de investigación. Todos os pacientes asinaron o seu consentimento informado por escrito segundo a Declaración de Helsinqui. De acordo coa política da AOU Policlinico "G. Rodolico - S. Marco", este estudo estivo exento da revisión ética porque a análise BRCA1/2 realizouse segundo a práctica clínica e todos os pacientes deron o seu consentimento informado por escrito. Os pacientes tamén consenten o uso dos seus datos con fins de investigación.
Agradecémoslle ao profesor Paolo Vigneri a súa axuda na atención de pacientes con cancro de mama, tal e como lle solicitou o Comité de Ética.
Federica Martorana recibe honorarios do Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis e Pfizer. Os demais autores declaran non ter ningún conflito de intereses neste traballo.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL e outros. Estatísticas globais do cancro de 2020: GLOBOCAN estima a incidencia e a mortalidade de 36 tipos de cancro en 185 países de todo o mundo. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249. doi: 10.3322/caac.21660