Таны хөтөч дээр Javascript идэвхгүй байна. Javascript идэвхгүй болсон үед энэ вэбсайтын зарим функц ажиллахгүй.
Өөрийн тодорхой мэдээлэл болон сонирхож буй эмийн тусламжтайгаар бүртгүүлээрэй, бид таны өгсөн мэдээллийг манай өргөн хүрээтэй мэдээллийн сан дахь нийтлэлүүдтэй тохируулж, танд PDF хуулбарыг нэн даруй имэйлээр илгээх болно.
Жүжигчин: Стелла С, Витале СР, Марторана Ф, Массимино М, Павоне Г, Ланзафаме К, Бианка С, Барон С, Горгоне С, Фичера М, Манзелла Л
Стефания Стелла, 1,2 Силвиа Рита Витале, 1,2 Федерика Марторана, 1,2 Мишель Массимино, 1,2 Жулиана Павоне, 3 Катиа Ланзафаме, 3 Себастьяно Бианка, 4 Чиара Бароне, 5 Кристина Горгоне, 6 Марко Фичера Лицелина12. болон Туршилтын Анагаах ухаан, Катаниагийн Их Сургууль, Катания, 95123, Итали;2 Туршилтын Хавдар судлал, Гематологийн төв, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Катаниа, 95123, Итали; 3 Эрүүл мэндийн онкологи, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Катаниа, 95123, Итали; 4 Анагаах ухааны генетик, ARNAS Garibaldi, Катаниа, 95123, Итали; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Итали; 6 Биоанагаах ухаан ба биотехнологийн шинжлэх ухааны тэнхим, Катаниагийн Их Сургууль, Анагаах ухааны генетик, Катаниа, Итали, 95123; 7Оази судалгааны хүрээлэн-IRCCS, Тройна, 94018, Итали Харилцаа холбоо: Стефаниа Стелла, утас +39 095 378 1946, имэйл [email protected]; [email protected] Зорилго: BRCA1 болон BRCA2-д үүссэн үр хөврөлийн мутаци болон хөхний хорт хавдар (BC), өндгөвчний хорт хавдар (OC) болон бусад хорт хавдрын насан туршийн эрсдэлтэй холбоотой. BRCA генийн шинжилгээ нь хувь хүний ​​эрсдэлийг үнэлэх, мөн эрүүл тээгчдэд урьдчилан сэргийлэх аргыг олох, хорт хавдартай өвчтөнүүдэд тохирсон эмчилгээг хийхэд чухал үүрэг гүйцэтгэдэг. BRCA1 болон BRCA2 өөрчлөлтийн тархалт газарзүйн бүс нутгуудад харилцан адилгүй байдаг бөгөөд Сицилийн гэр бүлд BRCA эмгэг төрүүлэгч хувилбаруудын талаарх мэдээлэл байгаа ч зүүн Сицилийн хүн амд тусгайлан чиглэсэн судалгаа дутмаг байна. Бидний судалгааны зорилго нь зүүн Сицилийн BC өвчтөнүүдийн бүлэгт BRCA эмгэг төрүүлэгч үр хөврөлийн өөрчлөлтийн тохиолдол, тархалтыг судлах, дараагийн үеийн дарааллыг ашиглан BC-ийн тодорхой шинж чанаруудтай холбоог үнэлэх явдал байв. Өөрчлөлтийн илрэл нь хавдрын зэрэг болон тархалтын индекстэй хамааралтай байв. ҮР ДҮН: Нийт 35 өвчтөн (9%) BRCA эмгэг төрүүлэгч хувилбартай байсан бол BRCA1-д 17 (49%), BRCA2-д 18 (51%) байв. BRCA1 өөрчлөлт нь гурвалсан сөрөг хувилбарт түгээмэл байдаг. БЦГ-тэй өвчтөнүүдэд BRCA2 мутаци нь люменаль БЦГ-тэй өвчтөнүүдэд илүү түгээмэл байдаг. Тээгч бус өвчтөнүүдтэй харьцуулахад BRCA1 хувилбартай өвчтөнүүд хавдрын зэрэглэл болон тархалтын индекс мэдэгдэхүйц өндөр байсан. Дүгнэлт: Бидний олдворууд нь зүүн Сицилийн БЦГ-тэй өвчтөнүүдийн BRCA мутацийн төлөв байдлын тоймыг гаргаж, удамшлын БЦГ-тэй өвчтөнүүдийг тодорхойлоход NGS шинжилгээний үүргийг баталгаажуулдаг. Ерөнхийдөө эдгээр өгөгдөл нь мутаци тээгчдэд хорт хавдраас урьдчилан сэргийлэх, эмчлэхэд BRCA скрининг хийхийг дэмжиж буй өмнөх нотолгоонуудтай нийцэж байна.
Хөхний хорт хавдар (ХХ) нь дэлхий даяар хамгийн түгээмэл тохиолддог хорт хавдар бөгөөд эмэгтэйчүүдийн дунд хамгийн аюултай хорт хавдар юм.1 ХХ-ийн тавилан болон эмнэлзүйн зан үйлийг тодорхойлдог биологийн шинж чанаруудыг цаг хугацааны явцад өргөн хүрээнд судалж, хэсэгчлэн тодруулсан. Үнэндээ ХХ-ийг өөр өөр молекулын дэд хэвшинжүүдэд ангилахад хэд хэдэн орлуулагч тэмдэглэгээг одоогоор ашиглаж байна. Эдгээр нь эстроген (ER) ба/эсвэл прогестерон рецептор (PgR), хүний ​​эпидермисийн өсөлтийн хүчин зүйлийн рецептор 2 (HER2)-ийн олшруулалт, тархалтын индекс Ki-67 болон хавдрын зэрэг (G) юм.2 Эдгээр хувьсагчдын хослол нь дараах ХХ ангиллыг тодорхойлсон: 1) ER ба/эсвэл PgR-ийн илэрхийлэл бүхий люменаль хавдар нь ХХ-ийн 75%-ийг эзэлж байв. Эдгээр хавдрыг цааш нь Ki-67 нь 20%-иас доош, HER2 сөрөг байх үед люменаль А, тархалтын индексээс үл хамааран Ki-67 нь 20%-иас дээш, HER2 олшруулалт байгаа үед люменаль В гэж хуваасан; 2) ER болон PgR сөрөг боловч HER2 олшруулалт үзүүлдэг HER2+ хавдар. Энэ бүлэг нь хөхний бүх хавдрын 10%-ийг эзэлдэг; 3) ER болон PgR илэрхийлэл болон HER2 олшруулалт үзүүлдэггүй гурвалсан сөрөг хөхний хорт хавдар (TNBC) нь хөхний хорт хавдрын 15 орчим хувийг эзэлдэг.2-4
Эдгээр BC дэд хэвшлүүдийн дунд хавдрын зэрэг болон тархалтын индекс нь хавдрын түрэмгий байдал болон тавилантай шууд болон бие даасан холбоотой хөндлөн огтлолын биомаркеруудыг илэрхийлдэг.5,6
Дээр дурдсан биологийн шинж чанаруудаас гадна хөхний хорт хавдрын хөгжилд хүргэдэг удамшлын генетикийн өөрчлөлтийн үүрэг сүүлийн хэдэн жилд улам бүр чухал болж байна.7 Хөхний хавдрын 10 орчим хувь нь тодорхой генийн үр хөврөлийн өөрчлөлтөөс болж удамшдаг.8 180,000 гаруй эмэгтэйг хамруулсан хоёр том тархвар судлалын судалгаагаар удамшлын хөхний хорт хавдрын гол үүрэг гүйцэтгэдэг найман генийн бүлгийг (жишээ нь, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, RAD51D) саяхан тодорхойлсон. Эдгээр генүүдийн дотроос BRCA1 ба BRCA2 (цаашид BRCA1/2 гэх) нь хөхний хавдрын хөгжилтэй хамгийн хүчтэй хамааралтай болохыг харуулсан.9-12 Үнэндээ BRCA1/2 үр хөврөлийн мутаци нь хөхний хорт хавдар болон өндгөвч, түрүү булчирхай, нойр булчирхай, бүдүүн гэдэс, меланома зэрэг бусад хорт хавдрын насан туршийн эрсдлийг мэдэгдэхүйц нэмэгдүүлдэг. 13-80 насны хооронд BRCA1 эмгэг төрүүлэгч хувилбар (PV) бүхий эмэгтэйчүүдэд хөхний хорт хавдрын хуримтлагдсан тохиолдол 72% байдаг ба BRCA2 PV.14-тэй эмэгтэйчүүдийн 69% нь
Саяхны нэгэн нийтлэлд Цервикийн эрсдэл нь ПВ-ийн төрлөөс хамаардаг болохыг онцлон тэмдэглэх нь зүйтэй. Үнэндээ эмгэг төрүүлэгч таслагдах хувилбаруудтай харьцуулахад, ялангуяа BRCA1 генийн хувьд тод томруун миссэнс хувилбарууд нь ялангуяа ахимаг насны эмэгтэйчүүдэд Цервикийн эрсдэл буурдагтай холбоотой байдаг.15
BRCA1 эсвэл BRCA2 PV байгаа нь биологийн болон клиник эмгэг судлалын янз бүрийн шинж чанартай холбоотой байв.16,17 BRCA1-тэй холбоотой BC нь эмнэлзүйн хувьд түрэмгий, ялгаварлан гадуурхалт муутай, өндөр үржлийн шинж чанартай байдаг. Эдгээр хавдар нь ихэвчлэн гурвалсан сөрөг бөгөөд эрт үед эхэлдэг. BRCA2 мутацитай өвчтөнүүдэд тохиолддог хавдар нь дунд болон сайн ялгаварлан гадуурхалтын зэрэглэлтэй, хувьсах үржлийн индекстэй байдаг. Эдгээр хавдар нь В хөндийд илүү түгээмэл бөгөөд ихэвчлэн ахмад насанд хүрэгчдэд тохиолддог.16-18 BRCA1 болон BRCA2-ийн мутаци нь цагаан алтны давс, поли(ADP-рибоз) полимераза дарангуйлагч (PARPi) зэрэг зорилтот эмүүд зэрэг тодорхой эмчилгээнд мэдрэмтгий байдлыг нэмэгдүүлдэг болохыг тэмдэглэх нь зүйтэй.19,20
Сүүлийн хэдэн жилийн хугацаанд эмнэлзүйн практикт дараагийн үеийн дарааллын шинжилгээ (NGS)-ийг хэрэгжүүлснээр БЦГ-тай өвчтөнүүдийн тоо нэмэгдэж, BRCA1/2 зэрэг хорт хавдрын мэдрэмтгий байдлын хам шинжийн молекулын шинжилгээнд хамрагдах боломжтой болсон.21 Үүний зэрэгцээ гэр бүлийн түүх, хүн ам зүйн болон клиник эмгэг судлалын шинж чанарын талаарх нарийн шалгуурт үндэслэсэн тодорхойлолтууд нь BRCA1/2 шинжилгээнд хамрагдах зохистой хүмүүсийг илүү сайн тодорхойлоход тусалдаг.22,23 Энэ хүрээнд тодорхой популяцид BRCA1/2 шинжилгээний талаарх нотолгоо хуримтлагдаж байгаа нь газарзүйн бүс нутгийн ялгааг харуулж байна.24–27 Баруун Сицилийн БЦГ-ын когортын талаарх тайлан байгаа ч зүүн Сицилийн хүн амын BRCA1/2 шинжилгээний талаарх мэдээлэл цөөн байна.28,29
Бид энд Сицилийн зүүн хэсгийн BC өвчтөнүүдэд хийсэн үр хөврөлийн BRCA1/2 скринингийн үр дүнг тайлбарлаж, BRCA1 эсвэл BRCA2 мутаци байгаа эсэхийг эдгээр хавдрын үндсэн клиник эмгэг судлалын шинж чанаруудтай цаашид холбож үзлээ.
Катаниа дахь Родолико – Сан Марко дахь Поликлинико эмнэлгийн “Туршилтын Хавдар Судлал ба Гематологийн Төв”-д ретроспектив судалгаа хийсэн. 2017 оны 1-р сараас 2021 оны 3-р сар хүртэл хөхний болон өндгөвчний, меланома, нойр булчирхай эсвэл түрүү булчирхайн хорт хавдартай нийт 455 өвчтөнийг BRCA/2 генетикийн шинжилгээнд хамруулахаар манай молекулын оношилгооны лабораторид илгээсэн. Энэхүү судалгааг Хельсинкийн тунхаглалын дагуу явуулсан бөгөөд бүх оролцогчид молекулын шинжилгээ хийхээс өмнө бичгээр мэдээлэл өгсөн зөвшөөрөл өгсөн.
БЦ-ийн гистологи болон биологийн шинж чанаруудыг (ER, PgR, HER2 статус, Ki-67 болон зэрэг) зөвхөн түрэмгий хавдрын бүрэлдэхүүн хэсгүүдийг харгалзан үндсэн биопси эсвэл мэс заслын дээж дээр үнэлсэн. Эдгээр шинж чанарууд дээр үндэслэн БЦ-ийг дараах байдлаар ангилсан: люменаль А (ER+ ба/эсвэл PgR+, HER2-, Ki-67<20%), люменаль B (ER+ ба/эсвэл PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), люменаль B-HER2+ (ER ба/эсвэл PgR+, HER2+), HER2+ (ER ба PgR-, HER2+) эсвэл гурвалсан сөрөг (ER ба PgR-, HER2-).
BRCA1 болон BRCA2 мутацийн төлөв байдлыг үнэлэхээс өмнө хавдар судлаач, генетикч, сэтгэл судлаач зэрэг олон салбарыг хамарсан баг өвчтөн бүрт хавдрын генетикийн зөвлөгөө өгч, BRCA1 болон/эсвэл BRCA1 байгаа эсэхийг, эсвэл BRCA2 генд PV-ийн өндөр эрсдэлтэй хүмүүсийг тодорхойлсон. Өвчтөнийг Италийн Анагаах Ухааны Хавдар Судлалын Нийгэмлэгийн (AIOM) удирдамж болон орон нутгийн Сицилийн зөвлөмжийн дагуу сонгосон.30,31 Эдгээр шалгуурт дараахь зүйлс орно: (i) мэдрэмтгий генийн мэдэгдэж буй эмгэг төрүүлэгч хувилбаруудын гэр бүлийн түүх (жишээ нь, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) BC-тэй эрчүүд; (iii) BC болон OC-тэй хүмүүс; (iv) BC <36 настай, TNBC <60 настай, эсвэл хоёр талын BC <50 настай эмэгтэйчүүд; (v) BC <50 настай, нэгдүгээр зэргийн хамаатан садны хувийн эмнэлгийн түүх: (a) BC <50 настай; (b) ямар ч насны салстлаг бус, хил хязгааргүй OC; (c) хоёр талын BC; (d) эрэгтэй хүний ​​хөхний хорт хавдар; (e) нойр булчирхайн хорт хавдар; (f) түрүү булчирхайн хорт хавдар; (vi) хоёр ба түүнээс дээш насны хөхний хорт хавдрын хувийн түүх 50-иас дээш жил, бие биетэйгээ нэгдүгээр зэргийн хамаатан садан болох хамаатан садан (түүний нэгдүгээр зэргийн хамаатан садан орно) хувьд хөхний хорт хавдар, OC, эсвэл нойр булчирхайн хорт хавдрын гэр бүлийн түүхтэй байх; (vii) Хөхний хорт хавдрын хувийн түүх болон дор хаяж нэг нэгдүгээр зэргийн хамаатан садан: (a) Хөхний хорт хавдар <50 жил; (b) NOC; (c) хоёр талын хөхний хорт хавдар; (d) эрэгтэй хүний ​​хөхний хорт хавдар; (vii) өндөр зэрэглэлийн сероз OC-тэй эмэгтэй.
Өвчтөн бүрээс 20 мл захын цусны дээж авч, EDTA хоолойд (BD Biosciences) цуглуулсан. Геномын ДНХ-г үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Хилден, Итали) ашиглан 0.7 мл бүхэл цусны дээжээс ялгаж, Qubit® 3.0 флуорометрээр (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) дамжуулсан. Тоон үзүүлэлтийг гүйцэтгэнэ. Зорилтот баяжуулалт болон номын санг бэлтгэх ажлыг Oncomine™ BRCA Research Assay Chef гүйцэтгэж, үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу номын санг автоматжуулах зорилгоор Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit-д ачаалахад бэлэн болгодог. Энэхүү хэрэгсэл нь бүх BRCA1 (NM_007300.3) болон BRCA2 (NM_000059.3) генийг судлахад ашиглаж болох хоёр мультиплекс PCR праймер сангаас бүрдэнэ. Товчхондоо, шингэрүүлсэн дээж тус бүрийн 15 µL ДНХ-г (10 нг) номын санг бэлтгэх зорилгоор бар кодтой хавтан дээр нэмж, бүх урвалж болон хэрэглээний материалыг Ion Chef™ багаж дээр ачаалсан. Дараа нь номын санг автоматжуулж бэлтгэх болон бар кодтой дээжийн санг нэгтгэх ажлыг Ion Chef™ багаж дээр гүйцэтгэсэн. Дараа нь бэлтгэсэн номын сангуудын тоог үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу Qubit® 3.0 флуорометр (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)-аар үнэлсэн. Эцэст нь номын сангуудыг Ion Chef™ номын сангийн дээжийн хоолойд эквимоляр харьцаагаар нэгтгэсэн. (бар кодтой хоолой)-г ашиглан Ion Chef™ хэрэгсэлд ачаалсан. Дарааллыг Ion 510 чип (Thermo Fisher Scientific) ашиглан Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) хэрэгсэл (Thermo Fisher Scientific) ашиглан гүйцэтгэсэн. Өгөгдлийн шинжилгээг Amplicon Suite (SmartSeq srl) болон Ion Reporter Software ашиглан гүйцэтгэсэн.
Бүх хувилбарын нэршил нь Хүний геномын өөрчлөлтийн консорциумын одоогийн удирдамжийг дагаж мөрдсөн бөгөөд онлайнаар авах боломжтой (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). BRCA1/2 хувилбаруудын эмнэлзүйн ач холбогдлыг Олон улсын консорциум ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/)-ын ангиллыг ашиглан болон ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, болон UMD зэрэг өөр өөр мэдээллийн сангуудыг ашиглан тодорхойлсон. Ангилал нь таван өөр эрсдэлийн ангилалд багтдаг: хоргүй (I ангилал), хоргүй (II ангилал), тодорхойгүй ач холбогдолтой хувилбар (VUS, III ангилал), эмгэг төрүүлэгч (IV ангилал), эмгэг төрүүлэгч (V ангилал). VarSome нь мөн 30 мэдээллийн санд хандах боломжтой мэдээллийн хэрэгсэл болох уургийн бүтэц, үйл ажиллагаанд мутацийн нөлөөллийг шинжилсэн.32
VUS бүрт боломжит эмнэлзүйн ач холбогдлыг оноохын тулд дараах тооцооллын уургийн таамаглалын алгоритмуудыг ашигласан: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) болон Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). 1 ба 2-р ангилалд ангилагдсан хувилбаруудыг зэрлэг төрөл гэж үзсэн.
Сангерын дараалал нь эмгэг төрүүлэгч хувилбар бүр байгааг баталгаажуулсан. Товчхондоо, BRCA1 болон BRCA2 генийн лавлагааны дарааллыг (NG_005905.2, NM_007294.3 болон NG_012772.3, NM_000059.3 тус тус) ашиглан илэрсэн хувилбар бүрт хос тодорхой праймерыг боловсруулсан. Тиймээс зорилтот PCR-ийг хийсний дараа Сангерын дараалал хийсэн.
BRCA1/2 генийн шинжилгээ сөрөг гарсан өвчтөнүүдийг үйлдвэрлэгчийн зааврын дагуу олон талт холбоосоос хамааралтай датчик олшруулалт (MLPA)-аар шинжилсэн бөгөөд геномын том өөрчлөлт (LGR) байгаа эсэхийг үнэлжээ. Товчхондоо, ДНХ-ийн дээжийг денатурацид оруулж, 60 хүртэлх BRCA1 ба BRCA2 генийн өвөрмөц датчик ашигладаг бөгөөд тус бүр нь ойролцоогоор 60 нуклеотидын урттай тодорхой ДНХ-ийн дарааллыг илрүүлдэг. Дараа нь PCR ампликонуудын өвөрмөц багцаас бүрдэх датчик олшруулалт бүтээгдэхүүнийг капилляр электрофорез болон Cofalyser.Net програм хангамжаар зохих багцад зориулсан Cofalyser хүснэгтүүдтэй хамт шинжилсэн (www.mrcholland.com).
Сонгосон клиник эмгэг судлалын хувьсагчдыг (гистологийн зэрэг ба Ki-67% тархалтын индекс) p-утга <0.05 нь ач холбогдолтой гэж үзэн Фишерийн нарийн тестийг ашиглан Prism програм хангамж v. 8.4 ашиглан тооцоолсон BRCA1/2 PV-ийн илрэлтэй холбосон.
2017 оны 1-р сараас 2021 оны 3-р сарын хооронд 455 өвчтөнд BRCA1/2 үр хөврөлийн мутацийг илрүүлэх шинжилгээ хийсэн. Мутацийн шинжилгээг Поликлинико эмнэлгийн Туршилтын Хавдар Судлал ба Гематологийн Төвд хийсэн. Сицилийн удирдамжийн дагуу (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), Катаниягийн Родолико - Сан Марко"-д нийт 389 өвчтөн бүртгэгдсэн. Хөхний хорт хавдар 37, өндгөвчний хорт хавдар 16, нойр булчирхайн хорт хавдар 8, түрүү булчирхайн хорт хавдар 5, меланома 5 бүртгэгдсэн. Хорт хавдрын төрөл болон шинжилгээний үр дүнгээр өвчтөнүүдийн тархалтыг Зураг 1-т үзүүлэв.
Зураг 1-т судалгааны тоймыг харуулсан урсгалын диаграммыг харуулав. Хөх, меланома, нойр булчирхай, түрүү булчирхай эсвэл өндгөвчний хавдартай өвчтөнүүдийг BRCA1 ба BRCA2 генийн мутацийн шинжилгээнд хамруулсан.
Товчлолууд: PV, эмгэг төрүүлэгч хувилбар; VUS, тодорхойгүй ач холбогдолтой хувилбар; WT, зэрлэг хэлбэрийн BRCA1/2 дараалал.
Бид судалгаагаа хөхний хорт хавдрын бүлэгт сонгон төвлөрүүлсэн. Өвчтөнүүдийн дундаж нас 49 (23-89 насны хооронд) бөгөөд голчлон эмэгтэйчүүд (n=376 буюу 97%) байв.
Эдгээр хүмүүсийн 64 (17%) нь BRCA1/2 мутацитай байсан бөгөөд бүгд эмэгтэй байв. Гучин таван (9%) нь PV, 29 (7.5%) нь VUS-тай байв. Эмгэг төрүүлэгч 35 хувилбарын арван долоо (48.6%) нь BRCA1-д, 18 (51.4%) нь BRCA2-д тохиолдсон бол 5 VUS нь BRCA1-д (17.2%), 24 (82.8%) нь BRCA2-д тохиолдсон (Зураг 1 ба 2). MLPA шинжилгээнд LGR илрээгүй.
Зураг 2. Хөхний хорт хавдартай 389 өвчтөнд BRCA1 ба BRCA2 мутацийн шинжилгээ.(A) Хөхний хорт хавдартай 389 өвчтөнд эмгэг төрүүлэгч хувилбарууд (PV) (улаан), тодорхойгүй ач холбогдолтой хувилбарууд (VUS) (улбар шар), болон WT (цэнхэр)-ийн тархалт; (B) Хөхний хорт хавдартай 389 өвчтөн Гучин таван (9%) нь BRCA1/2 эмгэг төрүүлэгч хувилбаруудтай (PVs) байв. Тэдний 17 (48.6%) нь BRCA1 PV тээгч (хар улаан), 18 (51.4%) нь BRCA2 тээгч (цайвар улаан) байв; (C) 389 хүний ​​29 (7.5%) нь VUS, 5 (17.2%) нь BRCA1 ген (хар улбар шар), 24 (82.8%) нь BRCA2 ген (цайвар улбар шар) тээгч байв.
Товчлолууд: PV, эмгэг төрүүлэгч хувилбар; VUS, тодорхойгүй ач холбогдолтой хувилбар; WT, зэрлэг хэлбэрийн BRCA1/2 дараалал.
Дараа нь бид BRCA1/2 PV-тэй өвчтөнүүдэд BC молекулын дэд хэвшлийн тархалтыг судалсан. Тархалтад 2 (5.7%) люминал А, 15 (42.9%) люминал В, 3 (8.6%) люминал B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ болон 13 (37.1%) TNBC өвчтөнүүд багтсан. BRCA1 эерэг өвчтөнүүдийн дунд 5 (29.4%) нь люминал B BC, 2 (11.8%) нь HER2+ өвчтэй, 10 (58.8%) нь TNBC өвчтэй байв. BRCA1 мутацигүй хавдар нь люминал А эсвэл люминал B-HER2+ байв (Зураг 3). BRCA2 эерэг дэд бүлэгт 10 (55.6%) хавдар нь люминал B, 3 (16.7%) нь люминал B-HER2+, 3 (16.7%) TNBC, 2 (11.1%) нь ... байв. А люмен (Зураг 3). Энэ бүлэгт HER2+ хавдар илрээгүй. Тиймээс BRCA1 мутаци нь TNBC өвчтөнүүдэд түгээмэл байдаг бол BRCA2 өөрчлөлт нь В люмен хүмүүст давамгайлдаг.
Зураг 3 BRCA1 болон BRCA2-ийн эмгэг төрүүлэгч хувилбаруудтай өвчтөнүүдэд хөхний хорт хавдрын дэд хэвшлийн тархалт. Хөхний хорт хавдартай өвчтөнүүдийн молекулын дэд хэвшлийн дунд BRCA1- (бараан улаан) болон BRCA2- (цайвар улаан) PV-ийн тархалтыг харуулсан гистограммууд. Хайрцаг бүрт мэдээлэгдсэн тоонууд нь хөхний хорт хавдрын дэд хэвшлийн тус бүрийн BRCA1 болон BRCA2 PV-тэй өвчтөнүүдийн хувийг илэрхийлнэ.
Товчлол: PVs, эмгэг төрүүлэгч хувилбар; HER2+, хүний ​​эпидермисийн өсөлтийн хүчин зүйлийн рецептор 2 эерэг; TNBC, гурвалсан сөрөг хөхний хорт хавдар.
Дараа нь бид BRCA1 болон BRCA2 PV-ийн төрөл ба генийн байршлыг үнэлсэн. BRCA1 PV-д бид 7 дан нуклеотидын хувилбар (SNV), 6 устгал, 3 давхардал, 1 оруулга ажигласан. Зөвхөн нэг мутаци (c.5522delG) нь шинэ нээлтийг илэрхийлж байна. Хоёр субъектэд илэрсэн хамгийн түгээмэл BRCA1 PV нь c.5035_5039delCTAAT байв. Энэхүү өөрчлөлт нь BRCA1 экзон 15-д таван нуклеотидын (CTAAT) устгалыг хамардаг бөгөөд энэ нь 1679 кодон дээр амин хүчлийн лейцинийг тирозиноор орлуулахад хүргэдэг бөгөөд таамаглаж буй өөр нэг зогсоох кодонтой орчуулгын фрэймийн шилжилт нь уургийн эрт тасрахад хүргэдэг. Бусад бүх өөрчлөлтийг зөвхөн нэг тохиолдолд илрүүлсэн. Мэдээлэгдсэн PV-ийн нэг нь залгах цэгийн консенсус бүсэд байрласан (c.4357+1G>T) (Хүснэгт 1).
BRCA2 PV-ийн хувьд бид 6 устгал, 6 SNV болон 2 давхардлыг ажигласан. Олдсон өөрчлөлтүүдийн аль нь ч шинэлэг биш юм. Манай популяцид гурван мутаци давтагдсан бөгөөд 3 субъектэд c.428dup болон c.8487+1G>A ажиглагдсан бөгөөд дараа нь хоёр тохиолдолд c.5851_5854delAGTT сэргээгдсэн. c.428dup өөрчлөлт нь BRCA2-ийн 5-р экзонд C-ийн давталтыг агуулдаг бөгөөд энэ нь таслагдсан, үйл ажиллагаагүй уургийг кодчилдог гэж таамаглаж байна. c.8487+1G>A мутаци нь BRCA2 интрон 19-ийн интрон бүсэд (± 1,2) тохиолддог бөгөөд залгалтын консенсус дараалалд нөлөөлдөг бөгөөд улмаар залгалтын өөрчлөлтөд хүргэдэг бөгөөд энэ нь хэвийн бус эсвэл уураг байхгүй болгодог. c.5851_5854delAGTT эмгэг төрүүлэгч хувилбар нь BRCA2-ийн 10-р кодчилдог экзон дахь 5851-5854 нуклеотидын байрлалаас 4 нуклеотидын устгалаас үүдэлтэй юм. ген болон урьдчилан таамагласан өөр зогсоох кодон (p.S1951WfsTer)-тай хамт трансляцийн фрэймийн шилжилтийг үүсгэдэг. Өмнө нь мэдээлснээр c.631G>A ба c.7008-2A>T хоёр өөрчлөлтийг нэг өвчтөнд илрүүлсэн нь анхаарал татаж байна.34 Эхний мутаци нь BRCA2 экзон 7 дахь аденозин (A)-г нуклеотид агуулсан гуанин (G)-ээр сольж, 211 кодон дээр валиныг изолейцин болгон өөрчлөхөд хүргэдэг. изолейцин Амин хүчил нь маш төстэй шинж чанартай амин хүчил юм. Энэ өөрчлөлт нь хэвийн mRNA залгахад нөлөөлдөг. Хоёр дахь хувилбар нь интроник бүсэд байрладаг бөгөөд BRCA2-г кодчилдог генийн 13-р экзоноос өмнө А-г тимин (T)-д давхар орлуулахад хүргэдэг. c.7008-2A>T өөрчлөлт нь өөр өөр урттай олон транскрипт үүсгэж болзошгүй. Цаашилбал, BRCA2 PV-ийн бүлэгт 18 өөрчлөлтийн 4 нь (22.2%) интроник байсан.
Дараа нь бид функциональ домэйн болон уураг холбох бүсүүдэд BRCA1/2 хортой мутацийг зурагласан (Зураг 4). BRCA1 генд PV-ийн 50% нь хөхний хорт хавдрын кластерын бүсэд (BCCR), харин мутацийн 22% нь өндгөвчний хорт хавдрын кластерын бүсэд (OCCR) байрласан (Зураг 4A). BRCA2 PV-д хувилбаруудын 35.7% нь BCCR бүсэд, мутацийн 42.8% нь OCCR-д байрласан (Зураг 4B). Дараа нь бид BRCA1 болон BRCA2 уургийн домэйн доторх PV-ийн байршлыг үнэлсэн. BRCA1 уургийн хувьд бид гогцоо болон ороомог ороомог домэйнд гурван PV, BRCT домэйнд хоёр мутацийг олсон (Зураг 4A). BRCA2 уургийн хувьд BRC давталтын домэйнд 4 PV зурагласан бол 3 интроник болон 3 экзоник өөрчлөлт илэрсэн. олиго/олигосахаридтай холбогдох (OB) ба цамхаг (T) домэйнууд (Зураг 4B).
Зураг 4 BRCA1 болон BRCA2 уургийн бүдүүвч дүрслэл ба эмгэг төрүүлэгч хувилбаруудын байршил. Энэ зурагт хөхний хорт хавдартай өвчтөнүүдэд BRCA1 (A) болон BRCA2 (B) эмгэг төрүүлэгч хувилбаруудын тархалтыг харуулав. Экзоник мутацийг цэнхэр өнгөөр, интроник хувилбаруудыг улбар шар өнгөөр ​​харуулав. Баарны өндөр нь тохиолдлын тоог илэрхийлнэ. BRCA1 болон BRCA2 уургууд болон тэдгээрийн функциональ домэйнүүдийг мэдээлэв.(A) BRCA1 уураг нь гогцоо домэйн (RING) болон цөмийн байршлын дараалал (NLS), ороомог ороомог домэйн, SQ/TQ кластер домэйн (SCD) болон BRCA1 C-терминал домэйн (BRCT) агуулдаг.(B) BRCA2 уураг нь найман BRC давталт, мушгиа домэйнтэй ДНХ-тэй холбогдох домэйн (Helical), гурван олигонуклеотид/олигосахаридтай холбогдох (OB) нугалаа, цамхагийн домэйн (T), С талдаа NLS агуулдаг. Хөхний хорт хавдрын кластерын бүс (BCCR) болон өндгөвчний хорт хавдрын кластер гэж нэрлэгддэг хэсгүүд Бүс нутгийг (OCCR) доод хэсэгт харуулав. *Стоп кодонуудыг тодорхойлдог мутацийг илэрхийлнэ.
Дараа нь бид BRCA1/2 PV-ийн илрэлтэй холбоотой байж болох Цээжний хорт хавдрын эмнэлзүйн эмгэг судлалын шинж чанаруудыг судалсан. BRCA1/2-сөрөг 181 өвчтөн (тээгч биш) болон бүх тээгч (n = 35)-ийн эмнэлзүйн бүрэн бүртгэлийг авах боломжтой байсан. Хавдрын тархалтын хурд болон зэрэг хоёрын хооронд хамаарал байсан.
Бид Ki-67-ийн тархалтыг манай бүлгийн голч утгад үндэслэн тооцоолсон (25%, хүрээ <10-90%). Ki-67 < 25% бүхий хүмүүсийг "бага Ki-67" гэж тодорхойлсон бол утга ≥ 25% бүхий хүмүүсийг "өндөр Ki-67" гэж үзсэн. Ki-67-ийн мэдэгдэхүйц ялгаа (p<0.01) нь тээвэрлэгч бус болон BRCA1 PV тээгчдийн хооронд илэрсэн (Зураг 5A).
Зураг 5. BRCA1 болон BRCA2 PV-тэй болон байхгүй хөхний хорт хавдартай эмэгтэйчүүдийн Ki-67-ийн зэрэглэлийн тархалттай хамаарал.(A) Хөхний хорт хавдартай 181 тээгч бус өвчтөний Ki-67 дундаж утгыг BRCA1 (18) эсвэл BRCA2 (17) PV өвчтөнүүдтэй харьцуулсан хайрцгийн график. 0.5-аас доош P утгыг статистикийн хувьд ач холбогдолтой гэж үзсэн.(B) Хөхний хорт хавдартай өвчтөнүүдийг BRCA1 болон BRCA2 мутацийн төлөв байдлын дагуу гистологийн зэрэглэлийн бүлэгт (G2 ба G3) хуваарилахыг харуулсан гистограмм (WT субъектууд, BRCA1 ба BRCA2 PV тээгчид).
Үүнтэй адилаар бид хавдрын зэрэг нь BRCA1/2 PV-ийн илрэлтэй хамааралтай эсэхийг судалсан. Манай популяцид G1 BC байхгүй тул бид өвчтөнүүдийг хоёр бүлэгт хуваасан (G2 эсвэл G3). Ki-67 үр дүнтэй нийцүүлэн шинжилгээгээр хавдрын зэрэг болон BRCA1 мутацийн хооронд статистикийн хувьд ач холбогдолтой хамаарал байгааг тогтоосон бөгөөд BRCA1 тээгчдэд G3 хавдрын эзлэх хувь нь тээгч бус хүмүүстэй харьцуулахад өндөр байсан (p<0.005) (Зураг 5B).
ДНХ-ийн дарааллын технологийн дэвшил нь BRCA1/2 генетикийн шинжилгээнд урьд өмнө байгаагүй дэвшил гаргах боломжийг олгосон бөгөөд энэ нь хорт хавдрын гэр бүлийн түүхтэй өвчтөнүүдэд чухал ач холбогдолтой юм. Өнөөдрийг хүртэл Америкийн Анагаах Ухааны Генетикийн Нийгэмлэг 35 болон ENIGMA системийн дагуу ойролцоогоор 20,000 BRCA1/2 хувилбарыг тодорхойлж, ангилсан байна.35,36 BRCA1/2 мутацийн спектр нь газарзүйн бүс нутгуудад харилцан адилгүй байдаг нь сайн мэдэгдэж байна.37 Италид BRCA1/2 PV-ийн түвшин 8%-37% хооронд хэлбэлзэж, улс орон доторх өргөн хэлбэлзлийг харуулж байна.38,39 Бараг 5 сая хүн амтай Сицили нь оршин суугчдын тоогоороо Италийн тавдугаарт ордог бүс нутаг юм. Баруун Сицилид BRCA1/2-ийн тархалтын талаарх мэдээлэл байгаа ч арлын зүүн хэсэгт өргөн хүрээтэй нотолгоо байхгүй байна.
Манай судалгаа нь Сицилийн зүүн хэсэгт орших BC өвчтөнүүдийн BRCA1/2 PV-ийн тохиолдлын талаарх анхны тайлангуудын нэг юм.28 Бид дүн шинжилгээгээ BC дээр төвлөрүүлсэн, учир нь энэ нь манай бүлэгт хамгийн түгээмэл тохиолддог өвчин юм.
389 хөхний хорт хавдартай өвчтөнд шинжилгээ хийхэд 9% нь BRCA1/2 PV-тэй байсан бөгөөд энэ нь BRCA1 болон BRCA2-ийн хооронд жигд тархсан байв. Эдгээр үр дүн нь Италийн хүн амын өмнө нь мэдээлэгдсэн үр дүнтэй нийцэж байна.28 Сонирхолтой нь, манай когортын 3% (13/389) нь эрэгтэйчүүд байв. Энэ түвшин нь эрэгтэйчүүдийн хөхний хорт хавдрын хүлээгдэж байснаас өндөр байна (бүх хөхний хорт хавдрын 1%),40 нь BRCA1/2 мутацийн эрсдэлд үндэслэн популяцийг сонгосон байдлыг тусгасан болно. Гэсэн хэдий ч эдгээр эрчүүдийн аль нь ч BRCA1/2 PV үүсгээгүй тул PALB2, RAD51C, D зэрэг бага түгээмэл мутаци байгаа эсэхийг үгүйсгэхийн тулд цаашид молекулын шинжилгээ хийх нэр дэвшигчид байв. BRCA2 VUS илэрсэн хүмүүсийн 7%-д тодорхойгүй ач холбогдолтой хувилбаруудыг олж авсан. Энэ үр дүн ч гэсэн өмнөх нотлох баримттай нийцэж байна.28,41,42
Бид BRCA1/2 мутант эмэгтэйчүүдэд BC молекулын дэд хэвшлийн тархалтыг шинжлэхэд TNBC болон BRCA1 PV (58.8%) болон люменал B BC болон BRCA2 PV (55.6%) хоорондын холбоог баталсан.16,43 BRCA1 болон BRCA2 PV тээгчдэд люменал А болон HER2+ хавдар нь одоо байгаа уран зохиолын өгөгдөлтэй нийцэж байна.16,43
Дараа нь бид BRCA1/2 PV-ийн төрөл, байршилд анхаарлаа хандуулдаг. Манай бүлэгт хамгийн түгээмэл BRCA1 PV нь c.5035_5039delCTAAT байсан. Хэдийгээр Incorvaia et al. Сицилийн бүлэгтээ энэ хувилбарыг тайлбарлаагүй, бусад зохиогчид үүнийг үр хөврөлийн BRCA1 PV гэж мэдээлсэн.34 Манай бүлэгт хэд хэдэн BRCA1 PV олдсон - жишээ нь c.181T>G, c.514del, c.3253dupA болон c.5266dupC - эдгээр нь Сицилид ажиглагдсан.28 Эдгээрээс хоёр BRCA1 үүсгэн байгуулагч мутаци (c.181T>G болон c.5266dupC) нь Зүүн болон Төв Европын (Польш, Чех), Словени, Австри, Унгар, Беларусь, Герман) Ашкенази еврейчүүдэд түгээмэл байдаг (44,45) бөгөөд АНУ, Аргентинд саяхан BC болон OC өвчтэй Италийн өвчтөнүүдэд "давтагдах үр хөврөлийн хувилбар" гэж тодорхойлсон. 34c.514del хувилбарыг өмнө нь Палермо, Мессина дахь хойд Сицилийн хөхний хорт хавдартай 8 өвчтөнд тодорхойлсон. Сонирхолтой нь, тэр ч байтугай Инкорвайа нар... Катаниа мужийн зарим гэр бүлд c.3253dupA хувилбарыг олсон.28 BRCA2 PV-ийн хамгийн төлөөлөл нь c.428dup, c.5851_5854delAGTT болон интроник хувилбар c.8487+1G>A бөгөөд эдгээрийг Палермо мужид c.428dup, c.5851_5854delAGTT өвчтэй өвчтөнд илүү дэлгэрэнгүй мэдээлсэн 28. PV нь Сицилийн баруун хойд хэсэгт, голчлон Трапани, Палермо мужуудад ажиглагдсан бол c.5851_5854delAGTT PV нь Сицилийн баруун хойд хэсэгт байрлах өрхүүдэд ажиглагдсан. 8487+1G>A хувилбар нь Мессина, Палермо, Калтаниссеттагийн хүмүүст илүү түгээмэл байсан.28 Реббек нар. Өмнө нь Колумб улсад c.5851_5854delAGTT өөрчлөлтийг тайлбарласан.37 Өөр нэг BRCA2 PV, c.631+1G>A нь Сицилийн BC болон OC өвчтөнүүдэд (Агригенто, Сиракуса, Рагуса) илэрсэн.28 Бид өмнө нь мэдээлсэнчлэн цис горимд тусгаарлагдсан гэж үзсэн ижил өвчтөнд хоёр BRCA2 хувилбар (BRCA2 c.631G>A ба c.7008-2A>T) зэрэгцэн оршиж байгааг ажигласан.34,46 Эдгээр BRCA2 боломжтой мутаци нь Италийн бүс нутагт байнга ажиглагддаг бөгөөд дутуу зогсолтын кодонуудыг нэвтрүүлж, мессенжер РНХ-ийн залгалтанд нөлөөлж, BRCA2 уургийн эвдрэлд хүргэдэг болохыг тогтоожээ.47,48
Бид мөн уургийн домэйн болон генийн таамагласан OCCR болон BCCR бүсүүдэд BRCA1 болон BRCA2 PV-г зурагласан. Эдгээр бүс нутгуудыг Реббек нар өндгөвч болон хөхний хорт хавдар тусах эрсдэлтэй бүс гэж тус тус тодорхойлсон.49 Гэсэн хэдий ч үр хөврөлийн хувилбаруудын байршил болон хөх эсвэл өндгөвчний хорт хавдрын эрсдэлийн хоорондын хамаарлын талаарх нотолгоо маргаантай хэвээр байна.28,50-52 Манай хүн амын дунд BRCA1 PV нь голчлон BCCR бүсэд байрладаг бол BRCA2 PV нь голчлон OCCR бүсэд байрладаг байв. Гэсэн хэдий ч бид таамагласан OCCR болон BCCR бүсүүд болон BC-ийн шинж чанаруудын хооронд ямар нэгэн холбоо олж чадаагүй. Энэ нь BRCA1/2 мутацитай өвчтөнүүдийн тоо хязгаарлагдмал байгаатай холбоотой байж болох юм. Уургийн домэйны үүднээс авч үзвэл BRCA1 PV нь уургийн бүх хэсэгт тархсан бөгөөд BRCA2 өөрчлөлт нь BRC давталтын домэйнд илүү их тохиолддог.
Эцэст нь бид БЦГ-ын эмнэлзүйн эмгэг судлалын шинж чанарыг BRCA1/2 PV-тэй харьцуулсан. Оролцсон өвчтөнүүдийн тоо хязгаарлагдмал тул бид зөвхөн Ki-67 болон хавдрын зэрэглэлийн хооронд мэдэгдэхүйц хамаарал байгааг олж мэдсэн. Ki-67-ийн үнэлгээ, тайлбар нь маргаантай хэвээр байгаа ч өндөр тархалтын түвшин нь өвчний дахилтын эрсдэл нэмэгдэж, амьдрах чадвар буурахтай холбоотой гэдэг нь гарцаагүй. Өнөөдрийг хүртэл "өндөр" ба "бага" Ki-67-г ялгах хязгаар нь 20% байна. Гэсэн хэдий ч энэ босго нь бидний BRCA1/2 мутацитай өвчтөний популяцид хамаарахгүй бөгөөд Ki-67-ийн дундаж утга нь 25% байна. Ki-67-ийн өндөр түвшин дэх энэ хандлагыг манай люменаль B болон TNBC когортуудын тархалтаар тайлбарлаж болох бөгөөд үүнээс цөөн тооны люменаль А хавдар илэрсэн. Гэсэн хэдий ч зарим нотолгоо нь Ki-67-ийн өндөр хязгаар (25-30%) нь өвчтөнүүдийг тавилангаар нь илүү сайн ангилж болохыг харуулж байна.53,54 Бидний шинжилгээний үр дүнгээс харахад мэдэгдэхүйц хамаарал нь гайхмаар зүйл биш юм. Ki-67-ийн өндөр түвшин болон зэрэглэл болон илрэх хооронд тохиолддог. BRCA1 PV. Үнэндээ BRCA1-тэй холбоотой хавдар нь TNBC-ийн ердийн шинж чанартай бөгөөд илүү түрэмгий шинж чанартай байдаг.16,17
Эцэст нь хэлэхэд, энэхүү судалгаа нь зүүн Сицилийн BC когорт дахь BRCA1/2-ийн мутацийн төлөв байдлын талаарх тайланг гаргаж байна. Ерөнхийдөө бидний олдворууд нь BC-ийн мутацийн тархалт болон клиник эмгэг судлалын шинж чанаруудын хувьд урьд өмнө байсан нотлох баримтуудтай нийцэж байна. BRCA1/2-мутант BC өвчтөнүүдийн томоохон популяцид BRCA1/2-ээс ялгаатай, бага тохиолддог PV-ийн илрэлийг үнэлэхийн тулд олон геномын өргөтгөсөн мутацийн шинжилгээг ашиглах гэх мэт илүү их судалгаа хийх шаардлагатай. Энэ нь генетикийн мутацийн улмаас хорт хавдар тусах эрсдэл нэмэгдэж буй хүмүүсийн тоо нэмэгдэж байгааг тодорхойлж, зохих ёсоор эмчлэх боломжийг олгоно.
Бид өвчтөнүүд судалгааны зорилгоор хавдрын дээжээ нэрээ нууцалж гаргах талаар мэдээлэлтэй зөвшөөрөлд гарын үсэг зурсан болохыг баталгаажуулсан. Бүх өвчтөнүүд Хельсинкийн тунхаглалын дагуу бичгээр мэдээлэлтэй зөвшөөрөлд гарын үсэг зурсан. AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco”-ийн бодлогын дагуу энэхүү судалгааг ёс зүйн хяналтаас чөлөөлсөн, учир нь BRCA1/2 шинжилгээг эмнэлзүйн практикийн дагуу хийсэн бөгөөд бүх өвчтөнүүд бичгээр мэдээлэлтэй зөвшөөрөл өгсөн. Өвчтөнүүд мөн өөрсдийн өгөгдлийг судалгааны зорилгоор ашиглахыг зөвшөөрч байна.
Ёс зүйн хорооны хүсэлтийн дагуу хөхний хорт хавдартай өвчтөнүүдийг эмчлэхэд тусалсан Профессор Паоло Виньерид талархал илэрхийлье.
Федерика Марторана Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer-ээс шагналын хуудсыг тайлагнадаг. Бусад зохиогчид энэ бүтээлд ашиг сонирхлын зөрчилгүй гэж мэдэгджээ.
1. Сун Х, Ферлай Ж, Сигел РЛ, нар. Дэлхийн хорт хавдрын статистик 2020: GLOBOCAN нь дэлхийн 185 оронд 36 хорт хавдрын өвчлөл болон нас баралтыг тооцоолсон. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660