Javascript ass de Moment an Ärem Browser deaktivéiert. Verschidde Funktiounen vun dëser Websäit funktionéieren net wann Javascript deaktivéiert ass.
Registréiert Iech mat Äre spezifeschen Donnéeën an dem spezifesche Medikament vun Ärem Interessi a mir wäerten d'Informatiounen, déi Dir gitt, mat Artikelen an eiser extensiver Datebank vergläichen an Iech direkt eng PDF-Kopie per E-Mail schécken.
Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L.
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzellal University of Experience Catania, Catania, 95123, Italien;2 Center fir Experimentell Onkologie an Hämatologie, AOU Policlinico "G.Rodolico - San Marco", Catania, 95123, Italien; 3 Medical Oncology, AOU Policlinico "G. Rodolico - San Marco", Catania, 95123, Italien; 4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italien; 5 Medezin Genetik, ASP, Syracuse, 96100, Italien; 6 Departement fir Biomedizinesch a Biotechnologiewëssenschaften, Universitéit vu Catania, Medizinesch Genetik, Catania, Italien, 95123; 7Oasi Fuerschungsinstitut-IRCCS, Troina, 94018, Italien Kommunikatioun: Stefania Stella, Tel. +39 095 378 1946, E-Mail [email protected]; [email protected] Zweck: Keimlinnmutatiounen a BRCA1 an BRCA2 a festgestallte Broschtkriibs (BC), Eierstockkriibs (OC) an aner Kriibserkrankungen, déi mat engem Liewensdauerrisiko fir Kriibs verbonne sinn. Tester fir de BRCA-Gen sinn de Schlëssel fir den individuellen Risiko ze bewäerten, souwéi fir Präventiounsmethoden bei gesonde Träger ze fannen an d'Behandlungen bei Kriibspatienten unzepassen. D'Prävalenz vu BRCA1- an BRCA2-Verännerungen variéiert staark tëscht geografesche Regiounen, an obwuel et Daten iwwer pathogen BRCA-Varianten a sizilianesche Familljen gëtt, feelen et Studien, déi speziell op Populatiounen am Oste vu Sizilien geriicht sinn. Zil vun eiser Studie war et, d'Inzidenz an d'Verdeelung vu pathogenen BRCA-Keimlinnännerungen an enger Kohort vu BC-Patienten aus dem Oste vu Sizilien z'ënnersichen an hir Associatioun mat spezifesche BC-Charakteristiken mat Hëllef vun der Next-Generation-Sequenzéierung ze bewäerten. D'Präsenz vun Ännerungen korreléiert mam Tumorgrad an dem Proliferatiounsindex. RESULTATER: Am Ganzen haten 35 Patienten (9%) eng pathogen BRCA-Variant, 17 (49%) a BRCA1 an 18 (51%) a BRCA2. BRCA1-Verännerunge si prevalent bei dräifach negativen BC-Patienten, während BRCA2-Mutatiounen méi heefeg bei luminalen BC-Patienten sinn. Am Verglach mat Bei Persounen ouni Trägerschaft haten d'Persounen mat BRCA1-Varianten e wesentlech méi héijen Tumorgrad an e proliferativen Index. Conclusiounen: Eis Erkenntnisser bidden en Iwwerbléck iwwer de BRCA-Mutatiounsstatus bei BC-Patienten aus Oste vu Sizilien a bestätegen d'Roll vun der NGS-Analyse bei der Identifikatioun vu Patienten mat ierflecher BC. Am Allgemengen sinn dës Donnéeën am Aklang mat fréiere Beweiser, déi de BRCA-Screening fir eng korrekt Präventioun a Behandlung vu Kriibs bei Mutatiounsträger ënnerstëtzen.
Broschtkriibs (BC) ass déi heefegst bösarteg Krankheet weltwäit an dee geféierlechste Kriibs bei Fraen.1 Déi biologesch Charakteristiken, déi d'Prognose an d'klinescht Verhalen vu BC bestëmmen, goufen am Laf vun der Zäit extensiv ënnersicht an deelweis opgekläert. Tatsächlech ginn de Moment verschidde Surrogatmarker benotzt fir BC a verschidden molekular Ënnertypen ze klassifizéieren. Si sinn Östrogen (ER) an/oder Progesteronrezeptor (PgR), mënschlech epidermal Wuesstemsfaktorrezeptor 2 (HER2) Amplifikatioun, Proliferatiounsindex Ki-67 an Tumorgrad (G).2 D'Kombinatioun vun dëse Variabelen huet déi folgend BC-Kategorien identifizéiert: 1) Luminal Tumoren, déi ER- an/oder PgR-Expressioun weisen, hunn 75% vun de BCs ausgemaach. Dës Tumoren goufen weider opgedeelt a Luminal A, wann Ki-67 ënner 20% an HER2-negativ war, a Luminal B, wann Ki-67 gläich oder iwwer 20% war an et eng HER2-Amplifikatioun gouf, onofhängeg vum Proliferatiounsindex; 2) HER2+ Tumoren, déi ER- a PgR-negativ sinn, awer eng HER2-Amplifikatioun weisen. Dës Grupp mécht 10% vun alle Broschttumoren aus; 3) Tripel-negative Broschtkriibs (TNBC), deen keng ER- a PgR-Expressioun an HER2-Amplifikatioun weist, ass fir ongeféier 15% vun de Broschtkriibsfäll verantwortlech.2-4
Ënnert dësen BC-Ënnertypen representéieren den Tumorgrad an de Proliferatiounsindex Querschnittsbiomarker, déi direkt an onofhängeg mat der Tumoraggressivitéit a Prognose assoziéiert sinn.5,6
Nieft den uewe genannten biologesche Charakteristiken ass d'Roll vun ierfleche genetesche Verännerungen, déi zur Entwécklung vu Broschtkriibs féieren, an de leschte Joren ëmmer méi wichteg ginn.7 Ongeféier 1 vun 10 Broschttumoren gëtt duerch Keimline-Verännerungen a spezifesche Genen ierflech.8 Zwee grouss epidemiologesch Studien mat méi wéi 180.000 Fraen hunn viru kuerzem eng Grupp vun aacht Genen identifizéiert (z.B. ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C an RAD51D), déi haaptsächlech fir ierflech Broschtkriibs verantwortlech sinn. Ënnert dëse Genen hunn BRCA1 a BRCA2 (am weidere BRCA1/2 genannt) déi stäerkst Korrelatioun mat der Entwécklung vu Broschttumoren gewisen.9-12 Tatsächlech erhéijen d'Keimline-BRCA1/2-Mutatiounen de Liewensdauerrisiko fir Broschtkriibs souwéi aner bösarteg Tumoren, dorënner Eierstock-, Prostata-, Bauchspeicheldrüs-, Kolorektal- a Melanom, däitlech. Vum Alter vun 13 bis 80 Joer ass déi kumulativ Inzidenz vu Broschtkriibs 72% bei Frae mat enger pathogener BRCA1-Variant (PV) a 69% bei Frae mat enger BRCA2-Variant. PV.14
Besonnesch ass et ze bemierken, datt eng rezent Publikatioun drop hiweist, datt de Risiko fir BC vun der Aart vu PV ofhänkt. Tatsächlech sinn am Verglach mat pathogene trunkerende Varianten opfälleg Missense-Varianten, besonnesch am BRCA1-Gen, mat engem reduzéierte Risiko fir BC verbonnen, besonnesch bei eelere Fraen.15
D'Präsenz vu BRCA1 oder BRCA2 PV gouf mat verschiddene biologeschen a klinesch-pathologesche Charakteristiken assoziéiert.16,17 BRCA1-assoziéiert BCs tendéieren klinesch aggressiv, schlecht differenzéiert a staark proliferativ ze sinn. Dës Tumoren sinn normalerweis dräifach negativ an hunn en fréien Ufanksalter. Tumoren, déi bei BRCA2-mutéierte Patienten optrieden, weisen typescherweis mëttel bis gutt differenzéiert Graden a variabel proliferativ Indizes. Dës Tumoren si méi heefeg am Lumen B a trieden normalerweis bei eeleren Erwuessenen op.16-18 Besonnesch Mutatiounen am BRCA1 an BRCA2 erhéijen d'Sensibilitéit fir spezifesch Behandlungen, dorënner Platinsalze a gezielte Medikamenter wéi Poly(ADP-Ribose)-Polymerase-Inhibitoren (PARPi).19,20
An de leschte Joren huet d'Ëmsetzung vun der Next-Generation-Sequenzéierung (NGS) an der klinescher Praxis et enger wuessender Zuel vu BC-Patienten erméiglecht, molekulare Tester fir Kriibs-Empfindlechkeetssyndromer, dorënner BRCA1/2, ze maachen.21 Gläichzäiteg ginn Definitiounen, déi op präzise Critèren iwwer d'Familljegeschicht, demographesch a klinesch-pathologesch Charakteristiken baséieren, benotzt, fir Persounen, déi e BRCA1/2-Test wäert sinn, besser z'identifizéieren.22,23 An dësem Kontext sammelen sech Beweiser fir BRCA1/2-Screening a spezifesche Populatiounen, wat Ënnerscheeder tëscht geografesche Regiounen ervirhieft.24–27 Obwuel et Rapporte iwwer d'BC-Kohort a Westsizilien gëtt, si manner Donnéeën iwwer BRCA1/2-Screening an der Bevëlkerung a Sizilien am Oste verfügbar.28,29
Mir beschreiwen hei d'Resultater vum Screening op der Keimlinn vu BRCA1/2 bei BC-Patienten aus dem Oste vu Sizilien, a korreléieren d'Präsenz vu BRCA1- oder BRCA2-Mutatiounen weider mat den Haaptklinisch-pathologesche Charakteristike vun dësen Tumoren.
Eng retrospektiv Studie gouf am "Center for Experimental Oncology and Hematology" am Policlinico Hospital.Rodolico - San Marco zu Catania duerchgefouert. Vum Januar 2017 bis Mäerz 2021 goufen insgesamt 455 Patienten mat Broscht- a Eierstockkriibs, Melanom, Bauchspeicheldrüs- oder Prostatakriibs an eist molekulare Diagnostiklaboratoire fir BRCA/2-Gentester iwwerwisen. Dës Studie gouf am Aklang mat der Deklaratioun vun Helsinki duerchgefouert, an all Participanten hunn hir schrëftlech Zoustëmmung virun der molekularer Analyse ginn.
Histologesch a biologesch Charakteristiken (ER, PgR, HER2-Status, Ki-67 a Grad) vun de BC goufen op Basis vun enger Kärbiopsie oder chirurgesche Proben evaluéiert, woubäi nëmmen aggressiv Tumorkomponenten berécksiichtegt goufen. Baséierend op dësen Charakteristiken goufen d'BCs wéi follegt klasséiert: luminal A (ER+ an/oder PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ an/oder PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER an/oder PgR+, HER2+), HER2+ (ER a PgR-, HER2+) oder dräifach negativ (ER a PgR-, HER2-).
Ier de BRCA1- a BRCA2-Mutatiounsstatus bewäert gouf, huet en multidisziplinärt Team mat engem Onkolog, engem Genetiker an engem Psycholog eng Tumorgenetik-Konsultatioun fir all Patient duerchgefouert, fir d'Präsenz vu BRCA1 an/oder BRCA1 oder Persounen mat engem héije Risiko fir PV am BRCA2-Gen ze bestëmmen. D'Patientenauswiel gouf no de Richtlinne vun der italieenescher Gesellschaft fir medizinesch Onkologie (AIOM) a lokale sizilianesche Empfehlungen duerchgefouert.30,31 Dës Critèren enthalen: (i) Familljegeschicht vu bekannte pathogene Varianten an Suszeptibilitätsgenen (z.B. BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) Männer mat Broschtkriibs; (iii) déi mat Broschtkriibs an OC; (iv) Frae mat Broschtkriibs <36 Joer, TNBC <60 Joer oder bilateraler Broschtkriibs <50 Joer; (v) perséinlech medizinesch Geschicht vu Broschtkriibs <50 Joer an op d'mannst engem Familljemember am éischte Grad: (a) Broschtkriibs < 50 Joer; (b) net-muzinös an net-borderline OC vun all Alter; (c) bilateraler Broschtkriibs; (d) männlech Broschtkriibs; (e) Bauchspeicheldrüskriibs; (f) Prostatakriibs; (vi) zwou oder méi Perséinlech Geschicht vu BC > 50 Joer a Familljegeschicht vu BC, OC oder Bauchspeicheldrüskriibs fir Familljememberen, déi sech géigesäiteg am éischte Grad verwandt sinn (inklusiv Familljememberen, mat deenen si am éischte Grad verwandt ass); (vii) Perséinlech Geschicht vun OC an op d'mannst engem Familljemember am éischte Grad: (a) BC < 50 Joer; (b) NOC; (c) bilateral BC; (d) männlech BC; (vii) weiblech mat héichgrade seröser OC.
Vun all Patient gouf eng 20 ml periphere Bluttprouf geholl an an EDTA-Réier (BD Biosciences) gesammelt. Genomesch DNA gouf aus 0,7 ml Vollblutprouwen mat dem QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italien) no den Instruktioune vum Hiersteller isoléiert an duerch e Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) geleet. D'Quantifizéierung gouf duerchgefouert. D'Zilanreicherung an d'Bibliothéiksvirbereedung ginn vum Oncomine™ BRCA Research Assay Chef duerchgefouert, prett fir an den Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit fir automatiséiert Bibliothéiksvirbereedung no den Instruktioune vum Hiersteller gelueden ze ginn. De Kit besteet aus zwee Multiplex PCR Primer Pools, déi benotzt kënne ginn fir all BRCA1 (NM_007300.3) an BRCA2 (NM_000059.3) Genen ze studéieren. Kuerz gesot, 15 µL vun all verdënntem Prouf-DNA (10 ng) goufen zu Barcode-Platten fir d'Bibliothéiksvirbereedung bäigefüügt an all Reagenzien a Verbrauchsmaterialien goufen um Ion Chef™ Instrument gelueden. Déi automatiséiert Bibliothéiksvirbereedung an de Barcode-Proufbibliothéikspooling goufen dann um Ion Chef™ Instrument duerchgefouert. D'Zuel vun de virbereete Bibliothéike gouf dann mat engem Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) no den Instruktioune vum Hiersteller bewäert. Schlussendlech ginn d'Bibliothéike a gläichmolare Verhältnisser an Ion Chef™ Bibliothéiksproberöhrchen (mat Barcode) kombinéiert. Réiercher) an op den Ion Chef™ Instrument gelueden. D'Sequenzéierung gouf mat engem Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) Instrument (Thermo Fisher Scientific) mat engem Ion 510 Chip (Thermo Fisher Scientific) duerchgefouert. D'Datenanalyse gouf mat Amplicon Suite (SmartSeq srl) an Ion Reporter Software duerchgefouert.
All Variantnomenklatur huet den aktuellen Richtlinne vum Human Genome Variation Consortium gefollegt, déi online verfügbar sinn (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Déi klinesch Bedeitung vu BRCA1/2 Varianten gouf mat Hëllef vun der Klassifikatioun vum International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) a Consultatioun vu verschiddenen Datebanken wéi ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD an UMD definéiert. D'Klassifikatioun enthält fënnef verschidde Risikokategorien: benign (Kategorie I), wahrscheinlech benign (Kategorie II), Variant vun onsécherer Bedeitung (VUS, Kategorie III), wahrscheinlech pathogen (Kategorie IV) a pathogen (Kategorie V). VarSome huet och den Effekt vu Mutatiounen op d'Proteinstruktur a -funktioun analyséiert, en informativen Tool mat Zougang zu 30 Datebanken.32
Fir all VUS eng potenziell klinesch Bedeitung zouzeweisen, goufen déi folgend Berechnungsalgorithmen fir d'Proteinprediktioun benotzt: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) an Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Varianten, déi als Klass 1 an 2 klasséiert waren, goufen als Wildtyp ugesinn.
D'Sanger-Sequenzéierung huet d'Präsenz vun all pathogene Variant bestätegt. Kuerz gesot, gouf e puer spezifesch Primer fir all detektéiert Variant entwéckelt andeems d'BRCA1- a BRCA2-Genreferenzsequenzen (NG_005905.2, NM_007294.3 an NG_012772.3, NM_000059.3) benotzt goufen. Dofir gouf eng gezielte PCR duerchgefouert, gefollegt vun enger Sanger-Sequenzéierung.
Patienten, déi negativ op de BRCA1/2-Gen getest goufen, goufen duerch Multiplex-Ligatiounsofhängeg Probe-Amplifikatioun (MLPA) no den Instruktioune vum Hiersteller getest, fir d'Präsenz vu grousse genomesche Rearrangementer (LGR) ze bewäerten. Kuerz gesot, DNA-Prouwen ginn denaturéiert a bis zu 60 BRCA1- a BRCA2-genspezifesch Proben ginn benotzt, déi all eng spezifesch DNA-Sequenz vun ongeféier 60 Nukleotiden detektéieren. Probe-Amplifikatiounsprodukter, déi aus engem eenzegaartege Set vu PCR-Amplikonen bestinn, goufen duerno duerch Kapillarelektrophorese an duerch d'Cofalyser.Net Software a Verbindung mat den entspriechenden batchspezifesche Cofalyser-Tabellen (www.mrcholland.com) analyséiert.
Ausgewielte klinesch-pathologesch Variablen (histologesche Grad a Ki-67% Proliferatiounsindex) goufe mat der Präsenz vu BRCA1/2 PV assoziéiert, berechent mat der Prism Software v. 8.4 an dem Fisher-exakten Test, ënner der Viraussetzung datt e p-Wäert < 0,05 als signifikant ass.
Tëscht Januar 2017 a Mäerz 2021 goufen 455 Patienten op Keimline BRCA1/2 Mutatiounen ënnersicht. Mutatiounstester goufen am Zentrum fir experimentell Onkologie an Hämatologie vum Policlinico Spidol duerchgefouert. Geméiss der sizilianescher Richtlinn (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020) goufen am Rodolico vu Catania - San Marco insgesamt 389 Patienten gemellt. Et goufen Broschtkriibs, 37 Eierstockkriibs, 16 Bauchspeicheldrüskriibs, 8 Prostatakriibs a 5 Melanom festgestallt. D'Verdeelung vun de Patienten no Kriibstyp an Analyseresultater gëtt an der Figur 1 gewisen.
Figur 1 weist en Ablaufdiagramm mat engem Iwwerbléck iwwer d'Studie. Patienten mat Broscht-, Melanom-, Bauchspaicheldrüsentumoren, Prostata- oder Eierstocktumoren goufen op Mutatiounen an de BRCA1- a BRCA2-Genen getest.
Ofkierzungen: PVs, pathogen Variant; VUS, Variant vun onsécherer Bedeitung; WT, Wildtyp BRCA1/2 Sequenz.
Mir hunn eis Studien selektiv op Broschtkriibskohorten konzentréiert. D'Patienten haten en Duerchschnëttsalter vu 49 Joer (Spanne vun 23-89) a ware virun allem Fraen (n=376, oder 97%).
Vun dëse Persounen haten 64 (17%) BRCA1/2 Mutatiounen a ware all weiblech. Fënnefanzwanzeg (9%) haten PV an 29 (7,5%) haten VUS. Siwwenzéng (48,6%) vun den 35 pathogene Varianten koumen a BRCA1 an 18 (51,4%) a BRCA2 vir, während 5 VUS a BRCA1 (17,2%) an 24 (82,8%) a BRCA2 virkoumen (Figuren 1 an 2). LGR war net an der MLPA Analyse präsent.
Figur 2. Analyse vun de BRCA1- a BRCA2-Mutatiounen bei 389 Broschtkriibspatientinnen. (A) Verdeelung vu pathogene Varianten (PV) (rout), Varianten vun onsécherer Bedeitung (VUS) (orange) a WT (blo) bei 389 Broschtkriibspatientinnen; (B) 389 Broschtkriibspatientinnen Fënnefanzwanzeg (9%) haten pathogene BRCA1/2-Varianten (PVs). Dorënner waren 17 (48,6%) BRCA1-PV-Träger (donkelrout) an 18 (51,4%) BRCA2-Träger (hellrout); (C) 29 (7,5%) vun 389 Persounen haten VUS, 5 (17,2%) BRCA1-Genen (donkelorange) an 24 (82,8%) BRCA2-Genen (hellorange).
Ofkierzungen: PVs, pathogen Variant; VUS, Variant vun onsécherer Bedeitung; WT, Wildtyp BRCA1/2 Sequenz.
Mir hunn duerno d'Prävalenz vu molekulare BC-Subtypen bei Patienten mat BRCA1/2 PV ënnersicht. D'Verdeelung huet 2 (5,7%) luminal A, 15 (42,9%) luminal B, 3 (8,6%) luminal B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ an 13 (37,1%) TNBC-Patienten abegraff. Ënnert de BRCA1-positive Patienten haten 5 (29,4%) luminal B BC, 2 (11,8%) haten HER2+ Krankheet, an 10 (58,8%) haten TNBC. Tumoren ouni BRCA1-Mutatiounen waren entweder luminal A oder luminal B-HER2+ (Figur 3). An der BRCA2-positiver Ënnergrupp waren 10 (55,6%) Tumoren luminal B, 3 (16,7%) waren luminal B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC an 2 (11,1%) waren luminal A (Figur 3). Keng HER2+ Tumoren waren an dëser Grupp präsent. Dofir si BRCA1-Mutatioune bei TNBC-Patienten heefeg, während BRCA2-Verännerunge bei Individuen am Lumen B iwwerwiegend sinn.
Figur 3 Prävalenz vu Broschtkriibs-Ënnertypen bei Patienten mat pathogene Varianten am BRCA1 an am BRCA2. Histogrammer, déi d'Verdeelung vu BRCA1- (donkelrout) a BRCA2- (hellrout) PVen ënner de molekulare Ënnertypen vu Broschtkriibspatienten weisen. D'Zuelen, déi an all Këscht uginn sinn, representéieren de Prozentsaz vu Patienten mat BRCA1- a BRCA2-PV fir all Broschtkriibs-Ënnertyp.
Ofkierzungen: PV, pathogene Variant; HER2+, mënschlechen epidermalen Wuestumsfaktorrezeptor 2 positiv; TNBC, dräifach negativen Broschtkriibs.
Duerno hu mir den Typ an d'Genlokaliséierung vu BRCA1- a BRCA2-PVs ënnersicht. Am BRCA1-PV hu mir 7 Eenzelnukleotidvarianten (SNVs), 6 Deletiounen, 3 Duplikatiounen an 1 Insertioun observéiert. Nëmmen eng Mutatioun (c.5522delG) stellt eng nei Entdeckung duer. Déi heefegst BRCA1-PV, déi bei béide Persounen nogewise gouf, war c.5035_5039delCTAAT. Dës Ännerung ëmfaasst eng Deletioun vu fënnef Nukleotiden (CTAAT) am BRCA1-Exon 15, wat zu der Substitutioun vun der Aminosaier Leucin duerch Tyrosin um Codon 1679 féiert, an duerch e Frameshift vun der Translatioun mat engem virausgesoten alternativen Stopcodon zu enger virzäiteger Proteintrunkerung féiert. All aner Ännerunge ginn nëmmen an engem Fall nogewise. Bemierkenswäert ass, datt ee vun de gemellten PVs an der Splice-Site-Konsensusregioun lokaliséiert war (c.4357+1G>T) (Tabell 1).
Wat BRCA2 PV ugeet, hu mir 6 Deletiounen, 6 SNVen an 2 Duplikatiounen observéiert. Keng vun den fonnten Ännerungen ass nei. Dräi Mutatiounen sinn an eiser Populatioun widderholl ginn, c.428dup an c.8487+1G>A, déi bei 3 Persounen observéiert goufen, gefollegt vu c.5851_5854delAGTT, déi an zwee Fäll erëmfonnt gouf. D'c.428dup Ännerung involvéiert eng Widderhuelung vu C am Exon 5 vu BRCA2, déi virausgesot gëtt, e verkierzt, net-funktionellt Protein ze kodéieren. D'c.8487+1G>A Mutatioun geschitt an der intronescher Regioun vum BRCA2 Intron 19 (± 1,2) a beaflosst d'Splicing-Konsensussequenz, wat zu engem verännerte Splicing féiert, wat zu engem anormalen oder feelenden Protein féiert. Déi pathogen Variant c.5851_5854delAGTT ass op eng 4-Nukleotid-Deletioun vun den Nukleotidpositiounen 5851 bis 5854 am kodéierenden Exon 10 vum BRCA2-Gen zréckzeféieren an resultéiert an enger Translatiounsframeshift mat engem virausgesoten alternativen Stopcodon (p.S1951WfsTer). Bemierkenswäert, wéi virdru bericht, goufen déi zwou Ännerungen c.631G>A a c.7008-2A>T beim selwechte Patient festgestallt.34 Déi éischt Mutatioun ëmfaasst den Ersatz vun Adenosin (A) am BRCA2 Exon 7 duerch en Nukleotid mat Guanin (G), wat zu enger Ännerung vu Valin an Isoleucin um Codon 211 féiert. Isoleucin-Aminosaier ass eng Aminosäure mat ganz ähnlechen Eegeschaften. Dës Ännerung beaflosst déi normal mRNA-Splicing. Déi zweet Variant läit an enger intronescher Regioun a féiert zu enger duebeler Substitutioun vun A zu Thymin (T) virum Exon 13 vum Gen, dat fir BRCA2 kodéiert. D'Ännerung c.7008-2A>T kann verschidde Transkripte vu verschiddene Längt generéieren. Ausserdeem waren an der Grupp vu BRCA2 PVs 4 vun 18 Ännerungen (22,2%) intronesch.
Mir hunn duerno schiedlech BRCA1/2 Mutatiounen a funktionellen Domänen a Proteinbindungsregiounen kartéiert (Fig. 4). Am BRCA1-Gen waren 50% vun de PV an der Broschtkriibsclusterregioun (BCCR) lokaliséiert, während 22% vun de Mutatiounen an der Eierstockkriibsclusterregioun (OCCR) lokaliséiert waren (Fig. 4A). Am BRCA2 PV waren 35,7% vun de Varianten an der BCCR-Regioun an 42,8% vun de Mutatiounen am OCCR lokaliséiert (Fig. 4B). Duerno hu mir d'Lag vu PV an de BRCA1- an BRCA2-Proteindomänen ënnersicht. Fir de BRCA1-Protein hu mir dräi PV an de Loop- an Coiled-Coil-Domänen an zwou Mutatiounen am BRCT-Domän fonnt (Fig. 4A). Fir de BRCA2-Protein waren 4 PV op d'BRC-Widderhuelungsdomän kartéiert, während 3 intronesch an 3 exonesch Ännerungen an den Oligo/Oligosaccharid-Bindungs- (OB) an Tower- (T) Domänen nogewise goufen (Figur 4B).
Figur 4 Schematesch Duerstellung vu BRCA1- a BRCA2-Proteinen a Lokaliséierung vu pathogene Varianten. Dës Figur weist d'Verdeelung vu pathogene Varianten vu BRCA1 (A) a BRCA2 (B) bei Broschtkriibspatienten. Exonesch Mutatioune sinn a blo duergestallt, während intronesch Varianten an orange duergestallt sinn. D'Balkenhéicht representéiert d'Zuel vun de Fäll. D'BRCA1- a BRCA2-Proteinen an hir funktionell Domänen ginn uginn. (A) De BRCA1-Protein enthält eng Schleifendomän (RING) an eng nuklear Lokaliséierungssequenz (NLS), eng gewellte Coil-Domän, eng SQ/TQ-Clusterdomän (SCD) an eng BRCA1 C-terminal Domän (BRCT). (B) De BRCA2-Protein enthält aacht BRC-Wiederholungen, eng DNA-bindend Domän mat enger helixer Domän (Helical), dräi Oligonukleotid/Oligosaccharid-bindend (OB) Falten, eng Tower-Domän (T) an eng NLS op der C-Säit. Gebidder, déi Broschtkriibsclusterregioun (BCCR) an Eierstockkriibsclusterregioun (OCCR) genannt ginn, sinn ënnen duergestallt. *Representéiert Mutatiounen, déi de Stopp bestëmmen. Kodonen.
Mir hunn duerno klinesch-pathologesch Charakteristike vu BC ënnersicht, déi mat der Präsenz vu BRCA1/2 PV korreléiere kéinten. Komplett klinesch Dossiere ware fir 181 BRCA1/2-negativ Patienten (Net-Träger) an all Träger (n = 35) verfügbar. Et gouf eng Korrelatioun tëscht der Tumorproliferatiounsquote an dem Grad festgestallt.
Mir hunn d'Verdeelung vu Ki-67 op Basis vum Median vun eiser Kohort berechent (25%, Beräich <10-90%). Persounen mat Ki-67 < 25% goufen als "niddrege Ki-67" definéiert, während Persounen mat Wäerter ≥ 25% als "héich Ki-67" ugesi goufen. Signifikant Ki-67 Ënnerscheeder (p<0.01) goufen tëscht Net-Dréier a BRCA1 PV-Dréier fonnt (Fig. 5A).
Figur 5 Korrelatioun vu Ki-67 mat der Gradverdeelung bei Frae mat Broschtkriibs mat an ouni BRCA1- a BRCA2-PV. (A) Boxplot, deen d'Median-Ki-67-Wäerter bei 181 Patienten ouni Broschtkriibs-Tragödie am Verglach zu Patienten mat BRCA1- (18) oder BRCA2- (17) PV weist. P-Wäerter ënner 0,5 goufen als statistesch signifikant ugesinn. (B) Histogramm, deen d'Zouuerdnung vu Broschtkriibs-Patienten an histologesch Gradgruppen (G2 an G3) no dem BRCA1- a BRCA2-Mutatiounsstatus (WT-Persounen, BRCA1- a BRCA2-PV-Tragödien) duerstellt.
Mir hunn och ënnersicht, ob den Tumorgrad mat der Präsenz vu BRCA1/2 PV korreléiert huet. Well G1 BC an eiser Populatioun net virkoum, hu mir d'Patienten an zwou Gruppen opgedeelt (G2 oder G3). Am Aklang mat de Ki-67 Resultater huet d'Analyse eng statesch signifikant Korrelatioun tëscht dem Tumorgrad an der BRCA1 Mutatioun gewisen, mat engem méi héije Prozentsaz u G3 Tumoren bei BRCA1 Träger am Verglach mat Net-Träger (p<0,005) (Figur 5B).
Fortschrëtter an der DNA-Sequenzéierungstechnologie hunn ongehéiert Fortschrëtter an der BRCA1/2-Gentester erméiglecht, mat entscheedenden Implikatioune fir Patienten mat enger Familljegeschicht vu Kriibs. Bis haut goufen ongeféier 20.000 BRCA1/2-Varianten identifizéiert a klasséiert no der American Society of Medical Genetics 35 an dem ENIGMA-System. 35,36 Et ass bekannt, datt de BRCA1/2-Mutatiounsspektrum tëscht de geografesche Regiounen staark variéiert. 37 Bannent Italien louch d'Rate vun de BRCA1/2-PV tëscht 8% an 37%, wat eng grouss Variabilitéit tëscht de Länner weist. 38,39 Mat enger Bevëlkerung vu bal 5 Milliounen ass Sizilien déi fënneftgréisst Regioun an Italien wat d'Zuel vun den Awunner ugeet. Och wann et Donnéeën iwwer d'Verdeelung vu BRCA1/2 a Westsizilien gëtt, gëtt et keng extensiv Beweiser am ëstlechen Deel vun der Insel.
Eis Studie ass ee vun den éischte Berichter iwwer d'Inzidenz vu BRCA1/2 PV bei BC-Patienten am Oste vu Sizilien.28 Mir hunn eis Analyse op BC konzentréiert, well dëst déi wäit heefegst Krankheet an eiser Kohort ass.
Beim Test vun 389 BC-Patienten haten 9% BRCA1/2 PVen, gläichméisseg verdeelt tëscht BRCA1 a BRCA2. Dës Resultater stëmmen mat deene iwwereneen, déi virdru an der italieenescher Bevëlkerung gemellt goufen.28 Interessanterweis waren 3% (13/389) vun eiser Kohort männlech. Dës Rate ass méi héich wéi erwaart fir männlech Broschtkriibs (1% vun alle BCen),40 wat eis Auswiel vu Populatiounen op Basis vum BRCA1/2 Mutatiounsrisiko reflektéiert. Wéi och ëmmer, kee vun dëse Männer huet eng BRCA1/2 PV entwéckelt, sou datt si Kandidate fir weider molekular Analysen waren, fir d'Präsenz vu manner heefege Mutatiounen wéi PALB2, RAD51C an D, ënner anerem, auszeschléissen. Varianten vun onsécherer Bedeitung goufen a 7% vun de Persounen fonnt, bei deenen BRCA2 VUS evident war. Och dëst Resultat stëmmt mat virdru existéierenden Erkenntnesser iwwereneen.28,41,42
Wéi mir d'Verdeelung vun de molekulare Subtypen vun der BC bei Fraen mat BRCA1/2-Mutatiounen analyséiert hunn, hu mir bekannt Associatiounen tëscht TNBC a BRCA1 PV (58,8%) an tëscht luminaler B BC a BRCA2 PV (55,6%) bestätegt.16,43 Déi luminal A- an HER2+ Tumoren bei BRCA1- a BRCA2 PV-Träger stëmmen mat den existente Literaturdaten iwwereneen.16,43
Mir konzentréiere eis dann op den Typ an d'Lokalisatioun vum BRCA1/2 PV. An eiser Kohort war dee heefegsten BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT. Obwuel Incorvaia et al. dës Variant net an hirer sizilianescher Kohort beschriwwen hunn, hunn aner Autoren se als eng Keimlinn BRCA1 PV gemellt.34 Verschidde BRCA1 PVe goufen an eiser Kohort fonnt – z.B. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA a c.5266dupC – déi a Sizilien observéiert goufen.28 Vun dësen ginn zwou BRCA1 Grënnermutatiounen (c.181T>G a c.5266dupC) dacks bei Ashkenasi-Judden aus Ost- a Mëtteleuropa (Polen, Tschechesch), Slowenesch, Éisträichesch, Ungaresch, Wäissrussesch an Däitsch) fonnt,44,45 a gouf an den USA an Argentinien viru kuerzem als eng "rezidivéierend Keimlinnvariant" bei italieenesche Patienten mat BC an OC definéiert. D'Variant 34c.514del gouf virdru bei 8 Broschtkriibspatienten aus Nordsizilien zu Palermo a Messina identifizéiert. Interessanterweis hunn och Incorvaia et al. huet d'Variant c.3253dupA a verschiddene Familljen zu Catania fonnt.28 Déi representativst BRCA2 PVs sinn c.428dup, c.5851_5854delAGTT an déi intronesch Variant c.8487+1G>A, déi méi detailléiert 28 bei engem Patient zu Palermo mat c.428dup, c.5851_5854delAGTT beschriwwe goufen. PV gouf a Stéit am Nordweste vu Sizilien observéiert, haaptsächlech an de Regiounen Trapani a Palermo, während c.5851_5854delAGTT PV a Stéit am Nordweste vu Sizilien observéiert gouf. D'Variant 8487+1G>A war méi heefeg bei Persounen aus Messina, Palermo a Caltanissetta.28 Rebbeck et al. virdrun huet d'c.5851_5854delAGTT Ännerung a Kolumbien beschriwwen.37 En anere BRCA2 PV, c.631+1G>A, gouf bei BC- an OC-Patienten aus Sizilien (Agrigento, Siracusa a Ragusa) fonnt.28 Besonnesch bemierkenswäert ass, datt mir d'Koexistenz vun zwou BRCA2-Varianten (BRCA2 c.631G>A an c.7008-2A>T) beim selwechte Patient observéiert hunn, vun deenen mir ugeholl hunn, datt se am cis-Modus segregéiert sinn, wéi virdru bericht.34,46 Dës BRCA2-Uble-Mutatioune ginn tatsächlech dacks an der italieenescher Regioun observéiert a si goufen als virzäiteg Stopcodonen agefouert, déi d'Messenger-RNA-Splicing beaflossen an de BRCA2-Protein zum Ausfall féieren.47,48
Mir hunn och BRCA1- a BRCA2-PVs a vermutlechen OCCR- a BCCR-Regiounen vu Proteindomänen a Genen kartéiert. Dës Regioune goufe vum Rebbeck et al. als Risikogebidder fir d'Entwécklung vun Eierstock- a Broschtkriibs beschriwwen.49 Wéi och ëmmer, d'Beweiser iwwer den Zesummenhang tëscht der Lag vun de Keimlinnvarianten an dem Risiko vu Broscht- oder Eierstockkriibs bleiwen kontrovers.28,50-52 An eiser Populatioun ware BRCA1-PVs haaptsächlech an der BCCR-Regioun lokaliséiert, während BRCA2-PVs haaptsächlech an der OCCR-Regioun lokaliséiert waren. Wéi och ëmmer, mir konnten keen Zesummenhang tëscht vermutlechen OCCR- a BCCR-Regiounen a BC-Charakteristiken fannen. Dëst kéint un der limitéierter Zuel vu Patienten mat BRCA1/2-Mutatiounen leien. Aus enger Proteindomänperspektiv sinn BRCA1-PVs iwwer dat ganzt Protein verdeelt, an BRCA2-Ännerunge ginn bevorzugt am BRC-Widderhuelungsdomän fonnt.
Schlussendlech hu mir klinesch-pathologesch Charakteristike vu BC mat BRCA1/2 PV korreléiert. Wéinst der limitéierter Zuel vun abegraffene Patienten, hu mir nëmmen eng signifikant Korrelatioun tëscht Ki-67 an dem Tumorgrad fonnt. Och wann d'Bewäertung an d'Interpretatioun vu Ki-67 nach ëmmer e bësse kontrovers ass, ass et sécher, datt héich proliferativ Raten mat engem erhéichte Risiko vun engem Krankheetsrezidiv an enger reduzéierter Iwwerliewensdauer verbonne sinn. Bis elo ass de Grenzwert fir tëscht "héijen" an "niddregen" Ki-67 z'ënnerscheeden 20%. Dësen Schwellwert gëllt awer net fir eis BRCA1/2 Mutatiounspatientenpopulatioun, déi e Median Ki-67 Wäert vun 25% huet. Dësen Trend vun héije Ki-67 Raten kann duerch d'Prävalenz an eise luminalen B an TNBC Kohorten erkläert ginn, vun deenen nëmme wéineg luminal A Tumoren präsent waren. Wéi och ëmmer, e puer Beweiser schéngen drop hinzeweisen, datt e méi héije Ki-67 Grenzwert (25-30%) d'Patienten no hirer Prognose besser stratifizéiere kéint.53,54 Aus de Resultater vun eiser Analyse ass eng signifikant Korrelatioun net iwwerraschend. Et trëtt tëscht héije Ki-67 a Graden an der Präsenz vu BRCA1 op. PV. Tatsächlech sinn BRCA1-verbonne Tumoren typesch fir TNBC a weisen méi aggressiv Charakteristiken op.16,17
Schlussendlech gëtt dës Studie e Bericht iwwer de Mutatiounsstatus vu BRCA1/2 an enger BC-Kohort aus Oste vu Sizilien. Am Allgemengen sinn eis Resultater am Aklang mat virbestinnende Beweiser, souwuel wat d'Mutatiounsprävalenz wéi och d'klinesch-pathologesch Charakteristika a BC ugeet. Méi Studien a gréissere Populatioune vu BRCA1/2-mutéierte BC-Patienten, wéi z. B. d'Benotzung vun der multigenomerweiderter Mutatiounsanalyse, si gerechtfäerdegt fir d'Präsenz vu PVen ze evaluéieren, déi ënnerschiddlech a manner heefeg sinn wéi BRCA1/2. Dëst erlaabt d'Identifikatioun an d'korrekt Behandlung vun der wuessender Zuel vu Persounen mat engem erhéichte Kriibsrisiko wéinst genetesche Mutatiounen.
Mir hunn bestätegt, datt d'Patienten eng informéiert Zoustëmmung ënnerschriwwen hunn, fir hir Tumorproben anonym fir Fuerschungszwecker fräizeginn. All Patienten hunn eng schrëftlech informéiert Zoustëmmung geméiss der Deklaratioun vun Helsinki ënnerschriwwen. Geméiss der Politik vun der AOU Policlinico "G.Rodolico - S.Marco" gouf dës Studie vun der ethescher Iwwerpréiwung befreit, well d'BRCA1/2-Analyse no der klinescher Praxis duerchgefouert gouf an all Patienten eng schrëftlech informéiert Zoustëmmung ginn hunn. D'Patienten stëmmen och der Notzung vun hiren Donnéeën fir Fuerschungszwecker zou.
Mir soen dem Prof. Paolo Vigneri Merci fir seng Hëllef bei der Betreiung vu Broschtkriibspatienten, wéi vum Ethikkomitee ugefrot.
D'Federica Martorana bezilt Honorarer vum Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Déi aner Autoren deklaréieren keng Interessenkonflikter an dëser Aarbecht.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN schätzt d'Inzidenz an d'Mortalitéit vu 36 Kriibsfäll an 185 Länner weltwäit. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660