Hozirda brauzeringizda Javascript o'chirilgan. Ushbu veb-saytning ba'zi funksiyalari JavaScript o'chirilgan holda ishlamaydi.
O'zingizning aniq ma'lumotlaringiz va qiziqishingizdagi aniq dori vositasi bilan ro'yxatdan o'ting, biz siz taqdim etgan ma'lumotlarni keng ma'lumotlar bazamizdagi maqolalar bilan moslashtiramiz va sizga PDF nusxasini darhol elektron pochta orqali yuboramiz.
mán Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefaniya Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federika Martorana, 1,2 Mishel Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Kristina Gorgone, 6 Marko Ficherella Liz1212, va Eksperimental Tibbiyot, Kataniya Universiteti, Kataniya, 95123, Italiya;2 Eksperimental Onkologiya va Gematologiya markazi, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Kataniya, 95123, Italiya; 3 Tibbiy onkologiya, AOU Policlinico “G. Rodolico – San-Marko”, Kataniya, 95123, Italiya; 4 Tibbiy genetika, ARNAS Garibaldi, Kataniya, 95123, Italiya; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italiya; 6 Biotibbiyot va biotexnologiya fanlari kafedrasi, Kataniya universiteti, Tibbiy genetika, Kataniya, Italiya, 95123; 7Oasi tadqiqot instituti-IRCCS, Troina, 94018, Italiya Aloqa: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, elektron pochta [email protected]; [email protected] Maqsad: BRCA1 va BRCA2 genlaridagi mutatsiyalar va ko'krak bezi saratoni (BC), tuxumdon (OC) va boshqa saraton kasalliklarining umrbod xavfi bilan bog'liq. BRCA genini tekshirish individual xavfni baholash, shuningdek, sog'lom tashuvchilarda profilaktika usullarini topish va saraton bemorlarida davolanishni moslashtirish uchun kalit hisoblanadi. BRCA1 va BRCA2 o'zgarishlarining tarqalishi geografik mintaqalarda juda xilma-xil bo'lib, Sitsiliya oilalarida BRCA patogen variantlari haqida ma'lumotlar mavjud bo'lsa-da, Sharqiy Sitsiliyadagi populyatsiyalarga qaratilgan tadqiqotlar yetarli emas. Bizning tadqiqotimizning maqsadi Sharqiy Sitsiliyadan kelgan BC bemorlari kohortasida BRCA patogen germline o'zgarishlarining chastotasi va tarqalishini o'rganish va ularning keyingi avlod ketma-ketligi yordamida ma'lum BC belgilari bilan bog'liqligini baholash edi. O'zgarishlarning mavjudligi o'sma darajasi va proliferatsiya indeksi bilan bog'liq. NATIJALAR: Umuman olganda, 35 bemorda (9%) BRCA patogen varianti, 17 tasida (49%) BRCA1 va 18 tasida (51%) BRCA2 mavjud edi. BRCA1 o'zgarishlari uch karra salbiy holatlarda keng tarqalgan. BC bemorlarida, BRCA2 mutatsiyalari esa luminal BC bemorlarida ko'proq uchraydi. Tashuvchi bo'lmaganlar bilan solishtirganda, BRCA1 variantlari bo'lgan sub'ektlarda o'sma darajasi va proliferativ indeks sezilarli darajada yuqori edi. Xulosa: Bizning topilmalarimiz sharqiy Sitsiliyadan kelgan BC bemorlarida BRCA mutatsiya holati haqida umumiy ma'lumot beradi va irsiy BC bilan og'rigan bemorlarni aniqlashda NGS tahlilining rolini tasdiqlaydi. Umuman olganda, bu ma'lumotlar mutatsiya tashuvchilarida saraton kasalligining to'g'ri oldini olish va davolash uchun BRCA skriningini qo'llab-quvvatlovchi avvalgi dalillarga mos keladi.
Ko'krak bezi saratoni (KB) butun dunyoda eng keng tarqalgan xavfli o'sma va ayollarda eng xavfli saraton hisoblanadi.1 KB prognozi va klinik xulq-atvorini belgilovchi biologik xususiyatlar vaqt o'tishi bilan keng o'rganilgan va qisman aniqlangan. Darhaqiqat, hozirda KBni turli molekulyar kichik turlarga ajratish uchun bir nechta surrogat markerlar qo'llaniladi. Ular estrogen (ER) va/yoki progesteron retseptorlari (PgR), inson epidermal o'sish omili retseptorlari 2 (HER2) amplifikatsiyasi, proliferatsiya indeksi Ki-67 va o'sma darajasi (G).2 Ushbu o'zgaruvchilarning kombinatsiyasi quyidagi KB toifalarini aniqladi: 1) ER va/yoki PgR ifodasini ko'rsatuvchi luminal o'smalar KBlarning 75% ni tashkil etdi. Bu o'smalar, shuningdek, Ki-67 20% dan past va HER2 salbiy bo'lganda Luminal A va proliferatsiya indeksidan qat'i nazar, Ki-67 20% ga teng yoki undan yuqori bo'lganda va HER2 amplifikatsiyasi mavjud bo'lganda Luminal B ga bo'lingan; 2) ER va PgR manfiy, ammo HER2 amplifikatsiyasini ko'rsatadigan HER2+ o'smalari. Bu guruh barcha ko'krak o'smalarining 10% ni tashkil qiladi; 3) ER va PgR ekspressiyasini va HER2 amplifikatsiyasini ko'rsatmaydigan uch karra salbiy ko'krak saratoni (TNBC) ko'krak saratonining taxminan 15% ni tashkil qiladi.2-4
Ushbu BC subtiplari orasida o'sma darajasi va proliferatsiya indeksi o'smaning agressivligi va prognozi bilan bevosita va mustaqil ravishda bog'liq bo'lgan kesma biomarkerlarni ifodalaydi.5,6
Yuqorida aytib o'tilgan biologik xususiyatlarga qo'shimcha ravishda, so'nggi bir necha yil ichida BC rivojlanishiga olib keladigan irsiy genetik o'zgarishlarning roli tobora muhim ahamiyat kasb etmoqda.7 Har 10 ta ko'krak o'smalaridan 1 tasi ma'lum genlardagi jinsiy olat o'zgarishlari tufayli irsiydir.8 Yaqinda 180 000 dan ortiq ayollarni qamrab olgan ikkita yirik epidemiologik tadqiqotda asosan irsiy BC uchun mas'ul bo'lgan sakkizta gen guruhi (ya'ni, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C va RAD51D) aniqlandi. Ushbu genlar orasida BRCA1 va BRCA2 (bundan keyin BRCA1/2 deb yuritiladi) ko'krak o'smalari rivojlanishi bilan eng kuchli bog'liqlikni ko'rsatdi.9-12 Darhaqiqat, BRCA1/2 jinsiy olat mutatsiyalari BC, shuningdek, tuxumdon, prostata, oshqozon osti bezi, yo'g'on ichak va melanoma kabi boshqa xavfli o'smalarning umrbod xavfini sezilarli darajada oshiradi. 13 yoshdan 80 yoshgacha BRCA1 patogen varianti (PV) bo'lgan ayollarda BC ning kümülatif chastotasi 72% ni tashkil qiladi va BRCA2 PV.14 ga ega ayollarda 69%
Shunisi e'tiborga loyiqki, yaqinda nashr etilgan nashrda BC xavfi PV turiga bog'liqligi ta'kidlangan. Aslida, patogen qisqartiruvchi variantlar bilan solishtirganda, ayniqsa BRCA1 genida yaqqol ko'rinadigan missens variantlari, ayniqsa keksa ayollarda, BC xavfining pasayishi bilan bog'liq.15
BRCA1 yoki BRCA2 PV ning mavjudligi turli xil biologik va klinik-patologik xususiyatlar bilan bog'liq edi.16,17 BRCA1 bilan bog'liq BClar klinik jihatdan agressiv, yomon differentsiatsiyalangan va yuqori darajada proliferativ bo'lishga moyil. Bu o'smalar odatda uch barobar salbiy bo'ladi va erta yoshda paydo bo'ladi. BRCA2 mutatsiyasiga uchragan bemorlarda uchraydigan o'smalar odatda o'rtacha va yaxshi differentsiatsiyalangan darajalar va o'zgaruvchan proliferativ indekslarni namoyon qiladi. Bu o'smalar B lümenida ko'proq uchraydi va odatda keksa kattalarda uchraydi.16-18 Shunisi e'tiborga loyiqki, BRCA1 va BRCA2 mutatsiyalari platina tuzlari va poli(ADP-riboza) polimeraza ingibitorlari (PARPi) kabi maqsadli dorilarni o'z ichiga olgan maxsus davolash usullariga sezgirlikni oshiradi.19,20
So'nggi bir necha yil ichida klinik amaliyotda keyingi avlod ketma-ketligini (NGS) joriy etish BC bemorlarining soni ortib borayotganiga saratonga moyillik sindromlari, jumladan, BRCA1/2 uchun molekulyar testdan o'tish imkonini berdi.21 Shu bilan birga, oila tarixi, demografik va klinik-patologik xususiyatlarga oid aniq mezonlarga asoslangan ta'riflar BRCA1/2 testidan o'tishga loyiq shaxslarni yaxshiroq aniqlash imkonini beradi.22,23 Shu nuqtai nazardan, ma'lum populyatsiyalarda BRCA1/2 skriningi bo'yicha dalillar to'planmoqda, bu geografik mintaqalar bo'yicha farqlarni ta'kidlaydi.24–27 G'arbiy Sitsiliyadagi BC kohortasi haqida xabarlar mavjud bo'lsa-da, sharqiy Sitsiliya populyatsiyasida BRCA1/2 skriningi bo'yicha kamroq ma'lumotlar mavjud.28,29
Biz bu yerda Sharqiy Sitsiliyadan kelgan BC bemorlarida BRCA1/2 germinal skriningi natijalarini tasvirlab beramiz, bu BRCA1 yoki BRCA2 mutatsiyalarining mavjudligini ushbu o'smalarning asosiy klinik-patologik xususiyatlari bilan yanada bog'liq qiladi.
Kataniyadagi Rodolico – San-Marko polikliniko kasalxonasining “Eksperimental onkologiya va gematologiya markazi”da retrospektiv tadqiqot oʻtkazildi. 2017-yil yanvaridan 2021-yil martigacha koʻkrak va tuxumdon, melanoma, oshqozon osti bezi yoki prostata saratoni bilan ogʻrigan jami 455 bemor BRCA/2 genetik tekshiruvi uchun molekulyar diagnostika laboratoriyamizga yuborildi. Ushbu tadqiqot Xelsinki deklaratsiyasiga muvofiq oʻtkazildi va barcha ishtirokchilar molekulyar tahlildan oldin yozma ravishda xabardor qilingan roziliklarini berishdi.
BC ning gistologik va biologik xususiyatlari (ER, PgR, HER2 holati, Ki-67 va darajasi) faqat agressiv o'sma komponentlarini hisobga olgan holda yadro biopsiyasi yoki jarrohlik namunalarida baholandi. Ushbu xususiyatlarga asoslanib, BClar quyidagicha tasniflandi: luminal A (ER+ va/yoki PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ va/yoki PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER va/yoki PgR+, HER2+), HER2+ (ER va PgR-, HER2+) yoki uch karra salbiy (ER va PgR-, HER2-).
BRCA1 va BRCA2 mutatsiya holatini baholashdan oldin, onkolog, genetik va psixologdan iborat ko'p tarmoqli guruh har bir bemor uchun BRCA1 va/yoki BRCA1 yoki BRCA2 genida PV xavfi yuqori bo'lgan shaxslarning mavjudligini aniqlash uchun o'sma genetikasi bo'yicha konsultatsiya o'tkazdi. Bemorni tanlash Italiya Tibbiy Onkologiya Jamiyati (AIOM) ko'rsatmalariga va mahalliy Sitsiliya tavsiyalariga muvofiq amalga oshirildi.30,31 Ushbu mezonlarga quyidagilar kiradi: (i) sezuvchanlik genlarida ma'lum patogen variantlarning oilaviy tarixi (masalan, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) BC bilan og'rigan erkaklar; (iii) BC va OC bilan og'riganlar; (iv) BC <36 yosh, TNBC <60 yosh yoki ikki tomonlama BC <50 yoshli ayollar; (v) BC <50 yoshli shaxsiy tibbiy tarixi va kamida bitta birinchi darajali qarindoshi: (a) BC <50 yosh; (b) har qanday yoshdagi shilliq qavatsiz va chegarasiz OC; (c) ikki tomonlama BC; (d) erkakda BC; (e) oshqozon osti bezi saratoni; (f) prostata saratoni; (vi) ikki yoki undan ortiq 50 yildan ortiq shaxsiy BC tarixi va bir-biriga birinchi darajali qarindosh bo'lgan qarindoshlar uchun (shu jumladan, u birinchi darajali qarindosh bo'lgan qarindoshlar uchun) BC, OC yoki oshqozon osti bezi saratonining oilaviy tarixi; (vii) OCning shaxsiy tarixi va kamida bitta birinchi darajali qarindosh: (a) BC <50 yosh; (b) NOC; (c) ikki tomonlama BC; (d) erkak BC; (vii) yuqori darajadagi seroz OC bilan og'rigan ayol.
Har bir bemordan 20 ml periferik qon namunasi olindi va EDTA naychalariga (BD Biosciences) to'plandi. Ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italiya) yordamida 0,7 ml butun qon namunalaridan genom DNK ajratib olindi va Qubit® 3.0 fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AQSh) orqali o'tkazildi. Miqdoriy aniqlashni amalga oshiring. Nishonni boyitish va kutubxonani tayyorlash Oncomine™ BRCA Research Assay Chef tomonidan amalga oshiriladi, ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq avtomatlashtirilgan kutubxona tayyorlash uchun Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kitga yuklashga tayyor. To'plam barcha BRCA1 (NM_007300.3) va BRCA2 (NM_000059.3) genlarini o'rganish uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan ikkita multipleks PCR primer havzalaridan iborat. Qisqacha aytganda, har bir suyultirilgan namunaviy DNKning 15 µL (10 ng) kutubxona tayyorlash uchun shtrix-kodli plastinkalarga qo'shildi va barcha reagentlar va sarf materiallari Ion Chef™ asbobiga yuklandi. Keyin Ion Chef™ asbobida avtomatlashtirilgan kutubxona tayyorlash va shtrix-kodli namunaviy kutubxona havzasi amalga oshirildi. Keyin tayyorlangan kutubxonalar soni ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq Qubit® 3.0 Fluorometri (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AQSh) tomonidan baholandi. Nihoyat, kutubxonalar Ion Chef™ kutubxona namunaviy naychalarida ekvimolyar nisbatlarda birlashtiriladi. (shtrix-kodli naychalar) va Ion Chef™ asbobiga yuklandi. Ketma-ketlik Ion 510 chipi (Thermo Fisher Scientific) yordamida Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) asbobi (Thermo Fisher Scientific) yordamida amalga oshirildi. Ma'lumotlar tahlili Amplicon Suite (SmartSeq srl) va Ion Reporter Software tomonidan amalga oshirildi.
Barcha variant nomenklaturasi onlayn mavjud bo'lgan Inson Genomining Variatsiya Konsorsiumining amaldagi ko'rsatmalariga amal qildi (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). BRCA1/2 variantlarining klinik ahamiyati Xalqaro Konsorsium ENIGMA (Germline Mutant Allellarini Interpretatsiya qilish uchun Dalillarga asoslangan Tarmoq, https://enigmaconsortium.org/) tasnifi va ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD va UMD kabi turli ma'lumotlar bazalariga murojaat qilish orqali aniqlandi. Tasniflash beshta alohida xavf toifasini o'z ichiga oladi: benign (I toifa), ehtimol benign (II toifa), noaniq ahamiyatga ega variant (VUS, III toifa), ehtimol patogen (IV toifa) va patogen (V toifa). VarSome shuningdek, 30 ta ma'lumotlar bazasiga kirish imkoniyatiga ega bo'lgan informatsion vosita bo'lgan oqsil tuzilishi va funktsiyasiga mutatsiyalarning ta'sirini tahlil qildi.32
Har bir VUSga potentsial klinik ahamiyatni belgilash uchun quyidagi hisoblash oqsilini bashorat qilish algoritmlari qo'llanildi: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) va Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). 1 va 2-sinf sifatida tasniflangan variantlar yovvoyi tur deb hisoblandi.
Sanger ketma-ketligi har bir patogen variantning mavjudligini tasdiqladi. Qisqacha aytganda, har bir aniqlangan variant uchun BRCA1 va BRCA2 genlarining mos yozuvlar ketma-ketliklaridan (NG_005905.2, NM_007294.3 va NG_012772.3, NM_000059.3) foydalanib, bir juft maxsus primerlar ishlab chiqilgan. Shuning uchun, maqsadli PZR, so'ngra Sanger ketma-ketligi amalga oshirildi.
BRCA1/2 geni uchun salbiy natija bergan bemorlar ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq katta genom qayta tashkil etilishlari (LGR) mavjudligini baholash uchun multipleks ligatsiyaga bog'liq zond amplifikatsiyasi (MLPA) yordamida tekshirildi. Qisqacha aytganda, DNK namunalari denatüratsiya qilinadi va 60 tagacha BRCA1 va BRCA2 geniga xos zondlar qo'llaniladi, ularning har biri taxminan 60 nukleotid uzunligidagi ma'lum bir DNK ketma-ketligini aniqlaydi. Noyob PZR amplikonlari to'plamidan iborat zond amplifikatsiya mahsulotlari keyin kapillyar elektroforez va Cofalyser.Net dasturi yordamida tegishli partiyaga xos Cofalyser jadvallari (www.mrcholland.com) bilan birgalikda tahlil qilindi.
Tanlangan klinikopatologik o'zgaruvchilar (gistologik daraja va Ki-67% proliferatsiya indeksi) BRCA1/2 PV mavjudligi bilan bog'liq bo'lib, p-qiymati <0,05 ni ahamiyatli deb taxmin qilib, Fisherning aniq testidan foydalangan holda Prism dasturi v. 8.4 yordamida hisoblab chiqilgan.
2017-yil yanvaridan 2021-yil martigacha 455 bemor BRCA1/2 germinal mutatsiyalariga tekshirildi. Mutatsiya testi Policlinico kasalxonasining Eksperimental Onkologiya va Gematologiya Markazida o'tkazildi. Sitsiliya qo'llanmasiga (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Yanvar 2020) ko'ra, Kataniya Rodolikosi - San-Marko"da jami 389 bemor bor edi. Ko'krak bezi saratoni, 37 ta tuxumdon saratoni, 16 ta oshqozon osti bezi saratoni, 8 ta prostata saratoni va 5 ta melanoma mavjud edi. Bemorlarning saraton turi va tahlil natijalari bo'yicha taqsimoti 1-rasmda ko'rsatilgan.
1-rasmda tadqiqotning umumiy ko'rinishini ko'rsatuvchi oqim sxemasi ko'rsatilgan. Ko'krak, melanoma, oshqozon osti bezi, prostata yoki tuxumdon o'smalari bo'lgan bemorlar BRCA1 va BRCA2 genlaridagi mutatsiyalar uchun tekshirildi.
Qisqartmalar: PV, patogen variant; VUS, noaniq ahamiyatga ega variant; WT, yovvoyi tipdagi BRCA1/2 ketma-ketligi.
Biz tadqiqotlarimizni tanlab ko'krak bezi saratoni kohortalariga qaratdik. Bemorlarning o'rtacha yoshi 49 yoshni tashkil etdi (23-89 yosh oralig'i) va asosan ayollar edi (n=376 yoki 97%).
Ushbu sub'ektlarning 64 tasida (17%) BRCA1/2 mutatsiyalari mavjud edi va ularning barchasi ayollar edi. O'ttiz beshtasida (9%) PV va 29 tasida (7,5%) VUS bor edi. 35 ta patogen variantdan o'n yettitasi (48,6%) BRCA1 da va 18 tasida (51,4%) BRCA2 da, 5 ta VUS esa BRCA1 da (17,2%) va 24 tasida (82,8%) BRCA2 da sodir bo'lgan (1 va 2-rasmlar). LGR MLPA tahlilida mavjud emas edi.
2-rasm. 389 ko'krak bezi saratoni bilan og'rigan bemorlarda BRCA1 va BRCA2 mutatsiyalarining tahlili.(A) 389 ko'krak bezi saratoni bilan og'rigan bemorlarda patogen variantlarning (PV) (qizil), noaniq ahamiyatga ega variantlarning (VUS) (to'q sariq) va WT (ko'k) ning taqsimlanishi; (B) 389 ko'krak bezi saratoni bilan og'rigan bemorlar O'ttiz beshtasida (9%) BRCA1/2 patogen variantlari (PV) mavjud edi. Ular orasida 17 tasi (48,6%) BRCA1 PV tashuvchilari (to'q qizil) va 18 tasi (51,4%) BRCA2 tashuvchilari (och qizil) edi; (C) 389 ta sub'ektdan 29 tasi (7,5%) VUS, 5 tasi (17,2%) BRCA1 genlari (to'q to'q sariq) va 24 tasi (82,8%) BRCA2 genlari (och to'q sariq) tashuvchisi edi.
Qisqartmalar: PV, patogen variant; VUS, noaniq ahamiyatga ega variant; WT, yovvoyi tipdagi BRCA1/2 ketma-ketligi.
Keyingi tadqiqotda biz BRCA1/2 PV bilan og'rigan bemorlarda BC molekulyar subtiplarining tarqalishini o'rganib chiqdik. Tarqalish 2 (5,7%) luminal A, 15 (42,9%) luminal B, 3 (8,6%) luminal B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ va 13 (37,1%) TNBC bemorlarini o'z ichiga oldi. BRCA1-musbat bemorlar orasida 5 (29,4%) luminal B BC, 2 (11,8%) HER2+ kasalligi va 10 (58,8%) TNBC bor edi. BRCA1 mutatsiyalari bo'lmagan o'smalar luminal A yoki luminal B-HER2+ edi (3-rasm). BRCA2-musbat kichik guruhda 10 (55,6%) o'smalar luminal B, 3 (16,7%) luminal B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC va 2 (11,1%) lümen A (3-rasm). Bu guruhda HER2+ o'smalari mavjud emas edi. Shunday qilib, BRCA1 mutatsiyalari TNBC bemorlarida keng tarqalgan, BRCA2 o'zgarishlari esa lümen B shaxslarida ustunlik qiladi.
3-rasm. BRCA1 va BRCA2 patogen variantlari bo'lgan bemorlarda ko'krak bezi saratoni subtiplarining tarqalishi. Ko'krak bezi saratoni bilan og'rigan bemorlarning molekulyar subtiplari orasida BRCA1- (to'q qizil) va BRCA2- (och qizil) PVlarning taqsimlanishini ko'rsatuvchi gistogrammalar. Har bir katakchada ko'rsatilgan raqamlar har bir ko'krak bezi saratoni subtipi uchun BRCA1 va BRCA2 PV bilan og'rigan bemorlarning foizini ifodalaydi.
Qisqartmalar: PV, patogen variant; HER2+, inson epidermal o'sish omili retseptorlari 2 musbat; TNBC, uch karra salbiy ko'krak bezi saratoni.
Keyinchalik, biz BRCA1 va BRCA2 PVlarining turi va gen lokalizatsiyasini baholadik. BRCA1 PV da biz 7 ta bitta nukleotid variantini (SNV), 6 ta o'chirishni, 3 ta duplikatsiyani va 1 ta qo'shilishni kuzatdik. Faqat bitta mutatsiya (c.5522delG) yangi kashfiyotni anglatadi. Ikkala sub'ektda ham aniqlangan eng keng tarqalgan BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT edi. Bu o'zgarish BRCA1 ekzon 15 da beshta nukleotidning (CTAAT) o'chirilishini o'z ichiga oladi, natijada 1679 kodonida aminokislota leytsini tirozin bilan almashtiriladi va bashorat qilingan alternativ stop-kodon bilan tarjima ramka siljishi tufayli oqsilning muddatidan oldin kesilishiga olib keladi. Boshqa barcha o'zgarishlar faqat bitta holatda aniqlanadi. Shunisi e'tiborga loyiqki, xabar qilingan PVlardan biri splays saytining konsensus mintaqasida joylashgan (c.4357+1G>T) (1-jadval).
BRCA2 PV ga kelsak, biz 6 ta o'chirish, 6 ta SNV va 2 ta dublikatni kuzatdik. Topilgan o'zgarishlarning hech biri yangi emas. Bizning populyatsiyamizda uchta mutatsiya takrorlandi, 3 ta sub'ektda c.428dup va c.8487+1G>A kuzatildi, undan keyin ikkita holatda c.5851_5854delAGTT olindi. c.428dup o'zgarishi BRCA2 ning 5-ekzonida C ning takrorlanishini o'z ichiga oladi, bu qisqartirilgan, funktsional bo'lmagan oqsilni kodlashi taxmin qilinadi. c.8487+1G>A mutatsiyasi BRCA2 intron 19 ning intronik mintaqasida (± 1,2) sodir bo'ladi va splaysing konsensus ketma-ketligiga ta'sir qiladi, natijada o'zgargan splaysingga olib keladi, natijada g'ayritabiiy yoki oqsil yo'q bo'ladi. c.5851_5854delAGTT patogen varianti BRCA2 ning 10-kodlovchi ekzonidagi 5851 dan 5854 gacha bo'lgan nukleotid pozitsiyalaridan 4-nukleotid o'chirilishiga bog'liq. gen va bashorat qilingan muqobil stop-kodon (p.S1951WfsTer) bilan translyatsion kadr siljishiga olib keladi. Shunisi e'tiborga loyiqki, avval xabar qilinganidek, c.631G>A va c.7008-2A>T o'zgarishlari bir xil bemorda aniqlangan.34 Birinchi mutatsiya BRCA2 ekzon 7 dagi adenozin (A) ni nukleotidni o'z ichiga olgan guanin (G) bilan almashtirishni o'z ichiga oladi, natijada 211-kodonda valin izoleysinga o'zgaradi, izoleysin Aminokislota juda o'xshash xususiyatlarga ega aminokislotadir. Bu o'zgarish normal mRNK splaysingiga ta'sir qiladi. Ikkinchi variant intronik mintaqada joylashgan va BRCA2 ni kodlovchi genning 13-ekzonidan oldin A dan timinga (T) qo'shaloq almashinuviga olib keladi. c.7008-2A>T o'zgarishi turli uzunlikdagi bir nechta transkriptlarni yaratishi mumkin. Bundan tashqari, BRCA2 PV guruhida 18 ta o'zgarishdan 4 tasi (22,2%) intronik edi.
Keyin biz funktsional domenlar va oqsil bilan bog'lanish mintaqalarida BRCA1/2 zararli mutatsiyalarini xaritaga tushirdik (4-rasm). BRCA1 genida PVlarning 50% ko'krak bezi saratoni klaster mintaqasida (BCCR), mutatsiyalarning 22% esa tuxumdon saratoni klaster mintaqasida (OCCR) joylashgan edi (4A-rasm). BRCA2 PV da variantlarning 35,7% BCCR mintaqasida va mutatsiyalarning 42,8% OCCRda joylashgan edi (4B-rasm). Keyin biz PVning BRCA1 va BRCA2 oqsil domenlari ichidagi joylashuvini baholadik. BRCA1 oqsili uchun biz halqa va o'ralgan o'ralgan domenlarda uchta PV va BRCT domenida ikkita mutatsiya topdik (4A-rasm). BRCA2 oqsili uchun BRC takroriy domeniga 4 ta PV xaritaga tushirildi, shu bilan birga 3 ta intronik va 3 ta ekzonik o'zgarishlar aniqlandi. oligo/oligosaxarid bilan bog'lanish (OB) va minora (T) domenlari (4B-rasm).
4-rasm. BRCA1 va BRCA2 oqsillarining sxematik ko'rinishi va patogen variantlarning lokalizatsiyasi. Ushbu rasmda ko'krak bezi saratoni bilan og'rigan bemorlarda BRCA1 (A) va BRCA2 (B) patogen variantlarining tarqalishi ko'rsatilgan. Ekzon mutatsiyalari ko'k rangda, intron variantlari esa to'q sariq rangda ko'rsatilgan. Bar balandligi holatlar sonini bildiradi. BRCA1 va BRCA2 oqsillari va ularning funktsional domenlari haqida ma'lumot berilgan.(A) BRCA1 oqsili halqa domeni (RING) va yadro lokalizatsiyasi ketma-ketligi (NLS), o'ralgan spiral domeni, SQ/TQ klaster domeni (SCD) va BRCA1 C-terminal domeni (BRCT) ni o'z ichiga oladi.(B) BRCA2 oqsili sakkizta BRC takrorlanishini, spiral domenli DNK bilan bog'lanadigan domenni (Spherical), uchta oligonukleotid/oligosakkarid bilan bog'lanadigan (OB) burmalarni, minora domenini (T) va C tomonida NLS ni o'z ichiga oladi. Ko'krak bezi saratoni klasteri mintaqasi (BCCR) va tuxumdon saratoni klasteri deb ataladigan sohalar. Mintaqa (OCCR) pastki qismida ko'rsatilgan.*Stop kodonlarini aniqlaydigan mutatsiyalarni ifodalaydi.
Keyin biz BRCA1/2 PV mavjudligi bilan bog'liq bo'lishi mumkin bo'lgan BC klinik-patologik xususiyatlarini o'rganib chiqdik. 181 ta BRCA1/2-negativ bemorlar (tashuvchi bo'lmaganlar) va barcha tashuvchilar (n = 35) uchun to'liq klinik yozuvlar mavjud edi. O'sma proliferatsiyasi tezligi va darajasi o'rtasida bog'liqlik mavjud edi.
Biz Ki-67 ning taqsimotini kohortamiz medianasi asosida hisobladik (25%, diapazon <10-90%). Ki-67 < 25% bo'lgan sub'ektlar "past Ki-67" deb belgilangan, qiymatlari ≥ 25% bo'lgan shaxslar esa "yuqori Ki-67" deb hisoblangan. Tashuvchi bo'lmaganlar va BRCA1 PV tashuvchilari o'rtasida sezilarli Ki-67 farqlari (p<0.01) aniqlandi (5A-rasm).
5-rasm. BRCA1 va BRCA2 PV bilan va bo'lmagan ko'krak bezi saratoni bilan og'rigan ayollarda Ki-67 ning daraja taqsimoti bilan o'zaro bog'liqligi.(A) 181 ta BC tashuvchisi bo'lmagan bemorlarda BRCA1 (18) yoki BRCA2 (17) PV bilan og'rigan bemorlarda mediana Ki-67 qiymatlarini ko'rsatuvchi jadval. 0,5 dan past P qiymatlari statistik jihatdan ahamiyatli deb hisoblandi.(B) BC saratoni bilan og'rigan bemorlarni BRCA1 va BRCA2 mutatsiya holatiga ko'ra gistologik daraja guruhlariga (G2 va G3) ajratishni ifodalovchi gistogramma (WT sub'ektlari, BRCA1 va BRCA2 PV tashuvchilari).
Xuddi shunday, biz o'sma darajasi BRCA1/2 PV mavjudligi bilan bog'liqligini tekshirdik. Bizning populyatsiyamizda G1 BC yo'qligi sababli, bemorlarni ikki guruhga ajratdik (G2 yoki G3). Ki-67 natijalariga muvofiq, tahlil o'sma darajasi va BRCA1 mutatsiyasi o'rtasida statistik jihatdan ahamiyatli bog'liqlikni aniqladi, BRCA1 tashuvchilarida G3 o'smalarining ulushi tashuvchi bo'lmaganlarga nisbatan yuqori (p<0,005) (5B-rasm).
DNK ketma-ketligi texnologiyasidagi yutuqlar BRCA1/2 genetik testida misli ko'rilmagan yutuqlarga erishish imkonini berdi, bu esa oilaviy saraton tarixiga ega bemorlar uchun juda muhim oqibatlarga olib keldi. Bugungi kunga qadar Amerika Tibbiy Genetika Jamiyati 35 va ENIGMA tizimiga muvofiq taxminan 20 000 BRCA1/2 variantlari aniqlandi va tasniflandi.35,36 Ma'lumki, BRCA1/2 mutatsion spektri geografik mintaqalarda juda keng farq qiladi.37 Italiyada BRCA1/2 PV darajasi 8% dan 37% gacha bo'lgan, bu esa mamlakat ichida keng o'zgaruvchanlikni ko'rsatadi.38,39 Deyarli 5 million aholiga ega Sitsiliya aholisi soni bo'yicha Italiyada beshinchi yirik mintaqadir. G'arbiy Sitsiliyada BRCA1/2 ning tarqalishi haqida ma'lumotlar mavjud bo'lsa-da, orolning sharqiy qismida keng dalillar yo'q.
Bizning tadqiqotimiz Sharqiy Sitsiliyadagi BC bemorlarida BRCA1/2 PV bilan kasallanish darajasi bo'yicha dastlabki hisobotlardan biridir.28 Biz tahlilimizni BCga qaratdik, chunki bu bizning kohortamizda eng keng tarqalgan kasallikdir.
389 nafar BC bemorlarini tekshirishda, 9% da BRCA1/2 PV mavjud bo'lib, ular BRCA1 va BRCA2 o'rtasida teng taqsimlangan. Bu natijalar Italiya populyatsiyasida ilgari xabar qilingan natijalarga mos keladi.28 Qizig'i shundaki, bizning kohortamizning 3% (13/389) erkaklar edi. Bu ko'rsatkich erkaklar ko'krak bezi saratoni uchun kutilganidan yuqori (barcha BClarning 1%),40 bu BRCA1/2 mutatsiya xavfiga asoslangan populyatsiyalarni tanlashimizni aks ettiradi. Biroq, bu erkaklarning hech birida BRCA1/2 PV rivojlanmagan, shuning uchun ular PALB2, RAD51C va D kabi kamroq uchraydigan mutatsiyalar mavjudligini istisno qilish uchun qo'shimcha molekulyar tahlil uchun nomzodlar edi. BRCA2 VUS aniq bo'lgan sub'ektlarning 7% da noaniq ahamiyatga ega variantlar topildi. Hatto bu natija ham oldindan mavjud bo'lgan dalillarga mos keladi.28,41,42
BRCA1/2 mutant ayollarda BC molekulyar subtiplarining taqsimlanishini tahlil qilganimizda, biz TNBC va BRCA1 PV (58,8%) va luminal B BC va BRCA2 PV (55,6%) o'rtasidagi ma'lum bog'liqlikni tasdiqladik.16,43 BRCA1 va BRCA2 PV tashuvchilarida luminal A va HER2+ o'smalari mavjud adabiyot ma'lumotlariga mos keladi.16,43
Keyin biz BRCA1/2 PV turi va joylashuviga e'tibor qaratamiz. Bizning kohortamizda eng keng tarqalgan BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT edi. Garchi Incorvaia va boshqalar. Sitsiliya kohortasida bu variantni tasvirlamagan, boshqa mualliflar uni BRCA1 PV jinsiy hujayrasi sifatida xabar qilishgan.34 Bizning kohortamizda bir nechta BRCA1 PVlari topildi - masalan, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA va c.5266dupC - ular Sitsiliyada kuzatilgan.28 Ulardan ikkita BRCA1 asoschisi mutatsiyalari (c.181T>G va c.5266dupC) Sharqiy va Markaziy Yevropaning (Polsha, Chexiya), Sloveniya, Avstriya, Vengriya, Belarus va Germaniya) Ashkenazi yahudiylarida keng tarqalgan, 44,45 va Qo'shma Shtatlar va Argentinada yaqinda BC va OC bilan kasallangan italyan bemorlarida "takrorlanuvchi jinsiy hujayra varianti" sifatida aniqlangan. 34c.514del varianti ilgari Shimoliy Sitsiliyadan Palermo va Messinada 8 ta ko'krak bezi saratoni bemorlarida aniqlangan edi. Qizig'i shundaki, hatto Incorvaia va boshqalar ham... Kataniyadagi ba'zi oilalarda c.3253dupA variantini topdi.28 Eng vakilli BRCA2 PVlari c.428dup, c.5851_5854delAGTT va intronik variant c.8487+1G>A bo'lib, ular Palermodagi c.428dup, c.5851_5854delAGTT bilan og'rigan bemorda batafsilroq 28 xabar qilingan. PV Sitsiliyaning shimoli-g'arbiy qismidagi xonadonlarda, asosan Trapani va Palermo mintaqalarida kuzatilgan, shu bilan birga Sitsiliyaning shimoli-g'arbiy qismidagi xonadonlarda c.5851_5854delAGTT PV kuzatilgan. 8487+1G>A varianti Messina, Palermo va Caltanissettadan bo'lgan sub'ektlarda ko'proq uchraydi.28 Rebbeck va boshqalar. ilgari Kolumbiyadagi c.5851_5854delAGTT o'zgarishi tasvirlangan edi.37 Yana bir BRCA2 PV, c.631+1G>A, Sitsiliyadan kelgan BC va OC bemorlarida (Agrigento, Siracusa va Ragusa) topilgan.28 Shunisi e'tiborga loyiqki, biz xuddi shu bemorda ikkita BRCA2 variantining (BRCA2 c.631G>A va c.7008-2A>T) birga mavjudligini kuzatdik, ular ilgari xabar qilinganidek, cis rejimida ajratilgan deb taxmin qildik.34,46 Ushbu BRCA2 mutatsiyalari haqiqatan ham Italiya mintaqasida tez-tez kuzatiladi va muddatidan oldin to'xtash kodonlarini keltirib chiqarishi, xabarchi RNK splaysingiga ta'sir qilishi va BRCA2 oqsilining ishdan chiqishiga olib kelishi aniqlangan.47,48
Shuningdek, biz BRCA1 va BRCA2 PVlarini oqsil domenlari va genlarining taxminiy OCCR va BCCR mintaqalarida xaritaga tushirdik. Bu mintaqalar Rebbeck va boshqalar tomonidan mos ravishda tuxumdon va ko'krak saratoni rivojlanish xavf zonalari sifatida ta'riflangan.49 Biroq, jinsiy a'zolar variantlarining joylashuvi va ko'krak yoki tuxumdon saratoni xavfi o'rtasidagi bog'liqlik haqidagi dalillar bahsli bo'lib qolmoqda.28,50-52 Bizning populyatsiyamizda BRCA1 PVlari asosan BCCR mintaqasida, BRCA2 PVlari esa asosan OCCR mintaqasida joylashgan edi. Biroq, biz taxminiy OCCR va BCCR mintaqalari va BC xususiyatlari o'rtasida hech qanday bog'liqlikni topa olmadik. Bu BRCA1/2 mutatsiyalariga ega bemorlarning cheklangan soni bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Oqsil domeni nuqtai nazaridan, BRCA1 PVlari butun oqsil bo'ylab taqsimlangan va BRCA2 o'zgarishlari afzalroq BRC takroriy domenida uchraydi.
Nihoyat, biz BC klinikopatologik xususiyatlarini BRCA1/2 PV bilan o'zaro bog'ladik. Kiritilgan bemorlar soni cheklanganligi sababli, biz faqat Ki-67 va o'sma darajasi o'rtasida sezilarli bog'liqlikni topdik. Ki-67 ni baholash va talqin qilish biroz bahsli bo'lib qolsa-da, yuqori proliferativ ko'rsatkichlar kasallikning qaytalanish xavfining ortishi va omon qolishning pasayishi bilan bog'liqligi aniq. Bugungi kunga kelib, "yuqori" va "past" Ki-67 ni farqlash uchun chegara 20% ni tashkil qiladi. Biroq, bu chegara bizning BRCA1/2 mutatsiyasiga ega bemorlar populyatsiyasiga taalluqli emas, ularning o'rtacha Ki-67 qiymati 25% ni tashkil qiladi. Yuqori Ki-67 ko'rsatkichlaridagi bu tendentsiyani bizning luminal B va TNBC kohortalarimizdagi tarqalish bilan izohlash mumkin, ulardan bir nechta luminal A o'smalari mavjud edi. Biroq, ba'zi dalillar yuqori Ki-67 chegarasi (25-30%) bemorlarni ularning prognoziga ko'ra yaxshiroq stratifikatsiya qilishi mumkinligini ko'rsatadi.53,54 Bizning tahlilimiz natijalaridan sezilarli bog'liqlik ajablanarli emas. Yuqori Ki-67 va darajalar va mavjudligi o'rtasida yuzaga keladi. BRCA1 PV. Aslida, BRCA1 bilan bog'liq o'smalar TNBCga xos bo'lib, ko'proq tajovuzkor xususiyatlarga ega.16,17
Xulosa qilib aytganda, ushbu tadqiqot Sharqiy Sitsiliyadan kelgan BC kohortasida BRCA1/2 ning mutatsion holati haqida hisobot taqdim etadi. Umuman olganda, bizning topilmalarimiz mutatsiya tarqalishi va BCdagi klinik-patologik xususiyatlar nuqtai nazaridan oldindan mavjud bo'lgan dalillarga mos keladi. BRCA1/2 mutant BC bemorlarining katta populyatsiyalarida ko'proq tadqiqotlar, masalan, ko'p genomli kengaytirilgan mutatsion tahlildan foydalanish, BRCA1/2 ga qaraganda aniq va kamroq uchraydigan PVlarning mavjudligini baholash uchun zarurdir. Bu genetik mutatsiyalar tufayli saraton xavfi ortib borayotgan sub'ektlar sonini aniqlash va to'g'ri boshqarish imkonini beradi.
Biz bemorlar tadqiqot maqsadlarida o'sma namunalarini anonim ravishda chiqarishga rozilik berganliklarini tasdiqladik. Barcha bemorlar Xelsinki deklaratsiyasiga muvofiq yozma rozilik imzoladilar. AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco” siyosatiga muvofiq, ushbu tadqiqot axloqiy ko'rib chiqishdan ozod qilindi, chunki BRCA1/2 tahlili klinik amaliyotga muvofiq o'tkazildi va barcha bemorlar yozma rozilik berishdi. Bemorlar, shuningdek, o'z ma'lumotlaridan tadqiqot maqsadlarida foydalanishga rozilik bildiradilar.
Axloq qo'mitasi iltimosiga binoan ko'krak bezi saratoni bilan og'rigan bemorlarni davolashda ko'rsatgan yordami uchun professor Paolo Vigneriga minnatdorchilik bildiramiz.
Federica Martorana Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizerdan faxriy yorliqlar haqida xabar beradi. Boshqa mualliflar ushbu ishda manfaatlar to'qnashuvi yo'qligini e'lon qilishadi.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL va boshqalar. Global Saraton Statistikasi 2020: GLOBOCAN dunyoning 185 mamlakatida 36 ta saraton kasalligining tarqalishi va o'limini baholaydi. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660