Javascript hozirda brauzeringizda oʻchirib qoʻyilgan. Javascript oʻchirilgan boʻlsa, ushbu veb-saytning baʼzi funksiyalari ishlamaydi.
O'zingizning aniq ma'lumotlaringiz va o'ziga xos dori-darmonlaringiz bilan ro'yxatdan o'ting va biz siz taqdim etgan ma'lumotlarga bizning keng ma'lumotlar bazasidagi maqolalar bilan moslashamiz va sizga PDF nusxasini darhol elektron pochta orqali yuboramiz.
mán Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefaniya Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federika Martorana, 1,2 Mishel Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Kristina Gorgone, 6 Marko Ficherella Liz1212, va Eksperimental Tibbiyot, Kataniya Universiteti, Kataniya, 95123, Italiya;2 Eksperimental Onkologiya va Gematologiya markazi, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Kataniya, 95123, Italiya; 3 Tibbiy onkologiya, AOU Policlinico “G. Rodolico – San-Marko”, Kataniya, 95123, Italiya; 4 Tibbiy genetika, ARNAS Garibaldi, Kataniya, 95123, Italiya; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italiya; 6 Biotibbiyot va biotexnologiya fanlari kafedrasi, Kataniya universiteti, Tibbiy genetika, Kataniya, Italiya, 95123; 7Oasi tadqiqot instituti-IRCCS, Troina, 94018, Italiya Aloqa: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected]; [email protected] Maqsad: BRCA1 va BRCA2 va aniqlangan koʻkrak saratoni (BC), tuxumdon (OC) va boshqalardagi germline mutatsiyalari saraton kasalligining umr boʻyi xavfi bilan bogʻliq. BRCA genini tekshirish individual xavfni baholash, shuningdek, sogʻlom tashuvchilarda profilaktika usullarini topish va saraton bemorlarida davolash usullarini tanlash uchun kalit hisoblanadi. mintaqalarda va Sitsiliya oilalarida BRCA patogen variantlari haqida ma'lumotlar mavjud bo'lsa-da, Sitsiliyaning sharqiy qismidagi populyatsiyalarga qaratilgan tadqiqotlar etishmayapti. Bizning tadqiqotimizning maqsadi Sitsiliyaning sharqiy qismidagi BC bemorlari guruhida BRCA patogen mikrob o'zgarishlarining tarqalishini va tarqalishini o'rganish va ularning keyingi BC generatsiyalari bilan bog'liqligini baholash edi. o'simta darajasi va proliferatsiya indeksi bilan bog'liq. NATIJALAR: Umuman olganda, 35 (9%) bemorda BRCA patogen varianti bo'lgan, BRCA1da 17 (49%) va BRCA2da 18 (51%). BRCA1 o'zgarishlari uch marta salbiy BC bemorlarda keng tarqalgan, holbuki BRCA2 bilan kasallangan bemorlarda ko'proq uchraydi. BRCA1 variantlari boʻlgan subʼyektlarda oʻsimta darajasi va proliferativ indeksi sezilarli darajada yuqori boʻlgan. Xulosalar: Bizning topilmalarimiz Sitsiliyaning sharqiy qismidagi BC bemorlarida BRCA mutatsion holati haqida umumiy maʼlumot beradi va irsiy BC bilan ogʻrigan bemorlarni aniqlashda NGS tahlilining rolini tasdiqlaydi. Umuman olganda, bu maʼlumotlar BRCA mutatsion skriningini qoʻllab-quvvatlovchi oldingi dalillarga mos keladi.
Ko'krak bezi saratoni (BC) dunyo bo'ylab eng keng tarqalgan va ayollarda eng halokatli saraton hisoblanadi.1 BC prognozi va klinik xatti-harakatini belgilovchi biologik xususiyatlar vaqt o'tishi bilan keng o'rganilgan va qisman aniqlangan.Aslida, hozirgi vaqtda BCni turli molekulyar subtiplarga tasniflash uchun bir nechta surrogat markerlar qo'llanilmoqda. Ular insoniy molekulyar (ER) va estrogen (reseptor) prognozi (RR) va prognozi). epidermal o'sish omili retseptorlari 2 (HER2) kuchayishi, ko'payish indeksi Ki-67 va o'simta darajasi (G).2 Ushbu o'zgaruvchilarning kombinatsiyasi quyidagi BC toifalarini aniqladi: 1) ER va/yoki PgR ifodasini ko'rsatadigan luminal o'smalar BCsning 75% ni tashkil etdi. Bu o'smalar yana quyida Luminal A va Ki-26 ga bo'lindi. manfiy va Luminal B, Ki-67 20% ga teng yoki undan yuqori bo'lganida va proliferatsiya indeksidan qat'i nazar, HER2 kuchaytirilishi mavjud bo'lganda; 2) ER va PgR manfiy, lekin HER2 kuchaytirilishini ko'rsatadigan HER2+ o'smalari. Bu guruh barcha ko'krak o'smalarining 10% ni tashkil qiladi; 3) ER va PgR ifodasini va HER2 kuchayishini ko'rsatmaydigan uch marta salbiy ko'krak saratoni (TNBC) ko'krak saratoni kasalliklarining taxminan 15% ni tashkil qiladi.2-4
Ushbu BC subtiplari orasida o'simta darajasi va proliferatsiya indeksi o'simta agressivligi va prognozi bilan bevosita va mustaqil ravishda bog'liq bo'lgan kesma biomarkerlarni ifodalaydi.5,6
Yuqorida aytib o'tilgan biologik xususiyatlarga qo'shimcha ravishda, BC rivojlanishiga olib keladigan irsiy genetik o'zgarishlarning roli so'nggi bir necha yil ichida tobora muhim ahamiyat kasb etmoqda.7 Taxminan 10 ta ko'krak o'smalaridan 1 tasi o'ziga xos genlardagi germline o'zgarishlari tufayli meros bo'lib o'tadi.8 Ikki yirik epidemiologik tadqiqot 180 000 dan ortiq ayollarni qamrab olgan (yaqinda 180 000 dan ortiq ayollar, AARD, e TM1, e TM1, 180 dan ortiq ayollar aniqlangan). BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C va RAD51D) asosan irsiy BC uchun javobgardir. Bu genlar orasida BRCA1 va BRCA2 (keyingi o'rinlarda BRCA1/2 deb yuritiladi) ko'krak o'smalarining rivojlanishi bilan eng kuchli bog'liqlikni ko'rsatdi. BC, shuningdek, tuxumdon, prostata, oshqozon osti bezi, yo'g'on ichak va melanomani o'z ichiga olgan boshqa malign o'smalarning umr bo'yi xavfi. 13 yoshdan 80 yoshgacha bo'lgan davrda BRCA1 patogen varianti (PV) bo'lgan ayollarda BC 72% va BRCA2 bilan kasallangan ayollarda 69% ni tashkil qiladi.
Shunisi e'tiborga loyiqki, yaqinda nashr etilgan nashr BC xavfi PV turiga bog'liqligini ko'rsatmoqda. Aslida, patogen kesish variantlari bilan solishtirganda, yaltiroq noto'g'ri variantlar, ayniqsa BRCA1 genida, ayniqsa keksa ayollarda BC xavfining pasayishi bilan bog'liq.15
BRCA1 yoki BRCA2 PV mavjudligi turli biologik va klinikopatologik xususiyatlar bilan bog'liq edi.16,17 BRCA1 bilan bog'liq bo'lgan BC'lar klinik jihatdan agressiv, yomon differensial va yuqori proliferativ bo'ladi. Bu o'smalar odatda uch baravar salbiy bo'lib, erta boshlanishiga ega. yaxshi tabaqalashtirilgan darajalar va o'zgaruvchan proliferativ indekslar. Bu o'smalar B lümenida ko'proq uchraydi va odatda keksa odamlarda uchraydi.16-18 E'tiborga loyiqki, BRCA1 va BRCA2 mutatsiyalari maxsus davolash usullariga, jumladan, platina tuzlari va maqsadli dorilarga, masalan, poli(ADP-riboz) (PAR2 ingibitorlari, PAR2 ingibitorlari) sezgirligini oshiradi.
So'nggi bir necha yil ichida klinik amaliyotda yangi avlod sekvensiyasining (NGS) joriy etilishi BC bemorlarining soni ko'payib borayotgan saratonga moyillik sindromlari, shu jumladan BRCA1 / 2.21 uchun molekulyar testdan o'tishga imkon berdi. Shu bilan birga, oilaviy tarix, demografik va klinik xususiyatlarni yaxshiroq aniqlash uchun aniq mezonlarga asoslangan ta'riflar. test.22,23 Shu nuqtai nazardan, ma'lum populyatsiyalarda BRCA1/2 skriningi bo'yicha dalillar to'planib, geografik mintaqalar bo'yicha farqlarni ko'rsatmoqda.24-27 Sitsiliyaning g'arbiy qismida BC kohorti haqida xabarlar mavjud bo'lsa-da, Sitsiliyaning sharqiy aholisida BRCA1/2 skriningi haqida kamroq ma'lumotlar mavjud.28,29
Biz bu erda Sitsiliyaning sharqiy qismidagi BC bemorlarida BRCA1/2 germline skrining natijalarini tasvirlab beramiz, bu esa BRCA1 yoki BRCA2 mutatsiyalarining mavjudligini ushbu o'smalarning asosiy klinikopatologik xususiyatlari bilan yanada bog'liqdir.
Kataniyadagi Rodoliko-San-Marko Polikliniko kasalxonasidagi "Eksperimental onkologiya va gematologiya markazi"da retrospektiv tadqiqot o'tkazildi. 2017 yil yanvaridan 2021 yil martigacha ko'krak va tuxumdonlar, melanoma, oshqozon osti bezi yoki prostata bezi saratoni bilan kasallangan jami 455 nafar bemor BRB diagnostikasiga yuborildi. genetik test.Ushbu tadqiqot Xelsinki deklaratsiyasiga muvofiq o'tkazildi va barcha ishtirokchilar molekulyar tahlildan oldin yozma ravishda xabardor qilingan rozilik oldilar.
BC ning gistologik va biologik xususiyatlari (ER, PgR, HER2 holati, Ki-67 va daraja) asosiy biopsiya yoki jarrohlik namunalarida, faqat agressiv o'simta tarkibiy qismlarini hisobga olgan holda baholandi. Ushbu belgilarga asoslanib, BClar quyidagicha tasniflandi: luminal A (ER+ va/yoki PgR+, HER2-%, HER2-2/0, HER2-%, B) yoki PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER va/yoki PgR+, HER2+), HER2+ (ER va PgR-, HER2+) yoki uch marta salbiy (ER va PgR-, HER2-).
BRCA1 va BRCA2 mutatsion holatini baholashdan oldin, onkolog, genetik va psixologni o'z ichiga olgan multidisipliner jamoa BRCA1 va / yoki BRCA1 mavjudligini aniqlash uchun har bir bemor uchun o'simta genetikasi bo'yicha maslahat o'tkazdi. yoki BRCA2 genida PV xavfi yuqori bo'lgan shaxslar. Bemor tanlash Italiya Tibbiy Onkologiya Jamiyati (AIOM) ko'rsatmalari va mahalliy Sitsiliya tavsiyalariga muvofiq amalga oshirildi.30,31 Bu mezonlar quyidagilardan iborat: (i) sezuvchanlik genlarida ma'lum patogen variantlarning oilaviy tarixi (masalan, BRCA1, BRCA5, EN); (ii) BC bilan erkaklar; (iii) BC va OC bo'lganlar; (iv) BC <36 yoshda, TNBC <60 yoshda yoki ikki tomonlama BC <50 yoshda bo'lgan ayollar; (v) BC <50 yil shaxsiy kasallik tarixi va kamida bitta birinchi darajali qarindoshi: (a) BC <50 yil; (b) har qanday yoshdagi shilimshiq bo'lmagan va chegaralanmagan OK; v) ikki tomonlama BC; (d) BC erkak; e) oshqozon osti bezi saratoni; (f) prostata saratoni; (vi) ikki yoki undan ortiq BC > 50 yil shaxsiy tarixi va bir-biriga birinchi darajali qarindoshlar (shu jumladan, u birinchi darajali qarindoshlari bo'lgan qarindoshlar) uchun BC, OK yoki oshqozon osti bezi saratoni bilan kasallanganligi; (vii) OKning shaxsiy tarixi va kamida bitta birinchi darajali qarindoshi: (a) BC <50 yil; (b) MOQ; v) ikki tomonlama BC; (d) BC erkak; (vii) yuqori darajadagi seroz OK bo'lgan ayol.
Har bir bemordan 20 ml periferik qon namunasi olindi va EDTA naychalariga (BD Biosciences) yig‘ildi. Genomik DNK QIAsymphony DSP DNK Midi Izolyatsiya to‘plami (QIAGEN, Hilden, Italiya) yordamida 0,7 ml to‘liq qon namunalaridan ajratildi (QIAGEN, Hilden, Italiya). Scientific, Waltham, MA, AQSH) Miqdorni aniqlash. Maqsadni boyitish va kutubxonani tayyorlash Oncomine™ BRCA Research Assay Chef tomonidan amalga oshiriladi, ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq avtomatlashtirilgan kutubxona tayyorlash uchun Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 to'plamiga yuklashga tayyor. To'plam barcha BRCA1 va (NMCA_03) o'rganish uchun ishlatilishi mumkin bo'lgan ikkita multipleks PCR primer pullaridan iborat. (NM_000059.3) genlari.Qisqacha, har bir suyultirilgan namuna DNKdan 15 mkl (10 ng) kutubxona tayyorlash uchun shtrixli plitalarga qo‘shildi va barcha reagentlar va sarf materiallari Ion Chef™ asbobiga yuklandi. Avtomatlashtirilgan kutubxona tayyorlash va shtrixli namunalar kutubxonasini yig‘ish, so‘ngra Ion ™ tomonidan baholangan asboblar soni tayyorlandi. Qubit® 3.0 florometr (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AQSh) ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq. Nihoyat, kutubxonalar Ion Chef™ kutubxonasi namuna naychalarida (shtrixli naychalar) ekvimolyar nisbatlarda birlashtiriladi va Ion Chef™ asbobiga yuklanadi. (Thermo Fisher Scientific) Ion 510 Chip (Thermo Fisher Scientific) yordamida. Ma'lumotlar tahlili Amplicon Suite (SmartSeq srl) va Ion Reporter Software tomonidan amalga oshirildi.
Barcha variant nomenklaturasi Inson Genomi Variatsiyasi Konsortsiumining joriy koʻrsatmalariga amal qildi, onlaynda mavjud (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen).BRCA1/2 variantlarining klinik ahamiyati ENIGMA (Evidence-Based Germ Network for Interpreting All Consortium, All Interpreting All Consortium) tasnifi yordamida aniqlangan. https://enigmaconsortium.org/) va ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD va UMD kabi turli xil maʼlumotlar bazalariga murojaat qilish. Tasniflash beshta alohida xavf toifasini oʻz ichiga oladi: yaxshi (I toifa), ehtimol xavfli (II toifa), noaniq ahamiyatga ega boʻlgan variant (VUS, toifali va III toifali patogenlar), ehtimoliy patogenlik. V).VarSome, shuningdek, mutatsiyalarning oqsil tuzilishi va funktsiyasiga ta'sirini tahlil qildi, bu 30 ma'lumotlar bazasiga kirish huquqiga ega.32
Har bir VUSga potentsial klinik ahamiyatga ega bo'lish uchun proteinni bashorat qilishning quyidagi hisoblash algoritmlaridan foydalanilgan: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph-DG) va Align-DG (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). 1 va 2-sinf sifatida tasniflangan variantlar yovvoyi tip hisoblangan.
Sanger sekvensiyasi har bir patogen variant mavjudligini tasdiqladi. Qisqacha aytganda, BRCA1 va BRCA2 gen mos yozuvlar ketma-ketliklaridan (NG_005905.2, NM_007294.3 va NG_012772.3, NM9.030, PC5 uchun nishonga olindi) foydalangan holda, har bir aniqlangan variant uchun bir juft maxsus primer ishlab chiqilgan. keyin Sanger ketma-ketligi amalga oshirildi.
BRCA1/2 geni uchun manfiy sinovdan o'tgan bemorlar ishlab chiqaruvchining ko'rsatmalariga muvofiq, katta genomik o'zgarishlar (LGR) mavjudligini baholash uchun multipleks ligatsiyaga bog'liq zond amplifikatsiyasi (MLPA) bilan sinovdan o'tkazildi. Qisqacha aytganda, DNK namunalari denatüratsiya qilinadi va 60 tagacha BRCA1 va BRCA2 genlari har birida o'ziga xos DNA60 genini aniqlashda qo'llaniladi. Nukleotidlar uzunligi. Noyob PCR amplikonlari to'plamidan tashkil topgan zond kuchaytiruvchi mahsulotlar keyinchalik kapillyar elektroforez va Cofalyser.Net dasturiy ta'minoti tomonidan tegishli partiyaga xos Cofalyser jadvallari (www.mrcholland.com) bilan birgalikda tahlil qilindi.
Tanlangan klinikopatologik o'zgaruvchilar (gistologik daraja va Ki-67% proliferatsiya indeksi) BRCA1/2 PV mavjudligi bilan bog'liq bo'lib, Prism dasturiy ta'minoti v. 8.4 yordamida Fisherning p-qiymati <0,05 muhim deb faraz qilingan aniq testidan foydalangan holda hisoblangan.
2017 yilning yanvaridan 2021 yilning martigacha 455 nafar bemor germline BRCA1/2 mutatsiyalari uchun skriningdan o'tkazildi. Mutatsion test Policlinico kasalxonasining Eksperimental onkologiya va gematologiya markazida o'tkazildi. Sitsiliya yo'riqnomasiga ko'ra (http://www.gurs.regione/it.Incilia.1,Incilia. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), Kataniya Rodoliko – San-Marko” umumiy sonida 389 bemor koʻkrak bezi saratoni, 37 tuxumdon saratoni, 16 oshqozon osti bezi saratoni, 8 prostata saratoni va 5 melanoma. Bemorlarning saraton turi va tahlil natijalari boʻyicha taqsimlanishi 1-rasmda keltirilgan.
1-rasmda tadqiqotning umumiy ko'rinishi ko'rsatilgan oqim diagrammasi ko'rsatilgan. Ko'krak, melanoma, oshqozon osti bezi, prostata yoki tuxumdon o'smalari bo'lgan bemorlar BRCA1 va BRCA2 genlarida mutatsiyalar uchun sinovdan o'tkazildi.
Qisqartmalar: PVs, patogen variant; VUS, noaniq ahamiyatga ega variant; WT, yovvoyi turdagi BRCA1/2 ketma-ketligi.
Biz tadqiqotlarimizni tanlab ko'krak bezi saratoni kogortalariga qaratdik. Bemorlarning o'rtacha yoshi 49 yosh (diapazon 23-89) va asosan ayollar (n=376 yoki 97%) edi.
Ushbu sub'ektlarning 64 tasi (17%) BRCA1/2 mutatsiyasiga ega bo'lib, barchasi ayol edi. O'ttiz beshtasida (9%) PV va 29 tasida (7,5%) VUS mavjud. 35 ta patogen variantning 17 tasi (48,6%) BRCA1da va 18 tasi (51,4%) BRCA2da (52%) va 52 tasi BRCA1da uchraydi. BRCA2 da (82,8%) (1 va 2-rasmlar). MLPA tahlilida LGR mavjud emas edi.
Shakl 2. 389 ko'krak bezi saratoni bilan og'rigan bemorlarda BRCA1 va BRCA2 mutatsiyalarining tahlili. (A) 389 ko'krak bezi saratoni bilan og'rigan bemorlarda patogen variantlar (PV) (qizil), noaniq ahamiyatga ega variantlar (VUS) (to'q sariq) va WT (ko'k) taqsimoti; (B) 389 ko'krak bezi saratoni bemorlar O'ttiz besh (9%) BRCA1 / 2 patogen variantlari (PVs) bor edi. Ularning orasida 17 (48,6%) BRCA1 PV tashuvchisi (to'q qizil) va 18 (51,4%) BRCA2 tashuvchisi (ochiq qizil); (C) 389 sub'ektdan 29 (7,5%) VUS, 5 (17,2%) BRCA1 genlari (to'q to'q sariq) va 24 (82,8%) BRCA2 genlari (ochiq to'q sariq).
Qisqartmalar: PVs, patogen variant; VUS, noaniq ahamiyatga ega variant; WT, yovvoyi turdagi BRCA1/2 ketma-ketligi.
Keyinchalik biz BRCA1/2 PV bilan og'rigan bemorlarda BC molekulyar subtiplarining tarqalishini o'rgandik. Tarqatish 2 (5,7%) luminal A, 15 (42,9%) luminal B, 3 (8,6%) luminal B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ va 13% (37% BCA1BR) bilan kasallangan. bemorlar, 5 (29,4%) luminal B BC, 2 (11,8%) HER2+ kasalligi va 10 (58,8%) TNBC bilan kasallangan. BRCA1 mutatsiyalari bo'lmagan o'smalar yo luminal A yoki luminal B-HER2+ edi (3-rasm). BRCA2-musbat guruhda luminal B-HER2+ (3-rasm). (16,7%) luminal B-HER2+, 3 ta (16,7%) TNBC va 2 ta (11,1%) luminal A (3-rasm) edi. Bu guruhda HER2+ o'smalari mavjud emas. Shunday qilib, TNBC bemorlarida BRCA1 mutatsiyalari keng tarqalgan, BRCA2 ning individual o'zgarishlari esa B lumenda.
Shakl 3 BRCA1 va BRCA2 patogen variantlari bo'lgan bemorlarda ko'krak bezi saratoni pastki turlarining tarqalishi. Ko'krak bezi saratoni bilan og'rigan bemorlarning molekulyar subtiplari o'rtasida BRCA1- (to'q qizil) va BRCA2- (ochiq qizil) PVlarning taqsimlanishini ko'rsatadigan gistogrammalar. Har bir quti ichida xabar qilingan raqamlar BRCA21 va har bir ko'krak saratoni subtipi bo'lgan bemorlarning foizini bildiradi.
Qisqartmalar: PVs, patogen variant; HER2+, inson epidermal o'sish omili retseptorlari 2 ijobiy; TNBC, uch marta salbiy ko'krak saratoni.
Keyinchalik, biz BRCA1 va BRCA2 PV larning turi va gen lokalizatsiyasini baholadik. BRCA1 PV da biz 7 ta bitta nukleotid variantini (SNV), 6 ta oʻchirishni, 3 ta dublikatsiyani va 1 ta kiritishni kuzatdik. Faqat bitta mutatsiya (c.5522delG) BRCA ning eng koʻp aniqlangan obʼyektini ifodalaydi. c.5035_5039delCTAAT. Bu oʻzgarish BRCA1 15-eksonida besh nukleotidning (CTAAT) oʻchirilishini oʻz ichiga oladi, natijada 1679-kodonda aminokislota leytsin tirozin bilan almashtiriladi va translatsiya doirasi oʻzgarishi tufayli prognozdan oldingi toʻxtash kodonida faqat bitta boshqa oʻzgarishlar aniqlanadi. Ta'kidlash joizki, xabar qilingan PVlardan biri ulanish joyi konsensus mintaqasida joylashgan (c.4357+1G>T) (1-jadval).
BRCA2 PV boʻyicha biz 6 ta oʻchirish, 6 ta SNV va 2 ta dublikatsiyani kuzatdik. Topilgan oʻzgarishlarning hech biri yangi emas. Bizning populyatsiyada uchta mutatsiya takrorlangan, c.428dup va c.8487+1G>A, 3 ta subʼyektda kuzatilgan, soʻngra c.5851_5854delAGTT2da c.5851_5854delAG4. BRCA2 ning 5-eksonida C ning kesilgan, funktsional bo'lmagan oqsilni kodlashi taxmin qilingan takrorlanishini o'z ichiga oladi. c.8487+1G>A mutatsiyasi BRCA2 intron 19 ning intronik hududida (± 1,2) sodir bo'ladi va qo'shilish konsensus ketma-ketligiga ta'sir qiladi, natijada anormal splitsiya yoki oqsil o'zgarishiga olib keladi. c.5851_5854delAGTT patogen varianti BRCA2 genining 10-kodlash ekzonida 5851-5854 nukleotid pozitsiyalaridan 4-nukleotid delektsiyasi bilan bog'liq bo'lib, bashorat qilingan alternativ to'xtash kodoniga ega translatsion ramka siljishiga olib keladi (s.S1951WfsT, avvalgi ma'lumotlarga qaraganda). c.631G>A va c.7008-2A>T xuddi shu bemorda aniqlangan.34 Birinchi mutatsiya BRCA2 7 eksonidagi adenozin (A) ni nukleotid o'z ichiga olgan guanin (G) bilan almashtirishni o'z ichiga oladi, natijada 211 kodonida valin izolösinga o'zgaradi, izolösin kislotasi amino kislotasi bilan normal o'zgaradi. mRNK qo'shilishi. Ikkinchi variant intronik mintaqada joylashgan bo'lib, BRCA2 ni kodlovchi genning 13-eksonidan oldin ikki marta A ga timin (T) o'zgarishiga olib keladi. c.7008-2A>T o'zgarishi turli uzunlikdagi bir nechta transkriptlarni yaratishi mumkin. Bundan tashqari, BRCA2 guruhida PVs ning o'zgarishlari% 2 ni tashkil etdi.12tr.
Keyin biz funktsional domenlarda va oqsillarni bog'laydigan hududlarda BRCA1 / 2 zararli mutatsiyalarini xaritalashtirdik (4-rasm). BRCA1 genida PVlarning 50% ko'krak bezi saratoni klaster mintaqasida (BCCR) joylashgan bo'lsa, mutatsiyalarning 22% tuxumdon saratoni klasteri hududida joylashgan (OCCR) (4-rasm, PVBR3 ning% varianti). BCCR mintaqasida joylashgan va mutatsiyalarning 42,8% OCCRda joylashgan (4B-rasm).Keyingi, biz BRCA1 va BRCA2 oqsil domenlari ichida PV joylashuvini baholadik.BRCA1 oqsili uchun biz halqa va o'ralgan lasan domenlarida uchta PV va ikkita mutatsiyani topdik. BRC takroriy domeniga ko'rsatilgan, oligo/oligosaxaridlarni bog'lash (OB) va minora (T) domenlarida 3 ta intronik va 3 ta ekzonik o'zgarishlar aniqlangan (4B-rasm).
4-rasm BRCA1 va BRCA2 oqsillarining sxematik ko‘rinishi va patogen variantlarning lokalizatsiyasi. Bu rasmda ko‘krak bezi saratoni bilan og‘rigan bemorlarda BRCA1 (A) va BRCA2 (B) patogen variantlari taqsimoti ko‘rsatilgan. Ekzonik mutatsiyalar ko‘k rangda, intronik variantlar esa to‘q sariq rangda ko‘rsatilgan. Chiziq balandligi holatlar sonini va xabar qilingan BRCA2 domenidagi oqsillarni bildiradi. BRCA1 oqsili halqa domenini (RING) va yadro lokalizatsiyasi ketma-ketligini (NLS), o‘ralgan domenni, SQ/TQ klaster domenini (SCD) va BRCA1 C-terminal domenini (BRCT) o‘z ichiga oladi. (B) BRCA2 oqsilida sakkizta BRC takrori, DNK-bog‘lovchi domen (spiral domen bilan uchta) mavjud. oligonukleotid/oligosaxaridlar bilan bog‘lovchi (OB) burmalari, minora domeni (T) va C tomonida NLS. Ko‘krak bezi saratoni klasteri hududi (BCCR) va tuxumdon saratoni klasteri hududi (OCCR) deb ataladigan hududlar pastki qismida ko‘rsatilgan.*To‘xtash kodonlarini aniqlaydigan mutatsiyalarni ifodalaydi.
Keyin biz BRCA1 / 2 PV mavjudligi bilan bog'liq bo'lishi mumkin bo'lgan BC klinikopatologik xususiyatlarini o'rganib chiqdik. 181 BRCA1 / 2-salbiy bemorlar (tashuvchilar bo'lmagan) va barcha tashuvchilar (n = 35) uchun to'liq klinik yozuvlar mavjud edi. O'smaning tarqalishi darajasi va darajasi o'rtasida korrelyatsiya mavjud edi.
Biz Ki-67 ning taqsimlanishini kohortimizning medianasi asosida hisobladik (25%, diapazon <10-90%). Ki-67 < 25% boʻlgan subʼyektlar “past Ki-67”, ≥ 25% qiymatga ega boʻlgan shaxslar esa “yuqori Ki-67″ deb taʼriflangan. BRCA1 PV tashuvchilari (5A-rasm).
5-rasm Ki-67 ning BRCA1 va BRCA2 PVlari bo'lgan va bo'lmagan ko'krak bezi saratoni bilan kasallangan ayollarda daraja taqsimoti bilan bog'liqligi. (A) BRCA1 (18) yoki BRCA2 (17) PV bemorlarga nisbatan 181 BC tashuvchisi bo'lmagan bemorlarda o'rtacha Ki-67 qiymatlarini ko'rsatadigan diagramma. BC saratoni bilan kasallangan bemorlar BRCA1 va BRCA2 mutatsion holatiga ko'ra gistologik daraja guruhlariga (G2 va G3) ajratiladi (WT sub'ektlari, BRCA1 va BRCA2 PV tashuvchilari).
Xuddi shunday, biz o'simta darajasining BRCA1/2 PV mavjudligi bilan bog'liqligini tekshirdik. Bizning populyatsiyada G1 BC yo'qligi sababli, biz bemorlarni ikki guruhga (G2 yoki G3) ajratdik. Ki-67 natijalariga muvofiq, tahlil o'simta darajasi va BRCA1 proporti o'rtasidagi statistik jihatdan muhim korrelyatsiyani aniqladi. tashuvchilarga nisbatan (p<0,005) (5B-rasm).
DNK sekvensiyasi texnologiyasidagi yutuqlar BRCA1/2 genetik testida misli ko'rilmagan yutuqlarga erishdi, bu oilada saraton kasalligiga chalingan bemorlar uchun juda muhim ta'sir ko'rsatdi. Bugungi kunga kelib, taxminan 20.000 BRCA1/2 varianti aniqlangan va Amerika Tibbiy Genetika Jamiyati 35 va EN5CA3BR tizimiga muvofiq tasniflangan. Mutatsion spektr geografik mintaqalarda keng farq qiladi.37 Italiyada BRCA1/2 PVs darajasi 8% dan 37% gacha boʻlib, mamlakat ichidagi keng oʻzgaruvchanlikni koʻrsatdi.38,39 Deyarli 5 million aholiga ega Sitsiliya aholisi soni boʻyicha Italiyada beshinchi yirik mintaqa hisoblanadi. orolning sharqiy qismida keng ko'lamli dalil yo'q.
Bizning tadqiqotimiz Sharqiy Sitsiliyadagi BC bemorlarida BRCA1/2 PV bilan kasallanish holatlari haqidagi birinchi hisobotlardan biridir.28 Biz tahlillarimizni BCga qaratdik, chunki bu bizning guruhimizdagi eng keng tarqalgan kasallikdir.
Miloddan avvalgi 389 bemorni sinovdan o'tkazishda 9% BRCA1/2 PV ni olib yurgan, ular BRCA1 va BRCA2 o'rtasida teng taqsimlangan. Bu natijalar Italiya populyatsiyasida ilgari e'lon qilingan natijalarga mos keladi.28 Qizig'i shundaki, bizning kogortamizning 3% (13/389) erkaklar edi. Bu ko'rsatkich bizdagi barcha ko'krak saratoni turlari bo'yicha erkaklarda kutilganidan yuqoridir (BC04), BRCA1/2 mutatsiyasi xavfi. Biroq, bu erkaklarning hech biri BRCA1/2 PVni ishlab chiqmagan, shuning uchun ular PALB2, RAD51C va D kabi kamroq tarqalgan mutatsiyalar mavjudligini istisno qilish uchun keyingi molekulyar tahlilga nomzod bo'lishgan. Noaniq ahamiyatga ega bo'lgan variantlar BRCA2 dan oldin aniqlangan bemorlarning 7 foizida topilgan. dalil.28,41,42
Biz BRCA1/2 mutant ayollarda BC molekulyar subtiplarining tarqalishini tahlil qilganimizda, biz TNBC va BRCA1 PV (58,8%) va luminal B BC va BRCA2 PV (55,6%) o'rtasidagi ma'lum bog'lanishlarni tasdiqladik. ma’lumotlar.16,43
Keyin biz BRCA1/2 PV turi va joylashuviga e'tibor qaratamiz. Bizning kohortimizda eng keng tarqalgan BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT edi. Garchi Incorvaia va boshqalar. bu variantni o'zlarining Sitsiliya kogortalarida tasvirlamagan, boshqa mualliflar uni BRCA1 PV germline sifatida xabar qilishgan.34 Bizning kohortimizda bir nechta BRCA1 PV topilgan - masalan c.181T>G, c.514del, c.3253dupA va c.5266dupC - ular SBR28 dan ikkita mutatsiyada kuzatilgan. (c.181T>G va c.5266dupC) odatda Sharqiy va Markaziy Yevropadagi Ashkenazi yahudiylarida (Polsha, Chexiya), sloveniyalik, avstriyalik, vengriyalik, belaruslik va nemislarda uchraydi, 44,45 va AQSh va Argentinada yaqinda “takroriy germline varianti” deb taʼriflangan va Italiyada BC43 OC1 varianti boʻlgan. ilgari Palermo va Messina shimoliy Sitsiliyadan 8 ko'krak saratoni bemorlarda aniqlangan. Qizig'i shundaki, hatto Incorvaia et al. Kataniyadagi ba'zi oilalarda c.3253dupA variantini topdi.28 Eng ko'p ifodalangan BRCA2 PV'lari c.428dup, c.5851_5854delAGTT va intronik variant c.8487+1G>A bo'lib, ular batafsilroq 28 Palermodagi bemorda c.425845, c.425845 edi xabar qilingan. Sitsiliya shimoli-g'arbiy qismidagi uy xo'jaliklarida, asosan Trapani va Palermo mintaqalarida kuzatilgan, holbuki c.5851_5854delAGTT PV shimoli-g'arbiy Sitsiliyadagi uy xo'jaliklarida kuzatilgan. 8487+1G>A varianti Messina, Palermo va Kaltanissetta va boshqalarda ko'proq tarqalgan.28. avvalroq Kolumbiyada c.5851_5854delAGTT oʻzgarishi tasvirlangan edi.37 Yana bir BRCA2 PV, c.631+1G>A Sitsiliyadan (Agrigento, Sirakusa va Ragusa) BC va OK bemorlarida topilgan.28 Taʼkidlash joizki, biz ikkita BRCA2 va c.3A1 variantining birgalikda mavjudligini kuzatdik. c.7008-2A>T) xuddi shu bemorda, biz ilgari xabar qilinganidek, cis rejimida ajratilgan deb faraz qilgandik.34,46 Ushbu BRCA2 uble mutatsiyalari haqiqatan ham Italiya mintaqasida tez-tez kuzatiladi va erta to'xtash kodonlarini kiritishi aniqlangan, bu esa messenjer RNKning birikishiga ta'sir qiladi va protein BR847 ning ishlamay qolishiga olib keladi.
Shuningdek, biz BRCA1 va BRCA2 PV-larini oqsil domenlari va genlarining taxminiy OCCR va BCCR mintaqalarida xaritalashtirdik. Bu hududlar Rebbek va boshqalar tomonidan tasvirlangan. mos ravishda tuxumdon va ko'krak saratoni rivojlanishi uchun xavf zonalari sifatida.49 Biroq, germline variantlarining joylashuvi va ko'krak yoki tuxumdon saratoni xavfi o'rtasidagi bog'liqlik haqidagi dalillar munozarali bo'lib qolmoqda.28,50-52 Bizning populyatsiyada BRCA1 PVs asosan BCCR mintaqasida joylashgan bo'lsa, biz BRCA2 PVXdan oldingi mintaqada joylashgan edik. taxminiy OCCR va BCCR hududlari va BC xususiyatlari o'rtasida hech qanday bog'liqlik topa olmadi. Bu BRCA1/2 mutatsiyalari bo'lgan bemorlarning cheklangan soni bilan bog'liq bo'lishi mumkin. Protein sohasi nuqtai nazaridan, BRCA1 PV'lari butun protein bo'ylab taqsimlanadi va BRCA2 o'zgarishlari BRC takroriy domenida afzal ko'riladi.
Nihoyat, biz BC klinikopatologik xususiyatlarni BRCA1/2 PV bilan bog'ladik. Bemorlarning cheklangan soni tufayli biz Ki-67 va o'simta darajasi o'rtasida faqat sezilarli bog'liqlikni topdik. Ki-67 ni baholash va talqin qilish biroz munozarali bo'lib qolsa-da, yuqori proliferativ ko'rsatkichlar kasallikning takrorlanish xavfini oshirishi va suruvning qisqarishi bilan bog'liq ekanligi aniq. Ki-67 "yuqori" va "past" ni ajratib ko'rsatish 20% ni tashkil qiladi. Biroq, bu chegara Ki-67 o'rtacha qiymati 25% bo'lgan BRCA1/2 mutatsiyasiga chalingan bemorlarga taalluqli emas. Ki-67 ning yuqori ko'rsatkichlari tendentsiyasi bizning luminal B va TNBCH ko'rsatkichlarining bir nechtasi bo'lganligi bilan izohlanadi. Ba'zi dalillar shuni ko'rsatadiki, Ki-67 ning yuqori chegarasi (25-30%) bemorlarni prognoziga ko'ra yaxshiroq tabaqalashi mumkin.53,54 Bizning tahlilimiz natijalariga ko'ra, muhim korrelyatsiya ajablanarli emas. Ki-67 darajasi va BRCA1 PV mavjudligi o'rtasida sodir bo'ladi. xususiyatlari.16,17
Xulosa qilib aytganda, ushbu tadqiqot Sitsiliyaning sharqiy qismidagi miloddan avvalgi kohortda BRCA1/2 ning mutatsion holati to'g'risida hisobot beradi. Umuman olganda, bizning topilmalarimiz mutatsiyalarning tarqalishi va BCdagi klinikopatologik xususiyatlar bo'yicha ham oldingi dalillarga mos keladi. BRCA1/2-mutantli BC genini tahlil qilish kabi kengaygan BRCA1/2-mutantli BC genlarini tahlil qilish uchun kengroq populyatsiyalarda olib borilgan ko'proq tadqiqotlar. BRCA1/2 dan farqli va kamroq tez-tez uchraydigan PVlarning mavjudligi. Bu genetik mutatsiyalar tufayli saraton xavfi ortib borayotgan sub'ektlar sonini aniqlash va to'g'ri boshqarish imkonini beradi.
Biz bemorlar oʻsimta namunalarini tadqiqot maqsadida anonim ravishda chiqarishga rozilik berganligini tasdiqladik. Barcha bemorlar Xelsinki deklaratsiyasiga muvofiq yozma xabardor qilingan rozilikni imzoladilar. AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marko” siyosatiga koʻra, bu tadqiqot axloqiy tekshiruvdan ozod qilindi, chunki barcha bemorlarga BRCA12 asosida yozma ravishda tahlil qilinib, tahlil qilindi. rozilik. Bemorlar ham oʻz maʼlumotlaridan tadqiqot maqsadlarida foydalanishga rozilik bildiradilar.
Professor Paolo Vigneriga Etika qo'mitasi talabiga binoan ko'krak bezi saratoni bilan og'rigan bemorlarni parvarish qilishda yordam bergani uchun minnatdorchilik bildiramiz.
Federika Martorana Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizerdan gonorar haqida xabar beradi. Boshqa mualliflar bu ishda manfaatlar to'qnashuvi yo'qligini e'lon qilmaydi.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, va boshqalar. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN dunyoning 185 mamlakatida 36 saraton kasalligi bilan kasallanish va o'lim darajasini taxmin qiladi. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.ca32.doi: