Javascript desgaituta dago zure arakatzailean. Webgune honetako funtzio batzuk ez dira funtzionatuko javascript desgaituta dagoenean.
Eman izena zure datu zehatzekin eta intereseko sendagai espezifikoarekin, eta ematen duzun informazioa gure datu-base zabaleko artikuluekin lotuko dugu eta berehala bidaliko dizugu PDF kopia bat posta elektronikoz.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella Medikuntza Klinika, Catania Cataniako Unibertsitate Experimentala 1,21 Unibertsitatea 95123, Italia; 2 Onkologia eta Hematologia Esperimentalerako Zentroa, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Italia; 3 Onkologia Medikoa, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italia; 4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italia; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italia; 6 Biomedikuntza eta Bioteknologia Zientzien Saila, Cataniako Unibertsitatea, Genetika Medikoa, Catania, Italia, 95123; 7Oasi Ikerketa Institutua-IRCCS, Troina, 94018, Italia Komunikazioak: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected]; [email protected] Helburua: BRCA1 eta BRCA2 geneen mutazio germinalak eta bularreko minbizia (BC), obulutegiko minbizia (OC) eta beste minbizi-arriskuarekin lotuta.BRCA genearen probak funtsezkoak dira banakako arriskua ebaluatzeko, baita eramaile osasuntsuetan prebentzio-metodoak aurkitzeko eta minbizi-pazienteen tratamenduak egokitzeko ere.BRCA1 eta BRCA2 alterazioen prebalentzia asko aldatzen da eskualde geografikoen arabera, eta Siziliako familietan BRCA aldaera patogenikoei buruzko datuak dauden arren, Sizilia ekialdeko populazioei zuzendutako ikerketak falta dira.Gure ikerketaren helburua Sizilia ekialdeko BC pazienteen kohorte batean BRCA aldaera germinal patogenikoen intzidentzia eta banaketa ikertzea eta hurrengo belaunaldiko sekuentziazioa erabiliz BC ezaugarri espezifikoekin duten lotura ebaluatzea izan zen.Aldaketen presentzia tumore-mailarekin eta ugalketa-indizearekin korrelazionatu zen.EMAITZAK: Oro har, 35 pazientek (% 9) BRCA aldaera patogenikoa zuten, 17k (% 49) BRCA1en eta 18k (% 51) BRCA2en.BRCA1 alterazioak ohikoak dira BC hirukoitz negatiboko pazienteetan, eta BRCA2 mutazioak ohikoagoak dira BC luminalaren pazienteetan.Konparatua Eramaile ez zirenekin, BRCA1 aldaerak zituzten subjektuek tumore-maila eta ugalketa-indize nabarmen handiagoa zuten. Ondorioak: Gure aurkikuntzek Sizilia ekialdeko BC pazienteen BRCA mutazio-egoeraren ikuspegi orokorra eskaintzen dute eta NGS analisiak BC hereditarioa duten pazienteak identifikatzeko duen eginkizuna berresten dute. Oro har, datu hauek bat datoz mutazio-eramaileetan minbizia behar bezala prebenitzeko eta tratatzeko BRCA baheketa babesten duten aurreko ebidentziarekin.
Bularreko minbizia (MB) mundu osoko minbizi ohikoena da eta emakumeengan hilgarriena.1 MBren pronostikoa eta portaera klinikoa zehazten dituzten ezaugarri biologikoak sakonki aztertu eta partzialki argitu dira denboran zehar. Izan ere, hainbat ordezko markatzaile erabiltzen dira gaur egun MBak azpimota molekular desberdinetan sailkatzeko. Hauek dira: estrogeno (ER) eta/edo progesterona hartzailea (PgR), gizakiaren hazkuntza epidermikoaren faktorearen hartzaile 2 (HER2) anplifikazioa, Ki-67 ugalketa-indizea eta tumorearen maila (G).2 Aldagai hauen konbinazioak MB kategoria hauek identifikatu zituen: 1) ER eta/edo PgR adierazpena erakusten duten tumore luminalak MBen % 75 izan ziren. Tumore hauek A Luminaletan banatu ziren, Ki-67 % 20tik beherakoa eta HER2 negatiboa zenean, eta B Luminaletan, Ki-67 % 20 edo gehiagokoa zenean eta HER2 anplifikazioa zegoenean, ugalketa-indizea edozein dela ere; 2) ER eta PgR negatiboak diren baina HER2 anplifikazioa erakusten duten HER2+ tumoreak. Talde honek bularreko tumore guztien % 10 hartzen du; 3) Hirukoitz negatiboko bularreko minbizia (TNBC), ER eta PgR espresioa eta HER2 anplifikazioa erakusten ez dituena, bularreko minbizien % 15 inguru hartzen du.2-4
BC azpimota hauen artean, tumorearen maila eta ugalketa-indizea tumorearen oldarkortasunarekin eta pronostikoarekin zuzenean eta independenteki lotuta dauden zeharkako biomarkatzaileak dira.5,6
Aipatutako ezaugarri biologikoez gain, azken urteotan gero eta garrantzitsuagoa bihurtu da BCaren garapenean heredatutako alterazio genetikoen eginkizuna.7 Bularreko tumoreen hamarretik bat gutxi gorabehera gene espezifikoetan dauden aldaketen ondorioz heredatzen da.8 180.000 emakume baino gehiagorekin parte hartu duten bi ikerketa epidemiologiko handik zortzi geneko talde bat identifikatu berri dute (hau da, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C eta RAD51D), BC hereditarioaren erantzule nagusiak direnak. Gene horien artean, BRCA1 eta BRCA2 (aurrerantzean BRCA1/2) bularreko tumoreen garapenarekin korrelazio sendoena erakutsi dute.9-12 Izan ere, BRCA1/2 mutazio germinalek nabarmen handitzen dute BCaren bizitza osoko arriskua, baita beste gaixotasun gaizto batzuk ere, besteak beste, obulutegikoak, prostatakoak, pankreakoak, kolonekoak eta melanoma. 13 urtetik 80 urtera, BCaren intzidentzia metatua % 72koa da BRCA1 aldaera patogenoa (PV) duten emakumeengan eta % 69koa BRCA2 aldaera duten emakumeengan. PV.14
Azpimarratzekoa da duela gutxiko argitalpen batek iradokitzen duela BC arriskua PV motaren araberakoa dela. Izan ere, aldaera moztu patogenikoekin alderatuta, aldaera missense nabarmenak, batez ere BRCA1 genean, BC izateko arrisku txikiagoarekin lotuta daude, batez ere emakume helduengan.15
BRCA1 edo BRCA2 PV-ren presentzia ezaugarri biologiko eta klinikopatologiko desberdinekin lotu zen.16,17 BRCA1-ekin lotutako tumore kronikoek klinikoki oldarkorrak, gaizki bereiziak eta oso ugalkorrak izan ohi dira. Tumore hauek normalean hirukoitz negatiboak dira eta adin goiztiarrean agertzen dira. BRCA2 mutazioa duten pazienteengan agertzen diren tumoreek normalean gradu moderatu eta ondo bereiziak eta ugalketa-indize aldakorrak erakusten dituzte. Tumore hauek ohikoagoak dira B lumenean eta normalean adineko helduengan agertzen dira.16-18 Aipagarria da BRCA1 eta BRCA2-ren mutazioek tratamendu espezifikoekiko sentikortasuna handitzen dutela, platino-gatzak eta poli(ADP-ribosa) polimerasa inhibitzaileak (PARPi) bezalako sendagai zuzenduak barne.19,20
Azken urteotan, hurrengo belaunaldiko sekuentziazioa (NGS) praktika klinikoan ezartzeak gero eta BC paziente gehiagori minbiziarekiko suszeptibilitate sindromeen proba molekularrak egiteko aukera eman die, BRCA1/2 barne.21 Aldi berean, familia-historiaren, ezaugarri demografikoen eta kliniko-patologikoen inguruko irizpide zehatzetan oinarritutako definizioak BRCA1/2 probak egiteko modukoak diren pertsonak hobeto identifikatzeko aukera ematen du.22,23 Testuinguru honetan, BRCA1/2 baheketaren inguruko ebidentzia pilatzen ari da populazio espezifikoetan, eskualde geografikoen arteko desberdintasunak nabarmenduz.24–27 Mendebaldeko Siziliako BC kohorteari buruzko txostenak badaude ere, datu gutxiago daude eskuragarri BRCA1/2 baheketari buruz ekialdeko Siziliako populazioan.28,29
Sizilia ekialdeko BC duten pazienteetan BRCA1/2 lerro germinalaren baheketaren emaitzak deskribatzen ditugu hemen, BRCA1 edo BRCA2 mutazioen presentzia tumore hauen ezaugarri kliniko-patologiko nagusiekin korrelazionatuz.
Atzera begirako ikerketa bat egin zen Cataniako Rodolico – San Marco Policlinico Ospitaleko "Onkologia eta Hematologia Esperimentaleko Zentroan". 2017ko urtarriletik 2021eko martxora, bularreko eta obulutegiko, melanomako, pankreako edo prostatako minbizia zuten 455 paziente gure diagnostiko molekularreko laborategira bidali ziren BRCA/2 proba genetikoak egiteko. Ikerketa hau Helsinkiko Adierazpenaren arabera egin zen, eta parte-hartzaile guztiek idatzizko baimen informatua eman zuten analisi molekularra egin aurretik.
Gurutzetako tumoreen ezaugarri histologiko eta biologikoak (ER, PgR, HER2 egoera, Ki-67 eta gradua) biopsia nukleoetan edo kirurgia-laginetan ebaluatu ziren, tumore-osagai oldarkorrak bakarrik kontuan hartuta. Ezaugarri hauetan oinarrituta, tumoreak honela sailkatu ziren: A luminala (ER+ eta/edo PgR+, HER2-, Ki-67<%20), B luminala (ER+ eta/edo PgR+, HER2-, Ki-67≥%20), B luminala-HER2+ (ER eta/edo PgR+, HER2+), HER2+ (ER eta PgR-, HER2+) edo hirukoitz negatiboa (ER eta PgR-, HER2-).
BRCA1 eta BRCA2 mutazio-egoera ebaluatu aurretik, onkologo, genetista eta psikologo bat barne hartzen zituen diziplina anitzeko talde batek tumoreen genetika-kontsulta bat egin zuen paziente bakoitzarentzat, BRCA1 eta/edo BRCA1 presentzia zehazteko. edo BRCA2 genean PV izateko arrisku handia duten pertsonak. Pazienteen hautaketa Italiako Onkologia Medikoko Elkartearen (AIOM) jarraibideen eta Siziliako tokiko gomendioen arabera egin zen.30,31 Irizpide horien artean daude: (i) suszeptibilitate-geneetan ezagutzen diren aldaera patogenikoen familia-historia (adibidez, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) bularreko minbizia duten gizonezkoak; (iii) bularreko minbizia eta onddo kardiakoa dutenak; (iv) bularreko minbizia <36 urte, bularreko minbizi transnazionala <60 urte edo bularreko minbizi bilaterala <50 urte dituzten emakumeak; (v) bularreko minbiziaren historia mediko pertsonala <50 urte eta gutxienez lehen mailako senide bat: (a) bularreko minbizia <50 urte; (b) bularreko minbizia ez-mukinosoa eta ez-mukinosoa edozein adinetan; (c) bularreko minbizi bilaterala; (d) bularreko minbizia gizonezkoa; (e) pankreako minbizia; (f) prostatako minbizia; (vi) bi EBren aurrekari pertsonal edo gehiago > 50 urte eta EB, OB edo pankreako minbiziaren familia-aurrekariak elkarren lehen mailako senideentzat (berarekin lehen mailako senideak barne); (vii) OBren aurrekari pertsonalak eta gutxienez lehen mailako senide bat: (a) EB <50 urte; (b) OB; (c) EB bilaterala; (d) EB gizonezkoa; (vii) OB seroso gradu handiko emakumea.
Paziente bakoitzetik 20 ml-ko odol periferikoko lagin bat lortu eta EDTA hodietan (BD Biosciences) bildu zen. DNA genomikoa 0,7 ml-ko odol osoko laginetatik isolatu zen QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italia) erabiliz, fabrikatzailearen argibideen arabera, eta Qubit® 3.0 Fluorometro batetik pasa zen (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AEB). Kuantifikazioa egin. Helburuaren aberastea eta liburutegiaren prestaketa Oncomine™ BRCA Research Assay Chef-ek egiten ditu, Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit-ean kargatzeko prest, liburutegiaren prestaketa automatizatua egiteko, fabrikatzailearen argibideen arabera. Kitak bi PCR primer multzo multiplex ditu, BRCA1 (NM_007300.3) eta BRCA2 (NM_000059.3) gene guztiak aztertzeko erabil daitezkeenak. Laburbilduz, DNA lagin diluitu bakoitzetik 15 µL (10 ng) gehitu ziren barra-kodedun plaketan liburutegia prestatzeko, eta erreaktibo eta kontsumigarri guztiak Ion Chef™ tresnan kargatu ziren. Ondoren, liburutegiaren prestaketa automatizatua eta barra-kodedun lagin liburutegiaren bilketa Ion Chef™ tresnan egin ziren. Ondoren, prestatutako liburutegien kopurua Qubit® 3.0 Fluorometro batekin (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AEB) ebaluatu zen, fabrikatzailearen argibideen arabera. Azkenik, liburutegiak proportzio ekuimolarretan konbinatzen dira Ion Chef™ liburutegiko lagin-hodietan (barra-kodedun hodiak) eta kargatzen dira. Ion Chef™ tresnan. Sekuentziazioa Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) tresna bat (Thermo Fisher Scientific) erabiliz egin zen, Ion 510 txipa (Thermo Fisher Scientific) erabiliz. Datuen analisia Amplicon Suite (SmartSeq srl) eta Ion Reporter Software-rekin egin zen.
Aldaeren nomenklatura guztiak Giza Genomaren Aldaketaren Partzuergoaren egungo jarraibideak jarraitu zituen, online eskuragarri (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). BRCA1/2 aldaeren garrantzi klinikoa Nazioarteko Partzuergo ENIGMAren sailkapena erabiliz definitu zen (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Aleles, https://enigmaconsortium.org/) eta hainbat datu-base kontsultatuz, hala nola ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD eta UMD. Sailkapenak bost arrisku-kategoria bereizten ditu: onbera (I. kategoria), litekeena da onbera izatea (II. kategoria), ziurgabeko esanahia duen aldaera (VUS, III. kategoria), litekeena da patogenoa izatea (IV. kategoria) eta patogenoa izatea (V. kategoria). VarSome-k mutazioek proteinen egituran eta funtzioan duten eragina ere aztertu zuen, 30 datu-basetarako sarbidea duen tresna informatibo bat.32
VUS bakoitzari esangura kliniko potentziala esleitzeko, proteinak iragartzeko algoritmo konputazional hauek erabili ziren: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) eta Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). 1. eta 2. klase gisa sailkatutako aldaerak basatitzat hartu ziren.
Sanger sekuentziazioak aldaera patogeno bakoitzaren presentzia baieztatu zuen. Laburbilduz, detektatutako aldaera bakoitzerako primer espezifiko pare bat diseinatu zen BRCA1 eta BRCA2 geneen erreferentzia-sekuentziak erabiliz (NG_005905.2, NM_007294.3 eta NG_012772.3, NM_000059.3, hurrenez hurren). Beraz, PCR zuzendua egin zen eta ondoren Sanger sekuentziazioa egin zen.
BRCA1/2 genearen proba negatiboa zuten pazienteei ligadura multiplexaren menpeko zunda anplifikazio (MLPA) bidezko proba egin zitzaien, fabrikatzailearen argibideen arabera, genoma-berrantolaketa handien (LGR) presentzia ebaluatzeko. Laburbilduz, DNA laginak desnaturalizatzen dira eta gehienez 60 BRCA1 eta BRCA2 geneentzako zunda espezifiko erabiltzen dira, bakoitzak gutxi gorabehera 60 nukleotidoko luzera duen DNA sekuentzia espezifiko bat detektatuz. PCR amplifikazio multzo bakar batez osatutako zunda anplifikazio produktuak elektroforesi kapilar bidez eta Cofalyser.Net softwarearen bidez aztertu ziren, lote espezifikoetarako Cofalyser taulekin batera (www.mrcholland.com).
Hautatutako aldagai klinikopatologikoak (maila histologikoa eta Ki-% 67ko ugalketa-indizea) BRCA1/2 PVren presentziarekin lotu ziren, Prism softwarea v. 8.4 erabiliz kalkulatuta, Fisherren proba zehatza erabiliz, p-balioa <0,05 esanguratsua zela suposatuz.
2017ko urtarriletik 2021eko martxoaren artean, 455 pazienteri BRCA1/2 mutazio germinalen baheketa egin zitzaien. Mutazio probak Policlinico Ospitaleko Onkologia Esperimentaleko eta Hematologiako Zentroan egin ziren. Siziliako jarraibideen arabera (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, 2020ko urtarrilaren 10a, ostirala), Cataniako Rodolico-n – San Marco-n guztira 389 paziente zeuden. Bularreko minbizia, 37 obulutegiko minbizia, 16 pankreako minbizia, 8 prostatako minbizia eta 5 melanoma. Pazienteen banaketa minbizi motaren eta analisi emaitzen arabera 1. irudian ageri da.
1. irudiak ikerketaren ikuspegi orokorra erakusten duen fluxu-diagrama bat erakusten du. Bularreko, melanomako, pankreako, prostatako edo obulutegiko tumoreak zituzten pazienteei BRCA1 eta BRCA2 geneetan mutazioak detektatzeko probak egin zitzaizkien.
Laburdurak: PV, aldaera patogenoa; VUS, esanahi ziurgabeko aldaera; WT, BRCA1/2 sekuentzia basatia.
Gure ikerketak bularreko minbiziaren kohorteetan zentratu genituen. Pazienteen batez besteko adina 49 urtekoa zen (23-89 tartea) eta gehienbat emakumezkoak ziren (n=376, edo %97).
Subjektu hauetatik, 64k (% 17) BRCA1/2 mutazioak zituzten eta guztiak emakumezkoak ziren. Hogeita hamabostek (% 9) PV zuten eta 29k (% 7,5) VUS. 35 aldaera patogenikoetatik hamazazpi (% 48,6) BRCA1en agertu ziren eta 18 (% 51,4) BRCA2en, eta 5 VUS BRCA1en (% 17,2) eta 24 (% 82,8) BRCA2en (1. eta 2. irudiak). LGR ez zen agertu MLPA analisian.
2. irudia. BRCA1 eta BRCA2 mutazioen analisia 389 bularreko minbizia duten pazienteetan. (A) Aldaera patogenikoen (PV) banaketa (gorria), esanahi ziurgabeko aldaerak (VUS) (laranja) eta WT (urdina) 389 bularreko minbizia duten pazienteetan; (B) 389 bularreko minbizia duten pazienteetan Hogeita hamabost (% 9) BRCA1/2 aldaera patogenikoak (PV) zituzten. Horien artean, 17 (% 48,6) BRCA1 PV eramaileak ziren (gorri iluna) eta 18 (% 51,4) BRCA2 eramaileak (gorri argia); (C) 389 subjektuetatik 29 (% 7,5) VUS geneak zituzten, 5 (% 17,2) BRCA1 geneak (laranja iluna) eta 24 (% 82,8) BRCA2 geneak (laranja argia).
Laburdurak: PV, aldaera patogenoa; VUS, esanahi ziurgabeko aldaera; WT, BRCA1/2 sekuentzia basatia.
Ondoren, BRCA1/2 PV duten pazienteen BC azpimota molekularren prebalentzia ikertu genuen. Banaketak 2 (% 5,7) luminal A, 15 (% 42,9) luminal B, 3 (% 8,6) luminal B-HER2+, 2 (% 5,7) HER2+ eta 13 (% 37,1) TNBC paziente barne hartu zituen. BRCA1 positiboko pazienteen artean, 5ek (% 29,4) luminal B BC zuten, 2k (% 11,8) HER2+ gaixotasuna zuten eta 10ek (% 58,8) TNBC zuten. BRCA1 mutaziorik gabeko tumoreak luminal A edo luminal B-HER2+ ziren (3. irudia). BRCA2 positiboko azpitaldean, 10 (% 55,6) tumore luminal B ziren, 3 (% 16,7) luminal B-HER2+, 3 (% 16,7) TNBC eta 2 (% 11,1) luminal A ziren (3. irudia). 3 ). Ez zen HER2+ tumorerik aurkitu talde honetan. Beraz, BRCA1 mutazioak nagusi dira TNBC pazienteetan, eta BRCA2 alterazioak, berriz, B lumeneko gizabanakoetan.
3. irudia Bularreko minbiziaren azpimoten prebalentzia BRCA1 eta BRCA2 aldaera patogenikoak dituzten pazienteetan. BRCA1- (gorri iluna) eta BRCA2- (gorri argia) PVen banaketa erakusten duten histogramak, bularreko minbizia duten pazienteen azpimota molekularren artean. Kutxa bakoitzean adierazitako zenbakiek bularreko minbiziaren azpimota bakoitzerako BRCA1 eta BRCA2 PV duten pazienteen ehunekoa adierazten dute.
Laburdurak: PV, aldaera patogenoa; HER2+, giza hazkuntza-faktore epidermikoaren 2. hartzaile positiboa; TNBC, bularreko minbizi hirukoitz negatiboa.
Ondoren, BRCA1 eta BRCA2 PV-en mota eta geneen lokalizazioa ebaluatu genituen. BRCA1 PV-an, 7 nukleotido bakarreko aldaera (SNV), 6 ezabatze, 3 bikoizketa eta txertatze 1 ikusi genituen. Mutazio bakarra (c.5522delG) aurkikuntza berri bat da. Bi subjektuetan detektatu den BRCA1 PV ohikoena c.5035_5039delCTAAT izan zen. Aldaketa honek bost nukleotidoren ezabapena (CTAAT) dakar BRCA1 15. exoian, eta ondorioz, leuzina aminoazidoa tirosinarekin ordezkatu da 1679. kodoian, eta itzulpen-marko-desplazamendu baten ondorioz, aurreikusitako stop kodon alternatibo batekin proteina-mozketa goiztiarra eragin du. Gainerako aldaketa guztiak kasu bakarrean bakarrik detektatu dira. Aipagarria da, jakinarazitako PV bat empalme-gunearen adostasun-eskualdean kokatuta zegoela (c.4357+1G>T) (1. taula).
BRCA2 PVri dagokionez, 6 ezabatze, 6 SNV eta 2 bikoizpen ikusi genituen. Aurkitutako aldaketa bat ere ez da berria. Hiru mutazio errepikatu ziren gure populazioan, c.428dup eta c.8487+1G>A 3 subjektutan ikusi ziren, eta ondoren c.5851_5854delAGTT bi kasutan berreskuratua. c.428dup aldaketak C-ren errepikapena dakar BRCA2-ren 5. exoian, proteina moztu eta ez-funtzional bat kodetzen duela aurreikusten dena. c.8487+1G>A mutazioa BRCA2-ren 19. introiaren introi eskualdean gertatzen da (± 1,2) eta splicing-aren adostasun-sekuentzian eragiten du, splicing-a aldatuz eta proteina anormala edo ez-egoera eraginez. c.5851_5854delAGTT aldaera patogenikoa BRCA2 genearen 10. exoi kodetzailean 5851etik 5854ra bitarteko nukleotido-posizioetatik 4 nukleotido-ezabatze baten ondoriozkoa da, eta... itzulpen-marko-aldaketa aurreikusitako stop kodon alternatibo batekin (p.S1951WfsTer). Aipagarria da, aurretik jakinarazi bezala, c.631G>A eta c.7008-2A>T alterazioak paziente berean detektatu zirela.34 Lehenengo mutazioak BRCA2 7. exoian adenosina (A) ordezkatzea dakar guanina (G) duen nukleotido batekin, eta horrek balina isoleuzina bihurtzen du 211. kodoian, isoleuzina aminoazidoa propietate oso antzekoak dituen aminoazido bat da. Aldaketa honek mRNAren splicing normala eragiten du. Bigarren aldaera eskualde introniko batean dago eta A bikoitza timina (T) ordezkatzea eragiten du BRCA2 kodetzen duen genearen 13. exoiaren aurretik. c.7008-2A>T aldaketak luzera desberdineko transkripzio anitz sor ditzake. Gainera, BRCA2 PV taldean, 18 aldaketatik 4 (% 22,2) intronikoak izan ziren.
Ondoren, BRCA1/2 mutazio kaltegarriak mapatu genituen domeinu funtzionaletan eta proteinen lotura-eskualdeetan (4. irudia). BRCA1 genean, PVen % 50 bularreko minbiziaren multzo-eskualdean (BCCR) kokatu ziren, eta mutazioen % 22 obulutegiko minbiziaren multzo-eskualdean (OCCR) (4A irudia). BRCA2 PVan, aldaeren % 35,7 BCCR eskualdean kokatu ziren eta mutazioen % 42,8 OCCRn (4B irudia). Ondoren, PVren kokapena ebaluatu genuen BRCA1 eta BRCA2 proteina-domeinuetan. BRCA1 proteinari dagokionez, hiru PV aurkitu genituen begizta eta kiribildutako kiribil domeinuetan, eta bi mutazio BRCT domeinuan (4A irudia). BRCA2 proteinari dagokionez, 4 PV BRC errepikapen-domeinuan mapatu ziren, eta 3 aldaketa introniko eta 3 aldaketa exoniko detektatu ziren oligo/oligosakaridoen lotura-domeinuetan (OB) eta dorre-domeinuetan (T) (4B irudia).
4. irudia BRCA1 eta BRCA2 proteinen eskema-adierazpena eta aldaera patogenoen lokalizazioa. Irudi honek BRCA1 (A) eta BRCA2 (B) aldaera patogenoen banaketa erakusten du bularreko minbizia duten pazienteetan. Mutazio exonikoak urdinez ageri dira, eta aldaera intronikoak laranjaz. Barraren altuerak kasu kopurua adierazten du. BRCA1 eta BRCA2 proteinak eta haien domeinu funtzionalak jakinarazi dira. (A) BRCA1 proteinak begizta-domeinu bat (RING) eta lokalizazio nuklearreko sekuentzia bat (NLS), kiribildutako kiribil-domeinu bat, SQ/TQ multzo-domeinu bat (SCD) eta BRCA1 C-terminal domeinu bat (BRCT) ditu. (B) BRCA2 proteinak zortzi BRC errepikapen, DNA lotura-domeinu helikoidal bat (Helical), hiru oligonukleotido/oligosakarido lotura-tolestura (OB), dorre-domeinu bat (T) eta NLS bat C aldean ditu. Bularreko Minbiziaren Kluster Eskualdea (BCCR) eta Obulutegiko Minbiziaren Kluster Eskualdea (OCCR) izeneko eremuak behean ageri dira. *Mutazioak adierazten ditu... stop kodonak zehaztu.
Ondoren, BRCA1/2 PV-ren presentziarekin korrelazionatu daitezkeen BCren ezaugarri kliniko-patologikoak ikertu genituen. 181 BRCA1/2 negatiboko pazienteren (eramaile ez direnak) eta eramaile guztien (n = 35) erregistro kliniko osoak zeuden eskuragarri. Korrelazioa zegoen tumorearen ugalketa-tasaren eta graduaren artean.
Ki-67ren banaketa kalkulatu genuen gure kohortearen medianaren arabera (% 25, ​​tartea <10-90%). Ki-67 < % 25 zuten subjektuak "Ki-67 baxua" gisa definitu ziren, eta % 25 ≥ balioak zituztenak "Ki-67 altua" bezala. Ki-67 alde esanguratsuak (p <0,01) aurkitu ziren BRCA1 PV eramaile ez zirenen eta (5A irudia).
5. irudia Ki-67ren eta BRCA1 eta BRCA2 mutazio-egoeraren (PV) arteko banaketaren arteko korrelazioa bularreko minbizia duten emakumeen artean. (A) Kaxa-diagrama, 181 bularreko minbizia duten paziente ez-eramaileetan Ki-67 balioen mediana erakusten duena, BRCA1 (18) edo BRCA2 (17) PV pazienteen aldean. 0,5etik beherako P balioak estatistikoki esanguratsutzat jo ziren. (B) BU minbizia duten pazienteen sailkapena adierazten duen histograma, BRCA1 eta BRCA2 mutazio-egoeraren arabera (WT subjektuak, BRCA1 eta BRCA2 PV eramaileak).
Era berean, tumore-maila BRCA1/2 PV-ren presentziarekin korrelazionatzen zen aztertu genuen. Gure populazioan G1 BC ez zegoenez, pazienteak bi taldetan banatu genituen (G2 edo G3). Ki-67 emaitzekin bat etorriz, analisiak tumore-mailaren eta BRCA1 mutazioaren arteko korrelazio estatistikoki esanguratsua agerian utzi zuen, G3 tumoreen proportzio handiagoarekin BRCA1 eramaileetan eramaile ez direnekin alderatuta (p<0,005) (5B irudia).
DNA sekuentziazio teknologian egindako aurrerapenek BRCA1/2 proba genetikoetan aurrerapen handiak ahalbidetu dituzte, eta horrek ondorio garrantzitsuak ditu minbiziaren familia-aurrekariak dituzten pazienteentzat. Gaur arte, gutxi gorabehera 20.000 BRCA1/2 aldaera identifikatu eta sailkatu dira American Society of Medical Genetics 35 eta ENIGMA sistemaren arabera.35,36 Jakina da BRCA1/2 mutazio-espektroa asko aldatzen dela eskualde geografikoen arabera.37 Italian, BRCA1/2 PV-en tasa % 8tik % 37ra bitartekoa zen, eta herrialde barruko aldakortasun handia erakusten du.38,39 Ia 5 milioi biztanlerekin, Sizilia da Italiako bosgarren eskualderik handiena biztanle kopuruari dagokionez. BRCA1/2-ren banaketari buruzko datuak badaude ere Siziliako mendebaldean, ez dago ebidentzia zabalik uhartearen ekialdean.
Gure ikerketa Siziliako ekialdeko BC pazienteen BRCA1/2 PV-aren intzidentziari buruzko lehenengo txostenetako bat da.28 Gure analisia BC-an zentratu genuen, gure kohorteko gaixotasun ohikoena baita, alde handiz.
389 bularreko minbizi motako pazienteei egindako probak egitean, % 9k BRCA1/2 PVak zituzten, BRCA1 eta BRCA2 artean berdin banatuta. Emaitza hauek Italiako populazioan lehenago jakinarazitakoekin bat datoz.28 Interesgarria da, gure kohorteko % 3 (13/389) gizonezkoak zirela. Tasa hau gizonezkoen bularreko minbiziarentzat espero baino handiagoa da (bularreko minbizi mota guztien % 1),40 BRCA1/2 mutazio arriskuan oinarritutako populazioen hautaketa islatzen duena. Hala ere, gizon horietako inork ez zuen BRCA1/2 PVrik garatu, beraz, analisi molekular gehiago egiteko hautagaiak ziren, PALB2, RAD51C eta D bezalako mutazio ez hain ohikoen presentzia baztertzeko, besteak beste. Garrantzi ziurgabeko aldaerak berreskuratu ziren BRCA2 VUS agerikoa zen subjektuen % 7an. Emaitza hau ere bat dator aurretik zegoen ebidentziarekin.28,41,42
BRCA1/2 mutanteak dituzten emakumeen BC azpimota molekularren banaketa aztertu genuenean, TNBC eta BRCA1 PV (% 58,8) eta B luminaleko BC eta BRCA2 PV (% 55,6) arteko lotura ezagunak baieztatu genituen.16,43 BRCA1 eta BRCA2 PV eramaileen luminaleko A eta HER2+ tumoreak bat datoz literaturako datuekin.16,43
Ondoren, BRCA1/2 PV motan eta kokapenean zentratzen gara. Gure kohortean, BRCA1 PV ohikoena c.5035_5039delCTAAT izan zen. Incorvaia et al.-ek egin duten arren... aldaera hau ez zuten deskribatu Siziliako kohortean, beste egile batzuek BRCA1 PV germinal gisa jakinarazi dute.34 Hainbat BRCA1 PV aurkitu ziren gure kohortean – adibidez, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA eta c.5266dupC – Sizilian ikusi direnak.28 Horietatik, bi BRCA1 sortzaile mutazio (c.181T>G eta c.5266dupC) ohikoak dira Ekialdeko eta Erdialdeko Europako (Polonia, Txekia), Esloveniera, Austria, Hungaria, Bielorrusia eta Alemania) judu askenazietan, 44,45 eta, Estatu Batuetan eta Argentinan, duela gutxi "aldaera germinal errepikakor" gisa definitu zen BC eta OC duten italiar pazienteetan. 34c.514del aldaera aurretik identifikatu zen Siziliako iparraldeko 8 bularreko minbizia duten pazienteetan, Palermon eta Messinan. Interesgarria da, Incorvaia et al.-ek ere... c.3253dupA aldaera aurkitu zuten Cataniako familia batzuetan.28 BRCA2 PV adierazgarrienak c.428dup, c.5851_5854delAGTT aldaera introikoa eta c.8487+1G>A aldaera introikoa dira, xehetasun gehiagorekin jakinarazi direnak 28 Palermoko c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV zuen paziente batean. Siziliako ipar-mendebaldeko etxeetan ikusi zen, batez ere Trapani eta Palermo eskualdeetan, eta c.5851_5854delAGTT PV, berriz, Siziliako ipar-mendebaldeko etxeetan ikusi zen. 8487+1G>A aldaera ohikoagoa zen Messina, Palermo eta Caltanissettako subjektuetan.28 Rebbeck et al. Aurretik deskribatu zen c.5851_5854delAGTT alterazioa Kolonbian.37 Beste BRCA2 PV bat, c.631+1G>A, aurkitu da Siziliako (Agrigento, Siracusa eta Ragusa) BC eta OC pazienteetan.28 Aipagarria da bi BRCA2 aldaera (BRCA2 c.631G>A eta c.7008-2A>T) koexistentzia ikusi dugula paziente berean, cis moduan bereizita zegoela suposatu genuena, lehenago horrela jakinarazi bezala.34,46 BRCA2 aldaera hauek maiz ikusten dira Italiako eskualdean eta stop kodon goiztiarrak sartzen dituztela ikusi da, mezulari RNAren splicing-a eraginez eta BRCA2 proteina huts egitea eraginez.47,48
BRCA1 eta BRCA2 PVak proteina domeinu eta geneen OCCR eta BCCR ustezko eskualdeetan ere mapatu genituen. Eskualde hauek Rebbeck et al.-ek obulutegiko eta bularreko minbizia garatzeko arrisku-eremu gisa deskribatu zituzten, hurrenez hurren.49 Hala ere, lerro germinalaren aldaeren kokapenaren eta bularreko edo obulutegiko minbiziaren arriskuaren arteko loturari buruzko ebidentzia eztabaidagarria da oraindik.28,50-52 Gure populazioan, BRCA1 PVak nagusiki BCCR eskualdean kokatuta zeuden, eta BRCA2 PVak, berriz, OCCR eskualdean. Hala ere, ez genuen inolako loturarik aurkitu ustezko OCCR eta BCCR eskualdeen eta BC ezaugarrien artean. Hori BRCA1/2 mutazioak dituzten paziente kopuru mugatuaren ondorioz izan daiteke. Proteina domeinuaren ikuspegitik, BRCA1 PVak proteina osoan zehar banatzen dira, eta BRCA2 alterazioak lehentasunez BRC errepikapen domeinuan aurkitzen dira.
Azkenik, BCren ezaugarri klinikopatologikoak BRCA1/2 PV-rekin lotu genituen. Sartutako paziente kopuru mugatua dela eta, Ki-67 eta tumore-graduaren arteko korrelazio esanguratsu bat baino ez genuen aurkitu. Ki-67ren ebaluazioa eta interpretazioa eztabaidagarria den arren, ziurra da ugalketa-tasa altuak gaixotasunaren berragerpen arrisku handiagoarekin eta biziraupen txikiagoarekin lotuta daudela. Gaur egun, "altua" eta "baxua" den Ki-67 bereizteko muga % 20koa da. Hala ere, atalase hau ez da aplikatzen gure BRCA1/2 mutazioko pazienteen populazioari, zeinak % 25eko Ki-67 balio mediana baitu. Ki-67 tasa altuen joera hau gure B luminalaren eta TNBC kohorteen prebalentziagatik azal daiteke, eta horietan A luminalaren tumore gutxi zeuden. Hala ere, ebidentzia batzuek iradokitzen dute Ki-67 muga altuago batek (% 25-30) hobeto estratifika ditzakeela pazienteak haien pronostikoaren arabera.53,54 Gure analisiaren emaitzetatik, ez da harritzekoa korrelazio esanguratsua egotea. Ki-67 altuaren eta graduen artean gertatzen da eta honako hauek agertzen dira: BRCA1 PV. Izan ere, BRCA1ekin lotutako tumoreak TNBC-ren tipikoak dira eta ezaugarri oldarkorragoak erakusten dituzte.16,17
Ondorioz, ikerketa honek Siziliako ekialdeko BC kohorte batean BRCA1/2-ren mutazio-egoerari buruzko txostena eskaintzen du. Oro har, gure aurkikuntzak bat datoz aurretik zegoen ebidentziarekin, bai mutazioen prebalentziari bai BC-ren ezaugarri kliniko-patologikoei dagokienez. BRCA1/2 mutazioa duten BC pazienteen populazio handiagoetan ikerketa gehiago egitea beharrezkoa da, hala nola mutazio-analisi hedatu multigenoma erabiliz, BRCA1/2 baino bereizgarriak eta maiztasun txikiagoa duten PV-en presentzia ebaluatzeko. Horri esker, mutazio genetikoak direla eta minbizia izateko arrisku handiagoa duten subjektu kopurua gero eta handiagoa identifikatu eta behar bezala kudeatu ahal izango da.
Pazienteek baimen informatua sinatu zutela baieztatu genuen beren tumore-laginak ikerketa-helburuetarako anonimo gisa askatzeko. Paziente guztiek idatzizko baimen informatua sinatu zuten Helsinkiko Adierazpenaren arabera. AOU Policlinico "G.Rodolico - S.Marco"-ren politikaren arabera, ikerketa hau berrikuspen etikotik salbuetsita zegoen, BRCA1/2 analisia praktika klinikoaren arabera egin zelako eta paziente guztiek idatzizko baimen informatua eman zutelako. Pazienteek, halaber, beren datuak ikerketa-helburuetarako erabiltzea onartzen dute.
Eskerrak eman nahi dizkiogu Paolo Vigneri irakasleari, Etika Batzordeak eskatutako bularreko minbizia duten pazienteen zainketan emandako laguntzagatik.
Federica Martoranak Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis eta Pfizer-en ohorezko ordainsariak jaso ditu. Gainerako egileek ez dute interes-gatazkarik adierazi lan honetan.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, etab. 2020ko Minbiziaren Estatistika Globala: GLOBOCANek 36 minbizi motaren intzidentzia eta hilkortasuna kalkulatzen ditu mundu osoko 185 herrialdetan. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249. doi: 10.3322/caac.21660