Javascript er óvirkt í vafranum þínum. Sumir eiginleikar þessarar vefsíðu virka ekki þegar JavaScript er óvirkt.
Skráðu þig með þínum eigin upplýsingum og lyfi sem þú hefur áhuga á og við munum para upplýsingarnar sem þú gefur upp við greinar í umfangsmiklum gagnagrunni okkar og senda þér PDF eintak tafarlaust í tölvupósti.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzellal University of C1linical og Experience Department of C1linical Manzella Catania, Catania, 95123, Ítalía;2 Center for Experimental Oncology and Hematology, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Ítalía; 3 Medical Oncology, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Ítalíu; 4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Ítalíu; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Ítalía; 6 Líf- og læknisfræði- og líftæknideild, Háskólinn í Catania, Læknisfræðileg erfðafræði, Catania, Ítalía, 95123; 7 Oasi rannsóknarstofnunin-IRCCS, Troina, 94018, Ítalía Samskipti: Stefania Stella, sími +39 095 378 1946, netfang [email protected]; [email protected] Tilgangur: Stökkbreytingar í kímlínu BRCA1 og BRCA2 og staðfest brjóstakrabbamein (BC), eggjastokkakrabbamein (OC) og annað sem tengist ævilangri áhættu á krabbameini. Prófanir á BRCA geninu eru lykilatriði til að meta einstaklingsbundna áhættu, sem og til að finna forvarnaraðferðir hjá heilbrigðum berjum og sníða meðferðir að krabbameinssjúklingum. Tíðni BRCA1 og BRCA2 breytinga er mjög mismunandi eftir landfræðilegum svæðum og þó að gögn séu til um sjúkdómsvaldandi afbrigði BRCA í fjölskyldum á Sikiley, þá vantar rannsóknir sem beinast sérstaklega að hópum á Austur-Sikiley. Markmið rannsóknarinnar var að kanna tíðni og dreifingu sjúkdómsvaldandi breytinga á kímlínu BRCA í hópi BC sjúklinga frá Austur-Sikiley og meta tengsl þeirra við tiltekna BC eiginleika með því að nota næstu kynslóðar raðgreiningu. Tilvist breytinga tengdist æxlisgráðu og frumufjölgunarstuðli. NIÐURSTÖÐUR: Í heildina höfðu 35 sjúklingar (9%) sjúkdómsvaldandi afbrigði BRCA, 17 (49%) í BRCA1 og 18 (51%) í BRCA2. Breytingar á BRCA1 eru algengar hjá sjúklingum með þrefalt neikvætt BC, en stökkbreytingar í BRCA2 eru algengari hjá sjúklingum með BC í lungum. Samanborið við Þeir sem ekki voru með BRCA1 afbrigði höfðu marktækt hærri æxlisgráðu og frumufjölgunarstuðul. Niðurstöður: Niðurstöður okkar veita yfirlit yfir stöðu BRCA stökkbreytinga hjá sjúklingum með brjóstakrabbamein frá austurhluta Sikileyjar og staðfesta hlutverk NGS greiningar við að greina sjúklinga með arfgengan brjóstakrabbamein. Í heildina eru þessi gögn í samræmi við fyrri sannanir sem styðja BRCA skimun fyrir rétta forvörn og meðferð krabbameins hjá stökkbreytingarberum.
Brjóstakrabbamein er algengasta illkynja æxlið í heiminum og banvænasta krabbameinið hjá konum.1 Líffræðilegir eiginleikar sem ákvarða horfur og klíníska hegðun brjóstakrabbameins hafa verið rannsakaðir ítarlega og að hluta til skýrðir með tímanum. Reyndar eru nokkrir staðgöngumerki notaðir til að flokka brjóstakrabbamein í mismunandi sameinda undirgerðir. Þeir eru estrógen (ER) og/eða prógesterón viðtaki (PgR), mögnun á vaxtarþáttarviðtaka 2 hjá mönnum (HER2), fjölgunarvísitala Ki-67 og æxlisgráðu (G).2 Samsetning þessara breyta leiddi til eftirfarandi flokka brjóstakrabbameins: 1) Lumínal æxli, sem sýndu ER og/eða PgR tjáningu, námu 75% brjóstakrabbameina. Þessi æxli voru frekar skipt í Lumínal A, þegar Ki-67 var undir 20% og HER2 neikvætt, og Lumínal B, þegar Ki-67 var jafnt eða yfir 20% og í viðurvist HER2 mögnunar, óháð fjölgunarvísitölu; 2) HER2+ æxli sem eru ER og PgR neikvæð en sýna HER2 mögnun. Þessi hópur telur 10% allra brjóstakrabbameina; 3) Þrefalt neikvætt brjóstakrabbamein (TNBC), sem sýnir ekki ER og PgR tjáningu og HER2 mögnun, telur um 15% brjóstakrabbameina.2-4
Meðal þessara undirgerða krabbameins í ristli eru æxlisgráður og fjölgunarvísitala þversniðs lífmerki sem tengjast beint og sjálfstætt árásargirni æxla og horfum.5,6
Auk fyrrnefndra líffræðilegra eiginleika hefur hlutverk arfgengra erfðabreytinga sem leiða til þróunar brjóstakrabbameins orðið sífellt mikilvægara á undanförnum árum.7 Um það bil eitt af hverjum 10 brjóstakrabbameinum erfist vegna breytinga á kímlínu í tilteknum genum.8 Tvær stórar faraldsfræðilegar rannsóknir sem tóku þátt í meira en 180.000 konum hafa nýlega bent á hóp átta gena (þ.e. ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C og RAD51D) sem aðallega bera ábyrgð á arfgengum brjóstakrabbameini. Meðal þessara gena sýndu BRCA1 og BRCA2 (hér eftir nefnt BRCA1/2) sterkustu fylgnina við þróun brjóstakrabbameina.9-12 Reyndar auka stökkbreytingar í kímlínu BRCA1/2 verulega lífstíðaráhættu á brjóstakrabbameini sem og öðrum illkynja sjúkdómum, þar á meðal eggjastokkum, blöðruhálskirtli, brisi, ristli og sortuæxli. Frá 13 til 80 ára aldri er samanlögð tíðni brjóstakrabbameins 72% hjá konum með BRCA1 sjúkdómsvaldandi afbrigði (PV) og 69% hjá konum með BRCA2. PV.14
Athyglisvert er að nýleg rit bendir til þess að áhætta á krabbameini í ristli (BC) sé háð tegund lungnaþekju. Reyndar, samanborið við sjúkdómsvaldandi styttingarafbrigði, eru áberandi missense afbrigði, sérstaklega í BRCA1 geninu, tengd minni hættu á krabbameini í ristli, sérstaklega hjá eldri konum.15
Tilvist BRCA1 eða BRCA2 PV tengdist mismunandi líffræðilegum og klínískum og meinafræðilegum einkennum.16,17 BRCA1-tengd æxli eru yfirleitt klínískt árásargjörn, illa aðgreind og mjög fjölgandi. Þessi æxli eru yfirleitt þrefalt neikvæð og koma fram snemma. Æxli sem koma fram hjá sjúklingum með BRCA2 stökkbreytingu sýna yfirleitt miðlungs til vel aðgreinda gráður og breytilegan fjölgunarstuðul. Þessi æxli eru algengari í lumen B og koma venjulega fyrir hjá eldri fullorðnum.16-18 Athyglisvert er að stökkbreytingar í BRCA1 og BRCA2 auka næmi fyrir tilteknum meðferðum, þar á meðal platínu söltum og markvissum lyfjum eins og pólý(ADP-ríbósa) pólýmerasa hemlum (PARPi).19,20
Undanfarin ár hefur innleiðing næstu kynslóðar raðgreiningar (NGS) í klínískri starfsemi gert vaxandi fjölda sjúklinga með krabbamein í ristli (BC) kleift að gangast undir sameindapróf fyrir krabbameinsnæmisheilkenni, þar á meðal BRCA1/2.21 Samhliða því eru skilgreiningar byggðar á nákvæmum viðmiðum varðandi fjölskyldusögu, lýðfræðilega og klíníska sjúkdómsfræðilega eiginleika notaðar til að bera betur kennsl á einstaklinga sem verðugir BRCA1/2 prófunar.22,23 Í þessu samhengi eru vísbendingar að safnast upp um BRCA1/2 skimun í tilteknum hópum, sem undirstrikar mun á landfræðilegum svæðum.24–27 Þó að skýrslur séu til um BC hópinn á vesturhluta Sikileyjar eru færri gögn tiltæk um BRCA1/2 skimun í íbúum á austurhluta Sikileyjar.28,29
Við lýsum hér niðurstöðum skimunar fyrir BRCA1/2 kímlínufrumum hjá sjúklingum með breska kólesterólið frá austurhluta Sikileyjar og tengim frekar tilvist BRCA1- eða BRCA2 stökkbreytinga við helstu klínísk-meinafræðilega eiginleika þessara æxla.
Afturskyggn rannsókn var framkvæmd við „Miðstöð tilraunakrabbameins- og blóðsjúkdómafræði“ á Policlinico-sjúkrahúsinu í Rodolico – San Marco í Catania. Frá janúar 2017 til mars 2021 var alls 455 sjúklingum með brjóstakrabbamein, eggjastokkakrabbamein, sortuæxli, briskrabbamein eða blöðruhálskirtilskrabbamein vísað á sameindagreiningarstofu okkar vegna BRCA/2 erfðaprófa. Þessi rannsókn var framkvæmd í samræmi við yfirlýsingu Helsinki-yfirlýsingarinnar og allir þátttakendur veittu skriflegt upplýst samþykki fyrir sameindagreiningu.
Vefjafræðilegir og líffræðilegir eiginleikar (ER, PgR, HER2 staða, Ki-67 og gráða) krabbameinsæxla voru metnir úr kjarnavefjasýnum eða skurðaðgerðarsýnum, þar sem aðeins voru teknir tillit til árásargjarnra æxlisþátta. Byggt á þessum einkennum voru krabbameinsæxli flokkuð sem hér segir: luminal A (ER+ og/eða PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ og/eða PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER og/eða PgR+, HER2+), HER2+ (ER og PgR-, HER2+) eða þrefalt neikvæð (ER og PgR-, HER2-).
Áður en staða stökkbreytinga í BRCA1 og BRCA2 var metin, framkvæmdi fjölfaglegt teymi, þar á meðal krabbameinslæknir, erfðafræðingur og sálfræðingur, erfðafræðilega ráðgjöf um æxli fyrir hvern sjúkling til að ákvarða hvort BRCA1 og/eða BRCA1 væri til staðar, eða fyrir einstaklinga með mikla áhættu á blöðruhálskirtli í BRCA2 geninu. Val á sjúklingum var framkvæmt samkvæmt leiðbeiningum Ítalska krabbameinslæknafélagsins (AIOM) og staðbundnum ráðleggingum frá Sikiley.30,31 Þessi viðmið eru meðal annars: (i) fjölskyldusaga um þekktar sjúkdómsvaldandi afbrigði í næmisgenum (td BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) karlar með krabbamein í brjóstum; (iii) þeir sem eru með krabbamein í brjóstum og krabbamein í lok leggöngum; (iv) konur með krabbamein í brjóstum <36 ára, millibilsbundið krabbamein í brjóstum <60 ára eða tvíhliða krabbamein í brjóstum <50 ára; (v) persónuleg sjúkrasaga um krabbamein í brjóstum <50 ára og að minnsta kosti einn ættingi af fyrsta stigi: (a) krabbamein í brjóstum < 50 ára; (b) krabbamein í brjóstum án slíms og ekki á mörkum krabbameins í lok leggöngum, á öllum aldri; (c) krabbamein í brjóstum í báðum áttum; (d) krabbamein í brjóstum hjá körlum; (e) briskrabbamein; (f) blöðruhálskirtilskrabbamein; (vi) tveggja eða fleiri persónulegar sögur um briskirtilsbólgu > 50 ár og fjölskyldusaga um briskirtilsbólgu, briskirtilsbólgu eða briskrabbamein hjá ættingjum sem eru fyrsta stigs ættingir hvor af öðrum (þar með taldar ættingjar sem viðkomandi er fyrsta stigs ættingi með); (vii) persónulegar sögur um briskirtilsbólgu og að minnsta kosti eins fyrsta stigs ættingja: (a) briskirtilsbólgu <50 ár; (b) ekki til staðar briskirtilsbólgu; (c) báðir briskirtilsbólgu; (d) briskirtilsbólgu hjá körlum; (vii) kona með alvarlegt briskirtilsbólgu af háu stigi.
20 ml útlægt blóðsýni var tekið úr hverjum sjúklingi og safnað í EDTA rör (BD Biosciences). Erfðaefni var einangrað úr 0,7 ml heilblóðsýnum með því að nota QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Ítalíu) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda og sent í gegnum Qubit® 3.0 flúrljómunarmæli (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Bandaríkin). Framkvæmdu magngreiningu. Markmiðsauðgun og undirbúningur bókasafns er framkvæmdur með Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, tilbúið til að vera hlaðið inn í Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit fyrir sjálfvirka undirbúning bókasafns samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Kitið samanstendur af tveimur fjölþættum PCR grunnpúlsum sem hægt er að nota til að rannsaka öll BRCA1 (NM_007300.3) og BRCA2 (NM_000059.3) gen. Í stuttu máli voru 15 µL af hverju þynntu sýnis-DNA (10 ng) bætt við strikamerktar plötur fyrir undirbúning bókasafns og öll hvarfefni og rekstrarvörur voru hlaðin inn í Ion Chef™ tækið. Sjálfvirk undirbúningur bókasafns og strikamerkt sýnisbókasafnssafnsöfnun var síðan framkvæmd á Ion Chef™ tækinu. Fjöldi undirbúinna bókasafna var síðan metinn með Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Bandaríkjunum) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda. Að lokum eru bókasöfn sameinuð í jafnmólhlutföllum í Ion Chef™ bókasafnssýnishornsrörum (strikamerktar rör) og sett á Ion Chef™ tækið. Raðgreining var framkvæmd með Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) tæki (Thermo Fisher Scientific) sem notaði Ion 510 örgjörva (Thermo Fisher Scientific). Gagnagreining var framkvæmd með Amplicon Suite (SmartSeq srl) og Ion Reporter hugbúnaði.
Öll afbrigðisnafngiftir fylgdu gildandi leiðbeiningum Human Genome Variation Consortium, sem eru aðgengilegar á netinu (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Klínísk þýðing BRCA1/2 afbrigða var skilgreind með flokkun International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) og með því að skoða mismunandi gagnagrunna eins og ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD og UMD. Flokkunin inniheldur fimm mismunandi áhættuflokka: góðkynja (flokkur I), líklega góðkynja (flokkur II), afbrigði með óvissa þýðingu (VUS, flokkur III), líklega sjúkdómsvaldandi (flokkur IV) og sjúkdómsvaldandi (flokkur V). VarSome greindi einnig áhrif stökkbreytinga á próteinbyggingu og virkni, sem er upplýsandi tól með aðgangi að 30 gagnagrunnum.32
Til að úthluta mögulegri klínískri þýðingu fyrir hvert VUS voru eftirfarandi tölvureiknirit fyrir próteinspá notuð: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) og Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Afbrigði sem flokkuð voru sem 1. og 2. flokkur voru talin villt gerð.
Sanger-raðgreining staðfesti tilvist hvers sjúkdómsvaldandi afbrigðis. Í stuttu máli var par af sértækum praimerum hannað fyrir hvert greint afbrigði með því að nota BRCA1 og BRCA2 genaviðmiðunarraðir (NG_005905.2, NM_007294.3 og NG_012772.3, NM_000059.3, talið í sömu röð). Því var markviss PCR framkvæmd og síðan Sanger-raðgreining.
Sjúklingar sem reyndust neikvæðir fyrir BRCA1/2 geninu voru prófaðir með margföldu lígunarháðri rannsakaamgnun (MLPA) samkvæmt leiðbeiningum framleiðanda til að meta hvort stórar erfðabreytingar (LGR) væru til staðar. Í stuttu máli eru DNA sýni afnáttúruð og allt að 60 BRCA1 og BRCA2 genasértækar rannsakar eru notaðar, þar sem hver greinir ákveðna DNA röð sem er um það bil 60 núkleótíð að lengd. Rannsakaamgnunarafurðir, sem samanstanda af einstöku setti af PCR amplikónum, voru síðan greindar með háræðarafdrætti og með Cofalyser.Net hugbúnaði í tengslum við viðeigandi lotusértækar Cofalyser töflur (www.mrcholland.com).
Valdar klínísk-meinafræðilegar breytur (vefjafræðilegt stig og Ki-67% fjölgunarvísitala) tengdust nærveru BRCA1/2 PV, reiknað með Prism hugbúnaði útgáfu 8.4 og Fishers nákvæmnisprófi þar sem gert var ráð fyrir að p-gildi <0,05 væri marktækt.
Á tímabilinu janúar 2017 til mars 2021 voru 455 sjúklingar skimaðir fyrir stökkbreytingum í BRCA1/2 erfðaefni. Stökkbreytingaprófanir voru framkvæmdar á tilraunamiðstöð Policlinico-sjúkrahússins fyrir krabbameinslækningar og blóðsjúkdómafræði. Samkvæmt sikileyskum leiðbeiningum (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), í Rodolico í Catania – San Marco voru 389 sjúklingar með brjóstakrabbamein, 37 eggjastokkakrabbamein, 16 briskrabbamein, 8 blöðruhálskirtilskrabbamein og 5 sortuæxli. Dreifing sjúklinga eftir tegund krabbameins og niðurstöðum greiningarinnar er sýnd á mynd 1.
Mynd 1 sýnir flæðirit sem sýnir yfirlit yfir rannsóknina. Sjúklingar með brjóstakrabbamein, sortuæxli, briskirtils-, blöðruhálskirtils- eða eggjastokkaæxli voru prófaðir fyrir stökkbreytingum í BRCA1 og BRCA2 genum.
Skammstafanir: PV, sjúkdómsvaldandi afbrigði; VUS, afbrigði af óvissri þýðingu; WT, villtgerð BRCA1/2 röð.
Við einbeittu rannsóknum okkar sérstaklega að hópum með brjóstakrabbamein. Miðgildi aldurs sjúklinganna var 49 ár (á bilinu 23-89) og voru aðallega konur (n = 376, eða 97%).
Af þessum einstaklingum höfðu 64 (17%) BRCA1/2 stökkbreytingar og voru allir konur. Þrjátíu og fimm (9%) höfðu PV og 29 (7,5%) höfðu VUS. Sautján (48,6%) af 35 sjúkdómsvaldandi afbrigðum komu fyrir í BRCA1 og 18 (51,4%) í BRCA2, en 5 VUS komu fyrir í BRCA1 (17,2%) og 24 (82,8%) í BRCA2 (Myndir 1 og 2). LGR var ekki til staðar í MLPA greiningunni.
Mynd 2. Greining á BRCA1 og BRCA2 stökkbreytingum hjá 389 sjúklingum með brjóstakrabbamein. (A) Dreifing sjúkdómsvaldandi afbrigða (PV) (rautt), afbrigða með óvissa þýðingu (VUS) (appelsínugult) og WT (blátt) hjá 389 sjúklingum með brjóstakrabbamein; (B) 389 sjúklingar með brjóstakrabbamein Þrjátíu og fimm (9%) höfðu sjúkdómsvaldandi afbrigði BRCA1/2 (PV). Meðal þeirra voru 17 (48,6%) berar BRCA1 PV (dökkrautt) og 18 (51,4%) voru berar BRCA2 (ljósrautt); (C) 29 (7,5%) af 389 einstaklingum báru VUS, 5 (17,2%) BRCA1 gen (dökk appelsínugult) og 24 (82,8%) BRCA2 gen (ljós appelsínugult).
Skammstafanir: PV, sjúkdómsvaldandi afbrigði; VUS, afbrigði af óvissri þýðingu; WT, villtgerð BRCA1/2 röð.
Næst rannsökuðum við algengi sameindagerða BC hjá sjúklingum með BRCA1/2 PV. Dreifingin innihélt 2 (5,7%) sjúklinga með A-frumuhimnu, 15 (42,9%) með B-frumuhimnu, 3 (8,6%) með B-HER2+ frumuhimnu, 2 (5,7%) með HER2+ frumuhimnu og 13 (37,1%) með TNBC. Meðal BRCA1-jákvæðra sjúklinga voru 5 (29,4%) með B-frumuhimnu BC, 2 (11,8%) með HER2+ sjúkdóm og 10 (58,8%) með TNBC. Æxli án BRCA1 stökkbreytinga voru annað hvort með A-frumuhimnu eða B-HER2+ frumuhimnu (Mynd 3). Í BRCA2-jákvæðum undirhópi voru 10 (55,6%) æxli með B-frumuhimnu, 3 (16,7%) með B-HER2+ frumuhimnu, 3 (16,7%) með TNBC og 2 (11,1%) með A-frumuhimnu (Mynd 3). 3). Engin HER2+ æxli voru til staðar í þessum hópi. Þannig eru BRCA1 stökkbreytingar algengar hjá sjúklingum með TNBC, en breytingar á BRCA2 eru ríkjandi hjá einstaklingum með B-holrými.
Mynd 3 Tíðni undirgerða brjóstakrabbameins hjá sjúklingum með sjúkdómsvaldandi afbrigði í BRCA1 og BRCA2. Súlurit sem sýna dreifingu BRCA1- (dökkrauð) og BRCA2- (ljósrauð) PV meðal sameindaundirgerða brjóstakrabbameinssjúklinga. Tölur sem gefnar eru upp í hverjum kassa tákna hlutfall sjúklinga með BRCA1 og BRCA2 PV fyrir hverja undirgerð brjóstakrabbameins.
Skammstafanir: PV, sjúkdómsvaldandi afbrigði; HER2+, jákvætt fyrir vaxtarþáttarviðtaka 2 hjá mönnum; TNBC, þrefalt neikvætt brjóstakrabbamein.
Í kjölfarið metum við gerð og staðsetningu gena BRCA1 og BRCA2 PV. Í BRCA1 PV sáum við 7 stakar núkleótíðafbrigði (SNV), 6 eyðingar, 3 tvítekningar og 1 innsetningu. Aðeins ein stökkbreyting (c.5522delG) er ný uppgötvun. Algengasta BRCA1 PV sem greindist hjá báðum einstaklingum var c.5035_5039delCTAAT. Þessi breyting felur í sér eyðingu fimm núkleótíða (CTAAT) í BRCA1 exoni 15, sem leiðir til þess að amínósýrunni leucíni er skipt út fyrir týrósín við kóðon 1679, og vegna þýðingarrammabreytingar með spáðum öðrum stöðvunarkóða leiðir það til ótímabærrar styttingar á próteinum. Allar aðrar breytingar greinast aðeins í einu tilviki. Athyglisvert er að ein af tilkynntu PV-unum var staðsett í samstöðusvæði splice site (c.4357+1G>T) (Tafla 1).
Hvað varðar BRCA2 PV, þá sáum við 6 eyðingar, 6 SNV og 2 tvítekningar. Engar af þeim breytingum sem fundust eru nýjar. Þrjár stökkbreytingar komu aftur fram í okkar þýði, c.428dup og c.8487+1G>A sem sáust hjá 3 einstaklingum, og síðan c.5851_5854delAGTT sem fannst í tveimur tilfellum. Breytingin c.428dup felur í sér endurtekningu á C í exoni 5 í BRCA2, sem talið er að kóði fyrir styttu, óvirku próteini. Stökkbreytingin c.8487+1G>A á sér stað í innri hluta BRCA2 innri 19 (± 1,2) og hefur áhrif á samhljóða röð splæsingar, sem leiðir til breyttrar splæsingar sem leiðir til óeðlilegs eða fjarverandi próteins. Sjúkdómsvaldandi afbrigðið c.5851_5854delAGTT er vegna 4 núkleótíða eyðingar frá núkleótíðstöðum 5851 til 5854 í kóðandi exoni 10 í BRCA2 geninu og leiðir til... þýðingarrammabreyting með spáðum öðrum stöðvunarkóða (p.S1951WfsTer). Eins og áður hefur verið greint frá, greindust báðar breytingarnar c.631G>A og c.7008-2A>T hjá sama sjúklingi.34 Fyrsta stökkbreytingin felur í sér að adenosín (A) er skipt út í BRCA2 exoni 7 fyrir núkleótíð sem inniheldur gúanín (G) sem leiðir til breytinga á valíni í ísóleucín við kóða 211. Ísóleucín amínósýra er amínósýra með mjög svipaða eiginleika. Þessi breyting hefur áhrif á eðlilega mRNA splæsingu. Önnur afbrigðið er staðsett í innri svæði og leiðir til tvöfaldrar A í týmín (T) skiptingar fyrir exoni 13 í geninu sem kóðar fyrir BRCA2. Breytingin c.7008-2A>T getur myndað margar umrit af mismunandi lengd. Ennfremur, í hópnum af BRCA2 PV, voru 4 af 18 breytingum (22,2%) innri.
Við kortlögðum síðan skaðlegar stökkbreytingar í BRCA1/2 í virkum svæðum og próteinbindandi svæðum (Mynd 4). Í BRCA1 geninu voru 50% af PV staðsettar í brjóstakrabbameinsklasasvæðinu (BCCR), en 22% stökkbreytinganna voru staðsettar í eggjastokkakrabbameinsklasasvæðinu (OCCR) (Mynd 4A). Í BRCA2 PV voru 35,7% afbrigðanna staðsettar í BCCR svæðinu og 42,8% stökkbreytinganna voru staðsettar í OCCR (Mynd 4B). Næst metum við staðsetningu PV innan próteinlénanna BRCA1 og BRCA2. Fyrir BRCA1 próteinið fundum við þrjár PV í lykkju- og spinnlaga lénunum og tvær stökkbreytingar í BRCT léninu (Mynd 4A). Fyrir BRCA2 próteinið kortlögðust 4 PV á BRC endurtekningarlénið, en 3 innri og 3 útri breytingar greindust í oligo/olígósakkaríðbindandi (OB) og turn (T) lénunum (Mynd 4B).
Mynd 4 Skýringarmynd af BRCA1 og BRCA2 próteinum og staðsetningu sjúkdómsvaldandi afbrigða. Þessi mynd sýnir dreifingu sjúkdómsvaldandi afbrigða BRCA1 (A) og BRCA2 (B) hjá sjúklingum með brjóstakrabbamein. Stökkbreytingar í útlægum frumubreytingum eru sýndar í bláu, en innlægar afbrigði eru sýnd í appelsínugulu. Hæð súlunnar táknar fjölda tilfella. BRCA1 og BRCA2 próteinin og virkni þeirra eru tilgreind. (A) BRCA1 próteinið inniheldur lykkjueiningu (RING) og kjarnastaðsetningarröð (NLS), spinnlaga einingu, SQ/TQ klasaeiningu (SCD) og BRCA1 C-enda einingu (BRCT). (B) BRCA2 próteinið inniheldur átta BRC endurtekningar, DNA-bindandi einingu með helix einingu (Helical), þrjár oligonúkleótíð/olígósakkaríð-bindandi (OB) fellingar, turneiningu (T) og NLS á C-hliðinni. Svæði sem kallast brjóstakrabbameinsklasasvæðið (BCCR) og eggjastokkakrabbameinsklasasvæðið (OCCR) eru sýnd neðst. *Táknar stökkbreytingar sem ákvarða stöðvun. kódonar.
Við rannsökuðum síðan klínísk meinafræðileg einkenni BC sem gætu tengst nærveru BRCA1/2 PV. Heildar klínískar gögn voru tiltæk fyrir 181 BRCA1/2-neikvæða sjúklinga (ekki BRCA1/2-bera) og alla beri (n = 35). Fylgni var milli hraða æxlisfjölgunar og stigs æxlis.
Við reiknuðum dreifingu Ki-67 út frá miðgildi hópsins okkar (25%, bil <10-90%). Þátttakendur með Ki-67 < 25% voru skilgreindir sem „lágt Ki-67“, en einstaklingar með gildi ≥ 25% voru taldir „hátt Ki-67“. Marktækur munur (p<0,01) fannst á milli þeirra sem ekki voru með BRCA1 PV berandi og þeirra sem voru með BRCA1 PV berandi (Mynd 5A).
Mynd 5 Tengsl Ki-67 við dreifingu á stigum hjá konum með brjóstakrabbamein með og án BRCA1 og BRCA2 PV. (A) Kassarit sem sýnir miðgildi Ki-67 gilda hjá 181 sjúklingi með brjóstakrabbamein án burðarefnis samanborið við sjúklinga með BRCA1 (18) eða BRCA2 (17) PV. P gildi undir 0,5 voru talin tölfræðilega marktæk. (B) Súlurit sem sýnir flokkun sjúklinga með brjóstakrabbamein í vefjafræðilega stigahópa (G2 og G3) eftir stöðu BRCA1 og BRCA2 stökkbreytinga (WT einstaklingar, BRCA1 og BRCA2 PV berar).
Á sama hátt skoðuðum við hvort æxlisgráðu tengdist nærveru BRCA1/2 PV. Þar sem G1 BC var ekki til staðar í okkar þýði, skiptum við sjúklingunum í tvo hópa (G2 eða G3). Í samræmi við Ki-67 niðurstöðurnar leiddi greiningin í ljós tölfræðilega marktæka fylgni milli æxlisgráðu og BRCA1 stökkbreytingar, með hærra hlutfalli G3 æxla hjá BRCA1 berum samanborið við þá sem ekki voru með BRCA1 (p < 0,005) (Mynd 5B).
Framfarir í DNA-raðgreiningartækni hafa gert kleift að ná fordæmalausum árangri í erfðaprófunum á BRCA1/2, með mikilvægum afleiðingum fyrir sjúklinga með fjölskyldusögu um krabbamein. Til þessa hafa um það bil 20.000 BRCA1/2 afbrigði verið greind og flokkuð samkvæmt American Society of Medical Genetics 35 og ENIGMA kerfinu. 35,36 Það er vel þekkt að stökkbreytingarsvið BRCA1/2 er mjög mismunandi eftir landfræðilegum svæðum. 37 Innan Ítalíu var tíðni BRCA1/2 PV á bilinu 8% til 37%, sem sýnir mikinn breytileika innan lands. 38,39 Með næstum 5 milljónir íbúa er Sikiley fimmta stærsta svæðið á Ítalíu hvað varðar fjölda íbúa. Þó að gögn séu til um útbreiðslu BRCA1/2 á vesturhluta Sikileyjar eru engar ítarlegar sannanir fyrir því á austurhluta eyjarinnar.
Rannsókn okkar er ein af fyrstu skýrslunum um tíðni BRCA1/2 PV hjá sjúklingum með krabbamein í ristli á austurhluta Sikileyjar.28 Við einbeittum greiningu okkar að krabbameini í ristli, þar sem þetta er langalgengasti sjúkdómurinn í okkar hópi.
Þegar 389 sjúklingar með brjóstakrabbamein voru prófaðir, báru 9% þeirra BRCA1/2 PV frumur, jafnt dreift á milli BRCA1 og BRCA2. Þessar niðurstöður eru í samræmi við þær sem áður hafa verið greindar frá í ítalska þýðinu.28 Athyglisvert er að 3% (13/389) í hópnum okkar voru karlar. Þetta hlutfall er hærra en búist var við fyrir brjóstakrabbamein hjá körlum (1% allra brjóstakrabbameina),40 sem endurspeglar val okkar á þýðum út frá áhættu á stökkbreytingum í BRCA1/2. Hins vegar þróaði enginn þessara karla með sér BRCA1/2 PV, þannig að þeir voru frambjóðendur til frekari sameindagreiningar til að útiloka tilvist sjaldgæfari stökkbreytinga eins og PALB2, RAD51C og D, meðal annarra. Afbrigði af óvissu þýðingu fundust hjá 7% einstaklinga þar sem BRCA2 VUS var greinilegt. Jafnvel þessi niðurstaða er í samræmi við fyrirliggjandi gögn.28,41,42
Þegar við greindum dreifingu sameindagerða BC hjá konum með BRCA1/2 stökkbreytingu staðfestum við þekkt tengsl milli TNBC og BRCA1 PV (58,8%) og milli luminal B BC og BRCA2 PV (55,6%).16,43 Æxli í luminal A og HER2+ hjá BRCA1 og BRCA2 PV berum eru í samræmi við núverandi gögn í ritrýndum heimildum.16,43
Við einbeitum okkur síðan að gerð og staðsetningu BRCA1/2 PV. Í okkar hópi var algengasta BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT. Þó að Incorvaia o.fl. lýstu ekki þessari afbrigði í sikileyskum hópi sínum, hafa aðrir höfundar greint frá því sem kímlínu BRCA1 PV.34 Nokkrar BRCA1 PV stofnanir fundust í okkar hópi – t.d. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA og c.5266dupC – sem hafa sést á Sikiley.28 Af þessum eru tvær stofnstökkbreytingar BRCA1 (c.181T>G og c.5266dupC) algengar hjá askenasískum gyðingum í Austur- og Mið-Evrópu (Póllandi, Tékklandi), Slóveníu, Austurríki, Ungverjalandi, Hvítrússnesku og Þjóðverjum), 44,45 og var nýlega skilgreind í Bandaríkjunum og Argentínu sem „endurtekin kímlínuafbrigði“ hjá ítölskum sjúklingum með brjóstakrabbamein og ofnæmisviðbrögð. 34c.514del afbrigðið var áður greint hjá 8 brjóstakrabbameinssjúklingum frá norðurhluta Sikileyjar í Palermo og Messína. Athyglisvert er að jafnvel Incorvaia o.fl. fann c.3253dupA afbrigðið í sumum fjölskyldum í Catania.28 Dæmigerðustu BRCA2 PV eru c.428dup, c.5851_5854delAGTT og intronic afbrigðið c.8487+1G>A, sem hafa verið skráð nánar 28 hjá sjúklingi í Palermo með c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV sást í heimilum á norðvesturhluta Sikileyjar, aðallega í Trapani og Palermo héruðunum, en c.5851_5854delAGTT PV sást í heimilum á norðvesturhluta Sikileyjar. 8487+1G>A afbrigðið var algengara hjá einstaklingum frá Messina, Palermo og Caltanissetta.28 Rebbeck o.fl. áður lýst breytingunni á c.5851_5854delAGTT í Kólumbíu.37 Annað BRCA2 PV, c.631+1G>A, hefur fundist hjá sjúklingum með BC og OC frá Sikiley (Agrigento, Siracusa og Ragusa).28 Athyglisvert er að við sáum samhliða tilvist tveggja BRCA2 afbrigða (BRCA2 c.631G>A og c.7008-2A>T) hjá sama sjúklingi, sem við gerðum ráð fyrir að væru aðgreind í cis ham, eins og áður hefur verið greint frá á þennan hátt.34,46 Þessar BRCA2 tvíþættu stökkbreytingar eru vissulega oft sjáanlegar á Ítalíusvæðinu og hafa reynst valda ótímabærum stöðvunarkóðum, sem hafa áhrif á splæsingu boðbera RNA og valda því að BRCA2 próteinið bilar.47,48
Við kortlögðum einnig BRCA1 og BRCA2 PV í hugsanlegum OCCR og BCCR svæðum próteinléna og gena. Rebbeck o.fl. lýstu þessum svæðum sem áhættusvæðum fyrir eggjastokka- og brjóstakrabbamein, talið í sömu röð.49 Hins vegar eru vísbendingar um tengsl milli staðsetningar kímlínuafbrigða og áhættu á brjósta- eða eggjastokkakrabbameini enn umdeildar.28,50-52 Í okkar þýði voru BRCA1 PV aðallega staðsett í BCCR svæðinu, en BRCA2 PV voru aðallega staðsett í OCCR svæðinu. Hins vegar gátum við ekki fundið nein tengsl milli hugsanlegra OCCR og BCCR svæða og BC eiginleika. Þetta gæti verið vegna takmarkaðs fjölda sjúklinga með BRCA1/2 stökkbreytingar. Frá sjónarhóli próteinléns eru BRCA1 PV dreifð um allt próteinið og BRCA2 breytingar finnast helst í BRC endurtekningarléninu.
Að lokum tengdum við klínísk-meinafræðileg einkenni BC við BRCA1/2 PV. Vegna takmarkaðs fjölda sjúklinga sem voru teknir með fundum við aðeins marktæka fylgni milli Ki-67 og æxlisgráðu. Þótt mat og túlkun á Ki-67 sé nokkuð umdeild er víst að há fjölgunartíðni tengist aukinni hættu á endurkomu sjúkdómsins og minnkaðri lifun. Hingað til er viðmiðunarmörkin fyrir að greina á milli „hárrar“ og „lágrar“ Ki-67 20%. Hins vegar á þetta við um sjúklingahóp okkar með BRCA1/2 stökkbreytingu, sem hefur miðgildi Ki-67 gildis upp á 25%. Þessa þróun í háum Ki-67 tíðni má skýra með algengi í hópum okkar með BRCA1/2 og TNBC, þar sem fá æxli í A blöðru voru til staðar. Hins vegar virðast sumar vísbendingar benda til þess að hærri Ki-67 viðmiðunarmörk (25–30%) geti betur flokkað sjúklinga eftir horfum þeirra.53,54 Af niðurstöðum greiningar okkar kemur marktæk fylgni ekki á óvart. Kemur fram milli hárrar Ki-67 og gráðu og nærveru BRCA1. PV. Reyndar eru BRCA1-tengd æxli dæmigerð fyrir TNBC og sýna árásargjarnari einkenni.16,17
Að lokum veitir þessi rannsókn skýrslu um stökkbreytingastöðu BRCA1/2 í krabbameinshópi frá austurhluta Sikileyjar. Í heildina eru niðurstöður okkar í samræmi við fyrirliggjandi vísbendingar, bæði hvað varðar útbreiðslu stökkbreytinga og klínísk-meinafræðileg einkenni í krabbameini. Fleiri rannsóknir á stærri hópum sjúklinga með krabbamein í krabbameini með BRCA1/2 stökkbreytingu, svo sem með því að nota fjölgenamafjölda stökkbreytingagreiningu, eru nauðsynlegar til að meta tilvist PV sem eru ólík og sjaldgæfari en BRCA1/2. Þetta mun gera kleift að bera kennsl á og meðhöndla vaxandi fjölda einstaklinga í aukinni hættu á krabbameini vegna erfðabreytinga.
Við staðfestum að sjúklingar skrifuðu undir upplýst samþykki fyrir því að gefa út æxlissýni sín nafnlaust í rannsóknarskyni. Allir sjúklingar skrifuðu undir skriflegt upplýst samþykki samkvæmt yfirlýsingunni frá Helsinki. Samkvæmt stefnu AOU Policlinico „G.Rodolico – S.Marco“ var þessi rannsókn undanþegin siðferðilegri endurskoðun þar sem BRCA1/2 greiningin var framkvæmd samkvæmt klínískri starfsháttum og allir sjúklingar gáfu skriflegt upplýst samþykki. Sjúklingar samþykkja einnig notkun gagna þeirra í rannsóknarskyni.
Við þökkum prófessor Paolo Vigneri fyrir aðstoð hans við umönnun brjóstakrabbameinssjúklinga eins og siðanefndin bað um.
Federica Martorana greiðir þóknanir frá Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis og Pfizer. Hinir höfundarnir lýsa því yfir að engir hagsmunaárekstrar séu til staðar í þessu verki.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, o.fl. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN áætlar tíðni og dánartíðni 36 krabbameina í 185 löndum um allan heim. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660