Javascript imezimwa kwa sasa kwenye kivinjari chako. Baadhi ya vipengele vya tovuti hii havitafanya kazi javascript imezimwa.
Jisajili na maelezo yako mahususi na dawa maalum ya kuvutia na tutalinganisha taarifa unayotoa na makala katika hifadhidata yetu pana na kukutumia nakala ya PDF mara moja.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Ficheravia 2, 16 Idara ya Tiba ya Maperinze, 16 ya kliniki ya Maperinze na 16 ya kliniki ya Maperinze. Chuo Kikuu cha Catania, Catania, 95123, Italia;2 Kituo cha Oncology ya Majaribio na Hematology, AOU Policlinico "G.Rodolico - San Marco", Catania , 95123, Italia; 3 Oncology ya Matibabu, AOU Policlinico "G. Rodolico - San Marco", Catania, 95123, Italia; 4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italia; 5 Dawa Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italia; 6 Idara ya Sayansi ya Bioteknolojia na Bioteknolojia, Chuo Kikuu cha Catania, Jenetiki ya Kimatibabu, Catania, Italia, 95123; 7Taasisi ya Utafiti ya Oasi-IRCCS, Troina, 94018, Italia Mawasiliano: Stefania Stella, simu +39 095 378 1946, barua pepe [email protected]; [email protected] Kusudi: Mabadiliko ya vijidudu katika BRCA1 na BRCA2 na kuanzisha saratani ya matiti (BC), ovari (OC) na mengine yanayohusiana na hatari ya saratani ya maisha yote. Upimaji wa jeni la BRCA ni muhimu katika kutathmini hatari ya mtu binafsi, na pia kutafuta mbinu za kuzuia kwa wabebaji wenye afya na matibabu ya kurekebisha kwa wagonjwa wa saratani. Kuenea kwa mabadiliko ya BRCA1 na BRCA2 hutofautiana sana katika maeneo ya kijiografia, na ingawa data ipo kuhusu aina tofauti za vijidudu vya BRCA katika familia za Sicilia, tafiti zinazolenga hasa idadi ya watu mashariki mwa Sicily hazipo. Lengo la utafiti wetu lilikuwa kuchunguza matukio na usambazaji wa mabadiliko ya vijidudu vya BRCA katika kundi la wagonjwa wa BC kutoka Sicily mashariki na kutathmini uhusiano wao na sifa maalum za BC kwa kutumia mpangilio wa kizazi kijacho. Uwepo wa mabadiliko ulihusiana na kiwango cha uvimbe na faharisi ya kuenea. MATOKEO: Kwa ujumla, wagonjwa 35 (9%) walikuwa na aina tofauti ya vijidudu vya BRCA, 17 (49%) katika BRCA1 na 18 (51%) katika BRCA2. Mabadiliko ya BRCA1 yameenea kwa wagonjwa wa BC wenye uthabiti mara tatu, ilhali mabadiliko ya BRCA2 yanaenea zaidi kwa wagonjwa wa BC wenye uthabiti. Ikilinganishwa Kwa wasio wabebaji, watu walio na aina tofauti za BRCA1 walikuwa na kiwango cha juu zaidi cha uvimbe na faharisi ya kuenea. Hitimisho: Matokeo yetu yanatoa muhtasari wa hali ya mabadiliko ya BRCA kwa wagonjwa wa BC kutoka mashariki mwa Sicily na yanathibitisha jukumu la uchambuzi wa NGS katika kutambua wagonjwa walio na BC ya kurithi. Kwa ujumla, data hizi zinaendana na ushahidi wa awali unaounga mkono uchunguzi wa BRCA kwa ajili ya kuzuia na kutibu saratani kwa usahihi katika wabebaji wa mabadiliko.
Saratani ya matiti (BC) ndiyo saratani inayoenea zaidi duniani kote na saratani inayoua zaidi wanawake.1 Sifa za kibiolojia zinazoamua ubashiri wa BC na tabia za kimatibabu zimesomwa kwa kina na kuelezwa kwa kiasi fulani baada ya muda. Kwa kweli, alama kadhaa mbadala kwa sasa zinatumika kuainisha BC katika aina tofauti za molekuli. Ni estrojeni (ER) na/au kipokezi cha progesterone (PgR), ukuzaji wa kipokezi cha kipengele cha ukuaji wa epidermal 2 (HER2), faharisi ya ukuaji Ki-67 na daraja la uvimbe (G).2 Mchanganyiko wa vigezo hivi ulibainisha kategoria zifuatazo za BC: 1) Uvimbe wa Luminal, unaoonyesha usemi wa ER na/au PgR, ulichangia 75% ya BC. Uvimbe huu uligawanywa zaidi katika Luminal A, wakati Ki-67 ilikuwa chini ya 20% na HER2 hasi, na Luminal B, wakati Ki-67 ilikuwa sawa na au zaidi ya 20% na mbele ya ukuzaji wa HER2, bila kujali faharisi ya ukuaji; 2) Vivimbe vya HER2+ ambavyo havina ER na PgR lakini vinaonyesha ongezeko la HER2. Kundi hili linachangia 10% ya uvimbe wote wa matiti; 3) Saratani ya matiti yenye hasi mara tatu (TNBC), ambayo haionyeshi usemi wa ER na PgR na ongezeko la HER2, inachangia takriban 15% ya saratani za matiti.2-4
Miongoni mwa aina hizi ndogo za BC, kiwango cha uvimbe na faharisi ya kuenea huwakilisha alama za kibayolojia za sehemu mtambuka ambazo zinahusishwa moja kwa moja na kwa kujitegemea na ukali na ubashiri wa uvimbe.5,6
Mbali na sifa za kibiolojia zilizotajwa hapo juu, jukumu la mabadiliko ya kijenetiki yaliyorithiwa na kusababisha ukuaji wa BC limekuwa muhimu zaidi katika miaka michache iliyopita.7 Takriban uvimbe 1 kati ya 10 wa matiti hurithiwa kutokana na mabadiliko ya vijidudu katika jeni maalum.8 Uchunguzi mkubwa wa magonjwa mawili unaohusisha zaidi ya wanawake 180,000 hivi karibuni umebaini kundi la jeni nane (yaani, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, na RAD51D) ambazo kimsingi ndizo zinazosababisha BC kurithiwa.Miongoni mwa jeni hizi, BRCA1 na BRCA2 (ambazo zitajulikana kama BRCA1/2) zilionyesha uhusiano mkubwa zaidi na ukuaji wa uvimbe wa matiti.9-12 Kwa kweli, mabadiliko ya BRCA1/2 ya vijidudu huongeza hatari ya maisha ya BC pamoja na saratani nyingine, ikiwa ni pamoja na ovari, kibofu, kongosho, utumbo mpana, na melanoma.Kuanzia umri wa miaka 13 hadi 80, matukio ya jumla ya BC ni 72% kwa wanawake walio na aina ya BRCA1 ya vijidudu (PV) na 69% kwa wanawake walio na BRCA2 PV.14
Ikumbukwe kwamba chapisho la hivi karibuni linaonyesha kwamba hatari ya BC inategemea aina ya PV. Kwa kweli, ikilinganishwa na aina zinazosababisha magonjwa kukatwa, aina zisizoeleweka wazi, hasa katika jeni la BRCA1, zinahusishwa na hatari iliyopunguzwa ya BC, hasa kwa wanawake wazee.15
Uwepo wa BRCA1 au BRCA2 PV ulihusishwa na sifa tofauti za kibiolojia na kliniki.16,17 BC zinazohusiana na BRCA1 huwa na ukali wa kimatibabu, hazitofautiani vizuri, na huongezeka sana. Uvimbe huu kwa kawaida huwa hasi mara tatu na una umri mdogo wa kuanza. Uvimbe unaotokea kwa wagonjwa waliobadilishwa BRCA2 kwa kawaida huonyesha daraja za wastani hadi tofauti na fahirisi tofauti za kuongezeka. Uvimbe huu ni wa kawaida zaidi katika lumen B na kwa kawaida hutokea kwa watu wazima.16-18 Ikumbukwe kwamba, mabadiliko katika BRCA1 na BRCA2 huongeza usikivu kwa matibabu maalum, ikiwa ni pamoja na chumvi za platinamu na dawa zinazolengwa kama vile vizuizi vya polimerasi ya poly(ADP-ribose) (PARPi).19,20
Katika miaka michache iliyopita, utekelezaji wa mpangilio wa kizazi kijacho (NGS) katika mazoezi ya kliniki umewezesha idadi inayoongezeka ya wagonjwa wa BC kufanyiwa upimaji wa molekuli kwa dalili za kuathiriwa na saratani, ikiwa ni pamoja na BRCA1/2.21 Wakati huo huo, ufafanuzi unaotegemea vigezo sahihi kuhusu historia ya familia, idadi ya watu, na sifa za kliniki ili kuwatambua vyema watu wanaostahili kupimwa BRCA1/2.22,23 Katika muktadha huu, ushahidi unakusanyika kwenye uchunguzi wa BRCA1/2 katika idadi maalum ya watu, ukionyesha tofauti katika maeneo ya kijiografia.24–27 Ingawa kuna ripoti kuhusu kundi la BC magharibi mwa Sicily, data chache zinapatikana kuhusu uchunguzi wa BRCA1/2 katika idadi ya watu wa mashariki mwa Sicily.28,29
Hapa tunaelezea matokeo ya uchunguzi wa BRCA1/2 ya vijidudu kwa wagonjwa wa BC kutoka Sicily mashariki, na kuhusisha zaidi uwepo wa mabadiliko ya BRCA1 au BRCA2 na sifa kuu za kliniki za uvimbe huu.
Utafiti wa nyuma ulifanywa katika "Kituo cha Oncology ya Majaribio na Hematology" katika Hospitali ya Policlinico.Rodolico - San Marco huko Catania. Kuanzia Januari 2017 hadi Machi 2021, jumla ya wagonjwa 455 wenye saratani ya matiti na ovari, melanoma, kongosho au kibofu walipelekwa kwenye maabara yetu ya uchunguzi wa molekuli kwa ajili ya upimaji wa kijenetiki wa BRCA/2. Utafiti huu ulifanywa kwa mujibu wa Azimio la Helsinki, na washiriki wote walitoa idhini iliyoandikwa kabla ya uchambuzi wa molekuli.
Sifa za kihistolojia na kibiolojia (ER, PgR, hali ya HER2, Ki-67, na daraja) za BC zilipimwa kwa kutumia sampuli za msingi za biopsy au upasuaji, kwa kuzingatia vipengele vya uvimbe vikali pekee. Kulingana na sifa hizi, BC ziliainishwa kama ifuatavyo: luminal A (ER+ na/au PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ na/au PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER na/au PgR+, HER2+), HER2+ (ER na PgR-, HER2+) au hasi tatu (ER na PgR-, HER2-).
Kabla ya kutathmini hali ya mabadiliko ya BRCA1 na BRCA2, timu ya wataalamu mbalimbali ikiwa ni pamoja na mtaalamu wa saratani, mtaalamu wa jeni, na mwanasaikolojia walifanya mashauriano ya jeni ya uvimbe kwa kila mgonjwa ili kubaini uwepo wa BRCA1 na/au BRCA1. au watu binafsi walio na hatari kubwa ya PV katika jeni la BRCA2. Uteuzi wa mgonjwa ulifanywa kulingana na miongozo ya Jumuiya ya Italia ya Oncology ya Matibabu (AIOM) na mapendekezo ya eneo la Sicilian.30,31 Vigezo hivi ni pamoja na: (i) historia ya familia ya aina zinazojulikana za vimelea katika jeni za kuathiriwa (km, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) wanaume walio na BC; (iii) wale walio na BC na OC; (iv) wanawake walio na BC <36 miaka, TNBC <60 miaka, au BC ya pande mbili <50 miaka; (v) historia ya kibinafsi ya matibabu ya BC <50 miaka na angalau jamaa mmoja wa shahada ya kwanza: (a) BC <50 miaka; (b) OC isiyo ya mucinous na isiyo ya mpaka wa umri wowote; (c) BC ya pande mbili; (d) BC ya kiume; (e) saratani ya kongosho; (f) saratani ya tezi dume; (vi) Historia mbili au zaidi za BC > miaka 50 na historia ya familia ya BC, OC, au saratani ya kongosho kwa jamaa ambao ni jamaa wa shahada ya kwanza kwa kila mmoja (ikiwa ni pamoja na jamaa ambao ni jamaa wa shahada ya kwanza); (vii) Historia ya kibinafsi ya OC na angalau jamaa mmoja wa shahada ya kwanza: (a) BC chini ya miaka 50; (b) NOC; (c) BC ya pande mbili; (d) BC ya kiume; (vii) mwanamke mwenye OC ya kiwango cha juu ya serous.
Sampuli ya damu ya pembeni ya mililita 20 ilichukuliwa kutoka kwa kila mgonjwa na kukusanywa kwenye mirija ya EDTA (BD Biosciences). DNA ya jenomu ilitengwa kutoka kwa sampuli za damu nzima ya mililita 0.7 kwa kutumia Kitengo cha Kutenganisha cha QIAsymphony DSP DNA Midi (QIAGEN, Hilden, Italia) kulingana na maagizo ya mtengenezaji na kupitishwa kupitia Fluorometer ya Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Marekani). Fanya upimaji. Uboreshaji wa lengo na maandalizi ya maktaba hufanywa na Mpishi wa Utafiti wa Oncomine™ BRCA, tayari kupakiwa kwenye Kitengo cha Vitendanishi vya Chef cha Ion AmpliSeq™ DL8 kwa ajili ya maandalizi ya maktaba kiotomatiki kulingana na maagizo ya mtengenezaji. Kitengo hiki kina mabwawa mawili ya primer ya PCR ya multiplex ambayo yanaweza kutumika kusoma jeni zote za BRCA1 (NM_007300.3) na BRCA2 (NM_000059.3). Kwa ufupi, 15 µL ya kila DNA ya sampuli iliyopunguzwa (10 ng) iliongezwa kwenye sahani zilizo na msimbopau kwa ajili ya maandalizi ya maktaba na vitendanishi vyote na vifaa vya matumizi vilipakiwa kwenye kifaa cha Ion Chef™. Maandalizi ya maktaba kiotomatiki na mkusanyiko wa sampuli za maktaba zilizo na msimbopau vilifanywa kwenye kifaa cha Ion Chef™. Idadi ya maktaba zilizoandaliwa ilipimwa na Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Marekani) kulingana na maagizo ya mtengenezaji. Hatimaye, maktaba huunganishwa katika uwiano wa usawa katika mirija ya sampuli za maktaba ya Ion Chef™. (mirija yenye msimbo wa pau) na kupakiwa kwenye kifaa cha Ion Chef™. Mfuatano ulifanywa kwa kutumia kifaa cha Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) kwa kutumia Chip ya Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Uchambuzi wa data ulifanywa na Amplicon Suite (SmartSeq srl) na Programu ya Ion Reporter.
Majina yote ya aina mbalimbali yalifuata miongozo ya sasa ya Muungano wa Tofauti za Jenomu za Binadamu, unaopatikana mtandaoni (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Umuhimu wa kimatibabu wa aina za BRCA1/2 ulifafanuliwa kwa kutumia uainishaji wa Muungano wa Kimataifa wa ENIGMA (Mtandao Unaotegemea Ushahidi wa Kutafsiri Aleli za Vimelea vya Muta, https://enigmaconsortium.org/) na kushauriana na hifadhidata tofauti kama vile ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, na UMD. Uainishaji huu unajumuisha kategoria tano tofauti za hatari: isiyo na madhara (kategoria ya I), isiyo na madhara (kategoria ya II), isiyo na madhara ya umuhimu usiojulikana (VUS, kategoria ya III), inayoweza kusababisha magonjwa (kategoria ya IV), na inayosababisha magonjwa (kategoria ya V).VarSome pia walichambua athari za mabadiliko kwenye muundo na utendaji kazi wa protini, chombo chenye taarifa chenye ufikiaji wa hifadhidata 30.32
Ili kugawa umuhimu wa kimatibabu unaowezekana kwa kila VUS, algoriti zifuatazo za utabiri wa protini za kompyuta zilitumika: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) na Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Lahaja zilizoainishwa kama darasa la 1 na la 2 zilizingatiwa kuwa aina pori.
Mfuatano wa Sanger ulithibitisha uwepo wa kila aina ya vimelea. Kwa ufupi, jozi ya vitangulizi maalum viliundwa kwa kila aina iliyogunduliwa kwa kutumia mfuatano wa marejeleo ya jeni la BRCA1 na BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 na NG_012772.3, NM_000059.3, mtawalia). Kwa hivyo, PCR iliyolengwa ilifanywa ikifuatiwa na mfuatano wa Sanger.
Wagonjwa waliopimwa na kupimwa kuwa hawana jeni la BRCA1/2 walipimwa kwa kutumia kipandishio cha probe kinachotegemea ligation (MLPA) kulingana na maagizo ya mtengenezaji ili kutathmini uwepo wa mpangilio mpya wa jenomu (LGR). Kwa ufupi, sampuli za DNA huondolewa na hadi vipandishio 60 maalum vya jeni la BRCA1 na BRCA2 hutumiwa, kila kimoja kikigundua mfuatano maalum wa DNA takriban nyukleotidi 60 kwa urefu. Bidhaa za kipandishio cha probe, zinazojumuisha seti ya kipekee ya vipandishio vya PCR, kisha zilichambuliwa kwa kutumia elektrophoresis ya kapilari na kwa programu ya Cofalyser.Net pamoja na jedwali zinazofaa za Cofalyser maalum (www.mrcholland.com).
Vigezo vilivyochaguliwa vya kliniki (daraja la kihistolojia na faharisi ya ukuaji wa Ki-67%) vilihusishwa na uwepo wa BRCA1/2 PV, vilivyohesabiwa kwa kutumia programu ya Prism v. 8.4 kwa kutumia jaribio halisi la Fisher likichukulia thamani ya p <0.05 kuwa muhimu.
Kati ya Januari 2017 na Machi 2021, wagonjwa 455 walichunguzwa kwa mabadiliko ya BRCA1/2 ya vijidudu. Upimaji wa mabadiliko ulifanywa katika Kituo cha Oncology ya Majaribio na Hematology cha Hospitali ya Policlinico. Kulingana na mwongozo wa Sicilia (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), Rodolico wa Catania - San Marco kwa ujumla, wagonjwa 389 Kulikuwa na saratani ya matiti, saratani ya ovari 37, saratani ya kongosho 16, saratani ya kibofu 8 na melanoma 5. Mgawanyo wa wagonjwa kulingana na aina ya saratani na matokeo ya uchambuzi umeonyeshwa kwenye Mchoro 1.
Mchoro 1 unaonyesha chati ya mtiririko inayoonyesha muhtasari wa utafiti. Wagonjwa wenye uvimbe wa matiti, melanoma, kongosho, kibofu, au ovari walijaribiwa kwa mabadiliko katika jeni za BRCA1 na BRCA2.
Vifupisho: PV, aina ya pathojeni; VUS, aina ya umuhimu usiojulikana; WT, mfuatano wa BRCA1/2 wa aina ya mwitu.
Tulilenga kwa uangalifu tafiti zetu kwenye makundi ya saratani ya matiti. Wagonjwa walikuwa na umri wa wastani wa miaka 49 (kati ya 23-89) na wengi wao walikuwa wanawake (n=376, au 97%).
Kati ya watu hawa, 64 (17%) walikuwa na mabadiliko ya BRCA1/2 na wote walikuwa wanawake. Thelathini na tano (9%) walikuwa na PV na 29 (7.5%) walikuwa na VUS. Kumi na saba (48.6%) kati ya aina 35 za vimelea zilitokea katika BRCA1 na 18 (51.4%) katika BRCA2, huku VUS 5 zilitokea katika BRCA1 (17.2%) na 24 (82.8%) katika BRCA2 (Mchoro 1 na 2). LGR haikuwepo katika uchanganuzi wa MLPA.
Mchoro 2. Uchambuzi wa mabadiliko ya BRCA1 na BRCA2 kwa wagonjwa 389 wa saratani ya matiti.(A) Usambazaji wa aina tofauti za vimelea (PV) (nyekundu), aina tofauti zisizo na umuhimu (VUS) (chungwa), na WT (bluu) kwa wagonjwa 389 wa saratani ya matiti; (B) wagonjwa 389 wa saratani ya matiti Thelathini na tano (9%) walikuwa na aina tofauti za vimelea (PV) za BRCA1/2. Miongoni mwao, 17 (48.6%) walikuwa wabebaji wa PV ya BRCA1 (nyekundu nyeusi) na 18 (51.4%) walikuwa wabebaji wa BRCA2 (nyekundu nyeusi); (C) 29 (7.5%) ya watu 389 walikuwa na VUS, jeni 5 (17.2%) za BRCA1 (chungwa nyeusi) na jeni 24 (82.8%) za BRCA2 (chungwa nyeusi).
Vifupisho: PV, aina ya pathojeni; VUS, aina ya umuhimu usiojulikana; WT, mfuatano wa BRCA1/2 wa aina ya mwitu.
Kisha tulichunguza kuenea kwa aina ndogo za molekuli za BC kwa wagonjwa walio na BRCA1/2 PV. Usambazaji ulijumuisha wagonjwa 2 (5.7%) wa luminal A, wagonjwa 15 (42.9%) wa luminal B, wagonjwa 3 (8.6%) wa luminal B-HER2+, wagonjwa 2 (5.7%) wa HER2+ na wagonjwa 13 (37.1%) wa TNBC.Miongoni mwa wagonjwa wenye BRCA1 chanya, 5 (29.4%) walikuwa na luminal B BC, 2 (11.8%) walikuwa na ugonjwa wa HER2+, na 10 (58.8%) walikuwa na TNBC. Uvimbe bila mabadiliko ya BRCA1 ulikuwa ama luminal A au luminal B-HER2+ (Mchoro 3).Katika kundi dogo la BRCA2-chanya, uvimbe 10 (55.6%) ulikuwa luminal B, 3 (16.7%) ulikuwa luminal B-HER2+, 3 (16.7%) TNBC na 2 (11.1%) ulikuwa luminal A (Mchoro 3).Hapana. Vivimbe vya HER2+ vilikuwepo katika kundi hili. Kwa hivyo, mabadiliko ya BRCA1 yameenea kwa wagonjwa wa TNBC, ilhali mabadiliko ya BRCA2 yanaenea kwa watu binafsi wa lumen B.
Mchoro 3 Kuenea kwa aina ndogo za saratani ya matiti kwa wagonjwa wenye aina mbalimbali za vimelea katika BRCA1 na BRCA2. Histogramu zinazoonyesha usambazaji wa PV za BRCA1- (nyekundu nyeusi) na BRCA2- (nyekundu hafifu) miongoni mwa aina ndogo za molekuli za wagonjwa wa saratani ya matiti. Nambari zilizoripotiwa ndani ya kila kisanduku zinawakilisha asilimia ya wagonjwa walio na PV ya BRCA1 na BRCA2 kwa kila aina ndogo ya saratani ya matiti.
Vifupisho: PV, aina ya pathogen; HER2+, kipokezi cha kipengele cha ukuaji wa epidermal cha binadamu 2; TNBC, saratani ya matiti yenye hasi mara tatu.
Baadaye, tulitathmini aina na ujanibishaji wa jeni wa BRCA1 na BRCA2 PV. Katika BRCA1 PV, tuliona aina 7 za nyukleotidi moja (SNV), ufutaji 6, urudiaji 3 na uingizaji 1. Mabadiliko moja tu (c.5522delG) yanawakilisha ugunduzi mpya. PV ya kawaida ya BRCA1 iliyogunduliwa katika masomo yote mawili ilikuwa c.5035_5039delCTAAT. Mabadiliko haya yanahusisha ufutaji wa nyukleotidi tano (CTAAT) katika BRCA1 exon 15, na kusababisha uingizwaji wa amino acid leusini na tyrosine kwenye kodoni 1679, na kutokana na mabadiliko ya fremu yenye kodoni mbadala ya kusimama iliyotabiriwa husababisha kukatwa kwa protini mapema. Mabadiliko mengine yote yanagunduliwa katika kisa kimoja tu. Ikumbukwe kwamba, moja ya PV zilizoripotiwa ilikuwa katika eneo la makubaliano ya eneo la splice (c.4357+1G>T) (Jedwali 1).
Kuhusu PV ya BRCA2, tuliona ufutaji 6, SNV 6 na marudio 2. Hakuna mabadiliko yoyote yaliyopatikana ambayo ni mapya. Mabadiliko matatu yalijirudia katika idadi yetu, c.428dup na c.8487+1G>A yaliyoonekana katika watu 3, ikifuatiwa na c.5851_5854delAGTT iliyopatikana katika visa viwili. Mabadiliko ya c.428dup yanahusisha kurudiwa kwa C katika exon 5 ya BRCA2, iliyotabiriwa kusimba protini iliyokatwa, isiyofanya kazi. Mabadiliko ya c.8487+1G>A hutokea katika eneo la kitroniki la intron ya BRCA2 19 (± 1,2) na huathiri mlolongo wa makubaliano ya uunganishaji, na kusababisha uunganishaji uliobadilika na kusababisha protini isiyo ya kawaida au isiyokuwepo. Tofauti ya pathojeni ya c.5851_5854delAGTT inatokana na uondoaji wa nucleotidi 4 kutoka nafasi za nucleotidi 5851 hadi 5854 katika exon 10 ya usimbaji. Jeni la BRCA2 na husababisha mabadiliko ya fremu ya tafsiri yenye kodoni mbadala ya kusimamisha iliyotabiriwa (uk.S1951WfsTer). Ikumbukwe kwamba, kama ilivyoripotiwa hapo awali, mabadiliko yote mawili c.631G>A na c.7008-2A>T yaligunduliwa kwa mgonjwa mmoja.34 Mabadiliko ya kwanza yanahusisha uingizwaji wa adenosine (A) katika exon 7 ya BRCA2 na guanine (G) iliyo na nyukleotidi na kusababisha mabadiliko ya valine hadi isoleusini kwenye kodoni 211, isoleusini Asidi ya amino ni asidi amino yenye sifa zinazofanana sana. Mabadiliko haya huathiri uunganishaji wa kawaida wa mRNA. Lahaja ya pili iko katika eneo la introniki na husababisha uingizwaji wa A mara mbili hadi thymine (T) kabla ya exon 13 ya jeni linalosimba BRCA2. Mabadiliko ya c.7008-2A>T yanaweza kutoa nakala nyingi za urefu tofauti. Zaidi ya hayo, katika kundi la PV za BRCA2, mabadiliko 4 kati ya 18 (22.2%) yalikuwa ya introniki.
Kisha tukachora ramani ya mabadiliko mabaya ya BRCA1/2 katika nyanja za utendaji kazi na maeneo yanayofunga protini (Mchoro 4). Katika jeni la BRCA1, 50% ya PV zilikuwa katika eneo la nguzo ya saratani ya matiti (BCCR), huku 22% ya mabadiliko hayo yakiwa katika eneo la nguzo ya saratani ya ovari (OCCR) (Mchoro 4A). Katika PV ya BRCA2, 35.7% ya aina mbalimbali zilikuwa katika eneo la BCCR na 42.8% ya mabadiliko hayo yalikuwa katika OCCR (Mchoro 4B). Kisha, tulitathmini eneo la PV ndani ya vikoa vya protini vya BRCA1 na BRCA2. Kwa protini ya BRCA1, tulipata PV tatu katika vikoa vya kitanzi na koili vilivyojikunja, na mabadiliko mawili katika kikoa cha BRCT (Mchoro 4A). Kwa protini ya BRCA2, PV 4 zilichorwa kwenye kikoa cha kurudia cha BRC, huku mabadiliko 3 ya kitroniki na 3 ya kiexoniki yakigunduliwa katika vikoa vya oligo/oligosaccharide-binding (OB) na mnara (T) (Mchoro 4B).
Mchoro 4 Uwakilishi wa kimfumo wa protini za BRCA1 na BRCA2 na ujanibishaji wa aina tofauti za vimelea. Mchoro huu unaonyesha usambazaji wa aina tofauti za vimelea za BRCA1 (A) na BRCA2 (B) kwa wagonjwa wa saratani ya matiti. Mabadiliko ya nje yanaonyeshwa kwa rangi ya bluu, huku aina tofauti za introniki zikionyeshwa kwa rangi ya chungwa. Urefu wa baa unawakilisha idadi ya visa. Protini za BRCA1 na BRCA2 na vikoa vyao vya utendaji kazi vimeripotiwa.(A) Protini ya BRCA1 ina kikoa cha kitanzi (RING) na mfuatano wa ujanibishaji wa nyuklia (NLS), kikoa cha coil kilichoviringishwa, kikoa cha nguzo cha SQ/TQ (SCD), na kikoa cha C-terminal cha BRCA1 (BRCT).(B) Protini ya BRCA2 ina marudio manane ya BRC, kikoa cha kuunganisha DNA chenye kikoa cha helical (Helical), mikunjo mitatu ya oligonucleotide/oligosaccharide-binding (OB), kikoa cha mnara (T), na NLS upande wa C. Maeneo yanayoitwa Mkoa wa Kundi la Saratani ya Matiti (BCCR) na Mkoa wa Kundi la Saratani ya Ovari (OCCR) yanaonyeshwa kwenye chini.*Inawakilisha mabadiliko yanayoamua kodoni za kusimamisha.
Kisha tukachunguza vipengele vya kliniki vya BC ambavyo vinaweza kuhusishwa na uwepo wa BRCA1/2 PV. Kumbukumbu kamili za kliniki zilipatikana kwa wagonjwa 181 hasi wa BRCA1/2 (wasio wabebaji) na wabebaji wote (n = 35). Kulikuwa na uhusiano kati ya kiwango cha kuenea kwa uvimbe na daraja.
Tulihesabu usambazaji wa Ki-67 kulingana na wastani wa kundi letu (25%, masafa <10-90%). Masomo yenye Ki-67 <25% yalifafanuliwa kama "Ki-67 ya chini", huku watu binafsi wenye thamani ≥ 25% wakichukuliwa kuwa "Ki-67 ya juu". Tofauti kubwa za Ki-67 (p<0.01) zilipatikana kati ya wasio wabebaji na wabebaji wa PV wa BRCA1 (Mchoro 5A).
Mchoro 5 Uhusiano wa Ki-67 na usambazaji wa daraja kwa wanawake wa saratani ya matiti walio na na wasio na BRCA1 na BRCA2 PV.(A) Kisanduku kinachoonyesha thamani za wastani za Ki-67 kwa wagonjwa 181 wasio wabebaji wa BC dhidi ya wagonjwa 181 wa PV wa BRCA1 (18) au BRCA2 (17). Thamani za P chini ya 0.5 zilizingatiwa kuwa muhimu kitakwimu.(B) Histogramu inayowakilisha ugawaji wa wagonjwa wa saratani ya BC katika vikundi vya daraja la histolojia (G2 na G3) kulingana na hali ya mabadiliko ya BRCA1 na BRCA2 (watu wenye WT, wabebaji wa BRCA1 na BRCA2 PV).
Vile vile, tulichunguza kama kiwango cha uvimbe kilihusiana na uwepo wa BRCA1/2 PV. Kwa kuwa G1 BC haikuwepo katika idadi yetu, tuligawanya wagonjwa katika makundi mawili (G2 au G3). Sambamba na matokeo ya Ki-67, uchambuzi ulifunua uhusiano muhimu wa kitakwimu kati ya kiwango cha uvimbe na mabadiliko ya BRCA1, huku idadi kubwa ya uvimbe wa G3 katika wabebaji wa BRCA1 ikilinganishwa na wasiobeba (p<0.005) (Mchoro 5B).
Maendeleo katika teknolojia ya mpangilio wa DNA yamewezesha maendeleo yasiyotarajiwa katika upimaji wa kijenetiki wa BRCA1/2, na athari muhimu kwa wagonjwa walio na historia ya saratani ya familia. Hadi sasa, takriban aina 20,000 za BRCA1/2 zimetambuliwa na kuainishwa kulingana na Jumuiya ya Marekani ya Jenetiki ya Kimatibabu 35 na mfumo wa ENIGMA.35,36 Inajulikana vyema kwamba wigo wa mabadiliko ya BRCA1/2 hutofautiana sana katika maeneo ya kijiografia.37 Ndani ya Italia, kiwango cha BRCA1/2 PV kilikuwa kati ya 8% hadi 37%, kikionyesha utofauti mkubwa wa ndani ya nchi.38,39 Kwa idadi ya watu karibu milioni 5, Sicily ni eneo la tano kwa ukubwa nchini Italia kwa idadi ya wakazi. Ingawa data ipo kuhusu usambazaji wa BRCA1/2 magharibi mwa Sicily, hakuna ushahidi mpana katika sehemu ya mashariki ya kisiwa hicho.
Utafiti wetu ni mojawapo ya ripoti za kwanza kuhusu matukio ya BRCA1/2 PV kwa wagonjwa wa BC mashariki mwa Sicily.28 Tulilenga uchambuzi wetu kwenye BC, kwani huu ndio ugonjwa unaopatikana zaidi katika kundi letu.
Wakati wa kuwapima wagonjwa 389 BC, 9% walikuwa na BRCA1/2 PV, zilizosambazwa sawasawa kati ya BRCA1 na BRCA2. Matokeo haya yanaendana na yale yaliyoripotiwa hapo awali katika idadi ya watu wa Italia.28 Cha kufurahisha ni kwamba, 3% (13/389) ya kundi letu walikuwa wanaume. Kiwango hiki ni cha juu kuliko ilivyotarajiwa kwa saratani ya matiti ya wanaume (1% ya BC zote),40 ikionyesha uteuzi wetu wa idadi kulingana na hatari ya mabadiliko ya BRCA1/2.Hata hivyo, hakuna hata mmoja wa wanaume hawa aliyetengeneza BRCA1/2 PV, kwa hivyo walikuwa wagombea wa uchambuzi zaidi wa molekuli ili kuondoa uwepo wa mabadiliko yasiyo ya kawaida kama vile PALB2, RAD51C na D, miongoni mwa mengine. Tofauti zisizo na umuhimu usiojulikana zilipatikana katika 7% ya watu ambapo BRCA2 VUS ilionekana wazi.Hata matokeo haya yanaendana na ushahidi uliopo.28,41,42
Tulipochambua usambazaji wa aina ndogo za molekuli za BC katika wanawake waliobadilishwa BRCA1/2, tulithibitisha uhusiano unaojulikana kati ya TNBC na BRCA1 PV (58.8%) na kati ya luminal B BC na BRCA2 PV (55.6%).16,43 Vivimbe vya luminal A na HER2+ katika wabebaji wa BRCA1 na BRCA2 PV vinaendana na data iliyopo ya fasihi.16,43
Kisha tunazingatia aina na eneo la BRCA1/2 PV. Katika kundi letu, BRCA1 PV ya kawaida ilikuwa c.5035_5039delCTAAT. Ingawa Incorvaia et al. hawakuelezea aina hii katika kundi lao la Sicilia, waandishi wengine wameripoti kama aina ya BRCA1 PV.34 Aina kadhaa za BRCA1 PV zilipatikana katika kundi letu - k.m. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA na c.5266dupC - ambazo zimeonekana Sicily.28 Kati ya hizi, mabadiliko mawili ya BRCA1 mwanzilishi (c.181T>G na c.5266dupC) hupatikana kwa kawaida katika Wayahudi wa Ashkenazi wa Ulaya Mashariki na Kati (Poland, Czech), Slovenia, Austria, Hungaria, Belarusi na Ujerumani), 44,45 na, nchini Marekani na Argentina, hivi karibuni ilifafanuliwa kama "tofauti ya aina ya jeni inayojirudia" kwa wagonjwa wa Italia wenye BC na OC. Aina ya 34c.514del ilitambuliwa hapo awali kwa wagonjwa 8 wa saratani ya matiti kutoka kaskazini mwa Sicily huko Palermo na Messina. Cha kufurahisha, hata Incorvaia et al. ilipata aina ya c.3253dupA katika baadhi ya familia huko Catania.28 PV za BRCA2 zinazowakilisha zaidi ni c.428dup, c.5851_5854delAGTT na aina ya intronic c.8487+1G>A, ambazo zimeripotiwa kwa undani zaidi 28 kwa mgonjwa huko Palermo mwenye c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV ilionekana katika kaya kaskazini magharibi mwa Sicily, hasa katika maeneo ya Trapani na Palermo, ilhali c.5851_5854delAGTT PV ilionekana katika kaya kaskazini magharibi mwa Sicily. Aina ya 8487+1G>A ilikuwa ya kawaida zaidi kwa watu kutoka Messina, Palermo, na Caltanissetta.28 Rebbeck et al. hapo awali ilielezea mabadiliko ya c.5851_5854delAGTT huko Kolombia.37 PV nyingine ya BRCA2, c.631+1G>A, imepatikana kwa wagonjwa wa BC na OC kutoka Sicily (Agrigento, Siracusa na Ragusa).28 Ikumbukwe kwamba, tuliona uwepo wa aina mbili za BRCA2 (BRCA2 c.631G>A na c.7008-2A>T) katika mgonjwa yule yule, ambaye tulidhani ametengwa katika hali ya cis, kama ilivyoripotiwa hapo awali kama hivyo.34,46 Mabadiliko haya ya BRCA2 kwa kweli huonekana mara nyingi katika eneo la Italia na yamepatikana kuanzisha kodoni za kusimama mapema, na kuathiri uunganishaji wa RNA ya mjumbe na kusababisha protini ya BRCA2 kushindwa kufanya kazi.47,48
Pia tuliweka ramani ya BRCA1 na BRCA2 PV katika maeneo ya OCCR na BCCR ya vikoa na jeni za protini. Maeneo haya yalielezewa na Rebbeck et al. kama maeneo ya hatari ya kupata saratani ya ovari na matiti, mtawalia.49 Hata hivyo, ushahidi kuhusu uhusiano kati ya eneo la aina tofauti za vijidudu na hatari ya saratani ya matiti au ovari unabaki kuwa na utata.28,50-52 Katika idadi yetu, BRCA1 PV zilikuwa ziko katika eneo la BCCR, ilhali BRCA2 PV zilikuwa ziko katika eneo la OCCR.Hata hivyo, hatukuweza kupata uhusiano wowote kati ya maeneo ya OCCR na BCCR na vipengele vya BC.Hii inaweza kuwa kutokana na idadi ndogo ya wagonjwa walio na mabadiliko ya BRCA1/2.Kutoka kwa mtazamo wa kikoa cha protini, BRCA1 PV husambazwa katika protini nzima, na mabadiliko ya BRCA2 yanapatikana zaidi katika kikoa cha kurudia cha BRC.
Hatimaye, tuliunganisha sifa za kliniki za BC na BRCA1/2 PV. Kutokana na idadi ndogo ya wagonjwa waliojumuishwa, tulipata uhusiano muhimu tu kati ya Ki-67 na daraja la uvimbe. Ingawa tathmini na tafsiri ya Ki-67 bado ina utata, ni hakika kwamba viwango vya juu vya kuongezeka vinahusishwa na hatari kubwa ya kurudia kwa ugonjwa na kupungua kwa maisha. Hadi sasa, kikomo cha kutofautisha kati ya Ki-67 "cha juu" na "cha chini" ni 20%. Hata hivyo, kizingiti hiki hakitumiki kwa idadi yetu ya wagonjwa wa mabadiliko ya BRCA1/2, ambayo ina thamani ya wastani ya Ki-67 ya 25%. Mwelekeo huu wa viwango vya juu vya Ki-67 unaweza kuelezewa na kuenea kwa makundi yetu ya luminal B na TNBC, ambayo uvimbe mdogo wa luminal A ulikuwepo. Hata hivyo, ushahidi fulani unaonekana kupendekeza kwamba kikomo cha juu cha Ki-67 (25-30%) kinaweza kuwagawa wagonjwa vizuri kulingana na ubashiri wao.53,54 Kutokana na matokeo ya uchambuzi wetu, uhusiano muhimu haushangazi. Hutokea kati ya Ki-67 ya juu na daraja na uwepo wa BRCA1 PV. Kwa kweli, uvimbe unaohusiana na BRCA1 ni wa kawaida wa TNBC na huonyesha sifa kali zaidi.16,17
Kwa kumalizia, utafiti huu unatoa ripoti kuhusu hali ya mabadiliko ya BRCA1/2 katika kundi la BC kutoka mashariki mwa Sicily. Kwa ujumla, matokeo yetu yanaendana na ushahidi uliopo, katika suala la kuenea kwa mabadiliko ya jeni na sifa za kliniki katika BC. Tafiti zaidi katika idadi kubwa ya wagonjwa wa BC walio na mabadiliko ya jeni 1/2, kama vile kutumia uchambuzi wa mabadiliko ya jeni nyingi, zinatakiwa kutathmini uwepo wa PV ambazo ni tofauti na hazipatikani sana kuliko BRCA1/2. Hii itaruhusu utambuzi na usimamizi sahihi wa idadi inayoongezeka ya watu walio katika hatari kubwa ya saratani kutokana na mabadiliko ya jeni.
Tulithibitisha kwamba wagonjwa walisaini ridhaa ya kutoa sampuli zao za uvimbe bila kujulikana kwa madhumuni ya utafiti. Wagonjwa wote walisaini ridhaa ya maandishi kulingana na Azimio la Helsinki. Kulingana na sera ya AOU Policlinico "G.Rodolico - S.Marco", utafiti huu haukuhusishwa na mapitio ya kimaadili kwa sababu uchambuzi wa BRCA1/2 ulifanywa kulingana na mazoezi ya kliniki na wagonjwa wote walitoa ridhaa ya maandishi. Wagonjwa pia wanakubali matumizi ya data zao kwa madhumuni ya utafiti.
Tunamshukuru Profesa Paolo Vigneri kwa msaada wake katika kuwatunza wagonjwa wa saratani ya matiti kama ilivyoombwa na Kamati ya Maadili.
Federica Martorana anaripoti kuhusu heshima kutoka kwa Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Waandishi wengine hawatangazi migongano yoyote ya maslahi katika kazi hii.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Takwimu za Saratani Duniani 2020: GLOBOCAN inakadiria matukio na vifo vya saratani 36 katika nchi 185 kote ulimwenguni. CA Saratani J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660