Учурда сиздин браузериңизде Javascript өчүрүлгөн. Бул веб-сайттын айрым функциялары Javascript өчүрүлгөндө иштебейт.
Өзүңүздүн жеке маалыматыңыз жана кызыккан дары-дармегиңиз менен катталыңыз, биз сиз берген маалыматты биздин кеңири маалымат базабыздагы макалалар менен дал келтирип, сизге PDF көчүрмөсүн дароо электрондук почта аркылуу жөнөтөбүз.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Стефания Стелла, 1,2 Сильвия Рита Витале, 1,2 Федерика Марторана, 1,2 Мишель Массимино, 1,2 Джулиана Павоне, 3 Катя Ланзафаме, 3 Себастьяно Бианка, 4 Чиара Бароне, 5 Кристина Горгоне, 6 Марко Фичера Лицелина, 6, Департамент Си612, жана Эксперименттик Медицина, Катания университети, Катания, 95123, Италия;2 Эксперименталдык онкология жана гематология борбору, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Катания, 95123, Италия; 3 Медициналык онкология, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Катания, 95123, Италия; 4 Медициналык генетика, ARNAS Garibaldi, Катания, 95123, Италия; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Италия; 6 Биомедициналык жана биотехнологиялык илимдер бөлүмү, Катания университети, Медициналык генетика, Катания, Италия, 95123; 7Oasi изилдөө институту-IRCCS, Тройна, 94018, Италия Байланыш: Стефания Стелла, тел +39 095 378 1946, электрондук почта [email protected]; [email protected] Максаты: BRCA1 жана BRCA2деги жыныс клеткаларынын мутациялары жана эмчек рагы (БР), энелик без (БР) жана башка рактын өмүр бою пайда болуу коркунучу менен байланышкан. BRCA генин текшерүү жеке тобокелдикти баалоодо, ошондой эле дени сак алып жүрүүчүлөрдө алдын алуу ыкмаларын табууда жана рак менен ооруган бейтаптарды дарылоону ылайыкташтырууда маанилүү. BRCA1 жана BRCA2 өзгөрүүлөрүнүн таралышы географиялык аймактарда ар кандай болот жана Сицилиянын үй-бүлөлөрүндөгү BRCA патогендик варианттары боюнча маалыматтар болгону менен, чыгыш Сицилиянын калкына багытталган изилдөөлөр жетишсиз. Биздин изилдөөнүн максаты чыгыш Сицилиянын БР бейтаптарынын когортасында BRCA патогендик жыныс клеткаларынын өзгөрүүлөрүнүн пайда болушун жана таралышын изилдөө жана алардын кийинки муундагы секвенирлөөнү колдонуу менен белгилүү бир БР белгилери менен байланышын баалоо болгон. Өзгөрүүлөрдүн болушу шишиктин даражасы жана көбөйүү индекси менен байланышкан. ЖЫЙЫНТЫКТАР: Жалпысынан 35 бейтапта (9%) BRCA патогендик варианты болгон, 17 бейтапта (49%) BRCA1де жана 18 бейтапта (51%) BRCA2де болгон. BRCA1 өзгөрүүлөрү үч эсе терс болгон бейтаптарда кеңири таралган. БК менен ооругандарда, ал эми BRCA2 мутациялары люминалдык БК менен ооругандарда көбүрөөк кездешет. Ташуучу эместерге салыштырмалуу, BRCA1 варианттары бар субъекттерде шишиктин деңгээли жана пролиферация индекси бир кыйла жогору болгон. Тыянактар: Биздин жыйынтыктар чыгыш Сицилиядан келген БК менен ооругандарда BRCA мутациялык статусуна сереп берет жана тукум куума БК менен ооругандарды аныктоодо NGS анализинин ролун тастыктайт. Жалпысынан алганда, бул маалыматтар мутация алып жүрүүчүлөрдө рактын туура алдын алуу жана дарылоо үчүн BRCA скринингин колдогон мурунку далилдер менен дал келет.
Эмчек рагы (ЭР) дүйнө жүзү боюнча эң көп кездешкен залалдуу шишик жана аялдардагы эң өлүмгө алып келүүчү рак болуп саналат.1 ЭРдин прогнозун жана клиникалык жүрүм-турумун аныктоочу биологиялык өзгөчөлүктөр убакыттын өтүшү менен кеңири изилденип, жарым-жартылай аныкталган. Чындыгында, учурда ЭРди ар кандай молекулярдык түрлөргө бөлүү үчүн бир нече суррогат маркерлер колдонулат. Алар эстроген (ЭР) жана/же прогестерон рецептору (PgR), адамдын эпидермалдык өсүү факторунун 2-рецепторунун (HER2) күчөшү, пролиферация индекси Ki-67 жана шишик даражасы (G).2 Бул өзгөрмөлөрдүн айкалышы төмөнкү ЭР категорияларын аныктады: 1) ЭР жана/же PgR экспрессиясын көрсөткөн люминалдык шишиктер ЭРдин 75% түзгөн. Бул шишиктер андан ары Ki-67 20% дан төмөн жана HER2 терс болгондо люминалдык А жана пролиферация индексине карабастан Ki-67 20% га барабар же андан жогору болгондо жана HER2 күчөшү болгондо люминалдык В болуп бөлүнгөн; 2) ER жана PgR терс, бирок HER2 күчөшүн көрсөткөн HER2+ шишиктери. Бул топ бардык эмчек шишиктеринин 10% түзөт; 3) ER жана PgR экспрессиясын жана HER2 күчөшүн көрсөтпөгөн үч терс эмчек рагы (TNBC) эмчек рагынын болжол менен 15% түзөт.2-4
Бул БС түрчөлөрүнүн арасында шишиктин даражасы жана көбөйүү индекси шишиктин агрессивдүүлүгү жана прогноз менен түздөн-түз жана көз карандысыз байланышкан кесилиш биомаркерлерин билдирет.5,6
Жогоруда айтылган биологиялык өзгөчөлүктөрдөн тышкары, акыркы бир нече жылда БКнын өнүгүшүнө алып келген тукум куучулук генетикалык өзгөрүүлөрдүн ролу барган сайын маанилүү болуп баратат.7 Эмчек шишиктеринин 10дон 1и белгилүү бир гендердеги жыныс клеткаларынын өзгөрүшүнөн улам тукум кууйт.8 180 000ден ашык аялдар катышкан эки ири эпидемиологиялык изилдөө жакында тукум куучулук БКга негизинен жооптуу болгон сегиз гендин тобун (б.а., ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C жана RAD51D) аныктады. Бул гендердин арасында BRCA1 жана BRCA2 (мындан ары BRCA1/2 деп аталат) эмчек шишиктеринин өнүгүшү менен эң күчтүү корреляцияны көрсөттү.9-12 Чындыгында, BRCA1/2 жыныс клеткаларынын мутациялары БКнын, ошондой эле энелик бездин, простатанын, уйку безинин, жоон ичеги жана меланома сыяктуу башка залалдуу шишиктердин өмүр бою пайда болуу коркунучун бир топ жогорулатат. 13 жаштан 80 жашка чейин BRCA1 патогендик варианты (PV) бар аялдарда БКнын жалпы жуктуруп алуу көрсөткүчү 72% түзөт жана BRCA2 PV.14 менен ооруган аялдарда 69%
Белгилей кетчү нерсе, жакында жарыяланган бир басылмада БЦ коркунучу ПВ түрүнө жараша болору айтылган. Чындыгында, патогендик кыскартуучу варианттарга салыштырмалуу, айрыкча BRCA1 гениндеги ачык-айкын миссенс варианттары, айрыкча улгайган аялдарда, БЦ коркунучунун төмөндөшү менен байланыштуу.15
BRCA1 же BRCA2 PV болушу ар кандай биологиялык жана клиникалык-патологиялык өзгөчөлүктөр менен байланыштуу болгон.16,17 BRCA1 менен байланышкан БКлар клиникалык жактан агрессивдүү, начар дифференциацияланган жана жогорку пролиферацияга ээ. Бул шишиктер, адатта, үч эсе терс жана эрте башталышка ээ. BRCA2 мутацияланган бейтаптарда пайда болгон шишиктер, адатта, орточодон жакшы дифференциацияланган даражаларга жана өзгөрүлмө пролиферациялык индекстерге ээ. Бул шишиктер В люменинде көбүрөөк кездешет жана адатта улгайган адамдарда кездешет.16-18 Белгилей кетчү нерсе, BRCA1 жана BRCA2 мутациялары платина туздарын жана поли(ADP-рибоза) полимераза ингибиторлору (PARPi) сыяктуу максаттуу дары-дармектерди камтыган белгилүү бир дарылоолорго сезгичтикти жогорулатат.19,20
Акыркы бир нече жылдын ичинде клиникалык практикада кийинки муундагы секвенирлөөнү (NGS) киргизүү БС менен ооругандардын санынын көбөйүшүнө BRCA1/2 сыяктуу ракка сезгичтик синдромдорун аныктоо үчүн молекулярдык тестирлөөдөн өтүүгө мүмкүндүк берди.21 Ошол эле учурда, үй-бүлөлүк тарыхка, демографиялык жана клиникалык-патологиялык мүнөздөмөлөргө байланыштуу так критерийлерге негизделген аныктамалар BRCA1/2 тестирлөөгө татыктуу адамдарды жакшыраак аныктоо үчүн колдонулат.22,23 Бул контекстте, белгилүү бир популяцияларда BRCA1/2 скрининги боюнча далилдер топтолууда, бул географиялык аймактардагы айырмачылыктарды баса белгилейт.24–27 Батыш Сицилиядагы БС когортасы жөнүндө маалыматтар болгону менен, чыгыш Сицилиянын калкында BRCA1/2 скрининги боюнча маалыматтар азыраак.28,29
Бул жерде биз чыгыш Сицилиядан келген БС менен ооруган бейтаптарда BRCA1/2 гендик скринингинин жыйынтыктарын сүрөттөп, BRCA1 же BRCA2 мутацияларынын бар экендигин бул шишиктердин негизги клиникалык-патологиялык өзгөчөлүктөрү менен андан ары байланыштырабыз.
Катаниядагы Родолико – Сан-Марко шаарындагы Поликлинико ооруканасынын "Эксперименталдык онкология жана гематология борборунда" ретроспективдүү изилдөө жүргүзүлдү. 2017-жылдын январынан 2021-жылдын мартына чейин эмчек жана энелик бездин, меланоманын, уйку безинин же простатанын рагы менен ооруган жалпысынан 455 бейтап BRCA/2 генетикалык тестирлөөсү үчүн биздин молекулярдык диагностикалык лабораторияга жөнөтүлдү. Бул изилдөө Хельсинки декларациясына ылайык жүргүзүлдү жана бардык катышуучулар молекулярдык анализге чейин жазуу жүзүндө макулдук беришти.
БКнын гистологиялык жана биологиялык мүнөздөмөлөрү (ER, PgR, HER2 статусу, Ki-67 жана даражасы) өзөктүк биопсияда же хирургиялык үлгүлөрдө бааланган, агрессивдүү шишик компоненттерин гана эске алган. Бул мүнөздөмөлөрдүн негизинде БКлар төмөнкүдөй классификацияланган: люминалдык А (ER+ жана/же PgR+, HER2-, Ki-67<20%), люминалдык В (ER+ жана/же PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), люминалдык В-HER2+ (ER жана/же PgR+, HER2+), HER2+ (ER жана PgR-, HER2+) же үч эсе терс (ER жана PgR-, HER2-).
BRCA1 жана BRCA2 мутациясынын абалын баалоодон мурун, онколог, генетик жана психологдон турган көп тармактуу топ ар бир бейтап үчүн BRCA1 жана/же BRCA1 же BRCA2 генинде ПВ коркунучу жогору болгон адамдарды аныктоо үчүн шишик генетикасы боюнча консультация өткөрүшкөн. Бейтаптарды тандоо Италиянын медициналык онкология коомунун (AIOM) көрсөтмөлөрүнө жана жергиликтүү сицилиялык сунуштарга ылайык жүргүзүлдү.30,31 Бул критерийлерге төмөнкүлөр кирет: (i) сезгичтик гендериндеги белгилүү патогендик варианттардын үй-бүлөлүк тарыхы (мисалы, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) БЦ менен ооруган эркектер; (iii) БЦ жана ОК менен ооругандар; (iv) БЦ <36 жаш, TNBC <60 жаш же эки тараптуу БЦ <50 жаш аялдар; (v) БЦ <50 жаш жана жок дегенде бир биринчи даражадагы тууганынын жеке медициналык тарыхы: (a) БЦ <50 жаш; (b) ар кандай курактагы муциндик эмес жана чек арасыз ОК; (c) эки тараптуу БЦ; (d) эркектин БЦ; (e) уйку безинин рагы; (f) простата рагы; (vi) эки же андан көп жеке БЦ тарыхы > 50 жыл жана бири-бирине биринчи даражадагы тууган болгон туугандары үчүн БЦ, ОК же уйку безинин рагы үй-бүлөлүк тарыхы (анын ичинде аял биринчи даражадагы тууганы болгон туугандары); (vii) ОК жеке тарыхы жана жок дегенде бир биринчи даражадагы тууганы: (a) БЦ <50 жыл; (b) УОК; (c) эки тараптуу БЦ; (d) эркектин БЦ; (vii) жогорку даражадагы сероздук ОК менен ооруган аял.
Ар бир бейтаптан 20 мл перифериялык кан үлгүсү алынып, ЭДТА түтүкчөлөрүнө чогултулган (BD Biosciences). Геномдук ДНК өндүрүүчүнүн көрсөтмөлөрүнө ылайык QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Хилден, Италия) колдонулуп, 0,7 мл бүтүн кан үлгүлөрүнөн бөлүнүп алынган жана Qubit® 3.0 флуорометринен (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, MA, АКШ) өткөрүлгөн. Сандык аныктоону жүргүзүңүз. Максаттуу байытуу жана китепкананы даярдоо Oncomine™ BRCA Research Assay Chef тарабынан аткарылат, ал өндүрүүчүнүн көрсөтмөлөрүнө ылайык автоматташтырылган китепкана даярдоо үчүн Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 комплектине жүктөөгө даяр. Комплект бардык BRCA1 (NM_007300.3) жана BRCA2 (NM_000059.3) гендерин изилдөө үчүн колдонула турган эки мультиплекстүү ПЦР праймер пулдарынан турат. Кыскача айтканда, ар бир суюлтулган үлгү ДНКсынан (10 нг) 15 мкл китепкананы даярдоо үчүн штрих-коддолгон пластиналарга кошулуп, бардык реагенттер жана керектелүүчү материалдар Ion Chef™ аспабына жүктөлдү. Андан кийин Ion Chef™ аспабында автоматташтырылган китепкананы даярдоо жана штрих-коддолгон үлгү китепканасын топтоо жүргүзүлдү. Андан кийин даярдалган китепканалардын саны өндүрүүчүнүн көрсөтмөлөрүнө ылайык Qubit® 3.0 флуорометри (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, АКШ) менен бааланды. Акырында, китепканалар Ion Chef™ китепкана үлгү түтүктөрүндө эквимолярдык катыштарда бириктирилет. (штрих-коддолгон түтүктөр) жана Ion Chef™ аспабына жүктөлдү. Ырааттуулукту аныктоо Ion 510 чибин (Thermo Fisher Scientific) колдонуу менен Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) аспабы (Thermo Fisher Scientific) аркылуу жүргүзүлдү. Маалыматтарды талдоо Amplicon Suite (SmartSeq srl) жана Ion Reporter Software тарабынан жүргүзүлдү.
Бардык варианттардын номенклатурасы онлайн режиминде жеткиликтүү болгон Адам геномунун вариациялык консорциумунун учурдагы көрсөтмөлөрүнө ылайык келген (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). BRCA1/2 варианттарынын клиникалык мааниси Эл аралык консорциум ENIGMA (Далилдерге негизделген тармак, гермлин мутант аллелдерин интерпретациялоо үчүн, https://enigmaconsortium.org/) классификациясын колдонуу жана ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD жана UMD сыяктуу ар кандай маалымат базаларына кайрылуу аркылуу аныкталган. Классификация беш башка тобокелдик категориясын камтыйт: залалсыз (I категория), ыктымалдуу залалсыз (II категория), белгисиз маанидеги вариант (VUS, III категория), ыктымалдуу патогендик (IV категория) жана патогендик (V категория). VarSome ошондой эле 30 маалымат базасына кирүү мүмкүнчүлүгү бар маалыматтык курал болгон мутациялардын белоктун түзүлүшүнө жана функциясына тийгизген таасирин талдаган.32
Ар бир VUSка потенциалдуу клиникалык маанини белгилөө үчүн төмөнкү эсептөөчү белокту алдын ала айтуу алгоритмдери колдонулган: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) жана Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). 1 жана 2-класс катары классификацияланган варианттар жапайы тип деп эсептелген.
Сэнгер секвенирлөөсү ар бир патогендик варианттын бар экендигин тастыктады. Кыскача айтканда, ар бир аныкталган вариант үчүн BRCA1 жана BRCA2 генинин шилтеме ырааттуулуктарын (NG_005905.2, NM_007294.3 жана NG_012772.3, NM_000059.3) колдонуу менен бир жуп спецификалык праймер иштелип чыккан. Ошондуктан, максаттуу ПЦР жүргүзүлүп, андан кийин Сэнгер секвенирлөөсү жүргүзүлдү.
BRCA1/2 генине терс тест берген бейтаптар чоң геномдук кайра түзүлүштөрдүн (LGR) бар экендигин баалоо үчүн өндүрүүчүнүн көрсөтмөлөрүнө ылайык мультиплекстик лигацияга көз каранды зондду амплификациялоо (MLPA) аркылуу текшерилген. Кыскача айтканда, ДНК үлгүлөрү денатурацияланып, 60ка чейин BRCA1 жана BRCA2 генине мүнөздүү зонддор колдонулат, алардын ар бири болжол менен 60 нуклеотиддин узундугундагы белгилүү бир ДНК ырааттуулугун аныктайт. Андан кийин ПЦР ампликондорунун уникалдуу топтомунан турган зондду амплификациялоо продуктулары капиллярдык электрофорез жана Cofalyser.Net программасы аркылуу тиешелүү партияга мүнөздүү Cofalyser таблицалары менен биргеликте талданган (www.mrcholland.com).
Тандалган клиникалык-патологиялык өзгөрмөлөр (гистологиялык даража жана Ki-67% пролиферация индекси) BRCA1/2 PV болушу менен байланышкан, ал Prism программалык камсыздоосу v. 8.4 аркылуу эсептелген, p-мааниси <0.05 маанилүү деп эсептелген Фишердин так тести менен.
2017-жылдын январынан 2021-жылдын мартына чейин 455 бейтап BRCA1/2 жыныс клеткаларынын мутацияларына текшерилген. Мутациялык тестирлөө Поликлинико ооруканасынын Эксперименталдык онкология жана гематология борборунда жүргүзүлдү. Сицилиялык көрсөтмөгө ылайык (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Январь 2020), Катаниянын Родоликосу – Сан-Маркодо жалпысынан 389 бейтап катталган. Эмчек рагы, 37 энелик без рагы, 16 уйку безинин рагы, 8 простата рагы жана 5 меланома болгон. Бейтаптардын рактын түрү жана анализдин жыйынтыктары боюнча бөлүштүрүлүшү 1-сүрөттө көрсөтүлгөн.
1-сүрөттө изилдөөнүн жалпы көрүнүшүн көрсөткөн блок-схема көрсөтүлгөн. Эмчек, меланома, уйку безинин, простатанын же энелик бездин шишиктери бар бейтаптар BRCA1 жана BRCA2 гендериндеги мутацияларга текшерилген.
Кыскартуулдар: PV, патогендик вариант; VUS, мааниси белгисиз вариант; WT, жапайы типтеги BRCA1/2 ырааттуулугу.
Биз изилдөөлөрүбүздү эмчек рагы когорталарына тандап багыттадык. Бейтаптардын орточо жашы 49 жашты (диапазону 23-89) түзүп, көбүнчө аялдардан турган (n=376 же 97%).
Бул субъекттердин 64үндө (17%) BRCA1/2 мутациялары болгон жана алардын баары аялдар болгон. Отуз бешинде (9%) PV жана 29унда (7,5%) VUS болгон. 35 патогендик варианттын он жетиси (48,6%) BRCA1де жана 18инде (51,4%) BRCA2де кездешкен, ал эми VUS BRCA1де (17,2%) жана 24үндө (82,8%) BRCA2де кездешкен (1 жана 2-сүрөттөр). LGR MLPA анализинде жок болгон.
2-сүрөт. 389 эмчек рагы менен ооруган бейтаптардагы BRCA1 жана BRCA2 мутацияларын талдоо.(A) 389 эмчек рагы менен ооруган бейтаптардагы патогендик варианттардын (PV) (кызыл), белгисиз маанидеги варианттардын (VUS) (кызгылт сары) жана WT (көк) бөлүштүрүлүшү; (B) 389 эмчек рагы менен ооруган бейтаптар Отуз бешинде (9%) BRCA1/2 патогендик варианттары (PV) болгон. Алардын ичинен 17си (48,6%) BRCA1 PV алып жүрүүчүлөрү (кочкул кызыл) жана 18и (51,4%) BRCA2 алып жүрүүчүлөрү (ачык кызыл) болгон; (C) 389 субъекттин 29у (7,5%) VUS, 5и (17,2%) BRCA1 гендери (кочкул кызгылт сары) жана 24ү (82,8%) BRCA2 гендери (ачык кызгылт сары) болгон.
Кыскартуулдар: PV, патогендик вариант; VUS, мааниси белгисиз вариант; WT, жапайы типтеги BRCA1/2 ырааттуулугу.
Андан кийин биз BRCA1/2 PV менен ооругандарда BC молекулярдык субтиптеринин таралышын изилдедик. Бөлүштүрүүгө 2 (5,7%) люминалдык A, 15 (42,9%) люминалдык B, 3 (8,6%) люминалдык B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ жана 13 (37,1%) TNBC бейтаптары кирген. BRCA1-позитивдүү бейтаптардын арасында 5инде (29,4%) люминалдык B BC, 2синде (11,8%) HER2+ оорусу жана 10унда (58,8%) TNBC болгон. BRCA1 мутациясы жок шишиктер люминалдык A же люминалдык B-HER2+ болгон (3-сүрөт). BRCA2-позитивдүү топчодо 10 (55,6%) шишиктер люминалдык B, 3 (16,7%) люминалдык B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC жана 2 (11,1%) болгон люмен А (3-сүрөт). Бул топто HER2+ шишиктери табылган жок. Ошентип, BRCA1 мутациялары TNBC бейтаптарында кеңири таралган, ал эми BRCA2 өзгөрүүлөрү В люмениндеги адамдарда басымдуулук кылат.
3-сүрөт. BRCA1 жана BRCA2 патогендик варианттары бар бейтаптарда эмчек рагынын түрчөлөрүнүн таралышы. Эмчек рагынын молекулярдык түрчөлөрүнүн арасында BRCA1- (кочкул кызыл) жана BRCA2- (ачык кызыл) ПВлардын бөлүштүрүлүшүн көрсөткөн гистограммалар. Ар бир кутучанын ичинде көрсөтүлгөн сандар эмчек рагынын ар бир түрчөсүндө BRCA1 жана BRCA2 ПВ менен ооругандардын пайызын билдирет.
Кыскартмалар: PV, патогендик вариант; HER2+, адамдын эпидермалдык өсүү факторунун 2-рецептору оң; TNBC, үч эсе терс эмчек рагы.
Андан кийин, биз BRCA1 жана BRCA2 PVларынын түрүн жана гендик локализациясын бааладык. BRCA1 PVсында биз 7 бир нуклеотиддик варианттарды (SNV), 6 делецияны, 3 дупликацияны жана 1 инсерцияны байкадык. Бир гана мутация (c.5522delG) жаңы ачылышты билдирет. Эки субъектте тең аныкталган эң көп кездешкен BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT болгон. Бул өзгөрүү BRCA1 экзонунун 15инде беш нуклеотиддин (CTAAT) делециясын камтыйт, натыйжада 1679 кодонунда лейцин аминокислотасынын тирозин менен алмаштырылышына алып келет жана болжолдонгон альтернативдүү стоп-кодон менен трансляциялык кадр жылышуусу белоктун эрте кыскартылышына алып келет. Башка бардык өзгөрүүлөр бир гана учурда аныкталган. Белгилей кетчү нерсе, кабарланган PVлардын бири сплайс сайтынын консенсус аймагында жайгашкан (c.4357+1G>T) (1-таблица).
BRCA2 PVге келсек, биз 6 делецияны, 6 SNVди жана 2 дубликацияны байкадык. Табылган өзгөрүүлөрдүн бири да жаңы эмес. Биздин популяцияда үч мутация кайталанды, 3 субъектте c.428dup жана c.8487+1G>A байкалды, андан кийин эки учурда алынган c.5851_5854delAGTT. c.428dup өзгөрүүсү BRCA2нин 5-экзонунда Cнин кайталанышын камтыйт, ал кыскартылган, функционалдуу эмес белокту коддойт деп болжолдонууда. c.8487+1G>A мутациясы BRCA2 интронунун 19 интрондук аймагында (± 1,2) пайда болот жана сплайсингдин консенсус ырааттуулугуна таасир этет, натыйжада сплайсингдин өзгөрүшү анормалдуу же жок белокко алып келет. c.5851_5854delAGTT патогендик варианты BRCA2нин 10-коддоочу экзонундагы 5851ден 5854кө чейинки нуклеотиддик позициялардан 4-нуклеотиддик делецияга байланыштуу. ген жана болжолдонгон альтернативдүү стоп-кодон (p.S1951WfsTer) менен трансляциялык кадр жылышына алып келет. Белгилей кетчү нерсе, мурда кабарлангандай, c.631G>A жана c.7008-2A>T эки өзгөртүү тең бир эле бейтапта аныкталган.34 Биринчи мутация BRCA2 экзонунун 7-сундагы аденозиндин (A) нуклеотидди камтыган гуанин (G) менен алмаштырылышын камтыйт, натыйжада 211 кодонунда валин изолейцинге өзгөрөт, изолейцин Аминокислота - бул өтө окшош касиеттерге ээ аминокислота. Бул өзгөрүү кадимки мРНК сплайсингине таасир этет. Экинчи вариант интрондук аймакта жайгашкан жана BRCA2 коддогон гендин 13-экзонунун алдында тиминге (T) кош алмаштырууга алып келет. c.7008-2A>T өзгөрүүсү ар кандай узундуктагы бир нече транскрипттерди жаратышы мүмкүн. Андан тышкары, BRCA2 PV тобунда 18 өзгөрүүнүн 4ү (22,2%) интрондук болгон.
Андан кийин биз функционалдык домендердеги жана белок байланыштыруучу аймактардагы BRCA1/2 зыяндуу мутацияларын картага түшүрдүк (4-сүрөт). BRCA1 генинде ПВлардын 50% эмчек рагынын кластердик аймагында (BCCR), ал эми мутациялардын 22% энелик бездин рагынын кластердик аймагында (OCCR) жайгашкан (4А-сүрөт). BRCA2 ПВсында варианттардын 35,7% BCCR аймагында жана мутациялардын 42,8% OCCRде жайгашкан (4Б-сүрөт). Андан кийин биз ПВнын BRCA1 жана BRCA2 белок домендериндеги жайгашкан жерин бааладык. BRCA1 белогу үчүн биз циклдик жана спираль домендеринде үч ПВны жана BRCT доменинде эки мутацияны таптык (4А-сүрөт). BRCA2 белогу үчүн BRC кайталоо доменине 4 ПВ картага түшүрүлдү, ал эми 3 интрондук жана 3 экзондук өзгөрүүлөр аныкталды. олиго/олигосахарид менен байланышуучу (OB) жана мунара (T) домендери (4B-сүрөт).
4-сүрөт. BRCA1 жана BRCA2 белокторунун схемалык көрсөтүлүшү жана патогендик варианттардын локализациясы. Бул сүрөттө эмчек рагы менен ооругандарда BRCA1 (A) жана BRCA2 (B) патогендик варианттарынын таралышы көрсөтүлгөн. Экзоникалык мутациялар көк түстө, ал эми интрондук варианттар кызгылт сары түстө көрсөтүлгөн. Тилкенин бийиктиги учурлардын санын билдирет. BRCA1 жана BRCA2 белоктору жана алардын функционалдык домендери келтирилген.(A) BRCA1 белогу циклдик доменди (RING) жана ядролук локализация ырааттуулугун (NLS), спираль спираль доменин, SQ/TQ кластердик доменин (SCD) жана BRCA1 C-терминалдык доменин (BRCT) камтыйт.(B) BRCA2 белогу сегиз BRC кайталоосун, спираль сымал домени бар ДНК менен байланышуучу доменди (Helical), үч олигонуклеотид/олигосахарид менен байланышуучу (OB) бүктөмдөрдү, мунара доменин (T) жана С тарабындагы NLSти камтыйт. Эмчек рагы кластеринин аймагы (BCCR) жана энелик бездин рагы кластери деп аталган аймактар. Төмөндө аймак (OCCR) көрсөтүлгөн. *Стоп-кодондорду аныктоочу мутацияларды билдирет.
Андан кийин биз BRCA1/2 PV болушу менен байланыштуу болушу мүмкүн болгон б.з.к. клиникалык-патологиялык өзгөчөлүктөрүн изилдедик. BRCA1/2-терс 181 бейтап (алып жүрүүчү эмес) жана бардык алып жүрүүчүлөр (n = 35) боюнча толук клиникалык жазуулар бар болчу. Шишиктин көбөйүү ылдамдыгы менен даражасынын ортосунда корреляция болгон.
Биз Ki-67нин бөлүштүрүлүшүн когортубуздун медианасына негиздеп эсептедик (25%, диапазону <10-90%). Ki-67 < 25% болгон субъектилер "төмөн Ki-67" деп аныкталган, ал эми мааниси ≥ 25% болгон адамдар "жогорку Ki-67" деп эсептелген. Ki-67нин олуттуу айырмачылыктары (p<0.01) ташуучу эместер менен BRCA1 PV ташуучуларынын ортосунда табылган (5А-сүрөт).
5-сүрөт. BRCA1 жана BRCA2 PV менен ооруган жана оорубаган эмчек рагы менен ооруган аялдардагы Ki-67нин даражадагы бөлүштүрүлүшү менен корреляциясы.(A) 181 БК алып жүрүүчү эмес бейтаптардагы Ki-67 медианалык маанилерин BRCA1 (18) же BRCA2 (17) PV менен ооруган бейтаптарга салыштырмалуу көрсөткөн кутуча диаграммасы. 0,5тен төмөн P маанилери статистикалык жактан маанилүү деп эсептелген.(B) БК рак менен ооругандарды BRCA1 жана BRCA2 мутациясынын статусуна ылайык гистологиялык даражадагы топторго (G2 жана G3) бөлүштүрүүнү билдирген гистограмма (WT субъекттери, BRCA1 жана BRCA2 PV алып жүрүүчүлөр).
Ошо сыяктуу эле, биз шишиктин деңгээли BRCA1/2 PV болушу менен байланыштуубу же жокпу, изилдедик. Биздин популяцияда G1 BC жок болгондуктан, биз бейтаптарды эки топко бөлдүк (G2 же G3). Ki-67 жыйынтыктарына ылайык, анализ шишиктин деңгээли менен BRCA1 мутациясынын ортосундагы статистикалык жактан маанилүү корреляцияны көрсөттү, BRCA1 алып жүрүүчүлөрүндө G3 шишиктеринин үлүшү алып жүрүүчүлөр эместерге салыштырмалуу жогору болгон (p<0,005) (5B-сүрөт).
ДНК секвенирлөө технологиясындагы жетишкендиктер BRCA1/2 генетикалык тестирлөөсүндө болуп көрбөгөндөй жетишкендиктерге мүмкүндүк берди, бул үй-бүлөлүк рак тарыхы бар бейтаптар үчүн маанилүү кесепеттерге алып келди. Бүгүнкү күнгө чейин Америкалык медициналык генетика коомунун 35 жана ENIGMA системасына ылайык болжол менен 20 000 BRCA1/2 варианттары аныкталып, классификацияланган.35,36 BRCA1/2 мутациялык спектри географиялык аймактарда кеңири өзгөрүп тураары белгилүү.37 Италиянын ичинде BRCA1/2 PV көрсөткүчү 8% дан 37% га чейин өзгөрүп, өлкө ичинде кеңири өзгөрмөлүүлүктү көрсөтүп турат.38,39 Дээрлик 5 миллион калкы бар Сицилия Италиядагы тургундардын саны боюнча бешинчи ири аймак болуп саналат. Батыш Сицилияда BRCA1/2нин таралышы боюнча маалыматтар болгону менен, аралдын чыгыш бөлүгүндө кеңири далилдер жок.
Биздин изилдөө чыгыш Сицилиядагы BC бейтаптарында BRCA1/2 PV оорусунун пайда болуу көрсөткүчү боюнча алгачкы отчеттордун бири болуп саналат.28 Биз талдообузду BCге багыттадык, анткени бул биздин когортадагы эң кеңири таралган оору.
389 БМС менен ооругандарды текшергенде, 9% BRCA1/2 PV алып жүргөн, алар BRCA1 жана BRCA2 ортосунда бирдей бөлүштүрүлгөн. Бул жыйынтыктар мурда Италия калкында кабарланган жыйынтыктарга дал келет.28 Кызыгы, биздин когортонун 3% (13/389) эркектер болгон. Бул көрсөткүч эркектердин эмчек рагы үчүн күтүлгөндөн жогору (бардык БМСтердин 1%),40 бул BRCA1/2 мутация коркунучуна негизделген популяцияларды тандообузду чагылдырат. Бирок, бул эркектердин бири да BRCA1/2 PV пайда болгон эмес, ошондуктан алар PALB2, RAD51C жана D сыяктуу аз кездешүүчү мутациялардын бар экендигин жокко чыгаруу үчүн андан ары молекулярдык анализ жүргүзүү үчүн талапкерлер болгон. BRCA2 VUS аныкталган субъекттердин 7%ында белгисиз маанидеги варианттар алынган. Бул жыйынтык да мурдатан бар болгон далилдер менен дал келет.28,41,42
BRCA1/2 мутант аялдардагы BC молекулярдык субтиптеринин таралышын талдаганыбызда, биз TNBC жана BRCA1 PV (58,8%) жана люминалдык B BC жана BRCA2 PV (55,6%) ортосундагы белгилүү байланыштарды тастыктадык.16,43 BRCA1 жана BRCA2 PV алып жүрүүчүлөрүндөгү люминалдык A жана HER2+ шишиктери учурдагы адабият маалыматтарына дал келет.16,43
Андан кийин биз BRCA1/2 PV түрүнө жана жайгашкан жерине көңүл бурабыз. Биздин когортада эң көп кездешкен BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT болгон. Бирок Incorvaia жана башкалар. бул вариантты өздөрүнүн Сицилия когортасында сүрөттөшкөн эмес, башка авторлор аны BRCA1 PV жыныс мүчөсү катары билдиришкен.34 Биздин когортада бир нече BRCA1 PV табылган - мисалы, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA жана c.5266dupC - алар Сицилияда байкалган.28 Алардын ичинен эки BRCA1 негиздөөчү мутациясы (c.181T>G жана c.5266dupC) Чыгыш жана Борбордук Европанын (Польша, Чехия), Словениянын, Австриянын, Венгриянын, Беларуссиянын жана Германиянын) ашкенази еврейлеринде көп кездешет, 44,45 жана Америка Кошмо Штаттарында жана Аргентинада жакында эле БЦ жана ОК менен ооруган италиялык бейтаптарда "кайталануучу жыныс мүчөсүнүн варианты" катары аныкталган. 34c.514del варианты мурда Сицилия түндүгүнөн Палермо жана Мессинадагы 8 эмчек рагы менен ооруган бейтапта аныкталган. Кызыктуусу, ал тургай Инкорвая ж.б. Катаниядагы кээ бир үй-бүлөлөрдө c.3253dupA вариантын тапкан.28 BRCA2 PVларынын эң өкүлдүгү c.428dup, c.5851_5854delAGTT жана интрондук вариант c.8487+1G>A болуп саналат, алар Палермодогу c.428dup, c.5851_5854delAGTT менен ооруган бейтапта кененирээк баяндалган 28. PV Сицилиянын түндүк-батышындагы үй чарбаларында, негизинен Трапани жана Палермо аймактарында байкалган, ал эми c.5851_5854delAGTT PV Сицилиянын түндүк-батышындагы үй чарбаларында байкалган. 8487+1G>A варианты Мессина, Палермо жана Калтаниссеттадан келген субъекттерде көбүрөөк кездешкен.28 Реббек жана башкалар. мурда Колумбиядагы c.5851_5854delAGTT өзгөрүүсүн сүрөттөгөн.37 Дагы бир BRCA2 PV, c.631+1G>A, Сицилиядан келген БК жана ОК бейтаптарында (Агридженто, Сиракуза жана Рагуса) табылган.28 Белгилей кетчү нерсе, биз ошол эле бейтапта эки BRCA2 вариантынын (BRCA2 c.631G>A жана c.7008-2A>T) бирге жашоосун байкадык, алар мурда ушундайча кабарлангандай, цис режиминде бөлүнгөн деп эсептедик.34,46 Бул BRCA2 мутациялары чындыгында Италия аймагында көп байкалат жана эрте токтотуу кодондорун киргизип, кабарчы РНКнын сплайсингине таасир этип, BRCA2 протеининин иштебей калышына алып келери аныкталган.47,48
Ошондой эле, биз белок домендеринин жана гендеринин болжолдуу OCCR жана BCCR аймактарындагы BRCA1 жана BRCA2 PV'лерин картага түшүрдүк. Бул аймактарды Реббек жана башкалар тиешелүүлүгүнө жараша энелик без жана эмчек рагынын өнүгүү коркунучу бар аймактар ​​катары сүрөттөшкөн.49 Бирок, жыныс клеткаларынын варианттарынын жайгашкан жери менен эмчек же энелик без рагынын коркунучунун ортосундагы байланышка байланыштуу далилдер талаш-тартыштуу бойдон калууда.28,50-52 Биздин калкта BRCA1 PV'лери негизинен BCCR аймагында жайгашкан, ал эми BRCA2 PV'лери негизинен OCCR аймагында жайгашкан. Бирок, биз болжолдуу OCCR жана BCCR аймактары менен BC өзгөчөлүктөрүнүн ортосунда эч кандай байланыш таба алган жокпуз. Бул BRCA1/2 мутациялары бар бейтаптардын саны чектелүү болгондугуна байланыштуу болушу мүмкүн. Белок домендеринин көз карашынан алганда, BRCA1 PV'лери бүт белок боюнча бөлүштүрүлгөн жана BRCA2 өзгөрүүлөрү BRC кайталоо доменинде артыкчылыктуу түрдө кездешет.
Акырында, биз БЦнын клиникалык-патологиялык өзгөчөлүктөрүн BRCA1/2 PV менен корреляцияладык. Камтылган бейтаптардын саны чектелүү болгондуктан, биз Ki-67 менен шишиктин деңгээлинин ортосунда гана олуттуу корреляцияны таптык. Ki-67ди баалоо жана чечмелөө бир аз талаш-тартыштуу бойдон калууда, бирок жогорку пролиферация көрсөткүчтөрү оорунун кайталануу коркунучунун жогорулашы жана жашоо деңгээлинин төмөндөшү менен байланыштуу экени анык. Бүгүнкү күнгө чейин "жогорку" жана "төмөн" Ki-67ди айырмалоо үчүн чектик маани 20% түзөт. Бирок, бул босого биздин BRCA1/2 мутациясы бар бейтаптардын популяциясына тиешелүү эмес, алардын Ki-67 орточо мааниси 25% түзөт. Ki-67 жогорку көрсөткүчтөрүнүн бул тенденциясын биздин люминалдык В жана TNBC когорталарындагы таралышы менен түшүндүрсө болот, алардын ичинен люминалдык А шишиктери аз болгон. Бирок, кээ бир далилдер Ki-67 жогорку чектик мааниси (25–30%) бейтаптарды алардын божомолуна ылайык жакшыраак стратификациялашы мүмкүн экенин көрсөтүп турат.53,54 Биздин анализдин жыйынтыктарынан көрүнүп тургандай, олуттуу корреляция таң калыштуу эмес. Жогорку Ki-67 менен даражалардын жана болушунун ортосунда пайда болот. BRCA1 PV. Чындыгында, BRCA1 менен байланышкан шишиктер TNBCге мүнөздүү жана агрессивдүү өзгөчөлүктөрдү көрсөтөт.16,17
Жыйынтыктап айтканда, бул изилдөө чыгыш Сицилиядан келген BC когортасындагы BRCA1/2 мутациялык абалы жөнүндө отчет берет. Жалпысынан алганда, биздин жыйынтыктарыбыз мутациянын таралышы жана BCдеги клиникалык-патологиялык өзгөчөлүктөр жагынан мурдатан бар болгон далилдер менен дал келет. BRCA1/2-мутант BC бейтаптарынын чоңураак популяцияларында көбүрөөк изилдөөлөр, мисалы, көп геномдук кеңейтилген мутациялык анализди колдонуу, BRCA1/2ге караганда айырмаланган жана азыраак кездешкен PVлердин бар экендигин баалоо үчүн зарыл. Бул генетикалык мутациялардан улам рак оорусуна чалдыгуу коркунучу жогору болгон субъекттердин санынын көбөйүшүн аныктоого жана туура башкарууга мүмкүндүк берет.
Биз бейтаптар изилдөө максатында шишик үлгүлөрүн анонимдүү түрдө чыгарууга макулдук бергенин ырастадык. Бардык бейтаптар Хельсинки декларациясына ылайык жазуу жүзүндө макулдукка кол коюшту. AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco” саясатына ылайык, бул изилдөө этикалык кароодон бошотулган, анткени BRCA1/2 анализи клиникалык практикага ылайык жүргүзүлгөн жана бардык бейтаптар жазуу жүзүндө макулдук беришкен. Бейтаптар ошондой эле өздөрүнүн маалыматтарын изилдөө максатында колдонууга макул болушат.
Этика комитетинин өтүнүчү боюнча эмчек рагы менен ооругандарды дарылоодо көрсөткөн жардамы үчүн профессор Паоло Виньериге ыраазычылык билдиребиз.
Федерика Марторана Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer компанияларынан гонорарларды алат. Башка авторлор бул эмгекте кызыкчылыктардын кагылышуусу жок экенин билдиришет.
1. Сунг Х, Ферлай Дж, Сигел РЛ ж.б. 2020-жылдагы глобалдык рак статистикасы: GLOBOCAN дүйнө жүзү боюнча 185 өлкөдө 36 рак оорусунун пайда болуу жана өлүм көрсөткүчүн эсептейт. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660