Javascript bħalissa huwa diżattivat fil-brawżer tiegħek. Xi karatteristiċi ta' dan is-sit elettroniku mhux se jaħdmu meta javascript ikun diżattivat.
Irreġistra bid-dettalji speċifiċi tiegħek u l-mediċina speċifika li tinteressak u aħna se nqabblu l-informazzjoni li tipprovdi ma' artikli fid-database estensiva tagħna u nibagħtulek kopja PDF bl-email minnufih.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella, Dipartiment tal-Klinika tal-Mediċina1, 21 Ex Cataperinia 95123, l-Italja;2 Ċentru għall-Onkoloġija u l-Ematoloġija Sperimentali, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, l-Italja; 3 Onkoloġija Medika, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Katanja, 95123, l-Italja; 4 Ġenetika Medika, ARNAS Garibaldi, Katanja, 95123, l-Italja; 5 Ġenetika tal-Mediċina, ASP, Sirakuża, 96100, l-Italja; 6 Dipartiment tax-Xjenzi Bijomediċi u Bijoteknoloġiċi, Università ta' Catania, Ġenetika Medika, Catania, l-Italja, 95123; 7Istitut ta' Riċerka Oasi-IRCCS, Troina, 94018, l-Italja Komunikazzjonijiet: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected]; [email protected] Skop: Mutazzjonijiet tal-linja ġerminali f'BRCA1 u BRCA2 u kanċer tas-sider stabbilit (BC), tal-ovarji (OC) u oħrajn assoċjati ma' riskju ta' kanċer tul il-ħajja. L-ittestjar għall-ġene BRCA huwa essenzjali biex jiġi vvalutat ir-riskju individwali, kif ukoll biex jinstabu metodi ta' prevenzjoni f'dawk li jġorru l-kanċer b'saħħithom u biex jiġu mfassla trattamenti f'pazjenti bil-kanċer. Il-prevalenza ta' alterazzjonijiet f'BRCA1 u BRCA2 tvarja ħafna bejn ir-reġjuni ġeografiċi, u għalkemm teżisti dejta dwar varjanti patoġeniċi ta' BRCA f'familji Sqallin, studji li jimmiraw speċifikament lejn popolazzjonijiet fil-Lvant ta' Sqallija huma nieqsa. L-għan tal-istudju tagħna kien li ninvestigaw l-inċidenza u d-distribuzzjoni ta' alterazzjonijiet patoġeniċi tal-linja ġerminali ta' BRCA f'grupp ta' pazjenti bil-BC mill-Lvant ta' Sqallija u li nivvalutaw l-assoċjazzjoni tagħhom ma' karatteristiċi speċifiċi tal-BC bl-użu ta' sekwenzar tal-ġenerazzjoni li jmiss. Il-preżenza ta' alterazzjonijiet kienet korrelata mal-grad tat-tumur u l-indiċi tal-proliferazzjoni. RIŻULTATI: B'mod ġenerali, 35 pazjent (9%) kellhom varjant patoġeniku ta' BRCA, 17 (49%) f'BRCA1 u 18 (51%) f'BRCA2. L-alterazzjonijiet f'BRCA1 huma prevalenti f'pazjenti bil-BC triplu negattiv, filwaqt li l-mutazzjonijiet f'BRCA2 huma aktar komuni f'pazjenti bil-BC luminali. Imqabbel Ma' dawk li ma jġorrux il-kanċer, is-suġġetti b'varjanti BRCA1 kellhom grad ta' tumur u indiċi proliferattiv sinifikament ogħla. Konklużjonijiet: Is-sejbiet tagħna jipprovdu ħarsa ġenerali lejn l-istatus mutazzjonali tal-BRCA f'pazjenti bil-BC mil-Lvant ta' Sqallija u jikkonfermaw ir-rwol tal-analiżi tal-NGS fl-identifikazzjoni ta' pazjenti b'BC ereditarju. B'mod ġenerali, din id-dejta hija konsistenti ma' evidenza preċedenti li tappoġġja l-iskrinjar tal-BRCA għall-prevenzjoni u t-trattament xieraq tal-kanċer f'dawk li jġorru l-mutazzjoni.
Il-kanċer tas-sider (BC) huwa l-aktar tumur malinni komuni madwar id-dinja u l-aktar kanċer qattiel fin-nisa.1 Il-karatteristiċi bijoloġiċi li jiddeterminaw il-prognożi u l-imġieba klinika tal-BC ġew studjati b'mod estensiv u parzjalment eluċidati matul iż-żmien. Fil-fatt, diversi markaturi surrogati bħalissa qed jintużaw biex jikklassifikaw il-BC f'sottotipi molekulari differenti. Dawn huma r-riċettur tal-estroġenu (ER) u/jew tal-proġesteron (PgR), l-amplifikazzjoni tar-riċettur 2 tal-fattur tat-tkabbir epidermali uman (HER2), l-indiċi tal-proliferazzjoni Ki-67 u l-grad tat-tumur (G).2 Il-kombinazzjoni ta' dawn il-varjabbli identifikat il-kategoriji tal-BC li ġejjin: 1) Tumuri luminali, li juru espressjoni ta' ER u/jew PgR, ammontaw għal 75% tal-BCs. Dawn it-tumuri ġew maqsuma aktar f'Luminali A, meta Ki-67 kien taħt l-20% u HER2 negattiv, u Luminali B, meta Ki-67 kien ugwali għal jew 'il fuq minn 20% u fil-preżenza ta' amplifikazzjoni ta' HER2, irrispettivament mill-indiċi tal-proliferazzjoni; 2) Tumuri HER2+ li huma ER u PgR negattivi iżda juru amplifikazzjoni ta' HER2. Dan il-grupp jammonta għal 10% tat-tumuri kollha tas-sider; 3) Kanċer tas-sider triplu negattiv (TNBC), li ma jurix espressjoni ta' ER u PgR u amplifikazzjoni ta' HER2, jammonta għal madwar 15% tal-kanċers tas-sider.2-4
Fost dawn is-sottotipi ta' BC, il-grad tat-tumur u l-indiċi tal-proliferazzjoni jirrappreżentaw bijomarkaturi trasversali li huma direttament u indipendentement assoċjati mal-aggressività u l-pronjosi tat-tumur.5,6
Minbarra l-karatteristiċi bijoloġiċi msemmija hawn fuq, ir-rwol tal-alterazzjonijiet ġenetiċi ereditarji li jwasslu għall-iżvilupp tal-BC sar dejjem aktar importanti matul l-aħħar ftit snin.7 Madwar 1 minn kull 10 tumuri tas-sider jintirtu minħabba alterazzjonijiet fil-linja ġerminali f'ġeni speċifiċi.8 Żewġ studji epidemjoloġiċi kbar li involvew aktar minn 180,000 mara reċentement identifikaw grupp ta' tmien ġeni (jiġifieri, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, u RAD51D) primarjament responsabbli għall-BC ereditarju. Fost dawn il-ġeni, BRCA1 u BRCA2 (minn hawn 'il quddiem imsejħa BRCA1/2) urew l-aktar korrelazzjoni qawwija mal-iżvilupp ta' tumuri tas-sider.9-12 Fil-fatt, il-mutazzjonijiet fil-linja ġerminali BRCA1/2 iżidu b'mod sinifikanti r-riskju tul il-ħajja tal-BC kif ukoll malinjanzi oħra, inklużi dawk tal-ovarji, tal-prostata, tal-pankreas, tal-kolon u tar-rektum, u tal-melanoma. Mill-età ta' 13 sa 80 sena, l-inċidenza kumulattiva tal-BC hija ta' 72% f'nisa b'varjant patoġeniku (PV) BRCA1 u 69% f'nisa b'varjant BRCA2. PV.14
Ta' min jinnota li pubblikazzjoni reċenti tissuġġerixxi li r-riskju ta' BC jiddependi mit-tip ta' PV. Fil-fatt, meta mqabbla ma' varjanti patoġeniċi li jqassru, varjanti missense evidenti, speċjalment fil-ġene BRCA1, huma assoċjati ma' riskju mnaqqas ta' BC, speċjalment f'nisa anzjani.15
Il-preżenza ta' BRCA1 jew BRCA2 PV kienet assoċjata ma' karatteristiċi bijoloġiċi u klinikopatoloġiċi differenti.16,17 Il-BCs assoċjati ma' BRCA1 għandhom it-tendenza li jkunu klinikament aggressivi, differenzjati ħażin, u proliferattivi ħafna. Dawn it-tumuri ġeneralment ikunu triplu negattivi u jkollhom età żgħira ta' bidu. Tumuri li jseħħu f'pazjenti b'mutazzjoni BRCA2 tipikament juru gradi moderati sa differenzjati sew u indiċi proliferattivi varjabbli. Dawn it-tumuri huma aktar komuni fil-lumen B u ġeneralment iseħħu f'adulti akbar fl-età.16-18 Ta' min jinnota li mutazzjonijiet f'BRCA1 u BRCA2 iżidu s-sensittività għal trattamenti speċifiċi, inklużi melħ tal-platinu u drogi mmirati bħal inibituri tal-polimerażi tal-poli(ADP-ribose) (PARPi).19,20
Matul l-aħħar ftit snin, l-implimentazzjoni tas-sekwenzar tal-ġenerazzjoni li jmiss (NGS) fil-prattika klinika ppermettiet lil numru dejjem jikber ta’ pazjenti bil-BC biex jagħmlu testijiet molekulari għal sindromi ta’ suxxettibilità għall-kanċer, inkluż BRCA1/2.21 Fl-istess ħin, definizzjonijiet ibbażati fuq kriterji preċiżi rigward l-istorja tal-familja, il-karatteristiċi demografiċi u klinikopatoloġiċi biex jiġu identifikati aħjar individwi li jistħoqqilhom it-test tal-BRCA1/2.22,23 F’dan il-kuntest, qed takkumula evidenza dwar l-iskrinjar tal-BRCA1/2 f’popolazzjonijiet speċifiċi, li tenfasizza d-differenzi bejn ir-reġjuni ġeografiċi.24–27 Għalkemm hemm rapporti dwar il-koorti tal-BC fil-punent ta’ Sqallija, hemm inqas dejta disponibbli dwar l-iskrinjar tal-BRCA1/2 fil-popolazzjoni tal-lvant ta’ Sqallija.28,29
Hawnhekk niddeskrivu r-riżultati tal-iskrinjar tal-linja ġerminali BRCA1/2 f'pazjenti bil-BC mil-Lvant ta' Sqallija, u nikkorrelataw aktar il-preżenza ta' mutazzjonijiet BRCA1 jew BRCA2 mal-karatteristiċi klinikopatoloġiċi ewlenin ta' dawn it-tumuri.
Studju retrospettiv twettaq fiċ-“Ċentru għall-Onkoloġija Sperimentali u l-Ematoloġija” fl-Isptar Policlinico. Rodolico – San Marco f’Catania. Minn Jannar 2017 sa Marzu 2021, total ta’ 455 pazjent b’kanċer tas-sider u tal-ovarji, melanoma, pankreatiku jew tal-prostata ġew riferuti lil-laboratorju dijanjostiku molekulari tagħna għal testijiet ġenetiċi BRCA/2. Dan l-istudju twettaq skont id-Dikjarazzjoni ta’ Ħelsinki, u l-parteċipanti kollha pprovdew kunsens infurmat bil-miktub qabel l-analiżi molekulari.
Il-karatteristiċi istoloġiċi u bijoloġiċi (ER, PgR, status HER2, Ki-67, u grad) tal-BC ġew ivvalutati fuq bijopsija ewlenija jew kampjuni kirurġiċi, billi ġew ikkunsidrati biss il-komponenti aggressivi tat-tumur. Abbażi ta' dawn il-karatteristiċi, il-BCs ġew ikklassifikati kif ġej: luminali A (ER+ u/jew PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminali B (ER+ u/jew PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminali B-HER2+ (ER u/jew PgR+, HER2+), HER2+ (ER u PgR-, HER2+) jew triplu negattiv (ER u PgR-, HER2-).
Qabel ma ġie vvalutat l-istatus tal-mutazzjoni BRCA1 u BRCA2, tim multidixxiplinari li kien jinkludi onkologu, ġenetista, u psikologu wettaq konsultazzjoni dwar il-ġenetika tat-tumur għal kull pazjent biex jiddetermina l-preżenza ta' BRCA1 u/jew BRCA1. jew individwi b'riskju għoli ta' PV fil-ġene BRCA2. L-għażla tal-pazjenti twettqet skont il-linji gwida tas-Soċjetà Taljana tal-Onkoloġija Medika (AIOM) u r-rakkomandazzjonijiet lokali Sqallin.30,31 Dawn il-kriterji jinkludu: (i) storja familjari ta' varjanti patoġeniċi magħrufa f'ġeni ta' suxxettibilità (eż., BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) irġiel b'BC; (iii) dawk b'BC u OC; (iv) nisa b'BC <36 sena, TNBC <60 sena, jew BC bilaterali <50 sena; (v) storja medika personali ta' BC <50 sena u mill-inqas qarib wieħed tal-ewwel grad: (a) BC < 50 sena; (b) OC mhux muċinuż u mhux borderline ta' kwalunkwe età; (c) BC bilaterali; (d) BC maskili; (e) kanċer tal-frixa; (f) kanċer tal-prostata; (vi) żewġ Storji personali jew aktar ta' BC > 50 sena u storja familjari ta' BC, OC, jew kanċer tal-frixa għal qraba li huma qraba tal-ewwel grad ta' xulxin (inklużi qraba li magħhom hija qraba tal-ewwel grad); (vii) Storja personali ta' OC u mill-inqas qarib wieħed tal-ewwel grad: (a) BC <50 sena; (b) NOC; (c) BC bilaterali; (d) BC maskili; (vii) mara b'OC seruża ta' grad għoli.
Kampjun ta' 20 mL tad-demm periferali ttieħed minn kull pazjent u nġabar f'tubi EDTA (BD Biosciences). Id-DNA ġenomika ġiet iżolata minn kampjuni ta' 0.7 mL tad-demm sħiħ bl-użu tal-QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, l-Italja) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur u għaddiet minn Fluorometru Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, l-Istati Uniti). Wettaq kwantifikazzjoni. L-arrikkiment tal-mira u t-tħejjija tal-librerija jitwettqu mill-Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, lest biex jitgħabba fil-Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit għat-tħejjija awtomatizzata tal-librerija skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Il-kit jikkonsisti f'żewġ pools multiplex ta' primers tal-PCR li jistgħu jintużaw biex jiġu studjati l-ġeni kollha BRCA1 (NM_007300.3) u BRCA2 (NM_000059.3). Fil-qosor, 15 µL ta' kull kampjun tad-DNA dilwit (10 ng) ġew miżjuda ma' pjanċi bil-barcode għat-tħejjija tal-librerija u r-reaġenti u l-konsumabbli kollha ġew mgħobbija fuq l-istrument Ion Chef™. It-tħejjija awtomatizzata tal-librerija u l-ġbir tal-librerija tal-kampjuni bil-barcode mbagħad twettqu fuq l-istrument Ion Chef™. In-numru ta' libreriji ppreparati mbagħad ġie vvalutat minn Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur. Fl-aħħarnett, il-libreriji huma kkombinati fi proporzjonijiet ekwimolari fit-tubi tal-kampjuni tal-librerija Ion Chef™ (tubi bil-barcode) u mgħobbija. fuq l-istrument Ion Chef™. Is-sekwenzar sar bl-użu ta' strument Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) bl-użu ta' Ċippa Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). L-analiżi tad-dejta twettqet minn Amplicon Suite (SmartSeq srl) u Ion Reporter Software.
In-nomenklatura kollha tal-varjanti segwiet il-linji gwida attwali tal-Konsorzju tal-Varjazzjoni tal-Ġenoma Umana, disponibbli online (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Is-sinifikat kliniku tal-varjanti BRCA1/2 ġie definit bl-użu tal-klassifikazzjoni tal-Konsorzju Internazzjonali ENIGMA (Netwerk Ibbażat fuq l-Evidenza għall-Interpretazzjoni tal-Alleli Mutanti tal-Linja Ġermali, https://enigmaconsortium.org/) u billi ġew ikkonsultati databases differenti bħal ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, u UMD. Il-klassifikazzjoni tinkludi ħames kategoriji distinti ta’ riskju: beninni (kategorija I), probabbilment beninni (kategorija II), varjant ta’ sinifikat inċert (VUS, kategorija III), probabbilment patoġeniku (kategorija IV), u patoġeniku (kategorija V). VarSome analizza wkoll l-effett tal-mutazzjonijiet fuq l-istruttura u l-funzjoni tal-proteini, għodda informattiva b’aċċess għal 30 database.32
Biex tiġi assenjata sinifikat kliniku potenzjali lil kull VUS, intużaw l-algoritmi komputazzjonali ta' tbassir tal-proteini li ġejjin: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) u Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Il-varjanti kklassifikati bħala klassi 1 u 2 tqiesu bħala tat-tip selvaġġ.
Is-sekwenzar ta' Sanger ikkonferma l-preżenza ta' kull varjant patoġeniku. Fil-qosor, ġie ddisinjat par ta' primers speċifiċi għal kull varjant skopert billi ntużaw is-sekwenzi ta' referenza tal-ġeni BRCA1 u BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 u NG_012772.3, NM_000059.3, rispettivament). Għalhekk, twettqet PCR immirata segwita minn sekwenzar ta' Sanger.
Pazjenti li ttestjaw negattiv għall-ġene BRCA1/2 ġew ittestjati permezz ta' amplifikazzjoni tal-probe dipendenti fuq il-ligazzjoni multiplex (MLPA) skont l-istruzzjonijiet tal-manifattur biex tiġi vvalutata l-preżenza ta' riarranġamenti ġenomiċi kbar (LGR). Fil-qosor, il-kampjuni tad-DNA jiġu denaturati u jintużaw sa 60 sonda speċifika għall-ġene BRCA1 u BRCA2, li kull waħda minnhom tiskopri sekwenza speċifika tad-DNA b'tul ta' madwar 60 nukleotide. Il-prodotti tal-amplifikazzjoni tal-probe, li jikkonsistu f'sett uniku ta' amplikoni PCR, imbagħad ġew analizzati permezz ta' elettroforesi kapillari u bis-softwer Cofalyser.Net flimkien mat-tabelli Cofalyser speċifiċi għall-lott xieraq (www.mrcholland.com).
Varjabbli klinikopatoloġiċi magħżula (grad istoloġiku u indiċi ta' proliferazzjoni Ki-67%) kienu assoċjati mal-preżenza ta' BRCA1/2 PV, ikkalkulati bl-użu tas-softwer Prism v. 8.4 bl-użu tat-test eżatt ta' Fisher billi wieħed jassumi li valur p <0.05 huwa sinifikanti.
Bejn Jannar 2017 u Marzu 2021, 455 pazjent ġew skrinjati għal mutazzjonijiet tal-linja ġerminali BRCA1/2. L-ittestjar tal-mutazzjoni sar fiċ-Ċentru għall-Onkoloġija Sperimentali u l-Ematoloġija tal-Isptar Policlinico. Skont il-linja gwida Siċiljana (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), ir-Rodolico ta' Catania – San Marco” b'kollox, 389 pazjent kienu b'kanċer tas-sider, 37 b'kanċer tal-ovarji, 16 b'kanċer tal-frixa, 8 b'kanċer tal-prostata u 5 b'melanoma. Id-distribuzzjoni tal-pazjenti skont it-tip ta' kanċer u r-riżultati tal-analiżi hija murija fil-Figura 1.
Figura 1 turi dijagramma tal-fluss li turi ħarsa ġenerali lejn l-istudju. Pazjenti b'tumuri tas-sider, melanoma, pankreatiċi, tal-prostata, jew tal-ovarji ġew ittestjati għal mutazzjonijiet fil-ġeni BRCA1 u BRCA2.
Abbrevjazzjonijiet: PVs, varjant patoġeniku; VUS, varjant ta' sinifikat inċert; WT, sekwenza BRCA1/2 tat-tip selvaġġ.
Iffokajna l-istudji tagħna b'mod selettiv fuq gruppi ta' pazjenti bil-kanċer tas-sider. Il-pazjenti kellhom età medjana ta' 49 sena (firxa 23-89) u kienu predominantement nisa (n=376, jew 97%).
Minn dawn is-suġġetti, 64 (17%) kellhom mutazzjonijiet BRCA1/2 u kienu kollha nisa. Ħamsa u tletin (9%) kellhom PV u 29 (7.5%) kellhom VUS. Sebgħa u tletin (48.6%) mit-35 varjant patoġeniku seħħew f'BRCA1 u 18 (51.4%) f'BRCA2, filwaqt li 5 VUS seħħew f'BRCA1 (17.2%) u 24 (82.8%) f'BRCA2 (Figuri 1 u 2). LGR ma kienx preżenti fl-analiżi MLPA.
Figura 2. Analiżi tal-mutazzjonijiet BRCA1 u BRCA2 fi 389 pazjent bil-kanċer tas-sider. (A) Distribuzzjoni ta' varjanti patoġeniċi (PV) (aħmar), varjanti ta' sinifikat inċert (VUS) (oranġjo), u WT (blu) fi 389 pazjent bil-kanċer tas-sider; (B) 389 pazjent bil-kanċer tas-sider Ħamsa u tletin (9%) kellhom varjanti patoġeniċi (PVs) BRCA1/2. Fosthom, 17 (48.6%) kienu trasportaturi ta' BRCA1 PV (aħmar skur) u 18 (51.4%) kienu trasportaturi ta' BRCA2 (aħmar ċar); (C) 29 (7.5%) minn 389 suġġett kellhom VUS, 5 (17.2%) ġeni BRCA1 (oranġjo skur) u 24 (82.8%) ġeni BRCA2 (oranġjo ċar).
Abbrevjazzjonijiet: PVs, varjant patoġeniku; VUS, varjant ta' sinifikat inċert; WT, sekwenza BRCA1/2 tat-tip selvaġġ.
Imbagħad investigajna l-prevalenza tas-sottotipi molekulari BC f'pazjenti b'BRCA1/2 PV. Id-distribuzzjoni inkludiet 2 (5.7%) luminal A, 15 (42.9%) luminal B, 3 (8.6%) luminal B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ u 13 (37.1%) pazjenti TNBC. Fost il-pazjenti BRCA1-pożittivi, 5 (29.4%) kellhom luminal B BC, 2 (11.8%) kellhom marda HER2+, u 10 (58.8%) kellhom TNBC. Tumuri mingħajr mutazzjonijiet BRCA1 kienu jew luminal A jew luminal B-HER2+ (Figura 3). Fis-sottogrupp BRCA2-pożittiv, 10 (55.6%) tumuri kienu luminal B, 3 (16.7%) kienu luminal B-HER2+, 3 (16.7%) TNBC u 2 (11.1%) kienu luminal A (Figura 3). L-ebda tumuri HER2+ ma kienu preżenti f'dan il-grupp. Għalhekk, il-mutazzjonijiet BRCA1 huma prevalenti f'pazjenti TNBC, filwaqt li l-alterazzjonijiet BRCA2 huma predominanti f'individwi lumen B.
Figura 3 Prevalenza ta' sottotipi ta' kanċer tas-sider f'pazjenti b'varjanti patoġeniċi f'BRCA1 u BRCA2. Istogrammi li juru d-distribuzzjoni ta' PVs BRCA1- (aħmar skur) u BRCA2- (aħmar ċar) fost sottotipi molekulari ta' pazjenti bil-kanċer tas-sider. In-numri rrappurtati f'kull kaxxa jirrappreżentaw il-perċentwal ta' pazjenti b'PV BRCA1 u BRCA2 għal kull sottotip ta' kanċer tas-sider.
Abbrevjazzjonijiet: PVs, varjant patoġeniku; HER2+, riċettur 2 tal-fattur tat-tkabbir epidermali uman pożittiv; TNBC, kanċer tas-sider triplu negattiv.
Sussegwentement, ivvalutajna t-tip u l-lokalizzazzjoni tal-ġeni tal-PVs ta' BRCA1 u BRCA2. Fil-PV ta' BRCA1, osservajna 7 varjanti ta' nukleotidi singoli (SNVs), 6 tħassir, 3 duplikazzjonijiet u inserzjoni waħda. Mutazzjoni waħda biss (c.5522delG) tirrappreżenta skoperta ġdida. L-aktar PV ta' BRCA1 komuni skoperta fiż-żewġ suġġetti kienet c.5035_5039delCTAAT. Din l-alterazzjoni tinvolvi tħassir ta' ħames nukleotidi (CTAAT) fl-eżon 15 ta' BRCA1, li tirriżulta fis-sostituzzjoni tal-aċidu amminiku lewċina bit-tirosina fil-kodon 1679, u minħabba frameshift tat-traduzzjoni b'kodon ta' waqfien alternattiv imbassar iwassal għal truncment prematur tal-proteina. Il-bidliet l-oħra kollha jinstabu f'każ wieħed biss. Ta' min jinnota li waħda mill-PVs irrappurtati kienet tinsab fir-reġjun tal-kunsens tas-sit tal-isplice (c.4357+1G>T) (Tabella 1).
Rigward il-BRCA2 PV, osservajna 6 tħassir, 6 SNVs u 2 duplikazzjonijiet. L-ebda waħda mill-bidliet misjuba mhi ġdida. Tliet mutazzjonijiet reġgħu seħħew fil-popolazzjoni tagħna, c.428dup u c.8487+1G>A osservati fi 3 suġġetti, segwiti minn c.5851_5854delAGTT irkuprat f'żewġ każijiet. L-alterazzjoni c.428dup tinvolvi ripetizzjoni ta' C fl-eżon 5 ta' BRCA2, imbassra li tikkodifika proteina mqassra u mhux funzjonali. Il-mutazzjoni c.8487+1G>A sseħħ fir-reġjun introniku tal-intron 19 ta' BRCA2 (± 1,2) u taffettwa s-sekwenza tal-kunsens tal-isplicing, li tirriżulta fi splicing mibdul li jirriżulta fi proteina anormali jew assenti. Il-varjant patoġeniku c.5851_5854delAGTT huwa dovut għal tħassir ta' 4 nukleotidi mill-pożizzjonijiet tan-nukleotidi 5851 sa 5854 fl-eżon kodifikanti 10 tal-ġene BRCA2 u tirriżulta f' frameshift traduzzjonali b'kodon ta' waqfien alternattiv imbassar (p.S1951WfsTer). Notevolment, kif irrappurtat qabel, iż-żewġ alterazzjonijiet c.631G>A u c.7008-2A>T instabu fl-istess pazjent.34 L-ewwel mutazzjoni tinvolvi s-sostituzzjoni ta' adenosine (A) fl-eżon 7 ta' BRCA2 b'nukleotide li fih guanina (G) li tirriżulta f'bidla ta' valine għal isolewċina fil-kodon 211, isolewċina L-aċidu amminiku huwa aċidu amminiku bi proprjetajiet simili ħafna. Din il-bidla taffettwa t-tqattigħ normali tal-mRNA. It-tieni varjant jinsab f'reġjun introniku u jirriżulta f'sostituzzjoni doppja ta' A għal timina (T) qabel l-eżon 13 tal-ġene li jikkodifika BRCA2. Il-bidla c.7008-2A>T tista' tiġġenera traskrizzjonijiet multipli ta' tulijiet differenti. Barra minn hekk, fil-grupp ta' BRCA2 PVs, 4 minn 18-il bidla (22.2%) kienu introniċi.
Imbagħad immappjajna mutazzjonijiet detrimentali ta' BRCA1/2 f'dominji funzjonali u reġjuni li jorbtu l-proteini (Fig. 4). Fil-ġene BRCA1, 50% tal-PVs kienu jinsabu fir-reġjun tal-grupp ta' kanċer tas-sider (BCCR), filwaqt li 22% tal-mutazzjonijiet kienu jinsabu fir-reġjun tal-grupp ta' kanċer tal-ovarji (OCCR) (Fig. 4A). Fil-PV ta' BRCA2, 35.7% tal-varjanti kienu jinsabu fir-reġjun BCCR u 42.8% tal-mutazzjonijiet kienu jinsabu fl-OCCR (Fig. 4B). Imbagħad, ivvalutajna l-post tal-PV fid-dominji tal-proteini BRCA1 u BRCA2. Għall-proteina BRCA1, sibna tliet PVs fid-dominji loop u coiled coil, u żewġ mutazzjonijiet fid-dominju BRCT (Fig. 4A). Għall-proteina BRCA2, 4 PVs immappjati għad-dominju ta' ripetizzjoni BRC, filwaqt li 3 bidliet introniċi u 3 bidliet eżoniċi ġew skoperti fid-dominji li jorbtu l-oligo/oligosakkaridi (OB) u tower (T) (Figura 4B).
Figura 4 Rappreżentazzjoni skematika tal-proteini BRCA1 u BRCA2 u lokalizzazzjoni ta' varjanti patoġeniċi. Din il-figura turi d-distribuzzjoni tal-varjanti patoġeniċi BRCA1 (A) u BRCA2 (B) f'pazjenti bil-kanċer tas-sider. Il-mutazzjonijiet eżoniċi huma murija bil-blu, filwaqt li l-varjanti introniċi huma murija bl-oranġjo. L-għoli tal-virga jirrappreżenta n-numru ta' każijiet. Il-proteini BRCA1 u BRCA2 u d-dominji funzjonali tagħhom huma rrappurtati. (A) Il-proteina BRCA1 fiha dominju loop (RING) u sekwenza ta' lokalizzazzjoni nukleari (NLS), dominju coiled-coil, dominju ta' cluster SQ/TQ (SCD), u dominju C-terminal BRCA1 (BRCT). (B) Il-proteina BRCA2 fiha tmien ripetizzjonijiet BRC, dominju li jorbot mad-DNA b'dominju eliċi (Helical), tliet tinjiet li jorbtu ma' oligonucleotide/oligosaccharide (OB), dominju tower (T), u NLS fuq in-naħa C. Żoni msejħa r-Reġjun tal-Grupp tal-Kanċer tas-Sider (BCCR) u r-Reġjun tal-Grupp tal-Kanċer tal-Ovarji (OCCR) huma murija fil-qiegħ. *Tirrappreżenta mutazzjonijiet li tiddetermina l-kodons ta' waqfien.
Imbagħad investigajna l-karatteristiċi klinikopatoloġiċi tal-BC li jistgħu jikkorrelataw mal-preżenza ta' BRCA1/2 PV. Rekords kliniċi kompluti kienu disponibbli għal 181 pazjent negattiv għal BRCA1/2 (mhux portaturi) u l-portaturi kollha (n = 35). Kien hemm korrelazzjoni bejn ir-rata ta' proliferazzjoni tat-tumur u l-grad.
Ikkalkulajna d-distribuzzjoni ta' Ki-67 ibbażata fuq il-medjan tal-koorti tagħna (25%, firxa <10-90%). Is-suġġetti b'Ki-67 < 25% ġew definiti bħala "Ki-67 baxx", filwaqt li individwi b'valuri ≥ 25% ġew ikkunsidrati "Ki-67 għoli". Instabu differenzi sinifikanti fil-Ki-67 (p<0.01) bejn dawk li ma jġorrux il-virus BRCA1 u dawk li jġorru l-virus BRCA1 (Fig. 5A).
Figura 5 Korrelazzjoni ta' Ki-67 mad-distribuzzjoni tal-grad f'nisa bil-kanċer tas-sider bi u mingħajr PVs ta' BRCA1 u BRCA2.(A) Boxplot li juri l-valuri medjani ta' Ki-67 f'181 pazjent bil-kanċer tas-sider mhux portaturi kontra pazjenti b'PV ta' BRCA1 (18) jew BRCA2 (17). Valuri P taħt 0.5 tqiesu statistikament sinifikanti.(B) Istogramma li tirrappreżenta l-assenjazzjoni ta' pazjenti bil-kanċer tas-sider fi gruppi ta' grad istoloġiku (G2 u G3) skont l-istatus tal-mutazzjoni BRCA1 u BRCA2 (suġġetti WT, portaturi ta' PVs ta' BRCA1 u BRCA2).
Bl-istess mod, eżaminajna jekk il-grad tat-tumur kienx korrelatat mal-preżenza ta' BRCA1/2 PV. Peress li G1 BC kien assenti fil-popolazzjoni tagħna, qsamna l-pazjenti f'żewġ gruppi (G2 jew G3). Konsistenti mar-riżultati ta' Ki-67, l-analiżi żvelat korrelazzjoni statistikament sinifikanti bejn il-grad tat-tumur u l-mutazzjoni BRCA1, bi proporzjon ogħla ta' tumuri G3 f'dawk li jġorru BRCA1 meta mqabbla ma' dawk li ma jġorrux (p<0.005) (Figura 5B).
L-avvanzi fit-teknoloġija tas-sekwenzar tad-DNA ppermettew avvanzi bla preċedent fl-ittestjar ġenetiku tal-BRCA1/2, b'implikazzjonijiet kruċjali għal pazjenti bi storja familjari ta' kanċer. Sal-lum, ġew identifikati u kklassifikati madwar 20,000 varjant tal-BRCA1/2 skont l-American Society of Medical Genetics 35 u s-sistema ENIGMA.35,36 Huwa magħruf sew li l-ispettru mutazzjonali tal-BRCA1/2 ivarja ħafna bejn ir-reġjuni ġeografiċi.37 Fl-Italja, ir-rata ta' PVs tal-BRCA1/2 varjat minn 8% sa 37%, u turi varjabbiltà wiesgħa intra-pajjiż.38,39 B'popolazzjoni ta' kważi 5 miljun, Sqallija hija l-ħames l-akbar reġjun fl-Italja f'termini tan-numru ta' abitanti. Għalkemm teżisti dejta dwar id-distribuzzjoni tal-BRCA1/2 fil-punent ta' Sqallija, m'hemm l-ebda evidenza estensiva fil-parti tal-lvant tal-gżira.
L-istudju tagħna huwa wieħed mill-ewwel rapporti dwar l-inċidenza ta' BRCA1/2 PV f'pazjenti bil-BC fil-Lvant ta' Sqallija.28 Iffokajna l-analiżi tagħna fuq il-BC, peress li din hija bil-bosta l-aktar marda komuni fil-koorti tagħna.
Meta ġew ittestjati 389 pazjent bil-kanċer tas-sider (BC), 9% kellhom PVs ta' BRCA1/2, imqassma b'mod ugwali bejn BRCA1 u BRCA2. Dawn ir-riżultati huma konsistenti ma' dawk irrappurtati qabel fil-popolazzjoni Taljana.28 Interessanti, 3% (13/389) tal-koorti tagħna kienu rġiel. Din ir-rata hija ogħla milli mistenni għall-kanċer tas-sider fl-irġiel (1% tal-BCs kollha),40 tirrifletti l-għażla tagħna ta' popolazzjonijiet ibbażata fuq ir-riskju ta' mutazzjoni BRCA1/2. Madankollu, l-ebda wieħed minn dawn l-irġiel ma żviluppa PV ta' BRCA1/2, għalhekk kienu kandidati għal aktar analiżi molekulari biex tiġi eskluża l-preżenza ta' mutazzjonijiet inqas komuni bħal PALB2, RAD51C u D, fost oħrajn. Varjanti ta' sinifikat inċert instabu f'7% tas-suġġetti li fihom kien evidenti l-VUS ta' BRCA2. Anke dan ir-riżultat huwa konsistenti ma' evidenza pre-eżistenti.28,41,42
Meta analizzajna d-distribuzzjoni tas-sottotipi molekulari tal-BC f'nisa mutanti BRCA1/2, ikkonfermajna assoċjazzjonijiet magħrufa bejn TNBC u BRCA1 PV (58.8%) u bejn luminal B BC u BRCA2 PV (55.6%).16,43 It-tumuri luminal A u HER2+ f'dawk li jġorru BRCA1 u BRCA2 PV huma konsistenti mad-dejta tal-letteratura eżistenti.16,43
Imbagħad niffokaw fuq it-tip u l-post tal-BRCA1/2 PV. Fil-koorti tagħna, l-aktar BRCA1 PV komuni kien c.5035_5039delCTAAT. Għalkemm Incorvaia et al. Ma ddeskrivewx din il-varjant fil-koorti Siċiljana tagħhom, awturi oħra rrappurtawha bħala PV BRCA1 tal-linja ġerminali.34 Instabu diversi PV BRCA1 fil-koorti tagħna – eż. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA u c.5266dupC – li ġew osservati fi Sqallija.28 Minn dawn, żewġ mutazzjonijiet fundaturi BRCA1 (c.181T>G u c.5266dupC) jinstabu komunement fil-Lhud Ashkenazi tal-Ewropa tal-Lvant u Ċentrali (Polonja, Ċeka), Slovena, Awstrijaka, Ungeriża, Belarussa u Ġermaniża), 44,45 u, fl-Istati Uniti u l-Arġentina, ġiet definita reċentement bħala "varjant rikorrenti tal-linja ġerminali" f'pazjenti Taljani b'BC u OC. Il-varjant 34c.514del ġie identifikat qabel fi 8 pazjenti bil-kanċer tas-sider mit-Tramuntana ta' Sqallija f'Palermo u Messina. Interessanti, anke Incorvaia et al. sabu l-varjant c.3253dupA f'xi familji f'Catania.28 L-aktar PVs rappreżentattivi ta' BRCA2 huma c.428dup, c.5851_5854delAGTT u l-varjant introniku c.8487+1G>A, li ġew irrappurtati f'aktar dettall 28 f'pazjent f'Palermo b'c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV ġie osservat fi djar fil-majjistral ta' Sqallija, prinċipalment fir-reġjuni ta' Trapani u Palermo, filwaqt li c.5851_5854delAGTT PV ġie osservat fi djar fil-majjistral ta' Sqallija. Il-varjant 8487+1G>A kien aktar komuni f'suġġetti minn Messina, Palermo, u Caltanissetta.28 Rebbeck et al. qabel iddeskriva l-alterazzjoni c.5851_5854delAGTT fil-Kolombja.37 PV ieħor ta' BRCA2, c.631+1G>A, instab f'pazjenti BC u OC minn Sqallija (Agrigento, Siracusa u Ragusa).28 Ta' min jinnota li osservajna l-koeżistenza ta' żewġ varjanti ta' BRCA2 (BRCA2 c.631G>A u c.7008-2A>T) fl-istess pazjent, li assumejna li huma segregati fil-modalità cis, kif irrappurtat qabel b'dak il-mod.34,46 Dawn il-mutazzjonijiet BRCA2 huma tabilħaqq osservati ta' spiss fir-reġjun Taljan u nstabu li jintroduċu kodons ta' waqfien prematuri, li jaffettwaw it-tqattigħ tal-RNA tal-messaġġier u jikkawżaw li l-proteina BRCA2 tfalli.47,48
Immappjajna wkoll il-PVs ta' BRCA1 u BRCA2 f'reġjuni putattivi ta' OCCR u BCCR ta' dominji u ġeni tal-proteini. Dawn ir-reġjuni ġew deskritti minn Rebbeck et al. bħala żoni ta' riskju għall-iżvilupp ta' kanċer tal-ovarji u tas-sider, rispettivament.49 Madankollu, l-evidenza rigward l-assoċjazzjoni bejn il-post tal-varjanti tal-linja ġerminali u r-riskju ta' kanċer tas-sider jew tal-ovarji tibqa' kontroversjali.28,50-52 Fil-popolazzjoni tagħna, il-PVs ta' BRCA1 kienu predominantement jinsabu fir-reġjun BCCR, filwaqt li l-PVs ta' BRCA2 kienu predominantement jinsabu fir-reġjun OCCR. Madankollu, ma stajniex insibu xi assoċjazzjoni bejn ir-reġjuni putattivi ta' OCCR u BCCR u l-karatteristiċi tal-BC. Dan jista' jkun minħabba n-numru limitat ta' pazjenti b'mutazzjonijiet BRCA1/2. Mill-perspettiva tad-dominju tal-proteini, il-PVs ta' BRCA1 huma mqassma tul il-proteina kollha, u l-alterazzjonijiet ta' BRCA2 jinstabu preferenzjalment fid-dominju tar-ripetizzjoni tal-BRC.
Fl-aħħar nett, ikkorrelatajna l-karatteristiċi klinikopatoloġiċi tal-BC mal-BRCA1/2 PV. Minħabba n-numru limitat ta’ pazjenti inklużi, sibna biss korrelazzjoni sinifikanti bejn Ki-67 u l-grad tat-tumur. Għalkemm il-valutazzjoni u l-interpretazzjoni ta’ Ki-67 jibqgħu kemmxejn kontroversjali, huwa ċert li rati proliferattivi għoljin huma assoċjati ma’ riskju akbar ta’ rikorrenza tal-marda u sopravivenza mnaqqsa. Sal-lum, il-limitu għad-distinzjoni bejn Ki-67 “għoli” u “baxx” huwa ta’ 20%. Madankollu, dan il-limitu ma japplikax għall-popolazzjoni ta’ pazjenti bil-mutazzjoni BRCA1/2 tagħna, li għandha valur medjan ta’ Ki-67 ta’ 25%. Din ix-xejra fir-rati għoljin ta’ Ki-67 tista’ tiġi spjegata mill-prevalenza fil-koorti luminali B u TNBC tagħna, li minnhom kienu preżenti ftit tumuri luminali A. Madankollu, xi evidenza tidher li tissuġġerixxi li limitu ogħla ta’ Ki-67 (25–30%) jista’ jistratifika aħjar il-pazjenti skont il-pronjosi tagħhom.53,54 Mir-riżultati tal-analiżi tagħna, korrelazzjoni sinifikanti mhijiex sorprendenti. Isseħħ bejn gradi għoljin ta’ Ki-67 u l-preżenza ta’ BRCA1 PV. Fil-fatt, it-tumuri relatati ma' BRCA1 huma tipiċi ta' TNBC u juru karatteristiċi aktar aggressivi.16,17
Bħala konklużjoni, dan l-istudju jipprovdi rapport dwar l-istatus mutazzjonali ta' BRCA1/2 f'koorti tal-BC mil-Lvant ta' Sqallija. B'mod ġenerali, is-sejbiet tagħna huma konsistenti ma' evidenza pre-eżistenti, kemm f'termini ta' prevalenza tal-mutazzjoni kif ukoll ta' karatteristiċi klinikopatoloġiċi fil-BC. Aktar studji f'popolazzjonijiet akbar ta' pazjenti bil-BC b'mutazzjoni BRCA1/2, bħall-użu ta' analiżi mutazzjonali estiża b'ħafna ġenomi, huma meħtieġa biex jivvalutaw il-preżenza ta' PVs li huma distinti u inqas frekwenti minn BRCA1/2. Dan jippermetti l-identifikazzjoni u l-immaniġġjar xieraq tan-numru dejjem jikber ta' suġġetti f'riskju akbar ta' kanċer minħabba mutazzjonijiet ġenetiċi.
Ikkonfermajna li l-pazjenti ffirmaw kunsens infurmat biex jirrilaxxaw il-kampjuni tat-tumur tagħhom b'mod anonimu għal skopijiet ta' riċerka. Il-pazjenti kollha ffirmaw kunsens infurmat bil-miktub skont id-Dikjarazzjoni ta' Ħelsinki. Skont il-politika tal-AOU Policlinico "G. Rodolico - S. Marco", dan l-istudju kien eżentat minn reviżjoni etika għaliex l-analiżi BRCA1/2 twettqet skont il-prattika klinika u l-pazjenti kollha taw kunsens infurmat bil-miktub. Il-pazjenti jagħtu wkoll il-kunsens tagħhom għall-użu tad-dejta tagħhom għal skopijiet ta' riċerka.
Nirringrazzjaw lill-Prof. Paolo Vigneri għall-għajnuna tiegħu fil-kura ta' pazjenti bil-kanċer tas-sider kif mitlub mill-Kumitat tal-Etika.
Federica Martorana tirrapporta onorarja minn Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. L-awturi l-oħra jiddikjaraw li m’għandhom l-ebda kunflitt ta’ interess f’dan ix-xogħol.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Statistiċi Globali tal-Kanċer 2020: GLOBOCAN jistma l-inċidenza u l-mortalità ta' 36 kanċer f'185 pajjiż madwar id-dinja. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249. doi: 10.3322/caac.21660