Javascript is op it stuit útskeakele yn jo browser. Guon funksjes fan dizze webside sille net wurkje as javascript útskeakele is.
Registrearje mei jo spesifike gegevens en it spesifike medisyn fan belang en wy sille de ynformaasje dy't jo leverje oerienkomme mei artikels yn ús útwreide database en jo daliks in PDF-kopy e-postje.
Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L.
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 4 Catania, Catania, 95123, Itaalje;2 Sintrum foar eksperimintele onkology en hematology, AOU Policlinico "G.Rodolico - San Marco", Catania, 95123, Itaalje; 3 Medical Oncology, AOU Policlinico "G. Rodolico - San Marco", Catania, 95123, Itaalje; 4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Itaalje; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Itaalje; 6 Ofdieling Biomedyske en Biotechnologyske Wittenskippen, Universiteit fan Catania, Medyske Genetika, Catania, Itaalje, 95123; 7Oasi Undersyksynstitút-IRCCS, Troina, 94018, Itaalje Kommunikaasje: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, e-post [email protected]; [email protected] Doel: Kiemline-mutaasjes yn BRCA1 en BRCA2 en fêststelde boarstkanker (BC), eierstokkanker (OC) en oare kanker dy't ferbûn binne mei in libbenslang risiko op kanker. Testen foar it BRCA-gen is wichtich foar it beoardieljen fan yndividueel risiko, lykas foar it finen fan previnsjemetoaden by sûne dragers en it oanpassen fan behannelingen by kankerpasjinten. De prevalinsje fan BRCA1- en BRCA2-feroarings ferskilt sterk tusken geografyske regio's, en hoewol gegevens besteane oer BRCA-patogene farianten yn Sisyljaanske famyljes, ûntbrekke stúdzjes dy't spesifyk rjochte binne op populaasjes yn eastlik Sisylje. It doel fan ús stúdzje wie om de ynsidinsje en fersprieding fan BRCA-patogene kiemline-feroarings te ûndersykjen yn in kohort fan BC-pasjinten út eastlik Sisylje en om har assosjaasje mei spesifike BC-eigenskippen te beoardieljen mei help fan folgjende-generaasje-sekwinsje. De oanwêzigens fan feroarings korreleare mei tumorgraad en proliferaasje-yndeks. RESULTATEN: Oer it algemien hienen 35 pasjinten (9%) in BRCA-patogene fariant, 17 (49%) yn BRCA1 en 18 (51%) yn BRCA2. BRCA1-feroarings komme foar by trijefâldich negative BC-pasjinten, wylst BRCA2-mutaasjes faker foarkomme by luminale BC-pasjinten. Yn ferliking mei net-dragers, hienen ûnderwerpen mei BRCA1-farianten in signifikant hegere tumorgraad en proliferative yndeks. Konklúzjes: Us befiningen jouwe in oersjoch fan 'e BRCA-mutaasjestatus by BC-pasjinten út eastlik Sisylje en befêstigje de rol fan NGS-analyze by it identifisearjen fan pasjinten mei erflike BC. Oer it algemien binne dizze gegevens yn oerienstimming mei earder bewiis dat BRCA-screening stipet foar juste previnsje en behanneling fan kanker by mutaasjedragers.
Boarstkanker (BC) is de meast foarkommende maligniteit wrâldwiid en de deadlikste kanker by froulju.1 De biologyske skaaimerken dy't de BC-prognose en klinysk gedrach bepale, binne yn 'e rin fan' e tiid wiidweidich bestudearre en foar in part ferdúdlike. Eins wurde op it stuit ferskate surrogaatmarkers brûkt om BC te klassifisearjen yn ferskate molekulêre subtypen. Dat binne estrogen (ER) en/of progesteronreseptor (PgR), minsklike epidermale groeifaktorreseptor 2 (HER2) amplifikaasje, proliferaasje-yndeks Ki-67 en tumorgraad (G).2 De kombinaasje fan dizze fariabelen identifisearre de folgjende BC-kategoryen: 1) Luminale tumors, dy't ER- en/of PgR-ekspresje sjen litte, wiene ferantwurdlik foar 75% fan 'e BC's. Dizze tumors waarden fierder ferdield yn Luminal A, as Ki-67 ûnder 20% en HER2-negatyf wie, en Luminal B, as Ki-67 gelyk oan of boppe 20% wie en yn 'e oanwêzigens fan HER2-amplifikaasje, nettsjinsteande de proliferaasje-yndeks; 2) HER2+ tumors dy't ER- en PgR-negatyf binne, mar HER2-amplifikaasje sjen litte. Dizze groep makket 10% út fan alle boarsttumors; 3) Triple-negative boarstkanker (TNBC), dy't gjin ER- en PgR-ekspresje en HER2-amplifikaasje sjen lit, is ferantwurdlik foar sawat 15% fan boarstkankers.2-4
Under dizze BC-subtypen fertsjintwurdigje tumorgraad en proliferaasje-yndeks cross-sectionele biomarkers dy't direkt en ûnôfhinklik assosjeare binne mei tumoragressiviteit en prognose.5,6
Neist de neamde biologyske skaaimerken is de rol fan erflike genetyske feroarings dy't liede ta de ûntwikkeling fan boarstkanker de ôfrûne jierren hieltyd wichtiger wurden.7 Sawat 1 op de 10 boarsttumors wurdt erfd troch feroarings yn 'e kiemline yn spesifike genen.8 Twa grutte epidemiologyske stúdzjes mei mear as 180.000 froulju hawwe koartlyn in groep fan acht genen identifisearre (d.w.s. ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, en RAD51D) dy't primêr ferantwurdlik binne foar erflike boarstkanker. Under dizze genen lieten BRCA1 en BRCA2 (hjirnei oantsjutten as BRCA1/2) de sterkste korrelaasje sjen mei de ûntwikkeling fan boarsttumors.9-12 Eins ferheegje kiemline BRCA1/2-mutaasjes it libbenslange risiko op boarstkanker, lykas oare maligniteiten, signifikant, ynklusyf eierstok-, prostaat-, pankreas-, kolorektale en melanoma. Fan 'e leeftyd fan 13 oant 80 jier is de kumulative ynsidinsje fan boarstkanker 72% by froulju mei in BRCA1-patogene fariant (PV) en 69% by froulju mei in BRCA2- PV.14
It is opmerklik dat in resinte publikaasje suggerearret dat it risiko op BC ôfhinklik is fan it type PV. Eins binne, yn ferliking mei patogene ôfkoartende farianten, opfallende missense-farianten, benammen yn it BRCA1-gen, assosjeare mei in fermindere risiko op BC, benammen by âldere froulju.15
De oanwêzigens fan BRCA1- of BRCA2-PV waard assosjeare mei ferskate biologyske en klinysk-patologyske skaaimerken.16,17 BRCA1-assosjeare BC's binne faak klinysk agressyf, min differinsjearre en tige proliferatyf. Dizze tumors binne meastal trijefâldich negatyf en hawwe in jonge leeftyd fan oanset. Tumors dy't foarkomme by BRCA2-mutearre pasjinten litte typysk matige oant goed differinsjearre graden en fariabele proliferative yndeksen sjen. Dizze tumors komme faker foar yn lumen B en komme meastal foar by âldere folwoeksenen.16-18 It is opmerklik dat mutaasjes yn BRCA1 en BRCA2 de gefoelichheid foar spesifike behannelingen ferheegje, ynklusyf platinasâlt en rjochte medisinen lykas poly(ADP-ribose) polymerase-ynhibitoren (PARPi).19,20
Yn 'e ôfrûne jierren hat de ymplemintaasje fan next-generation sequencing (NGS) yn 'e klinyske praktyk in tanimmend oantal BC-pasjinten yn steat steld om molekulêre testen te ûndergean foar kankergefoelichheidssyndromen, ynklusyf BRCA1/2.21 Tagelyk wurde definysjes basearre op krekte kritearia oangeande famyljeskiednis, demografyske en klinysk-patologyske skaaimerken brûkt om yndividuen dy't BRCA1/2-testen wurdich binne better te identifisearjen.22,23 Yn dizze kontekst sammelet bewiis him op oer BRCA1/2-screening yn spesifike populaasjes, wat ferskillen tusken geografyske regio's markearret.24–27 Hoewol d'r rapporten binne oer de BC-kohort yn westlik Sisylje, binne minder gegevens beskikber oer BRCA1/2-screening yn 'e befolking fan eastlik Sisylje.28,29
Wy beskriuwe hjir de resultaten fan screening op kiemline BRCA1/2 by BC-pasjinten út eastlik Sisylje, en korrelearje fierder de oanwêzigens fan BRCA1- of BRCA2-mutaasjes mei de wichtichste klinysk-patologyske skaaimerken fan dizze tumors.
In retrospektive stúdzje waard útfierd yn it "Sintrum foar Eksperimintele Onkology en Hematology" yn it Policlinico Sikehûs. Rodolico - San Marco yn Catania. Fan jannewaris 2017 oant maart 2021 waarden yn totaal 455 pasjinten mei boarst- en eierstokkanker, melanoma, pankreas- of prostaatkanker ferwiisd nei ús molekulêr diagnostysk laboratoarium foar BRCA/2 genetyske testen. Dizze stúdzje waard útfierd yn oerienstimming mei de Ferklearring fan Helsinki, en alle dielnimmers joegen skriftlike ynformearre tastimming foarôfgeand oan molekulêre analyze.
Histologyske en biologyske skaaimerken (ER, PgR, HER2-status, Ki-67, en graad) fan BC waarden beoardiele op kearnbiopsie of sjirurgyske samples, wêrby't allinich agressive tumorkomponinten waarden beskôge. Op basis fan dizze skaaimerken waarden BC's as folget klassifisearre: luminaal A (ER+ en/of PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminaal B (ER+ en/of PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminaal B-HER2+ (ER en/of PgR+, HER2+), HER2+ (ER en PgR-, HER2+) of trijefâldich negatyf (ER en PgR-, HER2-).
Foardat de BRCA1- en BRCA2-mutaasjestatus beoardiele waard, fierde in multidissiplinêr team mei in onkolooch, in genetikus en in psycholooch in oerlis oer tumorgenetika út foar elke pasjint om de oanwêzigens fan BRCA1 en/of BRCA1 te bepalen, of persoanen mei in heech risiko op PV yn it BRCA2-gen. Pasjinteseleksje waard útfierd neffens de rjochtlinen fan 'e Italiaanske Feriening foar Medyske Onkology (AIOM) en lokale Sisyljaanske oanbefellings.30,31 Dizze kritearia omfetsje: (i) famyljeskiednis fan bekende patogene farianten yn gefoelichheidsgenen (bygelyks BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) manlju mei boarstkanker; (iii) dyjingen mei boarstkanker en OC; (iv) froulju mei boarstkanker <36 jier, TNBC <60 jier, of bilaterale boarstkanker <50 jier; (v) persoanlike medyske skiednis fan boarstkanker <50 jier en teminsten ien earstegraads famyljelid: (a) boarstkanker < 50 jier; (b) net-mucineuze en net-borderline OC fan elke leeftyd; (c) bilaterale boarstkanker; (d) manlike boarstkanker; (e) pankreaskanker; (f) prostaatkanker; (vi) twa of mear Persoanlike skiednis fan BC > 50 jier en famyljeskiednis fan BC, OC, of ​​pankreaskanker foar sibben dy't earstegraads sibben fan elkoar binne (ynklusyf sibben mei wa't sy earstegraads sibben is); (vii) Persoanlike skiednis fan OC en teminsten ien earstegraads sibben: (a) BC <50 jier; (b) NOC; (c) bilateraal BC; (d) manlike BC; (vii) frou mei heechgradige sereuze OC.
In perifeare bloedmonster fan 20 mL waard fan elke pasjint nommen en sammele yn EDTA-buisjes (BD Biosciences). Genomysk DNA waard isolearre út 0,7 mL folsleine bloedmonsters mei de QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italië) neffens de ynstruksjes fan 'e fabrikant en troch in Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Feriene Steaten) laat. Fier kwantifikaasje út. Doelferriking en bibleteektarieding wurde útfierd troch de Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, klear om te wurden laden yn 'e Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit foar automatisearre bibleteektarieding neffens de ynstruksjes fan 'e fabrikant. De kit bestiet út twa multiplex PCR-primerpools dy't brûkt wurde kinne om alle BRCA1 (NM_007300.3) en BRCA2 (NM_000059.3) genen te bestudearjen. Koartsein, 15 µL fan elk ferdund sample-DNA (10 ng) waard tafoege oan barcodeplaten foar bibleteektarieding en alle reagentia en konsumpsjeartikelen waarden laden op it Ion Chef™-ynstrumint. Automatisearre bibleteektarieding en barcode-samplebibleteekpooling waarden doe útfierd op it Ion Chef™-ynstrumint. It oantal taret bibleteken waard doe beoardiele troch in Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, FS) neffens de ynstruksjes fan 'e fabrikant. Uteinlik wurde bibleteken kombineare yn lykmolêre ferhâldingen yn Ion Chef™ bibleteeksamplebuizen (barcode buizen) en laden op it Ion Chef™-ynstrumint. Sekwinsje waard útfierd mei in Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) ynstrumint (Thermo Fisher Scientific) mei in Ion 510 Chip (Thermo Fisher Scientific). Gegevensanalyse waard útfierd mei Amplicon Suite (SmartSeq srl) en Ion Reporter Software.
Alle fariantnomenklatuer folge de hjoeddeiske rjochtlinen fan it Human Genome Variation Consortium, dy't online beskikber binne (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). De klinyske betsjutting fan BRCA1/2-farianten waard definiearre mei de klassifikaasje fan it International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) en it rieplachtsjen fan ferskate databases lykas ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, en UMD. De klassifikaasje omfettet fiif ûnderskate risikokategoryen: goedaardich (kategory I), wierskynlik goedaardich (kategory II), fariant fan ûnwisse betsjutting (VUS, kategory III), wierskynlik pathogeen (kategory IV), en pathogeen (kategory V). Guon analysearren ek it effekt fan mutaasjes op proteïnestruktuer en -funksje, in ynformatyf ark mei tagong ta 30 databases.32
Om potinsjele klinyske betsjutting ta te kennen oan elke VUS, waarden de folgjende komputasjonele proteïnefoarsizzingsalgoritmen brûkt: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) en Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Farianten klassifisearre as klasse 1 en 2 waarden beskôge as wyldtype.
Sanger-sekwinsjering befêstige de oanwêzigens fan elke patogene fariant. Koartsein, in pear spesifike primers waarden ûntworpen foar elke detektearre fariant mei help fan 'e BRCA1- en BRCA2-genreferinsjesekwinsjes (NG_005905.2, NM_007294.3 en NG_012772.3, NM_000059.3, respektivelik). Dêrom waard rjochte PCR útfierd folge troch Sanger-sekwinsjering.
Pasjinten dy't negatyf testen foar it BRCA1/2-gen waarden test troch multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) neffens de ynstruksjes fan 'e fabrikant om de oanwêzigens fan grutte genomyske rearrangements (LGR) te beoardieljen. Koartsein, DNA-samples wurde denaturearre en oant 60 BRCA1- en BRCA2-genspesifike probes wurde brûkt, elk dy't in spesifike DNA-sekwinsje fan sawat 60 nukleotiden lang detektearret. Probe-amplifikaasjeprodukten, besteande út in unike set PCR-amplikons, waarden doe analysearre troch kapillêre elektroforese en troch Cofalyser.Net-software yn kombinaasje mei de passende batchspesifike Cofalyser-tabellen (www.mrcholland.com).
Selektearre klinysk-patologyske fariabelen (histologyske graad en Ki-67% proliferaasje-yndeks) wiene assosjeare mei de oanwêzigens fan BRCA1/2 PV, berekkene mei de Prism-software v. 8.4 mei de krekte test fan Fisher, wêrby't oannommen waard dat p-wearde <0.05 signifikant wie.
Tusken jannewaris 2017 en maart 2021 waarden 455 pasjinten screene op kiemline BRCA1/2-mutaasjes. Mutaasjetests waarden útfierd yn it Sintrum foar Eksperimintele Onkology en Hematology fan it Policlinico Sikehûs. Neffens de Sisyljaanske rjochtline (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), wiene yn 'e Rodolico fan Catania - San Marco" yn totaal 389 pasjinten. D'r wiene boarstkanker, 37 eierstokkanker, 16 pankreaskanker, 8 prostaatkanker en 5 melanoma. De ferdieling fan pasjinten neffens kankertype en analyseresultaten wurdt werjûn yn figuer 1.
Figuer 1 lit in flowchart sjen dy't in oersjoch fan 'e stúdzje sjen lit. Pasjinten mei boarst-, melanoma-, pankreas-, prostaat- of eierstoktumoren waarden test op mutaasjes yn 'e BRCA1- en BRCA2-genen.
Ofkoartings: PV's, patogene fariant; VUS, fariant fan ûnwisse betsjutting; WT, wild-type BRCA1/2-sekwinsje.
Wy hawwe ús stúdzjes selektyf rjochte op boarstkankerkohorten. De pasjinten hienen in mediane leeftyd fan 49 jier (berik 23-89) en wiene foaral froulju (n = 376, of 97%).
Fan dizze ûnderwerpen hienen 64 (17%) BRCA1/2-mutaasjes en wiene allegear froulik. Fiifentritich (9%) hienen PV en 29 (7,5%) hienen VUS. Santjin (48,6%) fan 'e 35 patogene farianten kamen foar yn BRCA1 en 18 (51,4%) yn BRCA2, wylst 5 VUS foarkamen yn BRCA1 (17,2%) en 24 (82,8%) yn BRCA2 (Ofbyldings 1 en 2). LGR wie net oanwêzich yn 'e MLPA-analyze.
Figuer 2. Analyse fan BRCA1- en BRCA2-mutaasjes yn 389 boarstkankerpasjinten. (A) Ferdieling fan patogene farianten (PV) (read), farianten fan ûnwisse betsjutting (VUS) (oranje), en WT (blau) yn 389 boarstkankerpasjinten; (B) 389 boarstkankerpasjinten Fiifentritich (9%) hienen BRCA1/2 patogene farianten (PV's). Under harren wiene 17 (48,6%) BRCA1 PV-dragers (donkerread) en 18 (51,4%) wiene BRCA2-dragers (ljochtread); (C) 29 (7,5%) fan 389 ûnderwerpen droegen VUS, 5 (17,2%) BRCA1-genen (donkeroranje) en 24 (82,8%) BRCA2-genen (ljochtoranje).
Ofkoartings: PV's, patogene fariant; VUS, fariant fan ûnwisse betsjutting; WT, wild-type BRCA1/2-sekwinsje.
Wy hawwe dêrnei de prevalinsje fan molekulêre subtypen fan BC ûndersocht by pasjinten mei BRCA1/2 PV. De ferdieling omfette 2 (5,7%) luminale A, 15 (42,9%) luminale B, 3 (8,6%) luminale B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ en 13 (37,1%) TNBC-pasjinten. Under BRCA1-positive pasjinten hienen 5 (29,4%) luminale B BC, 2 (11,8%) hienen HER2+ sykte, en 10 (58,8%) hienen TNBC. Tumoren sûnder BRCA1-mutaasjes wiene of luminale A of luminale B-HER2+ (Ofbylding 3). Yn 'e BRCA2-positive subgroep wiene 10 (55,6%) tumoren luminale B, 3 (16,7%) wiene luminale B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC en 2 (11,1%) wiene luminale A (Ofbylding 3). Gjin HER2+ tumors wiene oanwêzich yn dizze groep. Sa binne BRCA1-mutaasjes faak foarkommend by TNBC-pasjinten, wylst BRCA2-feroarings oerhearskjend binne by lumen B-yndividuen.
Figuer 3 Prevalinsje fan boarstkankersubtypen by pasjinten mei patogene farianten yn BRCA1 en BRCA2. Histogrammen dy't de ferdieling fan BRCA1- (donkerread) en BRCA2- (ljochtread) PV's sjen litte ûnder molekulêre subtypen fan boarstkankerpasjinten. De sifers dy't yn elk fakje rapportearre wurde, fertsjintwurdigje it persintaazje pasjinten mei BRCA1- en BRCA2-PV foar elk boarstkankersubtype.
Ofkoartings: PV's, patogene fariant; HER2+, minsklike epidermale groeifaktorreseptor 2 posityf; TNBC, triple-negative boarstkanker.
Dêrnei hawwe wy it type en de genlokalisaasje fan BRCA1- en BRCA2-PV's beoardiele. Yn BRCA1-PV hawwe wy 7 ienkele nukleotidefarianten (SNV's), 6 deleasjes, 3 duplikaasjes en 1 ynfoeging waarnommen. Allinnich ien mutaasje (c.5522delG) fertsjintwurdiget in nije ûntdekking. De meast foarkommende BRCA1-PV dy't yn beide ûnderwerpen ûntdutsen waard, wie c.5035_5039delCTAAT. Dizze feroaring omfettet in deleasje fan fiif nukleotiden (CTAAT) yn BRCA1-ekson 15, wat resulteart yn 'e ferfanging fan it aminosoer leucine troch tyrosine by kodon 1679, en troch in oersettingsframeshift mei in foarsein alternatyf stopkodon liedt dit ta te betiid ôfkoarten fan proteïne. Alle oare feroarings wurde mar yn ien gefal ûntdutsen. It is opmerklik dat ien fan 'e rapportearre PV's yn 'e splice-side-konsensusregio lei (c.4357+1G>T) (Tabel 1).
Oangeande BRCA2 PV hawwe wy 6 deleasjes, 6 SNV's en 2 duplikaasjes waarnommen. Gjin fan 'e fûne feroarings binne nij. Trije mutaasjes kamen werom yn ús populaasje, c.428dup en c.8487+1G>A waarnommen yn 3 ûnderwerpen, folge troch c.5851_5854delAGTT weromhelle yn twa gefallen. De c.428dup-feroaring omfettet in werhelling fan C yn ekson 5 fan BRCA2, foarsein om in ôfkoarte, net-funksjonele proteïne te kodearjen. De c.8487+1G>A-mutaasje komt foar yn 'e intronyske regio fan BRCA2 intron 19 (± 1,2) en beynfloedet de splicing-konsensussekwinsje, wat resulteart yn feroare splicing dy't resulteart yn abnormaal of ôfwêzich proteïne. De c.5851_5854delAGTT patogene fariant is te tankjen oan in 4-nukleotiden-deleasje fan nukleotidenposysjes 5851 oant 5854 yn it kodearjende ekson 10 fan it BRCA2-gen en resulteart yn in translasjonele frameshift mei in foarsein alternatyf stopkodon (p.S1951WfsTer). Opmerklik is, lykas earder rapportearre, dat beide feroarings c.631G>A en c.7008-2A>T by deselde pasjint waarden ûntdutsen.34 De earste mutaasje omfettet de ferfanging fan adenosine (A) yn BRCA2 exon 7 mei in guanine (G) befetsjende nukleotide, wat resulteart yn in feroaring fan valine nei isoleucine by kodon 211. Isoleucine-aminosoer is in aminosoer mei tige ferlykbere eigenskippen. Dizze feroaring beynfloedet normale mRNA-splicing. De twadde fariant leit yn in intronyske regio en resulteart yn in dûbele A nei thymine (T)-substituasje foar exon 13 fan it gen dat kodearret foar BRCA2. De c.7008-2A>T-feroaring kin meardere transkripten fan ferskillende lingten generearje. Fierder wiene yn 'e groep fan BRCA2 PV's 4 fan de 18 feroarings (22,2%) intronysk.
Wy hawwe doe skealike mutaasjes fan BRCA1/2 yn kaart brocht yn funksjonele domeinen en proteïne-binende regio's (Fig. 4). Yn it BRCA1-gen wiene 50% fan 'e PV's yn 'e boarstkankerklusterregio (BCCR), wylst 22% fan 'e mutaasjes yn 'e eierstokkankerklusterregio (OCCR) wiene (Fig. 4A). Yn BRCA2 PV wiene 35,7% fan 'e farianten yn 'e BCCR-regio en 42,8% fan 'e mutaasjes yn 'e OCCR (Fig. 4B). Folgjende hawwe wy de lokaasje fan PV binnen de BRCA1- en BRCA2-proteïnedomeinen beoardiele. Foar it BRCA1-proteïne fûnen wy trije PV's yn 'e loop- en coiled coil-domeinen, en twa mutaasjes yn it BRCT-domein (Fig. 4A). Foar it BRCA2-proteïne wiene 4 PV's yn kaart brocht nei it BRC-werhellingsdomein, wylst 3 intronyske en 3 eksonyske feroarings waarden ûntdutsen yn 'e oligo/oligosaccharide-binende (OB) en toer (T) domeinen (Figuer 4B).
Figuer 4 Skematyske werjefte fan BRCA1- en BRCA2-proteinen en lokalisaasje fan patogene farianten. Dizze figuer lit de ferdieling sjen fan patogene farianten fan BRCA1 (A) en BRCA2 (B) by boarstkankerpasjinten. Eksonyske mutaasjes wurde werjûn yn blau, wylst intronyske farianten yn oranje wurde werjûn. De balkehichte fertsjintwurdiget it oantal gefallen. De BRCA1- en BRCA2-proteinen en har funksjonele domeinen wurde rapportearre. (A) It BRCA1-protein befettet in lusdomein (RING) en in nukleêre lokalisaasjesekwinsje (NLS), in coiled-coil-domein, in SQ/TQ-klusterdomein (SCD), en in BRCA1 C-terminal domein (BRCT). (B) It BRCA2-protein befettet acht BRC-herhellings, in DNA-binend domein mei in helikaal domein (Helical), trije oligonukleotiden/oligosaccharide-binende (OB) plooien, in toerdomein (T), en in NLS oan 'e C-kant. Gebieten neamd de boarstkankerklusterregio (BCCR) en eierstokkankerklusterregio (OCCR) wurde ûnderoan werjûn. *Fertsjintwurdiget mutaasjes dy't stop bepale kodons.
Wy hawwe doe klinysk-patologyske skaaimerken fan BC ûndersocht dy't mooglik korrelearje mei de oanwêzigens fan BRCA1/2 PV. Folsleine klinyske records wiene beskikber foar 181 BRCA1/2-negative pasjinten (gjin dragers) en alle dragers (n = 35). Der wie in korrelaasje tusken tumorproliferaasjesnelheid en graad.
Wy hawwe de ferdieling fan Ki-67 berekkene op basis fan 'e mediaan fan ús kohort (25%, berik <10-90%). Underwerpen mei Ki-67 < 25% waarden definiearre as "lege Ki-67", wylst yndividuen mei wearden ≥ 25% waarden beskôge as "hege Ki-67". Signifikante Ki-67 ferskillen (p<0.01) waarden fûn tusken net-dragers en BRCA1 PV-dragers (Fig. 5A).
Figuer 5 Korrelaasje fan Ki-67 mei graadferdieling by froulju mei boarstkanker mei en sûnder BRCA1- en BRCA2-PV's. (A) Boxplot dy't mediane Ki-67-wearden sjen lit by 181 net-drager BC-pasjinten versus BRCA1 (18) of BRCA2 (17) PV-pasjinten. P-wearden ûnder 0,5 waarden as statistysk signifikant beskôge. (B) Histogram dat de yndieling fan BC-kankerpasjinten yn histologyske graadgroepen (G2 en G3) fertsjintwurdiget neffens BRCA1- en BRCA2-mutaasjestatus (WT-ûnderwerpen, BRCA1- en BRCA2-PV-dragers).
Likegoed hawwe wy ûndersocht oft tumorgraad korrelearre mei de oanwêzigens fan BRCA1/2 PV. Omdat G1 BC net oanwêzich wie yn ús populaasje, hawwe wy de pasjinten yn twa groepen ferdield (G2 of G3). Yn oerienstimming mei de Ki-67-resultaten liet de analyze in statistysk signifikante korrelaasje sjen tusken tumorgraad en BRCA1-mutaasje, mei in heger persintaazje G3-tumoren yn BRCA1-dragers yn ferliking mei net-dragers (p < 0,005) (Ofbylding 5B).
Foarútgong yn DNA-sekwinsjetechnology hat noch nea earder sjoen foarútgong yn BRCA1/2 genetyske testen mooglik makke, mei krúsjale gefolgen foar pasjinten mei in famyljeskiednis fan kanker. Oant no ta binne sawat 20.000 BRCA1/2 farianten identifisearre en klassifisearre neffens de American Society of Medical Genetics 35 en it ENIGMA-systeem. 35,36 It is bekend dat it BRCA1/2 mutaasjespektrum sterk ferskilt tusken geografyske regio's. 37 Binnen Itaalje fariearre it taryf fan BRCA1/2 PV's fan 8% oant 37%, wat in brede intralânske fariaasje sjen lit. 38,39 Mei in befolking fan hast 5 miljoen is Sisylje de fyfde grutste regio yn Itaalje yn termen fan it oantal ynwenners. Hoewol gegevens besteane oer de fersprieding fan BRCA1/2 yn westlik Sisylje, is d'r gjin wiidweidich bewiis yn it eastlike diel fan it eilân.
Us stúdzje is ien fan 'e earste rapporten oer de ynsidinsje fan BRCA1/2 PV by BC-pasjinten yn eastlik Sisylje.28 Wy hawwe ús analyze rjochte op BC, om't dit fierwei de meast foarkommende sykte is yn ús kohort.
By it testen fan 389 BC-pasjinten, droegen 9% BRCA1/2 PV's, lykwichtich ferdield tusken BRCA1 en BRCA2. Dizze resultaten binne yn oerienstimming mei dy earder rapportearre yn 'e Italjaanske befolking.28 Nijsgjirrich is dat 3% (13/389) fan ús kohort manlju wiene. Dit taryf is heger as ferwachte foar manlike boarstkanker (1% fan alle BC's),40 wat ús seleksje fan populaasjes reflektearret op basis fan BRCA1/2-mutaasjerisiko. Gjin fan dizze manlju ûntwikkele lykwols in BRCA1/2 PV, dus se wiene kandidaten foar fierdere molekulêre analyze om de oanwêzigens fan minder foarkommende mutaasjes lykas PALB2, RAD51C en D, ûnder oaren, út te sluten. Farianten fan ûnwisse betsjutting waarden weromfûn yn 7% fan 'e ûnderwerpen wêryn BRCA2 VUS dúdlik wie. Sels dit resultaat is yn oerienstimming mei besteand bewiis.28,41,42
Doe't wy de ferdieling fan molekulêre subtypen fan BC yn froulju mei BRCA1/2-mutanten analysearren, befêstigen wy bekende assosjaasjes tusken TNBC en BRCA1 PV (58,8%) en tusken luminale B BC en BRCA2 PV (55,6%).16,43 De luminale A- en HER2+ tumors yn BRCA1- en BRCA2 PV-dragers binne yn oerienstimming mei besteande literatuergegevens.16,43
Wy rjochtsje ús dan op it type en de lokaasje fan 'e BRCA1/2 PV. Yn ús kohort wie de meast foarkommende BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT. Hoewol Incorvaia et al. dizze fariant net beskreaun hawwe yn harren Sisyljaanske kohort, hawwe oare auteurs it rapportearre as in kiemline BRCA1 PV.34 Ferskate BRCA1 PV's waarden fûn yn ús kohort - bygelyks c.181T>G, c.514del, c.3253dupA en c.5266dupC - dy't yn Sisylje waarnommen binne.28 Hjirfan wurde twa BRCA1-oprjochtersmutaasjes (c.181T>G en c.5266dupC) faak fûn yn Ashkenazyske Joaden fan East- en Sintraal-Jeropa (Poalen, Tsjechysk), Sloveensk, Eastenryksk, Hongaarsk, Wyt-Russysk en Dútsk), 44,45 en, yn 'e Feriene Steaten en Argentynje, waard koartlyn definiearre as in "weromkommende kiemlinefariant" yn Italjaanske pasjinten mei BC en OC. De 34c.514del fariant waard earder identifisearre yn 8 boarstkankerpasjinten út noardlik Sisylje yn Palermo en Messina. Nijsgjirrich is dat sels Incorvaia et al. fûn de c.3253dupA-fariant yn guon famyljes yn Catania.28 De meast represintative BRCA2 PV's binne c.428dup, c.5851_5854delAGTT en de intronyske fariant c.8487+1G>A, dy't yn mear detail rapportearre binne 28 by in pasjint yn Palermo mei c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV waard waarnommen yn húshâldens yn noardwestlik Sisylje, benammen yn 'e regio's Trapani en Palermo, wylst c.5851_5854delAGTT PV waard waarnommen yn húshâldens yn noardwestlik Sisylje. De 8487+1G>A-fariant kaam faker foar by ûnderwerpen út Messina, Palermo en Caltanissetta.28 Rebbeck et al. earder de c.5851_5854delAGTT-feroaring yn Kolombia beskreaun.37 In oare BRCA2 PV, c.631+1G>A, is fûn by BC- en OC-pasjinten út Sisylje (Agrigento, Siracusa en Ragusa).28 It is opmerklik dat wy it koëksistinsje fan twa BRCA2-farianten (BRCA2 c.631G>A en c.7008-2A>T) by deselde pasjint waarnommen hawwe, dy't wy oannamen dat se segregearre wiene yn cis-modus, lykas earder sa rapportearre.34,46 Dizze BRCA2-uble-mutaasjes wurde yndie faak waarnommen yn 'e Italjaanske regio en it is fûn dat se te betiid stopkodons yntrodusearje, dy't ynfloed hawwe op messenger RNA-splicing en feroarsaakje dat it BRCA2-proteïne mislearret.47,48
Wy hawwe ek BRCA1- en BRCA2-PV's yn kaart brocht yn fertochte OCCR- en BCCR-regio's fan proteïnedomeinen en genen. Dizze regio's waarden troch Rebbeck et al. beskreaun as risikogebieten foar it ûntwikkeljen fan eierstok- en boarstkanker, respektivelik.49 It bewiis oangeande de assosjaasje tusken de lokaasje fan kiemlinefarianten en it risiko op boarst- of eierstokkanker bliuwt lykwols kontroversjeel.28,50-52 Yn ús populaasje wiene BRCA1-PV's foaral yn 'e BCCR-regio, wylst BRCA2-PV's foaral yn 'e OCCR-regio wiene. Wy koene lykwols gjin assosjaasje fine tusken fertochte OCCR- en BCCR-regio's en BC-funksjes. Dit kin te tankjen wêze oan it beheinde oantal pasjinten mei BRCA1/2-mutaasjes. Fanút in proteïnedomeinperspektyf binne BRCA1-PV's ferspraat oer it heule proteïne, en BRCA2-feroarings wurde by foarkar fûn yn it BRC-werhellingsdomein.
Uteinlik hawwe wy klinysk-patologyske skaaimerken fan BC korrelearre mei BRCA1/2 PV. Fanwegen it beheinde oantal pasjinten dat opnommen is, hawwe wy allinich in wichtige korrelaasje fûn tusken Ki-67 en tumorgraad. Hoewol de beoardieling en ynterpretaasje fan Ki-67 wat kontroversjeel bliuwt, is it wis dat hege proliferative tariven ferbûn binne mei in ferhege risiko op weromkommen fan 'e sykte en fermindere oerlibjen. Oant no ta is de grinswearde foar it ûnderskieden tusken "hege" en "lege" Ki-67 20%. Dizze drompel jildt lykwols net foar ús BRCA1/2-mutaasjepasjintenpopulaasje, dy't in mediane Ki-67-wearde fan 25% hat. Dizze trend yn hege Ki-67-tariven kin ferklearre wurde troch de prevalinsje yn ús luminale B- en TNBC-kohorten, wêrfan mar in pear luminale A-tumoren oanwêzich wiene. Guon bewiis liket lykwols te suggerearjen dat in hegere Ki-67-grinswearde (25–30%) pasjinten better kin stratifisearje neffens har prognose.53,54 Ut 'e resultaten fan ús analyze is in wichtige korrelaasje net ferrassend. Komt foar tusken hege Ki-67- en tumorgraden en de oanwêzigens fan BRCA1 PV. Eins binne BRCA1-relatearre tumors typysk foar TNBC en litte se agressiver skaaimerken sjen.16,17
Konklúzjend jout dizze stúdzje in rapport oer de mutaasjestatus fan BRCA1/2 yn in BC-kohort út eastlik Sisylje. Oer it algemien binne ús befiningen yn oerienstimming mei besteand bewiis, sawol yn termen fan mutaasjeprevalinsje as klinysk-patologyske skaaimerken yn BC. Mear stúdzjes yn gruttere populaasjes fan BRCA1/2-mutante BC-pasjinten, lykas it brûken fan multigenome útwreide mutaasje-analyze, binne rjochtfeardige om de oanwêzigens fan PV's te beoardieljen dy't ûnderskiedend en minder faak binne as BRCA1/2. Dit sil de identifikaasje en juste behanneling mooglik meitsje fan it tanimmende oantal ûnderwerpen mei in ferhege risiko op kanker fanwegen genetyske mutaasjes.
Wy hawwe befêstige dat pasjinten ynformearre tastimming tekene hawwe om har tumormonsters anonym frij te jaan foar ûndersyksdoelen. Alle pasjinten tekene skriftlike ynformearre tastimming neffens de Ferklearring fan Helsinki. Neffens it belied fan AOU Policlinico "G.Rodolico - S.Marco" waard dizze stúdzje frijsteld fan etyske beoardieling, om't de BRCA1/2-analyze útfierd waard neffens klinyske praktyk en alle pasjinten skriftlike ynformearre tastimming joegen. Pasjinten jouwe ek tastimming foar it gebrûk fan har gegevens foar ûndersyksdoelen.
Wy tankje prof. Paolo Vigneri foar syn bystân by de soarch foar boarstkankerpasjinten lykas frege troch de Etyske Kommisje.
Federica Martorana rapportearret honoraria fan Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. De oare auteurs ferklearje gjin belangekonflikten yn dit wurk.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN skat de ynsidinsje en mortaliteit fan 36 kankersoarten yn 185 lannen oer de hiele wrâld. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249. doi: 10.3322/caac.21660