Häzirki wagtda brauzeriňizde Javascript öçürilen. Bu web sahypasynyň käbir aýratynlyklary Javascript öçürilende işlemez.
Öz maglumatlaryňyzy we gyzyklanýan dermanyňyzy ýazyň, biz siziň beren maglumatyňyzy giň maglumatlar bazamyzdaky makalalar bilen deňeşdireris we derrew PDF nusgasyny size e-poçta arkaly ibereris.
作者 Stella S, Witale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silwia Rita Witale, 1,2 Federika Martorana, 1,2 Mişel Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marko Fichera, 6, Livia Manzella1, 21 Italiýa; 2 tejribe onkologiýasy we gematologiýa merkezi, “G.Rodoliko - San Marko” AOU Polikliniko, Kataniýa, 95123, Italiýa; 3 Lukmançylyk onkologiýasy, AOU Polikliniko “G. Rodoliko - San Marko”, Kataniýa, 95123, Italiýa; 4 Lukmançylyk genetikasy, ARNAS Garibaldi, Kataniýa, 95123, Italiýa; 5 Medisina genetikasy, ASP, Sirakuza, 96100, Italiýa; 6 Biolukmançylyk we biotehnologiýa ylymlary bölümi, Kataniýa uniwersiteti, Lukmançylyk genetikasy, Kataniýa, Italiýa, 95123; 7Oasi ylmy-barlag instituty-IRCCS, Troina, 94018, Italiýa Aragatnaşyk: Stefaniýa Stella, tel +39 095 378 1946, e-poçta [email protected]; [email protected] Maksat: BRCA1 we BRCA2-de germline mutasiýalary we ömürboýy rak howpy bilen baglanyşykly döş raky (BC), ýumurtgalyk (OC) we beýleki rak kesellerinde ýüze çykan mutasiýalar. BRCA genini barlamak şahsy howpy bahalandyrmak, şeýle hem sagdyn göterijilerde öňüni alyş usullaryny tapmak we rak hassalarynda bejergileri sazlamak üçin möhümdir. BRCA1 we BRCA2 üýtgeşmeleriniň ýaýrawy geografik sebitlerde dürli-dürli bolýar we Sisiliýa maşgalalarynda BRCA patogen görnüşleri barada maglumatlar bar bolsa-da, gündogar Sisiliýadaky ilata gönükdirilen gözlegler ýetmezçilik edýär. Biziň gözlegimiziň maksady gündogar Sisiliýadan gelen BC hassalarynyň toparynda BRCA patogen germline üýtgeşmeleriniň ýüze çykmagyny we ýaýramagyny öwrenmek we olaryň indiki nesil yzygiderligini ulanyp, BC-niň belli alamatlary bilen baglanyşygyny bahalandyrmakdy. Üýtgeşmeleriň bolmagy şiş derejesi we köpelme indeksi bilen baglanyşyklydyr. NETIJELER: Umuman, 35 hassada (9%) BRCA patogen görnüşi, 17-sinde (49%) BRCA1-de we 18-inde (51%) BRCA2-de bardy. BRCA1 üýtgeşmeleri üçlü negatiwde giňden ýaýrandyr. BC hassalarynda, BRCA2 mutasiýalary bolsa lüminal BC hassalarynda has köp duş gelýär. Daşaýjy bolmadyk adamlar bilen deňeşdirilende, BRCA1 görnüşleri bolan adamlarda şiş derejesi we proliferasiýa indeksi has ýokary boldy. Netijeler: Biziň netijelerimiz gündogar Sisiliýadan bolan BC hassalarynda BRCA mutasiýa ýagdaýynyň umumy synyny berýär we irsi BC hassalaryny anyklamakda NGS analiziniň roluny tassyklaýar. Umuman, bu maglumatlar mutasiýa daşaýjylarynda rak keseliniň dogry öňüni almak we bejermek üçin BRCA skriningini goldaýan öňki subutnamalar bilen gabat gelýär.
Süýt mäziniň rak keseli (SR) dünýäde iň köp ýaýran howply täze kesel we aýallarda iň ölüm howply täze keseldir.1 SR-iň prognozyny we kliniki özüni alyp barşyny kesgitleýän biologik aýratynlyklar wagtyň geçmegi bilen giňişleýin öwrenildi we bölekleýin düşündirildi. Aslynda, häzirki wagtda SR-i dürli molekulýar kiçi görnüşlere bölmek üçin birnäçe surrogat markerler ulanylýar. Olar estrogen (ER) we/ýa-da progesteron reseptory (PgR), adam epidermal ösüş faktory reseptory 2-niň (HER2) güýçlenmegi, proliferasiýa indeksi Ki-67 we şiş derejesi (G).2 Bu üýtgeýänleriň utgaşmasy aşakdaky SR kategoriýalaryny kesgitledi: 1) ER we/ýa-da PgR ekspresiýasyny görkezýän lümen şişleri SR-leriň 75% -ini düzdi. Bu şişler Ki-67 20% -den aşak we HER2 negatiw bolanda Luminal A we proliferasiýa indeksine garamazdan Ki-67 20% -e deň ýa-da ondan ýokary bolanda we HER2 güýçlenmegi bolanda Luminal B-e bölündi; 2) ER we PgR negatiw, ýöne HER2 güýçlenmegini görkezýän HER2+ şişleri. Bu topar ähli süýt bezi şişleriniň 10% -ni düzýär; 3) ER we PgR ekspresiýasyny we HER2 güýçlenmegini görkezmeýän üçlü negatiw süýt bezi raky (TNBC) süýt bezi rakynyň takmynan 15% -ni düzýär.2-4
Bu BC kiçi görnüşleriniň arasynda şişiň derejesi we köpelme indeksi şişiň agressiwligi we prognozy bilen gönüden-göni we garaşsyz baglanyşykly kesişen biomarkerleri görkezýär.5,6
Ýokarda agzalan biologik aýratynlyklardan başga-da, soňky birnäçe ýylyň dowamynda BS-iň ösmegine getirýän miras galan genetiki üýtgeşmeleriň roly barha möhümleşýär.7 Süýt mäziniň her 10 şişiniň 1-si belli genlerdäki jyns agzalarynyň üýtgeşmeleri sebäpli miras galýar.8 180,000-den gowrak aýaly öz içine alýan iki uly epidemiologik barlag ýakynda irsi BS-e esasen jogapkär bolan sekiz geniň toparyny (ýagny ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C we RAD51D) anyklady. Bu genleriň arasynda BRCA1 we BRCA2 (mundan beýläk BRCA1/2 diýlip atlandyrylýar) süýt mäziniň şişleriniň ösmegi bilen iň güýçli arabaglanyşygy görkezdi.9-12 Aslynda, jyns agzalarynda BRCA1/2 mutasiýalary BS-iň, şeýle hem ýumurtgalyk, prostata, aşgazanasty mäziniň, göni içege we melanoma ýaly beýleki howply täze döremeleriň ömürlik töwekgelçiligini ep-esli ýokarlandyrýar. 13 ýaşdan 80 ýaşa çenli BRCA1 patogen görnüşi (PV) bolan aýallarda BS-iň umumy ýüze çykmagy 72% -e deňdir we BRCA2 PV.14 bolan aýallarda 69%
Belli bir zat, ýakynda çap edilen bir neşirde BC töwekgelçiliginiň PV görnüşine baglydygy aýdylýar. Aslynda, patogen kesiji wariantlar bilen deňeşdirilende, esasanam BRCA1 geninde göze ilýän missense wariantlar, esasanam gartaşan aýallarda BC töwekgelçiliginiň peselmegi bilen baglanyşyklydyr.15
BRCA1 ýa-da BRCA2 PV-niň bolmagy dürli biologik we kliniki-patologiki aýratynlyklar bilen baglanyşyklydy.16,17 BRCA1 bilen baglanyşykly BC-ler kliniki taýdan agressiw, pes tapawutlanýan we ýokary derejede köpelýän bolmaga meýilli. Bu şişler adatça üç esse negatiw bolýar we irki ýaşda başlaýar. BRCA2 mutasiýa geçiren näsaglarda ýüze çykýan şişler, adatça, orta we gowy tapawutlanan derejeleri we üýtgeýän köpelýän görkezijileri görkezýär. Bu şişler B lümeninde has köp duş gelýär we adatça uly ýaşly adamlarda ýüze çykýar.16-18 Belli bir zat, BRCA1 we BRCA2-däki mutasiýalar platina duzlary we poli(ADP-riboza) polimeraza ingibitorlary (PARPi) ýaly maksatly dermanlar ýaly belli bir bejergilere duýgurlygy ýokarlandyrýar.19,20
Soňky birnäçe ýylyň dowamynda kliniki tejribede indiki nesil yzygiderliliginiň (NGS) ornaşdyrylmagy, BRCA1/2.21 ýaly rak keseline duçar bolýan sindromlar üçin molekulýar synagdan geçmäge mümkinçilik berdi. Şol bir wagtyň özünde, maşgala taryhy, demografik we kliniki patologiki häsiýetler baradaky takyk ölçeglere esaslanýan kesgitlemeler BRCA1/2 synagyna mynasyp adamlary has gowy kesgitlemek üçin ulanylýar.22,23 Şu kontekstde, belli bir ilatlarda BRCA1/2 barlagy barada subutnamalar toplanýar we geografik sebitlerdäki tapawutlary görkezýär.24–27 Günbatar Sisiliýada BC kohortasy barada hasabatlar bar bolsa-da, gündogar Sisiliýa ilatynda BRCA1/2 barlagy barada az maglumat bar.28,29
Biz bu ýerde gündogar Sisiliýadan bolan BC hassalarynda BRCA1/2 germinal skrininginiň netijelerini beýan edýäris, bu bolsa BRCA1 ýa-da BRCA2 mutasiýalarynyň bardygyny bu şişleriň esasy kliniki-patologiki aýratynlyklary bilen has-da baglanyşdyrýar.
Kataniýadaky Rodoliko – San Marko şäherindäki Polikliniko hassahanasynyň “Eksperimental Onkologiýa we Gematologiýa Merkezinde” retrospektiw gözleg geçirildi. 2017-nji ýylyň ýanwaryndan 2021-nji ýylyň martyna çenli BRCA/2 genetiki barlaglary üçin süýt we ýumurtgalyk, melanoma, aşgazanasty bezi ýa-da prostata rak keselinden ejir çekýän jemi 455 hassa molekulýar diagnostika laboratoriýamyza ugradyldy. Bu gözleg Helsinki Jarnamasyna laýyklykda geçirildi we ähli gatnaşyjylar molekulýar analizden öň ýazmaça maglumatly razylyk berdiler.
BC-niň gistologiki we biologiki häsiýetnamalary (ER, PgR, HER2 ýagdaýy, Ki-67 we derejesi) diňe agressiw şiş böleklerini göz öňünde tutup, esasy biopsiýada ýa-da hirurgiki nusgalarda bahalandyryldy. Bu häsiýetlere esaslanyp, BC-ler aşakdaky ýaly klassifikasiýa edildi: lüminal A (ER+ we/ýa-da PgR+, HER2-, Ki-67<20%), lüminal B (ER+ we/ýa-da PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), lüminal B-HER2+ (ER we/ýa-da PgR+, HER2+), HER2+ (ER we PgR-, HER2+) ýa-da üç esse negatiw (ER we PgR-, HER2-).
BRCA1 we BRCA2 mutasiýasynyň ýagdaýyny baha bermezden öň, onkolog, genetik we psihologdan ybarat köpugurly topar her bir hassa üçin BRCA1 we/ýa-da BRCA1-iň bardygyny ýa-da BRCA2 geninde PV howpy ýokary bolan şahslary kesgitlemek üçin şiş genetikasy boýunça maslahat geçirdi. Hassalary saýlamak Italiýanyň Lukmançylyk Onkologiýasy Jemgyýetiniň (AIOM) görkezmelerine we ýerli Sisiliýanyň maslahatlaryna laýyklykda geçirildi.30,31 Bu ölçegler aşakdakylary öz içine alýar: (i) duýgurlyk genlerinde belli patogen wariantlaryň maşgala taryhy (meselem, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) BC bilen erkekler; (iii) BC we OC bilen bolanlar; (iv) BC <36 ýaş, TNBC <60 ýaş ýa-da ikitaraplaýyn BC <50 ýaş bolan aýallar; (v) BC <50 ýaş we azyndan bir birinji derejeli garyndaşyň şahsy lukmançylyk taryhy: (a) BC <50 ýaş; (b) islendik ýaşdaky musinoz däl we serhetsiz OC; (c) ikitaraplaýyn BC; (d) erkek BS; (e) aşgazanasty rak keseli; (f) prostata rak keseli; (vi) iki ýa-da ondan köp BS-iň şahsy taryhy > 50 ýyl we biri-birine birinji derejeli garyndaş bolan garyndaşlary üçin BS, OC ýa-da aşgazanasty rak keseliniň maşgala taryhy (şol sanda onuň birinji derejeli garyndaş bolan garyndaşlary); (vii) OK-iň şahsy taryhy we azyndan bir birinji derejeli garyndaş: (a) BS <50 ýyl; (b) NOK; (c) ikitaraplaýyn BS; (d) erkek BS; (vii) ýokary derejeli seroz OK bolan aýal.
Her bir hassadan 20 ml periferik gan nusgasy alnyp, EDTA turbalaryna (BD Biosciences) ýygnaldy. Öndürijiniň görkezmelerine laýyklykda, QIAsymphony DSP DNA Midi kit Izolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italiýa) ulanylyp, 0,7 ml tutuş gan nusgalaryndan genom DNK bölünip alyndy we Qubit® 3.0 Fluorometrinden (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABŞ) geçirildi. Mukdar kesgitlemesini ýerine ýetiriň. Nyşana baýlaşdyrmak we kitaphana taýýarlamak Oncomine™ BRCA Research Assay Chef tarapyndan ýerine ýetirilýär, öndürijiň görkezmelerine laýyklykda awtomatlaşdyrylan kitaphana taýýarlamak üçin Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 toplumyna ýüklenmäge taýýar. Toplum ähli BRCA1 (NM_007300.3) we BRCA2 (NM_000059.3) genlerini öwrenmek üçin ulanylyp bilinýän iki multipleks PCR praýmer howuzundan ybarat. Gysgaça aýdylanda, her bir suwuklandyrylan nusga DNK-nyň 15 µL-i (10 ng) kitaphana taýýarlamak üçin ştrih-kodly plastinkalara goşuldy we ähli reagentler we sarp ediş materiallary Ion Chef™ guralyna ýüklendi. Soňra awtomatlaşdyrylan kitaphana taýýarlamak we ştrih-kodly nusga kitaphanasynyň birleşmesi Ion Chef™ guralynda ýerine ýetirildi. Soňra taýýarlanan kitaphanalaryň sany öndürijiň görkezmelerine laýyklykda Qubit® 3.0 Fluorometri (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABŞ) arkaly kesgitlenildi. Ahyrsoňy, kitaphanalar Ion Chef™ kitaphana nusga turbalarynda ekwimolýar gatnaşyklarda birleşdirilýär. (ştrih kodly turbalar) we Ion Chef™ guralyna ýüklendi. Yzygiderlilik Ion 510 Çipi (Thermo Fisher Scientific) ulanylyp Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) guraly (Thermo Fisher Scientific) arkaly ýerine ýetirildi. Maglumatlaryň seljermesi Amplicon Suite (SmartSeq srl) we Ion Reporter Software tarapyndan ýerine ýetirildi.
Ähli wariant nomenklaturasy internetde elýeterli bolan Adam Genomynyň Üýtgeşiklik Konsorsiumynyň häzirki görkezmelerine eýerdi (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). BRCA1/2 wariantlarynyň kliniki ähmiýeti Halkara Konsorsium ENIGMA (Germline Mutant Allellerini Interpretasiýa etmek üçin Subutnama Esasy Tor, https://enigmaconsortium.org/) klassifikasiýasyny we ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD we UMD ýaly dürli maglumat bazalaryna seretmegi ulanyp kesgitlenildi. Klassifikasiýa bäş aýry töwekgelçilik kategoriýasyny öz içine alýar: zyýansyz (I kategoriýa), ähtimal zyýansyz (II kategoriýa), näbelli ähmiýetli wariant (VUS, III kategoriýa), ähtimal zyýanly (IV kategoriýa) we zyýanly (V kategoriýa).VarSome şeýle hem 30 maglumat bazasyna elýeterli maglumat beriji gural bolan belogyň gurluşyna we işine mutasiýalaryň täsirini seljerdi.32
Her bir VUS-a potensial kliniki ähmiýet bermek üçin aşakdaky hasaplama beloklaryny çaklama algoritmleri ulanyldy: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) we Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). 1-nji we 2-nji synp hökmünde klassifikasiýa edilen wariantlar ýabany görnüş hasaplandy.
Sanger yzygiderliligi her bir patogen görnüşiň bardygyny tassyklady. Gysgaça aýdylanda, BRCA1 we BRCA2 genleriniň salgylanma yzygiderlilikleri (degişlilikde NG_005905.2, NM_007294.3 we NG_012772.3, NM_000059.3) ulanylyp, her bir anyklanan görnüş üçin bir jübüt ýörite praýmerler döredildi. Şonuň üçin maksatly PCR we soňra Sanger yzygiderliligi geçirildi.
BRCA1/2 geni üçin negatiw synag netijesi bolan näsaglar, uly genom üýtgeşmeleriniň (LGR) bardygyny kesgitlemek üçin öndürijiň görkezmelerine laýyklykda multipleks ligasiýa bagly zond güýçlendirmesi (MLPA) arkaly synagdan geçirildi. Gysgaça aýdylanda, DNK nusgalary denaturasiýa edilýär we 60-a çenli BRCA1 we BRCA2 genine mahsus zondlar ulanylýar, olaryň her biri takmynan 60 nukleotid uzynlygyndaky belli bir DNK yzygiderliligini anyklaýar. Soňra özboluşly PCR amplikonlaryndan ybarat bolan zond güýçlendirme önümleri kapillýar elektroforez we degişli tapgyra mahsus Cofalyser tablisalary bilen bilelikde Cofalyser.Net programma üpjünçiligi arkaly seljerildi (www.mrcholland.com).
Saýlanan kliniki-patologiki üýtgeýjiler (gistologik dereje we Ki-67% proliferasiýa indeksi) BRCA1/2 PV-niň bolmagy bilen baglanyşykly boldy, bu bolsa p-bahasynyň <0.05 ähmiýetlidigini göz öňünde tutup, Fişeriň takyk synagyny ulanyp, Prism programma üpjünçiliginiň v. 8.4 ulanylyşynda hasaplanyldy.
2017-nji ýylyň ýanwaryndan 2021-nji ýylyň martyna çenli 455 hassada BRCA1/2 jyns mutasiýalary barlanyldy. Mutasiýa synagy Polikliniko hassahanasynyň Eksperimental Onkologiýa we Gematologiýa Merkezinde geçirildi. Sisiliýa gollanmasyna (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Yanvar 2020) laýyklykda, Kataniýanyň Rodolikosy – San Marko” jemi 389 hassany öz içine aldy. Süýt mäziniň rak keselinden 37, ýumurtgalyk rak keselinden 16, aşgazanasty mäziniň rak keselinden 8, prostata mäziniň rak keselinden 5 we melanoma keselinden 5 hassany öz içine aldy. Rak keseliniň görnüşine we analiz netijelerine görä hassalaryň paýlanyşy 1-nji suratda görkezilen.
1-nji suratda gözlegiň umumy syny görkezilen akym diagrammasy görkezilýär. Süýt, melanoma, aşgazanasty bezi, prostata ýa-da ýumurtgalyk şişleri bolan näsaglar BRCA1 we BRCA2 genlerinde mutasiýalara synagdan geçirildi.
Gysgaltmalar: PV, patogen görnüşi; VUS, belli bolmadyk ähmiýetli görnüşi; WT, ýabany görnüşli BRCA1/2 yzygiderliligi.
Biz gözleglerimizi süýt mäziniň rak keseliniň kohortalaryna saýlama görnüşde gönükdirdik. Näsaglaryň ortaça ýaşy 49 ýaş (23-89 aralygy) we olaryň köpüsi zenanlardan ybaratdy (n=376 ýa-da 97%).
Bu synp gatnaşyjylarynyň 64-sinde (17%) BRCA1/2 mutasiýalary bardy we olaryň hemmesi zenanlardan ybaratdy. Otuz bäşinde (9%) PV, 29-synda (7.5%) VUS bardy. 35 patogen görnüşiň on ýedisi (48.6%) BRCA1-de, 18-i (51.4%) BRCA2-de ýüze çykdy, VUS bolsa BRCA1-de (17.2%) we 24-si (82.8%) BRCA2-de ýüze çykdy (1-nji we 2-nji suratlar). LGR MLPA analizinde ýokdy.
2-nji surat. 389 süýt mäziniň rak keselinden ejir çekýän hassalarda BRCA1 we BRCA2 mutasiýalarynyň seljermesi.(A) 389 süýt mäziniň rak keselinden ejir çekýän hassalarda patogen wariantlaryň (PV) (gyzyl), belli bolmadyk ähmiýetli wariantlaryň (VUS) (mämişi) we WT-niň (gök) paýlanyşy; (B) 389 süýt mäziniň rak keselinden ejir çekýän hassalar Otuz bäşinde (9%) BRCA1/2 patogen wariantlary (PV) bardy. Olaryň arasynda 17-si (48,6%) BRCA1 PV göterijileri (gara gyzyl) we 18-si (51,4%) BRCA2 göterijileri (açyk gyzyl) boldy; (C) 389 adamyň 29-sy (7,5%) VUS, 5-si (17,2%) BRCA1 genleri (gara mämişi) we 24-si (82,8%) BRCA2 genleri (açyk mämişi) bardy.
Gysgaltmalar: PV, patogen görnüşi; VUS, belli bolmadyk ähmiýetli görnüşi; WT, ýabany görnüşli BRCA1/2 yzygiderliligi.
Soňra biz BRCA1/2 PV-li näsaglarda BC molekulýar alt görnüşleriniň ýaýraýşyny öwrendik. Paýlanma 2 (5.7%) luminal A, 15 (42.9%) luminal B, 3 (8.6%) luminal B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ we 13 (37.1%) TNBC näsaglaryny öz içine aldy. BRCA1-pozitiw näsaglaryň arasynda 5 (29.4%) luminal B BC, 2 (11.8%) HER2+ keseli we 10 (58.8%) TNBC bardy. BRCA1 mutasiýalary bolmadyk şişler ýa luminal A ýa-da luminal B-HER2+ boldy (3-nji surat). BRCA2-pozitiw alt toparda 10 (55.6%) şiş luminal B, 3 (16.7%) luminal B-HER2+, 3 (16.7%) TNBC we 2 (11.1%) lümen A (3-nji surat). Bu toparda HER2+ şişleri ýokdy. Şeýlelik bilen, BRCA1 mutasiýalary TNBC näsaglarynda agdyklyk edýär, BRCA2 üýtgemeleri bolsa lümen B şahslarynda agdyklyk edýär.
3-nji surat BRCA1 we BRCA2-de patogen görnüşleri bolan näsaglarda süýt mäziniň rak keseliniň alt görnüşleriniň ýaýraýşy. Süýt mäziniň rak keseliniň molekulýar alt görnüşleriniň arasynda BRCA1- (gara gyzyl) we BRCA2- (açyk gyzyl) PV-leriň paýlanyşyny görkezýän gistogrammalar. Her gutuda görkezilen sanlar her bir süýt mäziniň alt görnüşi üçin BRCA1 we BRCA2 PV-li näsaglaryň göterimini görkezýär.
Gysgaltmalar: PV, patogen görnüşi; HER2+, adam epidermal ösüş faktorynyň reseptory 2 pozitiw; TNBC, üçlü negatiw süýt mäziniň rak keseli.
Soňra, biz BRCA1 we BRCA2 PV-leriniň görnüşini we gen lokalizasiýasyny bahaladyk. BRCA1 PV-de biz 7 sany ýeke nukleotid wariantyny (SNV), 6 delesiýany, 3 dublikatlamany we 1 insersiýany synladyk. Diňe bir mutasiýa (c.5522delG) täze açyşy görkezýär. Iki subýektde hem ýüze çykarylan iň köp duş gelýän BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT boldy. Bu üýtgeşme BRCA1 ekzon 15-de bäş nukleotidiň (CTAAT) delesiýasyny öz içine alýar, bu bolsa 1679 kodonda aminokislota leýsiniň tirozin bilen çalşylmagyna we öňünden çaklanylýan alternatiw stop kodon bilen terjime ramkasynyň üýtgemegi sebäpli belogyň wagtyndan öň kesilmegine getirýär. Beýleki ähli üýtgeşmeler diňe bir ýagdaýda ýüze çykarylýar. Belli bir zat, habar berlen PV-leriň biri splaýs ýeriniň konsensus sebitinde ýerleşýärdi (c.4357+1G>T) (1-nji tablisa).
BRCA2 PV barada aýdylanda, biz 6 delesiýany, 6 SNV-ni we 2 dublikatlamany synladyk. Tapylan üýtgeşmeleriň hiç biri täze däl. Biziň populýasiýamyzda üç mutasiýa gaýtalandy, 3 synagda c.428dup we c.8487+1G>A syn edildi, soňra iki ýagdaýda c.5851_5854delAGTT alyndy. c.428dup üýtgeşmesi BRCA2-niň 5-nji ekzonynda C-niň gaýtalanmagyny öz içine alýar, onuň kesilen, işlemeýän belogy kodlaýandygy çak edilýär. c.8487+1G>A mutasiýa BRCA2 intron 19-yň intron sebitinde (± 1,2) ýüze çykýar we splaýsing konsensus yzygiderliligine täsir edýär, netijede üýtgeşik splaýsing bolýar we netijede belogyň anomaliýasyna ýa-da ýoklugyna getirýär. c.5851_5854delAGTT patogen görnüşi BRCA2-niň 10-njy kodlaýjy ekzonynda 5851-den 5854-e çenli nukleotid pozisiýalaryndan 4-nukleotid delesiýasy bilen baglanyşyklydyr. gen we öňünden habar berlişi ýaly, c.631G>A we c.7008-2A>T üýtgeşmeleriniň ikisi hem şol bir hassada ýüze çykaryldy.34 Birinji mutasiýa BRCA2 ekzon 7-de adenoziniň (A) guanin (G) bilen çalşyrylmagyny öz içine alýar, bu bolsa nukleotidi öz içine alýan guanin (G) bilen netijede 211 kodonda waliniň izoleýsine üýtgemegine getirýär, izoleýsin Aminokislota örän meňzeş häsiýetlere eýe bolan aminokislotadyr. Bu üýtgeşme kadaly mRNA birleşmesine täsir edýär. Ikinji wariant intron sebitde ýerleşýär we BRCA2 kodlaýan geniň 13-nji ekzonyndan öň A-nyň timin (T) bilen goşa çalşylmagyna getirýär. c.7008-2A>T üýtgeşmesi dürli uzynlykdaky köp sanly transkriptleri döredip biler. Mundan başga-da, BRCA2 PV toparynda 18 üýtgeşmäniň 4-si (22,2%) intronikdi.
Soňra biz funksional domenlerde we belok baglanyş sebitlerinde BRCA1/2 zyýanly mutasiýalaryny kartalaşdyrdyk (4-nji surat). BRCA1 geninde PV-leriň 50% -i süýt mäziniň rak klaster sebitinde (BCCR), mutasiýalaryň 22% -i bolsa ýumurtgalyk rak klaster sebitinde (OCCR) ýerleşýärdi (4A surat). BRCA2 PV-de wariantlaryň 35,7% -i BCCR sebitinde we mutasiýalaryň 42,8% -i OCCR-de ýerleşýärdi (4B surat). Soňra biz PV-niň BRCA1 we BRCA2 belok domenlerinde ýerleşýän ýerini bahaladyk. BRCA1 belogy üçin biz halka we spiral spiral domenlerinde üç PV we BRCT domeninde iki mutasiýa tapdyk (4A surat). BRCA2 belogy üçin BRC gaýtalanýan domenine 4 PV kartalaşdyryldy, şol bir wagtyň özünde 3 intronik we 3 ekzonik üýtgeşmeler anyklandy. oligo/oligosaharid bilen baglanyşýan (OB) we diň (T) domenleri (4B surat).
4-nji surat BRCA1 we BRCA2 beloklarynyň shematiki görkezilişi we patogen wariantlaryň ýerleşişi. Bu suratda BRCA1 (A) we BRCA2 (B) patogen wariantlarynyň süýt mäziniň rak keselinden ejir çekýän hassalarda paýlanyşy görkezilýär. Ekzon mutasiýalary gök reňkde, intron wariantlary bolsa mämişi reňkde görkezilýär. Çyzygyň beýikligi ýagdaýlaryň sanyny görkezýär. BRCA1 we BRCA2 beloklary we olaryň funksional domenleri habar berilýär.(A) BRCA1 belogy halka domenini (RING) we ýadro lokalizasiýa yzygiderliligini (NLS), spiral spiral domenini, SQ/TQ klaster domenini (SCD) we BRCA1 C-terminal domenini (BRCT) öz içine alýar.(B) BRCA2 belogy sekiz BRC gaýtalanmasyny, spiral domenli DNK-baglanyşyk domenini (Spiral), üç oligonukleotid/oligosaharid baglanyşyk domenini (OB), diň domenini (T) we C tarapynda NLS-i öz içine alýar. Süýt mäziniň rak klaster sebiti (BCCR) we ýumurtgalyk rak klasteri diýlip atlandyrylýan sebitler. Aşakda sebit (OCCR) görkezilýär. *Stop kodonlaryny kesgitleýän mutasiýalary görkezýär.
Soňra biz BRCA1/2 PV-niň bolmagy bilen baglanyşykly bolup biljek BC kliniki-patologiki aýratynlyklaryny öwrendik. 181 BRCA1/2-negatiw hassalar (daşyryjy däl) we ähli daşaýjylar (n = 35) üçin doly kliniki ýazgylar elýeterlidi. Şişiň köpelme tizligi bilen derejesi arasynda özara baglanyşyk bardy.
Biz Ki-67-niň paýlanyşyny öz kohortamyzyň medianasyna esaslanyp hasapladyk (25%, aralygy <10-90%). Ki-67 < 25% bolan subýektler "pes Ki-67" hökmünde kesgitlenildi, gymmaty ≥ 25% bolan şahslar bolsa "ýokary Ki-67" hasaplandy. Daşaýjy däl we BRCA1 PV daşaýjylarynyň arasynda Ki-67-niň möhüm tapawutlary (p<0.01) tapyldy (5A surat).
5-nji surat. BRCA1 we BRCA2 PV-leri bolan we bolmadyk süýt mäziniň rak keselinden ejir çekýän aýallarda Ki-67-niň dereje paýlanyşy bilen özara baglanyşygy.(A) 181 BC daşaýjy bolmadyk hassalarda BRCA1 (18) ýa-da BRCA2 (17) PV hassalaryna garşy ortaça Ki-67 gymmatlyklaryny görkezýän gutu diagrammasy. 0,5-den aşak P gymmatlyklary statistik taýdan ähmiýetli hasaplandy.(B) BC rak keselinden ejir çekýän hassalaryň BRCA1 we BRCA2 mutasiýa ýagdaýyna görä (WT subýektleri, BRCA1 we BRCA2 PV daşaýjylary) gistologik dereje toparlaryna (G2 we G3) bölünmegini görkezýän gistogramma.
Şeýle hem, biz şiş derejesiniň BRCA1/2 PV-niň bolmagy bilen baglanyşyklydygyny ýa-da däldigini barladyk. Biziň ilatymyzda G1 BC ýok bolany üçin, biz näsaglary iki topara böldik (G2 ýa-da G3). Ki-67 netijelerine laýyklykda, derňew şiş derejesi bilen BRCA1 mutasiýasynyň arasynda statistik taýdan ähmiýetli arabaglanyşygy ýüze çykardy, BRCA1 göterijilerde G3 şişleriniň paýy göterijiler dällere garanyňda has ýokarydy (p<0.005) (5B surat).
DNK yzygiderligi tehnologiýasyndaky ösüşler BRCA1/2 genetiki synaglarynda öň görülmedik ösüşlere mümkinçilik berdi we maşgalasynda rak keseliniň taryhy bolan näsaglar üçin möhüm ähmiýete eýe boldy. Häzirki güne çenli Amerikan Lukmançylyk Genetika Jemgyýetiniň 35 we ENIGMA ulgamyna laýyklykda takmynan 20.000 BRCA1/2 warianty anyklandy we klassifikasiýa edildi.35,36 BRCA1/2 mutasiýa spektriniň geografik sebitlerde giňden üýtgeýändigi mälim.37 Italiýanyň içinde BRCA1/2 PV-leriniň derejesi 8% -den 37% -e çenli bolup, ýurduň içinde giň üýtgeşikligi görkezýär.38,39 Takmynan 5 million ilaty bolan Sisiliýa Italiýanyň ýaşaýjylarynyň sany boýunça bäşinji uly sebitidir. Günbatar Sisiliýada BRCA1/2-niň ýaýrawy barada maglumatlar bar bolsa-da, adanyň gündogar böleginde giňişleýin subutnama ýok.
Biziň gözlegimiz gündogar Sisiliýada BC hassalarynda BRCA1/2 PV-niň ýüze çykmagy baradaky ilkinji hasabatlaryň biridir.28 Biz seljermämizi BC-e gönükdirdik, sebäbi bu biziň kohortamyzda iň köp duş gelýän kesel.
389 sany BC hassasyny synagdan geçirende, 9% -inde BRCA1/2 PV bardy, olar BRCA1 we BRCA2 arasynda deň derejede paýlanyldy. Bu netijeler italýan ilatynda öň habar berlen netijeler bilen gabat gelýär.28 Gyzykly tarapy, biziň kohortamyzyň 3% -i (13/389) erkeklerdi. Bu görkeziji erkekleriň süýt mäziniň rak keselinde garaşylýandan ýokary (ähli BC-leriň 1%),40 bu bolsa BRCA1/2 mutasiýa töwekgelçiligine esaslanýan ilaty saýlamagymyzy görkezýär. Şeýle-de bolsa, bu erkekleriň hiç birinde BRCA1/2 PV döremedi, şonuň üçin olar PALB2, RAD51C we D ýaly seýrek duş gelýän mutasiýalaryň bardygyny aradan aýyrmak üçin goşmaça molekulýar seljerme üçin dalaşgärlerdi. BRCA2 VUS-yň ýüze çykan subýektleriň 7% -inde belli bolmadyk ähmiýetli wariantlar tapyldy. Bu netije hem öňünden bar bolan subutnamalara gabat gelýär.28,41,42
BRCA1/2 mutant aýallarda BC molekulýar alt görnüşleriniň paýlanyşyny seljerenimizde, TNBC we BRCA1 PV (58.8%) we lüminal B BC we BRCA2 PV (55.6%) arasyndaky belli baglanyşygy tassykladyk.16,43 BRCA1 we BRCA2 PV göterijilerindäki lüminal A we HER2+ şişleri bar bolan edebiýat maglumatlaryna gabat gelýär.16,43
Soňra biz BRCA1/2 PV-niň görnüşine we ýerleşýän ýerine ünsi jemleýäris. Biziň kohortamyzda iň köp duş gelýän BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT boldy. Emma Incorvaia we beýlekiler... bu görnüşi özleriniň Sisiliýa kohortasynda beýan etmediler, beýleki awtorlar ony BRCA1 PV jyns agzasy hökmünde habar berdiler.34 Biziň kohortamyzda birnäçe BRCA1 PV tapyldy - mysal üçin, Sisiliýada syn edilen c.181T>G, c.514del, c.3253dupA we c.5266dupC.28 Bularyň arasynda iki sany BRCA1 esaslandyryjy mutasiýalary (c.181T>G we c.5266dupC) Gündogar we Merkezi Ýewropanyň (Polşa, Çehiýa), Sloweniýanyň, Awstriýanyň, Wengriýanyň, Belarusyň we Germaniýanyň) Aşkenazi ýewreýlerinde, 44,45 we ABŞ-da we Argentinada ýakynda BC we OC bilen kesellän italýan hassalarynda "gaýtalanýan jyns agzasynyň görnüşi" hökmünde kesgitlendi. 34c.514del görnüşi ozal Palermo we Messinada demirgazyk Sisiliýadan gelen 8 süýt mäziniň rak keselinden ejir çekýän hassada anyklanyldy. Gyzykly tarapy, hatda Incorvaia we beýlekiler hem... Kataniýadaky käbir maşgalalarda c.3253dupA wariantyny tapdy.28 BRCA2 PV-leriniň iň wekilçiliklileri c.428dup, c.5851_5854delAGTT we introniki wariant c.8487+1G>A bolup, olar has jikme-jik beýan edildi 28 Palermoda c.428dup, c.5851_5854delAGTT bolan hassada PV demirgazyk-günbatar Sisiliýadaky öý hojalyklarynda, esasan Trapani we Palermo sebitlerinde syn edildi, şol bir wagtyň özünde c.5851_5854delAGTT PV demirgazyk-günbatar Sisiliýadaky öý hojalyklarynda syn edildi. 8487+1G>A warianty Messina, Palermo we Caltanissettadaky adamlarda has köp duş gelýärdi.28 Rebbeck we beýlekiler. öň Kolumbiýada c.5851_5854delAGTT üýtgeşmesini beýan edipdi.37 Başga bir BRCA2 PV, c.631+1G>A, Sisiliýadan gelen BC we OC hassalarynda (Agrigento, Sirakuza we Ragusa) tapyldy.28 Belli bir zat, biz şol bir hassada iki sany BRCA2 görnüşiniň (BRCA2 c.631G>A we c.7008-2A>T) bile ýaşamagyny synladyk, olar öň şeýle habar berlişi ýaly, cis režiminde bölünen diýip çakladyk.34,46 Bu BRCA2 mutasiýalary hakykatdanam Italiýa sebitinde ýygy-ýygydan syn edilýär we wagtyndan öň stop kodonlaryny girizýändigi, habarçy RNK birleşmesine täsir edýändigi we BRCA2 belogynyň şowsuzlygyna sebäp bolýandygy anyklandy.47,48
Şeýle hem, belok domenleriniň we genleriniň çaklanylýan OCCR we BCCR sebitlerinde BRCA1 we BRCA2 PV-lerini kartalaşdyrdyk. Bu sebitler Rebbeck we beýlekiler tarapyndan degişlilikde ýumurtgalyk we süýt mäziniň rak keseliniň döremeginiň töwekgelçilik sebitleri hökmünde beýan edildi.49 Şeýle-de bolsa, jyns agzalarynyň görnüşleriniň ýerleşýän ýeri bilen süýt mäziniň ýa-da ýumurtgalyk rak keseliniň töwekgelçiligi arasyndaky baglanyşyk baradaky subutnamalar jedelli bolmagynda galýar.28,50-52 Biziň ilatymyzda BRCA1 PV-leri esasan BCCR sebitinde ýerleşýärdi, BRCA2 PV-leri bolsa esasan OCCR sebitinde ýerleşýärdi. Şeýle-de bolsa, çaklanylýan OCCR we BCCR sebitleri bilen BC alamatlarynyň arasynda hiç hili baglanyşyk tapyp bilmedik. Bu BRCA1/2 mutasiýalary bolan näsaglaryň sanynyň çäkli bolmagy bilen baglanyşykly bolup biler. Belok domeni nukdaýnazaryndan, BRCA1 PV-leri tutuş belok boýunça paýlanýar we BRCA2 üýtgeşmeleri BRC gaýtalanýan domeninde has köp duş gelýär.
Ahyrsoňy, biz BC kliniki patologiki aýratynlyklaryny BRCA1/2 PV bilen baglanyşdyrdyk. Goşulan hassalaryň sanynyň çäkli bolmagy sebäpli, biz diňe Ki-67 bilen şiş derejesi arasynda möhüm arabaglanyşygy tapdyk. Ki-67-niň bahalandyrylmagy we düşündirilmegi birneme jedelli bolmagynda galsa-da, ýokary proliferasiýa derejeleriniň keseliň gaýtalanma töwekgelçiliginiň ýokarlanmagy we ýaşaýşyň peselmegi bilen baglanyşyklydygy anykdyr. Häzirki güne çenli "ýokary" we "pes" Ki-67-ni tapawutlandyrmak üçin çäklendirme 20% -e deňdir. Şeýle-de bolsa, bu bosaga BRCA1/2 mutasiýaly hassalarymyza degişli däl, olaryň ortaça Ki-67 bahasy 25% -e deňdir. Ki-67-niň ýokary derejelerindäki bu meýil, lüminal B we TNBC kohortlarymyzda ýaýramak bilen düşündirilip bilner, olaryň arasynda lüminal A şişleri azdy. Şeýle-de bolsa, käbir subutnamalar Ki-67-niň ýokary çäginiň (25–30%) hassalary olaryň prognozyna görä has gowy gatlaklaşdyryp biljekdigini görkezýär.53,54 Seljermemiziň netijelerinden möhüm arabaglanyşygyň bolmagy geň däl. Ki-67-niň ýokary derejesi bilen derejeleriň we bolmagynyň arasynda ýüze çykýar. BRCA1 PV. Aslynda, BRCA1 bilen baglanyşykly şişler TNBC-niň tipik görnüşi bolup, has agressiw alamatlary görkezýär.16,17
Netijede, bu gözleg gündogar Sisiliýadan gelen BC kohortasynda BRCA1/2-niň mutasiýa ýagdaýy barada hasabat berýär. Umuman alanyňda, biziň netijelerimiz BC-de mutasiýalaryň ýaýramagy we kliniki patologiki aýratynlyklary babatda öňden bar bolan subutnamalara laýyk gelýär. BRCA1/2-mutant BC hassalarynyň has uly populýasiýalarynda has köp gözleg geçirmek, meselem, köpgenomly giňeldilen mutasiýa analizini ulanmak, BRCA1/2-den tapawutly we seýrek duş gelýän PV-leriň bardygyny bahalandyrmak üçin zerurdyr. Bu bolsa genetiki mutasiýalar sebäpli rak keseliniň ýokarlanma howpy bolan adamlaryň sanynyň artýandygyny anyklamaga we dogry dolandyrmaga mümkinçilik berer.
Biz hassalaryň ylmy-barlag maksatlary üçin şiş nusgalaryny anonim görnüşde çykarmaga razylyk berendiklerini tassykladyk. Ähli hassalar Helsinki Jarnamasyna laýyklykda ýazmaça razylyk berdi. AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco” syýasatyna laýyklykda, bu barlag etik gözden geçirilişden boşadyldy, sebäbi BRCA1/2 analizi kliniki tejribe laýyklykda geçirildi we ähli hassalar ýazmaça razylyk berdiler. Şeýle hem, hassalar öz maglumatlaryny ylmy-barlag maksatlary üçin ulanmaga razylyk berýärler.
Etika komitetiniň haýyşy boýunça süýt bezi rak keselinden ejir çekýän hassalara ideg etmekde beren kömegi üçin professor Paolo Wignerä minnetdarlyk bildirýäris.
Federika Martorana Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer-den gonorarlar barada habar berýär. Beýleki awtorlar bu işde hiç hili bähbitleriň gapma-garşylygynyň ýokdugyny yglan edýärler.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL we beýlekiler. Global Rak Statistikalary 2020: GLOBOCAN dünýäniň 185 ýurdunda 36 rak keseliniň ýüze çykmagyny we ölümini çaklaýar. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660