В вашем браузере в данный момент отключен Javascript. Некоторые функции этого веб-сайта не будут работать, если JavaScript отключен.
Зарегистрируйтесь, указав свои конкретные данные и конкретный интересующий вас препарат, и мы сопоставим предоставленную вами информацию со статьями в нашей обширной базе данных и оперативно отправим вам копию в формате PDF по электронной почте.
作者 Стелла С., Витале С.Р., Марторана Ф., Массимино М., Павоне Г., Ланцафэйм К., Бьянка С., Бароне С., Горгоне С., Фичера М., Манцелла Л.
Стефания Стелла, 1,2 Сильвия Рита Витале, 1,2 Федерика Марторана, 1,2 Микеле Массимино, 1,2 Джулиана Павоне, 3 Катя Ланцафаме, 3 Себастьяно Бьянка, 4 Кьяра Бароне, 5 Кристина Горгоне, 6 Марко Фичера, 6, 7 Ливия Манцелла1,21 Кафедра клинической и экспериментальной медицины, Университет Катания, Катания, 95123, Италия;2 Центр экспериментальной онкологии и гематологии, АОУ Поликлиника «Г.Родолико – Сан-Марко», Катания, 95123, Италия; 3 Медицинская онкология, АОУ Поликлиника «Г. Родолико – Сан-Марко», Катания, 95123, Италия; 4 Медицинская генетика, АРНАС Гарибальди, Катания, 95123, Италия; 5 Генетика медицины, ASP, Сиракузы, 96100, Италия; 6 Кафедра биомедицинских и биотехнологических наук, Университет Катании, медицинская генетика, Катания, Италия, 95123; 7 Научно-исследовательский институт Oasi-IRCCS, Троина, 94018, Италия Средства связи: Стефания Стелла, тел. +39 095 378 1946, электронная почта [email protected]; [email protected] Цель: Мутации зародышевой линии в BRCA1 и BRCA2 и установленный рак молочной железы (РМЖ), яичников (РЯ) и другие, связанные с пожизненным риском рака. Тестирование на ген BRCA является ключом к оценке индивидуального риска, а также для поиска методов профилактики у здоровых носителей и индивидуального лечения онкологических больных. Распространенность изменений BRCA1 и BRCA2 широко варьируется в зависимости от географических регионов, и хотя существуют данные о патогенных вариантах BRCA в сицилийских семьях, исследования, специально нацеленные на популяции в восточной Сицилии, отсутствуют. Целью нашего исследования было изучение частоты и распределения патогенных изменений зародышевой линии BRCA в когорте пациентов с РМЖ из восточной Сицилии и оценка их связи со специфическими признаками РМЖ с использованием секвенирования следующего поколения. Наличие изменений коррелировало со степенью злокачественности опухоли и индексом пролиферации. РЕЗУЛЬТАТЫ: В целом, у 35 пациентов (9%) был патогенный вариант BRCA, у 17 (49%) BRCA1 и 18 (51%) в BRCA2. Изменения BRCA1 распространены у пациентов с тройным негативным РМЖ, тогда как мутации BRCA2 чаще встречаются у пациентов с люминальным РМЖ. По сравнению с неносителями, у пациентов с вариантами BRCA1 наблюдалась значительно более высокая степень злокачественности опухоли и пролиферативный индекс. Выводы: Наши результаты дают представление о мутационном статусе BRCA у пациентов с РМЖ из восточной Сицилии и подтверждают роль анализа NGS в выявлении пациентов с наследственным РМЖ. В целом эти данные согласуются с предыдущими доказательствами, подтверждающими необходимость скрининга BRCA для надлежащей профилактики и лечения рака у носителей мутаций.
Рак молочной железы (РМЖ) является наиболее распространенной злокачественной опухолью во всем мире и самым смертоносным раком у женщин.1 Биологические особенности, которые определяют прогноз и клиническое поведение РМЖ, были тщательно изучены и частично выяснены с течением времени. Фактически, в настоящее время для классификации РМЖ по различным молекулярным подтипам используются несколько суррогатных маркеров. Это эстрогеновые (ER) и/или прогестероновые рецепторы (PgR), амплификация рецептора человеческого эпидермального фактора роста 2 (HER2), индекс пролиферации Ki-67 и степень злокачественности опухоли (G).2 Сочетание этих переменных определило следующие категории РМЖ: 1) Люминальные опухоли, показывающие экспрессию ER и/или PgR, составляли 75% РМЖ. Эти опухоли были далее разделены на люминальные A, когда Ki-67 был ниже 20% и HER2 отрицательный, и люминальные B, когда Ki-67 был равен или выше 20% и при наличии амплификации HER2, независимо от пролиферации. индекс; 2) HER2+ опухоли, которые являются ER и PgR отрицательными, но показывают амплификацию HER2. Эта группа составляет 10% всех опухолей молочной железы; 3) Трижды негативный рак молочной железы (TNBC), который не показывает экспрессию ER и PgR и амплификацию HER2, составляет около 15% случаев рака молочной железы.2-4
Среди этих подтипов РМЖ степень злокачественности опухоли и индекс пролиферации представляют собой перекрестные биомаркеры, которые напрямую и независимо связаны с агрессивностью опухоли и прогнозом.5,6
В дополнение к вышеупомянутым биологическим особенностям, роль наследственных генетических изменений, приводящих к развитию РМЖ, стала все более важной за последние несколько лет.7 Примерно 1 из 10 опухолей молочной железы наследуется из-за изменений зародышевой линии в определенных генах.8 Два крупных эпидемиологических исследования с участием более 180 000 женщин недавно выявили группу из восьми генов (т. е. ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C и RAD51D), в первую очередь ответственных за наследственный РМЖ. Среди этих генов BRCA1 и BRCA2 (далее именуемые BRCA1/2) показали самую сильную корреляцию с развитием опухолей молочной железы.9-12 Фактически, мутации зародышевой линии BRCA1/2 значительно увеличивают пожизненный риск РМЖ, а также других злокачественных новообразований, включая рак яичников, предстательной железы, поджелудочной железы, колоректальный, и меланома. В возрасте от 13 до 80 лет совокупная заболеваемость раком молочной железы составляет 72% у женщин с патогенным вариантом BRCA1 (ПВ) и 69% у женщин с ПВ BRCA2.14
Примечательно, что недавняя публикация предполагает, что риск РМЖ зависит от типа ИП. Фактически, по сравнению с патогенными укороченными вариантами, яркие миссенс-варианты, особенно в гене BRCA1, связаны с пониженным риском РМЖ, особенно у пожилых женщин.15
Наличие BRCA1 или BRCA2 PV было связано с различными биологическими и клинико-патологическими особенностями.16,17 BRCA1-ассоциированные раковые опухоли имеют тенденцию быть клинически агрессивными, плохо дифференцированными и высоко пролиферативными. Эти опухоли обычно являются трижды негативными и имеют ранний возраст начала. Опухоли, которые возникают у пациентов с мутацией BRCA2, как правило, демонстрируют умеренную или хорошо дифференцированную степень злокачественности и вариабельные пролиферативные индексы. Эти опухоли чаще встречаются в просвете B и обычно возникают у пожилых людей.16-18 Примечательно, что мутации в BRCA1 и BRCA2 повышают чувствительность к специфическим методам лечения, включая соли платины и таргетные препараты, такие как ингибиторы поли(АДФ-рибозы)полимеразы (PARPi).19,20
За последние несколько лет внедрение секвенирования нового поколения (NGS) в клиническую практику позволило все большему числу пациентов с раком молочной железы пройти молекулярное тестирование на синдромы восприимчивости к раку, включая BRCA1/2.21 Одновременно с этим определения, основанные на точных критериях, касающихся семейного анамнеза, демографических и клинико-патологических характеристик, позволяют лучше выявлять лиц, достойных тестирования на BRCA1/2.22,23 В этом контексте накапливаются данные о скрининге BRCA1/2 в определенных группах населения, подчеркивая различия между географическими регионами.24–27 Хотя имеются отчеты о группе больных раком молочной железы в западной Сицилии, меньше данных доступно о скрининге BRCA1/2 среди населения восточной Сицилии.28,29
В данной работе мы описываем результаты скрининга генов BRCA1/2 у пациентов с раком молочной железы из восточной части Сицилии, а также проводим дополнительную корреляцию между наличием мутаций BRCA1 или BRCA2 и основными клинико-патологическими признаками этих опухолей.
Ретроспективное исследование было проведено в «Центре экспериментальной онкологии и гематологии» больницы Policlinico.Rodolico – San Marco в Катании.С января 2017 года по март 2021 года в нашу молекулярную диагностическую лабораторию для генетического тестирования BRCA/2 было направлено в общей сложности 455 пациентов с раком молочной железы и яичников, меланомой, поджелудочной железы или простаты.Это исследование проводилось в соответствии с Хельсинкской декларацией, и все участники предоставили письменное информированное согласие до проведения молекулярного анализа.
Гистологические и биологические характеристики (ER, PgR, статус HER2, Ki-67 и степень злокачественности) рака молочной железы оценивались по образцам центральной биопсии или хирургическим образцам с учетом только агрессивных компонентов опухоли. На основании этих характеристик рак молочной железы классифицировался следующим образом: люминальный A (ER+ и/или PgR+, HER2-, Ki-67<20%), люминальный B (ER+ и/или PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), люминальный B-HER2+ (ER и/или PgR+, HER2+), HER2+ (ER и PgR-, HER2+) или трижды отрицательный (ER и PgR-, HER2-).
Перед оценкой статуса мутации BRCA1 и BRCA2 многопрофильная группа, включающая онколога, генетика и психолога, проводила консультацию по генетике опухолей для каждого пациента, чтобы определить наличие BRCA1 и/или BRCA1 или лиц с высоким риском PV в гене BRCA2. Отбор пациентов проводился в соответствии с рекомендациями Итальянского общества медицинской онкологии (AIOM) и местными сицилийскими рекомендациями.30,31 Эти критерии включают: (i) семейный анамнез известных патогенных вариантов в генах восприимчивости (например, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) мужчины с BC; (iii) пациенты с BC и OC; (iv) женщины с BC <36 лет, TNBC <60 лет или двусторонним BC <50 лет; (v) личный медицинский анамнез BC <50 лет и по крайней мере один родственник первой степени родства: (a) BC <50 лет; (b) немуцинозный и не пограничный рак яичников любого возраста; (c) двусторонний рак яичников; (d) мужской рак яичников; (e) рак поджелудочной железы; (f) рак предстательной железы; (vi) два или более случая рака яичников в личном анамнезе > 50 лет и семейный анамнез рака яичников, рака яичников или рака поджелудочной железы у родственников, являющихся друг другу родственниками первой степени родства (включая родственников, с которыми она является родственником первой степени родства); (vii) Личный анамнез рака яичников и по крайней мере один случай рака яичников в личном анамнезе у родственника первой степени родства: (a) рак яичников < 50 лет; (b) неяичников; (c) двусторонний рак яичников; (d) мужской рак яичников; (vii) женщина с серозным раком яичников высокой степени родства.
У каждого пациента брали образец периферической крови объемом 20 мл и собирали в пробирки с ЭДТА (BD Biosciences). Геномную ДНК выделяли из образцов цельной крови объемом 0,7 мл с помощью набора для выделения QIAsymphony DSP DNA Midi (QIAGEN, Хильден, Италия) в соответствии с инструкциями производителя и пропускали через флуориметр Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). Выполняли количественную оценку. Обогащение мишени и подготовка библиотеки выполняются с помощью Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, готового к загрузке в набор Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 для автоматизированной подготовки библиотеки в соответствии с инструкциями производителя. Набор состоит из двух пулов мультиплексных ПЦР-праймеров, которые можно использовать для изучения всех генов BRCA1 (NM_007300.3) и BRCA2 (NM_000059.3). Вкратце, 15 мкл каждого разбавленного образца ДНК (10 нг) добавляли в планшеты со штрих-кодом для подготовки библиотеки, а все реагенты и расходные материалы загружали в прибор Ion Chef™. Затем на приборе Ion Chef™ выполняли автоматизированную подготовку библиотеки и объединение библиотек образцов со штрих-кодом. Затем количество подготовленных библиотек оценивали с помощью флуориметра Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) в соответствии с инструкции производителя. Наконец, библиотеки объединяются в эквимолярных соотношениях в пробирках для образцов библиотеки Ion Chef™ (пробирки со штрих-кодом) и загружаются в прибор Ion Chef™. Секвенирование проводилось с использованием прибора Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) с использованием чипа Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Анализ данных проводился с помощью программного обеспечения Amplicon Suite (SmartSeq srl) и Ion Reporter.
Вся номенклатура вариантов соответствовала текущим рекомендациям Консорциума по вариациям генома человека, доступным онлайн (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Клиническая значимость вариантов BRCA1/2 была определена с использованием классификации Международного консорциума ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) и с использованием различных баз данных, таких как ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD и UMD. Классификация включает пять различных категорий риска: доброкачественный (категория I), вероятно доброкачественный (категория II), вариант неопределенной значимости (VUS, категория III), вероятно патогенный (категория IV) и патогенный (категория V). VarSome также проанализировал влияние мутаций на структуру и функцию белка, информативный инструмент с доступом к 30 базам данных.32
Для определения потенциальной клинической значимости каждого VUS использовались следующие вычислительные алгоритмы прогнозирования белков: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) и Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Варианты, отнесенные к классу 1 и 2, считались диким типом.
Секвенирование по Сэнгеру подтвердило наличие каждого патогенного варианта. Вкратце, для каждого обнаруженного варианта была разработана пара специфических праймеров с использованием референсных последовательностей генов BRCA1 и BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 и NG_012772.3, NM_000059.3 соответственно). Поэтому была проведена целевая ПЦР с последующим секвенированием по Сэнгеру.
Пациенты с отрицательным результатом теста на ген BRCA1/2 были протестированы методом мультиплексной амплификации зондов, зависимых от лигирования (MLPA), в соответствии с инструкциями производителя для оценки наличия крупных геномных перестроек (LGR). Вкратце, образцы ДНК денатурируются и используются до 60 зондов, специфичных для генов BRCA1 и BRCA2, каждый из которых обнаруживает определенную последовательность ДНК длиной около 60 нуклеотидов. Продукты амплификации зондов, состоящие из уникального набора ампликонов ПЦР, затем анализировались с помощью капиллярного электрофореза и программного обеспечения Cofalyser.Net в сочетании с соответствующими таблицами Cofalyser для конкретной партии (www.mrcholland.com).
Отдельные клинико-патологические переменные (гистологическая степень злокачественности и индекс пролиферации Ki-67%) были связаны с наличием BRCA1/2 PV, рассчитанными с помощью программного обеспечения Prism v. 8.4 с использованием точного критерия Фишера, предполагающего, что p-значение <0,05 является значимым.
В период с января 2017 года по март 2021 года 455 пациентов прошли скрининг на наличие мутаций BRCA1/2 в зародышевой линии. Тестирование на мутации проводилось в Центре экспериментальной онкологии и гематологии больницы Policlinico. Согласно сицилийскому руководству (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), Rodolico of Catania – San Marco” в целом, 389 пациентов имели рак молочной железы, 37 – рак яичников, 16 – рак поджелудочной железы, 8 – рак простаты и 5 – меланома. Распределение пациентов по типу рака и результатам анализа показано на рисунке 1.
На рисунке 1 представлена ​​блок-схема, дающая обзор исследования. Пациенты с опухолями молочной железы, меланомы, поджелудочной железы, предстательной железы или яичников были протестированы на наличие мутаций в генах BRCA1 и BRCA2.
Сокращения: PVs — патогенный вариант; VUS — вариант неопределенной значимости; WT — последовательность BRCA1/2 дикого типа.
Мы выборочно сосредоточили наши исследования на группах пациентов с раком молочной железы. Средний возраст пациентов составлял 49 лет (диапазон 23–89 лет), и среди них преобладали женщины (n=376 или 97%).
Из этих субъектов 64 (17%) имели мутации BRCA1/2, и все они были женщинами. У тридцати пяти (9%) была ИП, а у 29 (7,5%) — ВУС. Семнадцать (48,6%) из 35 патогенных вариантов возникли в BRCA1 и 18 (51,4%) — в BRCA2, в то время как 5 ВУС возникли в BRCA1 (17,2%) и 24 (82,8%) — в BRCA2 (рисунки 1 и 2). В анализе MLPA LGR не присутствовал.
Рисунок 2. Анализ мутаций BRCA1 и BRCA2 у 389 пациентов с раком молочной железы. (A) Распределение патогенных вариантов (PV) (красный), вариантов неопределенной значимости (VUS) (оранжевый) и WT (синий) у 389 пациентов с раком молочной железы; (B) 389 пациентов с раком молочной железы У тридцати пяти (9%) были патогенные варианты BRCA1/2 (PV). Среди них 17 (48,6%) были носителями BRCA1 PV (темно-красный) и 18 (51,4%) были носителями BRCA2 (светло-красный); (C) 29 (7,5%) из 389 субъектов имели VUS, 5 (17,2%) генов BRCA1 (темно-оранжевый) и 24 (82,8%) генов BRCA2 (светло-оранжевый).
Сокращения: PVs — патогенный вариант; VUS — вариант неопределенной значимости; WT — последовательность BRCA1/2 дикого типа.
Затем мы исследовали распространенность молекулярных подтипов BC у пациентов с BRCA1/2 PV. Распределение включало 2 (5,7%) люминальных A, 15 (42,9%) люминальных B, 3 (8,6%) люминальных B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ и 13 (37,1%) пациентов с TNBC. Среди BRCA1-позитивных пациентов 5 (29,4%) имели люминальный B BC, 2 (11,8%) имели заболевание HER2+ и 10 (58,8%) имели TNBC. Опухоли без мутаций BRCA1 были либо люминальными A, либо люминальными B-HER2+ (рисунок 3). В BRCA2-позитивной подгруппе 10 (55,6%) опухолей были люминальными B, 3 (16,7%) были люминальными B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC и 2 (11,1%) были люминальными A (рисунок 3). В этой группе не было обнаружено опухолей HER2+. Таким образом, мутации BRCA1 преобладают у пациентов с ТНРМЖ, тогда как изменения BRCA2 преобладают у лиц с люминальным B.
Рисунок 3 Распространенность подтипов рака молочной железы у пациентов с патогенными вариантами в BRCA1 и BRCA2. Гистограммы, показывающие распределение ПВ BRCA1- (темно-красный) и BRCA2- (светло-красный) среди молекулярных подтипов пациентов с раком молочной железы. Числа, указанные в каждом блоке, представляют собой процент пациентов с ПВ BRCA1 и BRCA2 для каждого подтипа рака молочной железы.
Сокращения: PV — патогенный вариант; HER2+ — положительный по рецептору человеческого эпидермального фактора роста 2; TNBC — трижды негативный рак молочной железы.
Затем мы оценили тип и локализацию генов полиморфизмов BRCA1 и BRCA2. В полиморфизме BRCA1 мы наблюдали 7 вариантов одиночных нуклеотидов (SNV), 6 делеций, 3 дупликации и 1 вставку. Только одна мутация (c.5522delG) представляет собой новое открытие. Наиболее распространенным полиморфизмом BRCA1, обнаруженным у обоих субъектов, был c.5035_5039delCTAAT. Это изменение включает делецию пяти нуклеотидов (CTAAT) в экзоне 15 BRCA1, что приводит к замене аминокислоты лейцина на тирозин в кодоне 1679, и из-за сдвига рамки трансляции с предсказанным альтернативным стоп-кодоном приводит к преждевременному укорочению белка. Все остальные изменения обнаружены только в одном случае. Примечательно, что один из зарегистрированных полиморфизмов был расположен в консенсусной области сайта сплайсинга (c.4357+1G>T) (таблица 1).
Что касается BRCA2 PV, мы наблюдали 6 делеций, 6 SNV и 2 дупликации. Ни одно из обнаруженных изменений не является новым. Три мутации повторились в нашей популяции, c.428dup и c.8487+1G>A наблюдались у 3 субъектов, за которыми последовала c.5851_5854delAGTT, извлеченная в двух случаях. Изменение c.428dup включает повтор C в экзоне 5 BRCA2, предположительно кодирующем укороченный, нефункциональный белок. Мутация c.8487+1G>A происходит в интронной области интрона BRCA2 19 (± 1,2) и влияет на консенсусную последовательность сплайсинга, что приводит к измененному сплайсингу, приводящему к аномальному или отсутствующему белку. Патогенный вариант c.5851_5854delAGTT обусловлен делецией 4 нуклеотидов из положений нуклеотидов 5851 до 5854 в кодирующем экзоне 10 гена BRCA2 и приводит к сдвигу рамки трансляции с предсказанным альтернативным стоп-кодоном (p.S1951WfsTer). Примечательно, что, как сообщалось ранее, оба изменения c.631G>A и c.7008-2A>T были обнаружены у одного и того же пациента.34 Первая мутация включает замену аденозина (A) в экзоне 7 BRCA2 на гуанин (G), содержащий нуклеотид, что приводит к замене валина на изолейцин в кодоне 211, изолейцин Аминокислота является аминокислотой с очень похожими свойствами. Это изменение влияет на нормальный сплайсинг мРНК. Второй вариант расположен в интронной области и приводит к двойной замене A на тимин (T) перед экзоном 13 гена, кодирующего BRCA2. Изменение c.7008-2A>T может генерировать несколько транскриптов различной длины. Кроме того, в группе PV BRCA2, 4 из 18 изменений (22,2%) были интронными.
Затем мы картировали вредные мутации BRCA1/2 в функциональных доменах и областях связывания с белком (рис. 4). В гене BRCA1 50% ПВ были расположены в области кластера рака молочной железы (BCCR), тогда как 22% мутаций были расположены в области кластера рака яичников (OCCR) (рис. 4A). В PV BRCA2 35,7% вариантов были расположены в области BCCR, а 42,8% мутаций были расположены в OCCR (рис. 4B). Затем мы оценили расположение ПВ в доменах белков BRCA1 и BRCA2. Для белка BRCA1 мы обнаружили три ПВ в доменах петли и спиральной спирали и две мутации в домене BRCT (рис. 4A). Для белка BRCA2 4 ПВ были картированы в домене повтора BRC, тогда как 3 интронных и 3 экзонных изменения были обнаружены в доменах, связывающих олиго/олигосахариды (OB) и башенных (T) (рисунок 4B).
Рисунок 4. Схематическое изображение белков BRCA1 и BRCA2 и локализация патогенных вариантов. На этом рисунке показано распределение патогенных вариантов BRCA1 (A) и BRCA2 (B) у пациентов с раком молочной железы. Экзонные мутации показаны синим цветом, а интронные варианты — оранжевым. Высота столбца соответствует количеству случаев. Сообщается о белках BRCA1 и BRCA2 и их функциональных доменах. (A) Белок BRCA1 содержит петлевой домен (RING) и последовательность ядерной локализации (NLS), домен спиральной спирали, домен кластера SQ/TQ (SCD) и С-концевой домен BRCA1 (BRCT). (B) Белок BRCA2 содержит восемь повторов BRC, домен связывания ДНК со спиральным доменом (Helical), три складки связывания олигонуклеотидов/олигосахаридов (OB), домен башни (T) и NLS на стороне C. Области, называемые областью кластера рака молочной железы (BCCR) и область кластера рака яичников (OCCR) показаны внизу. *Представляет собой мутации, определяющие стоп-кодоны.
Затем мы исследовали клинико-патологические особенности РМЖ, которые могли бы коррелировать с наличием BRCA1/2 PV. Были доступны полные клинические записи для 181 BRCA1/2-отрицательных пациентов (не носителей) и всех носителей (n = 35). Была обнаружена корреляция между скоростью пролиферации опухоли и степенью злокачественности.
Мы рассчитали распределение Ki-67 на основе медианы нашей когорты (25%, диапазон <10-90%). Субъекты с Ki-67 < 25% были определены как «низкий Ki-67», в то время как лица со значениями ≥ 25% считались «высоким Ki-67». Значимые различия Ki-67 (p < 0,01) были обнаружены между неносителями и носителями BRCA1 PV (рис. 5A).
Рисунок 5. Корреляция Ki-67 с распределением степени злокачественности у женщин с раком молочной железы с наличием и отсутствием ПВ BRCA1 и BRCA2. (A) Диаграмма с ящичками, показывающая медианные значения Ki-67 у 181 пациентки с раком молочной железы, не являющейся носителем, по сравнению с пациентами с ПВ BRCA1 (18) или BRCA2 (17). Значения P ниже 0,5 считались статистически значимыми. (B) Гистограмма, представляющая распределение пациентов с раком молочной железы по группам гистологической степени злокачественности (G2 и G3) в соответствии со статусом мутации BRCA1 и BRCA2 (субъекты дикого типа, носители ПВ BRCA1 и BRCA2).
Аналогичным образом мы изучили, коррелирует ли степень опухоли с наличием BRCA1/2 PV. Поскольку рак молочной железы G1 отсутствовал в нашей популяции, мы разделили пациентов на две группы (G2 или G3). В соответствии с результатами Ki-67 анализ выявил статистически значимую корреляцию между степенью опухоли и мутацией BRCA1, с более высокой долей опухолей G3 у носителей BRCA1 по сравнению с неносителями (p < 0,005) (рисунок 5B).
Достижения в технологии секвенирования ДНК позволили достичь беспрецедентных успехов в генетическом тестировании BRCA1/2, что имеет решающее значение для пациентов с семейным анамнезом рака. На сегодняшний день было идентифицировано и классифицировано около 20 000 вариантов BRCA1/2 в соответствии с Американским обществом медицинской генетики35 и системой ENIGMA.35,36 Хорошо известно, что спектр мутаций BRCA1/2 значительно различается в зависимости от географических регионов.37 В Италии частота ПВ BRCA1/2 варьировалась от 8% до 37%, что свидетельствует о широкой внутристрановой изменчивости.38,39 С населением почти в 5 миллионов человек Сицилия является пятым по величине регионом в Италии по числу жителей. Хотя существуют данные о распространении BRCA1/2 на западе Сицилии, в восточной части острова нет обширных доказательств.
Наше исследование является одним из первых отчетов о заболеваемости BRCA1/2 PV у пациентов с РМЖ в восточной части Сицилии.28 Мы сосредоточили свой анализ на РМЖ, поскольку это, безусловно, самое распространенное заболевание в нашей когорте.
При тестировании 389 пациентов с раком молочной железы 9% имели ПВ BRCA1/2, равномерно распределенные между BRCA1 и BRCA2. Эти результаты согласуются с ранее полученными данными для итальянской популяции.28 Интересно, что 3% (13/389) нашей когорты были мужчинами. Этот показатель выше ожидаемого для рака молочной железы у мужчин (1% всех пациентов с раком молочной железы)40, что отражает наш выбор популяций на основе риска мутации BRCA1/2. Однако ни у одного из этих мужчин не развился ПВ BRCA1/2, поэтому они были кандидатами на дальнейший молекулярный анализ, чтобы исключить наличие менее распространенных мутаций, таких как PALB2, RAD51C и D, среди прочих. Варианты неопределенной значимости были получены у 7% субъектов, у которых был очевиден ПВС BRCA2. Даже этот результат согласуется с ранее существовавшими доказательствами.28,41,42
При анализе распределения молекулярных подтипов РМЖ у женщин с мутацией BRCA1/2 мы подтвердили известную связь между ТНРМЖ и ИП BRCA1 (58,8%), а также между люминальным РМЖ и ИП BRCA2 (55,6%).16,43 Люминальные опухоли А и HER2+ у носителей ИП BRCA1 и BRCA2 согласуются с имеющимися литературными данными.16,43
Затем мы сосредоточимся на типе и местоположении полиневрита BRCA1/2. В нашей когорте наиболее распространенным полиневритом BRCA1 был c.5035_5039delCTAAT. Хотя Incorvaia et al. не описали этот вариант в своей сицилийской когорте, другие авторы сообщили о нем как о зародышевой PV BRCA1.34 Несколько PV BRCA1 были обнаружены в нашей когорте - например, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA и c.5266dupC - которые были обнаружены на Сицилии.28 Из них две мутации-основатели BRCA1 (c.181T>G и c.5266dupC) обычно встречаются у евреев-ашкенази Восточной и Центральной Европы (Польша, Чехия), Словении, Австрии, Венгрии, Беларуси и Германии),44,45 и, в Соединенных Штатах и ​​Аргентине, был недавно определен как «рецидивирующий зародышевый вариант» у итальянских пациентов с BC и OC. Вариант 34c.514del был ранее выявлен у 8 пациентов с раком груди из северной Сицилии в Палермо и Мессине. Интересно, что даже Incorvaia и др. обнаружили вариант c.3253dupA в некоторых семьях в Катании.28 Наиболее репрезентативными вариантами BRCA2 являются c.428dup, c.5851_5854delAGTT и интронный вариант c.8487+1G>A, которые были описаны более подробно28 у пациента в Палермо с PV c.428dup, c.5851_5854delAGTT наблюдался в домохозяйствах на северо-западе Сицилии, в основном в регионах Трапани и Палермо, тогда как PV c.5851_5854delAGTT наблюдался в домохозяйствах на северо-западе Сицилии. Вариант 8487+1G>A чаще встречался у субъектов из Мессины, Палермо и Кальтаниссетты.28 Реббек и др. Ранее было описано изменение c.5851_5854delAGTT в Колумбии.37 Другой BRCA2 PV, c.631+1G>A, был обнаружен у пациентов с раком молочной железы и раком яичников из Сицилии (Агридженто, Сиракуза и Рагуза).28 Примечательно, что мы наблюдали сосуществование двух вариантов BRCA2 (BRCA2 c.631G>A и c.7008-2A>T) у одного и того же пациента, которые, как мы предположили, были разделены в цис-режиме, как сообщалось ранее.34,46 Эти мутации BRCA2 uble действительно часто наблюдаются в итальянском регионе и, как было обнаружено, вводят преждевременные стоп-кодоны, влияя на сплайсинг информационной РНК и вызывая сбой белка BRCA2.47,48
Мы также картировали ПВ BRCA1 и BRCA2 в предполагаемых регионах OCCR и BCCR белковых доменов и генов. Эти регионы были описаны Реббеком и соавторами как области риска развития рака яичников и молочной железы соответственно.49 Однако доказательства относительно связи между расположением вариантов зародышевой линии и риском рака молочной железы или яичников остаются спорными.28,50-52 В нашей популяции ПВ BRCA1 были преимущественно расположены в регионе BCCR, тогда как ПВ BRCA2 были преимущественно расположены в регионе OCCR. Однако нам не удалось найти никакой связи между предполагаемыми регионами OCCR и BCCR и признаками BC. Это может быть связано с ограниченным числом пациентов с мутациями BRCA1/2. С точки зрения домена белка ПВ BRCA1 распределены по всему белку, а изменения BRCA2 преимущественно обнаруживаются в домене повтора BRC.
Наконец, мы сопоставили клинико-патологические признаки BC с BRCA1/2 PV. Из-за ограниченного числа включенных пациентов мы обнаружили только значительную корреляцию между Ki-67 и степенью злокачественности опухоли. Хотя оценка и интерпретация Ki-67 остаются несколько спорными, несомненно, что высокие пролиферативные показатели связаны с повышенным риском рецидива заболевания и снижением выживаемости. На сегодняшний день пороговое значение для различения «высокого» и «низкого» Ki-67 составляет 20%. Однако этот порог не применяется к нашей популяции пациентов с мутацией BRCA1/2, у которой медианное значение Ki-67 составляет 25%. Эту тенденцию к высоким показателям Ki-67 можно объяснить распространенностью в наших когортах люминального B и TNBC, в которых присутствовало несколько люминальных опухолей A. Однако некоторые данные, по-видимому, свидетельствуют о том, что более высокий пороговый показатель Ki-67 (25–30%) может лучше стратифицировать пациентов в соответствии с их прогнозом.53,54 По результатам нашего анализа значимая корреляция не удивительно. Возникает между высокими показателями Ki-67 и степенями и наличием BRCA1 PV. Фактически, опухоли, связанные с BRCA1, типичны для TNBC и демонстрируют более агрессивные признаки.16,17
В заключение следует отметить, что в данном исследовании представлен отчет о мутационном статусе BRCA1/2 в когорте больных РМЖ из восточной части Сицилии. В целом наши результаты согласуются с ранее полученными данными как с точки зрения распространенности мутаций, так и клинико-патологических особенностей при РМЖ. Для оценки наличия ПВ, которые являются отдельными и менее частыми, чем BRCA1/2, необходимы дополнительные исследования в более крупных популяциях пациентов с РМЖ с мутацией BRCA1/2, например, с использованием расширенного мультигеномного мутационного анализа. Это позволит выявлять и правильно лечить растущее число пациентов с повышенным риском развития рака из-за генетических мутаций.
Мы подтвердили, что пациенты подписали информированное согласие на анонимное использование образцов своих опухолей в исследовательских целях. Все пациенты подписали письменное информированное согласие в соответствии с Хельсинкской декларацией. Согласно политике AOU Policlinico «G.Rodolico – S.Marco», это исследование было освобождено от этической экспертизы, поскольку анализ BRCA1/2 проводился в соответствии с клинической практикой, и все пациенты дали письменное информированное согласие. Пациенты также дают согласие на использование своих данных в исследовательских целях.
Мы благодарим профессора Паоло Виньери за его помощь в лечении больных раком молочной железы в соответствии с просьбой Комитета по этике.
Федерика Марторана сообщает о гонорарах от Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Остальные авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов в данной работе.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL и др. Глобальная статистика рака 2020: GLOBOCAN оценивает заболеваемость и смертность от 36 видов рака в 185 странах мира. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249. doi: 10.3322/caac.21660