Javaskripto estas nuntempe malŝaltita en via retumilo. Kelkaj funkcioj de ĉi tiu retejo ne funkcios kiam Javaskripto estas malŝaltita.
Registriĝu per viaj specifaj detaloj kaj specifa drogo, kiu vin interesas, kaj ni kunigos la informojn, kiujn vi provizas, kun artikoloj en nia ampleksa datumbazo kaj tuj retpoŝtos al vi PDF-kopion.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella , 1,2 Silvia Rita Vitale , 1,2 Federica Martorana , 1,2 Michele Massimino , 1,2 Giuliana Pavone , 3 Katia Lanzafame , 3 Sebastiano Bianca , 4 Chiara Barone , 5 Cristina Gorgone , 6 Marco Fichera , 6, 7 Livia Manzella , 7 Livia Manzella , Universitato de Catania Medicine Sekcio de Kliniko1, 21, Eksperimenta Medicino de Catania 95123, Italio;2 Centro por Eksperimenta Onkologio kaj Hematologio, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Katanio , 95123, Italio; 3 Medicina Onkologio, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Katanio, 95123, Italio; 4 Medicina Genetiko, ARNAS Garibaldi, Katanio, 95123, Italio; 5 Medicine Genetics, ASP, Sirakuzo, 96100, Italio; 6 Fako de Biomedicinaj kaj Bioteknologiaj Sciencoj, Universitato de Katanio, Medicina Genetiko, Katanio, Italio, 95123; 7Oasi Esplorinstituto-IRCCS, Troina, 94018, Italio Komunikadoj: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, retpoŝto [email protected]; [email protected] Celo: Ĝermaj mutacioj en BRCA1 kaj BRCA2 kaj establita mama kancero (KK), ovaria kancero (OK) kaj aliaj asociitaj kun dumviva risko de kancero. Testado por la BRCA-geno estas ŝlosila por taksi individuan riskon, same kiel por trovi preventajn metodojn ĉe sanaj portantoj kaj adapti traktadojn ĉe kanceruloj. La tropezo de BRCA1 kaj BRCA2 ŝanĝoj varias vaste laŭ geografiaj regionoj, kaj kvankam ekzistas datumoj pri BRCA-patogenaj variaĵoj en siciliaj familioj, mankas studoj specife celantaj populaciojn en orienta Sicilio. La celo de nia studo estis esplori la incidencon kaj distribuon de BRCA-patogenaj ĝermaj ŝanĝoj en kohorto de KK-pacientoj el orienta Sicilio kaj taksi ilian asocion kun specifaj KK-trajtoj uzante venontgeneracian sekvencadon. La ĉeesto de ŝanĝoj korelaciis kun tumora grado kaj proliferada indico. REZULTOJ: Entute, 35 pacientoj (9%) havis BRCA-patogenan variaĵon, 17 (49%) ĉe BRCA1 kaj 18 (51%) ĉe BRCA2. BRCA1 ŝanĝoj estas oftaj ĉe trioble-negativaj KK-pacientoj, dum BRCA2 mutacioj estas pli oftaj ĉe lumenaj KK-pacientoj. Kompare kun ne-portantoj, subjektoj kun BRCA1-variaĵoj havis signife pli altan tumorgradon kaj proliferadan indekson. Konkludoj: Niaj trovoj provizas superrigardon pri la BRCA-mutacia statuso en pacientoj kun hereda kancero el orienta Sicilio kaj konfirmas la rolon de NGS-analizo en identigado de pacientoj kun hereda kancero. Ĝenerale, ĉi tiuj datumoj kongruas kun antaŭaj pruvoj subtenantaj BRCA-rastrumon por taŭga preventado kaj traktado de kancero ĉe mutaciportantoj.
Mama kancero (KK) estas la plej ofta maligneco tutmonde kaj la plej mortiga kancero ĉe virinoj.1 La biologiaj trajtoj, kiuj determinas la prognozon kaj klinikan konduton de KK, estis amplekse studitaj kaj parte klarigitaj laŭlonge de la tempo. Fakte, pluraj surogataj markiloj nuntempe estas uzataj por klasifiki KK en malsamajn molekulajn subtipojn. Ili estas estrogena (ER) kaj/aŭ progesterona receptoro (PgR), homa epiderma kreskofaktora receptoro 2 (HER2) plifortigo, proliferada indekso Ki-67 kaj tumora grado (G).2 La kombinaĵo de ĉi tiuj variabloj identigis la jenajn KK-kategoriojn: 1) Luminalaj tumoroj, montrantaj ER kaj/aŭ PgR-esprimon, konsistigis 75% de la KK-oj. Ĉi tiuj tumoroj estis plue dividitaj en Luminalan A, kiam Ki-67 estis sub 20% kaj HER2 negativa, kaj Luminalan B, kiam Ki-67 estis egala al aŭ super 20% kaj ĉeestante HER2-plifortigo, sendepende de la proliferada indekso; 2) HER2+ tumoroj, kiuj estas ER kaj PgR negativaj, sed montras HER2-amplaĵon. Ĉi tiu grupo konsistigas 10% de ĉiuj mamaj tumoroj; 3) Trioble negativa mama kancero (TNBC), kiu ne montras ER kaj PgR-esprimon kaj HER2-amplaĵon, konsistigas ĉirkaŭ 15% de mamaj kanceroj.2-4
Inter ĉi tiuj subtipoj de karcinomo, tumorgrado kaj proliferada indico reprezentas transversajn biosignojn, kiuj estas rekte kaj sendepende asociitaj kun tumora agresemo kaj prognozo.5,6
Aldone al la supre menciitaj biologiaj trajtoj, la rolo de hereditaj genetikaj ŝanĝoj kondukantaj al la disvolviĝo de mama tumoro fariĝis ĉiam pli grava dum la lastaj jaroj.7 Ĉirkaŭ 1 el 10 mamaj tumoroj estas hereditaj pro ĝermaj ŝanĝoj en specifaj genoj.8 Du grandaj epidemiologiaj studoj implikantaj pli ol 180 000 virinojn ĵus identigis grupon de ok genoj (t.e., ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, kaj RAD51D) ĉefe respondecaj pri hereda mama tumoro. Inter ĉi tiuj genoj, BRCA1 kaj BRCA2 (ĉi-poste nomataj BRCA1/2) montris la plej fortan korelacion kun la disvolviĝo de mamaj tumoroj.9-12 Fakte, ĝermaj mutacioj de BRCA1/2 signife pliigas la dumvivan riskon de mama tumoro same kiel aliaj malignecoj, inkluzive de ovariaj, prostataj, pankreaj, kolorektaj kaj melanomaj tumoroj. De la aĝo de 13 ĝis 80 jaroj, la akumula incidenco de mama tumoro estas 72% ĉe virinoj kun BRCA1-patogena variaĵo (PV) kaj 69% ĉe virinoj kun BRCA2-variaĵo. PV.14
Rimarkinde, lastatempa publikaĵo sugestas, ke la risko de kormalsano dependas de la tipo de fotovoltaiko. Fakte, kompare kun patogenaj stumpigaj variaĵoj, okulfrapaj missencaj variaĵoj, precipe en la geno BRCA1, estas asociitaj kun reduktita risko de kormalsano, precipe ĉe pli maljunaj virinoj.15
La ĉeesto de BRCA1- aŭ BRCA2 PV estis asociita kun malsamaj biologiaj kaj klinikopatologiaj trajtoj.16,17 BRCA1-asociitaj BC-oj tendencas esti klinike agresemaj, malbone diferencigitaj kaj tre proliferaj. Ĉi tiuj tumoroj kutime estas trioble negativaj kaj havas fruan aĝon de komenco. Tumoroj, kiuj okazas ĉe BRCA2-mutaciitaj pacientoj, tipe montras moderajn ĝis bone diferencigitajn gradojn kaj variajn proliferajn indicojn. Ĉi tiuj tumoroj estas pli oftaj en lumeno B kaj kutime okazas ĉe pli maljunaj plenkreskuloj.16-18 Rimarkinde, mutacioj en BRCA1 kaj BRCA2 pliigas sentemon al specifaj traktadoj, inkluzive de platenaj saloj kaj celitaj medikamentoj kiel poli(ADP-ribozo) polimerazaj inhibitoroj (PARPi).19,20
Dum la pasintaj kelkaj jaroj, la efektivigo de venontgeneracia sekvencado (NGS) en klinika praktiko ebligis al kreskanta nombro da kolesterolaj pacientoj sperti molekulajn testojn por kancermalsaniĝemaj sindromoj, inkluzive de BRCA1/2.21 Samtempe, difinoj bazitaj sur precizaj kriterioj pri familia historio, demografiaj kaj klinikopatologiaj karakterizaĵoj por pli bone identigi individuojn indajn je BRCA1/2-testado.22,23 En ĉi tiu kunteksto, evidenteco akumuliĝas pri BRCA1/2-rastrumo en specifaj populacioj, elstarigante diferencojn trans geografiaj regionoj.24–27 Kvankam ekzistas raportoj pri la kolesterola kohorto en okcidenta Sicilio, malpli da datumoj haveblas pri BRCA1/2-rastrumo en la orienta Sicilio-populacio.28,29
Ni priskribas ĉi tie la rezultojn de ĝermlinia BRCA1/2-rastrumo en pacientoj kun karcinomo de bronkio el orienta Sicilio, plue korelaciante la ĉeeston de BRCA1- aŭ BRCA2-mutacioj kun la ĉefaj klinikopatologiaj trajtoj de ĉi tiuj tumoroj.
Retrospektiva studo estis efektivigita ĉe la "Centro por Eksperimenta Onkologio kaj Hematologio" en la Policlinico-Hospitalo Rodolico - San Marco en Katanio. De januaro 2017 ĝis marto 2021, entute 455 pacientoj kun mama kaj ovaria, melanomo, pankreata aŭ prostatkancero estis plusenditaj al nia molekula diagnoza laboratorio por BRCA/2 genetika testado. Ĉi tiu studo estis efektivigita laŭ la Deklaracio de Helsinko, kaj ĉiuj partoprenantoj donis skriban informitan konsenton antaŭ la molekula analizo.
Histologiaj kaj biologiaj karakterizaĵoj (ER, PgR, HER2-statuso, Ki-67, kaj grado) de ĉelĉeloj estis taksitaj per kerna biopsio aŭ kirurgiaj specimenoj, konsiderante nur agresemajn tumorkomponantojn. Surbaze de ĉi tiuj karakterizaĵoj, ĉelĉeloj estis klasifikitaj jene: luminala A (ER+ kaj/aŭ PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminala B (ER+ kaj/aŭ PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminala B-HER2+ (ER kaj/aŭ PgR+, HER2+), HER2+ (ER kaj PgR-, HER2+) aŭ trioble negativaj (ER kaj PgR-, HER2-).
Antaŭ ol taksi la mutacian staton de BRCA1 kaj BRCA2, multdisciplina teamo, inkluzive de onkologo, genetikisto kaj psikologo, faris konsulton pri tumora genetiko por ĉiu paciento por determini la ĉeeston de BRCA1 kaj/aŭ BRCA1. aŭ individuoj kun alta risko de fotovoltaiko en la BRCA2-geno. Pacienta selektado estis farita laŭ la gvidlinioj de la Itala Societo de Medicina Onkologio (AIOM) kaj lokaj siciliaj rekomendoj.30,31 Ĉi tiuj kriterioj inkluzivas: (i) familian historion de konataj patogenaj variaĵoj en malsaniĝemaj genoj (ekz., BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) viroj kun kormalsano; (iii) tiuj kun kormalsano kaj ovario; (iv) virinoj kun kormalsano <36 jaroj, trans-korpa ovario <60 jaroj, aŭ duflanka kormalsano <50 jaroj; (v) personan medicinan historion de kormalsano <50 jaroj kaj almenaŭ unu parenco de la unua grado: (a) kormalsano <50 jaroj; (b) ne-mucina kaj ne-lima kormalsano de iu ajn aĝo; (c) duflanka kormalsano; (d) vira kormalsano; (e) pankreata kancero; (f) prostatkancero; (vi) du aŭ pli personaj antaŭhistorioj de kormalsano > 50 jaroj kaj familia antaŭhistorio de kormalsano, kormalsano-okulo (CO), aŭ pankreata kancero por parencoj, kiuj estas parencoj de unua grado unu al la alia (inkluzive de parencoj, kun kiuj ŝi estas parencoj de unua grado); (vii) persona antaŭhistorio de CO kaj almenaŭ unu parenco de unua grado: (a) kormalsano <50 jaroj; (b) neoformala kormalsano; (c) duflanka kormalsano; (d) vira kormalsano; (vii) virino kun altgrada seroza CO.
20 mL da periferia sangospecimeno estis akirita de ĉiu paciento kaj kolektita en EDTA-tubojn (BD Biosciences). Genara DNA estis izolita el 0.7 mL da tutaj sangospecimenoj uzante la QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italio) laŭ la instrukcioj de la fabrikanto kaj pasigita tra Qubit® 3.0 Fluorometro (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Usono). Faru kvantigon. Cela riĉigo kaj biblioteka preparado estas plenumataj per la Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, preta por esti ŝarĝita en la Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit por aŭtomata biblioteka preparado laŭ la instrukcioj de la fabrikanto. La ilaro konsistas el du plurpleksaj PCR-enkondukaj aroj, kiuj povas esti uzataj por studi ĉiujn BRCA1 (NM_007300.3) kaj BRCA2 (NM_000059.3) genojn. Mallonge, 15 µL da ĉiu diluita specimena DNA (10 ng) estis aldonita al strekkoditaj platoj por biblioteka preparado kaj ĉiuj reakciiloj kaj konsumaĵoj estis ŝarĝitaj sur la Ion Chef™ instrumento. Aŭtomata biblioteka preparado kaj strekkodita specimena biblioteka kunigado estis plenumitaj sur la Ion Chef™ instrumento. La nombro da preparitaj bibliotekoj estis taksita per Qubit® 3.0 Fluorometro (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Usono) laŭ la instrukcioj de la fabrikanto. Fine, bibliotekoj estas kombinitaj en ekvimolaj proporcioj en Ion Chef™ bibliotekaj specimenaj tuboj (strekkoditaj tuboj) kaj ŝarĝitaj. sur la instrumenton Ion Chef™. Sekvencado estis plenumita per instrumento Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) uzante peceton Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Datenanalizo estis plenumita per Amplicon Suite (SmartSeq srl) kaj programaro Ion Reporter.
Ĉiu variaĵa nomenklaturo sekvis la nunajn gvidliniojn de la Human Genome Variation Consortium, havebla interrete (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). La klinika signifo de BRCA1/2-variaĵoj estis difinita uzante la klasifikon de la Internacia Konsorcio ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) kaj konsultante diversajn datumbazojn kiel ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, kaj UMD. La klasifiko inkluzivas kvin apartajn riskokategoriojn: benigna (kategorio I), verŝajne benigna (kategorio II), variaĵo de necerta signifo (VUS, kategorio III), verŝajne patogena (kategorio IV), kaj patogena (kategorio V). VarSome ankaŭ analizis la efikon de mutacioj sur proteina strukturo kaj funkcio, informa ilo kun aliro al 30 datumbazoj.32
Por atribui eblan klinikan signifon al ĉiu VUS, la jenaj komputilaj proteinaj prognozaj algoritmoj estis uzitaj: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) kaj Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Variantoj klasifikitaj kiel klaso 1 kaj 2 estis konsiderataj sovaĝa tipo.
Sanger-sekvencado konfirmis la ĉeeston de ĉiu patogena variaĵo. Mallonge, paro da specifaj komenciloj estis desegnita por ĉiu detektita variaĵo uzante la referencsekvencojn de la genoj BRCA1 kaj BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 kaj NG_012772.3, NM_000059.3, respektive). Tial, celita PCR estis farita sekvata de Sanger-sekvencado.
Pacientoj, kiuj testis negative por la geno BRCA1/2, estis testitaj per plurfoja ligaĵ-dependa sondil-amplifikado (MLPA) laŭ la instrukcioj de la fabrikanto por taksi la ĉeeston de grandaj genomaj rearanĝoj (LGR). Mallonge, DNA-specimenoj estas denaturigitaj kaj ĝis 60 BRCA1 kaj BRCA2-gen-specifaj sondiloj estas uzataj, ĉiu detektante specifan DNA-sekvencon proksimume 60 nukleotidojn longan. Sondil-amplifikadaj produktoj, konsistantaj el unika aro de PCR-amplikonoj, estis poste analizitaj per kapilara elektroforezo kaj per Cofalyser.Net-programaro kune kun la taŭgaj aro-specifaj Cofalyser-tabeloj (www.mrcholland.com).
Elektitaj klinikopatologiaj variabloj (histologia grado kaj Ki-67%-a proliferada indekso) estis asociitaj kun la ĉeesto de BRCA1/2 PV, kalkulitaj per la programaro Prism v. 8.4 uzante la precizan teston de Fisher supozanta p-valoron <0.05 kiel signifan.
Inter januaro 2017 kaj marto 2021, 455 pacientoj estis ekzamenitaj pri ĝermaj BRCA1/2 mutacioj. Mutaciaj testoj estis faritaj ĉe la Centro por Eksperimenta Onkologio kaj Hematologio de la Policlinico-Hospitalo. Laŭ la sicilia gvidlinio (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N-ro 02-Vendredo 10 Januaro 2020), la Rodolico de Katanio - San Marco" entute 389 pacientoj estis kun mama kancero, 37 kun ovaria kancero, 16 kun pankreata kancero, 8 kun prostatkancero kaj 5 kun melanomo. La distribuo de pacientoj laŭ kancerotipo kaj analizaj rezultoj estas montrita en Figuro 1.
Figuro 1 montras fludiagramon superrigardon de la studo. Pacientoj kun mamaj, melanomaj, pankreataj, prostat- aŭ ovariaj tumoroj estis testitaj pri mutacioj en la genoj BRCA1 kaj BRCA2.
Mallongigoj: PVs, patogena variaĵo; VUS, variaĵo de necerta signifo; WT, sovaĝ-tipa BRCA1/2 sekvenco.
Ni selekteme enfokusigis niajn studojn al mamakanceraj kohortoj. La pacientoj havis medianan aĝon de 49 jaroj (intervalo 23-89) kaj estis ĉefe virinoj (n=376, aŭ 97%).
El tiuj subjektoj, 64 (17%) havis BRCA1/2 mutaciojn kaj ĉiuj estis virinoj. Tridek kvin (9%) havis PV kaj 29 (7.5%) havis VUS. Dek sep (48.6%) el la 35 patogenaj variaĵoj okazis en BRCA1 kaj 18 (51.4%) en BRCA2, dum 5 VUS okazis en BRCA1 (17.2%) kaj 24 (82.8%) en BRCA2 (Figuroj 1 kaj 2). LGR ne ĉeestis en la MLPA-analizo.
Figuro 2. Analizo de BRCA1 kaj BRCA2 mutacioj en 389 pacientoj kun mama kancero. (A) Distribuo de patogenaj variaĵoj (PV) (ruĝaj), variaĵoj de necerta signifo (VUS) (oranĝaj), kaj WT (bluaj) en 389 pacientoj kun mama kancero; (B) 389 pacientoj kun mama kancero. Tridek kvin (9%) havis BRCA1/2 patogenajn variaĵojn (PV). Inter ili, 17 (48.6%) estis BRCA1 PV portantoj (malhelruĝaj) kaj 18 (51.4%) estis BRCA2 portantoj (helruĝaj); (C) 29 (7.5%) el 389 subjektoj portis VUS, 5 (17.2%) BRCA1 genojn (malheloranĝaj) kaj 24 (82.8%) BRCA2 genojn (heloranĝaj).
Mallongigoj: PVs, patogena variaĵo; VUS, variaĵo de necerta signifo; WT, sovaĝ-tipa BRCA1/2 sekvenco.
Ni poste esploris la tropezon de molekulaj subtipoj de BC ĉe pacientoj kun BRCA1/2 PV. La distribuo inkluzivis 2 (5.7%) lumenajn A, 15 (42.9%) lumenajn B, 3 (8.6%) lumenajn B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ kaj 13 (37.1%) pacientojn kun TNBC. Inter BRCA1-pozitivaj pacientoj, 5 (29.4%) havis lumenajn B, 2 (11.8%) havis HER2+ malsanon, kaj 10 (58.8%) havis TNBC. Tumoroj sen BRCA1-mutacioj estis aŭ lumenaj A aŭ lumenaj B-HER2+ (Figuro 3). En la BRCA2-pozitiva subgrupo, 10 (55.6%) tumoroj estis lumenaj B, 3 (16.7%) estis lumenaj B-HER2+, 3 (16.7%) TNBC kaj 2 (11.1%) estis lumenaj A (Figuro). 3). Neniuj HER2+ tumoroj ĉeestis en ĉi tiu grupo. Tiel, BRCA1-mutacioj estas oftaj ĉe TNBC-pacientoj, dum BRCA2-ŝanĝoj estas superregaj ĉe lumeno B-individuoj.
Figuro 3 Troviĝo de mamakanceraj subtipoj ĉe pacientoj kun patogenaj variaĵoj en BRCA1 kaj BRCA2. Histogramoj montrantaj la distribuon de BRCA1- (malhelruĝa) kaj BRCA2- (helruĝa) PV inter molekulaj subtipoj de mamakanceraj pacientoj. Nombroj raportitaj en ĉiu kadro reprezentas la procenton de pacientoj kun BRCA1 kaj BRCA2 PV por ĉiu mamakancera subtipo.
Mallongigoj: PV-oj, patogena variaĵo; HER2+, homa epiderma kreskofaktorreceptoro 2 pozitiva; TNBC, trioble negativa mama kancero.
Poste, ni taksis la tipon kaj genan lokalizon de BRCA1 kaj BRCA2 PV-oj. En BRCA1 PV, ni observis 7 unu-nukleotidajn variaĵojn (SNV-ojn), 6 forigojn, 3 duobligojn kaj 1 enmeton. Nur unu mutacio (ĉ.5522delG) reprezentas novan malkovron. La plej ofta BRCA1 PV detektita en ambaŭ subjektoj estis ĉ.5035_5039delCTAAT. Ĉi tiu ŝanĝo implikas forigon de kvin nukleotidoj (CTAAT) en BRCA1 eksono 15, rezultante en la anstataŭigo de la aminoacido leŭcino per tirozino ĉe kodono 1679, kaj pro traduka kadroŝovo kun antaŭdirita alternativa haltiga kodono kondukas al trofrua proteina stumpigo. Ĉiuj aliaj ŝanĝoj estas detektitaj nur en unu kazo. Rimarkinde, unu el la raportitaj PV-oj estis lokita en la splisa lokkonsenta regiono (ĉ.4357+1G>T) (Tabelo 1).
Koncerne BRCA2 PV, ni observis 6 forigojn, 6 SNVojn kaj 2 duobligojn. Neniu el la trovitaj ŝanĝoj estas nova. Tri mutacioj ripetiĝis en nia populacio, c.428dup kaj c.8487+1G>A observitaj en 3 subjektoj, sekvataj de c.5851_5854delAGTT prenita en du kazoj. La c.428dup-ŝanĝo implikas ripeton de C en eksono 5 de BRCA2, antaŭdirita ĉifri stumpigitan, nefunkcian proteinon. La c.8487+1G>A-mutacio okazas en la introna regiono de BRCA2-introno 19 (± 1,2) kaj influas la splisan konsensan sekvencon, rezultante en ŝanĝita splisado, kiu rezultas en nenormala aŭ forestanta proteino. La c.5851_5854delAGTT-patogena variaĵo ŝuldiĝas al 4-nukleotida forigo de nukleotidaj pozicioj 5851 ĝis 5854 en la kodanta eksono 10 de la BRCA2-geno kaj rezultas en... traduka kadroŝovo kun antaŭdirita alternativa haltiga kodono (p.S1951WfsTer). Rimarkinde, kiel antaŭe raportite, ambaŭ ŝanĝoj c.631G>A kaj c.7008-2A>T estis detektitaj en la sama paciento.34 La unua mutacio implikas la anstataŭigon de adenozino (A) en BRCA2-ekzono 7 per guanino (G) enhavanta nukleotido, rezultante en ŝanĝo de valino al izoleŭcino ĉe kodono 211, izoleŭcina aminoacido estas aminoacido kun tre similaj ecoj. Ĉi tiu ŝanĝo influas normalan mRNA-splisadon. La dua variaĵo situas en introna regiono kaj rezultas en duobla A al timino (T) anstataŭigo antaŭ eksono 13 de la geno kodanta BRCA2. La ŝanĝo c.7008-2A>T povas generi plurajn transskribaĵojn de malsamaj longoj. Krome, en la grupo de BRCA2-PV-oj, 4 el 18 ŝanĝoj (22.2%) estis intronaj.
Ni poste mapigis BRCA1/2 malutilajn mutaciojn en funkciaj domajnoj kaj protein-ligaj regionoj (Fig. 4). En la BRCA1-geno, 50% de la PV-oj troviĝis en la mamakancera areta regiono (BCCR), dum 22% de la mutacioj troviĝis en la ovaria kancera areta regiono (OCCR) (Fig. 4A). En BRCA2 PV, 35.7% de la variaĵoj troviĝis en la BCCR-regiono kaj 42.8% de la mutacioj troviĝis en la OCCR (Fig. 4B). Poste, ni taksis la lokon de PV ene de la BRCA1 kaj BRCA2 proteinaj domajnoj. Por la BRCA1-proteino, ni trovis tri PV-ojn en la buklaj kaj spiralaj domajnoj, kaj du mutaciojn en la BRCT-domajno (Fig. 4A). Por la BRCA2-proteino, 4 PV-oj mapiĝis al la BRC-ripetdomajno, dum 3 intronaj kaj 3 eksonaj ŝanĝoj estis detektitaj en la oligo/oligosakarid-ligaj (OB) kaj turaj (T) domajnoj (Figuro 4B).
Figuro 4 Skemata reprezentado de BRCA1 kaj BRCA2 proteinoj kaj lokalizo de patogenaj variaĵoj. Ĉi tiu figuro montras la distribuon de BRCA1 (A) kaj BRCA2 (B) patogenaj variaĵoj en mamakanceraj pacientoj. Eksonaj mutacioj estas montritaj blue, dum intronaj variaĵoj estas montritaj oranĝe. La alteco de la stango reprezentas la nombron de kazoj. La BRCA1 kaj BRCA2 proteinoj kaj iliaj funkciaj domajnoj estas raportitaj. (A) La BRCA1 proteino enhavas buklodomajnon (RING) kaj nuklean lokalizan sekvencon (NLS), volvitan volvaĵan domajnon, SQ/TQ-aretodomajnon (SCD), kaj BRCA1 C-finan domajnon (BRCT). (B) La BRCA2 proteino enhavas ok BRC-ripetojn, DNA-ligan domajnon kun helikforma domajno (Helika), tri oligonukleotidajn/oligosakaridajn (OB) ligantajn faldojn, turan domajnon (T), kaj NLS sur la C-flanko. Areoj nomataj la Mamakancera Aretoregiono (BCCR) kaj Ovaria Kancera Aretoregiono (OCCR) estas montritaj sube. *Reprezentas mutaciojn kiuj determini haltigajn kodonojn.
Ni poste esploris klinikopatologiajn trajtojn de karcinomo kronika, kiuj eble korelacios kun la ĉeesto de BRCA1/2 PV. Kompletaj klinikaj registroj estis haveblaj por 181 BRCA1/2-negativaj pacientoj (ne-portantoj) kaj ĉiuj portantoj (n = 35). Estis korelacio inter la indico de tumora proliferado kaj la grado.
Ni kalkulis la distribuon de Ki-67 surbaze de la mediano de nia kohorto (25%, intervalo <10-90%). Subjektoj kun Ki-67 < 25% estis difinitaj kiel "malalta Ki-67", dum individuoj kun valoroj ≥ 25% estis konsiderataj "alta Ki-67". Signifaj Ki-67 diferencoj (p<0.01) estis trovitaj inter ne-portantoj kaj portantoj de BRCA1 PV (Fig. 5A).
Figuro 5 Korelacio de Ki-67 kun grada distribuo ĉe virinoj kun mama kancero kun kaj sen BRCA1 kaj BRCA2 PV-oj. (A) Skatola diagramo montranta medianajn Ki-67-valorojn ĉe 181 ne-portantaj mamakanceraj pacientoj kontraŭ BRCA1 (18) aŭ BRCA2 (17) PV-oj. P-valoroj sub 0.5 estis konsiderataj statistike signifaj. (B) Histogramo reprezentanta la asignon de mamakanceraj pacientoj en histologiajn gradajn grupojn (G2 kaj G3) laŭ BRCA1 kaj BRCA2 mutacia statuso (WT-subjektoj, portantoj de BRCA1 kaj BRCA2 PV).
Simile, ni ekzamenis ĉu la tumorgrado korelaciis kun la ĉeesto de BRCA1/2 PV. Ĉar G1 BC forestis en nia populacio, ni dividis la pacientojn en du grupojn (G2 aŭ G3). Kongrue kun la Ki-67-rezultoj, la analizo rivelis statistike signifan korelacion inter la tumorgrado kaj la BRCA1-mutacio, kun pli alta proporcio de G3-tumoroj ĉe BRCA1-portantoj kompare kun ne-portantoj (p<0,005) (Figuro 5B).
Progresoj en DNA-sekvenca teknologio ebligis senprecedencajn progresojn en BRCA1/2 genetika testado, kun decidaj implicoj por pacientoj kun familia historio de kancero. Ĝis nun, ĉirkaŭ 20.000 BRCA1/2 variaĵoj estis identigitaj kaj klasifikitaj laŭ la Usona Societo de Medicina Genetiko 35 kaj la ENIGMA-sistemo. 35,36 Estas bone konate, ke la BRCA1/2 mutacia spektro varias vaste tra geografiaj regionoj. 37 Ene de Italio, la ofteco de BRCA1/2 PV variis de 8% ĝis 37%, montrante larĝan enlandan ŝanĝiĝemon. 38,39 Kun loĝantaro de preskaŭ 5 milionoj, Sicilio estas la kvina plej granda regiono en Italio laŭ la nombro da loĝantoj. Kvankam ekzistas datumoj pri la distribuado de BRCA1/2 en okcidenta Sicilio, ne ekzistas ampleksa evidenteco en la orienta parto de la insulo.
Nia studo estas unu el la unuaj raportoj pri la incidenco de BRCA1/2 PV ĉe pacientoj kun kanceriaj vezikoj en orienta Sicilio.28 Ni enfokusigis nian analizon al kancerikoj, ĉar ĉi tio estas sendube la plej ofta malsano en nia kohorto.
Kiam oni testis 389 pacientojn kun mama kancero, 9% portis BRCA1/2 PV-ojn, egale distribuitajn inter BRCA1 kaj BRCA2. Ĉi tiuj rezultoj kongruas kun tiuj antaŭe raportitaj en la itala loĝantaro.28 Interese, 3% (13/389) de nia kohorto estis viroj. Ĉi tiu ofteco estas pli alta ol atendita por vira mama kancero (1% de ĉiuj mamaj kancero),40 reflektante nian elekton de loĝantaroj bazitan sur la risko de mutacio de BRCA1/2. Tamen, neniu el ĉi tiuj viroj evoluigis BRCA1/2 PV-on, do ili estis kandidatoj por plia molekula analizo por ekskludi la ĉeeston de malpli oftaj mutacioj kiel PALB2, RAD51C kaj D, inter aliaj. Variantoj de necerta signifo estis trovitaj en 7% de la subjektoj, ĉe kiuj BRCA2 VUS estis evidenta. Eĉ ĉi tiu rezulto kongruas kun antaŭekzistanta evidenteco.28,41,42
Kiam ni analizis la distribuon de molekulaj subtipoj de korinfarkto (BC) en virinoj kun BRCA1/2-mutacioj, ni konfirmis konatajn asociojn inter TNBC kaj BRCA1-PV (58.8%) kaj inter luminala B BC kaj BRCA2-PV (55.6%).16,43 La luminalaj A kaj HER2+ tumoroj en portantoj de BRCA1 kaj BRCA2-PV kongruas kun ekzistantaj literaturaj datumoj.16,43
Ni poste fokusiĝas al la tipo kaj loko de la BRCA1/2 PV. En nia kohorto, la plej ofta BRCA1 PV estis c.5035_5039delCTAAT. Kvankam Incorvaia et al. ne priskribis ĉi tiun variaĵon en sia sicilia kohorto, aliaj aŭtoroj raportis ĝin kiel ĝerman BRCA1 PV.34 Pluraj BRCA1 PV estis trovitaj en nia kohorto - ekz. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA kaj c.5266dupC - kiuj estis observitaj en Sicilio.28 El ĉi tiuj, du BRCA1 fondintaj mutacioj (c.181T>G kaj c.5266dupC) estas ofte trovitaj en Aŝkenazaj Judoj de Orienta kaj Centra Eŭropo (Pollando, Ĉeĥio), slovena, aŭstra, hungara, belorusa kaj germana), 44,45 kaj, en Usono kaj Argentino, estis ĵus difinita kiel "ripetiĝanta ĝerma variaĵo" en italaj pacientoj kun mamakancero kaj ovario. La 34c.514del variaĵo estis antaŭe identigita en 8 mamakanceraj pacientoj el norda Sicilio en Palermo kaj Mesino. Interese, eĉ Incorvaia et al. trovis la c.3253dupA-variaĵon en kelkaj familioj en Katanio.28 La plej reprezentaj BRCA2-PV-oj estas c.428dup, c.5851_5854delAGTT kaj la introna variaĵo c.8487+1G>A, kiuj estis raportitaj pli detale 28 en paciento en Palermo kun c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV estis observita en domanaroj en nordokcidenta Sicilio, ĉefe en la regionoj Trapani kaj Palermo, dum c.5851_5854delAGTT PV estis observita en domanaroj en nordokcidenta Sicilio. La 8487+1G>A-variaĵo estis pli ofta en subjektoj el Mesino, Palermo kaj Kaltaniseto.28 Rebbeck et al. antaŭe priskribis la ŝanĝon c.5851_5854delAGTT en Kolombio.37 Alia BRCA2 PV, c.631+1G>A, estis trovita en pacientoj kun BC kaj OC el Sicilio (Agrigento, Sirakuzo kaj Raguso).28 Rimarkinde, ni observis la kunekziston de du BRCA2-variaĵoj (BRCA2 c.631G>A kaj c.7008-2A>T) en la sama paciento, kiun ni supozis esti apartigita en cis-reĝimo, kiel antaŭe raportite tiel.34,46 Ĉi tiuj BRCA2-variaj mutacioj efektive estas ofte observataj en la itala regiono kaj oni trovis, ke ili enkondukas trofruajn haltigkodonojn, influante mesaĝan RNA-splisadon kaj kaŭzante la malsukceson de la BRCA2-proteino.47,48
Ni ankaŭ mapigis BRCA1 kaj BRCA2 PV-ojn en supozeblaj OCCR kaj BCCR regionoj de proteinaj domajnoj kaj genoj. Ĉi tiuj regionoj estis priskribitaj de Rebbeck et al. kiel riskaj areoj por disvolvi ovarian kaj maman kanceron, respektive.49 Tamen, la evidenteco pri la asocio inter la loko de ĝermaj variaĵoj kaj mama aŭ ovaria kancero restas kontestata.28,50-52 En nia populacio, BRCA1 PV-oj estis ĉefe situantaj en la BCCR-regiono, dum BRCA2 PV-oj estis ĉefe situantaj en la OCCR-regiono. Tamen, ni ne povis trovi ian asocion inter supozeblaj OCCR kaj BCCR regionoj kaj BC-trajtoj. Ĉi tio povas ŝuldiĝi al la limigita nombro da pacientoj kun BRCA1/2 mutacioj. El proteina domajna perspektivo, BRCA1 PV-oj estas distribuitaj laŭlonge de la tuta proteino, kaj BRCA2-ŝanĝoj estas preferate trovitaj en la BRC-ripetdomajno.
Fine, ni korelaciis klinikopatologiajn trajtojn de BC kun BRCA1/2 PV. Pro la limigita nombro da pacientoj inkluzivitaj, ni trovis signifan korelacion nur inter Ki-67 kaj tumorgrado. Kvankam la takso kaj interpreto de Ki-67 restas iom kontestataj, estas certe, ke altaj proliferaj indicoj estas asociitaj kun pliigita risko de malsanrevenigo kaj malpliiĝinta supervivo. Ĝis nun, la limo por distingi inter "alta" kaj "malalta" Ki-67 estas 20%. Tamen, ĉi tiu sojlo ne validas por nia BRCA1/2-mutacia pacientaro, kiu havas medianan Ki-67-valoron de 25%. Ĉi tiu tendenco en altaj Ki-67 indicoj povas esti klarigita per la tropezo en niaj lumenaj B kaj TNBC-kohortoj, el kiuj malmultaj lumenaj A-tumoroj ĉeestis. Tamen, iuj pruvoj ŝajnas sugesti, ke pli alta Ki-67-limigo (25-30%) povus pli bone tavoligi pacientojn laŭ ilia prognozo.53,54 El la rezultoj de nia analizo, signifa korelacio ne estas surpriza. Okazas inter altaj Ki-67 kaj gradoj kaj la ĉeesto de BRCA1 PV. Fakte, BRCA1-rilataj tumoroj estas tipaj por TNBC kaj montras pli agresemajn trajtojn.16,17
Konklude, ĉi tiu studo provizas raporton pri la mutacia stato de BRCA1/2 en kormalsana kohorto el orienta Sicilio. Ĝenerale, niaj trovoj kongruas kun antaŭekzistantaj pruvoj, kaj rilate al mutacia tropezo kaj klinikopatologiaj trajtoj en kormalsano. Pliaj studoj en pli grandaj populacioj de BRCA1/2-mutaciaj kormalsanaj pacientoj, kiel ekzemple uzante multigenoman vastigitan mutacian analizon, estas pravigitaj por taksi la ĉeeston de PV-oj, kiuj estas apartaj kaj malpli oftaj ol BRCA1/2. Ĉi tio ebligos la identigon kaj ĝustan administradon de la kreskanta nombro da subjektoj kun pliigita risko de kancero pro genetikaj mutacioj.
Ni konfirmis, ke pacientoj subskribis informitan konsenton por publikigi siajn tumorspecimenojn anonime por esplorceloj. Ĉiuj pacientoj subskribis skriban informitan konsenton laŭ la Deklaracio de Helsinko. Laŭ la politiko de AOU Policlinico "G. Rodolico - S. Marco", ĉi tiu studo estis esceptita de etika revizio ĉar la BRCA1/2 analizo estis farita laŭ klinika praktiko kaj ĉiuj pacientoj donis skriban informitan konsenton. Pacientoj ankaŭ konsentas pri la uzo de siaj datumoj por esplorceloj.
Ni dankas Profesoron Paolo Vigneri pro lia helpo en la prizorgado de pacientoj kun mama kancero laŭ peto de la Etikkomitato.
Federica Martorana raportas honorariojn de Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. La aliaj aŭtoroj deklaras neniujn konfliktojn de interesoj en ĉi tiu verko.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Tutmondaj Kancerstatistikoj 2020: GLOBOCAN taksas la incidencon kaj mortecon de 36 kanceroj en 185 landoj tra la mondo. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249. doi: 10.3322/caac.21660