Javascript is tans gedeaktiveer in jou blaaier. Sommige kenmerke van hierdie webwerf sal nie werk wanneer JavaScript gedeaktiveer is nie.
Registreer met jou spesifieke besonderhede en spesifieke middel van belang en ons sal die inligting wat jy verskaf, pas by artikels in ons uitgebreide databasis en jou dadelik 'n PDF-kopie per e-pos stuur.
By Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella Universiteit van C1lin, Manzella, Department of Medicine, 7 Catania, Catania, 95123, Italië;2 Sentrum vir Eksperimentele Onkologie en Hematologie, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italië; 3 Mediese Onkologie, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italië; 4 Mediese Genetika, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italië; 5 Geneeskunde Genetika, ASP, Syracuse, 96100, Italië; 6 Departement Biomediese en Biotegnologiewetenskappe, Universiteit van Catania, Mediese Genetika, Catania, Italië, 95123; 7Oasi Navorsingsinstituut-IRCCS, Troina, 94018, Italië Kommunikasie: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, e-pos [email protected]; [email protected] Doel: Kiemlynmutasies in BRCA1 en BRCA2 en gevestigde borskanker (BC), ovariumkanker (OC) en ander wat verband hou met 'n leeftydrisiko van kanker. Toetsing vir die BRCA-geen is die sleutel tot die beoordeling van individuele risiko, sowel as vir die vind van voorkomingsmetodes in gesonde draers en die aanpassing van behandelings in kankerpasiënte. Die voorkoms van BRCA1- en BRCA2-veranderinge wissel wyd tussen geografiese streke, en hoewel data bestaan ​​oor BRCA-patogene variante in Sisiliaanse families, ontbreek studies wat spesifiek op bevolkings in oostelike Sisilië gemik is. Die doel van ons studie was om die voorkoms en verspreiding van BRCA-patogene kiemlynveranderinge in 'n kohort BC-pasiënte van oostelike Sisilië te ondersoek en om hul assosiasie met spesifieke BC-eienskappe te bepaal deur gebruik te maak van volgende-generasie volgordebepaling. Die teenwoordigheid van veranderinge korreleer met tumorgraad en proliferasie-indeks. RESULTATE: Oor die algemeen het 35 pasiënte (9%) 'n BRCA-patogene variant gehad, 17 (49%) in BRCA1 en 18 (51%) in BRCA2. BRCA1-veranderinge is algemeen in drievoudig-negatiewe BC-pasiënte, terwyl BRCA2-mutasies meer algemeen is in luminale BC-pasiënte. In vergelyking met nie-draers, proefpersone met BRCA1-variante het beduidend hoër tumorgraad en proliferatiewe indeks gehad. Gevolgtrekkings: Ons bevindinge bied 'n oorsig van BRCA-mutasiestatus in BC-pasiënte van oostelike Sisilië en bevestig die rol van NGS-analise in die identifisering van pasiënte met oorerflike BC. Oor die algemeen is hierdie data in ooreenstemming met vorige bewyse wat BRCA-sifting ondersteun vir behoorlike voorkoming en behandeling van kanker in mutasiedraers.
Borskanker (BK) is die mees algemene kwaadaardigheid wêreldwyd en die dodelikste kanker by vroue.1 Die biologiese kenmerke wat BK-prognose en kliniese gedrag bepaal, is oor tyd breedvoerig bestudeer en gedeeltelik toegelig. Trouens, verskeie surrogaatmerkers word tans gebruik om BK in verskillende molekulêre subtipes te klassifiseer. Hulle is estrogeen (ER) en/of progesteroonreseptor (PgR), menslike epidermale groeifaktorreseptor 2 (HER2) amplifikasie, proliferasie-indeks Ki-67 en tumorgraad (G).2 Die kombinasie van hierdie veranderlikes het die volgende BK-kategorieë geïdentifiseer: 1) Luminale gewasse, wat ER- en/of PgR-uitdrukking toon, het 75% van BK's uitgemaak. Hierdie gewasse is verder verdeel in Luminaal A, wanneer Ki-67 onder 20% en HER2-negatief was, en Luminaal B, wanneer Ki-67 gelyk aan of bo 20% was en in die teenwoordigheid van HER2-amplifikasie was, ongeag die proliferasie-indeks; 2) HER2+ gewasse wat ER- en PgR-negatief is, maar HER2-amplifikasie toon. Hierdie groep maak 10% van alle borsgewasse uit; 3) Drievoudig-negatiewe borskanker (TNBC), wat nie ER- en PgR-uitdrukking en HER2-amplifikasie toon nie, is verantwoordelik vir ongeveer 15% van borskankers.2-4
Onder hierdie BC-subtipes verteenwoordig tumorgraad en proliferasie-indeks dwarssnitbiomerkers wat direk en onafhanklik geassosieer word met tumoraggressiwiteit en prognose.5,6
Benewens die bogenoemde biologiese kenmerke, het die rol van oorgeërfde genetiese veranderinge wat lei tot die ontwikkeling van borskanker die afgelope paar jaar toenemend belangrik geword.7 Ongeveer 1 uit 10 borskankergewasse word oorgeërf as gevolg van kiemlynveranderinge in spesifieke gene.8 Twee groot epidemiologiese studies met meer as 180 000 vroue het onlangs 'n groep van agt gene (dws ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C en RAD51D) geïdentifiseer wat hoofsaaklik verantwoordelik is vir oorgeërfde borskanker. Onder hierdie gene het BRCA1 en BRCA2 (hierna verwys as BRCA1/2) die sterkste korrelasie met die ontwikkeling van borskankergewasse getoon.9-12 Trouens, kiemlyn BRCA1/2-mutasies verhoog die leeftydrisiko van borskanker sowel as ander kwaadaardige gewasse, insluitend ovarium-, prostaat-, pankreas-, kolorektale en melanoom, aansienlik. Van ouderdom 13 tot 80 jaar is die kumulatiewe voorkoms van borskanker 72% by vroue met 'n BRCA1-patogene variant (PV) en 69% by vroue met 'n BRCA2-patogene variant. PV.14
Dit is opmerklik dat 'n onlangse publikasie daarop dui dat die risiko van BC afhang van die tipe PV. Trouens, in vergelyking met patogene afknottende variante, word opvallende missense-variante, veral in die BRCA1-geen, geassosieer met 'n verminderde risiko van BC, veral by ouer vroue.15
Die teenwoordigheid van BRCA1- of BRCA2-PV is geassosieer met verskillende biologiese en klinies-patologiese kenmerke.16,17 BRCA1-geassosieerde BC's is geneig om klinies aggressief, swak gedifferensieerd en hoogs proliferatief te wees. Hierdie gewasse is gewoonlik drievoudig negatief en het 'n vroeë ouderdom van aanvang. Gewasse wat voorkom by BRCA2-gemuteerde pasiënte vertoon tipies matige tot goed gedifferensieerde grade en veranderlike proliferatiewe indekse. Hierdie gewasse is meer algemeen in lumen B en kom gewoonlik voor by ouer volwassenes.16-18 Dit is opmerklik dat mutasies in BRCA1 en BRCA2 sensitiwiteit vir spesifieke behandelings verhoog, insluitend platinumsoute en geteikende middels soos poli(ADP-ribose) polimerase-inhibeerders (PARPi).19,20
Oor die afgelope paar jaar het die implementering van volgende-generasie volgordebepaling (NGS) in kliniese praktyk 'n toenemende aantal BC-pasiënte in staat gestel om molekulêre toetsing vir kankervatbaarheidsindroom, insluitend BRCA1/2, te ondergaan.21 Terselfdertyd word definisies gebaseer op presiese kriteria rakende familiegeskiedenis, demografiese en klinies-patologiese eienskappe gebruik om individue wat BRCA1/2-toetsing verdien, beter te identifiseer.22,23 In hierdie konteks word bewyse oor BRCA1/2-sifting in spesifieke bevolkingsgroepe opgehoop, wat verskille tussen geografiese streke uitlig.24–27 Alhoewel daar verslae oor die BC-kohort in westelike Sisilië is, is minder data beskikbaar oor BRCA1/2-sifting in die oostelike Sisilië-bevolking.28,29
Ons beskryf hier die resultate van kiemlyn BRCA1/2-sifting in BC-pasiënte van oostelike Sisilië, wat die teenwoordigheid van BRCA1- of BRCA2-mutasies verder korreleer met die belangrikste klinies-patologiese kenmerke van hierdie gewasse.
'n Retrospektiewe studie is uitgevoer by die "Sentrum vir Eksperimentele Onkologie en Hematologie" by die Policlinico-hospitaal in Rodolico – San Marco in Catania. Van Januarie 2017 tot Maart 2021 is altesaam 455 pasiënte met bors- en eierstok-, melanoom-, pankreas- of prostaatkanker na ons molekulêre diagnostiese laboratorium verwys vir BRCA/2 genetiese toetsing. Hierdie studie is uitgevoer in ooreenstemming met die Verklaring van Helsinki, en alle deelnemers het skriftelike ingeligte toestemming verskaf voor molekulêre analise.
Histologiese en biologiese eienskappe (ER, PgR, HER2-status, Ki-67 en graad) van BC is beoordeel op kernbiopsie of chirurgiese monsters, met inagneming van slegs aggressiewe tumorkomponente. Gebaseer op hierdie eienskappe, is BC's soos volg geklassifiseer: luminale A (ER+ en/of PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminale B (ER+ en/of PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminale B-HER2+ (ER en/of PgR+, HER2+), HER2+ (ER en PgR-, HER2+) of drievoudig negatief (ER en PgR-, HER2-).
Voordat die BRCA1- en BRCA2-mutasiestatus beoordeel is, het 'n multidissiplinêre span, insluitend 'n onkoloog, 'n genetikus en 'n sielkundige, 'n tumorgenetika-konsultasie vir elke pasiënt uitgevoer om die teenwoordigheid van BRCA1 en/of BRCA1, of individue met 'n hoë risiko van PV in die BRCA2-geen, te bepaal. Pasiëntseleksie is uitgevoer volgens die riglyne van die Italiaanse Vereniging vir Mediese Onkologie (AIOM) en plaaslike Sisiliaanse aanbevelings.30,31 Hierdie kriteria sluit in: (i) familiegeskiedenis van bekende patogene variante in vatbaarheidsgene (bv. BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) mans met borskanker; (iii) diegene met borskanker en okselkanker; (iv) vroue met borskanker <36 jaar, TNBC <60 jaar, of bilaterale borskanker <50 jaar; (v) persoonlike mediese geskiedenis van borskanker <50 jaar en ten minste een eerstegraadse familielid: (a) borskanker < 50 jaar; (b) nie-mukineuse en nie-grensgevalle borskanker van enige ouderdom; (c) bilaterale borskanker; (d) manlike borskanker; (e) pankreaskanker; (f) prostaatkanker; (vi) twee of meer Persoonlike geskiedenis van borskanker > 50 jaar en familiegeskiedenis van borskanker, okselkanker, of pankreaskanker vir familielede wat eerstegraadse familielede van mekaar is (insluitend familielede met wie sy eerstegraadse familielede is); (vii) Persoonlike geskiedenis van borskanker en ten minste een eerstegraadse familielid: (a) borskanker <50 jaar; (b) nie-okselkanker; (c) bilaterale borskanker; (d) manlike borskanker; (vii) vroulik met hoëgraadse sereuse borskanker.
'n Perifere bloedmonster van 20 ml is van elke pasiënt verkry en in EDTA-buise (BD Biosciences) versamel. Genomiese DNS is uit 0,7 ml volbloedmonsters geïsoleer met behulp van die QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italië) volgens die vervaardiger se instruksies en deur 'n Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, VSA) gelei. Voer kwantifisering uit. Teikenverryking en biblioteekvoorbereiding word uitgevoer deur die Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, gereed om in die Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit gelaai te word vir outomatiese biblioteekvoorbereiding volgens die vervaardiger se instruksies. Die kit bestaan ​​uit twee multipleks PCR-primerpoele wat gebruik kan word om alle BRCA1 (NM_007300.3) en BRCA2 (NM_000059.3) gene te bestudeer. Kortliks, 15 µL van elke verdunde monster-DNS (10 ng) is by strepieskodeplate gevoeg vir biblioteekvoorbereiding en alle reagense en verbruiksgoedere is op die Ion Chef™-instrument gelaai. Outomatiese biblioteekvoorbereiding en strepieskodemonsterbiblioteekpoeling is toe op die Ion Chef™-instrument uitgevoer. Die aantal voorbereide biblioteke is toe deur 'n Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, VSA) volgens die vervaardiger se instruksies beoordeel. Laastens word biblioteke in ekwimolêre verhoudings in Ion Chef™-biblioteekmonsterbuise (strepieskode buise) en op die Ion Chef™-instrument gelaai. Volgordebepaling is uitgevoer met behulp van 'n Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) instrument (Thermo Fisher Scientific) met behulp van 'n Ion 510-skyfie (Thermo Fisher Scientific). Data-analise is uitgevoer deur Amplicon Suite (SmartSeq srl) en Ion Reporter Software.
Alle variantnomenklatuur het die huidige riglyne van die Human Genome Variation Consortium gevolg, wat aanlyn beskikbaar is (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Die kliniese betekenis van BRCA1/2-variante is gedefinieer deur die klassifikasie van die International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) te gebruik en verskillende databasisse soos ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD en UMD te raadpleeg. Die klassifikasie sluit vyf verskillende risikokategorieë in: goedaardig (kategorie I), waarskynlik goedaardig (kategorie II), variant van onsekere betekenis (VUS, kategorie III), waarskynlik patogenies (kategorie IV) en patogenies (kategorie V). Sommige het ook die effek van mutasies op proteïenstruktuur en -funksie geanaliseer, 'n insiggewende instrument met toegang tot 30 databasisse.32
Om potensiële kliniese betekenis aan elke VUS toe te ken, is die volgende berekeningsproteïenvoorspellingsalgoritmes gebruik: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) en Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Variante wat as klas 1 en 2 geklassifiseer is, is as wilde tipe beskou.
Sanger-volgordebepaling het die teenwoordigheid van elke patogene variant bevestig. Kortliks, 'n paar spesifieke primers is ontwerp vir elke opgespoorde variant deur die BRCA1- en BRCA2-geenverwysingsreekse (NG_005905.2, NM_007294.3 en NG_012772.3, NM_000059.3, onderskeidelik) te gebruik. Daarom is geteikende PCR uitgevoer, gevolg deur Sanger-volgordebepaling.
Pasiënte wat negatief getoets het vir die BRCA1/2-geen, is getoets deur multipleksligasie-afhanklike probe-amplifikasie (MLPA) volgens die vervaardiger se instruksies om die teenwoordigheid van groot genomiese herrangskikkings (LGR) te bepaal. Kortliks, DNA-monsters word gedenatureer en tot 60 BRCA1- en BRCA2-geenspesifieke probes word gebruik, wat elk 'n spesifieke DNA-volgorde van ongeveer 60 nukleotiede lank opspoor. Probe-amplifikasieprodukte, bestaande uit 'n unieke stel PCR-amplikons, is toe geanaliseer deur kapillêre elektroforese en deur Cofalyser.Net-sagteware in samewerking met die toepaslike bondelspesifieke Cofalyser-tabelle (www.mrcholland.com).
Geselekteerde klinies-patologiese veranderlikes (histologiese graad en Ki-67% proliferasie-indeks) is geassosieer met die teenwoordigheid van BRCA1/2 PV, bereken met behulp van die Prism-sagteware v. 8.4 met behulp van Fisher se eksakte toets, met die aanname dat p-waarde <0.05 betekenisvol is.
Tussen Januarie 2017 en Maart 2021 is 455 pasiënte gekeur vir kiemlyn BRCA1/2-mutasies. Mutasietoetsing is uitgevoer by die Policlinico-hospitaal se Sentrum vir Eksperimentele Onkologie en Hematologie. Volgens die Sisiliaanse riglyn (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), was daar in die Rodolico van Catania – San Marco” altesaam 389 pasiënte. Daar was borskanker, 37 eierstokkanker, 16 pankreaskanker, 8 prostaatkanker en 5 melanoom. Die verspreiding van pasiënte volgens kankertipe en ontledingsresultate word in Figuur 1 getoon.
Figuur 1 toon 'n vloeidiagram wat 'n oorsig van die studie toon. Pasiënte met bors-, melanoom-, pankreas-, prostaat- of ovariumtumore is getoets vir mutasies in die BRCA1- en BRCA2-gene.
Afkortings: PV's, patogene variant; VUS, variant van onsekere betekenis; WT, wildetipe BRCA1/2-volgorde.
Ons het ons studies selektief op borskankerkohorte gefokus. Die pasiënte het 'n mediaan ouderdom van 49 jaar gehad (reeks 23-89) en was oorwegend vroulik (n=376, of 97%).
Van hierdie proefpersone het 64 (17%) BRCA1/2-mutasies gehad en was almal vroulik. Vyf-en-dertig (9%) het PV gehad en 29 (7.5%) het VUS gehad. Sewentien (48.6%) van die 35 patogene variante het in BRCA1 en 18 (51.4%) in BRCA2 voorgekom, terwyl 5 VUS in BRCA1 (17.2%) en 24 (82.8%) in BRCA2 voorgekom het (Figure 1 en 2). LGR was nie teenwoordig in die MLPA-analise nie.
Figuur 2. Analise van BRCA1- en BRCA2-mutasies in 389 borskankerpasiënte. (A) Verspreiding van patogene variante (PV) (rooi), variante van onsekere betekenis (VUS) (oranje), en WT (blou) in 389 borskankerpasiënte; (B) 389 borskankerpasiënte Vyf-en-dertig (9%) het BRCA1/2-patogene variante (PV's) gehad. Onder hulle was 17 (48.6%) BRCA1 PV-draers (donkerrooi) en 18 (51.4%) was BRCA2-draers (ligrooi); (C) 29 (7.5%) van 389 proefpersone het VUS gedra, 5 (17.2%) BRCA1-gene (donkeroranje) en 24 (82.8%) BRCA2-gene (ligoranje).
Afkortings: PV's, patogene variant; VUS, variant van onsekere betekenis; WT, wildetipe BRCA1/2-volgorde.
Ons het vervolgens die voorkoms van BC molekulêre subtipes in pasiënte met BRCA1/2 PV ondersoek. Die verspreiding het 2 (5.7%) luminale A, 15 (42.9%) luminale B, 3 (8.6%) luminale B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ en 13 (37.1%) TNBC pasiënte ingesluit. Onder BRCA1-positiewe pasiënte het 5 (29.4%) luminale B BC gehad, 2 (11.8%) het HER2+ siekte gehad, en 10 (58.8%) het TNBC gehad. Tumore sonder BRCA1 mutasies was óf luminale A óf luminale B-HER2+ (Figuur 3). In die BRCA2-positiewe subgroep was 10 (55.6%) gewasse luminale B, 3 (16.7%) was luminale B-HER2+, 3 (16.7%) TNBC en 2 (11.1%) was luminale A (Figuur 3). Geen HER2+ gewasse was in hierdie groep teenwoordig nie. Dus, BRCA1-mutasies is algemeen in TNBC-pasiënte, terwyl BRCA2-veranderinge oorheersend is in lumen B-individue.
Figuur 3 Voorkoms van borskankersubtipes in pasiënte met patogene variante in BRCA1 en BRCA2. Histogramme wat die verspreiding van BRCA1- (donkerrooi) en BRCA2- (ligrooi) PV's onder molekulêre subtipes van borskankerpasiënte toon. Getalle wat in elke blokkie gerapporteer word, verteenwoordig die persentasie pasiënte met BRCA1- en BRCA2-PV vir elke borskankersubtipe.
Afkortings: PV's, patogene variant; HER2+, menslike epidermale groeifaktorreseptor 2 positief; TNBC, drievoudig-negatiewe borskanker.
Vervolgens het ons die tipe en geenlokalisering van BRCA1- en BRCA2-PV's beoordeel. In BRCA1-PV het ons 7 enkelnukleotiedvariante (SNV's), 6 delesies, 3 duplikasies en 1 invoeging waargeneem. Slegs een mutasie (c.5522delG) verteenwoordig 'n nuwe ontdekking. Die mees algemene BRCA1-PV wat in beide proefpersone opgespoor is, was c.5035_5039delCTAAT. Hierdie verandering behels 'n delesie van vyf nukleotiede (CTAAT) in BRCA1-ekson 15, wat lei tot die vervanging van die aminosuur leusien deur tirosien by kodon 1679, en as gevolg van 'n translasieraamverskuiwing met 'n voorspelde alternatiewe stopkodon lei dit tot voortydige proteïenafkapping. Alle ander veranderinge word slegs in een geval opgespoor. Dit is opmerklik dat een van die gerapporteerde PV's in die splitsingsplek-konsensusstreek geleë was (c.4357+1G>T) (Tabel 1).
Wat BRCA2 PV betref, het ons 6 delesies, 6 SNV's en 2 duplikasies waargeneem. Geen van die veranderinge wat gevind is, is nuut nie. Drie mutasies het in ons populasie herhaal, c.428dup en c.8487+1G>A wat in 3 proefpersone waargeneem is, gevolg deur c.5851_5854delAGTT wat in twee gevalle herwin is. Die c.428dup-verandering behels 'n herhaling van C in ekson 5 van BRCA2, wat voorspel word om 'n afgeknotte, nie-funksionele proteïen te kodeer. Die c.8487+1G>A-mutasie vind plaas in die introniese streek van BRCA2 intron 19 (± 1,2) en beïnvloed die splitsingskonsensusvolgorde, wat lei tot veranderde splitsing wat lei tot abnormale of afwesige proteïene. Die c.5851_5854delAGTT patogene variant is te wyte aan 'n 4-nukleotieddelesie van nukleotiedposisies 5851 tot 5854 in die koderende ekson 10 van die BRCA2-geen en lei tot 'n translasionele raamverskuiwing met 'n voorspelde alternatiewe stopkodon (p.S1951WfsTer). Dit is opmerklik dat, soos voorheen gerapporteer, beide veranderinge c.631G>A en c.7008-2A>T in dieselfde pasiënt opgespoor is.34 Die eerste mutasie behels die vervanging van adenosien (A) in BRCA2 ekson 7 met 'n guanien (G) bevattende nukleotied, wat lei tot 'n verandering van valien na isoleusien by kodon 211. Isoleusien-aminosuur is 'n aminosuur met baie soortgelyke eienskappe. Hierdie verandering beïnvloed normale mRNA-splitsing. Die tweede variant is geleë in 'n introniese gebied en lei tot 'n dubbele A na timien (T) substitusie voor ekson 13 van die geen wat vir BRCA2 kodeer. Die c.7008-2A>T verandering kan veelvuldige transkripsies van verskillende lengtes genereer. Verder, in die groep BRCA2 PV's, was 4 uit 18 veranderinge (22.2%) intronies.
Ons het toe BRCA1/2-skadelike mutasies in funksionele domeine en proteïenbindende streke gekarteer (Fig. 4). In die BRCA1-geen was 50% van die PV's in die borskanker-klusterstreek (BCCR) geleë, terwyl 22% van die mutasies in die ovariumkanker-klusterstreek (OCCR) geleë was (Fig. 4A). In BRCA2 PV was 35.7% van die variante in die BCCR-streek geleë en 42.8% van die mutasies was in die OCCR geleë (Fig. 4B). Vervolgens het ons die ligging van PV binne die BRCA1- en BRCA2-proteïendomeine beoordeel. Vir die BRCA1-proteïen het ons drie PV's in die lus- en spiraaldomeine gevind, en twee mutasies in die BRCT-domein (Fig. 4A). Vir die BRCA2-proteïen is 4 PV's na die BRC-herhalingsdomein gekarteer, terwyl 3 introniese en 3 eksoniese veranderinge in die oligo/oligosakkaried-bindende (OB) en toring (T) domeine opgespoor is (Figuur 4B).
Figuur 4 Skematiese voorstelling van BRCA1- en BRCA2-proteïene en lokalisering van patogene variante. Hierdie figuur toon die verspreiding van BRCA1 (A) en BRCA2 (B) patogene variante in borskankerpasiënte. Eksoniese mutasies word in blou getoon, terwyl introniese variante in oranje getoon word. Die staafhoogte verteenwoordig die aantal gevalle. Die BRCA1- en BRCA2-proteïene en hul funksionele domeine word gerapporteer. (A) Die BRCA1-proteïen bevat 'n lusdomein (RING) en 'n kernlokaliseringsvolgorde (NLS), 'n spiraalvormige domein, 'n SQ/TQ-trosdomein (SCD) en 'n BRCA1 C-terminale domein (BRCT). (B) Die BRCA2-proteïen bevat agt BRC-herhalings, 'n DNA-bindende domein met 'n heliese domein (Heliese), drie oligonukleotied/oligosakkaried-bindende (OB) voue, 'n toringdomein (T) en 'n NLS aan die C-kant. Gebiede genaamd die Borskanker-trosstreek (BCCR) en Ovariumkanker-trosstreek (OCCR) word onderaan getoon. *Verteenwoordig mutasies wat stop bepaal. kodons.
Ons het toe klinies-patologiese kenmerke van BC ondersoek wat moontlik korreleer met die teenwoordigheid van BRCA1/2 PV. Volledige kliniese rekords was beskikbaar vir 181 BRCA1/2-negatiewe pasiënte (nie-draers) en alle draers (n = 35). Daar was 'n korrelasie tussen die tempo en graad van die tumorproliferasie.
Ons het die verspreiding van Ki-67 bereken op grond van die mediaan van ons kohort (25%, reeks <10-90%). Proefpersone met Ki-67 < 25% is gedefinieer as "lae Ki-67", terwyl individue met waardes ≥ 25% as "hoë Ki-67" beskou is. Beduidende Ki-67-verskille (p<0.01) is gevind tussen nie-draers en BRCA1 PV-draers (Fig. 5A).
Figuur 5 Korrelasie van Ki-67 met graadverspreiding in borskankervroue met en sonder BRCA1- en BRCA2-PV's. (A) Boksplot wat mediaan Ki-67-waardes toon in 181 nie-draer BC-pasiënte teenoor BRCA1 (18) of BRCA2 (17) PV-pasiënte. P-waardes onder 0.5 is as statisties beduidend beskou. (B) Histogram wat die toewysing van BC-kankerpasiënte in histologiese graadgroepe (G2 en G3) volgens BRCA1- en BRCA2-mutasiestatus (WT-subjekte, BRCA1- en BRCA2-PV-draers) voorstel.
Net so het ons ondersoek of tumorgraad gekorreleer het met die teenwoordigheid van BRCA1/2 PV. Aangesien G1 BC afwesig was in ons populasie, het ons die pasiënte in twee groepe verdeel (G2 of G3). In ooreenstemming met die Ki-67-resultate het die analise 'n statisties beduidende korrelasie tussen tumorgraad en BRCA1-mutasie getoon, met 'n hoër proporsie G3-gewasse in BRCA1-draers in vergelyking met nie-draers (p<0.005) (Figuur 5B).
Vooruitgang in DNS-volgordebepalingstegnologie het ongekende vooruitgang in BRCA1/2 genetiese toetsing moontlik gemaak, met deurslaggewende implikasies vir pasiënte met 'n familiegeskiedenis van kanker. Tot op hede is ongeveer 20 000 BRCA1/2-variante geïdentifiseer en geklassifiseer volgens die Amerikaanse Vereniging vir Mediese Genetika 35 en die ENIGMA-stelsel. 35,36 Dit is welbekend dat die BRCA1/2-mutasiespektrum wyd wissel tussen geografiese streke. 37 Binne Italië het die koers van BRCA1/2 PV's gewissel van 8% tot 37%, wat wye intra-land variasie toon. 38,39 Met 'n bevolking van byna 5 miljoen, is Sisilië die vyfde grootste streek in Italië in terme van die aantal inwoners. Alhoewel data bestaan ​​oor die verspreiding van BRCA1/2 in westelike Sisilië, is daar geen uitgebreide bewyse in die oostelike deel van die eiland nie.
Ons studie is een van die eerste verslae oor die voorkoms van BRCA1/2 PV in BC-pasiënte in oostelike Sisilië.28 Ons het ons analise op BC gefokus, aangesien dit verreweg die mees algemene siekte in ons kohort is.
Toe 389 BC-pasiënte getoets is, het 9% BRCA1/2 PV's gedra, eweredig versprei tussen BRCA1 en BRCA2. Hierdie resultate stem ooreen met dié wat voorheen in die Italiaanse bevolking gerapporteer is.28 Interessant genoeg was 3% (13/389) van ons kohort manlik. Hierdie koers is hoër as wat verwag is vir manlike borskanker (1% van alle BC's),40 wat ons keuse van populasies weerspieël gebaseer op BRCA1/2-mutasierisiko. Geen van hierdie mans het egter 'n BRCA1/2 PV ontwikkel nie, dus was hulle kandidate vir verdere molekulêre analise om die teenwoordigheid van minder algemene mutasies soos PALB2, RAD51C en D, onder andere, uit te sluit. Variante van onsekere betekenis is gevind in 7% van die proefpersone waarin BRCA2 VUS duidelik was. Selfs hierdie resultaat stem ooreen met reeds bestaande bewyse.28,41,42
Toe ons die verspreiding van BC molekulêre subtipes in BRCA1/2-mutantvroue ontleed het, het ons bekende assosiasies tussen TNBC en BRCA1 PV (58.8%) en tussen luminale B BC en BRCA2 PV (55.6%) bevestig.16,43 Die luminale A- en HER2+-gewasse in BRCA1- en BRCA2 PV-draers stem ooreen met bestaande literatuurdata.16,43
Ons fokus dan op die tipe en ligging van die BRCA1/2 PV. In ons kohort was die mees algemene BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT. Alhoewel Incorvaia et al. het nie hierdie variant in hul Sisiliaanse kohort beskryf nie, maar ander outeurs het dit as 'n kiemlyn BRCA1 PV gerapporteer.34 Verskeie BRCA1 PV's is in ons kohort gevind – bv. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA en c.5266dupC – wat in Sisilië waargeneem is.28 Hiervan word twee BRCA1-stigtermutasies (c.181T>G en c.5266dupC) algemeen aangetref in Ashkenazi-Jode van Oos- en Sentraal-Europa (Pole, Tsjeggies), Sloweens, Oostenryks, Hongaars, Belarussies en Duits), 44,45 en is in die Verenigde State en Argentinië onlangs gedefinieer as 'n "herhalende kiemlynvariant" in Italiaanse pasiënte met BC en OC. Die 34c.514del-variant is voorheen geïdentifiseer in 8 borskankerpasiënte van Noord-Sicilië in Palermo en Messina. Interessant genoeg, selfs Incorvaia et al. het die c.3253dupA-variant in sommige families in Catania gevind.28 Die mees verteenwoordigende BRCA2 PV's is c.428dup, c.5851_5854delAGTT en die introniese variant c.8487+1G>A, wat in meer besonderhede gerapporteer is 28 in 'n pasiënt in Palermo met c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV is waargeneem in huishoudings in noordwes-Sicilië, hoofsaaklik in die Trapani- en Palermo-streke, terwyl c.5851_5854delAGTT PV in huishoudings in noordwes-Sicilië waargeneem is. Die 8487+1G>A-variant was meer algemeen in proefpersone van Messina, Palermo en Caltanissetta.28 Rebbeck et al. het voorheen die c.5851_5854delAGTT-verandering in Colombia beskryf.37 Nog 'n BRCA2 PV, c.631+1G>A, is gevind in BC- en OC-pasiënte van Sisilië (Agrigento, Siracusa en Ragusa).28 Dit is opmerklik dat ons die saambestaan ​​van twee BRCA2-variante (BRCA2 c.631G>A en c.7008-2A>T) in dieselfde pasiënt waargeneem het, wat ons aangeneem het as geskei in cis-modus, soos voorheen so gerapporteer.34,46 Hierdie BRCA2-dubbelmutasies word inderdaad gereeld in die Italiaanse streek waargeneem en daar is gevind dat dit voortydige stopkodons inbring, wat boodskapper-RNA-splitsing beïnvloed en veroorsaak dat die BRCA2-proteïen faal.47,48
Ons het ook BRCA1- en BRCA2-PV's in vermeende OCCR- en BCCR-streke van proteïendomeine en -gene gekarteer. Hierdie streke is deur Rebbeck et al. beskryf as risikogebiede vir die ontwikkeling van eierstok- en borskanker, onderskeidelik.49 Die bewyse rakende die verband tussen die ligging van kiemlynvariante en die risiko van bors- of eierstokkanker bly egter kontroversieel.28,50-52 In ons populasie was BRCA1-PV's hoofsaaklik in die BCCR-streek geleë, terwyl BRCA2-PV's hoofsaaklik in die OCCR-streek geleë was. Ons kon egter geen verband vind tussen vermeende OCCR- en BCCR-streke en BC-kenmerke nie. Dit kan wees as gevolg van die beperkte aantal pasiënte met BRCA1/2-mutasies. Vanuit 'n proteïendomeinperspektief is BRCA1-PV's oor die hele proteïen versprei, en BRCA2-veranderinge word verkieslik in die BRC-herhalingsdomein gevind.
Laastens het ons klinies-patologiese kenmerke van BC met BRCA1/2 PV gekorreleer. As gevolg van die beperkte aantal pasiënte wat ingesluit is, het ons slegs 'n beduidende korrelasie tussen Ki-67 en tumorgraad gevind. Alhoewel die assessering en interpretasie van Ki-67 ietwat kontroversieel bly, is dit seker dat hoë proliferatiewe koerse geassosieer word met 'n verhoogde risiko van siekteherhaling en verminderde oorlewing. Tot op hede is die afsnypunt vir die onderskeid tussen "hoë" en "lae" Ki-67 20%. Hierdie drempel is egter nie van toepassing op ons BRCA1/2-mutasiepasiëntpopulasie nie, wat 'n mediaan Ki-67-waarde van 25% het. Hierdie tendens in hoë Ki-67-koerse kan verklaar word deur die voorkoms in ons luminale B- en TNBC-kohorte, waarvan min luminale A-gewasse teenwoordig was. Sommige bewyse blyk egter daarop te dui dat 'n hoër Ki-67-afsnypunt (25-30%) pasiënte beter kan stratifiseer volgens hul prognose.53,54 Uit die resultate van ons analise is 'n beduidende korrelasie nie verbasend nie. Kom voor tussen hoë Ki-67- en grade en die teenwoordigheid van BRCA1. PV. Trouens, BRCA1-verwante gewasse is tipies van TNBC en vertoon meer aggressiewe kenmerke.16,17
Ten slotte verskaf hierdie studie 'n verslag oor die mutasiestatus van BRCA1/2 in 'n BC-kohort van oostelike Sisilië. Oor die algemeen is ons bevindinge in ooreenstemming met reeds bestaande bewyse, beide in terme van mutasieprevalensie en klinies-patologiese kenmerke in BC. Meer studies in groter populasies van BRCA1/2-mutant BC-pasiënte, soos die gebruik van multigenoom-uitgebreide mutasie-analise, is geregverdig om die teenwoordigheid van PV's te bepaal wat onderskeibaar en minder gereeld as BRCA1/2 is. Dit sal die identifisering en behoorlike bestuur van die toenemende aantal individue met 'n verhoogde risiko vir kanker as gevolg van genetiese mutasies moontlik maak.
Ons het bevestig dat pasiënte ingeligte toestemming onderteken het om hul tumormonsters anoniem vir navorsingsdoeleindes vry te stel. Alle pasiënte het skriftelike ingeligte toestemming onderteken volgens die Verklaring van Helsinki. Volgens die beleid van AOU Policlinico "G.Rodolico - S.Marco", is hierdie studie vrygestel van etiese hersiening omdat die BRCA1/2-analise volgens kliniese praktyk uitgevoer is en alle pasiënte skriftelike ingeligte toestemming gegee het. Pasiënte stem ook in tot die gebruik van hul data vir navorsingsdoeleindes.
Ons bedank prof. Paolo Vigneri vir sy bystand met die versorging van borskankerpasiënte soos versoek deur die Etiekkomitee.
Federica Martorana rapporteer honorariums van Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Die ander outeurs verklaar geen belangebotsings in hierdie werk nie.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Globale Kankerstatistieke 2020: GLOBOCAN skat die voorkoms en mortaliteit van 36 kankers in 185 lande regoor die wêreld. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249. doi: 10.3322/caac.21660