Javascript е деактивиран във вашия браузър. Някои функции на този уебсайт няма да работят, когато javascript е деактивиран.
Регистрирайте се с вашите специфични данни и конкретно лекарство, което ви интересува, и ние ще съпоставим предоставената от вас информация със статии в нашата обширна база данни и незабавно ще ви изпратим PDF копие по имейл.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Стефания Стела, 1,2 Силвия Рита Витале, 1,2 Федерика Марторана, 1,2 Микеле Масимино, 1,2 Джулиана Павоне, 3 Катя Ланцафаме, 3 Себастиано Бианка, 4 Киара Бароне, 5 Кристина Горгоне, 6 Марко Фичера, 6, 7 Ливия Манзела1,21 Отдел по клинични и Експериментална медицина, Университет на Катания, Катания, 95123, Италия; 2 Център за експериментална онкология и хематология, AOU Policlinico „G.Rodolico – San Marco“, Катания, 95123, Италия; 3 Медицинска онкология, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Катания, 95123, Италия; 4 Медицинска генетика, ARNAS Garibaldi, Катания, 95123, Италия; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Италия; 6 Катедра по биомедицински и биотехнологични науки, Университет на Катания, Медицинска генетика, Катания, Италия, 95123; 7 Изследователски институт Oasi-IRCCS, Тройна, 94018, Италия Комуникации: Стефания Стела, тел. +39 095 378 1946, имейл [email protected]; [email protected] Цел: Мутации в зародишната линия в BRCA1 и BRCA2 и установен рак на гърдата (РГ), яйчниците (РЯ) и други, свързани с риск от рак през целия живот. Тестването за гена BRCA е ключово за оценка на индивидуалния риск, както и за намиране на методи за превенция при здрави носители и адаптиране на лечението при пациенти с рак. Разпространението на промените в BRCA1 и BRCA2 варира значително в различните географски региони и въпреки че съществуват данни за патогенните варианти на BRCA в сицилиански семейства, липсват проучвания, специално насочени към популации в източна Сицилия. Целта на нашето проучване беше да се изследва честотата и разпространението на патогенните промени в зародишната линия на BRCA в кохорта от пациенти с РГ от източна Сицилия и да се оцени тяхната връзка със специфични черти на РГ, използвайки секвениране от следващо поколение. Наличието на промени корелира със степента на тумора и индекса на пролиферация. РЕЗУЛТАТИ: Като цяло, 35 пациенти (9%) са имали патогенен вариант на BRCA, 17 (49%) в BRCA1 и 18 (51%) в BRCA2. Промените в BRCA1 са разпространени при пациенти с тройно негативен РГ, докато мутациите в BRCA2 са по-чести при пациенти с лумен РГ. В сравнение с Неносителите, пациентите с BRCA1 варианти са имали значително по-висок туморен клас и пролиферативен индекс. Заключения: Нашите открития предоставят общ преглед на мутационния статус на BRCA при пациенти с рак на белия дроб от Източна Сицилия и потвърждават ролята на NGS анализа при идентифициране на пациенти с наследствен рак на белия дроб. Като цяло, тези данни са в съответствие с предишни доказателства, подкрепящи BRCA скрининга за правилна превенция и лечение на рак при носители на мутации.
Ракът на гърдата (РГ) е най-често срещаното злокачествено заболяване в световен мащаб и най-смъртоносният рак при жените.1 Биологичните характеристики, които определят прогнозата и клиничното поведение на РГ, са обстойно проучени и частично изяснени с течение на времето. Всъщност, понастоящем се използват няколко сурогатни маркера за класифициране на РГ в различни молекулярни подтипове. Те са естрогенен (ER) и/или прогестеронов рецептор (PgR), амплификация на рецептора 2 на човешкия епидермален растежен фактор (HER2), индекс на пролиферация Ki-67 и степен на тумора (G).2 Комбинацията от тези променливи идентифицира следните категории РГ: 1) Луминални тумори, показващи експресия на ER и/или PgR, представляват 75% от РГ. Тези тумори са допълнително разделени на Луминал А, когато Ki-67 е под 20% и HER2 отрицателен, и Луминал B, когато Ki-67 е равен или над 20% и при наличие на HER2 амплификация, независимо от индекса на пролиферация; 2) HER2+ тумори, които са ER и PgR отрицателни, но показват HER2 амплификация. Тази група представлява 10% от всички тумори на гърдата; 3) Тройно негативният рак на гърдата (TNBC), който не показва експресия на ER и PgR и амплификация на HER2, представлява около 15% от случаите на рак на гърдата.2-4
Сред тези подтипове на рак на белия дроб, степента на тумора и индексът на пролиферация представляват биомаркери от напречно сечение, които са пряко и независимо свързани с агресивността и прогнозата на тумора.5,6
В допълнение към гореспоменатите биологични характеристики, ролята на наследствените генетични промени, водещи до развитие на рак на гърдата, става все по-важна през последните няколко години.7 Около 1 на 10 тумора на гърдата се наследяват поради промени в зародишната линия в специфични гени.8 Две големи епидемиологични проучвания, обхващащи повече от 180 000 жени, наскоро идентифицираха група от осем гена (т.е. ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C и RAD51D), които са основно отговорни за наследствения рак на гърдата. Сред тези гени BRCA1 и BRCA2 (наричани по-долу BRCA1/2) показват най-силна корелация с развитието на тумори на гърдата.9-12 Всъщност, мутациите в зародишната линия на BRCA1/2 значително увеличават риска от рак на гърдата през целия живот, както и от други злокачествени заболявания, включително на яйчниците, простатата, панкреаса, колоректалния рак и меланома. От 13 до 80-годишна възраст кумулативната честота на рак на гърдата е 72% при жени с патогенен вариант (PV) на BRCA1 и 69% при жени с BRCA2 PV.14
Забележително е, че скорошна публикация предполага, че рискът от рак на белия дроб (BC) зависи от вида на фотосинтезата (PV). Всъщност, в сравнение с патогенните отрязани варианти, очевидните миссенс варианти, особено в гена BRCA1, са свързани с намален риск от BC, особено при по-възрастни жени.15
Наличието на BRCA1 или BRCA2 PV е свързано с различни биологични и клиникопатологични характеристики.16,17 BRCA1-асоциираните BC са склонни да бъдат клинично агресивни, слабо диференцирани и силно пролиферативни. Тези тумори обикновено са тройно негативни и имат ранна възраст на начало. Туморите, които се появяват при пациенти с BRCA2-мутация, обикновено показват умерена до добре диференцирана степен и променливи пролиферативни индекси. Тези тумори са по-чести в лумен B и обикновено се срещат при по-възрастни хора.16-18 Важно е да се отбележи, че мутациите в BRCA1 и BRCA2 повишават чувствителността към специфични лечения, включително платинови соли и таргетни лекарства като инхибитори на поли(ADP-рибоза) полимераза (PARPi).19,20
През последните няколко години, прилагането на секвениране от следващо поколение (NGS) в клиничната практика позволи на все по-голям брой пациенти с рак на доменния мозък (BC) да се подложат на молекулярно изследване за синдроми на предразположеност към рак, включително BRCA1/2.21 Едновременно с това, дефиниции, базирани на точни критерии относно фамилната анамнеза, демографските и клиникопатологичните характеристики, за по-добро идентифициране на лица, достойни за BRCA1/2 изследване.22,23 В този контекст се натрупват доказателства за скрининг на BRCA1/2 в специфични популации, подчертавайки разликите между географските региони.24–27 Въпреки че има доклади за кохортата на BC в Западна Сицилия, по-малко данни са налични за скрининг на BRCA1/2 в популацията на Източна Сицилия.28,29
Тук описваме резултатите от скрининга на зародишната линия BRCA1/2 при пациенти с рак на дорма от източна Сицилия, като допълнително корелираме наличието на BRCA1 или BRCA2 мутации с основните клиникопатологични характеристики на тези тумори.
Ретроспективно проучване беше проведено в „Центъра за експериментална онкология и хематология“ към болница Policlinico.Rodolico – San Marco в Катания. От януари 2017 г. до март 2021 г. общо 455 пациенти с рак на гърдата и яйчниците, меланом, панкреас или простата бяха насочени към нашата молекулярно-диагностична лаборатория за генетично изследване на BRCA/2. Това проучване беше проведено в съответствие с Декларацията от Хелзинки и всички участници предоставиха писмено информирано съгласие преди молекулярния анализ.
Хистологичните и биологичните характеристики (ER, PgR, HER2 статус, Ki-67 и степен) на рак на белия дроб (BC) бяха оценени върху биопсия на ядрото или хирургични проби, като се вземат предвид само агресивните туморни компоненти. Въз основа на тези характеристики, раковите клетки (BC) бяха класифицирани както следва: луминален A (ER+ и/или PgR+, HER2-, Ki-67<20%), луминален B (ER+ и/или PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), луминален B-HER2+ (ER и/или PgR+, HER2+), HER2+ (ER и PgR-, HER2+) или тройно отрицателен (ER и PgR-, HER2-).
Преди да се оцени статусът на мутациите на BRCA1 и BRCA2, мултидисциплинарен екип, включващ онколог, генетик и психолог, проведе консултация за туморна генетика за всеки пациент, за да определи наличието на BRCA1 и/или BRCA1, или за лица с висок риск от паралитични заболявания (PV) в гена BRCA2. Подборът на пациентите беше извършен съгласно насоките на Италианското дружество по медицинска онкология (AIOM) и местните сицилиански препоръки.30,31 Тези критерии включват: (i) фамилна анамнеза за известни патогенни варианти в гените за чувствителност (напр. BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) мъже с рак на доменния мозък (BC); (iii) такива с рак на доменния мозък и рак на яйцеклетка (OC); (iv) жени с рак на доменния мозък <36 години, немуцинозен рак на доменния мозък (TNBC) <60 години или двустранен рак на доменния мозък <50 години; (v) лична медицинска анамнеза за рак на доменния мозък <50 години и поне един роднина от първа степен: (a) рак на доменния мозък < 50 години; (b) немуцинозен и неграничен рак на яйцеклетка на всяка възраст; (c) двустранен рак на доменния мозък; (d) мъжки рак на доменния мозък; (д) рак на панкреаса; (е) рак на простатата; (vi) два или повече случая на лична анамнеза за рак на доменния орган > 50 години и фамилна анамнеза за рак на доменния орган, рак на простатата или рак на панкреаса за роднини, които са роднини от първа степен помежду си (включително роднини, с които тя е роднина от първа степен); (vii) Лична анамнеза за рак на доменния орган и поне един роднина от първа степен: (а) рак на доменния орган <50 години; (б) нероден рак на доменния орган; (в) двустранен рак на доменния орган; (г) рак на доменния орган при мъжете; (vii) жена с високостепенен серозен рак на доменния орган.
От всеки пациент е взета 20 mL периферна кръвна проба и е събрана в EDTA епруветки (BD Biosciences). Геномна ДНК е изолирана от 0,7 mL проби от пълна кръв, използвайки QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Италия) съгласно инструкциите на производителя и е прекарана през Qubit® 3.0 флуорометър (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, САЩ). Извършва се количествено определяне. Обогатяването на мишени и подготовката на библиотеки се извършват от Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, готов за зареждане в Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit за автоматизирана подготовка на библиотеки съгласно инструкциите на производителя. Комплектът се състои от два мултиплексни PCR праймерни пула, които могат да се използват за изследване на всички гени BRCA1 (NM_007300.3) и BRCA2 (NM_000059.3). Накратко, 15 µL от всяка разредена ДНК проба (10 ng) бяха добавени към баркодирани плаки за подготовка на библиотеки и всички реактиви и консумативи бяха заредени в апарата Ion Chef™. След това автоматизираната подготовка на библиотеки и обединяването на баркодираните библиотеки с проби бяха извършени на апарата Ion Chef™. Броят на приготвените библиотеки беше оценен с Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) съгласно инструкциите на производителя. Накрая библиотеките се комбинират в еквимоларни съотношения в епруветки за проби от библиотеки Ion Chef™ (епруветки с баркод) и се зареждат върху инструментът Ion Chef™. Секвенирането беше извършено с помощта на инструмент Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific), използващ чип Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Анализът на данните беше извършен с Amplicon Suite (SmartSeq srl) и софтуера Ion Reporter.
Цялата номенклатура на вариантите следваше настоящите насоки на Консорциума за вариации в човешкия геном, достъпни онлайн (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Клиничното значение на вариантите на BRCA1/2 беше определено с помощта на класификацията на Международния консорциум ENIGMA (Мрежа, базирана на доказателства, за интерпретиране на алели с мутации в зародишната линия, https://enigmaconsortium.org/) и консултации с различни бази данни като ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD и UMD. Класификацията включва пет различни категории риск: доброкачествени (категория I), вероятно доброкачествени (категория II), варианти с неясна значимост (VUS, категория III), вероятно патогенни (категория IV) и патогенни (категория V). VarSome също анализира ефекта на мутациите върху структурата и функцията на протеините, информативен инструмент с достъп до 30 бази данни.32
За да се определи потенциална клинична значимост на всеки VUS, бяха използвани следните изчислителни алгоритми за прогнозиране на протеини: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) и Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Варианти, класифицирани като клас 1 и 2, бяха считани за див тип.
Секвенирането по Сангер потвърди наличието на всеки патогенен вариант. Накратко, за всеки открит вариант беше проектиран чифт специфични праймери, като се използваха референтните последователности на гените BRCA1 и BRCA2 (съответно NG_005905.2, NM_007294.3 и NG_012772.3, NM_000059.3). Следователно, беше извършена таргетна PCR, последвана от секвениране по Сангер.
Пациенти с отрицателен резултат за гена BRCA1/2 са изследвани чрез мултиплексна лигиращо-зависима амплификация на сонда (MLPA) съгласно инструкциите на производителя, за да се оцени наличието на големи геномни пренареждания (LGR). Накратко, ДНК пробите се денатурират и се използват до 60 BRCA1 и BRCA2 генно-специфични сонди, всяка от които открива специфична ДНК последователност с дължина приблизително 60 нуклеотида. Продуктите от амплификацията на сондата, състоящи се от уникален набор от PCR ампликони, след това са анализирани чрез капилярна електрофореза и чрез софтуера Cofalyser.Net във връзка със съответните специфични за партидата таблици Cofalyser (www.mrcholland.com).
Избрани клиникопатологични променливи (хистологична степен и Ki-67% индекс на пролиферация) бяха свързани с наличието на BRCA1/2 PV, изчислено с помощта на софтуера Prism v. 8.4, използвайки точния тест на Fisher, приемайки p-стойност <0,05 за значима.
Между януари 2017 г. и март 2021 г. 455 пациенти са били изследвани за мутации в зародишната линия на BRCA1/2. Тестването за мутации е проведено в Центъра за експериментална онкология и хематология към болница „Поликлинико“. Съгласно сицилианското ръководство (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), в Родолико де Катания – Сан Марко“ са били изследвани общо 389 пациенти. Имало е рак на гърдата, 37 рак на яйчниците, 16 рак на панкреаса, 8 рак на простатата и 5 меланом. Разпределението на пациентите според вида на рака и резултатите от анализа е показано на Фигура 1.
Фигура 1 показва блок-схема, представяща общ преглед на проучването. Пациентки с тумори на гърдата, меланома, панкреаса, простатата или яйчниците са били тествани за мутации в гените BRCA1 и BRCA2.
Съкращения: PV, патогенен вариант; VUS, вариант с неясна значимост; WT, див тип BRCA1/2 последователност.
Селективно фокусирахме нашите проучвания върху кохорти с рак на гърдата. Пациентките бяха на средна възраст 49 години (диапазон 23-89) и бяха предимно жени (n=376 или 97%).
От тези субекти, 64 (17%) са имали BRCA1/2 мутации и всички са били жени. Тридесет и пет (9%) са имали PV, а 29 (7,5%) са имали VUS. Седемнадесет (48,6%) от 35-те патогенни варианта са се появили в BRCA1 и 18 (51,4%) в BRCA2, докато 5 VUS са се появили в BRCA1 (17,2%) и 24 (82,8%) в BRCA2 (Фигури 1 и 2). LGR не е присъствал в MLPA анализа.
Фигура 2. Анализ на BRCA1 и BRCA2 мутации при 389 пациенти с рак на гърдата. (A) Разпределение на патогенни варианти (PV) (червено), варианти с неясна значимост (VUS) (оранжево) и WT (синьо) при 389 пациенти с рак на гърдата; (B) 389 пациенти с рак на гърдата Тридесет и пет (9%) са имали патогенни варианти (PV) на BRCA1/2. Сред тях 17 (48,6%) са били носители на BRCA1 PV (тъмночервено) и 18 (51,4%) са били носители на BRCA2 (светлочервено); (C) 29 (7,5%) от 389 субекта са носили VUS, 5 (17,2%) гени BRCA1 (тъмнооранжево) и 24 (82,8%) гени BRCA2 (светлооранжево).
Съкращения: PV, патогенен вариант; VUS, вариант с неясна значимост; WT, див тип BRCA1/2 последователност.
След това изследвахме разпространението на молекулярни подтипове на рак на доменния мозък (BC) при пациенти с BRCA1/2 паралимпиаден тумор (PV). Разпределението включваше 2 (5,7%) с луминален A, 15 (42,9%) с луминален B, 3 (8,6%) с луминален B-HER2+, 2 (5,7%) с HER2+ и 13 (37,1%) пациенти с неопределен рак на доменния мозък (TNBC). Сред BRCA1-позитивните пациенти, 5 (29,4%) имаха луминален B BC, 2 (11,8%) имаха HER2+ заболяване и 10 (58,8%) имаха TNBC. Туморите без BRCA1 мутации бяха или луминален A, или луминален B-HER2+ (Фигура 3). В BRCA2-позитивната подгрупа, 10 (55,6%) тумора бяха луминален B, 3 (16,7%) бяха луминален B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC и 2 (11,1%) бяха луминален A (Фигура 3). Няма HER2+ тумори. бяха налични в тази група. По този начин, BRCA1 мутациите са разпространени при пациенти с TNBC, докато BRCA2 промените са преобладаващи при индивиди с лумен B.
Фигура 3 Разпространение на подтипове рак на гърдата при пациенти с патогенни варианти в BRCA1 и BRCA2. Хистограми, показващи разпределението на BRCA1- (тъмночервено) и BRCA2- (светлочервено) парапротеини (ПВ) сред молекулярните подтипове на пациенти с рак на гърдата. Числата, посочени във всяко поле, представляват процента на пациентите с BRCA1 и BRCA2 ПВ за всеки подтип рак на гърдата.
Съкращения: PV, патогенен вариант; HER2+, положителен за рецептор 2 на човешки епидермален растежен фактор; TNBC, тройно негативен рак на гърдата.
Впоследствие оценихме вида и генната локализация на BRCA1 и BRCA2 паранормалните клетки (PV). В BRCA1 PV наблюдавахме 7 еднонуклеотидни варианта (SNV), 6 делеции, 3 дупликации и 1 инсерция. Само една мутация (c.5522delG) представлява ново откритие. Най-често срещаният BRCA1 PV, открит и при двамата субекта, беше c.5035_5039delCTAAT. Тази промяна включва делеция на пет нуклеотида (CTAAT) в BRCA1 екзон 15, което води до заместване на аминокиселината левцин с тирозин в кодон 1679 и поради изместване на рамката на транслация с предвиден алтернативен стоп кодон води до преждевременно отрязване на протеина. Всички останали промени са открити само в един случай. Забележително е, че един от докладваните PV е локализиран в консенсусния регион на мястото на сплайсинг (c.4357+1G>T) (Таблица 1).
По отношение на BRCA2 PV, наблюдавахме 6 делеции, 6 SNV и 2 дупликации. Нито една от откритите промени не е нова. Три мутации се появиха повторно в нашата популация, c.428dup и c.8487+1G>A, наблюдавани при 3 субекта, последвани от c.5851_5854delAGTT, възстановена в два случая. Промяната на c.428dup включва повторение на C в екзон 5 на BRCA2, за който се предполага, че кодира скъсен, нефункционален протеин. Мутацията c.8487+1G>A се среща в интронната област на интрон 19 на BRCA2 (± 1,2) и засяга консенсусната последователност на сплайсинга, което води до променен сплайсинг, водещ до анормален или липсващ протеин. Патогенният вариант c.5851_5854delAGTT се дължи на 4-нуклеотидна делеция от нуклеотидни позиции 5851 до 5854 в кодиращия екзон 10 на гена BRCA2 и води до транслационна... изместване на рамката с предвиден алтернативен стоп кодон (p.S1951WfsTer). Забележително е, че както беше съобщено по-рано, и двете промени c.631G>A и c.7008-2A>T бяха открити при един и същ пациент.34 Първата мутация включва заместване на аденозин (A) в екзон 7 на BRCA2 с нуклеотид, съдържащ гуанин (G), което води до промяна на валин на изолевцин при кодон 211, а аминокиселината изолевцин е аминокиселина с много сходни свойства. Тази промяна засяга нормалното сплайсинг на иРНК. Вторият вариант е разположен в интронен регион и води до двойно заместване на А с тимин (T) преди екзон 13 на гена, кодиращ BRCA2. Промяната c.7008-2A>T може да генерира множество транскрипти с различна дължина. Освен това, в групата на BRCA2 PV, 4 от 18 промени (22,2%) са били интроненни.
След това картографирахме вредните мутации на BRCA1/2 във функционални домейни и протеин-свързващи региони (фиг. 4). В гена BRCA1, 50% от PVs бяха разположени в клъстерния регион на рака на гърдата (BCCR), докато 22% от мутациите бяха разположени в клъстерния регион на рака на яйчниците (OCCR) (фиг. 4A). В BRCA2 PV, 35,7% от вариантите бяха разположени в BCCR региона и 42,8% от мутациите бяха разположени в OCCR (фиг. 4B). След това оценихме местоположението на PV в протеиновите домейни BRCA1 и BRCA2. За протеина BRCA1 открихме три PVs в домейните тип „бримка“ и „спирална спирала“ и две мутации в домейна BRCT (фиг. 4A). За протеина BRCA2, 4 PVs бяха картографирани към повторяемия домейн BRC, докато 3 интронни и 3 екзонични промени бяха открити в домейните за свързване на олиго/олигозахариди (OB) и „кула“ (T) (фиг. 4B).
Фигура 4 Схематично представяне на протеините BRCA1 и BRCA2 и локализация на патогенни варианти. Тази фигура показва разпределението на патогенните варианти на BRCA1 (A) и BRCA2 (B) при пациенти с рак на гърдата. Екзонните мутации са показани в синьо, докато интронните варианти са показани в оранжево. Височината на лентата представлява броя на случаите. Представени са протеините BRCA1 и BRCA2 и техните функционални домейни. (A) Протеинът BRCA1 съдържа бримков домейн (RING) и ядрено-локализираща последователност (NLS), домейн със спираловидна намотка, SQ/TQ клъстерен домейн (SCD) и C-терминален домейн на BRCA1 (BRCT). (B) Протеинът BRCA2 съдържа осем BRC повторения, ДНК-свързващ домейн със спирален домейн (Helical), три олигонуклеотидни/олигозахаридно-свързващи (OB) гънки, куловиден домейн (T) и NLS от C страната. Области, наречени клъстерен регион на рака на гърдата (BCCR) и клъстерен регион на рака на яйчниците (OCCR), са показани в долната част. *Представлява мутации, които определят стоп кодони.
След това изследвахме клиникопатологичните характеристики на рак на белия дроб (BC), които биха могли да корелират с наличието на BRCA1/2 паравентрикуларни тумори (PV). Пълни клинични записи бяха налични за 181 BRCA1/2-отрицателни пациенти (неносители) и всички носители (n = 35). Имаше корелация между скоростта на пролиферация на тумора и степента му.
Изчислихме разпределението на Ki-67 въз основа на медианата на нашата кохорта (25%, диапазон <10-90%). Субектите с Ki-67 < 25% бяха определени като „ниски Ki-67“, докато индивиди със стойности ≥ 25% бяха считани за „високи Ki-67“. Значителни разлики в Ki-67 (p<0,01) бяха открити между неносители и носители на BRCA1 PV (фиг. 5А).
Фигура 5 Корелация на Ki-67 с разпределението на степента при жени с рак на гърдата със и без BRCA1 и BRCA2 парагенетични тумори. (A) Диаграма, показваща медианните стойности на Ki-67 при 181 пациенти с рак на гърдата без носители спрямо пациенти с BRCA1 (18) или BRCA2 (17) парагенетични тумори. P стойностите под 0,5 се считат за статистически значими. (B) Хистограма, представяща разпределението на пациенти с рак на гърдата в групи по хистологичен клас (G2 и G3) според статуса на мутациите BRCA1 и BRCA2 (субекти с WT, носители на BRCA1 и BRCA2 парагенетични тумори).
По същия начин, изследвахме дали степента на тумора корелира с наличието на BRCA1/2 паравентрикуларни тумори. Тъй като G1 рак на гърдата липсваше в нашата популация, разделихме пациентите на две групи (G2 или G3). В съответствие с резултатите от Ki-67, анализът разкри статистически значима корелация между степента на тумора и BRCA1 мутацията, с по-висок дял на G3 тумори при носители на BRCA1 в сравнение с неносители (p<0,005) (Фигура 5B).
Напредъкът в технологията за ДНК секвениране позволи безпрецедентен напредък в генетичното тестване на BRCA1/2, с решаващи последици за пациенти с фамилна анамнеза за рак. Към днешна дата приблизително 20 000 варианта на BRCA1/2 са идентифицирани и класифицирани според Американското дружество по медицинска генетика35 и системата ENIGMA.35,36 Добре известно е, че мутационният спектър на BRCA1/2 варира значително в различните географски региони.37 В Италия честотата на BRCA1/2 PV варира от 8% до 37%, което показва широка вариабилност в рамките на страната.38,39 С население от почти 5 милиона, Сицилия е петият по големина регион в Италия по отношение на броя на жителите. Въпреки че съществуват данни за разпространението на BRCA1/2 в Западна Сицилия, няма обширни доказателства в източната част на острова.
Нашето проучване е един от първите доклади за честотата на BRCA1/2 полиомиелитни заболявания (PV) при пациенти с рак на догинекомастията (BC) в Източна Сицилия.28 Фокусирахме анализа си върху BC, тъй като това е най-често срещаното заболяване в нашата кохорта.
При тестване на 389 пациенти с рак на гърдата (BC), 9% са носили BRCA1/2 парагенетични вариабили (PV), равномерно разпределени между BRCA1 и BRCA2. Тези резултати са в съответствие с предишните данни в италианската популация.28 Интересното е, че 3% (13/389) от нашата кохорта са били мъже. Този процент е по-висок от очаквания за мъжки рак на гърдата (1% от всички BC),40 което отразява нашия подбор на популации въз основа на риска от мутация на BRCA1/2. Никой от тези мъже обаче не е развил BRCA1/2 парагенен вариабилитет (PV), така че те са били кандидати за по-нататъшен молекулярен анализ, за ​​да се изключи наличието на по-рядко срещани мутации като PALB2, RAD51C и D, наред с други. Варианти с неясна значимост са открити при 7% от пациентите, при които е била очевидна BRCA2 VUS. Дори този резултат е в съответствие с вече съществуващи доказателства.28,41,42
Когато анализирахме разпределението на молекулярните подтипове на рак на бъбреците (BC) при жени с BRCA1/2 мутация, потвърдихме известни връзки между TNBC и BRCA1 PV (58,8%) и между луминален B BC и BRCA2 PV (55,6%).16,43 Луминалните A и HER2+ тумори при носители на BRCA1 и BRCA2 PV са в съответствие със съществуващите литературни данни.16,43
След това се фокусираме върху вида и местоположението на BRCA1/2 PV. В нашата кохорта най-често срещаният BRCA1 PV беше c.5035_5039delCTAAT. Въпреки че Incorvaia et al. не са описали този вариант в своята сицилианска кохорта, други автори са го съобщили като зародишен BRCA1 PV.34 В нашата кохорта бяха открити няколко BRCA1 PV – например c.181T>G, c.514del, c.3253dupA и c.5266dupC – които са наблюдавани в Сицилия.28 От тях две основателски мутации на BRCA1 (c.181T>G и c.5266dupC) се срещат често при ашкеназки евреи от Източна и Централна Европа (Полша, Чехия), Словения, Австрия, Унгария, Беларус и Германия),44,45 и в Съединените щати и Аржентина наскоро беше определен като „рецидивиращ зародишен вариант“ при италиански пациенти с рак на гърдата и рак на гърдата. Вариантът 34c.514del е идентифициран преди това при 8 пациенти с рак на гърдата от Северна Сицилия в Палермо и Месина. Интересно е, че дори Incorvaia et al. открили варианта c.3253dupA в някои семейства в Катания.28 Най-представителните BRCA2 параферменти са c.428dup, c.5851_5854delAGTT и интроничният вариант c.8487+1G>A, които са докладвани по-подробно28 при пациент в Палермо с c.428dup, c.5851_5854delAGTT парафермент е наблюдаван в домакинства в северозападна Сицилия, главно в регионите Трапани и Палермо, докато c.5851_5854delAGTT парафермент е наблюдаван в домакинства в северозападна Сицилия. Вариантът 8487+1G>A е по-често срещан при субекти от Месина, Палермо и Калтанисета.28 Rebbeck et al. Преди това е описана промяната c.5851_5854delAGTT в Колумбия.37 Друг BRCA2 PV, c.631+1G>A, е открит при пациенти с рак на дорма и рак на овариалната област от Сицилия (Агридженто, Сиракуза и Рагуза).28 Забележително е, че наблюдавахме едновременното съществуване на два варианта на BRCA2 (BRCA2 c.631G>A и c.7008-2A>T) при един и същ пациент, за които предположихме, че са сегрегирани в цис режим, както е съобщено по-рано.34,46 Тези BRCA2 мутации наистина се наблюдават често в италианския регион и е установено, че въвеждат преждевременни стоп кодони, засягайки сплайсинга на информационната РНК и причинявайки неуспех на BRCA2 протеина.47,48
Също така картографирахме BRCA1 и BRCA2 PVs в предполагаеми OCCR и BCCR региони на протеинови домейни и гени. Тези региони бяха описани от Rebbeck et al. като рискови области за развитие съответно на рак на яйчниците и гърдата.49 Въпреки това, доказателствата относно връзката между местоположението на вариантите на зародишната линия и риска от рак на гърдата или яйчниците остават спорни.28,50-52 В нашата популация, BRCA1 PVs бяха предимно разположени в BCCR региона, докато BRCA2 PVs бяха предимно разположени в OCCR региона. Не успяхме обаче да открием никаква връзка между предполагаемите OCCR и BCCR региони и BC характеристиките. Това може да се дължи на ограничения брой пациенти с BRCA1/2 мутации. От гледна точка на протеиновия домейн, BRCA1 PVs са разпределени по целия протеин, а BRCA2 промените се намират преференциално в BRC повторяемия домейн.
Накрая, корелирахме клиникопатологичните характеристики на рак на белия дроб (BC) с BRCA1/2 PV. Поради ограничения брой включени пациенти, открихме значителна корелация само между Ki-67 и степента на тумора. Въпреки че оценката и интерпретацията на Ki-67 остават донякъде противоречиви, сигурно е, че високите нива на пролиферация са свързани с повишен риск от рецидив на заболяването и намалена преживяемост. Към днешна дата, граничната стойност за разграничаване между „висок“ и „нисък“ Ki-67 е 20%. Този праг обаче не се отнася за нашата популация пациенти с BRCA1/2 мутация, която има средна стойност на Ki-67 от 25%. Тази тенденция във високите нива на Ki-67 може да се обясни с разпространението в нашите кохорти с луминален B и TNBC, от които имаше малко тумори с луминален A. Някои доказателства обаче показват, че по-високата гранична стойност на Ki-67 (25–30%) може по-добре да стратифицира пациентите според тяхната прогноза.53,54 От резултатите от нашия анализ, значителната корелация не е изненадваща. Наблюдава се между висок Ki-67 и степента на тумора и наличието на BRCA1. ПВ. Всъщност, туморите, свързани с BRCA1, са типични за TNBC и проявяват по-агресивни характеристики.16,17
В заключение, това проучване предоставя доклад за мутационния статус на BRCA1/2 в кохорта с рак на догинекомастия (BC) от източна Сицилия. Като цяло, нашите открития са в съответствие с вече съществуващите доказателства, както по отношение на разпространението на мутациите, така и на клиникопатологичните характеристики при BC. Необходими са повече проучвания в по-големи популации от пациенти с BC с BRCA1/2 мутация, като например използване на мултигеномен разширен мутационен анализ, за ​​да се оцени наличието на парагенни вариабилитационни (ПВ), които са различни и по-редки от BRCA1/2. Това ще позволи идентифицирането и правилното лечение на нарастващия брой пациенти с повишен риск от рак поради генетични мутации.
Потвърдихме, че пациентите са подписали информирано съгласие за анонимно предоставяне на техните туморни проби за изследователски цели. Всички пациенти са подписали писмено информирано съгласие съгласно Декларацията от Хелзинки. Съгласно политиката на AOU Policlinico „G.Rodolico – S.Marco“, това проучване е освободено от етичен преглед, тъй като анализът на BRCA1/2 е извършен съгласно клиничната практика и всички пациенти са дали писмено информирано съгласие. Пациентите също така дават съгласие за използването на техните данни за изследователски цели.
Благодарим на проф. Паоло Виньери за съдействието му при грижите за пациенти с рак на гърдата, както беше поискано от Етичната комисия.
Федерика Марторана съобщава за хонорари от Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Другите автори декларират, че нямат конфликт на интереси в тази работа.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL и др. Глобална статистика за рака 2020: GLOBOCAN оценява честотата и смъртността от 36 вида рак в 185 страни по света. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660