Hiện tại Javascript đã bị vô hiệu hóa trong trình duyệt của bạn. Một số tính năng của trang web này sẽ không hoạt động khi javascript bị vô hiệu hóa.
Hãy đăng ký thông tin chi tiết và loại thuốc bạn quan tâm, chúng tôi sẽ đối chiếu thông tin bạn cung cấp với các bài viết trong cơ sở dữ liệu mở rộng của chúng tôi và nhanh chóng gửi cho bạn bản sao PDF qua email.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella1,21 Khoa Y học Lâm sàng và Thực nghiệm, Đại học Catania, Catania, 95123, Ý;2 Trung tâm Ung thư và Huyết học Thực nghiệm, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Ý; 3 Khoa Ung thư Nội khoa, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Ý; 4 Di truyền Y học, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Ý; 5 Di truyền học Y học, ASP, Syracuse, 96100, Ý; 6 Khoa Khoa học Y sinh và Công nghệ sinh học, Đại học Catania, Di truyền học Y học, Catania, Ý, 95123; 7 Viện nghiên cứu Oasi-IRCCS, Troina, 94018, Ý Truyền thông: Stefania Stella, điện thoại +39 095 378 1946, email [email protected]; [email protected] Mục đích: Đột biến dòng mầm ở BRCA1 và BRCA2 và ung thư vú (BC), buồng trứng (OC) đã được xác định và các loại khác liên quan đến nguy cơ ung thư trọn đời. Xét nghiệm gen BRCA là chìa khóa để đánh giá rủi ro của từng cá nhân, cũng như để tìm ra phương pháp phòng ngừa ở những người mang gen khỏe mạnh và điều chỉnh phương pháp điều trị cho bệnh nhân ung thư. Tỷ lệ biến đổi BRCA1 và BRCA2 thay đổi rất nhiều giữa các vùng địa lý và mặc dù có dữ liệu về các biến thể gây bệnh BRCA trong các gia đình người Sicilia, nhưng vẫn còn thiếu các nghiên cứu nhắm mục tiêu cụ thể vào các quần thể ở miền đông Sicilia. Mục đích của nghiên cứu của chúng tôi là điều tra tỷ lệ mắc và phân bố các biến đổi dòng mầm gây bệnh BRCA trong một nhóm bệnh nhân BC từ miền đông Sicilia và đánh giá mối liên hệ của chúng với các đặc điểm BC cụ thể bằng cách sử dụng giải trình tự thế hệ tiếp theo. Sự hiện diện của các biến đổi có tương quan với cấp độ khối u và chỉ số tăng sinh. KẾT QUẢ: Nhìn chung, 35 bệnh nhân (9%) có biến thể gây bệnh BRCA, 17 (49%) ở BRCA1 và 18 (51%) ở BRCA2. Biến đổi BRCA1 phổ biến ở những bệnh nhân BC ba âm tính, trong khi đột biến BRCA2 phổ biến hơn ở bệnh nhân BC trong lòng ống. So với những người không mang gen, những đối tượng có biến thể BRCA1 có cấp độ khối u và chỉ số tăng sinh cao hơn đáng kể. Kết luận: Những phát hiện của chúng tôi cung cấp cái nhìn tổng quan về tình trạng đột biến BRCA ở những bệnh nhân BC từ miền đông Sicily và xác nhận vai trò của phân tích NGS trong việc xác định những bệnh nhân mắc BC di truyền. Nhìn chung, những dữ liệu này phù hợp với bằng chứng trước đây hỗ trợ việc sàng lọc BRCA để phòng ngừa và điều trị ung thư thích hợp ở những người mang đột biến.
Ung thư vú (BC) là loại ung thư ác tính phổ biến nhất trên toàn thế giới và là loại ung thư gây tử vong nhiều nhất ở phụ nữ.1 Các đặc điểm sinh học quyết định tiên lượng và hành vi lâm sàng của BC đã được nghiên cứu sâu rộng và được làm sáng tỏ một phần theo thời gian. Trên thực tế, một số dấu hiệu thay thế hiện đang được sử dụng để phân loại BC thành các phân nhóm phân tử khác nhau. Chúng là thụ thể estrogen (ER) và/hoặc progesterone (PgR), khuếch đại thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì người 2 (HER2), chỉ số tăng sinh Ki-67 và cấp độ khối u (G).2 Sự kết hợp của các biến này đã xác định các loại BC sau: 1) Khối u lòng ống, biểu hiện ER và/hoặc PgR, chiếm 75% các khối u BC. Các khối u này được chia thành Luminal A, khi Ki-67 dưới 20% và âm tính với HER2, và Luminal B, khi Ki-67 bằng hoặc trên 20% và có sự khuếch đại HER2, bất kể chỉ số tăng sinh; 2) Khối u HER2+ âm tính với ER và PgR nhưng biểu hiện khuếch đại HER2. Nhóm này chiếm 10% trong tổng số các khối u vú; 3) Ung thư vú ba âm tính (TNBC), không biểu hiện ER và PgR và khuếch đại HER2, chiếm khoảng 15% các trường hợp ung thư vú.2-4
Trong số các phân nhóm BC này, cấp độ khối u và chỉ số tăng sinh đại diện cho các dấu ấn sinh học cắt ngang có liên quan trực tiếp và độc lập với mức độ hung hãn và tiên lượng của khối u.5,6
Ngoài các đặc điểm sinh học đã đề cập ở trên, vai trò của các biến đổi di truyền dẫn đến sự phát triển của BC ngày càng trở nên quan trọng trong vài năm qua.7 Khoảng 1 trong 10 khối u vú được di truyền do các biến đổi dòng mầm ở các gen cụ thể.8 Hai nghiên cứu dịch tễ học lớn liên quan đến hơn 180.000 phụ nữ gần đây đã xác định được một nhóm gồm tám gen (tức là ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C và RAD51D) chủ yếu chịu trách nhiệm về BC di truyền. Trong số các gen này, BRCA1 và BRCA2 (sau đây gọi là BRCA1/2) cho thấy mối tương quan mạnh nhất với sự phát triển của các khối u vú.9-12 Trên thực tế, các đột biến dòng mầm BRCA1/2 làm tăng đáng kể nguy cơ mắc BC trong suốt cuộc đời cũng như các bệnh ác tính khác, bao gồm ung thư buồng trứng, tuyến tiền liệt, tuyến tụy, đại trực tràng và u hắc tố. Từ 13 đến 80 tuổi, tỷ lệ mắc BC tích lũy là 72% ở những phụ nữ có biến thể gây bệnh BRCA1 (PV) và 69% ở phụ nữ có BRCA2 PV.14
Đáng chú ý, một ấn phẩm gần đây cho thấy rằng nguy cơ mắc BC phụ thuộc vào loại PV. Trên thực tế, so với các biến thể cắt cụt gây bệnh, các biến thể vô nghĩa rõ ràng, đặc biệt là trong gen BRCA1, có liên quan đến việc giảm nguy cơ mắc BC, đặc biệt là ở phụ nữ lớn tuổi.15
Sự hiện diện của BRCA1 hoặc BRCA2 PV có liên quan đến các đặc điểm sinh học và lâm sàng bệnh lý khác nhau.16,17 Các BC liên quan đến BRCA1 có xu hướng hung hăng về mặt lâm sàng, kém biệt hóa và tăng sinh cao. Những khối u này thường là khối u ba âm tính và có độ tuổi khởi phát sớm. Các khối u xảy ra ở những bệnh nhân đột biến BRCA2 thường biểu hiện các mức độ biệt hóa từ trung bình đến cao và chỉ số tăng sinh thay đổi. Những khối u này phổ biến hơn ở lòng B và thường xảy ra ở người lớn tuổi.16-18 Đáng chú ý, các đột biến ở BRCA1 và BRCA2 làm tăng độ nhạy cảm với các phương pháp điều trị cụ thể, bao gồm muối bạch kim và các loại thuốc nhắm mục tiêu như chất ức chế polymerase poly(ADP-ribose) (PARPi).19,20
Trong vài năm qua, việc triển khai giải trình tự thế hệ tiếp theo (NGS) trong thực hành lâm sàng đã cho phép ngày càng nhiều bệnh nhân BC được xét nghiệm phân tử để tìm các hội chứng dễ mắc ung thư, bao gồm BRCA1/2.21 Đồng thời, các định nghĩa dựa trên các tiêu chí chính xác liên quan đến tiền sử gia đình, đặc điểm nhân khẩu học và lâm sàng bệnh học để xác định tốt hơn những cá nhân xứng đáng được xét nghiệm BRCA1/2.22,23 Trong bối cảnh này, bằng chứng đang tích lũy về việc sàng lọc BRCA1/2 ở các quần thể cụ thể, làm nổi bật sự khác biệt giữa các vùng địa lý.24–27 Mặc dù có các báo cáo về nhóm BC ở phía tây Sicily, nhưng có ít dữ liệu hơn về việc sàng lọc BRCA1/2 ở quần thể phía đông Sicily.28,29
Chúng tôi mô tả ở đây kết quả sàng lọc dòng mầm BRCA1/2 ở bệnh nhân BC từ miền đông Sicily, tiếp tục tương quan sự hiện diện của đột biến BRCA1 hoặc BRCA2 với các đặc điểm lâm sàng và bệnh lý chính của các khối u này.
Một nghiên cứu hồi cứu đã được thực hiện tại "Trung tâm Ung thư và Huyết học Thực nghiệm" tại Bệnh viện Policlinico, Rodolico – San Marco ở Catania. Từ tháng 1 năm 2017 đến tháng 3 năm 2021, tổng cộng 455 bệnh nhân mắc ung thư vú và buồng trứng, ung thư hắc tố, ung thư tuyến tụy hoặc ung thư tuyến tiền liệt đã được chuyển đến phòng xét nghiệm chẩn đoán phân tử của chúng tôi để xét nghiệm gen BRCA/2. Nghiên cứu này được tiến hành theo Tuyên bố Helsinki và tất cả những người tham gia đều cung cấp sự đồng ý bằng văn bản trước khi phân tích phân tử.
Các đặc điểm mô học và sinh học (trạng thái ER, PgR, HER2, Ki-67 và cấp độ) của BC được đánh giá trên mẫu sinh thiết lõi hoặc mẫu phẫu thuật, chỉ xem xét các thành phần khối u hung dữ. Dựa trên các đặc điểm này, BC được phân loại như sau: lòng A (ER+ và/hoặc PgR+, HER2-, Ki-67<20%), lòng B (ER+ và/hoặc PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), lòng B-HER2+ (ER và/hoặc PgR+, HER2+), HER2+ (ER và PgR-, HER2+) hoặc ba âm tính (ER và PgR-, HER2-).
Trước khi đánh giá tình trạng đột biến BRCA1 và BRCA2, một nhóm đa chuyên khoa bao gồm bác sĩ ung thư, nhà di truyền học và nhà tâm lý học đã tiến hành tư vấn di truyền khối u cho từng bệnh nhân để xác định sự hiện diện của BRCA1 và/hoặc BRCA1. hoặc những cá nhân có nguy cơ cao mắc PV trong gen BRCA2. Việc lựa chọn bệnh nhân được thực hiện theo hướng dẫn của Hiệp hội Ung thư Nội khoa Ý (AIOM) và các khuyến nghị của địa phương Sicilia.30,31 Các tiêu chí này bao gồm: (i) tiền sử gia đình mắc các biến thể gây bệnh đã biết trong các gen dễ mắc bệnh (ví dụ: BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) nam giới mắc BC; (iii) những người mắc BC và OC; (iv) phụ nữ mắc BC <36 tuổi, TNBC <60 tuổi hoặc BC hai bên <50 tuổi; (v) tiền sử bệnh lý cá nhân mắc BC <50 năm và ít nhất một người thân cấp độ một: (a) BC < 50 tuổi; (b) OC không nhầy và không ranh giới ở mọi lứa tuổi; (c) BC hai bên; (d) BC nam; (e) ung thư tuyến tụy; (f) ung thư tuyến tiền liệt; (vi) hai hoặc nhiều hơn Tiền sử cá nhân bị BC > 50 năm và tiền sử gia đình bị BC, OC hoặc ung thư tuyến tụy đối với những người thân là họ hàng cấp một với nhau (bao gồm những người thân mà cô ấy là họ hàng cấp một); (vii) Tiền sử cá nhân bị OC và ít nhất một người thân cấp một: (a) BC <50 năm; (b) NOC; (c) BC hai bên; (d) BC nam; (vii) nữ bị OC thanh dịch cấp độ cao.
Lấy 20 mL mẫu máu ngoại vi từ mỗi bệnh nhân và thu thập vào các ống EDTA (BD Biosciences). DNA bộ gen được phân lập từ 0,7 mL mẫu máu toàn phần bằng Bộ phân lập DNA Midi kit QIAsymphony DSP (QIAGEN, Hilden, Ý) theo hướng dẫn của nhà sản xuất và chạy qua Máy đo huỳnh quang Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Hoa Kỳ) Thực hiện định lượng. Làm giàu mục tiêu và chuẩn bị thư viện được thực hiện bởi Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, sẵn sàng để được nạp vào Bộ thuốc thử Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 để chuẩn bị thư viện tự động theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Bộ dụng cụ bao gồm hai nhóm mồi PCR đa thành phần có thể được sử dụng để nghiên cứu tất cả các gen BRCA1 (NM_007300.3) và BRCA2 (NM_000059.3). Tóm lại, 15 µL của mỗi mẫu DNA pha loãng (10 ng) được thêm vào các đĩa có mã vạch để chuẩn bị thư viện và tất cả các thuốc thử và vật tư tiêu hao được nạp vào thiết bị Ion Chef™. Sau đó, chuẩn bị thư viện tự động và nhóm thư viện mẫu có mã vạch được thực hiện trên thiết bị Ion Chef™. Sau đó, số lượng thư viện đã chuẩn bị được đánh giá bằng Máy đo huỳnh quang Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Hoa Kỳ) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Cuối cùng, các thư viện được kết hợp theo tỷ lệ mol bằng nhau trong Các ống mẫu thư viện Ion Chef™ (ống có mã vạch) và được nạp vào thiết bị Ion Chef™. Trình tự được thực hiện bằng thiết bị Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) sử dụng Chip Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Phân tích dữ liệu được thực hiện bằng Amplicon Suite (SmartSeq srl) và Phần mềm Ion Reporter.
Tất cả các danh pháp biến thể đều tuân theo các hướng dẫn hiện hành của Human Genome Variation Consortium, có sẵn trực tuyến (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Ý nghĩa lâm sàng của các biến thể BRCA1/2 được xác định bằng cách sử dụng phân loại của International Consortium ENIGMA (Mạng lưới dựa trên bằng chứng để giải thích các alen đột biến dòng mầm, https://enigmaconsortium.org/) và tham khảo các cơ sở dữ liệu khác nhau như ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD và UMD. Phân loại bao gồm năm loại rủi ro riêng biệt: lành tính (loại I), có khả năng lành tính (loại II), biến thể có ý nghĩa không chắc chắn (VUS, loại III), có khả năng gây bệnh (loại IV) và gây bệnh (loại V). VarSome cũng phân tích tác động của đột biến lên cấu trúc và chức năng của protein, một công cụ cung cấp thông tin có thể truy cập vào 30 cơ sở dữ liệu.32
Để xác định ý nghĩa lâm sàng tiềm ẩn cho mỗi VUS, các thuật toán dự đoán protein tính toán sau đây đã được sử dụng: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) và Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Các biến thể được phân loại là loại 1 và 2 được coi là kiểu hoang dã.
Giải trình tự Sanger đã xác nhận sự hiện diện của từng biến thể gây bệnh. Tóm lại, một cặp mồi đặc hiệu đã được thiết kế cho từng biến thể được phát hiện bằng cách sử dụng trình tự tham chiếu gen BRCA1 và BRCA2 (lần lượt là NG_005905.2, NM_007294.3 và NG_012772.3, NM_000059.3). Do đó, PCR mục tiêu đã được thực hiện tiếp theo là giải trình tự Sanger.
Bệnh nhân có kết quả xét nghiệm âm tính với gen BRCA1/2 được xét nghiệm bằng phương pháp khuếch đại đầu dò phụ thuộc vào phản ứng ghép nối đa kênh (MLPA) theo hướng dẫn của nhà sản xuất để đánh giá sự hiện diện của các sắp xếp lại bộ gen lớn (LGR). Tóm lại, các mẫu DNA được biến tính và sử dụng tới 60 đầu dò đặc hiệu gen BRCA1 và BRCA2, mỗi đầu dò phát hiện một trình tự DNA cụ thể dài khoảng 60 nucleotide. Các sản phẩm khuếch đại đầu dò, bao gồm một bộ amplicon PCR duy nhất, sau đó được phân tích bằng phương pháp điện di mao quản và bằng phần mềm Cofalyser.Net kết hợp với các bảng Cofalyser phù hợp theo từng lô (www.mrcholland.com).
Các biến lâm sàng bệnh lý được chọn (cấp độ mô học và chỉ số tăng sinh Ki-67%) có liên quan đến sự hiện diện của PV BRCA1/2, được tính toán bằng phần mềm Prism v. 8.4 sử dụng kiểm định chính xác của Fisher với giả định giá trị p <0,05 là có ý nghĩa.
Từ tháng 1 năm 2017 đến tháng 3 năm 2021, 455 bệnh nhân đã được sàng lọc đột biến gen BRCA1/2 dòng mầm. Xét nghiệm đột biến đã được thực hiện tại Trung tâm Ung thư và Huyết học Thực nghiệm của Bệnh viện Policlinico. Theo hướng dẫn của Sicilia (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, Số 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), tổng cộng có 389 bệnh nhân mắc bệnh ung thư vú, 37 ung thư buồng trứng, 16 ung thư tuyến tụy, 8 ung thư tuyến tiền liệt và 5 u ác tính. Sự phân bố bệnh nhân theo loại ung thư và kết quả phân tích được thể hiện ở Hình 1.
Hình 1 cho thấy sơ đồ dòng thể hiện tổng quan về nghiên cứu. Bệnh nhân mắc khối u vú, u hắc tố, u tuyến tụy, u tuyến tiền liệt hoặc u buồng trứng đã được xét nghiệm tìm đột biến ở gen BRCA1 và BRCA2.
Viết tắt: PV, biến thể gây bệnh; VUS, biến thể có ý nghĩa không chắc chắn; WT, trình tự BRCA1/2 kiểu hoang dã.
Chúng tôi tập trung nghiên cứu có chọn lọc vào nhóm bệnh nhân ung thư vú. Độ tuổi trung bình của bệnh nhân là 49 (dao động từ 23-89) và chủ yếu là nữ (n = 376 hoặc 97%).
Trong số những đối tượng này, 64 (17%) có đột biến BRCA1/2 và tất cả đều là nữ. Ba mươi lăm (9%) có PV và 29 (7,5%) có VUS. Mười bảy (48,6%) trong số 35 biến thể gây bệnh xảy ra ở BRCA1 và 18 (51,4%) ở BRCA2, trong khi 5 VUS xảy ra ở BRCA1 (17,2%) và 24 (82,8%) ở BRCA2 (Hình 1 và 2). LGR không có trong phân tích MLPA.
Hình 2. Phân tích đột biến BRCA1 và BRCA2 ở 389 bệnh nhân ung thư vú. (A) Phân bố các biến thể gây bệnh (PV) (màu đỏ), các biến thể có ý nghĩa không chắc chắn (VUS) (màu cam) và WT (màu xanh lam) ở 389 bệnh nhân ung thư vú; (B) 389 bệnh nhân ung thư vú Ba mươi lăm (9%) có các biến thể gây bệnh (PV) BRCA1/2. Trong số đó, 17 (48,6%) là người mang gen BRCA1 PV (màu đỏ đậm) và 18 (51,4%) là người mang gen BRCA2 (màu đỏ nhạt); (C) 29 (7,5%) trong số 389 đối tượng mang gen VUS, 5 (17,2%) gen BRCA1 (màu cam đậm) và 24 (82,8%) gen BRCA2 (màu cam nhạt).
Viết tắt: PV, biến thể gây bệnh; VUS, biến thể có ý nghĩa không chắc chắn; WT, trình tự BRCA1/2 kiểu hoang dã.
Tiếp theo, chúng tôi đã nghiên cứu sự phổ biến của các phân nhóm phân tử BC ở những bệnh nhân mắc PV BRCA1/2. Phân bố bao gồm 2 (5,7%) luminal A, 15 (42,9%) luminal B, 3 (8,6%) luminal B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ và 13 (37,1%) bệnh nhân TNBC. Trong số những bệnh nhân dương tính với BRCA1, 5 (29,4%) bị BC luminal B, 2 (11,8%) bị bệnh HER2+ và 10 (58,8%) bị TNBC. Các khối u không có đột biến BRCA1 là luminal A hoặc luminal B-HER2+ (Hình 3). Trong phân nhóm dương tính với BRCA2, 10 (55,6%) khối u là luminal B, 3 (16,7%) là luminal B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC và 2 (11,1%) là luminal A (Hình 3 ).Không có khối u HER2+ nào xuất hiện trong nhóm này. Do đó, đột biến BRCA1 phổ biến ở bệnh nhân TNBC, trong khi đột biến BRCA2 lại chiếm ưu thế ở những người có lumen B.
Hình 3 Tỷ lệ mắc các phân nhóm ung thư vú ở những bệnh nhân có biến thể gây bệnh trong BRCA1 và BRCA2. Biểu đồ tần suất cho thấy sự phân bố của PV BRCA1- (màu đỏ sẫm) và BRCA2- (màu đỏ nhạt) trong số các phân nhóm phân tử của bệnh nhân ung thư vú. Các số được báo cáo trong mỗi ô biểu thị tỷ lệ phần trăm bệnh nhân có PV BRCA1 và BRCA2 cho mỗi phân nhóm ung thư vú.
Viết tắt: PV, biến thể gây bệnh; HER2+, thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì ở người 2 dương tính; TNBC, ung thư vú ba âm tính.
Sau đó, chúng tôi đã đánh giá loại và vị trí gen của PV BRCA1 và BRCA2. Ở PV BRCA1, chúng tôi quan sát thấy 7 biến thể nucleotide đơn (SNV), 6 lần xóa, 3 lần nhân đôi và 1 lần chèn. Chỉ có một đột biến (c.5522delG) đại diện cho một khám phá mới. PV BRCA1 phổ biến nhất được phát hiện ở cả hai đối tượng là c.5035_5039delCTAAT. Biến đổi này liên quan đến việc xóa năm nucleotide (CTAAT) ở exon 15 của BRCA1, dẫn đến việc thay thế axit amin leucine bằng tyrosine ở codon 1679 và do sự dịch khung dịch mã với một codon dừng thay thế được dự đoán dẫn đến cắt cụt protein sớm. Tất cả các thay đổi khác chỉ được phát hiện trong một trường hợp. Đáng chú ý, một trong những PV được báo cáo nằm ở vùng đồng thuận vị trí ghép nối (c.4357+1G>T) (Bảng 1).
Liên quan đến PV BRCA2, chúng tôi đã quan sát thấy 6 lần xóa, 6 lần SNV và 2 lần nhân đôi. Không có thay đổi nào được tìm thấy là mới. Ba đột biến tái phát trong quần thể của chúng tôi, c.428dup và c.8487+1G>A được quan sát thấy ở 3 đối tượng, tiếp theo là c.5851_5854delAGTT được tìm thấy trong hai trường hợp. Biến đổi c.428dup liên quan đến sự lặp lại của C trong exon 5 của BRCA2, được dự đoán là mã hóa một protein bị cắt cụt, không có chức năng. Đột biến c.8487+1G>A xảy ra ở vùng intron của intron 19 BRCA2 (± 1,2) và ảnh hưởng đến trình tự đồng thuận ghép nối, dẫn đến ghép nối bị thay đổi dẫn đến protein bất thường hoặc không có. Biến thể gây bệnh c.5851_5854delAGTT là do mất 4 nucleotide từ vị trí nucleotide từ 5851 đến 5854 trong exon mã hóa 10 của gen BRCA2 và dẫn đến sự dịch khung dịch mã với một codon dừng thay thế được dự đoán (p.S1951WfsTer). Đáng chú ý, như đã báo cáo trước đây, cả hai biến đổi c.631G>A và c.7008-2A>T đều được phát hiện ở cùng một bệnh nhân.34 Đột biến đầu tiên liên quan đến việc thay thế adenosine (A) trong exon 7 của BRCA2 bằng một nucleotide chứa guanine (G) dẫn đến sự thay đổi valine thành isoleucine ở codon 211, isoleucine Axit amin là một axit amin có các đặc tính rất giống nhau. Sự thay đổi này ảnh hưởng đến quá trình ghép nối mRNA bình thường. Biến thể thứ hai nằm ở vùng intron và dẫn đến sự thay thế A kép thành thymine (T) trước exon 13 của gen mã hóa BRCA2. Sự thay đổi c.7008-2A>T có thể tạo ra nhiều bản sao có độ dài khác nhau. Hơn nữa, trong nhóm PV BRCA2, 4 trong số 18 thay đổi (22,2%) là intron.
Sau đó, chúng tôi lập bản đồ các đột biến có hại BRCA1/2 trong các miền chức năng và vùng liên kết protein (Hình 4). Ở gen BRCA1, 50% PV nằm ở vùng cụm ung thư vú (BCCR), trong khi 22% đột biến nằm ở vùng cụm ung thư buồng trứng (OCCR) (Hình 4A). Ở PV BRCA2, 35,7% biến thể nằm ở vùng BCCR và 42,8% đột biến nằm ở OCCR (Hình 4B). Tiếp theo, chúng tôi đánh giá vị trí của PV trong các miền protein BRCA1 và BRCA2. Đối với protein BRCA1, chúng tôi tìm thấy ba PV trong các miền vòng và cuộn xoắn, và hai đột biến trong miền BRCT (Hình 4A). Đối với protein BRCA2, 4 PV được lập bản đồ tới miền lặp lại BRC, trong khi 3 thay đổi intron và 3 thay đổi exon được phát hiện trong các miền liên kết oligo/oligosaccharide (OB) và tower (T) (Hình 4B).
Hình 4 Sơ đồ biểu diễn protein BRCA1 và BRCA2 và vị trí của các biến thể gây bệnh. Hình này biểu thị sự phân bố của các biến thể gây bệnh BRCA1 (A) và BRCA2 (B) ở bệnh nhân ung thư vú. Các đột biến exon được hiển thị màu xanh lam, trong khi các biến thể intron được hiển thị màu cam. Chiều cao thanh biểu thị số trường hợp. Các protein BRCA1 và BRCA2 cùng các miền chức năng của chúng được báo cáo. (A) Protein BRCA1 chứa một miền vòng (RING) và một trình tự định vị nhân (NLS), một miền cuộn xoắn, một miền cụm SQ/TQ (SCD) và một miền đầu C BRCA1 (BRCT). (B) Protein BRCA2 chứa tám lần lặp lại BRC, một miền liên kết DNA với một miền xoắn ốc (Xoắn ốc), ba nếp gấp liên kết oligonucleotide/oligosaccharide (OB), một miền tháp (T) và một NLS ở phía C. Các vùng được gọi là Vùng cụm ung thư vú (BCCR) và Vùng cụm ung thư buồng trứng (OCCR) được hiển thị ở phía dưới. *Biểu thị các đột biến xác định codon kết thúc.
Sau đó, chúng tôi đã nghiên cứu các đặc điểm lâm sàng và bệnh lý của BC có thể tương quan với sự hiện diện của PV BRCA1/2. Hồ sơ lâm sàng đầy đủ đã có sẵn cho 181 bệnh nhân âm tính với BRCA1/2 (người không mang gen) và tất cả người mang gen (n = 35). Có mối tương quan giữa tỷ lệ tăng sinh khối u và cấp độ.
Chúng tôi đã tính toán sự phân bố Ki-67 dựa trên trung vị của nhóm đối tượng của chúng tôi (25%, phạm vi <10-90%). Những đối tượng có Ki-67 < 25% được định nghĩa là "Ki-67 thấp", trong khi những cá nhân có giá trị ≥ 25% được coi là "Ki-67 cao". Sự khác biệt đáng kể về Ki-67 (p <0,01) đã được tìm thấy giữa những người không mang gen và những người mang gen BRCA1 PV (Hình 5A).
Hình 5 Sự tương quan của Ki-67 với phân bố độ ở phụ nữ ung thư vú có và không có đột biến BRCA1 và BRCA2. (A) Biểu đồ hộp cho thấy giá trị Ki-67 trung vị ở 181 bệnh nhân BC không mang gen đột biến so với bệnh nhân PV BRCA1 (18) hoặc BRCA2 (17). Giá trị P dưới 0,5 được coi là có ý nghĩa thống kê. (B) Biểu đồ hình chữ nhật biểu thị việc phân loại bệnh nhân ung thư BC vào các nhóm độ mô học (G2 và G3) theo trạng thái đột biến BRCA1 và BRCA2 (đối tượng WT, người mang đột biến BRCA1 và BRCA2).
Tương tự như vậy, chúng tôi đã kiểm tra xem cấp độ khối u có tương quan với sự hiện diện của BRCA1/2 PV hay không. Vì G1 BC không có trong quần thể của chúng tôi, chúng tôi đã chia bệnh nhân thành hai nhóm (G2 hoặc G3). Phù hợp với kết quả Ki-67, phân tích cho thấy có mối tương quan có ý nghĩa thống kê giữa cấp độ khối u và đột biến BRCA1, với tỷ lệ khối u G3 cao hơn ở những người mang BRCA1 so với những người không mang (p < 0,005) (Hình 5B).
Những tiến bộ trong công nghệ giải trình tự DNA đã cho phép có những tiến bộ chưa từng có trong xét nghiệm di truyền BRCA1/2, với những hàm ý quan trọng đối với những bệnh nhân có tiền sử gia đình mắc ung thư. Cho đến nay, khoảng 20.000 biến thể BRCA1/2 đã được xác định và phân loại theo Hiệp hội Di truyền Y khoa Hoa Kỳ 35 và hệ thống ENIGMA.35,36 Người ta đều biết rằng phổ đột biến BRCA1/2 thay đổi rất nhiều giữa các vùng địa lý.37 Trong phạm vi nước Ý, tỷ lệ PV BRCA1/2 dao động từ 8% đến 37%, cho thấy sự biến động lớn trong nước.38,39 Với dân số gần 5 triệu người, Sicily là vùng lớn thứ năm ở Ý về số lượng cư dân. Mặc dù có dữ liệu về sự phân bố của BRCA1/2 ở phía tây Sicily, nhưng không có bằng chứng mở rộng nào ở phía đông của hòn đảo.
Nghiên cứu của chúng tôi là một trong những báo cáo đầu tiên về tỷ lệ mắc bệnh BRCA1/2 PV ở bệnh nhân BC ở miền đông Sicily.28 Chúng tôi tập trung phân tích vào BC vì đây là căn bệnh phổ biến nhất trong nhóm bệnh nhân của chúng tôi.
Khi xét nghiệm 389 bệnh nhân BC, 9% mang PV BRCA1/2, phân bố đều giữa BRCA1 và BRCA2. Những kết quả này phù hợp với những kết quả đã báo cáo trước đây trong quần thể người Ý.28 Điều thú vị là 3% (13/389) trong nhóm của chúng tôi là nam giới. Tỷ lệ này cao hơn dự kiến ​​đối với ung thư vú nam (1% trong số tất cả các BC),40 phản ánh lựa chọn quần thể của chúng tôi dựa trên nguy cơ đột biến BRCA1/2. Tuy nhiên, không ai trong số những người đàn ông này phát triển PV BRCA1/2, vì vậy họ là ứng cử viên cho phân tích phân tử sâu hơn để loại trừ sự hiện diện của các đột biến ít phổ biến hơn như PALB2, RAD51C và D, trong số những đột biến khác. Các biến thể có ý nghĩa không chắc chắn đã được tìm thấy ở 7% đối tượng có bằng chứng về BRCA2 VUS. Ngay cả kết quả này cũng phù hợp với bằng chứng đã có từ trước.28,41,42
Khi chúng tôi phân tích sự phân bố của các phân nhóm phân tử BC ở phụ nữ đột biến BRCA1/2, chúng tôi đã xác nhận mối liên hệ đã biết giữa TNBC và PV BRCA1 (58,8%) và giữa BC ống B và PV BRCA2 (55,6%).16,43 Các khối u ống A và HER2+ ở những người mang PV BRCA1 và BRCA2 phù hợp với dữ liệu tài liệu hiện có.16,43
Sau đó, chúng tôi tập trung vào loại và vị trí của PV BRCA1/2. Trong nhóm của chúng tôi, PV BRCA1 phổ biến nhất là c.5035_5039delCTAAT. Mặc dù Incorvaia et al. không mô tả biến thể này trong nhóm người Sicilia của họ, các tác giả khác đã báo cáo nó là một PV dòng mầm BRCA1.34 Một số PV BRCA1 đã được tìm thấy trong nhóm của chúng tôi - ví dụ c.181T>G, c.514del, c.3253dupA và c.5266dupC - đã được quan sát thấy ở Sicilia.28 Trong số này, hai đột biến sáng lập BRCA1 (c.181T>G và c.5266dupC) thường được tìm thấy ở người Do Thái Ashkenazi ở Đông và Trung Âu (Ba Lan, Séc), Slovenia, Áo, Hungary, Belarus và Đức), 44,45 và, ở Hoa Kỳ và Argentina, gần đây đã được định nghĩa là "biến thể dòng mầm tái phát" ở những bệnh nhân người Ý mắc BC và OC. Biến thể 34c.514del trước đây đã được xác định ở 8 bệnh nhân ung thư vú từ phía bắc Sicilia ở Palermo và Messina. Điều thú vị là ngay cả Incorvaia và cộng sự. phát hiện biến thể c.3253dupA ở một số gia đình ở Catania.28 Các PV BRCA2 tiêu biểu nhất là c.428dup, c.5851_5854delAGTT và biến thể intron c.8487+1G>A, đã được báo cáo chi tiết hơn28 ở một bệnh nhân ở Palermo với PV c.428dup, c.5851_5854delAGTT được quan sát thấy ở các hộ gia đình ở tây bắc Sicily, chủ yếu ở các vùng Trapani và Palermo, trong khi PV c.5851_5854delAGTT được quan sát thấy ở các hộ gia đình ở tây bắc Sicily. Biến thể 8487+1G>A phổ biến hơn ở các đối tượng từ Messina, Palermo và Caltanissetta.28 Rebbeck và cộng sự. trước đây đã mô tả biến thể c.5851_5854delAGTT ở Colombia.37 Một PV BRCA2 khác, c.631+1G>A, đã được tìm thấy ở những bệnh nhân BC và OC từ Sicily (Agrigento, Siracusa và Ragusa).28 Đáng chú ý, chúng tôi đã quan sát thấy sự đồng tồn tại của hai biến thể BRCA2 (BRCA2 c.631G>A và c.7008-2A>T) ở cùng một bệnh nhân, mà chúng tôi cho rằng được phân tách theo chế độ cis, như đã báo cáo trước đây như vậy.34,46 Những đột biến BRCA2 uble này thực sự thường xuyên được quan sát thấy ở vùng Ý và được phát hiện là đưa vào các codon dừng sớm, ảnh hưởng đến quá trình ghép nối RNA thông tin và khiến protein BRCA2 bị lỗi.47,48
Chúng tôi cũng đã lập bản đồ các PV BRCA1 và BRCA2 trong các vùng OCCR và BCCR được cho là của các miền protein và gen. Các vùng này được Rebbeck và cộng sự mô tả là các vùng có nguy cơ phát triển ung thư buồng trứng và ung thư vú.49 Tuy nhiên, bằng chứng liên quan đến mối liên hệ giữa vị trí của các biến thể dòng mầm và nguy cơ ung thư vú hoặc ung thư buồng trứng vẫn còn gây tranh cãi.28,50-52 Trong quần thể của chúng tôi, các PV BRCA1 chủ yếu nằm ở vùng BCCR, trong khi các PV BRCA2 chủ yếu nằm ở vùng OCCR. Tuy nhiên, chúng tôi không thể tìm thấy bất kỳ mối liên hệ nào giữa các vùng OCCR và BCCR được cho là và các đặc điểm của BC. Điều này có thể là do số lượng bệnh nhân có đột biến BRCA1/2 còn hạn chế. Theo quan điểm về miền protein, các PV BRCA1 phân bố dọc theo toàn bộ protein và các biến đổi BRCA2 được ưu tiên tìm thấy trong miền lặp lại BRC.
Cuối cùng, chúng tôi đã đối chiếu các đặc điểm lâm sàng bệnh lý của BC với PV BRCA1/2. Do số lượng bệnh nhân tham gia hạn chế, chúng tôi chỉ tìm thấy mối tương quan đáng kể giữa Ki-67 và cấp độ khối u. Mặc dù việc đánh giá và diễn giải Ki-67 vẫn còn gây nhiều tranh cãi, nhưng chắc chắn rằng tỷ lệ tăng sinh cao có liên quan đến nguy cơ tái phát bệnh tăng cao và tỷ lệ sống sót giảm. Cho đến nay, ngưỡng phân biệt giữa Ki-67 "cao" và "thấp" là 20%. Tuy nhiên, ngưỡng này không áp dụng cho quần thể bệnh nhân đột biến BRCA1/2 của chúng tôi, có giá trị Ki-67 trung bình là 25%. Xu hướng tỷ lệ Ki-67 cao này có thể được giải thích bằng tỷ lệ lưu hành trong nhóm B và TNBC của chúng tôi, trong đó có một số ít khối u A ở ống. Tuy nhiên, một số bằng chứng dường như cho thấy ngưỡng Ki-67 cao hơn (25–30%) có thể phân tầng bệnh nhân tốt hơn theo tiên lượng của họ. 53,54 Từ kết quả phân tích của chúng tôi, không có gì đáng ngạc nhiên khi có mối tương quan đáng kể. Xảy ra giữa Ki-67 cao và cấp độ và sự hiện diện của BRCA1 PV. Trên thực tế, các khối u liên quan đến BRCA1 là điển hình của TNBC và biểu hiện các đặc điểm hung hãn hơn.16,17
Tóm lại, nghiên cứu này cung cấp báo cáo về tình trạng đột biến của BRCA1/2 trong nhóm BC từ phía đông Sicily. Nhìn chung, những phát hiện của chúng tôi phù hợp với bằng chứng hiện có, xét về cả tỷ lệ đột biến và các đặc điểm lâm sàng bệnh lý ở BC. Cần có nhiều nghiên cứu hơn trên quần thể lớn hơn của bệnh nhân BC đột biến BRCA1/2, chẳng hạn như sử dụng phân tích đột biến mở rộng đa gen, để đánh giá sự hiện diện của PV riêng biệt và ít thường xuyên hơn BRCA1/2. Điều này sẽ cho phép xác định và quản lý phù hợp số lượng ngày càng tăng các đối tượng có nguy cơ ung thư cao do đột biến gen.
Chúng tôi xác nhận rằng bệnh nhân đã ký vào bản đồng ý cung cấp mẫu khối u của họ một cách ẩn danh cho mục đích nghiên cứu. Tất cả bệnh nhân đã ký vào bản đồng ý cung cấp thông tin bằng văn bản theo Tuyên bố Helsinki. Theo chính sách của AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco”, nghiên cứu này được miễn đánh giá đạo đức vì phân tích BRCA1/2 được thực hiện theo thông lệ lâm sàng và tất cả bệnh nhân đều đưa ra bản đồng ý cung cấp thông tin bằng văn bản. Bệnh nhân cũng đồng ý sử dụng dữ liệu của họ cho mục đích nghiên cứu.
Chúng tôi cảm ơn Giáo sư Paolo Vigneri đã hỗ trợ chăm sóc bệnh nhân ung thư vú theo yêu cầu của Ủy ban Đạo đức.
Federica Martorana báo cáo tiền thù lao từ Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Các tác giả khác tuyên bố không có xung đột lợi ích trong công trình này.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al.Thống kê ung thư toàn cầu năm 2020: GLOBOCAN ước tính tỷ lệ mắc và tử vong của 36 loại ung thư ở 185 quốc gia trên toàn thế giới.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660