Javascript hiện đang bị vô hiệu hóa trong trình duyệt của bạn. Một số tính năng của trang web này sẽ không hoạt động khi Javascript bị vô hiệu hóa.
Hãy đăng ký với thông tin cá nhân cụ thể và loại thuốc bạn quan tâm, chúng tôi sẽ đối chiếu thông tin bạn cung cấp với các bài báo trong cơ sở dữ liệu rộng lớn của mình và nhanh chóng gửi cho bạn bản PDF qua email.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella1,21 Khoa Y học Lâm sàng và Thực nghiệm, Đại học Catania, Catania, 95123, Ý;2 Trung tâm Ung thư và Huyết học Thực nghiệm, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Ý; 3 Khoa Ung thư Nội khoa, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Ý; 4 Di truyền Y học, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Ý; 5 Di truyền Y học, ASP, Syracuse, 96100, Ý; 6 Khoa Khoa học Y sinh và Công nghệ Sinh học, Đại học Catania, Di truyền Y học, Catania, Ý, 95123; 7 Viện Nghiên cứu Oasi-IRCCS, Troina, 94018, Ý. Liên hệ: Stefania Stella, điện thoại +39 095 378 1946, email [email protected]; [email protected] Mục đích: Đột biến dòng mầm trong BRCA1 và BRCA2 có liên quan đến ung thư vú (BC), ung thư buồng trứng (OC) và các loại ung thư khác, làm tăng nguy cơ mắc ung thư suốt đời. Xét nghiệm gen BRCA rất quan trọng để đánh giá nguy cơ cá nhân, cũng như tìm ra các phương pháp phòng ngừa ở người mang gen khỏe mạnh và điều chỉnh phương pháp điều trị cho bệnh nhân ung thư. Tỷ lệ mắc các đột biến BRCA1 và BRCA2 khác nhau rất nhiều giữa các vùng địa lý, và mặc dù có dữ liệu về các biến thể gây bệnh BRCA trong các gia đình ở Sicily, nhưng các nghiên cứu nhắm mục tiêu cụ thể vào các quần thể ở miền đông Sicily còn thiếu. Mục tiêu của nghiên cứu này là điều tra tỷ lệ mắc và phân bố các đột biến dòng mầm gây bệnh BRCA trong một nhóm bệnh nhân ung thư vú từ miền đông Sicily và đánh giá mối liên hệ của chúng với các đặc điểm cụ thể của ung thư vú bằng cách sử dụng giải trình tự thế hệ tiếp theo. Sự hiện diện của các đột biến tương quan với mức độ ác tính của khối u và chỉ số tăng sinh. KẾT QUẢ: Nhìn chung, 35 bệnh nhân (9%) có biến thể gây bệnh BRCA, 17 (49%) ở BRCA1 và 18 (51%) ở BRCA2. Các đột biến BRCA1 phổ biến ở bệnh nhân ung thư vú bộ ba âm tính, trong khi đột biến BRCA2 phổ biến hơn ở ung thư vú thể luminal. So với những người không mang đột biến, những người mang biến thể BRCA1 có mức độ ác tính và chỉ số tăng sinh khối u cao hơn đáng kể. Kết luận: Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cung cấp cái nhìn tổng quan về tình trạng đột biến BRCA ở bệnh nhân ung thư vú từ miền đông Sicily và khẳng định vai trò của phân tích NGS trong việc xác định bệnh nhân ung thư vú di truyền. Nhìn chung, những dữ liệu này phù hợp với bằng chứng trước đây ủng hộ việc sàng lọc BRCA để phòng ngừa và điều trị ung thư đúng cách ở những người mang đột biến.
Ung thư vú (BC) là bệnh ác tính phổ biến nhất trên toàn thế giới và là loại ung thư gây tử vong nhiều nhất ở phụ nữ.¹ Các đặc điểm sinh học quyết định tiên lượng và hành vi lâm sàng của BC đã được nghiên cứu rộng rãi và làm sáng tỏ một phần theo thời gian. Trên thực tế, một số dấu ấn sinh học thay thế hiện đang được sử dụng để phân loại BC thành các phân nhóm phân tử khác nhau. Đó là thụ thể estrogen (ER) và/hoặc progesterone (PgR), khuếch đại thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì người 2 (HER2), chỉ số tăng sinh Ki-67 và độ ác tính của khối u (G).² Sự kết hợp của các biến số này đã xác định các loại BC sau: 1) Khối u Luminal, biểu hiện ER và/hoặc PgR, chiếm 75% các trường hợp BC. Các khối u này được chia nhỏ hơn nữa thành Luminal A, khi Ki-67 dưới 20% và HER2 âm tính, và Luminal B, khi Ki-67 bằng hoặc trên 20% và có sự khuếch đại HER2, bất kể chỉ số tăng sinh; 2) Khối u HER2+ âm tính với ER và PgR nhưng có khuếch đại HER2. Nhóm này chiếm 10% tổng số khối u vú; 3) Ung thư vú ba âm tính (TNBC), không biểu hiện ER và PgR và không có khuếch đại HER2, chiếm khoảng 15% các trường hợp ung thư vú.2-4
Trong số các phân nhóm BC này, cấp độ khối u và chỉ số tăng sinh đại diện cho các dấu ấn sinh học cắt ngang có liên quan trực tiếp và độc lập với mức độ xâm lấn của khối u và tiên lượng bệnh.5,6
Ngoài các đặc điểm sinh học đã đề cập, vai trò của các biến đổi di truyền dẫn đến sự phát triển của ung thư vú ngày càng trở nên quan trọng trong vài năm qua.7 Khoảng 1 trong 10 khối u vú là do di truyền do các biến đổi dòng mầm trong các gen cụ thể.8 Hai nghiên cứu dịch tễ học quy mô lớn với hơn 180.000 phụ nữ tham gia gần đây đã xác định một nhóm tám gen (tức là ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C và RAD51D) chịu trách nhiệm chính gây ra ung thư vú di truyền. Trong số các gen này, BRCA1 và BRCA2 (sau đây gọi là BRCA1/2) cho thấy mối tương quan mạnh nhất với sự phát triển của khối u vú.9-12 Trên thực tế, đột biến dòng mầm BRCA1/2 làm tăng đáng kể nguy cơ mắc ung thư vú suốt đời cũng như các bệnh ung thư khác, bao gồm ung thư buồng trứng, tuyến tiền liệt, tuyến tụy, đại trực tràng và u hắc tố. Từ 13 đến 80 tuổi, tỷ lệ mắc ung thư vú tích lũy là 72% ở phụ nữ có biến thể gây bệnh BRCA1 (PV) và 69% ở những người không có biến thể này. phụ nữ có BRCA2 PV.14
Đáng chú ý, một ấn phẩm gần đây cho thấy nguy cơ ung thư vú phụ thuộc vào loại biến thể gây bệnh (PV). Trên thực tế, so với các biến thể cắt cụt gây bệnh, các biến thể sai nghĩa rõ rệt, đặc biệt là trong gen BRCA1, có liên quan đến nguy cơ ung thư vú giảm, đặc biệt là ở phụ nữ lớn tuổi.¹⁵
Sự hiện diện của đột biến BRCA1 hoặc BRCA2 có liên quan đến các đặc điểm sinh học và bệnh lý lâm sàng khác nhau.16,17 Ung thư vú liên quan đến BRCA1 có xu hướng xâm lấn mạnh về mặt lâm sàng, kém biệt hóa và có khả năng tăng sinh cao. Những khối u này thường là bộ ba âm tính và khởi phát ở độ tuổi sớm. Các khối u xảy ra ở bệnh nhân đột biến BRCA2 thường có mức độ biệt hóa từ trung bình đến tốt và chỉ số tăng sinh khác nhau. Những khối u này phổ biến hơn ở ống B và thường xảy ra ở người lớn tuổi.16-18 Đáng chú ý, đột biến ở BRCA1 và BRCA2 làm tăng độ nhạy cảm với các phương pháp điều trị đặc hiệu, bao gồm muối platin và thuốc nhắm mục tiêu như chất ức chế poly(ADP-ribose) polymerase (PARPi).19,20
Trong vài năm qua, việc ứng dụng giải trình tự thế hệ tiếp theo (NGS) trong thực hành lâm sàng đã cho phép ngày càng nhiều bệnh nhân ung thư vú được xét nghiệm phân tử để phát hiện các hội chứng nhạy cảm với ung thư, bao gồm cả BRCA1/2.21 Đồng thời, các định nghĩa dựa trên các tiêu chí chính xác liên quan đến tiền sử gia đình, đặc điểm nhân khẩu học và bệnh lý lâm sàng được đưa ra để xác định rõ hơn những cá nhân cần được xét nghiệm BRCA1/2.22,23 Trong bối cảnh này, bằng chứng về sàng lọc BRCA1/2 ở các quần thể cụ thể đang được tích lũy, làm nổi bật sự khác biệt giữa các vùng địa lý.24–27 Mặc dù có báo cáo về nhóm bệnh nhân ung thư vú ở miền tây Sicily, nhưng dữ liệu về sàng lọc BRCA1/2 ở dân số miền đông Sicily lại ít hơn.28,29
Bài viết này mô tả kết quả sàng lọc đột biến gen BRCA1/2 ở bệnh nhân ung thư vú tại miền đông Sicily, đồng thời liên hệ sự hiện diện của đột biến BRCA1 hoặc BRCA2 với các đặc điểm lâm sàng và bệnh lý chính của các khối u này.
Một nghiên cứu hồi cứu đã được thực hiện tại “Trung tâm Ung bướu và Huyết học Thực nghiệm” thuộc Bệnh viện Policlinico Rodolico – San Marco ở Catania. Từ tháng 1 năm 2017 đến tháng 3 năm 2021, tổng cộng 455 bệnh nhân mắc ung thư vú và buồng trứng, u hắc tố, ung thư tuyến tụy hoặc ung thư tuyến tiền liệt đã được chuyển đến phòng thí nghiệm chẩn đoán phân tử của chúng tôi để xét nghiệm gen BRCA/2. Nghiên cứu này được tiến hành phù hợp với Tuyên bố Helsinki, và tất cả những người tham gia đã cung cấp sự đồng ý bằng văn bản trước khi phân tích phân tử.
Các đặc điểm mô học và sinh học (tình trạng ER, PgR, HER2, Ki-67 và độ ác tính) của ung thư vú được đánh giá trên mẫu sinh thiết lõi hoặc mẫu phẫu thuật, chỉ xem xét các thành phần khối u xâm lấn. Dựa trên các đặc điểm này, ung thư vú được phân loại như sau: luminal A (ER+ và/hoặc PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ và/hoặc PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER và/hoặc PgR+, HER2+), HER2+ (ER và PgR-, HER2+) hoặc bộ ba âm tính (ER và PgR-, HER2-).
Trước khi đánh giá tình trạng đột biến BRCA1 và BRCA2, một nhóm đa ngành bao gồm bác sĩ ung bướu, nhà di truyền học và nhà tâm lý học đã tiến hành tư vấn di truyền khối u cho mỗi bệnh nhân để xác định sự hiện diện của BRCA1 và/hoặc BRCA1 hoặc những cá nhân có nguy cơ cao mắc PV trong gen BRCA2. Việc lựa chọn bệnh nhân được thực hiện theo hướng dẫn của Hiệp hội Ung bướu Y học Ý (AIOM) và các khuyến nghị địa phương của Sicilia.30,31 Các tiêu chí này bao gồm: (i) tiền sử gia đình có các biến thể gây bệnh đã biết trong các gen nhạy cảm (ví dụ: BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) nam giới mắc ung thư vú; (iii) những người mắc ung thư vú và ung thư buồng trứng; (iv) phụ nữ mắc ung thư vú <36 tuổi, ung thư vú ba âm tính <60 tuổi hoặc ung thư vú hai bên <50 tuổi; (v) tiền sử bệnh cá nhân mắc ung thư vú <50 tuổi và ít nhất một người thân ruột thịt: (a) ung thư vú <50 tuổi; (b) ung thư buồng trứng không nhầy và không ranh giới ở mọi lứa tuổi; (c) ung thư vú hai bên; (d) ung thư vú ở nam giới; (e) ung thư tuyến tụy; (f) ung thư tuyến tiền liệt; (vi) hai hoặc nhiều hơn Tiền sử cá nhân mắc ung thư vú > 50 năm và tiền sử gia đình mắc ung thư vú, ung thư buồng trứng hoặc ung thư tuyến tụy đối với những người thân ruột thịt (bao gồm cả những người thân ruột thịt với cô ấy); (vii) Tiền sử cá nhân mắc ung thư buồng trứng và ít nhất một người thân ruột thịt: (a) Ung thư vú <50 năm; (b) Ung thư buồng trứng không do ung thư; (c) Ung thư vú hai bên; (d) Ung thư vú ở nam giới; (vii) Nữ giới mắc ung thư buồng trứng thể huyết thanh độ cao.
Mẫu máu ngoại vi 20 mL được lấy từ mỗi bệnh nhân và thu thập vào ống EDTA (BD Biosciences). DNA bộ gen được phân lập từ mẫu máu toàn phần 0,7 mL bằng bộ kit phân lập DNA QIAsymphony DSP DNA Midi (QIAGEN, Hilden, Ý) theo hướng dẫn của nhà sản xuất và được phân tích định lượng bằng máy đo huỳnh quang Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Hoa Kỳ). Quá trình làm giàu mục tiêu và chuẩn bị thư viện được thực hiện bởi Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, sẵn sàng để được nạp vào bộ thuốc thử Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 để chuẩn bị thư viện tự động theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Bộ kit bao gồm hai nhóm mồi PCR đa mồi có thể được sử dụng để nghiên cứu tất cả các gen BRCA1 (NM_007300.3) và BRCA2 (NM_000059.3). Tóm lại, 15 µL mỗi mẫu DNA pha loãng (10 ng) được thêm vào các đĩa có mã vạch để chuẩn bị thư viện và tất cả các thuốc thử và vật tư tiêu hao được nạp vào thiết bị Ion Chef™. Sau đó, quá trình chuẩn bị thư viện tự động và gộp thư viện mẫu có mã vạch được thực hiện trên thiết bị Ion Chef™. Số lượng thư viện đã chuẩn bị sau đó được đánh giá bằng máy đo huỳnh quang Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Cuối cùng, các thư viện được kết hợp theo tỷ lệ mol bằng nhau trong Ion. Các mẫu thư viện Chef™ (ống có mã vạch) được nạp vào thiết bị Ion Chef™. Trình tự được xác định bằng thiết bị Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) sử dụng chip Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Phân tích dữ liệu được thực hiện bằng phần mềm Amplicon Suite (SmartSeq srl) và Ion Reporter.
Tất cả danh pháp biến thể đều tuân theo hướng dẫn hiện hành của Hiệp hội Biến thể Bộ gen Người (Human Genome Variation Consortium), có sẵn trực tuyến (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Ý nghĩa lâm sàng của các biến thể BRCA1/2 được xác định bằng cách sử dụng phân loại của Hiệp hội Quốc tế ENIGMA (Mạng lưới Dựa trên Bằng chứng để Giải thích các Allele Đột biến Dòng mầm, https://enigmaconsortium.org/) và tham khảo các cơ sở dữ liệu khác nhau như ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD và UMD. Phân loại này bao gồm năm loại nguy cơ khác nhau: lành tính (loại I), có khả năng lành tính (loại II), biến thể có ý nghĩa không chắc chắn (VUS, loại III), có khả năng gây bệnh (loại IV) và gây bệnh (loại V). VarSome cũng phân tích ảnh hưởng của đột biến đến cấu trúc và chức năng protein, một công cụ hữu ích với quyền truy cập vào 30 cơ sở dữ liệu.32
Để xác định ý nghĩa lâm sàng tiềm tàng cho từng VUS, các thuật toán dự đoán protein bằng máy tính sau đây đã được sử dụng: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) và Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Các biến thể được phân loại là loại 1 và 2 được coi là kiểu hoang dã.
Giải trình tự Sanger đã xác nhận sự hiện diện của từng biến thể gây bệnh. Tóm lại, một cặp mồi đặc hiệu đã được thiết kế cho mỗi biến thể được phát hiện bằng cách sử dụng trình tự tham chiếu gen BRCA1 và BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 và NG_012772.3, NM_000059.3, tương ứng). Do đó, PCR nhắm mục tiêu đã được thực hiện, tiếp theo là giải trình tự Sanger.
Những bệnh nhân có kết quả xét nghiệm âm tính với gen BRCA1/2 được xét nghiệm bằng phương pháp khuếch đại đầu dò phụ thuộc vào liên kết đa bội (MLPA) theo hướng dẫn của nhà sản xuất để đánh giá sự hiện diện của các sắp xếp lại bộ gen lớn (LGR). Tóm lại, các mẫu DNA được biến tính và sử dụng tối đa 60 đầu dò đặc hiệu cho gen BRCA1 và BRCA2, mỗi đầu dò phát hiện một trình tự DNA cụ thể có chiều dài khoảng 60 nucleotide. Các sản phẩm khuếch đại đầu dò, bao gồm một tập hợp các đoạn khuếch đại PCR duy nhất, sau đó được phân tích bằng điện di mao quản và bằng phần mềm Cofalyser.Net kết hợp với các bảng Cofalyser cụ thể theo từng lô (www.mrcholland.com).
Các biến số bệnh lý lâm sàng được chọn lọc (mức độ mô học và chỉ số tăng sinh Ki-67%) có liên quan đến sự hiện diện của BRCA1/2 PV, được tính toán bằng phần mềm Prism phiên bản 8.4 sử dụng phép thử chính xác Fisher với giả định giá trị p < 0,05 là có ý nghĩa thống kê.
Từ tháng 1 năm 2017 đến tháng 3 năm 2021, 455 bệnh nhân đã được sàng lọc đột biến gen BRCA1/2. Xét nghiệm đột biến được thực hiện tại Trung tâm Ung bướu và Huyết học Thực nghiệm của Bệnh viện Policlinico. Theo hướng dẫn của Sicilia (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), tại Bệnh viện Rodolico Catania – San Marco, tổng cộng có 389 bệnh nhân mắc ung thư vú, 37 bệnh nhân ung thư buồng trứng, 16 bệnh nhân ung thư tuyến tụy, 8 bệnh nhân ung thư tuyến tiền liệt và 5 bệnh nhân ung thư hắc tố. Sự phân bố bệnh nhân theo loại ung thư và kết quả phân tích được thể hiện trong Hình 1.
Hình 1 trình bày sơ đồ quy trình tổng quan của nghiên cứu. Bệnh nhân mắc ung thư vú, u hắc tố, ung thư tuyến tụy, ung thư tuyến tiền liệt hoặc ung thư buồng trứng được xét nghiệm đột biến gen BRCA1 và BRCA2.
Các từ viết tắt: PVs, biến thể gây bệnh; VUS, biến thể có ý nghĩa chưa chắc chắn; WT, trình tự BRCA1/2 kiểu hoang dã.
Chúng tôi tập trung nghiên cứu vào các nhóm bệnh nhân ung thư vú. Các bệnh nhân có độ tuổi trung bình là 49 tuổi (dao động từ 23 đến 89) và đa số là nữ (n=376, tương đương 97%).
Trong số các đối tượng này, 64 (17%) có đột biến BRCA1/2 và tất cả đều là nữ. Ba mươi lăm (9%) có PV và 29 (7,5%) có VUS. Mười bảy (48,6%) trong số 35 biến thể gây bệnh xảy ra ở BRCA1 và 18 (51,4%) ở BRCA2, trong khi 5 VUS xảy ra ở BRCA1 (17,2%) và 24 (82,8%) ở BRCA2 (Hình 1 và 2). LGR không xuất hiện trong phân tích MLPA.
Hình 2. Phân tích đột biến BRCA1 và BRCA2 ở 389 bệnh nhân ung thư vú. (A) Phân bố các biến thể gây bệnh (PV) (màu đỏ), biến thể có ý nghĩa không chắc chắn (VUS) (màu cam) và kiểu gen hoang dại (WT) (màu xanh lam) ở 389 bệnh nhân ung thư vú; (B) 389 bệnh nhân ung thư vú. Ba mươi lăm (9%) có biến thể gây bệnh BRCA1/2 (PV). Trong số đó, 17 (48,6%) là người mang biến thể gây bệnh BRCA1 (màu đỏ đậm) và 18 (51,4%) là người mang biến thể gây bệnh BRCA2 (màu đỏ nhạt); (C) 29 (7,5%) trong số 389 đối tượng mang VUS, 5 (17,2%) gen BRCA1 (màu cam đậm) và 24 (82,8%) gen BRCA2 (màu cam nhạt).
Các từ viết tắt: PVs, biến thể gây bệnh; VUS, biến thể có ý nghĩa chưa chắc chắn; WT, trình tự BRCA1/2 kiểu hoang dã.
Tiếp theo, chúng tôi đã điều tra tỷ lệ mắc các phân nhóm phân tử BC ở bệnh nhân có đột biến BRCA1/2. Phân bố bao gồm 2 (5,7%) luminal A, 15 (42,9%) luminal B, 3 (8,6%) luminal B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ và 13 (37,1%) bệnh nhân TNBC. Trong số các bệnh nhân dương tính với BRCA1, 5 (29,4%) mắc BC luminal B, 2 (11,8%) mắc bệnh HER2+ và 10 (58,8%) mắc TNBC. Các khối u không có đột biến BRCA1 là luminal A hoặc luminal B-HER2+ (Hình 3). Trong nhóm dương tính với BRCA2, 10 (55,6%) khối u là luminal B, 3 (16,7%) là luminal B-HER2+, 3 (16,7%) là TNBC và 2 (11,1%) là luminal A (Hình 3). Không có khối u HER2+ nào được tìm thấy trong nhóm này. Như vậy, đột biến BRCA1 phổ biến ở bệnh nhân TNBC, trong khi đột biến BRCA2 chiếm ưu thế ở những người thuộc nhóm luminal B.
Hình 3. Tỷ lệ mắc các phân nhóm ung thư vú ở bệnh nhân có biến thể gây bệnh trong gen BRCA1 và BRCA2. Biểu đồ cột thể hiện sự phân bố các biến thể gây bệnh BRCA1 (màu đỏ đậm) và BRCA2 (màu đỏ nhạt) giữa các phân nhóm phân tử của bệnh nhân ung thư vú. Các con số được báo cáo trong mỗi ô biểu thị tỷ lệ phần trăm bệnh nhân có biến thể gây bệnh BRCA1 và BRCA2 cho mỗi phân nhóm ung thư vú.
Các từ viết tắt: PVs, biến thể gây bệnh; HER2+, dương tính với thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì người 2; TNBC, ung thư vú ba thể âm tính.
Tiếp theo, chúng tôi đã đánh giá loại và vị trí gen của các biến thể protein (PV) BRCA1 và BRCA2. Trong PV BRCA1, chúng tôi quan sát thấy 7 biến thể đơn nucleotide (SNV), 6 đột biến mất đoạn, 3 đột biến lặp đoạn và 1 đột biến chèn đoạn. Chỉ có một đột biến (c.5522delG) là phát hiện mới. Biến thể protein BRCA1 phổ biến nhất được phát hiện ở cả hai đối tượng là c.5035_5039delCTAAT. Sự thay đổi này liên quan đến việc mất năm nucleotide (CTAAT) trong exon 15 của BRCA1, dẫn đến sự thay thế axit amin leucine bằng tyrosine tại codon 1679, và do sự dịch khung dịch mã với một codon dừng thay thế được dự đoán dẫn đến sự cắt cụt protein sớm. Tất cả các thay đổi khác chỉ được phát hiện trong một trường hợp. Đáng chú ý, một trong các PV được báo cáo nằm trong vùng đồng thuận vị trí nối (c.4357+1G>T) (Bảng 1).
Liên quan đến BRCA2 PV, chúng tôi quan sát thấy 6 đột biến mất đoạn, 6 đột biến điểm (SNV) và 2 đột biến lặp đoạn. Không có thay đổi nào được tìm thấy là mới. Ba đột biến tái phát trong quần thể của chúng tôi, c.428dup và c.8487+1G>A được quan sát thấy ở 3 đối tượng, tiếp theo là c.5851_5854delAGTT được tìm thấy ở hai trường hợp. Sự thay đổi c.428dup liên quan đến sự lặp lại của C trong exon 5 của BRCA2, được dự đoán mã hóa một protein bị cắt ngắn, không chức năng. Đột biến c.8487+1G>A xảy ra trong vùng intron của intron 19 (± 1,2) của BRCA2 và ảnh hưởng đến trình tự đồng thuận ghép nối, dẫn đến sự ghép nối bị thay đổi, dẫn đến protein bất thường hoặc không có. Biến thể gây bệnh c.5851_5854delAGTT là do sự mất đoạn 4 nucleotide từ vị trí nucleotide 5851 đến 5854 trong exon mã hóa 10 của gen BRCA2 và dẫn đến Một sự dịch chuyển khung dịch mã với một codon dừng thay thế được dự đoán (p.S1951WfsTer). Đáng chú ý, như đã báo cáo trước đây, cả hai biến đổi c.631G>A và c.7008-2A>T đều được phát hiện ở cùng một bệnh nhân.34 Đột biến đầu tiên liên quan đến việc thay thế adenosine (A) trong exon 7 của BRCA2 bằng một nucleotide chứa guanine (G), dẫn đến sự thay đổi từ valine thành isoleucine ở codon 211. Axit amin isoleucine là một axit amin có tính chất rất giống nhau. Sự thay đổi này ảnh hưởng đến quá trình ghép nối mRNA bình thường. Biến thể thứ hai nằm trong vùng intron và dẫn đến sự thay thế kép A thành thymine (T) trước exon 13 của gen mã hóa BRCA2. Sự thay đổi c.7008-2A>T có thể tạo ra nhiều bản sao có độ dài khác nhau. Hơn nữa, trong nhóm các biến thể BRCA2, 4 trong số 18 biến đổi (22,2%) nằm trong vùng intron.
Tiếp theo, chúng tôi đã lập bản đồ các đột biến gây hại BRCA1/2 trong các miền chức năng và vùng liên kết protein (Hình 4). Trong gen BRCA1, 50% PV nằm trong vùng cụm ung thư vú (BCCR), trong khi 22% đột biến nằm trong vùng cụm ung thư buồng trứng (OCCR) (Hình 4A). Trong PV BRCA2, 35,7% biến thể nằm trong vùng BCCR và 42,8% đột biến nằm trong OCCR (Hình 4B). Sau đó, chúng tôi đánh giá vị trí của PV trong các miền protein BRCA1 và BRCA2. Đối với protein BRCA1, chúng tôi tìm thấy ba PV trong miền vòng lặp và cuộn xoắn, và hai đột biến trong miền BRCT (Hình 4A). Đối với protein BRCA2, 4 PV được lập bản đồ trong miền lặp lại BRC, trong khi 3 thay đổi trong intron và 3 thay đổi trong exon được phát hiện trong miền liên kết oligo/oligosaccharide (OB) và miền tháp (T) (Hình 4B).
Hình 4. Sơ đồ biểu diễn protein BRCA1 và BRCA2 và vị trí của các biến thể gây bệnh. Hình này cho thấy sự phân bố các biến thể gây bệnh BRCA1 (A) và BRCA2 (B) ở bệnh nhân ung thư vú. Các đột biến exon được hiển thị bằng màu xanh lam, trong khi các biến thể intron được hiển thị bằng màu cam. Chiều cao của thanh biểu thị số lượng trường hợp. Protein BRCA1 và BRCA2 cùng các miền chức năng của chúng được mô tả. (A) Protein BRCA1 chứa một miền vòng (RING) và một trình tự định vị hạt nhân (NLS), một miền cuộn xoắn, một miền cụm SQ/TQ (SCD) và một miền C-terminal của BRCA1 (BRCT). (B) Protein BRCA2 chứa tám đoạn lặp BRC, một miền liên kết DNA với một miền xoắn ốc (Helical), ba nếp gấp liên kết oligonucleotide/oligosaccharide (OB), một miền tháp (T) và một NLS ở phía C. Các vùng được gọi là Vùng Cụm Ung thư Vú (BCCR) và Vùng Cụm Ung thư Buồng trứng (OCCR) được hiển thị ở phía dưới. *Biểu thị các đột biến quyết định sự dừng lại mã bộ ba.
Sau đó, chúng tôi đã điều tra các đặc điểm bệnh lý lâm sàng của ung thư vú có thể tương quan với sự hiện diện của đột biến BRCA1/2. Hồ sơ lâm sàng đầy đủ có sẵn cho 181 bệnh nhân âm tính với BRCA1/2 (không mang đột biến) và tất cả những người mang đột biến (n ​​= 35). Có mối tương quan giữa tốc độ tăng sinh khối u và mức độ ác tính.
Chúng tôi đã tính toán sự phân bố của Ki-67 dựa trên giá trị trung vị của nhóm nghiên cứu (25%, phạm vi <10-90%). Các đối tượng có Ki-67 < 25% được định nghĩa là “Ki-67 thấp”, trong khi những cá nhân có giá trị ≥ 25% được coi là “Ki-67 cao”. Sự khác biệt đáng kể về Ki-67 (p<0,01) đã được tìm thấy giữa những người không mang đột biến và những người mang đột biến BRCA1 PV (Hình 5A).
Hình 5 Mối tương quan giữa Ki-67 và phân bố độ ác tính ở phụ nữ mắc ung thư vú có và không có đột biến BRCA1 và BRCA2. (A) Biểu đồ hộp thể hiện giá trị trung vị của Ki-67 ở 181 bệnh nhân ung thư vú không mang đột biến so với bệnh nhân mang đột biến BRCA1 (18) hoặc BRCA2 (17). Giá trị P dưới 0,5 được coi là có ý nghĩa thống kê. (B) Biểu đồ cột thể hiện sự phân loại bệnh nhân ung thư vú vào các nhóm độ ác tính mô học (G2 và G3) theo tình trạng đột biến BRCA1 và BRCA2 (đối tượng kiểu hoang dại, người mang đột biến BRCA1 và BRCA2).
Tương tự, chúng tôi đã kiểm tra xem mức độ ác tính của khối u có tương quan với sự hiện diện của đột biến BRCA1/2 PV hay không. Vì ung thư vú G1 không có trong quần thể nghiên cứu của chúng tôi, chúng tôi đã chia bệnh nhân thành hai nhóm (G2 hoặc G3). Phù hợp với kết quả Ki-67, phân tích cho thấy mối tương quan có ý nghĩa thống kê giữa mức độ ác tính của khối u và đột biến BRCA1, với tỷ lệ khối u G3 cao hơn ở người mang đột biến BRCA1 so với người không mang đột biến (p<0,005) (Hình 5B).
Những tiến bộ trong công nghệ giải trình tự DNA đã cho phép những bước tiến chưa từng có trong xét nghiệm gen BRCA1/2, với ý nghĩa quan trọng đối với những bệnh nhân có tiền sử gia đình mắc ung thư. Cho đến nay, khoảng 20.000 biến thể BRCA1/2 đã được xác định và phân loại theo Hiệp hội Di truyền Y học Hoa Kỳ 35 và hệ thống ENIGMA.35,36 Người ta biết rằng phổ đột biến BRCA1/2 rất khác nhau giữa các vùng địa lý.37 Tại Ý, tỷ lệ biến thể BRCA1/2 dao động từ 8% đến 37%, cho thấy sự biến đổi rộng rãi trong nước.38,39 Với dân số gần 5 triệu người, Sicily là vùng lớn thứ năm ở Ý về số lượng dân cư. Mặc dù có dữ liệu về sự phân bố của BRCA1/2 ở phía tây Sicily, nhưng không có bằng chứng rộng rãi ở phía đông của hòn đảo.
Nghiên cứu của chúng tôi là một trong những báo cáo đầu tiên về tỷ lệ mắc BRCA1/2 PV ở bệnh nhân ung thư vú ở miền đông Sicily.28 Chúng tôi tập trung phân tích vào ung thư vú, vì đây là bệnh phổ biến nhất trong nhóm nghiên cứu của chúng tôi.
Khi xét nghiệm 389 bệnh nhân ung thư vú, 9% mang đột biến BRCA1/2 PV, phân bố đều giữa BRCA1 và BRCA2. Kết quả này phù hợp với những kết quả đã được báo cáo trước đây ở quần thể người Ý.28 Điều thú vị là, 3% (13/389) trong nhóm nghiên cứu của chúng tôi là nam giới. Tỷ lệ này cao hơn dự kiến ​​đối với ung thư vú ở nam giới (1% tổng số ca ung thư vú),40 phản ánh việc chúng tôi lựa chọn quần thể dựa trên nguy cơ đột biến BRCA1/2. Tuy nhiên, không có người đàn ông nào trong số này phát triển đột biến BRCA1/2 PV, vì vậy họ là đối tượng để phân tích phân tử sâu hơn nhằm loại trừ sự hiện diện của các đột biến ít phổ biến hơn như PALB2, RAD51C và D, cùng nhiều đột biến khác. Các biến thể có ý nghĩa không chắc chắn được tìm thấy ở 7% số đối tượng có BRCA2 VUS rõ ràng. Ngay cả kết quả này cũng phù hợp với bằng chứng đã có từ trước.28,41,42
Khi phân tích sự phân bố các phân nhóm phân tử BC ở phụ nữ mang đột biến BRCA1/2, chúng tôi đã xác nhận các mối liên hệ đã biết giữa TNBC và BRCA1 PV (58,8%) và giữa BC loại luminal B và BRCA2 PV (55,6%).16,43 Các khối u loại luminal A và HER2+ ở người mang đột biến BRCA1 và BRCA2 PV phù hợp với dữ liệu trong tài liệu hiện có.16,43
Tiếp theo, chúng tôi tập trung vào loại và vị trí của biến thể BRCA1/2 PV. Trong nhóm nghiên cứu của chúng tôi, biến thể BRCA1 PV phổ biến nhất là c.5035_5039delCTAAT. Mặc dù Incorvaia et al. Mặc dù không mô tả biến thể này trong nhóm bệnh nhân người Sicilia của họ, các tác giả khác đã báo cáo nó như một biến thể dòng mầm BRCA1 PV.34 Một số biến thể BRCA1 PV đã được tìm thấy trong nhóm bệnh nhân của chúng tôi – ví dụ như c.181T>G, c.514del, c.3253dupA và c.5266dupC – đã được quan sát thấy ở Sicilia.28 Trong số này, hai đột biến khởi nguồn BRCA1 (c.181T>G và c.5266dupC) thường được tìm thấy ở người Do Thái Ashkenazi ở Đông và Trung Âu (Ba Lan, Séc), Slovenia, Áo, Hungary, Belarus và Đức), 44,45 và, ở Hoa Kỳ và Argentina, gần đây đã được định nghĩa là một “biến thể dòng mầm tái phát” ở bệnh nhân người Ý mắc ung thư vú và ung thư buồng trứng. Biến thể 34c.514del trước đây đã được xác định ở 8 bệnh nhân ung thư vú từ miền bắc Sicilia ở Palermo và Messina. Điều thú vị là, ngay cả Incorvaia et al. Biến thể c.3253dupA được tìm thấy ở một số gia đình ở Catania.28 Các biến thể BRCA2 PV tiêu biểu nhất là c.428dup, c.5851_5854delAGTT và biến thể intron c.8487+1G>A, đã được báo cáo chi tiết hơn 28 ở một bệnh nhân ở Palermo với c.428dup, biến thể c.5851_5854delAGTT PV được quan sát thấy ở các hộ gia đình ở tây bắc Sicily, chủ yếu ở các vùng Trapani và Palermo, trong khi biến thể c.5851_5854delAGTT PV được quan sát thấy ở các hộ gia đình ở tây bắc Sicily. Biến thể 8487+1G>A phổ biến hơn ở các đối tượng đến từ Messina, Palermo và Caltanissetta.28 Rebbeck et al. Trước đây, biến thể c.5851_5854delAGTT đã được mô tả ở Colombia.37 Một biến thể BRCA2 khác, c.631+1G>A, đã được tìm thấy ở bệnh nhân ung thư vú và ung thư buồng trứng từ Sicily (Agrigento, Siracusa và Ragusa).28 Đáng chú ý, chúng tôi đã quan sát thấy sự cùng tồn tại của hai biến thể BRCA2 (BRCA2 c.631G>A và c.7008-2A>T) ở cùng một bệnh nhân, mà chúng tôi cho rằng được phân tách theo kiểu cis, như đã được báo cáo trước đây.34,46 Những đột biến kép BRCA2 này thực sự thường được quan sát thấy ở vùng Ý và được phát hiện là gây ra các codon dừng sớm, ảnh hưởng đến quá trình ghép nối RNA thông tin và khiến protein BRCA2 bị lỗi.47,48
Chúng tôi cũng đã lập bản đồ các PV BRCA1 và BRCA2 trong các vùng OCCR và BCCR giả định của các miền protein và gen. Các vùng này đã được Rebbeck và cộng sự mô tả là các vùng nguy cơ phát triển ung thư buồng trứng và ung thư vú, tương ứng.49 Tuy nhiên, bằng chứng về mối liên hệ giữa vị trí của các biến thể dòng mầm và nguy cơ ung thư vú hoặc buồng trứng vẫn còn gây tranh cãi.28,50-52 Trong quần thể của chúng tôi, các PV BRCA1 chủ yếu nằm trong vùng BCCR, trong khi các PV BRCA2 chủ yếu nằm trong vùng OCCR. Tuy nhiên, chúng tôi không thể tìm thấy bất kỳ mối liên hệ nào giữa các vùng OCCR và BCCR giả định và các đặc điểm của ung thư vú. Điều này có thể là do số lượng bệnh nhân có đột biến BRCA1/2 còn hạn chế. Từ góc độ miền protein, các PV BRCA1 được phân bố dọc theo toàn bộ protein, và các biến đổi BRCA2 được tìm thấy chủ yếu trong miền lặp lại BRC.
Cuối cùng, chúng tôi đã đối chiếu các đặc điểm bệnh lý lâm sàng của ung thư vú với đột biến BRCA1/2. Do số lượng bệnh nhân tham gia hạn chế, chúng tôi chỉ tìm thấy mối tương quan đáng kể giữa Ki-67 và độ ác tính của khối u. Mặc dù việc đánh giá và diễn giải Ki-67 vẫn còn gây tranh cãi, nhưng chắc chắn rằng tỷ lệ tăng sinh cao có liên quan đến nguy cơ tái phát bệnh cao hơn và tỷ lệ sống sót thấp hơn. Cho đến nay, ngưỡng để phân biệt giữa Ki-67 “cao” và “thấp” là 20%. Tuy nhiên, ngưỡng này không áp dụng cho quần thể bệnh nhân đột biến BRCA1/2 của chúng tôi, có giá trị Ki-67 trung bình là 25%. Xu hướng tỷ lệ Ki-67 cao này có thể được giải thích bởi tỷ lệ mắc bệnh trong nhóm ung thư vú loại B và TNBC của chúng tôi, trong đó có rất ít khối u loại A. Tuy nhiên, một số bằng chứng dường như cho thấy rằng ngưỡng Ki-67 cao hơn (25–30%) có thể phân loại bệnh nhân tốt hơn theo tiên lượng của họ.53,54 Từ kết quả phân tích của chúng tôi, mối tương quan đáng kể không có gì đáng ngạc nhiên. Xảy ra giữa Ki-67 cao và độ ác tính cũng như sự hiện diện của BRCA1 PV. Trên thực tế, các khối u liên quan đến BRCA1 thường là TNBC và thể hiện các đặc điểm hung hăng hơn.16,17
Tóm lại, nghiên cứu này cung cấp báo cáo về tình trạng đột biến của BRCA1/2 trong một nhóm bệnh nhân ung thư vú ở miền đông Sicily. Nhìn chung, các phát hiện của chúng tôi phù hợp với các bằng chứng hiện có, cả về tỷ lệ đột biến và đặc điểm lâm sàng bệnh lý trong ung thư vú. Cần có thêm các nghiên cứu trên quần thể lớn hơn gồm các bệnh nhân ung thư vú mang đột biến BRCA1/2, chẳng hạn như sử dụng phân tích đột biến mở rộng đa bộ gen, để đánh giá sự hiện diện của các biến thể gây bệnh (PV) khác biệt và ít phổ biến hơn BRCA1/2. Điều này sẽ cho phép xác định và quản lý đúng cách số lượng ngày càng tăng các đối tượng có nguy cơ mắc ung thư cao hơn do đột biến gen.
Chúng tôi xác nhận rằng bệnh nhân đã ký giấy đồng ý cung cấp mẫu khối u của họ một cách ẩn danh cho mục đích nghiên cứu. Tất cả bệnh nhân đã ký giấy đồng ý bằng văn bản theo Tuyên bố Helsinki. Theo chính sách của Bệnh viện Đại học Đa khoa “G.Rodolico – S.Marco”, nghiên cứu này được miễn xem xét đạo đức vì phân tích BRCA1/2 được thực hiện theo thực tiễn lâm sàng và tất cả bệnh nhân đã cung cấp giấy đồng ý bằng văn bản. Bệnh nhân cũng đồng ý cho phép sử dụng dữ liệu của họ cho mục đích nghiên cứu.
Chúng tôi xin cảm ơn Giáo sư Paolo Vigneri vì sự hỗ trợ của ông trong việc chăm sóc bệnh nhân ung thư vú theo yêu cầu của Ủy ban Đạo đức.
Federica Martorana báo cáo đã nhận thù lao từ Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Các tác giả khác tuyên bố không có xung đột lợi ích nào trong công trình này.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Thống kê ung thư toàn cầu 2020: GLOBOCAN ước tính tỷ lệ mắc và tử vong của 36 loại ung thư ở 185 quốc gia trên thế giới. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249. doi: 10.3322/caac.21660