Javascript është aktualisht i çaktivizuar në shfletuesin tuaj. Disa veçori të kësaj faqeje interneti nuk do të funksionojnë kur Javascript është i çaktivizuar.
Regjistrohuni me të dhënat tuaja specifike dhe ilaçin specifik që ju intereson dhe ne do ta përputhim informacionin që jepni me artikujt në bazën tonë të të dhënave të gjerë dhe do t'ju dërgojmë menjëherë një kopje PDF me email.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6 nga Lidhja12, dhe Mjekësi Eksperimentale, University of Catania, Catania, 95123, Itali;2 Qendra për Onkologji dhe Hematologji Eksperimentale, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Itali; 3 Onkologji Mjekësore, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Itali; 4 Mjekësore Gjenetika, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Itali; 5 Gjenetika e Mjekësisë, ASP, Sirakuzë, 96100, Itali; 6 Departamenti i Shkencave Biomjekësore dhe Bioteknologjike, Universiteti i Katanias, Gjenetika Mjekësore, Katania, Itali, 95123; 7 Instituti i Kërkimeve Oasi-IRCCS, Troina, 94018, Itali Komunikimi: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected]; [email protected] Qëllimi: Mutacionet e linjës embrionale në BRCA1 dhe BRCA2 dhe kanceri i gjirit (BC), vezoreve (OC) dhe të tjerë të lidhur me një rrezik për kancer gjatë gjithë jetës. Testimi për gjenin BRCA është çelësi për vlerësimin e rrezikut individual, si dhe për gjetjen e metodave parandaluese tek bartësit e shëndetshëm dhe përshtatjen e trajtimeve tek pacientët me kancer. Prevalenca e ndryshimeve BRCA1 dhe BRCA2 ndryshon shumë në rajone gjeografike, dhe megjithëse ekzistojnë të dhëna mbi variantet patogjene të BRCA në familjet siciliane, mungojnë studime që synojnë posaçërisht popullatat në Siçilinë lindore. Qëllimi i studimit tonë ishte të hetohej incidenca dhe shpërndarja e ndryshimeve patogjene të linjës embrionale BRCA në një grup pacientësh BC nga Siçilia lindore dhe të vlerësohej lidhja e tyre me tipare specifike të BC duke përdorur sekuencimin e gjeneratës së ardhshme. Prania e ndryshimeve korrelonte me gradën e tumorit dhe indeksin e përhapjes. REZULTATET: Në përgjithësi, 35 pacientë (9%) kishin një variant patogjen BRCA, 17 (49%) në BRCA1 dhe 18 (51%) në BRCA2. Ndryshimet BRCA1 janë të përhapura në pacientët me BC trefish negativ, ndërsa mutacionet BRCA2 janë më të zakonshme në BC luminale. pacientët. Krahasuar me jo-bartësit, subjektet me variante BRCA1 kishin gradë tumori dhe indeks proliferativ dukshëm më të lartë. Përfundime: Gjetjet tona ofrojnë një pasqyrë të statusit mutacional të BRCA në pacientët me BC nga Siçilia lindore dhe konfirmojnë rolin e analizës NGS në identifikimin e pacientëve me BC të trashëguar. Në përgjithësi, këto të dhëna janë në përputhje me provat e mëparshme që mbështesin shqyrtimin e BRCA për parandalimin dhe trajtimin e duhur të kancerit në bartësit e mutacionit.
Kanceri i gjirit (KG) është kanceri më i zakonshëm malinj në mbarë botën dhe kanceri më vdekjeprurës tek gratë.1 Karakteristikat biologjike që përcaktojnë prognozën e KG dhe sjelljen klinike janë studiuar gjerësisht dhe janë sqaruar pjesërisht me kalimin e kohës. Në fakt, disa shënjues zëvendësues përdoren aktualisht për të klasifikuar KG në nëntipe të ndryshme molekulare. Ato janë receptori i estrogjenit (ER) dhe/ose progesteronit (PgR), amplifikimi i receptorit 2 të faktorit të rritjes epidermale njerëzore (HER2), indeksi i përhapjes Ki-67 dhe shkalla e tumorit (G).2 Kombinimi i këtyre variablave identifikoi kategoritë e mëposhtme të KG: 1) Tumoret luminale, që tregojnë shprehje të ER dhe/ose PgR, përbënin 75% të KG. Këto tumore u ndanë më tej në Luminal A, kur Ki-67 ishte nën 20% dhe HER2 negativ, dhe Luminal B, kur Ki-67 ishte i barabartë ose mbi 20% dhe në prani të amplifikimit HER2, pavarësisht nga indeksi i përhapjes; 2) Tumoret HER2+ që janë ER dhe PgR negativë, por tregojnë amplifikim HER2. Ky grup përbën 10% të të gjithë tumoreve të gjirit; 3) Kanceri i gjirit trefish negativ (TNBC), i cili nuk tregon shprehje të ER dhe PgR dhe amplifikim HER2, përbën rreth 15% të kancereve të gjirit.2-4
Midis këtyre nëntipeve BC, shkalla e tumorit dhe indeksi i përhapjes përfaqësojnë biomarkues të prerjes tërthore që lidhen drejtpërdrejt dhe në mënyrë të pavarur me agresivitetin dhe prognozën e tumorit.5,6
Përveç karakteristikave biologjike të lartpërmendura, roli i ndryshimeve gjenetike të trashëguara që çojnë në zhvillimin e kancerit të gjirit është bërë gjithnjë e më i rëndësishëm gjatë viteve të fundit.7 Rreth 1 në 10 tumore të gjirit trashëgohen për shkak të ndryshimeve të linjës embrionale në gjene specifike.8 Dy studime të mëdha epidemiologjike që përfshijnë më shumë se 180,000 gra kanë identifikuar së fundmi një grup prej tetë gjenesh (domethënë, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C dhe RAD51D) kryesisht përgjegjës për kancerin e gjirit të trashëguar. Midis këtyre gjeneve, BRCA1 dhe BRCA2 (në tekstin e mëtejmë BRCA1/2) treguan korrelacionin më të fortë me zhvillimin e tumoreve të gjirit.9-12 Në fakt, mutacionet embrionale BRCA1/2 rrisin ndjeshëm rrezikun e kancerit të gjirit gjatë jetës, si dhe të tumoreve të tjera malinje, duke përfshirë kancerin ovarian, prostatën, pankreasin, kolorektumin dhe melanomën. Nga mosha 13 deri në 80 vjeç, incidenca kumulative e kancerit të gjirit është 72% tek gratë me një variant patogjen (PV) BRCA1 dhe 69% tek gratë me një variant BRCA2. PV.14
Veçanërisht, një botim i kohëve të fundit sugjeron që rreziku i kancerit të gjirit varet nga lloji i PV-së. Në fakt, krahasuar me variantet patogjene të cunguara, variantet e dukshme të gabuara, veçanërisht në gjenin BRCA1, shoqërohen me një rrezik të reduktuar të kancerit të gjirit, veçanërisht tek gratë e moshuara.15
Prania e BRCA1 ose BRCA2 PV ishte e lidhur me karakteristika të ndryshme biologjike dhe klinikopatologjike.16,17 BC-të e shoqëruara me BRCA1 kanë tendencë të jenë klinikisht agresive, të diferencuara dobët dhe shumë proliferative. Këto tumore zakonisht janë trefish negative dhe kanë një moshë të hershme të fillimit. Tumoret që ndodhin tek pacientët me mutacion BRCA2 zakonisht shfaqin gradë të moderuara deri të diferencuara mirë dhe indekse proliferative të ndryshueshme. Këto tumore janë më të zakonshme në lumenin B dhe zakonisht ndodhin tek të rriturit më të moshuar.16-18 Veçanërisht, mutacionet në BRCA1 dhe BRCA2 rrisin ndjeshmërinë ndaj trajtimeve specifike, duke përfshirë kripërat e platinës dhe ilaçet e synuara siç janë frenuesit e poli(ADP-ribozës) polimerazës (PARPi).19,20
Gjatë viteve të fundit, zbatimi i sekuencimit të gjeneratës së ardhshme (NGS) në praktikën klinike ka mundësuar që një numër në rritje i pacientëve me kancer të gjirit (BC) t'i nënshtrohen testimit molekular për sindromat e ndjeshmërisë ndaj kancerit, duke përfshirë BRCA1/2.21 Njëkohësisht, përkufizimet e bazuara në kritere të sakta në lidhje me historinë familjare, karakteristikat demografike dhe klinikopatologjike për të identifikuar më mirë individët e denjë për testimin BRCA1/2.22,23 Në këtë kontekst, provat po grumbullohen mbi shqyrtimin BRCA1/2 në popullata specifike, duke theksuar ndryshimet midis rajoneve gjeografike.24–27 Edhe pse ka raporte mbi kohortën BC në Siçilinë perëndimore, më pak të dhëna janë të disponueshme mbi shqyrtimin BRCA1/2 në popullatën e Siçilisë lindore.28,29
Këtu përshkruajmë rezultatet e shqyrtimit të linjës embrionale BRCA1/2 te pacientët me BC nga Siçilia lindore, duke e lidhur më tej praninë e mutacioneve BRCA1 ose BRCA2 me tiparet kryesore klinikopatologjike të këtyre tumoreve.
Një studim retrospektiv u krye në “Qendrën për Onkologji Eksperimentale dhe Hematologji” në Spitalin Policlinico.Rodolico – San Marco në Catania. Nga janari 2017 deri në mars 2021, një total prej 455 pacientësh me kancer të gjirit dhe vezoreve, melanoma, pankreasi ose prostate u referuan në laboratorin tonë të diagnostikimit molekular për testimin gjenetik BRCA/2. Ky studim u krye në përputhje me Deklaratën e Helsinkit dhe të gjithë pjesëmarrësit dhanë pëlqimin e tyre të informuar me shkrim para analizës molekulare.
Karakteristikat histologjike dhe biologjike (ER, PgR, statusi HER2, Ki-67 dhe grada) e kancerit të gjirit (BC) u vlerësuan në mostrat e biopsisë bazë ose kirurgjikale, duke marrë parasysh vetëm përbërësit agresivë të tumorit. Bazuar në këto karakteristika, BC-të u klasifikuan si më poshtë: luminale A (ER+ dhe/ose PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminale B (ER+ dhe/ose PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminale B-HER2+ (ER dhe/ose PgR+, HER2+), HER2+ (ER dhe PgR-, HER2+) ose trefish negative (ER dhe PgR-, HER2-).
Përpara vlerësimit të statusit të mutacionit BRCA1 dhe BRCA2, një ekip multidisiplinar, përfshirë një onkolog, një gjenetist dhe një psikolog, kreu një konsultë gjenetike tumorale për secilin pacient për të përcaktuar praninë e BRCA1 dhe/ose BRCA1, ose individë me një rrezik të lartë të PV në gjenin BRCA2. Përzgjedhja e pacientëve u krye sipas udhëzimeve të Shoqatës Italiane të Onkologjisë Mjekësore (AIOM) dhe rekomandimeve lokale siciliane.30,31 Këto kritere përfshijnë: (i) historinë familjare të varianteve të njohura patogjene në gjenet e ndjeshmërisë (p.sh., BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) meshkuj me BC; (iii) ata me BC dhe OC; (iv) gratë me BC <36 vjeç, TNBC <60 vjeç, ose BC bilaterale <50 vjeç; (v) historinë mjekësore personale të BC <50 vjeç dhe të paktën një të afërm të shkallës së parë: (a) BC < 50 vjeç; (b) OC jo-mucinoze dhe jo-kufitare e çdo moshe; (c) BC bilaterale; (d) BC mashkull; (e) kancer pankreatik; (f) kancer prostate; (vi) dy ose më shumë histori personale të kancerit të pankreasit > 50 vjet dhe histori familjare të kancerit të pankreasit, oksit të prostatës ose kancerit të pankreasit për të afërmit që janë të afërm të shkallës së parë me njëri-tjetrin (përfshirë të afërmit me të cilët ajo është e afërm i shkallës së parë); (vii) histori personale e oksit të prostatës dhe të paktën një i afërm i shkallës së parë: (a) oksit të prostatës <50 vjet; (b) kancer i paqëndrueshëm; (c) oksit të prostatës bilaterale; (d) oksit të prostatës mashkull; (vii) femër me oksit të prostatës seroze të gradës së lartë.
Një mostër gjaku periferik prej 20 mL u mor nga secili pacient dhe u mblodh në tuba EDTA (BD Biosciences). ADN-ja gjenomike u izolua nga mostra gjaku të plotë prej 0.7 mL duke përdorur kitin QIAsymphony DSP DNA Midi Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Itali) sipas udhëzimeve të prodhuesit dhe u kalua nëpër një fluorometër Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, SHBA). Kryeni kuantifikimin. Pasurimi i objektivit dhe përgatitja e bibliotekës kryhen nga Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, gati për t'u ngarkuar në Kitin e Reagjentëve DL8 të Ion AmpliSeq™ Chef për përgatitjen automatike të bibliotekës sipas udhëzimeve të prodhuesit. Kiti përbëhet nga dy grupe prajmerësh të shumëfishtë PCR që mund të përdoren për të studiuar të gjitha gjenet BRCA1 (NM_007300.3) dhe BRCA2 (NM_000059.3). Shkurtimisht, 15 µL të secilës ADN të holluar të mostrës (10 ng) u shtuan në pllakat e barkoduara për përgatitjen e bibliotekës dhe të gjithë reagentët dhe materialet e konsumueshme u ngarkuan në instrumentin Ion Chef™. Përgatitja automatike e bibliotekës dhe grumbullimi i bibliotekës së mostrave të barkoduara u kryen më pas në instrumentin Ion Chef™. Numri i bibliotekave të përgatitura u vlerësua më pas nga një Fluorometër Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, SHBA) sipas udhëzimeve të prodhuesit. Së fundmi, bibliotekat kombinohen në raporte ekuimolare në tubat e mostrave të bibliotekës Ion Chef™ (tubat me barkod) dhe ngarkohen. në instrumentin Ion Chef™. Sekuencimi u krye duke përdorur një instrument Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) duke përdorur një çip Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Analiza e të dhënave u krye nga Amplicon Suite (SmartSeq srl) dhe Ion Reporter Software.
I gjithë nomenklatura e varianteve ndiqte udhëzimet aktuale të Konsorciumit të Variacionit të Gjenomit Njerëzor, të disponueshme në internet (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Rëndësia klinike e varianteve BRCA1/2 u përcaktua duke përdorur klasifikimin e Konsorciumit Ndërkombëtar ENIGMA (Rrjeti i Bazuar në Dëshmi për Interpretimin e Aleleve Mutante të Gërminës, https://enigmaconsortium.org/) dhe duke konsultuar baza të dhënash të ndryshme si ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD dhe UMD. Klasifikimi përfshin pesë kategori të dallueshme rreziku: beninje (kategoria I), me shumë gjasa beninje (kategoria II), variant me rëndësi të pasigurt (VUS, kategoria III), me shumë gjasa patogjene (kategoria IV) dhe patogjene (kategoria V). VarSome gjithashtu analizoi efektin e mutacioneve në strukturën dhe funksionin e proteinave, një mjet informues me qasje në 30 baza të dhënash.32
Për t'i caktuar rëndësi të mundshme klinike secilës VUS, u përdorën algoritmet e mëposhtme kompjuterike të parashikimit të proteinave: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) dhe Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Variantet e klasifikuara si klasa 1 dhe 2 u konsideruan të tipit të egër.
Sekuencimi i Sangerit konfirmoi praninë e secilit variant patogjen. Shkurtimisht, një palë prajmerësh specifikë u krijuan për secilin variant të zbuluar duke përdorur sekuencat e referencës së gjenit BRCA1 dhe BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 dhe NG_012772.3, NM_000059.3, përkatësisht). Prandaj, u krye PCR e synuar e ndjekur nga sekuencimi i Sangerit.
Pacientët që rezultuan negativë për gjenin BRCA1/2 u testuan me anë të amplifikimit të sondës së varur nga ligacioni multipleks (MLPA) sipas udhëzimeve të prodhuesit për të vlerësuar praninë e rirregullimeve të mëdha gjenomike (LGR). Shkurtimisht, mostrat e ADN-së denatyrohen dhe përdoren deri në 60 sonda specifike për gjenin BRCA1 dhe BRCA2, secila duke zbuluar një sekuencë specifike ADN-je me gjatësi afërsisht 60 nukleotide. Produktet e amplifikimit të sondës, të përbëra nga një grup unik amplikonesh PCR, u analizuan më pas me anë të elektroforezës kapilare dhe nga softueri Cofalyser.Net në lidhje me tabelat e duhura Cofalyser specifike për serinë (www.mrcholland.com).
Variablat klinikopatologjikë të përzgjedhur (grada histologjike dhe indeksi i përhapjes Ki-67%) u shoqëruan me praninë e BRCA1/2 PV, të llogaritura duke përdorur programin Prism v. 8.4 duke përdorur testin e saktë të Fisher-it duke supozuar se vlera p <0.05 është e rëndësishme.
Midis janarit 2017 dhe marsit 2021, 455 pacientë u ekzaminuan për mutacione të linjës embrionale BRCA1/2. Testimi i mutacionit u krye në Qendrën për Onkologji Eksperimentale dhe Hematologji të Spitalit Policlinico. Sipas udhëzuesit sicilian (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), “Rodolico e Catania - San Marco” gjithsej, 389 pacientë. Kishte kancer të gjirit, 37 kancer të vezoreve, 16 kancer të pankreasit, 8 kancer të prostatës dhe 5 melanomë. Shpërndarja e pacientëve sipas llojit të kancerit dhe rezultateve të analizës tregohet në Figurën 1.
Figura 1 tregon një diagram rrjedhës që tregon një përmbledhje të studimit. Pacientët me tumore të gjirit, melanoma, pankreasit, prostatës ose ovarianëve u testuan për mutacione në gjenet BRCA1 dhe BRCA2.
Shkurtimet: PV, variant patogjen; VUS, variant me rëndësi të pasigurt; WT, sekuenca BRCA1/2 e tipit të egër.
Ne i përqendruam studimet tona në mënyrë selektive në kohortat e kancerit të gjirit. Pacientet kishin një moshë mesatare prej 49 vjeç (diapazoni 23-89) dhe ishin kryesisht femra (n = 376, ose 97%).
Nga këta subjekte, 64 (17%) kishin mutacione BRCA1/2 dhe të gjitha ishin femra. Tridhjetë e pesë (9%) kishin PV dhe 29 (7.5%) kishin VUS. Shtatëmbëdhjetë (48.6%) nga 35 variantet patogjene ndodhën në BRCA1 dhe 18 (51.4%) në BRCA2, ndërsa 5 VUS ndodhën në BRCA1 (17.2%) dhe 24 (82.8%) në BRCA2 (Figurat 1 dhe 2). LGR nuk ishte e pranishme në analizën MLPA.
Figura 2. Analiza e mutacioneve BRCA1 dhe BRCA2 në 389 pacientë me kancer të gjirit. (A) Shpërndarja e varianteve patogjene (PV) (e kuqe), varianteve me rëndësi të pasigurt (VUS) (portokalli) dhe WT (blu) në 389 pacientë me kancer të gjirit; (B) 389 pacientë me kancer të gjirit Tridhjetë e pesë (9%) kishin variante patogjene (PV) BRCA1/2. Midis tyre, 17 (48.6%) ishin bartës të PV të BRCA1 (e kuqe e errët) dhe 18 (51.4%) ishin bartës të BRCA2 (e kuqe e çelët); (C) 29 (7.5%) nga 389 subjekte mbanin VUS, 5 (17.2%) gjene BRCA1 (portokalli e errët) dhe 24 (82.8%) gjene BRCA2 (portokalli e çelët).
Shkurtimet: PV, variant patogjen; VUS, variant me rëndësi të pasigurt; WT, sekuenca BRCA1/2 e tipit të egër.
Më pas ne hetuam prevalencën e nëntipeve molekulare të BC tek pacientët me PV BRCA1/2. Shpërndarja përfshinte 2 (5.7%) pacientë me luminale A, 15 (42.9%) luminale B, 3 (8.6%) luminale B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ dhe 13 (37.1%) pacientë me TNBC. Midis pacientëve BRCA1-pozitivë, 5 (29.4%) kishin BC luminale B, 2 (11.8%) kishin sëmundje HER2+ dhe 10 (58.8%) kishin TNBC. Tumoret pa mutacione BRCA1 ishin ose luminale A ose luminale B-HER2+ (Figura 3). Në nëngrupin BRCA2-pozitiv, 10 (55.6%) tumore ishin luminale B, 3 (16.7%) ishin luminale B-HER2+, 3 (16.7%) TNBC dhe 2 (11.1%) ishin luminale A (Figura 3). Në këtë grup nuk kishte tumore HER2+. Kështu, mutacionet BRCA1 janë të përhapura te pacientët me TNBC, ndërsa ndryshimet e BRCA2 janë mbizotëruese te individët me lumen B.
Figura 3 Prevalenca e nëntipeve të kancerit të gjirit tek pacientët me variante patogjene në BRCA1 dhe BRCA2. Histogramet që tregojnë shpërndarjen e PV-ve BRCA1- (e kuqe e errët) dhe BRCA2- (e kuqe e çelët) midis nëntipeve molekulare të pacienteve me kancer të gjirit. Numrat e raportuar brenda secilës kuti përfaqësojnë përqindjen e pacientëve me PV BRCA1 dhe BRCA2 për secilin nëntip të kancerit të gjirit.
Shkurtimet: PV, variant patogjen; HER2+, receptori 2 pozitiv i faktorit të rritjes epidermale njerëzore; TNBC, kancer i gjirit trefish negativ.
Më pas, ne vlerësuam llojin dhe lokalizimin e gjenit të PV-ve BRCA1 dhe BRCA2. Në PV BRCA1, ne vumë re 7 variante me një nukleotid të vetëm (SNV), 6 fshirje, 3 dublikime dhe 1 futje. Vetëm një mutacion (c.5522delG) përfaqëson një zbulim të ri. PV BRCA1 më i zakonshëm i zbuluar në të dy subjektet ishte c.5035_5039delCTAAT. Ky ndryshim përfshin një fshirje të pesë nukleotideve (CTAAT) në ekzonin 15 të BRCA1, duke rezultuar në zëvendësimin e aminoacidit leucinë nga tirozina në kodonin 1679, dhe për shkak të një zhvendosjeje të kornizës së përkthimit me një kodon ndalues ​​alternativ të parashikuar çoi në shkurtim të parakohshëm të proteinave. Të gjitha ndryshimet e tjera zbulohen vetëm në një rast. Veçanërisht, një nga PV-të e raportuara ishte i vendosur në rajonin e konsensusit të vendit të bashkimit (c.4357+1G>T) (Tabela 1).
Lidhur me BRCA2 PV, ne vumë re 6 fshirje, 6 SNV dhe 2 dublikime. Asnjë nga ndryshimet e gjetura nuk është e re. Tre mutacione u përsëritën në popullatën tonë, c.428dup dhe c.8487+1G>A të vëzhguara në 3 subjekte, të ndjekura nga c.5851_5854delAGTT i gjetur në dy raste. Ndryshimi c.428dup përfshin një përsëritje të C në ekzonin 5 të BRCA2, i parashikuar të kodojë një proteinë të cunguar, jofunksionale. Mutacioni c.8487+1G>A ndodh në rajonin intronik të intronit 19 të BRCA2 (± 1,2) dhe ndikon në sekuencën konsensus të bashkimit, duke rezultuar në bashkim të ndryshuar që rezulton në proteinë anormale ose mungesë proteine. Varianti patogjen c.5851_5854delAGTT është për shkak të një fshirjeje prej 4 nukleotidesh nga pozicionet e nukleotideve 5851 deri në 5854 në ekzonin kodues 10 të gjenit BRCA2 dhe rezulton në një Zhvendosje e kornizës përkthimore me një kodon ndalues ​​alternativ të parashikuar (p.S1951WfsTer). Veçanërisht, siç është raportuar më parë, të dy ndryshimet c.631G>A dhe c.7008-2A>T u zbuluan tek i njëjti pacient.34 Mutacioni i parë përfshin zëvendësimin e adenozinës (A) në ekzonin 7 të BRCA2 me një nukleotid që përmban guaninë (G) duke rezultuar në një ndryshim të valinës në izoleucinë në kodonin 211, izoleucina. Aminoacidi është një aminoacid me veti shumë të ngjashme. Ky ndryshim ndikon në bashkimin normal të ARNm-së. Varianti i dytë ndodhet në një rajon intronik dhe rezulton në një zëvendësim të dyfishtë A me timinë (T) para ekzonit 13 të gjenit që kodon BRCA2. Ndryshimi c.7008-2A>T mund të gjenerojë transkripte të shumëfishta me gjatësi të ndryshme. Për më tepër, në grupin e PV-ve BRCA2, 4 nga 18 ndryshime (22.2%) ishin intronike.
Pastaj hartëzuam mutacionet e dëmshme BRCA1/2 në domenet funksionale dhe rajonet që lidhen me proteinat (Fig. 4). Në gjenin BRCA1, 50% e PV-ve ishin të vendosura në rajonin e grumbullit të kancerit të gjirit (BCCR), ndërsa 22% e mutacioneve ishin të vendosura në rajonin e grumbullit të kancerit ovarian (OCCR) (Fig. 4A). Në PV BRCA2, 35.7% e varianteve ishin të vendosura në rajonin BCCR dhe 42.8% e mutacioneve ishin të vendosura në OCCR (Fig. 4B). Më pas, vlerësuam vendndodhjen e PV brenda domeneve të proteinave BRCA1 dhe BRCA2. Për proteinën BRCA1, gjetëm tre PV në domenet e lakut dhe spirales së mbështjellë, dhe dy mutacione në domenin BRCT (Fig. 4A). Për proteinën BRCA2, 4 PV u hartëzuan në domenin e përsëritur BRC, ndërsa 3 ndryshime intronike dhe 3 ndryshime ekzonike u zbuluan në domenet që lidhen me oligo/oligosakaride (OB) dhe kullë (T) (Figura 4B).
Figura 4 Paraqitje skematike e proteinave BRCA1 dhe BRCA2 dhe lokalizimi i varianteve patogjene. Kjo figurë tregon shpërndarjen e varianteve patogjene BRCA1 (A) dhe BRCA2 (B) tek pacientët me kancer të gjirit. Mutacionet ekzonike tregohen me blu, ndërsa variantet intronike tregohen me portokalli. Lartësia e shiritit përfaqëson numrin e rasteve. Raportohen proteinat BRCA1 dhe BRCA2 dhe domenet e tyre funksionale. (A) Proteina BRCA1 përmban një domen laku (RING) dhe një sekuencë lokalizimi bërthamor (NLS), një domen me spirale të mbështjellë, një domen grumbulli SQ/TQ (SCD) dhe një domen C-terminal BRCA1 (BRCT). (B) Proteina BRCA2 përmban tetë përsëritje BRC, një domen që lidhet me ADN-në me një domen helikal (Helikal), tre palosje që lidhen me oligonukleotide/oligosakaride (OB), një domen kullë (T) dhe një NLS në anën C. Zonat e quajtura Rajoni i Grumbullimit të Kancerit të Gjirit (BCCR) dhe Rajoni i Grumbullimit të Kancerit të Ovarianëve (OCCR) tregohen në fund. *Përfaqëson mutacionet që përcaktojnë ndalimin kodone.
Pastaj ne hetuam karakteristikat klinikopatologjike të BC që mund të korrelojnë me praninë e PV BRCA1/2. Të dhënat e plota klinike ishin në dispozicion për 181 pacientë BRCA1/2-negativë (jo-bartës) dhe të gjithë bartësit (n = 35). Kishte një korrelacion midis shkallës së përhapjes së tumorit dhe gradës.
Ne llogaritëm shpërndarjen e Ki-67 bazuar në medianën e grupit tonë (25%, diapazoni <10-90%). Subjektet me Ki-67 < 25% u përcaktuan si "Ki-67 i ulët", ndërsa individët me vlera ≥ 25% u konsideruan "Ki-67 i lartë". Dallime të rëndësishme Ki-67 (p <0.01) u gjetën midis jo-bartësve dhe bartësve të BRCA1 PV (Fig. 5A).
Figura 5 Korrelacioni i Ki-67 me shpërndarjen e gradës tek gratë me kancer të gjirit me dhe pa PV BRCA1 dhe BRCA2. (A) Diagrami me kuti që tregon vlerat mesatare të Ki-67 në 181 paciente me kancer të gjirit jo-bartës të BC kundrejt pacientëve me PV BRCA1 (18) ose BRCA2 (17). Vlerat P nën 0.5 u konsideruan statistikisht të rëndësishme. (B) Histogrami që përfaqëson caktimin e pacientëve me kancer të BC në grupe të gradës histologjike (G2 dhe G3) sipas statusit të mutacionit BRCA1 dhe BRCA2 (subjekte me moshë më të madhe, bartës të PV BRCA1 dhe BRCA2).
Po kështu, ne shqyrtuam nëse shkalla e tumorit korrelonte me praninë e BRCA1/2 PV. Meqenëse G1 BC mungonte në popullatën tonë, ne i ndamë pacientët në dy grupe (G2 ose G3). Në përputhje me rezultatet e Ki-67, analiza zbuloi një korrelacion statistikisht të rëndësishëm midis gradës së tumorit dhe mutacionit BRCA1, me një përqindje më të lartë të tumoreve G3 në bartësit e BRCA1 krahasuar me jo-bartësit (p <0.005) (Figura 5B).
Përparimet në teknologjinë e sekuencimit të ADN-së kanë mundësuar përparime të papara në testimin gjenetik BRCA1/2, me implikime vendimtare për pacientët me histori familjare të kancerit. Deri më sot, afërsisht 20,000 variante të BRCA1/2 janë identifikuar dhe klasifikuar sipas Shoqërisë Amerikane të Gjenetikës Mjekësore 35 dhe sistemit ENIGMA.35,36 Dihet mirë se spektri mutacional i BRCA1/2 ndryshon shumë në rajone gjeografike.37 Brenda Italisë, shkalla e PV-ve BRCA1/2 varionte nga 8% në 37%, duke treguar ndryshueshmëri të gjerë brenda vendit.38,39 Me një popullsi prej gati 5 milionë banorësh, Siçilia është rajoni i pestë më i madh në Itali për sa i përket numrit të banorëve. Megjithëse ekzistojnë të dhëna mbi shpërndarjen e BRCA1/2 në Siçilinë perëndimore, nuk ka prova të gjera në pjesën lindore të ishullit.
Studimi ynë është një nga raportet e para mbi incidencën e BRCA1/2 PV tek pacientët me BC në Siçilinë lindore.28 Ne e përqendruam analizën tonë te BC, pasi kjo është deri tani sëmundja më e zakonshme në grupin tonë.
Gjatë testimit të 389 pacientëve me kancer të gjirit (BC), 9% e tyre mbanin kancer të gjirit BRCA1/2, të shpërndara në mënyrë të barabartë midis BRCA1 dhe BRCA2. Këto rezultate janë në përputhje me ato të raportuara më parë në popullatën italiane.28 Është interesante se 3% (13/389) e grupit tonë ishin meshkuj. Kjo shkallë është më e lartë se sa pritej për kancerin e gjirit mashkullor (1% e të gjithë BC-ve),40 duke reflektuar përzgjedhjen tonë të popullatave bazuar në rrezikun e mutacionit BRCA1/2. Megjithatë, asnjë nga këta burra nuk zhvilloi një PV BRCA1/2, kështu që ata ishin kandidatë për analiza të mëtejshme molekulare për të përjashtuar praninë e mutacioneve më pak të zakonshme si PALB2, RAD51C dhe D, ndër të tjera. Variante me rëndësi të pasigurt u gjetën në 7% të subjekteve në të cilat BRCA2 VUS ishte e dukshme. Edhe ky rezultat është në përputhje me provat paraprake.28,41,42
Kur analizuam shpërndarjen e nëntipeve molekulare të BC te gratë me mutant BRCA1/2, konfirmuam lidhjet e njohura midis TNBC dhe BRCA1 PV (58.8%) dhe midis BC luminale B dhe BRCA2 PV (55.6%).16,43 Tumoret luminale A dhe HER2+ te bartësit e BRCA1 dhe BRCA2 PV janë në përputhje me të dhënat ekzistuese të literaturës.16,43
Pastaj përqendrohemi në llojin dhe vendndodhjen e PV BRCA1/2. Në grupin tonë, PV BRCA1 më e zakonshme ishte c.5035_5039delCTAAT. Megjithëse Incorvaia et al. nuk e përshkruan këtë variant në kohortën e tyre siciliane, autorë të tjerë e kanë raportuar atë si një PV të linjës embrionale BRCA1.34 Disa PV të BRCA1 u gjetën në kohortën tonë - p.sh. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA dhe c.5266dupC - të cilat janë vërejtur në Siçili.28 Nga këto, dy mutacione themeluese të BRCA1 (c.181T>G dhe c.5266dupC) gjenden zakonisht tek hebrenjtë Ashkenazi të Evropës Lindore dhe Qendrore (Poloni, Çeke), Sllovene, Austriake, Hungareze, Bjelloruse dhe Gjermane), 44,45 dhe, në Shtetet e Bashkuara dhe Argjentinë, u përcaktua së fundmi si një "variant i linjës embrionale përsëritës" tek pacientët italianë me BC dhe OC. Varianti 34c.514del u identifikua më parë në 8 pacientë me kancer të gjirit nga Siçilia veriore në Palermo dhe Messina. Interesante, madje edhe Incorvaia et al. gjetën variantin c.3253dupA në disa familje në Catania.28 PV-të më përfaqësuese të BRCA2 janë c.428dup, c.5851_5854delAGTT dhe varianti intronik c.8487+1G>A, të cilat janë raportuar më hollësisht 28 tek një pacient në Palermo me PV c.428dup, c.5851_5854delAGTT u vu re në familjet në Siçilinë veriperëndimore, kryesisht në rajonet Trapani dhe Palermo, ndërsa PV c.5851_5854delAGTT u vu re në familjet në Siçilinë veriperëndimore. Varianti 8487+1G>A ishte më i zakonshëm tek subjektet nga Messina, Palermo dhe Caltanissetta.28 Rebbeck et al. më parë është përshkruar ndryshimi c.5851_5854delAGTT në Kolumbi.37 Një tjetër PV e BRCA2, c.631+1G>A, është gjetur te pacientët me BC dhe OC nga Siçilia (Agrigento, Siracusa dhe Ragusa).28 Veçanërisht, ne vumë re bashkëjetesën e dy varianteve të BRCA2 (BRCA2 c.631G>A dhe c.7008-2A>T) te i njëjti pacient, të cilët i supozuam të ishin të ndarë në modalitetin cis, siç është raportuar më parë kështu.34,46 Këto mutacione të BRCA2 vërehen shpesh në rajonin italian dhe është gjetur se prezantojnë kodone ndalimi të parakohshme, duke ndikuar në bashkimin e ARN-së lajmëtare dhe duke shkaktuar dështimin e proteinës BRCA2.47,48
Ne gjithashtu hartëzuam PV-të BRCA1 dhe BRCA2 në rajonet e supozuara OCCR dhe BCCR të domeneve dhe gjeneve të proteinave. Këto rajone u përshkruan nga Rebbeck et al. si zona rreziku për zhvillimin e kancerit të vezoreve dhe gjirit, përkatësisht.49 Megjithatë, provat në lidhje me lidhjen midis vendndodhjes së varianteve të linjës germinale dhe rrezikut të kancerit të gjirit ose vezoreve mbeten të diskutueshme.28,50-52 Në popullatën tonë, PV-të BRCA1 ishin të vendosura kryesisht në rajonin BCCR, ndërsa PV-të BRCA2 ishin të vendosura kryesisht në rajonin OCCR. Megjithatë, ne nuk ishim në gjendje të gjenim ndonjë lidhje midis rajoneve të supozuara OCCR dhe BCCR dhe karakteristikave të BC. Kjo mund të jetë për shkak të numrit të kufizuar të pacientëve me mutacione BRCA1/2. Nga një perspektivë e domenit të proteinave, PV-të BRCA1 shpërndahen përgjatë të gjithë proteinës, dhe ndryshimet BRCA2 gjenden me përparësi në domenin e përsëritur BRC.
Së fundmi, ne lidhëm karakteristikat klinikopatologjike të BC me PV BRCA1/2. Për shkak të numrit të kufizuar të pacientëve të përfshirë, ne gjetëm vetëm një korrelacion domethënës midis Ki-67 dhe gradës së tumorit. Megjithëse vlerësimi dhe interpretimi i Ki-67 mbetet disi i diskutueshëm, është e sigurt se shkallët e larta të përhapjes shoqërohen me rritje të rrezikut të përsëritjes së sëmundjes dhe ulje të mbijetesës. Deri më sot, kufiri për dallimin midis Ki-67 "të lartë" dhe "të ulët" është 20%. Megjithatë, ky prag nuk vlen për popullatën tonë të pacientëve me mutacion BRCA1/2, i cili ka një vlerë mesatare Ki-67 prej 25%. Ky trend në shkallët e larta të Ki-67 mund të shpjegohet me prevalencën në kohortat tona luminale B dhe TNBC, nga të cilat ishin të pranishme pak tumore luminale A. Megjithatë, disa prova duket se sugjerojnë që një kufi më i lartë Ki-67 (25-30%) mund t'i stratifikojë më mirë pacientët sipas prognozës së tyre.53,54 Nga rezultatet e analizës sonë, një korrelacion domethënës nuk është i habitshëm. Ndodh midis Ki-67 të lartë dhe gradëve dhe pranisë së BRCA1 PV. Në fakt, tumoret e lidhura me BRCA1 janë tipike për TNBC dhe shfaqin tipare më agresive.16,17
Si përfundim, ky studim ofron një raport mbi statusin mutacional të BRCA1/2 në një grup BC nga Siçilia lindore. Në përgjithësi, gjetjet tona janë në përputhje me provat paraprake, si në aspektin e prevalencës së mutacionit ashtu edhe të karakteristikave klinikopatologjike në BC. Më shumë studime në popullata më të mëdha të pacientëve BC me mutacion BRCA1/2, siç është përdorimi i analizës mutacionale të zgjeruar me shumë gjenome, janë të nevojshme për të vlerësuar praninë e PV-ve që janë të dallueshme dhe më pak të shpeshta se BRCA1/2. Kjo do të lejojë identifikimin dhe menaxhimin e duhur të numrit në rritje të subjekteve me rrezik në rritje të kancerit për shkak të mutacioneve gjenetike.
Ne konfirmuam që pacientët nënshkruan pëlqimin e tyre të informuar për të dhënë mostrat e tyre të tumorit në mënyrë anonime për qëllime kërkimore. Të gjithë pacientët nënshkruan pëlqimin e tyre të informuar me shkrim sipas Deklaratës së Helsinkit. Sipas politikës së AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco”, ky studim u përjashtua nga shqyrtimi etik sepse analiza BRCA1/2 u krye sipas praktikës klinike dhe të gjithë pacientët dhanë pëlqimin e tyre të informuar me shkrim. Pacientët gjithashtu japin pëlqimin e tyre për përdorimin e të dhënave të tyre për qëllime kërkimore.
Falënderojmë Prof. Paolo Vigneri-n për ndihmën e tij në kujdesin e pacienteve me kancer të gjirit, siç u kërkua nga Komiteti i Etikës.
Federica Martorana raporton honorarë nga Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Autorët e tjerë deklarojnë se nuk kanë konflikte interesi në këtë punim.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, etj. Statistikat Globale të Kancerit 2020: GLOBOCAN vlerëson incidencën dhe vdekshmërinë e 36 kancereve në 185 vende të botës. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660