तुमच्या ब्राउझरमध्ये जावास्क्रिप्ट सध्या अक्षम आहे. जावास्क्रिप्ट अक्षम असताना या वेबसाइटची काही वैशिष्ट्ये काम करणार नाहीत.
तुमच्या विशिष्ट तपशिलांसह आणि तुम्हाला स्वारस्य असलेल्या विशिष्ट औषधासह नोंदणी करा. तुम्ही दिलेल्या माहितीची आमच्या विस्तृत डेटाबेसमधील लेखांशी जुळवणी करून आम्ही तुम्हाला त्वरित एक PDF प्रत ईमेल करू.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
स्टेफानिया स्टेला, 1,2 सिल्व्हिया रीटा व्हिटाले, 1,2 फेडेरिका मार्टोराना, 1,2 मिशेल मॅसिमिनो, 1,2 जिउलियाना पावोने, 3 कटिया लॅन्झाफेम, 3 सेबॅस्टियानो बियान्का, 4 चियारा बॅरोन, 5 क्रिस्टिना गोर्गोन, 6 मार्को फिचेरा, 6 मार्को फिचेरा, सी 7 डिपार्टमेंटचे 1,2 लि. मेडिसिन, कॅटानिया विद्यापीठ, कॅटानिया, 95123, इटली;2 प्रायोगिक ऑन्कोलॉजी आणि रक्तविज्ञान केंद्र, AOU पॉलिक्लिनको “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Italy; 3 मेडिकल ऑन्कोलॉजी, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italy; 4 मेडिकल जेनेटिक्स, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italy; ५ मेडिसिन जेनेटिक्स, एएसपी, सिराक्यूज, ९६१००, इटली; ६ डिपार्टमेंट ऑफ बायोमेडिकल अँड बायोटेक्नॉलॉजी सायन्सेस, युनिव्हर्सिटी ऑफ कॅटानिया, मेडिकल जेनेटिक्स, कॅटानिया, इटली, ९५१२३; ७ ओआसी रिसर्च इन्स्टिट्यूट-आयआरसीसीएस, ट्रोइना, ९४०१८, इटली संपर्क: स्टेफानिया स्टेला, दूरध्वनी +३९ ०९५ ३७८ १९४६, ईमेल [email protected]; [email protected] उद्देश: BRCA1 आणि BRCA2 मधील जर्मलाइन उत्परिवर्तने (germline mutations) स्तनाचा कर्करोग (BC), अंडाशयाचा कर्करोग (OC) आणि इतर कर्करोगांशी संबंधित आहेत, ज्यामुळे आयुष्यभराचा धोका संभवतो. वैयक्तिक धोका तपासण्यासाठी, तसेच निरोगी वाहकांमध्ये प्रतिबंधात्मक पद्धती शोधण्यासाठी आणि कर्करोगाच्या रुग्णांमध्ये उपचार पद्धती निश्चित करण्यासाठी BRCA जनुकीय चाचणी महत्त्वाची आहे. BRCA1 आणि BRCA2 मधील बदलांचे प्रमाण भौगोलिक प्रदेशानुसार मोठ्या प्रमाणात बदलते, आणि जरी सिसिलियन कुटुंबांमधील BRCA रोगजनक प्रकारांवर (pathogenic variants) माहिती उपलब्ध असली तरी, पूर्व सिसिलीमधील लोकसंख्येला लक्ष्य करणारे विशेष अभ्यास उपलब्ध नाहीत. आमच्या अभ्यासाचा उद्देश पूर्व सिसिलीमधील स्तनाच्या कर्करोगाच्या रुग्णांच्या गटात BRCA रोगजनक जर्मलाइन बदलांची घटना आणि वितरण तपासणे आणि नेक्स्ट-जनरेशन सिक्वेन्सिंगचा वापर करून विशिष्ट स्तनाच्या कर्करोगाच्या लक्षणांशी त्यांचा संबंध तपासणे हा होता. बदलांची उपस्थिती ट्यूमर ग्रेड आणि प्रसार निर्देशांकाशी (proliferation index) संबंधित होती. निष्कर्ष: एकूण, 35 रुग्णांमध्ये (9%) BRCA रोगजनक प्रकार आढळला, त्यापैकी 17 (49%) BRCA1 मध्ये आणि 18 (51%) BRCA2 मध्ये होते. BRCA1 मधील बदल ट्रिपल-निगेटिव्ह स्तनाच्या कर्करोगाच्या रुग्णांमध्ये अधिक प्रमाणात आढळतात, तर लुमिनल बीसी रुग्णांमध्ये बीआरसीए२ उत्परिवर्तन अधिक सामान्य आहे. वाहक नसलेल्यांच्या तुलनेत, बीआरसीए१ व्हेरिएंट असलेल्या व्यक्तींमध्ये ट्यूमर ग्रेड आणि प्रोलिफरेटिव्ह इंडेक्स लक्षणीयरीत्या जास्त होता. निष्कर्ष: आमचे निष्कर्ष पूर्व सिसिलीमधील बीसी रुग्णांमधील बीआरसीए उत्परिवर्तन स्थितीचा आढावा देतात आणि अनुवांशिक बीसी असलेल्या रुग्णांना ओळखण्यात एनजीएस विश्लेषणाच्या भूमिकेची पुष्टी करतात. एकूणच, ही माहिती उत्परिवर्तन वाहकांमध्ये कर्करोगाच्या योग्य प्रतिबंध आणि उपचारांसाठी बीआरसीए स्क्रीनिंगला समर्थन देणाऱ्या पूर्वीच्या पुराव्यांशी सुसंगत आहे.
स्तनाचा कर्करोग (BC) हा जगभरातील सर्वात सामान्य दुर्दम्य आजार आहे आणि महिलांमधील सर्वात प्राणघातक कर्करोग आहे.¹ स्तनाच्या कर्करोगाचा रोगनिदान आणि नैदानिक ​​वर्तन निश्चित करणाऱ्या जैविक वैशिष्ट्यांचा कालांतराने मोठ्या प्रमाणावर अभ्यास केला गेला आहे आणि ती अंशतः स्पष्ट झाली आहेत. खरं तर, स्तनाच्या कर्करोगाचे वेगवेगळ्या आण्विक उपप्रकारांमध्ये वर्गीकरण करण्यासाठी सध्या अनेक पर्यायी मार्कर वापरले जातात. ते म्हणजे इस्ट्रोजेन (ER) आणि/किंवा प्रोजेस्टेरॉन रिसेप्टर (PgR), ह्युमन एपिडर्मल ग्रोथ फॅक्टर रिसेप्टर 2 (HER2) ॲम्प्लिफिकेशन, प्रोलिफरेशन इंडेक्स Ki-67 आणि ट्यूमर ग्रेड (G).² या घटकांच्या संयोगाने स्तनाच्या कर्करोगाच्या खालील श्रेणी ओळखल्या गेल्या: 1) ल्युमिनल ट्यूमर, ज्यात ER आणि/किंवा PgR अभिव्यक्ती दिसून येते, ते स्तनाच्या कर्करोगाच्या 75% होते. या ट्यूमरचे पुढे ल्युमिनल A मध्ये विभाजन केले गेले, जेव्हा Ki-67 20% पेक्षा कमी आणि HER2 निगेटिव्ह होते, आणि ल्युमिनल B मध्ये, जेव्हा Ki-67 20% किंवा त्याहून अधिक होते आणि प्रोलिफरेशन इंडेक्स विचारात न घेता HER2 ॲम्प्लिफिकेशन उपस्थित होते; २) HER2+ ट्यूमर जे ER आणि PgR निगेटिव्ह असतात परंतु HER2 ॲम्प्लिफिकेशन दाखवतात. हा गट सर्व स्तनाच्या ट्यूमरपैकी १०% असतो; ३) ट्रिपल-निगेटिव्ह ब्रेस्ट कॅन्सर (TNBC), ज्यामध्ये ER आणि PgR अभिव्यक्ती आणि HER2 ॲम्प्लिफिकेशन दिसत नाही, तो स्तनाच्या कर्करोगांपैकी सुमारे १५% असतो.²⁻⁴
या स्तनाच्या कर्करोगाच्या उपप्रकारांपैकी, ट्यूमर ग्रेड आणि प्रोलिफरेशन इंडेक्स हे क्रॉस-सेक्शनल बायोमार्कर आहेत जे ट्यूमरच्या आक्रमकतेशी आणि रोगनिदानाशी थेट आणि स्वतंत्रपणे संबंधित आहेत.5,6
वर नमूद केलेल्या जैविक वैशिष्ट्यांव्यतिरिक्त, गेल्या काही वर्षांपासून स्तनाच्या कर्करोगाच्या (BC) विकासास कारणीभूत ठरणाऱ्या आनुवंशिक जनुकीय बदलांची भूमिका अधिकाधिक महत्त्वाची झाली आहे.7 सुमारे १० पैकी १ स्तनाचा ट्यूमर हा विशिष्ट जनुकांमधील जर्मलाइन बदलांमुळे आनुवंशिक असतो.8 १,८०,००० पेक्षा जास्त महिलांचा समावेश असलेल्या दोन मोठ्या महामारीशास्त्रीय अभ्यासांनी अलीकडेच आठ जनुकांचा एक गट (म्हणजेच, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, आणि RAD51D) ओळखला आहे, जो प्रामुख्याने आनुवंशिक BC साठी जबाबदार आहे. या जनुकांमधील, BRCA1 आणि BRCA2 (यापुढे BRCA1/2 म्हणून संबोधले जाईल) यांनी स्तनाच्या ट्यूमरच्या विकासाशी सर्वात मजबूत संबंध दर्शविला आहे.9-12 खरं तर, जर्मलाइन BRCA1/2 उत्परिवर्तनामुळे BC तसेच अंडाशय, प्रोस्टेट, स्वादुपिंड, कोलोरेक्टल आणि मेलेनोमा यांसारख्या इतर दुर्दम्य रोगांचा आजीवन धोका लक्षणीयरीत्या वाढतो. १३ ते ८० वयोगटातील, BRCA1 पॅथोजेनिक व्हेरिएंट असलेल्या महिलांमध्ये BC होण्याचे प्रमाण ७२% आहे. (पीव्ही) आणि BRCA2 पीव्ही असलेल्या महिलांमध्ये ६९%.१४
विशेष म्हणजे, एका अलीकडील प्रकाशनाने असे सुचवले आहे की स्तनाच्या कर्करोगाचा धोका पॉलीसायथेमिया व्हेरा (PV) च्या प्रकारावर अवलंबून असतो. खरं तर, रोगकारक ट्रंकेटिंग व्हेरिएंट्सच्या तुलनेत, लक्षणीय मिससेन्स व्हेरिएंट्स, विशेषतः BRCA1 जनुकामधील, स्तनाच्या कर्करोगाचा धोका कमी होण्याशी संबंधित आहेत, विशेषतः वृद्ध महिलांमध्ये.15
BRCA1 किंवा BRCA2 पॉलीमॉर्फिझमची उपस्थिती वेगवेगळ्या जैविक आणि क्लिनिकोपॅथॉलॉजिकल वैशिष्ट्यांशी संबंधित होती.¹⁶,¹⁷ BRCA1-संबंधित स्तनाच्या कर्करोगाचे ट्यूमर (BCs) वैद्यकीयदृष्ट्या आक्रमक, कमी विभेदित आणि अत्यंत वेगाने वाढणारे असतात. हे ट्यूमर सहसा ट्रिपल निगेटिव्ह असतात आणि कमी वयात सुरू होतात. BRCA2-उत्परिवर्तित रुग्णांमध्ये आढळणारे ट्यूमर सामान्यतः मध्यम ते चांगल्या प्रकारे विभेदित श्रेणी आणि बदलणारे प्रसार निर्देशांक दर्शवतात. हे ट्यूमर ल्युमेन B मध्ये अधिक सामान्य आहेत आणि सहसा वृद्ध प्रौढांमध्ये आढळतात.¹⁶-¹⁸ विशेष म्हणजे, BRCA1 आणि BRCA2 मधील उत्परिवर्तनामुळे प्लॅटिनम सॉल्ट्स आणि पॉली(एडीपी-रिबोज) पॉलीमरेज इनहिबिटर (PARPi) सारख्या लक्ष्यित औषधांसह विशिष्ट उपचारांप्रति संवेदनशीलता वाढते.¹⁹,²⁰
गेल्या काही वर्षांमध्ये, वैद्यकीय क्षेत्रात नेक्स्ट-जनरेशन सिक्वेन्सिंग (NGS) च्या अंमलबजावणीमुळे, वाढत्या संख्येने स्तनाच्या कर्करोगाच्या (BC) रुग्णांना BRCA1/2 सह कर्करोग संवेदनशीलता सिंड्रोमसाठी आण्विक चाचणी करणे शक्य झाले आहे.²¹ त्याचबरोबर, BRCA1/2 चाचणीसाठी पात्र व्यक्तींना अधिक चांगल्या प्रकारे ओळखण्यासाठी कौटुंबिक इतिहास, लोकसंख्याशास्त्रीय आणि क्लिनिकोपॅथॉलॉजिकल वैशिष्ट्यांसंबंधी अचूक निकषांवर आधारित व्याख्या केल्या जात आहेत.²²,²³ या संदर्भात, विशिष्ट लोकसंख्येमध्ये BRCA1/2 स्क्रीनिंगबद्दल पुरावे जमा होत आहेत, जे भौगोलिक प्रदेशांमधील फरक अधोरेखित करतात.²⁴⁻²⁷ पश्चिम सिसिलीमधील BC समूहावर अहवाल असले तरी, पूर्व सिसिलीमधील लोकसंख्येमध्ये BRCA1/2 स्क्रीनिंगबद्दल कमी माहिती उपलब्ध आहे.²⁸,²⁹
आम्ही येथे पूर्व सिसिलीमधील स्तनाच्या कर्करोगाच्या रुग्णांमध्ये केलेल्या जर्मलाइन BRCA1/2 स्क्रिनिंगचे परिणाम सादर करत आहोत, तसेच BRCA1 किंवा BRCA2 उत्परिवर्तनांच्या उपस्थितीचा या ट्यूमरच्या मुख्य क्लिनिकोपॅथॉलॉजिकल वैशिष्ट्यांशी असलेला संबंधही स्पष्ट करत आहोत.
कॅटानिया येथील रोडोलिको - सॅन मार्को पॉलीक्लिनिको हॉस्पिटलमधील “सेंटर फॉर एक्सपेरिमेंटल ऑन्कोलॉजी अँड हेमेटोलॉजी” येथे एक पूर्वलक्षी अभ्यास करण्यात आला. जानेवारी २०१७ ते मार्च २०२१ या कालावधीत, स्तन आणि अंडाशयाचा कर्करोग, मेलेनोमा, स्वादुपिंडाचा कर्करोग किंवा प्रोस्टेट कर्करोग असलेल्या एकूण ४५५ रुग्णांना BRCA/2 जनुकीय चाचणीसाठी आमच्या आण्विक निदान प्रयोगशाळेत पाठवण्यात आले. हा अभ्यास हेलसिंकी घोषणेनुसार आयोजित करण्यात आला होता आणि आण्विक विश्लेषणापूर्वी सर्व सहभागींनी लेखी माहितीपूर्ण संमती दिली होती.
केवळ आक्रमक ट्यूमर घटकांचा विचार करून, कोअर बायोप्सी किंवा सर्जिकल नमुन्यांवर स्तनाच्या कर्करोगाची (BC) हिस्टोलॉजिकल आणि जैविक वैशिष्ट्ये (ER, PgR, HER2 स्थिती, Ki-67 आणि ग्रेड) तपासण्यात आली. या वैशिष्ट्यांच्या आधारे, स्तनाच्या कर्करोगाचे (BC) वर्गीकरण खालीलप्रमाणे करण्यात आले: ल्युमिनल A (ER+ आणि/किंवा PgR+, HER2-, Ki-67<20%), ल्युमिनल B (ER+ आणि/किंवा PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), ल्युमिनल B-HER2+ (ER आणि/किंवा PgR+, HER2+), HER2+ (ER आणि PgR-, HER2+) किंवा ट्रिपल निगेटिव्ह (ER आणि PgR-, HER2-).
BRCA1 आणि BRCA2 उत्परिवर्तन स्थितीचे मूल्यांकन करण्यापूर्वी, ऑन्कोलॉजिस्ट, जेनेटिसिस्ट आणि मानसशास्त्रज्ञ यांचा समावेश असलेल्या एका बहु-अनुशासनात्मक टीमने प्रत्येक रुग्णासाठी ट्यूमर जेनेटिक्स सल्लामसलत केली, जेणेकरून BRCA1 आणि/किंवा BRCA2 जनुकात PV चा उच्च धोका असलेल्या व्यक्तींची उपस्थिती निश्चित करता येईल. रुग्णांची निवड इटालियन सोसायटी ऑफ मेडिकल ऑन्कोलॉजी (AIOM) मार्गदर्शक तत्त्वे आणि स्थानिक सिसिलियन शिफारसींनुसार करण्यात आली.30,31 या निकषांमध्ये खालील गोष्टींचा समावेश आहे: (i) संवेदनशीलता जनुकांमधील (उदा., BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN) ज्ञात रोगजनक प्रकारांचा कौटुंबिक इतिहास; (ii) स्तनाच्या कर्करोगाचे (BC) पुरुष; (iii) BC आणि ओव्हेरियन कॅन्सर (OC) असलेले; (iv) 36 वर्षांपेक्षा कमी वयात BC, 60 वर्षांपेक्षा कमी वयात TNBC, किंवा 50 वर्षांपेक्षा कमी वयात द्विपक्षीय BC असलेल्या महिला; (v) 50 वर्षांपेक्षा कमी वयात BC चा वैयक्तिक वैद्यकीय इतिहास आणि किमान एक प्रथम-श्रेणीतील नातेवाईक: (a) 50 वर्षांपेक्षा कमी वयात BC; (b) कोणत्याही वयातील नॉन-म्युसिनस आणि नॉन-बॉर्डरलाइन ओव्हेरियन कॅन्सर; (c) द्विपक्षीय BC; (d) पुरुषांमधील स्तनाचा कर्करोग; (e) स्वादुपिंडाचा कर्करोग; (f) प्रोस्टेटचा कर्करोग; (vi) ५० वर्षांपेक्षा जास्त कालावधीपासून स्तनाचा कर्करोग असल्याचा दोन किंवा अधिक वैयक्तिक इतिहास आणि एकमेकांचे प्रथम-श्रेणीचे नातेवाईक असलेल्या नातेवाईकांमध्ये (ज्यात तिचे प्रथम-श्रेणीचे नातेवाईक असलेल्यांचा समावेश आहे) स्तनाचा कर्करोग, अंडाशयाचा कर्करोग किंवा स्वादुपिंडाच्या कर्करोगाचा कौटुंबिक इतिहास; (vii) अंडाशयाच्या कर्करोगाचा वैयक्तिक इतिहास आणि किमान एक प्रथम-श्रेणीचा नातेवाईक: (a) ५० वर्षांपेक्षा कमी कालावधीपासून स्तनाचा कर्करोग; (b) इतर अंडाशयाचा कर्करोग; (c) दोन्ही स्तनांचा स्तनाचा कर्करोग; (d) पुरुषांमधील स्तनाचा कर्करोग; (vii) उच्च-श्रेणीचा सीरस अंडाशयाचा कर्करोग असलेली महिला.
प्रत्येक रुग्णाकडून 20 मिली पेरिफेरल रक्ताचा नमुना घेण्यात आला आणि तो EDTA ट्यूबमध्ये (BD Biosciences) गोळा करण्यात आला. उत्पादकाच्या सूचनांनुसार QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italy) वापरून 0.7 मिली संपूर्ण रक्ताच्या नमुन्यांमधून जीनोमिक डीएनए वेगळा करण्यात आला आणि परिमापन करण्यासाठी तो Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) मधून प्रवाहित करण्यात आला. टार्गेट एनरिचमेंट आणि लायब्ररी प्रिपरेशन हे ऑनकोमाइन™ बीआरसीए रिसर्च एसे शेफद्वारे केले जाते, जे निर्मात्याच्या सूचनांनुसार स्वयंचलित लायब्ररी तयार करण्यासाठी आयन अॅम्प्लिसीक™ शेफ रिएजंट्स डीएल8 किटमध्ये लोड करण्यासाठी तयार असते. या किटमध्ये दोन मल्टिप्लेक्स पीसीआर प्रायमर पूल्स असतात, जे सर्व बीआरसीए1 (NM_007300.3) आणि बीआरसीए2 (NM_000059.3) जीन्सचा अभ्यास करण्यासाठी वापरले जाऊ शकतात. थोडक्यात, लायब्ररी तयार करण्यासाठी प्रत्येक डायल्यूटेड सॅम्पल डीएनएचे (10 ng) 15 µL बारकोड केलेल्या प्लेट्समध्ये टाकण्यात आले आणि सर्व रिएजंट्स व कन्झ्युमेबल्स आयन शेफ™ इन्स्ट्रुमेंटवर लोड करण्यात आले. त्यानंतर आयन शेफ™ इन्स्ट्रुमेंटवर स्वयंचलित लायब्ररी प्रिपरेशन आणि बारकोड केलेल्या सॅम्पल लायब्ररी पूलिंगची प्रक्रिया पार पाडण्यात आली. त्यानंतर निर्मात्याच्या सूचनांनुसार क्यूबिट® 3.0 फ्लोरोमीटर (थर्मो फिशर सायंटिफिक, वॉल्थम, एमए, यूएसए) द्वारे तयार केलेल्या लायब्ररींची संख्या तपासण्यात आली. शेवटी, लायब्ररी एकत्र केल्या जातात. आयन शेफ™ लायब्ररी सॅम्पल ट्यूबमध्ये (बारकोड असलेल्या ट्यूब) सममोलर प्रमाणात घेऊन ते आयन शेफ™ इन्स्ट्रुमेंटवर लोड केले. आयन 510 चिप (थर्मो फिशर सायंटिफिक) वापरून आयन टॉरेंट S5 (थर्मो फिशर सायंटिफिक) इन्स्ट्रुमेंट (थर्मो फिशर सायंटिफिक) द्वारे सिक्वेन्सिंग केले गेले. डेटाचे विश्लेषण अॅम्प्लिकॉन सूट (स्मार्टसेक एसआरएल) आणि आयन रिपोर्टर सॉफ्टवेअरद्वारे केले गेले.
सर्व व्हेरिएंट नामकरण हे ऑनलाइन उपलब्ध असलेल्या ह्युमन जीनोम व्हेरिएशन कन्सोर्टियमच्या (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen) सध्याच्या मार्गदर्शक तत्त्वांनुसार केले गेले. BRCA1/2 व्हेरिएंट्सचे नैदानिक ​​महत्त्व हे इंटरनॅशनल कन्सोर्टियम ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) च्या वर्गीकरणाचा वापर करून आणि ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, आणि UMD सारख्या विविध डेटाबेसचा सल्ला घेऊन परिभाषित केले गेले. या वर्गीकरणात पाच भिन्न जोखीम श्रेणींचा समावेश आहे: सौम्य (श्रेणी I), बहुधा सौम्य (श्रेणी II), अनिश्चित महत्त्वाचा व्हेरिएंट (VUS, श्रेणी III), बहुधा रोगजनक (श्रेणी IV), आणि रोगजनक (श्रेणी V). VarSome ने प्रथिनांच्या संरचना आणि कार्यावर उत्परिवर्तनांच्या परिणामाचे विश्लेषण देखील केले, जे ३० डेटाबेसमध्ये प्रवेश असलेले एक माहितीपूर्ण साधन आहे.३२
प्रत्येक VUS ला संभाव्य क्लिनिकल महत्त्व देण्यासाठी, खालील संगणकीय प्रथिने भविष्यवाणी अल्गोरिदम वापरले गेले: म्यूटेशन टेस्टर, प्रोव्हियन-सिफ्ट (http://provean.jcvi.org/index.php), पॉलीफेन-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) आणि अलाइन-जीव्हीजीडी (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). वर्ग 1 आणि 2 म्हणून वर्गीकृत केलेले व्हेरिएंट वाइल्ड टाइप मानले गेले.
सँगर सिक्वेन्सिंगने प्रत्येक रोगकारक व्हेरिएंटच्या उपस्थितीची पुष्टी केली. थोडक्यात, BRCA1 आणि BRCA2 जीन संदर्भ सिक्वेन्स (अनुक्रमे NG_005905.2, NM_007294.3 आणि NG_012772.3, NM_000059.3) वापरून, प्रत्येक शोधलेल्या व्हेरिएंटसाठी विशिष्ट प्राइमर्सची एक जोडी तयार करण्यात आली. त्यानंतर, टार्गेटेड पीसीआर करून सँगर सिक्वेन्सिंग करण्यात आले.
ज्या रुग्णांची BRCA1/2 जीन चाचणी निगेटिव्ह आली, त्यांच्यामध्ये मोठ्या जीनोमिक पुनर्रचनांची (LGR) उपस्थिती तपासण्यासाठी, उत्पादकाच्या सूचनांनुसार मल्टिप्लेक्स लायगेशन-डिपेंडंट प्रोब ॲम्प्लिफिकेशन (MLPA) द्वारे चाचणी करण्यात आली. थोडक्यात, डीएनए नमुने डीनॅचर केले जातात आणि ६० पर्यंत BRCA1 व BRCA2 जीन-विशिष्ट प्रोब्स वापरले जातात, ज्यापैकी प्रत्येक सुमारे ६० न्यूक्लिओटाइड्स लांबीचा एक विशिष्ट डीएनए क्रम शोधतो. त्यानंतर, पीसीआर ॲम्प्लिकॉन्सच्या एका अद्वितीय संचाचा समावेश असलेल्या प्रोब ॲम्प्लिफिकेशन उत्पादनांचे, कॅपिलरी इलेक्ट्रोफोरेसिसद्वारे आणि योग्य बॅच-विशिष्ट कोफॅलायझर सारण्यांच्या (www.mrcholland.com) साहाय्याने कोफॅलायझर.नेट सॉफ्टवेअरद्वारे विश्लेषण केले गेले.
निवडक क्लिनिकोपॅथॉलॉजिकल व्हेरिएबल्स (हिस्टोलॉजिकल ग्रेड आणि Ki-67% प्रोलिफरेशन इंडेक्स) हे BRCA1/2 PV च्या उपस्थितीशी संबंधित होते, ज्याची गणना प्रिझम सॉफ्टवेअर v. 8.4 वापरून फिशरच्या अचूक चाचणीद्वारे केली गेली, ज्यात p-मूल्य <0.05 महत्त्वपूर्ण मानले गेले.
जानेवारी २०१७ ते मार्च २०२१ दरम्यान, ४५५ रुग्णांची जर्मलाइन BRCA1/2 उत्परिवर्तनांसाठी तपासणी करण्यात आली. ही उत्परिवर्तन चाचणी पॉलीक्लिनिको हॉस्पिटलच्या प्रायोगिक ऑन्कोलॉजी आणि हेमेटोलॉजी केंद्रात करण्यात आली. सिसिलियन मार्गदर्शक तत्त्वांनुसार (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), काटानिया - सॅन मार्कोच्या रोडोलिकोनुसार, एकूण ३८९ रुग्ण स्तनाचा कर्करोग, ३७ अंडाशयाचा कर्करोग, १६ स्वादुपिंडाचा कर्करोग, ८ प्रोस्टेट कर्करोग आणि ५ मेलेनोमाचे होते. कर्करोगाच्या प्रकारानुसार रुग्णांचे वितरण आणि विश्लेषणाचे परिणाम आकृती १ मध्ये दर्शविले आहेत.
आकृती १ मध्ये अभ्यासाचा आढावा देणारा फ्लो चार्ट दाखवला आहे. स्तन, मेलेनोमा, स्वादुपिंड, प्रोस्टेट किंवा अंडाशयाच्या ट्यूमर असलेल्या रुग्णांची BRCA1 आणि BRCA2 जनुकांमधील उत्परिवर्तनांसाठी चाचणी करण्यात आली.
संक्षिप्त रूपे: PVs, रोगकारक प्रकार; VUS, अनिश्चित महत्त्वाचा प्रकार; WT, मूळ BRCA1/2 अनुक्रम.
आम्ही आमचा अभ्यास निवडकपणे स्तनाच्या कर्करोगाच्या गटांवर केंद्रित केला. रुग्णांचे सरासरी वय ४९ वर्षे होते (वय २३-८९) आणि त्यांमध्ये महिलांचे प्रमाण अधिक होते (n=३७६, किंवा ९७%).
या विषयांपैकी, 64 (17%) जणांमध्ये BRCA1/2 उत्परिवर्तन होते आणि त्या सर्व महिला होत्या. पस्तीस (9%) जणांमध्ये PV आणि 29 (7.5%) जणांमध्ये VUS होते. 35 रोगजनक प्रकारांपैकी सतरा (48.6%) BRCA1 मध्ये आणि 18 (51.4%) BRCA2 मध्ये आढळले, तर 5 VUS BRCA1 मध्ये (17.2%) आणि 24 (82.8%) BRCA2 मध्ये आढळले (आकृती 1 आणि 2). MLPA विश्लेषणात LGR उपस्थित नव्हते.
आकृती २. ३८९ स्तन कर्करोग रुग्णांमधील BRCA1 आणि BRCA2 उत्परिवर्तनांचे विश्लेषण. (A) ३८९ स्तन कर्करोग रुग्णांमधील रोगकारक प्रकार (PV) (लाल), अनिश्चित महत्त्वाचे प्रकार (VUS) (नारंगी), आणि WT (निळा) यांचे वितरण; (B) ३८९ स्तन कर्करोग रुग्णांपैकी पस्तीस (९%) रुग्णांमध्ये BRCA1/2 रोगकारक प्रकार (PVs) आढळले. त्यांच्यापैकी, १७ (४८.६%) BRCA1 PV वाहक (गडद लाल) आणि १८ (५१.४%) BRCA2 वाहक (फिकट लाल) होते; (C) ३८९ रुग्णांपैकी २९ (७.५%) रुग्णांमध्ये VUS आढळले, ज्यात ५ (१७.२%) BRCA1 जनुके (गडद नारंगी) आणि २४ (८२.८%) BRCA2 जनुके (फिकट नारंगी) होती.
संक्षिप्त रूपे: PVs, रोगकारक प्रकार; VUS, अनिश्चित महत्त्वाचा प्रकार; WT, मूळ BRCA1/2 अनुक्रम.
पुढे आम्ही BRCA1/2 PV असलेल्या रुग्णांमध्ये BC आण्विक उपप्रकारांच्या प्रसाराचा अभ्यास केला. या वितरणात २ (५.७%) ल्युमिनल A, १५ (४२.९%) ल्युमिनल B, ३ (८.६%) ल्युमिनल B-HER2+, २ (५.७%) HER2+ आणि १३ (३७.१%) TNBC रुग्णांचा समावेश होता. BRCA1-पॉझिटिव्ह रुग्णांपैकी, ५ (२९.४%) रुग्णांना ल्युमिनल B BC, २ (११.८%) रुग्णांना HER2+ आजार आणि १० (५८.८%) रुग्णांना TNBC होता. BRCA1 उत्परिवर्तन नसलेले ट्यूमर एकतर ल्युमिनल A किंवा ल्युमिनल B-HER2+ होते (आकृती ३). BRCA2-पॉझिटिव्ह उपगटात, १० (५५.६%) ट्यूमर ल्युमिनल B, ३ (१६.७%) ल्युमिनल B-HER2+, ३ (१६.७%) TNBC आणि २ (११.१%) ल्युमिनल A होते (आकृती ३). या गटामध्ये HER2+ ट्यूमर आढळले नाहीत. अशाप्रकारे, TNBC रुग्णांमध्ये BRCA1 उत्परिवर्तन प्रचलित आहे, तर ल्युमेन B व्यक्तींमध्ये BRCA2 बदल प्रबळ आहेत.
आकृती ३ BRCA1 आणि BRCA2 मधील रोगकारक व्हेरिएंट असलेल्या रुग्णांमधील स्तनाच्या कर्करोगाच्या उपप्रकारांचे प्राबल्य. स्तनाच्या कर्करोगाच्या रुग्णांच्या आण्विक उपप्रकारांमध्ये BRCA1- (गडद लाल) आणि BRCA2- (फिकट लाल) PV चे वितरण दर्शवणारे हिस्टोग्राम. प्रत्येक चौकटीतील आकडे प्रत्येक स्तनाच्या कर्करोगाच्या उपप्रकारासाठी BRCA1 आणि BRCA2 PV असलेल्या रुग्णांची टक्केवारी दर्शवतात.
संक्षिप्त रूपे: PVs, रोगकारक प्रकार; HER2+, मानवी एपिडर्मल ग्रोथ फॅक्टर रिसेप्टर 2 पॉझिटिव्ह; TNBC, ट्रिपल-निगेटिव्ह ब्रेस्ट कॅन्सर.
त्यानंतर, आम्ही BRCA1 आणि BRCA2 PVs चा प्रकार आणि जनुकीय स्थानिकीकरण यांचे मूल्यांकन केले. BRCA1 PV मध्ये, आम्हाला 7 एकल न्यूक्लियोटाइड व्हेरिएंट्स (SNVs), 6 डिलीशन्स, 3 डुप्लिकेशन्स आणि 1 इन्सर्शन आढळले. फक्त एक म्युटेशन (c.5522delG) हा एक नवीन शोध आहे. दोन्ही रुग्णांमध्ये आढळलेला सर्वात सामान्य BRCA1 PV हा c.5035_5039delCTAAT होता. या बदलामध्ये BRCA1 एक्सॉन 15 मधील पाच न्यूक्लियोटाइड्सचे (CTAAT) डिलीशन होते, ज्यामुळे कोडॉन 1679 वर ल्युसिन या अमिनो ॲसिडची जागा टायरोसिन घेते, आणि अंदाजित पर्यायी स्टॉप कोडॉनसह ट्रान्सलेशन फ्रेमशिफ्टमुळे प्रथिनांचे अकाली ट्रंकेशन होते. इतर सर्व बदल फक्त एकाच केसमध्ये आढळले आहेत. विशेष म्हणजे, नोंदवलेल्या PVs पैकी एक स्प्लिस साइट कन्सेंसस रीजनमध्ये (c.4357+1G>T) स्थित होता (तक्ता 1).
BRCA2 PV च्या संदर्भात, आम्हाला 6 डिलीशन्स, 6 SNVs आणि 2 डुप्लिकेशन्स आढळले. आढळलेले कोणतेही बदल नवीन नाहीत. आमच्या लोकसंख्येत तीन उत्परिवर्तने पुन्हा आढळली, c.428dup आणि c.8487+1G>A हे 3 व्यक्तींमध्ये आढळले, त्यानंतर c.5851_5854delAGTT हे दोन प्रकरणांमध्ये आढळले. c.428dup या बदलामध्ये BRCA2 च्या एक्सॉन 5 मध्ये C ची पुनरावृत्ती होते, ज्यामुळे एक अपूर्ण, अकार्यक्षम प्रथिन तयार होण्याची शक्यता आहे. c.8487+1G>A हे उत्परिवर्तन BRCA2 च्या इंट्रॉन 19 (± 1,2) च्या इंट्रॉनिक प्रदेशात होते आणि ते स्प्लिसिंग कन्सेंसस सिक्वेन्सवर परिणाम करते, ज्यामुळे स्प्लिसिंगमध्ये बदल होऊन असामान्य किंवा अनुपस्थित प्रथिन तयार होते. c.5851_5854delAGTT हा पॅथोजेनिक व्हेरिएंट BRCA2 जनुकाच्या कोडिंग एक्सॉन 10 मध्ये 5851 ते 5854 या न्यूक्लियोटाइड स्थानांमधील 4-न्यूक्लियोटाइड डिलीशनमुळे होतो. यामुळे अंदाजित पर्यायी स्टॉप कोडॉनसह (p.S1951WfsTer) ट्रान्सलेशनल फ्रेमशिफ्ट होतो. विशेष म्हणजे, पूर्वी नोंदवल्याप्रमाणे, c.631G>A आणि c.7008-2A>T हे दोन्ही बदल एकाच रुग्णामध्ये आढळले.³⁴ पहिल्या म्युटेशनमध्ये BRCA2 एक्सॉन ७ मधील ॲडेनोसिन (A) च्या जागी ग्वानिन (G) असलेले न्यूक्लिओटाइड येते, ज्यामुळे कोडॉन २११ वर व्हॅलिनचे आयसोल्युसिनमध्ये रूपांतर होते. आयसोल्युसिन हे एक अमिनो ॲसिड आहे ज्याचे गुणधर्म अत्यंत समान आहेत. या बदलाचा सामान्य mRNA स्प्लिसिंगवर परिणाम होतो. दुसरा व्हेरिएंट इंट्रॉनिक प्रदेशात स्थित आहे आणि BRCA2 एन्कोड करणाऱ्या जनुकाच्या एक्सॉन १३ च्या आधी दुहेरी A चे थायमिन (T) मध्ये प्रतिस्थापन करतो. c.7008-2A>T बदलामुळे वेगवेगळ्या लांबीचे अनेक ट्रान्सक्रिप्ट तयार होऊ शकतात. शिवाय, BRCA2 PVs च्या गटामध्ये, १८ पैकी ४ बदल (२२.२%) इंट्रॉनिक होते.
त्यानंतर आम्ही कार्यात्मक डोमेन आणि प्रथिन-बंधन क्षेत्रांमध्ये BRCA1/2 ची हानिकारक उत्परिवर्तने मॅप केली (आकृती ४). BRCA1 जनुकात, ५०% पीव्ही (PVs) स्तन कर्करोग क्लस्टर क्षेत्रात (BCCR) आढळले, तर २२% उत्परिवर्तने अंडाशय कर्करोग क्लस्टर क्षेत्रात (OCCR) आढळली (आकृती ४अ). BRCA2 पीव्हीमध्ये, ३५.७% व्हेरिएंट्स BCCR क्षेत्रात आणि ४२.८% उत्परिवर्तने OCCR मध्ये आढळली (आकृती ४ब). पुढे, आम्ही BRCA1 आणि BRCA2 प्रथिन डोमेनमध्ये पीव्हीच्या स्थानाचे मूल्यांकन केले. BRCA1 प्रथिनासाठी, आम्हाला लूप आणि कॉइल्ड कॉइल डोमेनमध्ये तीन पीव्ही आणि BRCT डोमेनमध्ये दोन उत्परिवर्तने आढळली (आकृती ४अ). BRCA2 प्रथिनासाठी, ४ पीव्ही BRC रिपीट डोमेनमध्ये मॅप केले गेले, तर ३ इंट्रॉनिक आणि ३ एक्सॉनिक बदल ओलिगो/ओलिगोसॅकराइड-बाइंडिंग (OB) आणि टॉवरमध्ये आढळले. (टी) डोमेन्स (आकृती 4B).
आकृती ४ BRCA1 आणि BRCA2 प्रथिनांचे योजनाबद्ध सादरीकरण आणि रोगकारक प्रकारांचे स्थानिकीकरण. ही आकृती स्तनाच्या कर्करोगाच्या रुग्णांमधील BRCA1 (A) आणि BRCA2 (B) रोगकारक प्रकारांचे वितरण दर्शवते. एक्सॉनिक उत्परिवर्तने निळ्या रंगात, तर इंट्रॉनिक प्रकार नारंगी रंगात दर्शविले आहेत. बारची उंची प्रकरणांची संख्या दर्शवते. BRCA1 आणि BRCA2 प्रथिने आणि त्यांचे कार्यात्मक डोमेन्स नोंदवले आहेत. (A) BRCA1 प्रथिनामध्ये एक लूप डोमेन (RING) आणि एक न्यूक्लियर लोकलायझेशन सिक्वेन्स (NLS), एक कॉइल्ड-कॉइल डोमेन, एक SQ/TQ क्लस्टर डोमेन (SCD), आणि एक BRCA1 C-टर्मिनल डोमेन (BRCT) असतो. (B) BRCA2 प्रथिनामध्ये आठ BRC रिपीट, हेलिकल डोमेनसह एक DNA-बाइंडिंग डोमेन (Helical), तीन ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड/ऑलिगोसॅकराइड-बाइंडिंग (OB) फोल्ड्स, एक टॉवर डोमेन (T), आणि C बाजूला एक NLS असतो. ब्रेस्ट कॅन्सर क्लस्टर रिजन (BCCR) आणि ओव्हेरियन कॅन्सर क्लस्टर रिजन नावाची क्षेत्रे. (OCCR) तळाशी दाखवले आहेत.*स्टॉप कोडॉन निश्चित करणारे उत्परिवर्तन दर्शवते.
त्यानंतर आम्ही BRCA1/2 PV च्या उपस्थितीशी संबंधित असू शकणाऱ्या BC क्लिनिकोपॅथॉलॉजिकल वैशिष्ट्यांचा अभ्यास केला. 181 BRCA1/2-नकारात्मक रुग्ण (नॉन-कॅरियर्स) आणि सर्व कॅरियर्स (n = 35) यांच्या संपूर्ण क्लिनिकल नोंदी उपलब्ध होत्या. ट्यूमरच्या प्रसाराचा दर आणि ग्रेड यांच्यात सहसंबंध आढळला.
आम्ही आमच्या गटाच्या मध्यकाच्या (25%, श्रेणी <10-90%) आधारावर Ki-67 चे वितरण मोजले. ज्या व्यक्तींमध्ये Ki-67 < 25% होते त्यांना "कमी Ki-67" असे परिभाषित केले गेले, तर ज्या व्यक्तींमध्ये हे प्रमाण ≥ 25% होते त्यांना "उच्च Ki-67" मानले गेले. वाहक नसलेल्या आणि BRCA1 PV वाहकांमध्ये Ki-67 मध्ये लक्षणीय फरक (p<0.01) आढळले (आकृती 5A).
आकृती ५ BRCA1 आणि BRCA2 PV असलेल्या आणि नसलेल्या स्तनाच्या कर्करोगाच्या महिलांमध्ये Ki-67 चा ग्रेड वितरणाशी असलेला सहसंबंध. (A) १८१ नॉन-कॅरियर BC रुग्णांमधील मध्यक Ki-67 मूल्ये विरुद्ध BRCA1 (१८) किंवा BRCA2 (१७) PV रुग्णांमधील मूल्ये दर्शवणारा बॉक्सप्लॉट. ०.५ पेक्षा कमी P मूल्ये सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण मानली गेली. (B) BRCA1 आणि BRCA2 उत्परिवर्तन स्थितीनुसार (WT विषय, BRCA1 आणि BRCA2 PV वाहक) BC कर्करोगाच्या रुग्णांना हिस्टोलॉजिकल ग्रेड गटांमध्ये (G2 आणि G3) विभागणारा हिस्टोग्राम.
त्याचप्रमाणे, आम्ही ट्यूमर ग्रेडचा BRCA1/2 PV च्या उपस्थितीशी संबंध आहे की नाही हे तपासले. आमच्या लोकसंख्येत G1 BC अनुपस्थित असल्याने, आम्ही रुग्णांना दोन गटांमध्ये (G2 किंवा G3) विभागले. Ki-67 परिणामांशी सुसंगत, विश्लेषणातून ट्यूमर ग्रेड आणि BRCA1 उत्परिवर्तन यांच्यात सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण संबंध दिसून आला, ज्यामध्ये गैर-वाहकांच्या तुलनेत BRCA1 वाहकांमध्ये G3 ट्यूमरचे प्रमाण जास्त होते (p<0.005) (आकृती 5B).
डीएनए सिक्वेन्सिंग तंत्रज्ञानातील प्रगतीमुळे BRCA1/2 जनुकीय चाचणीमध्ये अभूतपूर्व प्रगती झाली आहे, ज्याचे कर्करोगाचा कौटुंबिक इतिहास असलेल्या रुग्णांसाठी महत्त्वपूर्ण परिणाम आहेत. आजपर्यंत, अमेरिकन सोसायटी ऑफ मेडिकल जेनेटिक्स 35 आणि ENIGMA प्रणालीनुसार35,36 अंदाजे 20,000 BRCA1/2 व्हेरिएंट्स ओळखले आणि वर्गीकृत केले गेले आहेत. हे सर्वज्ञात आहे की BRCA1/2 उत्परिवर्तनाचा स्पेक्ट्रम भौगोलिक प्रदेशानुसार मोठ्या प्रमाणात बदलतो.37 इटलीमध्ये, BRCA1/2 PVs चा दर 8% ते 37% पर्यंत होता, जो देशांतर्गत मोठी भिन्नता दर्शवतो.38,39 जवळपास 5 दशलक्ष लोकसंख्येसह, सिसिली हा रहिवाशांच्या संख्येनुसार इटलीमधील पाचवा सर्वात मोठा प्रदेश आहे. पश्चिम सिसिलीमध्ये BRCA1/2 च्या वितरणाबद्दल डेटा उपलब्ध असला तरी, बेटाच्या पूर्व भागात कोणताही विस्तृत पुरावा नाही.
पूर्व सिसिलीमधील स्तनाच्या कर्करोगाच्या रुग्णांमध्ये BRCA1/2 PV च्या प्रादुर्भावावरील आमचा अभ्यास हा पहिल्या अहवालांपैकी एक आहे.२८ आम्ही आमच्या विश्लेषणाचे लक्ष स्तनाच्या कर्करोगावर केंद्रित केले, कारण आमच्या गटात हा आतापर्यंतचा सर्वात सामान्य आजार आहे.
३८९ स्तनाच्या कर्करोगाच्या रुग्णांची चाचणी केली असता, ९% रुग्णांमध्ये BRCA1/2 PVs आढळले, जे BRCA1 आणि BRCA2 मध्ये समान प्रमाणात विभागलेले होते. हे निष्कर्ष इटालियन लोकसंख्येमध्ये पूर्वी नोंदवलेल्या निष्कर्षांशी सुसंगत आहेत.२८ विशेष म्हणजे, आमच्या गटातील ३% (१३/३८९) पुरुष होते. पुरुषांमधील स्तनाच्या कर्करोगासाठी अपेक्षित असलेल्या दरापेक्षा (सर्व स्तनाच्या कर्करोगांपैकी १%) हा दर जास्त आहे,४० जे BRCA1/2 उत्परिवर्तनाच्या जोखमीवर आधारित आमच्या लोकसंख्येच्या निवडीला प्रतिबिंबित करते. तथापि, यापैकी कोणत्याही पुरुषात BRCA1/2 PV विकसित झाला नाही, त्यामुळे PALB2, RAD51C आणि D यांसारख्या कमी सामान्य उत्परिवर्तनांची शक्यता नाकारण्यासाठी ते पुढील आण्विक विश्लेषणासाठी पात्र ठरले. ज्या रुग्णांमध्ये BRCA2 VUS स्पष्ट होता, त्यांच्यापैकी ७% रुग्णांमध्ये अनिश्चित महत्त्वाचे व्हेरिएंट्स (VUS) आढळले. हा निकाल देखील पूर्वी अस्तित्वात असलेल्या पुराव्यांशी सुसंगत आहे.२८,४१,४२
जेव्हा आम्ही BRCA1/2 उत्परिवर्तित महिलांमध्ये स्तनाच्या कर्करोगाच्या (BC) आण्विक उपप्रकारांच्या वितरणाचे विश्लेषण केले, तेव्हा आम्ही TNBC आणि BRCA1 PV (58.8%) यांच्यातील आणि ल्युमिनल B BC आणि BRCA2 PV (55.6%) यांच्यातील ज्ञात संबंधांची पुष्टी केली.¹⁶,⁴³ BRCA1 आणि BRCA2 PV वाहकांमधील ल्युमिनल A आणि HER2+ ट्यूमर हे विद्यमान साहित्य डेटाशी सुसंगत आहेत.¹⁶,⁴³
त्यानंतर आम्ही BRCA1/2 PV च्या प्रकार आणि स्थानावर लक्ष केंद्रित करतो. आमच्या गटात, सर्वात सामान्य BRCA1 PV हा c.5035_5039delCTAAT होता. जरी इन्कोरवाइया आणि इतरांनी... त्यांनी त्यांच्या सिसिलियन गटात या प्रकाराचे वर्णन केले नाही, इतर लेखकांनी याला जर्मलाइन BRCA1 PV म्हणून नोंदवले आहे.34 आमच्या गटात अनेक BRCA1 PVs आढळले – उदा. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA आणि c.5266dupC – जे सिसिलीमध्ये पाहिले गेले आहेत.28 यापैकी, दोन BRCA1 संस्थापक उत्परिवर्तन (c.181T>G आणि c.5266dupC) सामान्यतः पूर्व आणि मध्य युरोप (पोलंड, झेक), स्लोव्हेनियन, ऑस्ट्रियन, हंगेरियन, बेलारशियन आणि जर्मन येथील अश्केनाझी ज्यूंमध्ये आढळतात,44,45 आणि, युनायटेड स्टेट्स आणि अर्जेंटिनामध्ये, अलीकडेच BC आणि OC असलेल्या इटालियन रुग्णांमध्ये "पुनरावृत्त जर्मलाइन प्रकार" म्हणून परिभाषित केले गेले.34c.514del प्रकार यापूर्वी पालेर्मो आणि मेसिना येथील उत्तर सिसिलीतील 8 स्तनाच्या कर्करोगाच्या रुग्णांमध्ये ओळखला गेला होता. विशेष म्हणजे, अगदी इन्कोरवाया एट अल. कॅटानियामधील काही कुटुंबांमध्ये c.3253dupA व्हेरिएंट आढळला.28 सर्वात प्रातिनिधिक BRCA2 PVs हे c.428dup, c.5851_5854delAGTT आणि इंट्रॉनिक व्हेरिएंट c.8487+1G>A आहेत, ज्यांची अधिक तपशीलवार नोंद 28 करण्यात आली आहे. पालेर्मोमधील c.428dup असलेल्या एका रुग्णामध्ये, c.5851_5854delAGTT PV वायव्य सिसिलीतील घरांमध्ये, प्रामुख्याने ट्रापानी आणि पालेर्मो प्रदेशात आढळला, तर c.5851_5854delAGTT PV वायव्य सिसिलीतील घरांमध्ये आढळला. 8487+1G>A व्हेरिएंट मेसिना, पालेर्मो आणि कॅल्टानिसेटा येथील व्यक्तींमध्ये अधिक सामान्य होता.28 रेबेक एट अल. कोलंबियामध्ये पूर्वी c.5851_5854delAGTT या बदलाचे वर्णन केले गेले आहे.37 दुसरा BRCA2 PV, c.631+1G>A, सिसिली (अग्रिजेंटो, सिराकुसा आणि रागुसा) येथील BC आणि OC रुग्णांमध्ये आढळला आहे.28 विशेष म्हणजे, आम्हाला एकाच रुग्णामध्ये दोन BRCA2 व्हेरिएंट्सचे (BRCA2 c.631G>A आणि c.7008-2A>T) सहअस्तित्व आढळले, जे पूर्वी नोंदवल्याप्रमाणे cis मोडमध्ये विभक्त झाले असावेत असे आम्ही गृहीत धरले.34,46 हे BRCA2 डबल म्युटेशन्स इटालियन प्रदेशात वारंवार आढळतात आणि त्यांच्यामुळे अपरिपक्व स्टॉप कोडॉन्स तयार होतात, ज्यामुळे मेसेंजर RNA स्प्लिसिंगवर परिणाम होतो आणि BRCA2 प्रथिन अयशस्वी होते.47,48
आम्ही प्रोटीन डोमेन्स आणि जीन्सच्या संभाव्य OCCR आणि BCCR प्रदेशांमध्ये BRCA1 आणि BRCA2 PVs चे मॅपिंग केले. रेबेक आणि त्यांच्या सहकाऱ्यांनी या प्रदेशांचे वर्णन अनुक्रमे अंडाशय आणि स्तनाचा कर्करोग होण्यासाठी धोकादायक क्षेत्र म्हणून केले आहे.४९ तथापि, जर्मलाइन व्हेरिएंट्सचे स्थान आणि स्तन किंवा अंडाशयाच्या कर्करोगाचा धोका यांच्यातील संबंधाबद्दलचे पुरावे विवादास्पद आहेत.२८,५०-५२ आमच्या लोकसंख्येमध्ये, BRCA1 PVs प्रामुख्याने BCCR प्रदेशात, तर BRCA2 PVs प्रामुख्याने OCCR प्रदेशात आढळले. तथापि, आम्हाला संभाव्य OCCR आणि BCCR प्रदेश आणि स्तनाच्या कर्करोगाची वैशिष्ट्ये यांच्यात कोणताही संबंध आढळला नाही. हे BRCA1/2 उत्परिवर्तन असलेल्या रुग्णांच्या मर्यादित संख्येमुळे असू शकते. प्रोटीन डोमेनच्या दृष्टिकोनातून, BRCA1 PVs संपूर्ण प्रोटीनमध्ये वितरित असतात आणि BRCA2 मधील बदल प्राधान्याने BRC रिपीट डोमेनमध्ये आढळतात.
शेवटी, आम्ही स्तनाच्या कर्करोगाच्या क्लिनिकोपॅथॉलॉजिकल वैशिष्ट्यांचा BRCA1/2 PV शी सहसंबंध जोडला. समाविष्ट केलेल्या रुग्णांची संख्या मर्यादित असल्यामुळे, आम्हाला फक्त Ki-67 आणि ट्यूमर ग्रेड यांच्यात महत्त्वपूर्ण सहसंबंध आढळला. जरी Ki-67 चे मूल्यांकन आणि अर्थ लावणे काहीसे विवादास्पद असले तरी, हे निश्चित आहे की उच्च प्रसार दर हे रोगाच्या पुनरावृत्तीच्या वाढलेल्या धोक्याशी आणि कमी झालेल्या जगण्याच्या कालावधीशी संबंधित आहेत. आजपर्यंत, "उच्च" आणि "कमी" Ki-67 मध्ये फरक करण्यासाठी कटऑफ 20% आहे. तथापि, ही मर्यादा आमच्या BRCA1/2 उत्परिवर्तन असलेल्या रुग्णांच्या लोकसंख्येला लागू होत नाही, ज्यांचे सरासरी Ki-67 मूल्य 25% आहे. उच्च Ki-67 दरांमधील हा कल आमच्या ल्युमिनल B आणि TNBC गटांमधील प्राबल्यमुळे स्पष्ट केला जाऊ शकतो, ज्यामध्ये ल्युमिनल A ट्यूमर कमी प्रमाणात होते. तथापि, काही पुरावे असे सूचित करतात की उच्च Ki-67 कटऑफ (25-30%) रुग्णांना त्यांच्या रोगनिदानानुसार अधिक चांगल्या प्रकारे वर्गीकृत करू शकतो.53,54 आमच्या विश्लेषणाच्या निकालांवरून, उच्च Ki-67 आणि ग्रेड्स यांच्यात महत्त्वपूर्ण सहसंबंध आढळणे आश्चर्यकारक नाही. आणि BRCA1 PV ची उपस्थिती. खरं तर, BRCA1-संबंधित ट्यूमर हे TNBC चे वैशिष्ट्य आहेत आणि ते अधिक आक्रमक वैशिष्ट्ये दर्शवतात.¹⁶,¹⁷
सारांशतः, हा अभ्यास पूर्व सिसिलीमधील स्तनाच्या कर्करोगाच्या (BC) गटातील BRCA1/2 च्या उत्परिवर्तन स्थितीवर एक अहवाल सादर करतो. एकूणच, आमचे निष्कर्ष BC मधील उत्परिवर्तनाची व्यापकता आणि क्लिनिकोपॅथॉलॉजिकल वैशिष्ट्ये या दोन्ही बाबतीत, आधीपासून अस्तित्वात असलेल्या पुराव्यांशी सुसंगत आहेत. BRCA1/2 पेक्षा वेगळ्या आणि कमी प्रमाणात आढळणाऱ्या PVs (पॅथॉलॉजिकल व्हेरिअबलता) च्या उपस्थितीचे मूल्यांकन करण्यासाठी, BRCA1/2-उत्परिवर्तित BC रुग्णांच्या मोठ्या लोकसंख्येमध्ये, जसे की मल्टिजिनोम विस्तारित उत्परिवर्तन विश्लेषणाचा वापर करून, अधिक अभ्यासांची आवश्यकता आहे. यामुळे जनुकीय उत्परिवर्तनांमुळे कर्करोगाचा वाढता धोका असलेल्या व्यक्तींची ओळख पटवणे आणि त्यांचे योग्य व्यवस्थापन करणे शक्य होईल.
आम्ही याची खात्री केली की रुग्णांनी संशोधनाच्या उद्देशाने त्यांचे ट्यूमरचे नमुने अनामिकपणे देण्यासाठी माहितीपूर्ण संमतीपत्रावर स्वाक्षरी केली आहे. हेलसिंकीच्या घोषणेनुसार सर्व रुग्णांनी लेखी माहितीपूर्ण संमतीपत्रावर स्वाक्षरी केली आहे. एओयू पॉलीक्लिनिको “जी. रोडोलिको – एस. मार्को” च्या धोरणानुसार, या अभ्यासाला नैतिक पुनरावलोकनातून सूट देण्यात आली, कारण BRCA1/2 विश्लेषण वैद्यकीय पद्धतीनुसार केले गेले होते आणि सर्व रुग्णांनी लेखी माहितीपूर्ण संमती दिली होती. रुग्णांनी संशोधनाच्या उद्देशाने त्यांच्या डेटाच्या वापरास देखील संमती दिली आहे.
नीतिशास्त्र समितीच्या विनंतीनुसार स्तनाच्या कर्करोगाच्या रुग्णांची काळजी घेण्यात सहाय्य केल्याबद्दल आम्ही प्रा. पाओलो विग्नेरी यांचे आभार मानतो.
फेडरिका मार्टोराणा यांनी इस्टिट्यूटो जेंटिली, एली लिली, नोव्हार्टिस, फायझर यांच्याकडून मानधन मिळाल्याचे कळवले आहे. इतर लेखकांनी या कामात कोणताही हितसंबंधांचा संघर्ष नसल्याचे जाहीर केले आहे.
१. संग एच, फर्ले जे, सीगल आरएल, इत्यादी. जागतिक कर्करोग सांख्यिकी २०२०: ग्लोबोकॅन जगभरातील १८५ देशांमधील ३६ प्रकारच्या कर्करोगांचे प्रमाण आणि मृत्यूदराचा अंदाज वर्तवते. सीए कॅन्सर जे क्लिन. २०२१; ७१(३):२०९-२४९. doi: १०.३३२२/caac.२१६६०