Javascript està actualment desactivat al vostre navegador. Algunes funcions d'aquest lloc web no funcionaran quan Javascript estigui desactivat.
Registra't amb les teves dades específiques i el medicament específic que t'interessa i nosaltres compararem la informació que ens proporcionis amb els articles de la nostra extensa base de dades i t'enviarem una còpia en PDF per correu electrònic de seguida.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella, 1,21 Departament de Medicina de la Clínica, Universitat de Catania i Ex Cataperia 95123, Itàlia; 2 Centre d'Oncologia Experimental i Hematologia, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catània , 95123, Itàlia; 3 Oncologia Mèdica, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catània, 95123, Itàlia; 4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catània, 95123, Itàlia; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Itàlia; 6 Departament de Ciències Biomèdiques i Biotecnològiques, Universitat de Catània, Genètica Mèdica, Catània, Itàlia, 95123; 7Institut de Recerca Oasi-IRCCS, Troina, 94018, Itàlia Comunicacions: Stefania Stella, tel. +39 095 378 1946, correu electrònic [email protected]; [email protected] Objectiu: Mutacions germinals en BRCA1 i BRCA2 i càncer de mama (CM), ovari (CO) i altres associats amb un risc de càncer durant la vida. La prova del gen BRCA és clau per avaluar el risc individual, així com per trobar mètodes de prevenció en portadors sans i adaptar els tractaments en pacients amb càncer. La prevalença d'alteracions de BRCA1 i BRCA2 varia àmpliament entre les regions geogràfiques, i tot i que existeixen dades sobre variants patogèniques de BRCA en famílies sicilianes, falten estudis dirigits específicament a poblacions de l'est de Sicília. L'objectiu del nostre estudi va ser investigar la incidència i la distribució d'alteracions germinals patogèniques de BRCA en una cohort de pacients amb CM de l'est de Sicília i avaluar la seva associació amb trets específics de CM mitjançant la seqüenciació de nova generació. La presència d'alteracions es va correlacionar amb el grau tumoral i l'índex de proliferació. RESULTATS: En general, 35 pacients (9%) tenien una variant patogènica de BRCA, 17 (49%) en BRCA1 i 18 (51%) en BRCA2. Les alteracions de BRCA1 són prevalents en pacients amb CM triple negatiu, mentre que les mutacions de BRCA2 són més freqüents en pacients amb CM luminal. Comparat amb els no portadors, els subjectes amb variants de BRCA1 tenien un grau tumoral i un índex proliferatiu significativament més alts. Conclusions: Els nostres resultats proporcionen una visió general de l'estat mutacional de BRCA en pacients amb càncer de mama de l'est de Sicília i confirmen el paper de l'anàlisi NGS en la identificació de pacients amb càncer de mama hereditari. En general, aquestes dades són consistents amb evidències prèvies que donen suport al cribratge de BRCA per a la prevenció i el tractament adequats del càncer en portadors de mutacions.
El càncer de mama (CM) és la neoplasia maligna més comuna a tot el món i el càncer més mortal en les dones.1 Les característiques biològiques que determinen el pronòstic i el comportament clínic del CM s'han estudiat àmpliament i s'han elucidat parcialment al llarg del temps. De fet, actualment s'utilitzen diversos marcadors substituts per classificar el CM en diferents subtipus moleculars. Són el receptor d'estrogen (ER) i/o progesterona (PgR), l'amplificació del receptor 2 del factor de creixement epidèrmic humà (HER2), l'índex de proliferació Ki-67 i el grau tumoral (G).2 La combinació d'aquestes variables va identificar les següents categories de CM: 1) Els tumors luminals, que mostren expressió d'ER i/o PgR, representaven el 75% dels CM. Aquests tumors es van dividir encara més en Luminal A, quan el Ki-67 era inferior al 20% i HER2 negatiu, i Luminal B, quan el Ki-67 era igual o superior al 20% i en presència d'amplificació de HER2, independentment de l'índex de proliferació; 2) Tumors HER2+ que són ER i PgR negatius però mostren amplificació de HER2. Aquest grup representa el 10% de tots els tumors de mama; 3) El càncer de mama triple negatiu (TNBC), que no mostra expressió d'ER i PgR ni amplificació de HER2, representa aproximadament el 15% dels càncers de mama.2-4
Entre aquests subtipus de càncer de mama, el grau tumoral i l'índex de proliferació representen biomarcadors transversals que s'associen directament i independentment amb l'agressivitat i el pronòstic tumoral.5,6
A més de les característiques biològiques esmentades, el paper de les alteracions genètiques hereditàries que condueixen al desenvolupament del càncer de mama (CM) ha adquirit una importància creixent en els darrers anys.7 Aproximadament 1 de cada 10 tumors de mama s'hereten a causa d'alteracions de la línia germinal en gens específics.8 Dos grans estudis epidemiològics que han implicat més de 180.000 dones han identificat recentment un grup de vuit gens (és a dir, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C i RAD51D) principals responsables del CM hereditari. Entre aquests gens, BRCA1 i BRCA2 (d'ara endavant denominats BRCA1/2) van mostrar la correlació més forta amb el desenvolupament de tumors de mama.9-12 De fet, les mutacions de la línia germinal BRCA1/2 augmenten significativament el risc de CM al llarg de la vida, així com altres malalties malignes, com ara les d'ovari, pròstata, pàncrees, colorectal i melanoma. Dels 13 als 80 anys, la incidència acumulada del CM és del 72% en dones amb una variant patogènica (PV) de BRCA1 i del 69% en dones amb una variant BRCA2. PV.14
Cal destacar que una publicació recent suggereix que el risc de càncer de mama depèn del tipus de PV. De fet, en comparació amb les variants truncadores patogèniques, les variants de sentit erroni evidents, especialment en el gen BRCA1, s'associen amb un risc reduït de càncer de mama, especialment en dones grans.15
La presència de PV en BRCA1 o BRCA2 es va associar amb diferents característiques biològiques i clinicopatològiques.16,17 Els BC associats a BRCA1 tendeixen a ser clínicament agressius, poc diferenciats i altament proliferatius. Aquests tumors solen ser triple negatius i tenen una edat d'aparició primerenca. Els tumors que es produeixen en pacients amb mutacions BRCA2 solen presentar graus de moderat a ben diferenciats i índexs proliferatius variables. Aquests tumors són més freqüents al lumen B i solen aparèixer en adults grans.16-18 Cal destacar que les mutacions en BRCA1 i BRCA2 augmenten la sensibilitat a tractaments específics, incloses les sals de platí i els fàrmacs dirigits com els inhibidors de la poli(ADP-ribosa) polimerasa (PARPi).19,20
Durant els darrers anys, la implementació de la seqüenciació de nova generació (NGS) a la pràctica clínica ha permès que un nombre creixent de pacients amb càncer de mama se sotmetin a proves moleculars per a síndromes de susceptibilitat al càncer, incloent-hi BRCA1/2.21 Alhora, les definicions basades en criteris precisos sobre antecedents familiars, característiques demogràfiques i clinicopatològiques per identificar millor els individus que mereixen les proves de BRCA1/2.22,23 En aquest context, s'està acumulant evidència sobre el cribratge de BRCA1/2 en poblacions específiques, destacant les diferències entre regions geogràfiques.24–27 Tot i que hi ha informes sobre la cohort de càncer de mama a l'oest de Sicília, hi ha menys dades disponibles sobre el cribratge de BRCA1/2 a la població de l'est de Sicília.28,29
Descrivim aquí els resultats del cribratge de la línia germinal BRCA1/2 en pacients amb càncer de mama de l'est de Sicília, correlacionant encara més la presència de mutacions BRCA1 o BRCA2 amb les principals característiques clinicopatològiques d'aquests tumors.
Es va dur a terme un estudi retrospectiu al "Centre d'Oncologia Experimental i Hematologia" de l'Hospital Policlinico Rodolico - San Marco de Catània. Des del gener de 2017 fins al març de 2021, un total de 455 pacients amb càncer de mama i ovari, melanoma, pàncrees o pròstata van ser derivats al nostre laboratori de diagnòstic molecular per a proves genètiques BRCA/2. Aquest estudi es va dur a terme d'acord amb la Declaració de Hèlsinki, i tots els participants van proporcionar el seu consentiment informat per escrit abans de l'anàlisi molecular.
Les característiques histològiques i biològiques (RE, PgR, estat HER2, Ki-67 i grau) del càncer de mama es van avaluar en biòpsies basals o mostres quirúrgiques, considerant només els components tumorals agressius. En funció d'aquestes característiques, els càncers de mama es van classificar de la següent manera: luminal A (ER+ i/o PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ i/o PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER i/o PgR+, HER2+), HER2+ (ER i PgR-, HER2+) o triple negatiu (ER i PgR-, HER2-).
Abans d'avaluar l'estat de les mutacions de BRCA1 i BRCA2, un equip multidisciplinari que incloïa un oncòleg, un genetista i un psicòleg va dur a terme una consulta de genètica tumoral per a cada pacient per determinar la presència de BRCA1 i/o BRCA1 o individus amb alt risc de PV en el gen BRCA2. La selecció de pacients es va dur a terme d'acord amb les directrius de la Societat Italiana d'Oncologia Mèdica (AIOM) i les recomanacions locals sicilianes.30,31 Aquests criteris inclouen: (i) antecedents familiars de variants patogèniques conegudes en gens de susceptibilitat (per exemple, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) homes amb càncer de mama; (iii) aquells amb càncer de mama i carcinoma ovàric; (iv) dones amb càncer de mama <36 anys, càncer de mama trigeminat <60 anys o càncer de mama bilateral <50 anys; (v) antecedents mèdics personals de càncer de mama <50 anys i almenys un familiar de primer grau: (a) càncer de mama <50 anys; (b) carcinoma ovàric no mucís i no límit de qualsevol edat; (c) càncer de mama bilateral; (d) càncer de mama masculí; (e) càncer de pàncrees; (f) càncer de pròstata; (vi) dos o més antecedents personals de càncer de pròstata > 50 anys i antecedents familiars de càncer de pròstata, càncer d'ovari o càncer de pàncrees per a familiars que siguin parents de primer grau entre si (inclosos els familiars amb qui la pacient sigui parent de primer grau); (vii) Antecedents personals de càncer d'ovari i almenys un familiar de primer grau: (a) càncer de pròstata <50 anys; (b) càncer nociu; (c) càncer de pròstata bilateral; (d) càncer de pròstata masculí; (vii) dona amb càncer d'ovari serós d'alt grau.
Es va obtenir una mostra de sang perifèrica de 20 mL de cada pacient i es va recollir en tubs amb EDTA (BD Biosciences). L'ADN genòmic es va aïllar de mostres de sang completa de 0,7 mL utilitzant el kit d'aïllament QIAsymphony DSP DNA Midi (QIAGEN, Hilden, Itàlia) segons les instruccions del fabricant i es va passar a través d'un fluoròmetre Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA). Es va realitzar la quantificació. L'enriquiment de la diana i la preparació de la biblioteca es duen a terme amb l'Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, llest per ser carregat al kit Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 per a la preparació automatitzada de la biblioteca segons les instruccions del fabricant. El kit consta de dos conjunts de primers de PCR multiplex que es poden utilitzar per estudiar tots els gens BRCA1 (NM_007300.3) i BRCA2 (NM_000059.3). Breument, es van afegir 15 µL de cada mostra d'ADN diluïda (10 ng) a plaques amb codi de barres per a la preparació de la biblioteca i tots els reactius i consumibles es van carregar a l'instrument Ion Chef™. A continuació, es va realitzar la preparació automatitzada de la biblioteca i l'agrupació de la biblioteca de mostres amb codi de barres a l'instrument Ion Chef™. El nombre de biblioteques preparades es va avaluar mitjançant un fluoròmetre Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA) segons les instruccions del fabricant. Finalment, les biblioteques es combinen en proporcions equimolars en tubs de mostra de la biblioteca Ion Chef™ (tubs amb codi de barres) i es carreguen. a l'instrument Ion Chef™. La seqüenciació es va dur a terme mitjançant un instrument Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) amb un xip Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). L'anàlisi de dades es va dur a terme mitjançant Amplicon Suite (SmartSeq srl) i el programari Ion Reporter.
Tota la nomenclatura de variants va seguir les directrius actuals del Consorci de Variació del Genoma Humà, disponible en línia (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). La importància clínica de les variants BRCA1/2 es va definir mitjançant la classificació del Consorci Internacional ENIGMA (Xarxa Basada en l'Evidència per a la Interpretació d'Al·lels Mutants de la Línia Germinal, https://enigmaconsortium.org/) i consultant diferents bases de dades com ara ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD i UMD. La classificació inclou cinc categories de risc diferents: benigna (categoria I), probablement benigna (categoria II), variant de significació incerta (VUS, categoria III), probablement patògena (categoria IV) i patògena (categoria V). VarSome també va analitzar l'efecte de les mutacions sobre l'estructura i la funció de les proteïnes, una eina informativa amb accés a 30 bases de dades.32
Per assignar una significació clínica potencial a cada VUS, es van utilitzar els següents algoritmes computacionals de predicció de proteïnes: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) i Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Les variants classificades com a classe 1 i 2 es van considerar de tipus salvatge.
La seqüenciació de Sanger va confirmar la presència de cada variant patogènica. Breument, es va dissenyar un parell d'encebadors específics per a cada variant detectada mitjançant les seqüències de referència dels gens BRCA1 i BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 i NG_012772.3, NM_000059.3, respectivament). Per tant, es va realitzar una PCR dirigida seguida de la seqüenciació de Sanger.
Els pacients que van donar negatiu per al gen BRCA1/2 van ser provats mitjançant amplificació amb sonda dependent de lligadura multiplex (MLPA) segons les instruccions del fabricant per avaluar la presència de grans reordenaments genòmics (LGR). Breument, les mostres d'ADN es desnaturalitzen i s'utilitzen fins a 60 sondes específiques dels gens BRCA1 i BRCA2, cadascuna de les quals detecta una seqüència d'ADN específica d'aproximadament 60 nucleòtids de longitud. Els productes d'amplificació de la sonda, que consisteixen en un conjunt únic d'amplicons de PCR, es van analitzar mitjançant electroforesi capil·lar i mitjançant el programari Cofalyser.Net juntament amb les taules Cofalyser específiques del lot corresponents (www.mrcholland.com).
Les variables clinicopatològiques seleccionades (grau histològic i índex de proliferació de Ki-67%) es van associar amb la presència de PV BRCA1/2, calculades mitjançant el programari Prism v. 8.4 utilitzant la prova exacta de Fisher assumint que un valor p <0,05 és significatiu.
Entre gener de 2017 i març de 2021, es van examinar 455 pacients per detectar mutacions germinals BRCA1/2. Les proves de mutació es van realitzar al Centre d'Oncologia Experimental i Hematologia de l'Hospital Policlinico. Segons la guia siciliana (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), el Rodolico de Catania – San Marco va tractar en total 389 pacients: càncer de mama, 37 càncer d'ovari, 16 càncer de pàncrees, 8 càncer de pròstata i 5 melanoma. La distribució dels pacients segons el tipus de càncer i els resultats de l'anàlisi es mostra a la Figura 1.
La figura 1 mostra un diagrama de flux que mostra una visió general de l'estudi. Es van fer proves a pacients amb tumors de mama, melanoma, pàncrees, pròstata o ovari per detectar mutacions en els gens BRCA1 i BRCA2.
Abreviatures: PVs, variant patogènica; VUS, variant de significat incert; WT, seqüència BRCA1/2 de tipus salvatge.
Vam centrar selectivament els nostres estudis en cohorts de càncer de mama. Les pacients tenien una edat mitjana de 49 anys (rang 23-89) i eren predominantment dones (n = 376, o 97%).
D'aquests subjectes, 64 (17%) tenien mutacions BRCA1/2 i tots eren dones. Trenta-cinc (9%) tenien PV i 29 (7,5%) tenien VUS. Disset (48,6%) de les 35 variants patogèniques es van produir en BRCA1 i 18 (51,4%) en BRCA2, mentre que 5 VUS es van produir en BRCA1 (17,2%) i 24 (82,8%) en BRCA2 (figures 1 i 2). L'LGR no estava present a l'anàlisi MLPA.
Figura 2. Anàlisi de les mutacions BRCA1 i BRCA2 en 389 pacients amb càncer de mama. (A) Distribució de les variants patogèniques (PV) (vermell), variants de significació incerta (VUS) (taronja) i WT (blau) en 389 pacients amb càncer de mama; (B) 389 pacients amb càncer de mama Trenta-cinc (9%) tenien variants patogèniques (PV) BRCA1/2. D'elles, 17 (48,6%) eren portadores de PV BRCA1 (vermell fosc) i 18 (51,4%) eren portadores de BRCA2 (vermell clar); (C) 29 (7,5%) de 389 subjectes portaven VUS, 5 (17,2%) gens BRCA1 (taronja fosc) i 24 (82,8%) gens BRCA2 (taronja clar).
Abreviatures: PVs, variant patogènica; VUS, variant de significat incert; WT, seqüència BRCA1/2 de tipus salvatge.
A continuació, vam investigar la prevalença dels subtipus moleculars de càncer de mama (CB) en pacients amb vírica de BRCA1/2. La distribució incloïa 2 (5,7%) pacients amb càncer de mama luminal A, 15 (42,9%) pacients amb càncer de mama luminal B, 3 (8,6%) pacients amb càncer de mama luminal B-HER2+, 2 (5,7%) pacients amb càncer de mama trigemina (TNBC) i 13 (37,1%) pacients amb càncer de mama trigemina (TNBC). Entre els pacients BRCA1 positius, 5 (29,4%) tenien càncer de mama luminal B, 2 (11,8%) tenien malaltia HER2+ i 10 (58,8%) tenien càncer de mama trigemina. Els tumors sense mutacions BRCA1 eren luminal A o luminal B-HER2+ (Figura 3). En el subgrup BRCA2 positiu, 10 (55,6%) tumors eren luminal B, 3 (16,7%) eren luminal B-HER2+, 3 (16,7%) pacients amb TNBC i 2 (11,1%) eren luminal A (Figura). 3). No es van trobar tumors HER2+ en aquest grup. Per tant, les mutacions de BRCA1 són prevalents en pacients amb TNBC, mentre que les alteracions de BRCA2 són predominants en individus amb lumen B.
Figura 3 Prevalença de subtipus de càncer de mama en pacients amb variants patogèniques en BRCA1 i BRCA2. Histogrames que mostren la distribució de les variants parasitàries (PV) de BRCA1 (vermell fosc) i BRCA2 (vermell clar) entre els subtipus moleculars de pacients amb càncer de mama. Els números indicats dins de cada quadre representen el percentatge de pacients amb PV de BRCA1 i BRCA2 per a cada subtipus de càncer de mama.
Abreviatures: PV, variant patogènica; HER2+, receptor 2 del factor de creixement epidèrmic humà positiu; TNBC, càncer de mama triple negatiu.
Posteriorment, vam avaluar el tipus i la localització gènica de les variants paraventriculars (PV) de BRCA1 i BRCA2. En les PV de BRCA1, vam observar 7 variants d'un sol nucleòtid (SNV), 6 delecions, 3 duplicacions i 1 inserció. Només una mutació (c.5522delG) representa un nou descobriment. La PV de BRCA1 més comuna detectada en ambdós subjectes va ser c.5035_5039delCTAAT. Aquesta alteració implica una deleció de cinc nucleòtids (CTAAT) a l'exó 15 de BRCA1, cosa que resulta en la substitució de l'aminoàcid leucina per tirosina al codó 1679, i a causa d'un desplaçament del marc de traducció amb un codó d'aturada alternatiu previst condueix a un truncament prematur de la proteïna. Tots els altres canvis es detecten només en un cas. Cal destacar que una de les PV reportades es va localitzar a la regió de consens del lloc d'empalmament (c.4357+1G>T) (Taula 1).
Pel que fa a la variant paraventricular (PV) de BRCA2, vam observar 6 delecions, 6 SNV i 2 duplicacions. Cap dels canvis trobats és nou. Tres mutacions van repetir-se a la nostra població, c.428dup i c.8487+1G>A observades en 3 subjectes, seguides de c.5851_5854delAGTT recuperat en dos casos. L'alteració c.428dup implica una repetició de C a l'exó 5 de BRCA2, que es preveu que codifica una proteïna truncada i no funcional. La mutació c.8487+1G>A es produeix a la regió intrònica de l'intró 19 de BRCA2 (± 1,2) i afecta la seqüència de consens d'empalmament, donant lloc a un splicing alterat que resulta en una proteïna anormal o absent. La variant patogènica c.5851_5854delAGTT es deu a una deleció de 4 nucleòtids de les posicions de nucleòtids 5851 a 5854 a l'exó codificant 10 del gen BRCA2 i resulta en una canvi de marc de lectura traduccional amb un codó d'aturada alternatiu previst (p.S1951WfsTer). Notablement, com s'ha informat anteriorment, es van detectar alteracions c.631G>A i c.7008-2A>T en el mateix pacient.34 La primera mutació implica la substitució de l'adenosina (A) a l'exó 7 de BRCA2 per un nucleòtid que conté guanina (G), cosa que resulta en un canvi de valina a isoleucina al codó 211, l'aminoàcid isoleucina és un aminoàcid amb propietats molt similars. Aquest canvi afecta l'empalmament normal de l'ARNm. La segona variant es troba en una regió intrònica i resulta en una doble substitució d'A a timina (T) abans de l'exó 13 del gen que codifica BRCA2. El canvi c.7008-2A>T pot generar múltiples transcrits de diferents longituds. A més, en el grup de PV de BRCA2, 4 de 18 canvis (22,2%) van ser intrònics.
A continuació, vam cartografiar les mutacions nocives de BRCA1/2 en dominis funcionals i regions d'unió a proteïnes (Fig. 4). En el gen BRCA1, el 50% de les variants paraventriculars (PV) es van localitzar a la regió del clúster de càncer de mama (BCCR), mentre que el 22% de les mutacions es van localitzar a la regió del clúster de càncer d'ovari (OCCR) (Fig. 4A). En les variants paraventriculars de BRCA2, el 35,7% de les variants es van localitzar a la regió BCCR i el 42,8% de les mutacions es van localitzar a l'OCCR (Fig. 4B). A continuació, vam avaluar la ubicació de les PV dins dels dominis proteics BRCA1 i BRCA2. Per a la proteïna BRCA1, vam trobar tres PV als dominis de bucle i coiled coil, i dues mutacions al domini BRCT (Fig. 4A). Per a la proteïna BRCA2, 4 PV es van cartografiar al domini de repetició BRC, mentre que es van detectar 3 canvis intrònics i 3 exònics als dominis d'unió a oligo/oligosacàrids (OB) i tower (T) (Figura 4B).
Figura 4 Representació esquemàtica de les proteïnes BRCA1 i BRCA2 i localització de variants patogèniques. Aquesta figura mostra la distribució de les variants patogèniques BRCA1 (A) i BRCA2 (B) en pacients amb càncer de mama. Les mutacions exòniques es mostren en blau, mentre que les variants intròniques es mostren en taronja. L'alçada de la barra representa el nombre de casos. Es presenten les proteïnes BRCA1 i BRCA2 i els seus dominis funcionals. (A) La proteïna BRCA1 conté un domini en bucle (RING) i una seqüència de localització nuclear (NLS), un domini en espiral, un domini de clúster SQ/TQ (SCD) i un domini C-terminal de BRCA1 (BRCT). (B) La proteïna BRCA2 conté vuit repeticions BRC, un domini d'unió a ADN amb un domini helicoïdal (Helical), tres plecs d'unió a oligonucleòtids/oligosacàrids (OB), un domini de torre (T) i un NLS al costat C. Les àrees anomenades Regió del Clúster de Càncer de Mama (BCCR) i Regió del Clúster de Càncer d'Ovari (OCCR) es mostren a la part inferior. *Representa mutacions que determinar els codons d'aturada.
A continuació, vam investigar les característiques clinicopatològiques del càncer de mama que podrien correlacionar-se amb la presència de vírica (VP) de BRCA1/2. Es disposava d'històries clíniques completes de 181 pacients amb BRCA1/2 negatius (no portadores) i de totes les portadores (n = 35). Hi havia una correlació entre la taxa de proliferació tumoral i el grau.
Vam calcular la distribució de Ki-67 basant-nos en la mediana de la nostra cohort (25%, rang <10-90%). Els subjectes amb Ki-67 <25% es van definir com a "Ki-67 baix", mentre que els individus amb valors ≥ 25% es van considerar "Ki-67 alt". Es van trobar diferències significatives de Ki-67 (p<0,01) entre les no portadores i les portadores de BRCA1 PV (Fig. 5A).
Figura 5 Correlació de Ki-67 amb la distribució de graus en dones amb càncer de mama amb i sense VP de BRCA1 i BRCA2. (A) Diagrama de caixa que mostra els valors mitjans de Ki-67 en 181 pacients amb càncer de mama no portadores versus pacients amb VP de BRCA1 (18) o BRCA2 (17). Els valors de p inferiors a 0,5 es van considerar estadísticament significatius. (B) Histograma que representa l'assignació de pacients amb càncer de mama en grups de grau histològic (G2 i G3) segons l'estat de mutació de BRCA1 i BRCA2 (subjectes de tipus salvatge, portadores de VP de BRCA1 i BRCA2).
Així mateix, vam examinar si el grau tumoral es correlacionava amb la presència de PV BRCA1/2. Com que el BC G1 estava absent a la nostra població, vam dividir els pacients en dos grups (G2 o G3). D'acord amb els resultats de Ki-67, l'anàlisi va revelar una correlació estadísticament significativa entre el grau tumoral i la mutació BRCA1, amb una proporció més alta de tumors G3 en portadors de BRCA1 en comparació amb els no portadors (p <0,005) (Figura 5B).
Els avenços en la tecnologia de seqüenciació d'ADN han permès avenços sense precedents en les proves genètiques de BRCA1/2, amb implicacions crucials per als pacients amb antecedents familiars de càncer. Fins ara, s'han identificat i classificat aproximadament 20.000 variants de BRCA1/2 segons l'American Society of Medical Genetics35 i el sistema ENIGMA.35,36 És ben sabut que l'espectre mutacional de BRCA1/2 varia àmpliament entre les regions geogràfiques.37 Dins d'Itàlia, la taxa de variants parasitaries de BRCA1/2 oscil·lava entre el 8% i el 37%, mostrant una àmplia variabilitat intra-país.38,39 Amb una població de gairebé 5 milions, Sicília és la cinquena regió més gran d'Itàlia pel que fa al nombre d'habitants. Tot i que existeixen dades sobre la distribució de BRCA1/2 a la Sicília occidental, no hi ha proves exhaustives a la part oriental de l'illa.
El nostre estudi és un dels primers informes sobre la incidència de la VP BRCA1/2 en pacients amb càncer de mama a l'est de Sicília.28 Vam centrar la nostra anàlisi en el càncer de mama, ja que aquesta és, amb diferència, la malaltia més comuna a la nostra cohort.
En fer proves a 389 pacients amb càncer de mama, el 9% portaven variants parasitaries (VP) de BRCA1/2, distribuïdes uniformement entre BRCA1 i BRCA2. Aquests resultats són consistents amb els que s'han descrit anteriorment a la població italiana.28 Curiosament, el 3% (13/389) de la nostra cohort eren homes. Aquesta taxa és més alta de l'esperada per al càncer de mama masculí (1% de tots els càncers de mama),40 reflectint la nostra selecció de poblacions basada en el risc de mutació de BRCA1/2. Tanmateix, cap d'aquests homes va desenvolupar una VP de BRCA1/2, per la qual cosa eren candidats a anàlisis moleculars addicionals per descartar la presència de mutacions menys comunes com ara PALB2, RAD51C i D, entre d'altres. Es van recuperar variants de significació incerta en el 7% dels subjectes en què la mutació voluntària (VUS) de BRCA2 era evident. Fins i tot aquest resultat és coherent amb l'evidència preexistent.28,41,42
Quan vam analitzar la distribució dels subtipus moleculars de càncer de mama en dones amb mutacions BRCA1/2, vam confirmar les associacions conegudes entre el càncer de mama trigemina (TNBC) i la PV de BRCA1 (58,8%) i entre el càncer de mama luminal B i la PV de BRCA2 (55,6%).16,43 Els tumors luminals A i HER2+ en portadores de PV de BRCA1 i BRCA2 són consistents amb les dades de la literatura existent.16,43
A continuació, ens centrem en el tipus i la ubicació del PV BRCA1/2. A la nostra cohort, el PV BRCA1 més comú va ser c.5035_5039delCTAAT. Tot i que Incorvaia et al. no van descriure aquesta variant a la seva cohort siciliana, altres autors l'han reportat com una variant germinal de BRCA1.34 Es van trobar diverses variants germinals de BRCA1 a la nostra cohort, com ara c.181T>G, c.514del, c.3253dupA i c.5266dupC, que s'han observat a Sicília.28 D'aquestes, dues mutacions fundadores de BRCA1 (c.181T>G i c.5266dupC) es troben habitualment en jueus asquenazites de l'Europa oriental i central (Polònia, Txeca), eslovena, austríaca, hongaresa, bielorussa i alemanya), 44,45 i, als Estats Units i l'Argentina, recentment es va definir com una "variant germinal recurrent" en pacients italians amb càncer de mama i càncer d'ovari. La variant 34c.514del es va identificar prèviament en 8 pacients amb càncer de mama del nord de Sicília a Palerm i Messina. Curiosament, fins i tot Incorvaia et al. van trobar la variant c.3253dupA en algunes famílies de Catània.28 Les variants víriques de BRCA2 més representatives són c.428dup, c.5851_5854delAGTT i la variant intrònica c.8487+1G>A, que s'han descrit amb més detall28 en un pacient de Palerm amb la variant c.428dup, c.5851_5854delAGTT es va observar en llars del nord-oest de Sicília, principalment a les regions de Trapani i Palerm, mentre que la variant c.5851_5854delAGTT es va observar en llars del nord-oest de Sicília. La variant 8487+1G>A era més comuna en subjectes de Messina, Palerm i Caltanissetta.28 Rebbeck et al. anteriorment s'ha descrit l'alteració c.5851_5854delAGTT a Colòmbia.37 S'ha trobat una altra variant de BRCA2, c.631+1G>A, en pacients amb càncer de mama i ovari de Sicília (Agrigent, Siracusa i Ragusa).28 Cal destacar que hem observat la coexistència de dues variants de BRCA2 (BRCA2 c.631G>A i c.7008-2A>T) en el mateix pacient, que vam assumir que estava segregada en mode cis, tal com s'ha informat anteriorment d'aquesta manera.34,46 Aquestes mutacions variables de BRCA2 s'observen amb freqüència a la regió italiana i s'ha descobert que introdueixen codons d'aturada prematurs, afectant l'empalmament de l'ARN missatger i provocant que la proteïna BRCA2 falli.47,48
També vam cartografiar els virus vírics (PV) de BRCA1 i BRCA2 en regions putatives OCCR i BCCR de dominis proteics i gens. Aquestes regions van ser descrites per Rebbeck et al. com a zones de risc per desenvolupar càncer d'ovari i de mama, respectivament.49 Tanmateix, l'evidència sobre l'associació entre la ubicació de les variants germinals i el risc de càncer de mama o d'ovari continua sent controvertida.28,50-52 A la nostra població, els PV de BRCA1 es van localitzar predominantment a la regió BCCR, mentre que els PV de BRCA2 es van localitzar predominantment a la regió OCCR. Tanmateix, no vam poder trobar cap associació entre les regions putatives OCCR i BCCR i les característiques del BC. Això pot ser degut al nombre limitat de pacients amb mutacions BRCA1/2. Des d'una perspectiva del domini proteic, els PV de BRCA1 es distribueixen al llarg de tota la proteïna i les alteracions de BRCA2 es troben preferentment al domini de repetició BRC.
Finalment, vam correlacionar les característiques clinicopatològiques del càncer de mama amb la varicel·la prognatològica (VP) de BRCA1/2. A causa del nombre limitat de pacients inclosos, només vam trobar una correlació significativa entre el Ki-67 i el grau tumoral. Tot i que l'avaluació i la interpretació del Ki-67 continua sent una mica controvertida, és cert que les taxes proliferatives elevades s'associen amb un major risc de recurrència de la malaltia i una disminució de la supervivència. Fins ara, el llindar per distingir entre el Ki-67 "alt" i el "baix" és del 20%. Tanmateix, aquest llindar no s'aplica a la nostra població de pacients amb mutacions de BRCA1/2, que té un valor mitjà de Ki-67 del 25%. Aquesta tendència en les taxes altes de Ki-67 es pot explicar per la prevalença a les nostres cohorts luminals B i TNBC, de les quals hi havia pocs tumors luminals A. Tanmateix, algunes evidències semblen suggerir que un llindar de Ki-67 més alt (25-30%) pot estratificar millor els pacients segons el seu pronòstic.53,54 A partir dels resultats de la nostra anàlisi, no és sorprenent una correlació significativa. Es produeix entre els graus alts de Ki-67 i la presència de BRCA1 PV. De fet, els tumors relacionats amb BRCA1 són típics del TNBC i presenten característiques més agressives.16,17
En conclusió, aquest estudi proporciona un informe sobre l'estat mutacional de BRCA1/2 en una cohort de càncer de mama de l'est de Sicília. En general, els nostres resultats són consistents amb l'evidència preexistent, tant pel que fa a la prevalença de mutacions com a les característiques clinicopatològiques del càncer de mama. Es justifiquen més estudis en poblacions més grans de pacients amb càncer de mama amb mutació BRCA1/2, com ara l'ús d'anàlisi mutacional expandida multigenoma, per avaluar la presència de PV que siguin diferents i menys freqüents que BRCA1/2. Això permetrà la identificació i el maneig adequat del nombre creixent de subjectes amb un major risc de càncer a causa de mutacions genètiques.
Vam confirmar que els pacients van signar el seu consentiment informat per alliberar les seves mostres tumorals de manera anònima amb finalitats de recerca. Tots els pacients van signar el seu consentiment informat per escrit d'acord amb la Declaració de Hèlsinki. D'acord amb la política de l'AOU Policlinico "G. Rodolico - S. Marco", aquest estudi va estar exempt de revisió ètica perquè l'anàlisi BRCA1/2 es va realitzar d'acord amb la pràctica clínica i tots els pacients van donar el seu consentiment informat per escrit. Els pacients també consenten l'ús de les seves dades amb finalitats de recerca.
Agraïm al professor Paolo Vigneri la seva ajuda en l'atenció de pacients amb càncer de mama, tal com va sol·licitar el Comitè d'Ètica.
Federica Martorana rep honoraris de l'Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis i Pfizer. Els altres autors declaren que no tenen conflictes d'interès en aquest treball.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Estadístiques mundials del càncer 2020: GLOBOCAN estima la incidència i la mortalitat de 36 càncers en 185 països d'arreu del món. CA Cancer J Clin. 2021; 71 (3): 209-249. doi: 10.3322 / caac.21660