Қазіргі уақытта сіздің браузеріңізде Javascript өшірілген. Бұл веб-сайттың кейбір мүмкіндіктері JavaScript өшірілген кезде жұмыс істемейді.
Өзіңіздің нақты деректеріңіз бен қызығушылық танытқан нақты дәрі-дәрмекпен тіркеліңіз, сонда біз сіз берген ақпаратты кең дерекқорымыздағы мақалалармен сәйкестендіреміз және сізге PDF көшірмесін дереу электрондық пошта арқылы жібереміз.
Стелла С, Витале СР, Марторана Ф, Массимино М, Павоне Д, Ланзафаме К, Бианка С, Барон С, Горгоне С, Фичера М, Манзелла Л.
Стефания Стелла, 1,2 Сильвия Рита Витале, 1,2 Федерика Марторана, 1,2 Мишель Массимино, 1,2 Джулиана Павоне, 3 Катя Ланзафаме, 3 Себастьяно Бианка, 4 Чиара Бароне, 5 Кристина Горгоне, 6 Марко Фичера Лицелина және Эксперименттік медицина, Катания университеті, Катания, 95123, Италия;2 Эксперименттік онкология және гематология орталығы, AOU Policlinico «G.Rodolico – San Marco», Катания, 95123, Италия; 3 Медициналық онкология, AOU Policlinico «G. Rodolico – San Marco», Катания, 95123, Италия; 4 Медициналық генетика, ARNAS Garibaldi, Катания, 95123, Италия; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Италия; 6 Биомедициналық және биотехнология ғылымдары кафедрасы, Катания университеті, Медициналық генетика, Катания, Италия, 95123; 7Oasi зерттеу институты-IRCCS, Тройна, 94018, Италия Байланыс: Стефания Стелла, тел +39 095 378 1946, электрондық пошта [email protected]; [email protected] Мақсаты: BRCA1 және BRCA2 геніндегі мутациялар және сүт безі обырының (СБР), аналық без обырының (СБР) және басқа да қатерлі ісіктердің өмір бойы қатерлі ісік ауруының қаупімен байланысты анықталған мутациялар. BRCA генін тексеру жеке қауіпті бағалау үшін, сондай-ақ сау тасымалдаушыларда алдын алу әдістерін табу және қатерлі ісікпен ауыратын науқастарда емдеуді бейімдеу үшін маңызды. BRCA1 және BRCA2 өзгерістерінің таралуы географиялық аймақтарда кеңінен өзгереді және Сицилия отбасыларындағы BRCA патогендік нұсқалары туралы деректер болғанымен, шығыс Сицилиядағы популяцияларға бағытталған зерттеулер жеткіліксіз. Біздің зерттеуіміздің мақсаты шығыс Сицилиядан келген СБР науқастарының когортасында BRCA патогендік жыныс жолдарының өзгерістерінің жиілігі мен таралуын зерттеу және келесі буын секвенирлеуін қолдана отырып, олардың СБР-ның нақты белгілерімен байланысын бағалау болды. Өзгерістердің болуы ісік дәрежесімен және пролиферация индексімен корреляцияланған. НӘТИЖЕЛЕР: Жалпы алғанда, 35 науқаста (9%) BRCA патогендік нұсқасы болды, 17-сінде (49%) BRCA1 және 18-інде (51%) BRCA2 болды. BRCA1 өзгерістері үштік теріс нәтижелерде кең таралған. СБ науқастарында, ал BRCA2 мутациялары люминальды СБ науқастарында жиі кездеседі. Тасымалдаушы емес адамдармен салыстырғанда, BRCA1 нұсқалары бар субъектілерде ісік дәрежесі және пролиферативті индекс айтарлықтай жоғары болды. Қорытынды: Біздің зерттеу нәтижелеріміз шығыс Сицилиядан келген СБ науқастарындағы BRCA мутациялық мәртебесіне шолу жасайды және тұқым қуалайтын СБ бар науқастарды анықтаудағы NGS талдауының рөлін растайды. Жалпы алғанда, бұл деректер мутация тасымалдаушыларында қатерлі ісіктің дұрыс алдын алу және емдеу үшін BRCA скринингін қолдайтын бұрынғы дәлелдерге сәйкес келеді.
Сүт безі қатерлі ісігі (СҚ) әлемдегі ең көп таралған қатерлі ісік және әйелдердегі ең өлімге әкелетін қатерлі ісік болып табылады.1 СҚ болжамын және клиникалық мінез-құлықты анықтайтын биологиялық ерекшеліктер уақыт өте келе кеңінен зерттелді және ішінара анықталды. Шын мәнінде, қазіргі уақытта СҚ-ны әртүрлі молекулалық кіші түрлерге жіктеу үшін бірнеше суррогат маркерлер қолданылады. Олар эстроген (ЭР) және/немесе прогестерон рецепторы (ПГР), адам эпидермальды өсу факторы рецепторы 2 (HER2) күшейтуі, пролиферация индексі Ki-67 және ісік дәрежесі (G).2 Осы айнымалылардың тіркесімі келесі СҚ санаттарын анықтады: 1) ЭР және/немесе ПГР экспрессиясын көрсететін люминальды ісіктер СҚ-ның 75%-ын құрады. Бұл ісіктер пролиферация индексіне қарамастан, Ki-67 20%-дан төмен және HER2 теріс болған кездегі А люминальды және пролиферация индексіне қарамастан, Ki-67 20%-ға тең немесе одан жоғары болған кездегі және HER2 күшейтілген кездегі В люминальды болып бөлінді; 2) ER және PgR теріс, бірақ HER2 амплификациясын көрсететін HER2+ ісіктері. Бұл топ барлық сүт безі ісіктерінің 10%-ын құрайды; 3) ER және PgR экспрессиясын және HER2 амплификациясын көрсетпейтін үштік теріс сүт безі қатерлі ісігі (TNBC) сүт безі қатерлі ісігінің шамамен 15%-ын құрайды.2-4
Осы СБИ кіші түрлерінің ішінде ісік дәрежесі және пролиферация индексі ісіктің агрессивтілігі мен болжамымен тікелей және тәуелсіз байланысты көлденең қима биомаркерлерін білдіреді.5,6
Жоғарыда аталған биологиялық ерекшеліктерден басқа, соңғы бірнеше жылда СБИ дамуына әкелетін тұқым қуалайтын генетикалық өзгерістердің рөлі барған сайын маңызды бола бастады.7 Сүт безі ісіктерінің шамамен 10-ы белгілі бір гендердегі жыныс жасушаларының өзгеруіне байланысты тұқым қуалайды.8 180 000-нан астам әйел қатысқан екі ірі эпидемиологиялық зерттеу жақында тұқым қуалайтын СБИ үшін негізінен жауапты сегіз ген тобын (яғни, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C және RAD51D) анықтады. Осы гендердің ішінде BRCA1 және BRCA2 (бұдан әрі BRCA1/2 деп аталады) сүт безі ісіктерінің дамуымен ең күшті корреляцияны көрсетті.9-12 Шын мәнінде, BRCA1/2 жыныс жасушаларының мутациялары СБИ-нің, сондай-ақ аналық без, қуық асты безі, ұйқы безі, тоқ ішек және меланома сияқты басқа да қатерлі ісіктердің өмірлік қаупін айтарлықтай арттырады. 13 жастан 80 жасқа дейін BRCA1 патогенді нұсқасы (PV) бар әйелдерде СБИ-нің жинақталған жиілігі 72% құрайды және BRCA2 PV.14 бар әйелдерде 69%
Айта кету керек, жақында жарияланған бір басылымда БЦ қаупі ПВ түріне байланысты екені айтылған. Шын мәнінде, патогенді қысқартатын нұсқалармен салыстырғанда, әсіресе BRCA1 геніндегі айқын миссенс нұсқалары, әсіресе егде жастағы әйелдерде БЦ қаупінің төмендеуімен байланысты.15
BRCA1 немесе BRCA2 PV болуы әртүрлі биологиялық және клиникалық-патологиялық ерекшеліктермен байланысты болды.16,17 BRCA1-мен байланысты БК клиникалық тұрғыдан агрессивті, нашар дифференциалданған және жоғары пролиферацияға бейім. Бұл ісіктер әдетте үш есе теріс және ерте жаста пайда болады. BRCA2-мутацияланған науқастарда пайда болатын ісіктер әдетте орташадан жақсы дифференциалданған дәрежелерге және өзгермелі пролиферациялық индекстерге ие. Бұл ісіктер В люменінде жиі кездеседі және әдетте егде жастағы ересектерде кездеседі.16-18 Айта кету керек, BRCA1 және BRCA2 мутациялары платина тұздары мен поли(ADP-рибоза) полимераза ингибиторлары (PARPi) сияқты мақсатты препараттарды қоса алғанда, нақты емдеу әдістеріне сезімталдықты арттырады.19,20
Соңғы бірнеше жылда клиникалық тәжірибеде келесі буын секвенирлеуін (NGS) енгізу БС науқастарының санының артуына BRCA1/2 қоса алғанда, қатерлі ісікке бейімділік синдромдарын анықтауға молекулалық тестілеуден өтуге мүмкіндік берді.21 Сонымен қатар, отбасылық тарихқа, демографиялық және клиникалық-патологиялық сипаттамаларға қатысты нақты критерийлерге негізделген анықтамалар BRCA1/2 тестілеуіне лайықты адамдарды жақсырақ анықтауға мүмкіндік береді.22,23 Осыған байланысты, белгілі бір популяцияларда BRCA1/2 скринингі бойынша дәлелдер жинақталуда, бұл географиялық аймақтардағы айырмашылықтарды көрсетеді.24–27 Батыс Сицилиядағы БС когортасы туралы есептер болғанымен, шығыс Сицилия популяциясындағы BRCA1/2 скринингі бойынша деректер аз.28,29
Біз мұнда шығыс Сицилиядан келген БК науқастарында BRCA1/2 ұрық жасушаларын скринингтеу нәтижелерін сипаттаймыз, бұл BRCA1 немесе BRCA2 мутацияларының болуын осы ісіктердің негізгі клиникалық-патологиялық ерекшеліктерімен одан әрі байланыстырады.
Катаниядағы Родолико – Сан-Марко қаласындағы Поликлинико ауруханасының «Эксперименттік онкология және гематология орталығында» ретроспективті зерттеу жүргізілді. 2017 жылдың қаңтарынан 2021 жылдың наурызына дейін сүт безі және аналық без, меланома, ұйқы безі немесе қуық асты безі қатерлі ісігімен ауыратын 455 науқас BRCA/2 генетикалық тестілеуіне біздің молекулалық диагностикалық зертханаға жіберілді. Бұл зерттеу Хельсинки декларациясына сәйкес жүргізілді және барлық қатысушылар молекулалық талдау алдында жазбаша түрде хабардар етілген келісім берді.
БК гистологиялық және биологиялық сипаттамалары (ER, PgR, HER2 мәртебесі, Ki-67 және дәрежесі) тек агрессивті ісік компоненттерін ескере отырып, негізгі биопсияда немесе хирургиялық үлгілерде бағаланды. Осы сипаттамаларға сүйене отырып, БК келесідей жіктелді: люминальды А (ER+ және/немесе PgR+, HER2-, Ki-67<20%), люминальды В (ER+ және/немесе PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), люминальды B-HER2+ (ER және/немесе PgR+, HER2+), HER2+ (ER және PgR-, HER2+) немесе үш есе теріс (ER және PgR-, HER2-).
BRCA1 және BRCA2 мутациясының мәртебесін бағалау алдында онколог, генетик және психологтан тұратын көп салалы топ әрбір пациентке BRCA1 және/немесе BRCA1 немесе BRCA2 генінде ПВ қаупі жоғары адамдар бар-жоғын анықтау үшін ісік генетикасы бойынша кеңес жүргізді. Пациенттерді іріктеу Италия медициналық онкология қоғамының (AIOM) нұсқауларына және жергілікті сицилиялық ұсыныстарға сәйкес жүргізілді.30,31 Бұл критерийлерге мыналар жатады: (i) сезімталдық гендеріндегі белгілі патогендік нұсқалардың отбасылық тарихы (мысалы, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) БЦ бар ер адамдар; (iii) БЦ және ОК барлар; (iv) БЦ <36 жас, TNBC <60 жас немесе екі жақты БЦ <50 жас әйелдер; (v) БЦ <50 жас және кем дегенде бір бірінші дәрежелі туысының жеке медициналық тарихы: (a) БЦ <50 жас; (b) кез келген жастағы муцинді емес және шекаралық емес ОК; (c) екі жақты БЦ; (d) ер адамның СБР-і; (e) ұйқы безі обыры; (f) қуық асты безі обыры; (vi) екі немесе одан да көп жеке СБР тарихы > 50 жыл және бір-біріне бірінші дәрежелі туыстары бар туыстары үшін СБР, ОК немесе ұйқы безі обырының отбасылық тарихы (оның ішінде бірінші дәрежелі туыстары бар туыстары); (vii) ОК-нің жеке тарихы және кем дегенде бір бірінші дәрежелі туысы: (a) СБР <50 жыл; (b) ҰОК; (c) екі жақты СБР; (d) ер адамның СБР; (vii) жоғары дәрежелі серозды ОК бар әйел.
Әрбір пациенттен 20 мл шеткергі қан үлгісі алынып, ЭДТА түтікшелеріне (BD Biosciences) жиналды. Геномдық ДНҚ өндірушінің нұсқауларына сәйкес QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Хильден, Италия) көмегімен 0,7 мл толық қан үлгілерінен бөлініп алынды және Qubit® 3.0 флуорометрінен (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, АҚШ) өткізілді. Сандық анықтауды орындаңыз. Нысананы байыту және кітапхананы дайындау Oncomine™ BRCA Research Assay Chef арқылы жүзеге асырылады, ол өндірушінің нұсқауларына сәйкес кітапхананы автоматтандырылған түрде дайындау үшін Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 жинағына салынуға дайын. Жиынтық барлық BRCA1 (NM_007300.3) және BRCA2 (NM_000059.3) гендерін зерттеу үшін пайдаланылуы мүмкін екі мультиплексті ПТР праймер пулынан тұрады. Қысқаша айтқанда, әрбір сұйылтылған үлгі ДНҚ-ның 15 мкл (10 нг) кітапхана дайындау үшін штрих-кодталған пластиналарға қосылды және барлық реагенттер мен шығын материалдары Ion Chef™ құралына салынды. Содан кейін Ion Chef™ құралында кітапхананы автоматтандырылған түрде дайындау және штрих-кодталған үлгі кітапханасын біріктіру орындалды. Дайындалған кітапханалар саны өндірушінің нұсқауларына сәйкес Qubit® 3.0 флуорометрімен (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, АҚШ) бағаланды. Соңында, кітапханалар Ion Chef™ кітапхана үлгі түтіктерінде эквимолярлық қатынастарда біріктіріледі. (штрих-кодталған түтіктер) және Ion Chef™ құралына жүктелді. Реттік реттеу Ion 510 чипін (Thermo Fisher Scientific) пайдаланып Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) құралын (Thermo Fisher Scientific) пайдаланып орындалды. Деректерді талдау Amplicon Suite (SmartSeq srl) және Ion Reporter Software бағдарламалары арқылы жүргізілді.
Барлық нұсқа номенклатурасы онлайн режимінде қолжетімді Адам геномының вариациялық консорциумының ағымдағы нұсқауларына сәйкес келді (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). BRCA1/2 нұсқаларының клиникалық маңыздылығы ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) халықаралық консорциумының жіктелуін және ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD және UMD сияқты әртүрлі дерекқорларды пайдалану арқылы анықталды. Жіктелуге бес түрлі қауіп санаты кіреді: қатерсіз (I санат), ықтимал қатерсіз (II санат), белгісіз маңыздылықтағы нұсқа (VUS, III санат), ықтимал патогенді (IV санат) және патогенді (V санат). VarSome сонымен қатар 30 дерекқорға қол жеткізе алатын ақпараттық құрал болып табылатын ақуыз құрылымы мен қызметіне мутациялардың әсерін талдады.32
Әрбір VUS-қа ықтимал клиникалық маңыздылықты тағайындау үшін келесі есептеу ақуызын болжау алгоритмдері қолданылды: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) және Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). 1 және 2 класқа жатқызылған нұсқалар жабайы тип болып саналды.
Сэнгер секвенирлеуі әрбір патогенді нұсқаның бар екенін растады. Қысқаша айтқанда, әрбір анықталған нұсқа үшін BRCA1 және BRCA2 генінің анықтамалық тізбектерін (сәйкесінше NG_005905.2, NM_007294.3 және NG_012772.3, NM_000059.3) пайдалану арқылы арнайы праймерлердің жұбы жасалды. Сондықтан, нысаналы ПТР, содан кейін Сэнгер секвенирлеуі жүргізілді.
BRCA1/2 геніне теріс нәтиже берген пациенттер өндірушінің нұсқауларына сәйкес үлкен геномдық қайта құрылымдардың (LGR) болуын бағалау үшін мультиплексті лигацияға тәуелді зондты күшейту (MLPA) арқылы тексерілді. Қысқаша айтқанда, ДНҚ үлгілері денатурацияланады және әрқайсысы шамамен 60 нуклеотидтің ұзындығындағы белгілі бір ДНҚ тізбегін анықтайтын 60 BRCA1 және BRCA2 геніне тән зондтар қолданылады. ПТР ампликондарының бірегей жиынтығынан тұратын зондты күшейту өнімдері капиллярлық электрофорез және Cofalyser.Net бағдарламалық жасақтамасы арқылы тиісті партияға тән Cofalyser кестелерімен бірге талданды (www.mrcholland.com).
Таңдалған клиникалық-патологиялық айнымалылар (гистологиялық дәреже және Ki-67% пролиферация индексі) BRCA1/2 PV болуымен байланысты болды, бұл Prism бағдарламалық жасақтамасының v. 8.4 нұсқасын пайдаланып, p-мәні <0.05 маңызды деп есептеп, Фишердің дәл сынағын пайдаланып есептелді.
2017 жылдың қаңтары мен 2021 жылдың наурызы аралығында 455 пациент BRCA1/2 жыныс мутацияларына тексерілді. Мутациялық тестілеу Поликлинико ауруханасының Эксперименттік онкология және гематология орталығында жүргізілді. Сицилия нұсқаулығына сәйкес (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 қаңтар 2020), Катания Родоликосы – Сан-Маркода жалпы 389 пациент болды. Сүт безі қатерлі ісігі, 37 аналық без қатерлі ісігі, 16 ұйқы безі қатерлі ісігі, 8 қуық асты безі қатерлі ісігі және 5 меланома болды. Қатерлі ісік түрі мен талдау нәтижелері бойынша науқастардың таралуы 1-суретте көрсетілген.
1-суретте зерттеуге шолуды көрсететін блок-схема көрсетілген. Сүт безі, меланома, ұйқы безі, қуық асты безі немесе аналық без ісіктері бар науқастар BRCA1 және BRCA2 гендеріндегі мутацияларға тексерілді.
Қысқартулар: PV, патогенді нұсқа; VUS, белгісіз маңызды нұсқа; WT, жабайы типті BRCA1/2 тізбегі.
Біз зерттеулерімізді сүт безі қатерлі ісігі когорталарына іріктеп бағыттадық. Пациенттердің орташа жасы 49 жасты құрады (диапазоны 23-89) және олардың басым бөлігі әйелдер болды (n=376 немесе 97%).
Осы субъектілердің 64-інде (17%) BRCA1/2 мутациялары болды және олардың барлығы әйелдер болды. Отыз бесінде (9%) PV, ал 29-ында (7,5%) VUS болды. 35 патогенді нұсқаның он жетісінде (48,6%) BRCA1-де және 18-інде (51,4%) BRCA2-де, ал 5 VUS BRCA1-де (17,2%) және 24-інде (82,8%) BRCA2-де пайда болды (1 және 2-суреттер). LGR MLPA талдауында болған жоқ.
2-сурет. 389 сүт безі қатерлі ісігімен ауыратын науқастағы BRCA1 және BRCA2 мутацияларын талдау.(A) 389 сүт безі қатерлі ісігімен ауыратын науқастағы патогендік нұсқалардың (PV) (қызыл), белгісіз маңызды нұсқалардың (VUS) (қызғылт сары) және WT (көк) таралуы; (B) 389 сүт безі қатерлі ісігімен ауыратын науқас Отыз бесінде (9%) BRCA1/2 патогендік нұсқалары (PV) болды. Олардың ішінде 17-сі (48,6%) BRCA1 PV тасымалдаушылары (қою қызыл) және 18-і (51,4%) BRCA2 тасымалдаушылары (ашық қызыл) болды; (C) 389 субъектінің 29-ы (7,5%) VUS, 5-і (17,2%) BRCA1 гені (қою қызғылт сары) және 24-і (82,8%) BRCA2 гені (ашық қызғылт сары) болды.
Қысқартулар: PV, патогенді нұсқа; VUS, белгісіз маңызды нұсқа; WT, жабайы типті BRCA1/2 тізбегі.
Келесіде біз BRCA1/2 PV бар науқастарда BC молекулалық кіші түрлерінің таралуын зерттедік. Таралуына 2 (5,7%) люминальды A, 15 (42,9%) люминальды B, 3 (8,6%) люминальды B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ және 13 (37,1%) TNBC бар науқастар кірді. BRCA1-позитивті науқастардың ішінде 5 (29,4%) люминальды B BC, 2 (11,8%) HER2+ ауруы және 10 (58,8%) TNBC болды. BRCA1 мутациясы жоқ ісіктер люминальды A немесе люминальды B-HER2+ болды (3-сурет). BRCA2-позитивті кіші топта 10 (55,6%) ісік люминальды B, 3 (16,7%) люминальды B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC және 2 (11,1%) болды. люмен А (3-сурет). Бұл топта HER2+ ісіктері болған жоқ. Осылайша, BRCA1 мутациялары TNBC пациенттерінде кең таралған, ал BRCA2 өзгерістері В люмені бар адамдарда басым.
3-сурет. BRCA1 және BRCA2 патогенді нұсқалары бар науқастарда сүт безі қатерлі ісігінің кіші түрлерінің таралуы. Сүт безі қатерлі ісігімен ауыратын науқастардың молекулалық кіші түрлері арасында BRCA1- (қою қызыл) және BRCA2- (ашық қызыл) ПВ таралуын көрсететін гистограммалар. Әр қорапта көрсетілген сандар сүт безі қатерлі ісігінің әрбір кіші түрі үшін BRCA1 және BRCA2 ПВ бар науқастардың пайызын білдіреді.
Қысқартулар: PV, патогенді нұсқа; HER2+, адам эпидермальды өсу факторының 2 рецепторы оң; TNBC, үш есе теріс сүт безі қатерлі ісігі.
Кейіннен біз BRCA1 және BRCA2 PV түрлерінің түрі мен гендік локализациясын бағаладық. BRCA1 PV-де біз 7 бір нуклеотидті нұсқаны (SNV), 6 делецияны, 3 дупликацияны және 1 инсерцияны байқадық. Тек бір мутация (c.5522delG) жаңа жаңалықты білдіреді. Екі субъектіде де анықталған ең көп таралған BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT болды. Бұл өзгеріс BRCA1 экзон 15-те бес нуклеотидтің (CTAAT) делециясын қамтиды, нәтижесінде 1679 кодонында аминқышқылы лейцинінің тирозинмен алмасуы орын алады және болжамды балама тоқтату кодоны бар трансляциялық кадрдың жылжуы ақуыздың мерзімінен бұрын қысқаруына әкеледі. Барлық басқа өзгерістер тек бір жағдайда анықталады. Айта кету керек, хабарланған PV-лардың бірі сплайс сайтының консенсус аймағында орналасқан (c.4357+1G>T) (1-кесте).
BRCA2 PV-ға қатысты біз 6 делецияны, 6 SNV және 2 дупликацияны байқадық. Табылған өзгерістердің ешқайсысы жаңа емес. Біздің популяциямызда үш мутация қайталанды, 3 субъектіде c.428dup және c.8487+1G>A байқалды, содан кейін екі жағдайда алынған c.5851_5854delAGTT. c.428dup өзгерісі BRCA2 5-экзонында C-ның қайталануын қамтиды, ол қысқартылған, функционалды емес ақуызды кодтайды деп болжанады. c.8487+1G>A мутациясы BRCA2 интронының 19 интрондық аймағында (± 1,2) пайда болады және сплайсинг консенсус тізбегіне әсер етеді, нәтижесінде сплайсинг өзгереді, нәтижесінде ақуыз қалыптан тыс немесе жоқ болады. c.5851_5854delAGTT патогенді нұсқасы BRCA2 кодтайтын 10 экзонындағы 5851-ден 5854-ке дейінгі нуклеотидтік позициялардан 4-нуклеотидті делецияға байланысты. гені және болжамды баламалы тоқтату кодоны (p.S1951WfsTer) бар трансляциялық кадр ығысуына әкеледі. Бұрын хабарланғандай, c.631G>A және c.7008-2A>T өзгерістері бір науқаста анықталды.34 Бірінші мутация BRCA2 экзонының 7-сіндегі аденозиннің (A) нуклеотиді бар гуанинмен (G) алмасуын қамтиды, бұл 211 кодонында валиннің изолейцинге өзгеруіне әкеледі, изолейцин Аминқышқылы - өте ұқсас қасиеттері бар аминқышқылы. Бұл өзгеріс қалыпты мРНҚ сплайсингіне әсер етеді. Екінші нұсқа интрондық аймақта орналасқан және BRCA2 кодтайтын геннің 13-экзонының алдында қос А-ның тиминге (T) алмасуына әкеледі. c.7008-2A>T өзгерісі әртүрлі ұзындықтағы бірнеше транскрипттерді тудыруы мүмкін. Сонымен қатар, BRCA2 PV тобында 18 өзгерістің 4-і (22,2%) интрондық болды.
Содан кейін біз функционалдық домендерде және ақуызбен байланысатын аймақтарда BRCA1/2 зиянды мутацияларын картаға түсірдік (4-сурет). BRCA1 генінде PV-лардың 50%-ы сүт безі қатерлі ісігінің кластерлік аймағында (BCCR), ал мутациялардың 22%-ы аналық без қатерлі ісігінің кластерлік аймағында (OCCR) орналасқан (4A-сурет). BRCA2 PV-да нұсқалардың 35,7%-ы BCCR аймағында және мутациялардың 42,8%-ы OCCR-да орналасқан (4B-сурет). Әрі қарай, біз PV-ның BRCA1 және BRCA2 ақуыз домендеріндегі орнын бағаладық. BRCA1 ақуызы үшін біз ілмек және орама катушка домендерінде үш PV және BRCT доменінде екі мутация таптық (4A-сурет). BRCA2 ақуызы үшін BRC қайталау доменіне 4 PV картаға түсірілді, ал 3 интрондық және 3 экзондық өзгерістер анықталды. олиго/олигосахаридпен байланысатын (OB) және мұнара (T) домендер (4B сурет).
4-сурет. BRCA1 және BRCA2 ақуыздарының схемалық көрінісі және патогендік нұсқалардың локализациясы. Бұл суретте сүт безі қатерлі ісігімен ауыратын науқастарда BRCA1 (A) және BRCA2 (B) патогендік нұсқаларының таралуы көрсетілген. Экзоникалық мутациялар көк түспен, ал интрондық нұсқалар қызғылт сары түспен көрсетілген. Жолақ биіктігі жағдайлар санын білдіреді. BRCA1 және BRCA2 ақуыздары және олардың функционалдық домендері көрсетілген.(A) BRCA1 ақуызында циклдік домен (RING) және ядролық локализация тізбегі (NLS), шиыршықталған шиыршық домені, SQ/TQ кластерлік домені (SCD) және BRCA1 C-терминалдық домені (BRCT) бар.(B) BRCA2 ақуызында сегіз BRC қайталануы, спиральды домені бар ДНҚ-байланыстырушы домен (спиральды), үш олигонуклеотид/олигосахарид-байланыстырушы (OB) қатпарлары, мұнара домені (T) және С жағында NLS бар. Сүт безі қатерлі ісігі кластерінің аймағы (BCCR) және аналық без қатерлі ісігі кластері деп аталатын аймақтар. Аймақ (OCCR) төменгі жағында көрсетілген.* Тоқтату кодондарын анықтайтын мутацияларды білдіреді.
Содан кейін біз BRCA1/2 PV болуымен өзара байланысты болуы мүмкін б.з. клиникалық-патологиялық ерекшеліктерін зерттедік. BRCA1/2-теріс 181 пациент (тасымалдаушы емес) және барлық тасымалдаушылар (n = 35) үшін толық клиникалық жазбалар қолжетімді болды. Ісіктің көбею жылдамдығы мен дәрежесі арасында өзара байланыс болды.
Біз Ki-67 таралуын когортамыздың медианасына сүйене отырып есептедік (25%, диапазоны <10-90%). Ki-67 < 25% болатын субъектілер «төмен Ki-67» деп анықталды, ал мәні ≥ 25% болатын адамдар «жоғары Ki-67» деп саналды. Тасымалдаушы еместер мен BRCA1 PV тасымалдаушылары арасында Ki-67-нің айтарлықтай айырмашылықтары (p<0,01) анықталды (5A сурет).
5-сурет. BRCA1 және BRCA2 PV бар және жоқ сүт безі қатерлі ісігі бар әйелдердегі Ki-67 деңгейінің таралуымен корреляциясы.(A) 181 БК тасымалдаушысы емес науқастардағы Ki-67 орташа мәндерін BRCA1 (18) немесе BRCA2 (17) PV науқастарымен салыстырғанда көрсететін қорап сызбасы. 0,5-тен төмен P мәндері статистикалық тұрғыдан маңызды деп саналды.(B) БК қатерлі ісігі бар науқастарды BRCA1 және BRCA2 мутация мәртебесіне сәйкес гистологиялық дәрежелі топтарға (G2 және G3) бөлуді білдіретін гистограмма (WT субъектілері, BRCA1 және BRCA2 PV тасымалдаушылары).
Сол сияқты, біз ісік дәрежесінің BRCA1/2 PV болуымен корреляцияланғанын зерттедік. Біздің популяцияда G1 BC болмағандықтан, біз пациенттерді екі топқа бөлдік (G2 немесе G3). Ki-67 нәтижелеріне сәйкес, талдау ісік дәрежесі мен BRCA1 мутациясы арасында статистикалық тұрғыдан маңызды корреляцияны анықтады, BRCA1 тасымалдаушыларында тасымалдаушы еместермен салыстырғанда G3 ісіктерінің үлесі жоғары болды (p<0,005) (5B сурет).
ДНҚ секвенирлеу технологиясындағы жетістіктер BRCA1/2 генетикалық тестілеуінде бұрын-соңды болмаған жетістіктерге қол жеткізуге мүмкіндік берді, бұл қатерлі ісік ауруының отбасылық тарихы бар науқастар үшін маңызды салдарға әкеп соқтырады. Бүгінгі күнге дейін Америка медициналық генетика қоғамының 35 және ENIGMA жүйесіне сәйкес шамамен 20 000 BRCA1/2 нұсқалары анықталып, жіктелді.35,36 BRCA1/2 мутациялық спектрі географиялық аймақтарда кеңінен өзгеретіні белгілі.37 Италияда BRCA1/2 PV деңгейінің 8%-дан 37%-ға дейін ауытқуы ел ішіндегі кең өзгергіштікті көрсетеді.38,39 Халқы шамамен 5 миллионға жететін Сицилия тұрғындар саны бойынша Италиядағы бесінші ірі аймақ болып табылады. Батыс Сицилияда BRCA1/2 таралуы туралы деректер болғанымен, аралдың шығыс бөлігінде кең дәлел жоқ.
Біздің зерттеуіміз шығыс Сицилиядағы БК науқастарында BRCA1/2 PV ауруының жиілігі туралы алғашқы есептердің бірі болып табылады.28 Біз талдауымызды БК-ға бағыттадық, себебі бұл біздің когортамыздағы ең көп таралған ауру.
389 б.з.б. науқастарын тексеру кезінде, 9%-ында BRCA1/2 PV болды, олар BRCA1 және BRCA2 арасында біркелкі бөлінді. Бұл нәтижелер бұрын итальяндық популяцияда хабарланған нәтижелерге сәйкес келеді.28 Қызығы, біздің когортамыздың 3%-ы (13/389) ер адамдар болды. Бұл көрсеткіш ерлердің сүт безі қатерлі ісігі үшін күтілгеннен жоғары (барлық Б.з.б. 1%),40 бұл BRCA1/2 мутация қаупіне негізделген популяцияларды таңдауымызды көрсетеді. Дегенмен, бұл ерлердің ешқайсысында BRCA1/2 PV пайда болған жоқ, сондықтан олар PALB2, RAD51C және D сияқты сирек кездесетін мутациялардың болуын жоққа шығару үшін молекулалық талдауға үміткерлер болды. BRCA2 VUS айқын болған субъектілердің 7%-ында белгісіз маңыздылықтағы нұсқалар алынды. Тіпті бұл нәтиже бұрыннан бар дәлелдерге сәйкес келеді.28,41,42
BRCA1/2 мутант әйелдеріндегі BC молекулалық кіші типтерінің таралуын талдаған кезде, біз TNBC және BRCA1 PV (58,8%) және люминальды B BC және BRCA2 PV (55,6%) арасындағы белгілі байланыстарды растадық.16,43 BRCA1 және BRCA2 PV тасымалдаушыларындағы люминальды A және HER2+ ісіктері қолданыстағы әдебиет деректеріне сәйкес келеді.16,43
Содан кейін біз BRCA1/2 PV түрі мен орналасқан жеріне назар аударамыз. Біздің когортамызда ең көп таралған BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT болды. Дегенмен, Incorvaia және т.б. бұл нұсқаны өздерінің Сицилия когортасында сипаттамаған, басқа авторлар оны BRCA1 PV жыныс мүшесі ретінде хабарлаған.34 Біздің когортада бірнеше BRCA1 PV табылды - мысалы, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA және c.5266dupC - олар Сицилияда байқалды.28 Олардың ішінде екі BRCA1 негізін қалаушы мутациясы (c.181T>G және c.5266dupC) Шығыс және Орталық Еуропаның (Польша, Чехия), Словения, Австрия, Венгрия, Беларусь және Германия) ашкенази еврейлерінде жиі кездеседі, 44,45 және Америка Құрама Штаттары мен Аргентинада жақында БЦ және ОК бар итальяндық науқастарда «қайталанатын жыныс мүшесінің нұсқасы» ретінде анықталды. 34c.514del нұсқасы бұрын Сицилияның солтүстігінен келген Палермо мен Мессинадағы сүт безі қатерлі ісігімен ауыратын 8 науқаста анықталған. Қызығы, тіпті Инкорвая және т.б. Катаниядағы кейбір тұқымдастарда c.3253dupA нұсқасын тапты.28 BRCA2 PV-ларының ең көп кездесетіні - c.428dup, c.5851_5854delAGTT және интрондық c.8487+1G>A нұсқасы, олар Палермодағы c.428dup, c.5851_5854delAGTT бар науқаста толығырақ 28 хабарланған. PV Сицилияның солтүстік-батысындағы үй шаруашылықтарында, негізінен Трапани және Палермо аймақтарында байқалды, ал c.5851_5854delAGTT PV Сицилияның солтүстік-батысындағы үй шаруашылықтарында байқалды. 8487+1G>A нұсқасы Мессина, Палермо және Калтаниссетта тұрғындарында жиі кездеседі.28 Реббек және т.б. бұрын Колумбиядағы c.5851_5854delAGTT өзгерісін сипаттаған болатынбыз.37 Тағы бір BRCA2 PV, c.631+1G>A, Сицилиядан келген БК және ОС науқастарында (Агридженто, Сиракуза және Рагуса) табылды.28 Айта кету керек, біз сол науқаста екі BRCA2 нұсқасының (BRCA2 c.631G>A және c.7008-2A>T) бірге өмір сүруін байқадық, олар бұрын осылай хабарланғандай цис режимінде бөлінген деп есептедік.34,46 Бұл BRCA2 мутациялары шынымен де Италия аймағында жиі байқалады және мезгілсіз тоқтау кодондарын енгізетіні, хабаршы РНҚ сплайсингіне әсер ететіні және BRCA2 ақуызының істен шығуына әкелетіні анықталды.47,48
Біз сондай-ақ ақуыз домендері мен гендерінің болжамды OCCR және BCCR аймақтарындағы BRCA1 және BRCA2 PV карталарын жасадық. Бұл аймақтарды Реббек және т.б. аналық без және сүт безі қатерлі ісігінің даму қаупі аймақтары ретінде сипаттады.49 Дегенмен, жыныс жолдарының нұсқаларының орналасуы мен сүт безі немесе аналық без қатерлі ісігінің қаупі арасындағы байланыс туралы дәлелдер әлі де даулы болып табылады.28,50-52 Біздің популяциямызда BRCA1 PV негізінен BCCR аймағында, ал BRCA2 PV негізінен OCCR аймағында орналасқан. Дегенмен, біз болжамды OCCR және BCCR аймақтары мен BC белгілері арасында ешқандай байланыс таба алмадық. Бұл BRCA1/2 мутациялары бар науқастар санының шектеулі болуына байланысты болуы мүмкін. Ақуыз домені тұрғысынан BRCA1 PV бүкіл ақуыз бойымен таралған, ал BRCA2 өзгерістері BRC қайталау доменінде басым түрде кездеседі.
Соңында, біз БЦ клиникалық-патологиялық ерекшеліктерін BRCA1/2 PV-мен корреляцияладық. Қамтылған пациенттер санының шектеулі болуына байланысты біз тек Ki-67 мен ісік дәрежесі арасында маңызды корреляцияны таптық. Ki-67 бағалауы мен түсіндірмесі біршама даулы болып қала берсе де, жоғары пролиферациялық көрсеткіштер аурудың қайталану қаупінің жоғарылауымен және өмір сүрудің төмендеуімен байланысты екені сөзсіз. Бүгінгі күнге дейін «жоғары» және «төмен» Ki-67 арасындағы айырмашылықты анықтау шегі 20% құрайды. Дегенмен, бұл шекті мән BRCA1/2 мутациясы бар пациенттер популяциясына қолданылмайды, олардың Ki-67 орташа мәні 25% құрайды. Ki-67 жоғары көрсеткіштерінің бұл үрдісін біздің люминальды B және TNBC когорталарындағы таралуымен түсіндіруге болады, олардың ішінде люминальды А ісіктері аз болды. Дегенмен, кейбір дәлелдер Ki-67 жоғары шегі (25-30%) пациенттерді олардың болжамына сәйкес жақсырақ стратификациялауы мүмкін екенін көрсетеді.53,54 Біздің талдау нәтижелерінен айтарлықтай корреляция таңқаларлық емес. Ki-67 жоғары және дәрежелері мен болуы арасында орын алады. BRCA1 PV. Шын мәнінде, BRCA1-мен байланысты ісіктер TNBC-ге тән және агрессивтірек белгілерді көрсетеді.16,17
Қорытындылай келе, бұл зерттеу шығыс Сицилиядан келген BC когортасындағы BRCA1/2 мутациялық мәртебесі туралы есеп береді. Жалпы алғанда, біздің нәтижелеріміз BC-дегі мутацияның таралуы және клиникалық-патологиялық ерекшеліктері тұрғысынан бұрыннан бар дәлелдерге сәйкес келеді. BRCA1/2-мутантты BC науқастарының үлкен популяцияларында көбірек зерттеулер жүргізу, мысалы, көп геномды кеңейтілген мутациялық талдауды қолдану BRCA1/2-ге қарағанда айқын және сирек кездесетін PV-лардың болуын бағалау үшін қажет. Бұл генетикалық мутацияларға байланысты қатерлі ісік ауруының қаупі жоғары субъектілер санының артуын анықтауға және дұрыс басқаруға мүмкіндік береді.
Біз пациенттердің зерттеу мақсаттары үшін ісік үлгілерін жасырын түрде жариялауға келісім бергенін растадық. Барлық пациенттер Хельсинки декларациясына сәйкес жазбаша келісімге қол қойды. AOU Policlinico «G.Rodolico – S.Marco» саясатына сәйкес, бұл зерттеу этикалық шолудан босатылды, себебі BRCA1/2 талдауы клиникалық тәжірибеге сәйкес жүргізілді және барлық пациенттер жазбаша келісім берді. Пациенттер де өз деректерін зерттеу мақсаттарында пайдалануға келісім береді.
Этика комитетінің өтініші бойынша сүт безі қатерлі ісігімен ауыратын науқастарды емдеуге көрсеткен көмегі үшін профессор Паоло Виньериге алғыс айтамыз.
Федерика Марторана Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer компанияларынан гонорарлар туралы хабарлайды. Басқа авторлар бұл жұмыста мүдделер қақтығысы жоқ екенін мәлімдейді.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL және т.б. 2020 жылғы жаһандық қатерлі ісік статистикасы: GLOBOCAN әлемнің 185 еліндегі 36 қатерлі ісік ауруының жиілігі мен өлімін бағалайды. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660