ขณะนี้ Javascript ถูกปิดใช้งานอยู่ในเบราว์เซอร์ของคุณ คุณลักษณะบางประการของเว็บไซต์นี้จะไม่ทำงานเมื่อปิดใช้งาน Javascript
ลงทะเบียนด้วยรายละเอียดเฉพาะของคุณและยาที่คุณสนใจและเราจะจับคู่ข้อมูลที่คุณให้ไว้กับบทความในฐานข้อมูลขนาดใหญ่ของเราและจะส่งสำเนา PDF ให้คุณทางอีเมลทันที
จาก Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
สเตฟาเนีย สเตลลา, 1,2 ซิลเวีย ริต้า วิตาเล, 1,2 เฟเดริกา มาร์โตรานา, 1,2 มิเชล มาสซิมิโน, 1,2 จูเลียนา ปาโวเน, 3 คาเทีย ลานซาฟาเม, 3 เซบาสเตียโน บิอันกา, 4 เคียรา บาโรเน, 5 คริสตินา กอร์โกเน, 6 มาร์โก ฟิเชรา, 6, 7 ลิเวีย แมนเซลลา 1,21 ภาควิชาเวชศาสตร์คลินิกและการทดลอง มหาวิทยาลัยคาตาเนีย, Catania, 95123, Italy;2 ศูนย์ทดลองมะเร็งวิทยาและโลหิตวิทยา, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, อิตาลี; 3 เนื้องอกวิทยาทางการแพทย์, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, อิตาลี; 4 พันธุศาสตร์การแพทย์, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, อิตาลี; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italy; 6 Department of Biomedical and Biotechnology Sciences, University of Catania, Medical Genetics, Catania, Italy, 95123; 7Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italy การสื่อสาร: Stefania Stella, โทรศัพท์ +39 095 378 1946, อีเมล [email protected]; [email protected] วัตถุประสงค์: การกลายพันธุ์ของเชื้อพันธุ์ในยีน BRCA1 และ BRCA2 และมะเร็งเต้านม (BC) รังไข่ (OC) และมะเร็งอื่นๆ ที่เกี่ยวข้องกับความเสี่ยงต่อการเกิดมะเร็งตลอดชีวิต การทดสอบยีน BRCA เป็นสิ่งสำคัญในการประเมินความเสี่ยงของแต่ละบุคคล รวมถึงการค้นหาวิธีป้องกันในผู้ที่เป็นพาหะที่แข็งแรง และการปรับแต่งการรักษาในผู้ป่วยมะเร็ง อุบัติการณ์ของการเปลี่ยนแปลงของยีน BRCA1 และ BRCA2 มีความหลากหลายอย่างมากในแต่ละภูมิภาคทางภูมิศาสตร์ แม้ว่าจะมีข้อมูลเกี่ยวกับการกลายพันธุ์ที่ทำให้เกิดโรคของยีน BRCA ในครอบครัวซิซิลี แต่การศึกษาที่กำหนดเป้าหมายประชากรในซิซิลีตะวันออกโดยเฉพาะยังขาดอยู่ วัตถุประสงค์ของการศึกษาของเราคือการตรวจสอบอุบัติการณ์และการกระจายของการเปลี่ยนแปลงของเชื้อพันธุ์ที่ทำให้เกิดโรคของยีน BRCA ในกลุ่มผู้ป่วย BC จากซิซิลีตะวันออก และเพื่อประเมินความสัมพันธ์กับลักษณะเฉพาะของ BC โดยใช้การจัดลำดับยีนรุ่นถัดไป การมีอยู่ของการเปลี่ยนแปลงมีความสัมพันธ์กับระดับของเนื้องอกและดัชนีการแพร่กระจาย ผลลัพธ์: โดยรวมแล้ว ผู้ป่วย 35 ราย (9%) มีการกลายพันธุ์ที่ทำให้เกิดโรคของยีน BRCA 17 ราย (49%) อยู่ใน BRCA1 และ 18 (51%) ใน BRCA2 การเปลี่ยนแปลงของ BRCA1 พบได้บ่อยในผู้ป่วย BC ชนิด triple-negative ในขณะที่การกลายพันธุ์ของ BRCA2 พบได้บ่อยกว่าในผู้ป่วย BC ชนิด luminal เมื่อเปรียบเทียบกับผู้ที่ไม่ได้เป็นพาหะ ผู้ที่มีรูปแบบ BRCA1 จะมีเกรดของเนื้องอกและดัชนีการแพร่กระจายที่สูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญข้อสรุป: ผลการค้นพบของเราให้ภาพรวมของสถานะการกลายพันธุ์ของ BRCA ในผู้ป่วย BC จากซิซิลีตะวันออก และยืนยันบทบาทของการวิเคราะห์ NGS ในการระบุผู้ป่วยที่มี BC ที่ถ่ายทอดทางพันธุกรรม โดยรวมแล้ว ข้อมูลเหล่านี้สอดคล้องกับหลักฐานก่อนหน้านี้ที่สนับสนุนการคัดกรอง BRCA เพื่อป้องกันและรักษามะเร็งที่เหมาะสมในผู้ที่มีการกลายพันธุ์
มะเร็งเต้านม (BC) เป็นมะเร็งที่พบได้บ่อยที่สุดในโลกและเป็นมะเร็งที่ร้ายแรงที่สุดในผู้หญิง1 ลักษณะทางชีววิทยาที่กำหนดการพยากรณ์โรคมะเร็งเต้านมและพฤติกรรมทางคลินิกได้รับการศึกษาอย่างกว้างขวางและมีการอธิบายบางส่วนในช่วงเวลาหนึ่ง ในความเป็นจริง เครื่องหมายทดแทนหลายชนิดถูกใช้ในปัจจุบันเพื่อจำแนกมะเร็งเต้านมออกเป็นชนิดย่อยของโมเลกุลที่แตกต่างกัน ได้แก่ เอสโตรเจน (ER) และ/หรือตัวรับโปรเจสเตอโรน (PgR) การขยายตัวของตัวรับปัจจัยการเจริญเติบโตของผิวหนังมนุษย์ 2 (HER2) ดัชนีการแพร่กระจาย Ki-67 และเกรดของเนื้องอก (G)2 การรวมกันของตัวแปรเหล่านี้ระบุหมวดหมู่ของ BC ดังต่อไปนี้: 1) เนื้องอก Luminal ที่แสดงการแสดงออกของ ER และ/หรือ PgR คิดเป็น 75% ของ BC เนื้องอกเหล่านี้แบ่งเพิ่มเติมเป็น Luminal A เมื่อ Ki-67 ต่ำกว่า 20% และ HER2 ลบ และ Luminal B เมื่อ Ki-67 เท่ากับหรือมากกว่า 20% และมีการขยายตัวของ HER2 โดยไม่คำนึงถึง ดัชนีการแพร่กระจาย 2) เนื้องอก HER2+ ที่เป็น ER และ PgR ลบแต่แสดงการขยายตัวของ HER2 กลุ่มนี้คิดเป็นร้อยละ 10 ของเนื้องอกเต้านมทั้งหมด 3) มะเร็งเต้านมชนิด Triple-negative (TNBC) ซึ่งไม่แสดงการแสดงออกของ ER และ PgR และการขยายตัวของ HER2 คิดเป็นร้อยละ 15 ของมะเร็งเต้านม2-4
ในกลุ่มย่อยของ BC เหล่านี้ ระดับของเนื้องอกและดัชนีการแพร่กระจายแสดงถึงไบโอมาร์กเกอร์แบบตัดขวางซึ่งเกี่ยวข้องโดยตรงและโดยอิสระกับความรุนแรงของเนื้องอกและการพยากรณ์โรค5,6
นอกเหนือจากลักษณะทางชีววิทยาที่กล่าวข้างต้น บทบาทของการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมที่สืบทอดซึ่งนำไปสู่การพัฒนาของมะเร็งเต้านมได้กลายมาเป็นสิ่งสำคัญมากขึ้นในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา7 เนื้องอกเต้านมประมาณ 1 ใน 10 รายถ่ายทอดทางพันธุกรรมเนื่องจากการเปลี่ยนแปลงในเซลล์สืบพันธุ์ในยีนเฉพาะ8 การศึกษาทางระบาดวิทยาขนาดใหญ่ 2 ชิ้นที่เกี่ยวข้องกับผู้หญิงมากกว่า 180,000 คนได้ระบุกลุ่มยีน 8 ยีน (เช่น ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C และ RAD51D) ที่รับผิดชอบหลักต่อมะเร็งเต้านมที่ถ่ายทอดทางพันธุกรรม ในบรรดายีนเหล่านี้ BRCA1 และ BRCA2 (ต่อไปนี้เรียกว่า BRCA1/2) แสดงให้เห็นความสัมพันธ์ที่แข็งแกร่งที่สุดกับการพัฒนาของเนื้องอกเต้านม9-12 ในความเป็นจริง การกลายพันธุ์ของ BRCA1/2 ในเซลล์สืบพันธุ์เพิ่มความเสี่ยงตลอดชีวิตของมะเร็งเต้านม รวมถึงมะเร็งชนิดอื่นๆ อย่างมีนัยสำคัญ รวมทั้งมะเร็งรังไข่ มะเร็งต่อมลูกหมาก มะเร็งตับอ่อน มะเร็งลำไส้ใหญ่และมะเร็งผิวหนัง ตั้งแต่อายุ 13 ถึง 80 ปี ปีที่ผ่านมา อุบัติการณ์สะสมของ BC อยู่ที่ 72% ในผู้หญิงที่มี BRCA1 pathogenic variant (PV) และ 69% ในผู้หญิงที่มี BRCA2 PV14
ที่น่าสังเกตคือ สิ่งพิมพ์ล่าสุดแนะนำว่าความเสี่ยงของ BC ขึ้นอยู่กับประเภทของ PV ในความเป็นจริง เมื่อเปรียบเทียบกับรูปแบบการตัดทอนที่ก่อโรค รูปแบบ missense ที่ชัดเจน โดยเฉพาะในยีน BRCA1 มีความสัมพันธ์กับความเสี่ยงของ BC ที่ลดลง โดยเฉพาะในสตรีสูงอายุ15
การมีอยู่ของ BRCA1 หรือ BRCA2 PV เกี่ยวข้องกับลักษณะทางชีววิทยาและทางคลินิกพยาธิวิทยาที่แตกต่างกัน16,17 BCs ที่เกี่ยวข้องกับ BRCA1 มักจะมีความก้าวร้าวทางคลินิก แยกแยะได้ไม่ดี และแพร่กระจายอย่างรวดเร็วเนื้องอกเหล่านี้มักเป็นแบบสามชนิดลบและเกิดขึ้นในช่วงอายุน้อยเนื้องอกที่เกิดขึ้นในผู้ป่วยที่มีการกลายพันธุ์ของ BRCA2 มักมีลักษณะเกรดปานกลางถึงแยกแยะได้ดีและดัชนีการแพร่กระจายที่แปรผันเนื้องอกเหล่านี้พบได้บ่อยในลูเมน B และมักเกิดขึ้นในผู้สูงอายุ16-18 สิ่งที่น่าสังเกตคือการกลายพันธุ์ของ BRCA1 และ BRCA2 เพิ่มความไวต่อการรักษาเฉพาะ รวมถึงเกลือแพลตตินัมและยาที่กำหนดเป้าหมาย เช่น สารยับยั้งโพลี(ADP-ไรโบส) โพลิเมอเรส (PARPi)19,20
ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา การนำการจัดลำดับยีนรุ่นถัดไป (NGS) มาใช้ในทางคลินิก ทำให้ผู้ป่วยมะเร็งเต้านมจำนวนมากขึ้นเรื่อยๆ สามารถเข้ารับการทดสอบทางโมเลกุลสำหรับกลุ่มอาการที่ไวต่อมะเร็งได้ รวมถึง BRCA1/221 ในขณะเดียวกัน คำจำกัดความที่อิงตามเกณฑ์ที่ชัดเจนเกี่ยวกับประวัติครอบครัว ข้อมูลประชากร และลักษณะทางคลินิกและพยาธิวิทยา ช่วยให้ระบุบุคคลที่สมควรได้รับการทดสอบ BRCA1/2 ได้ดีขึ้น22,23 ในบริบทนี้ มีการสะสมหลักฐานเกี่ยวกับการคัดกรอง BRCA1/2 ในกลุ่มประชากรเฉพาะ ซึ่งเน้นย้ำถึงความแตกต่างในแต่ละภูมิภาคทางภูมิศาสตร์24–27 แม้ว่าจะมีรายงานเกี่ยวกับกลุ่มประชากรมะเร็งเต้านมในซิซิลีตะวันตก แต่มีข้อมูลเกี่ยวกับการคัดกรอง BRCA1/2 ในประชากรซิซิลีตะวันออกน้อยกว่า28,29
เราจะอธิบายผลลัพธ์ของการคัดกรองเชื้อพันธุ์ BRCA1/2 ในผู้ป่วย BC จากซิซิลีตะวันออก พร้อมทั้งเชื่อมโยงการมีอยู่ของการกลายพันธุ์ BRCA1 หรือ BRCA2 กับลักษณะทางคลินิกพยาธิวิทยาหลักของเนื้องอกเหล่านี้
การศึกษาแบบย้อนหลังได้ดำเนินการที่ “ศูนย์การทดลองเนื้องอกวิทยาและโลหิตวิทยา” ที่โรงพยาบาล PoliclinicoRodolico – San Marco ในเมือง Cataniaตั้งแต่เดือนมกราคม 2017 ถึงเดือนมีนาคม 2021 ผู้ป่วยมะเร็งเต้านม มะเร็งรังไข่ มะเร็งผิวหนัง มะเร็งตับอ่อน หรือมะเร็งต่อมลูกหมาก รวมทั้งสิ้น 455 ราย ได้รับการส่งตัวมายังห้องปฏิบัติการวินิจฉัยทางโมเลกุลของเราเพื่อตรวจทางพันธุกรรม BRCA/2 การศึกษานี้ดำเนินการตามปฏิญญาเฮลซิงกิ และผู้เข้าร่วมทุกคนให้ความยินยอมโดยแจ้งเป็นลายลักษณ์อักษรก่อนการวิเคราะห์ทางโมเลกุล
ลักษณะทางเนื้อเยื่อวิทยาและชีววิทยา (ER, PgR, สถานะ HER2, Ki-67 และเกรด) ของ BC ได้รับการประเมินจากชิ้นเนื้อหลักหรือตัวอย่างทางการผ่าตัด โดยพิจารณาเฉพาะส่วนประกอบของเนื้องอกที่รุนแรงเท่านั้น จากลักษณะเหล่านี้ BC จะถูกจำแนกประเภทดังต่อไปนี้: ลูมินัล A (ER+ และ/หรือ PgR+, HER2-, Ki-67<20%), ลูมินัล B (ER+ และ/หรือ PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), ลูมินัล B-HER2+ (ER และ/หรือ PgR+, HER2+), HER2+ (ER และ PgR-, HER2+) หรือทริปเปิ้ลเนกาทีฟ (ER และ PgR-, HER2-)
ก่อนจะประเมินสถานะการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1 และ BRCA2 ทีมสหสาขาวิชาชีพ ซึ่งประกอบด้วยผู้เชี่ยวชาญด้านมะเร็งวิทยา นักพันธุศาสตร์ และนักจิตวิทยา ได้เข้าปรึกษาหารือทางด้านพันธุศาสตร์ของเนื้องอกกับผู้ป่วยแต่ละราย เพื่อพิจารณาการมีอยู่ของยีน BRCA1 และ/หรือ BRCA1 หรือบุคคลที่มีความเสี่ยงสูงต่อ PV ในยีน BRCA2 การคัดเลือกผู้ป่วยดำเนินการตามแนวทางของสมาคมการแพทย์มะเร็งวิทยาแห่งอิตาลี (AIOM) และคำแนะนำในท้องถิ่นของซิซิลี30,31 เกณฑ์เหล่านี้ได้แก่ (i) ประวัติครอบครัวที่มีรูปแบบก่อโรคที่ทราบในยีนที่ทำให้เกิดความไวต่อยีน (เช่น BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN) (ii) ผู้ชายที่มี BC; (iii) ผู้ที่มี BC และ OC; (iv) ผู้หญิงที่มี BC < 36 ปี, TNBC < 60 ปี หรือ BC ทั้งสองข้าง < 50 ปี; (v) ประวัติทางการแพทย์ส่วนบุคคลของ BC < 50 ปี และญาติสายตรงอย่างน้อยหนึ่งคน: (a) BC < 50 ปี; (b) OC ที่ไม่เป็นเมือกและไม่เป็นเส้นแบ่งในทุกช่วงวัย (c) BC ทั้งสองข้าง (d) BC ในผู้ชาย (e) มะเร็งตับอ่อน (f) มะเร็งต่อมลูกหมาก (vi) สองคนขึ้นไป ประวัติส่วนตัวของ BC > 50 ปี และประวัติครอบครัวเป็น BC, OC หรือมะเร็งตับอ่อนของญาติที่เป็นญาติสายตรงซึ่งกันและกัน (รวมถึงญาติที่เธอเป็นญาติสายตรงระดับที่หนึ่งด้วย); (vii) ประวัติส่วนตัวของ OC และญาติสายตรงระดับที่หนึ่งอย่างน้อยหนึ่งคน: (a) BC < 50 ปี; (b) NOC; (c) BC สองข้าง; (d) BC ในผู้ชาย; (vii) ผู้หญิงที่มี OC ระดับเซรุ่มระดับสูง
ตัวอย่างเลือดจากผู้ป่วยแต่ละรายปริมาตร 20 มิลลิลิตร แล้วเก็บในหลอด EDTA (BD Biosciences) จากนั้นแยกดีเอ็นเอจีโนมจากตัวอย่างเลือดทั้งหมด 0.7 มิลลิลิตรโดยใช้ชุดแยกดีเอ็นเอ QIAsymphony DSP Midi Kit (QIAGEN, Hilden, อิตาลี) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต จากนั้นส่งผ่านเครื่องวัดปริมาณฟลูออโรมิเตอร์ Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, สหรัฐอเมริกา) เพื่อดำเนินการวัดปริมาณ การเสริมความเข้มข้นของเป้าหมายและการเตรียมห้องสมุดดำเนินการโดย Oncomine™ BRCA Research Assay Chef ซึ่งพร้อมที่จะโหลดเข้าใน Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit สำหรับการเตรียมห้องสมุดอัตโนมัติตามคำแนะนำของผู้ผลิต ชุดประกอบด้วยไพรเมอร์ PCR แบบมัลติเพล็กซ์สองกลุ่มที่สามารถใช้ศึกษา BRCA1 (NM_007300.3) และ BRCA2 (NM_000059.3) ได้ทั้งหมด กล่าวโดยย่อ คือ เติม DNA ของตัวอย่างที่เจือจางแต่ละตัวอย่าง (10 นาโนกรัม) 15 µL ลงในเพลทที่มีบาร์โค้ดสำหรับการเตรียมห้องสมุด และรีเอเจนต์และวัสดุสิ้นเปลืองทั้งหมดถูกโหลดลงในเครื่องมือ Ion Chef™ จากนั้นจึงดำเนินการเตรียมห้องสมุดอัตโนมัติและรวมห้องสมุดตัวอย่างที่มีบาร์โค้ดบนเครื่องมือ Ion Chef™ จากนั้นจึงประเมินจำนวนห้องสมุดที่เตรียมไว้โดยเครื่องวัดฟลูออโรมิเตอร์ Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต ในที่สุด ห้องสมุดจะถูกผสมกันในอัตราส่วนโมลาร์เท่ากันใน หลอดตัวอย่างห้องสมุด Ion Chef™ (หลอดที่มีบาร์โค้ด) และโหลดลงในเครื่องมือ Ion Chef™ การจัดลำดับดำเนินการโดยใช้เครื่องมือ Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) โดยใช้ชิป Ion 510 (Thermo Fisher Scientific) การวิเคราะห์ข้อมูลดำเนินการโดย Amplicon Suite (SmartSeq srl) และซอฟต์แวร์ Ion Reporter
การตั้งชื่อตัวแปรทั้งหมดปฏิบัติตามแนวทางปัจจุบันของ Human Genome Variation Consortium ซึ่งสามารถเข้าถึงได้ทางออนไลน์ (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen) ความสำคัญทางคลินิกของตัวแปร BRCA1/2 ถูกกำหนดโดยใช้การจำแนกประเภทของ International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) และใช้ฐานข้อมูลต่างๆ เช่น ARUP, BRCAEXCHANGE , ClinVar, IARC_LOVD และ UMD การจำแนกประเภทประกอบด้วยห้าประเภทความเสี่ยงที่แตกต่างกัน: ไม่ร้ายแรง (ประเภท I), อาจไม่ร้ายแรง (ประเภท II), ตัวแปรที่มีความสำคัญไม่ชัดเจน (VUS, ประเภท III), มีแนวโน้มก่อโรค (ประเภท IV) และก่อโรค (ประเภท V) นอกจากนี้ VarSome ยังวิเคราะห์ผลกระทบของการกลายพันธุ์ต่อโครงสร้างและการทำงานของโปรตีน ซึ่งเป็นเครื่องมือที่ให้ข้อมูลโดยสามารถเข้าถึงฐานข้อมูล 30 แห่ง32
ในการกำหนดความสำคัญทางคลินิกที่เป็นไปได้ให้กับ VUS แต่ละอัน จะใช้ขั้นตอนวิธีในการทำนายโปรตีนด้วยคอมพิวเตอร์ดังต่อไปนี้: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) และ Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php) โดยที่ตัวแปรที่จัดอยู่ในประเภท 1 และ 2 ถือเป็นประเภทป่า
การเรียงลำดับแซงเกอร์ยืนยันการมีอยู่ของตัวแปรที่ก่อโรคแต่ละตัว โดยสรุปแล้ว ไพรเมอร์เฉพาะคู่หนึ่งได้รับการออกแบบสำหรับตัวแปรที่ตรวจพบแต่ละตัวโดยใช้ลำดับอ้างอิงยีน BRCA1 และ BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 และ NG_012772.3, NM_000059.3 ตามลำดับ) ดังนั้น จึงดำเนินการ PCR เป้าหมายตามด้วยการจัดลำดับแซงเกอร์
ผู้ป่วยที่ตรวจพบยีน BRCA1/2 เป็นลบ จะได้รับการทดสอบด้วยการเพิ่มจำนวนโพรบแบบพึ่งพาการผูกมัดแบบมัลติเพล็กซ์ (MLPA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต เพื่อประเมินการมีอยู่ของการจัดเรียงจีโนมขนาดใหญ่ (LGR) โดยสรุป ตัวอย่าง DNA จะถูกเปลี่ยนสภาพ และใช้โพรบที่จำเพาะยีน BRCA1 และ BRCA2 สูงสุด 60 ตัว โดยแต่ละตัวจะตรวจจับลำดับ DNA เฉพาะที่มีความยาวประมาณ 60 นิวคลีโอไทด์ ผลิตภัณฑ์การเพิ่มจำนวนโพรบ ซึ่งประกอบด้วยแอมพลิคอน PCR เฉพาะชุดหนึ่ง จะได้รับการวิเคราะห์โดยอิเล็กโทรโฟรีซิสแบบแคปิลลารีและซอฟต์แวร์ Cofalyser.Net ร่วมกับตาราง Cofalyser จำเพาะต่อชุดที่เหมาะสม (www.mrcholland.com)
ตัวแปรทางคลินิกพยาธิวิทยาที่เลือก (เกรดทางเนื้อเยื่อวิทยาและดัชนีการแพร่กระจาย Ki-67%) เกี่ยวข้องกับการมีอยู่ของ BRCA1/2 PV ซึ่งคำนวณโดยใช้ซอฟต์แวร์ Prism เวอร์ชัน 8.4 โดยใช้การทดสอบที่แน่นอนของ Fisher โดยถือว่าค่า p <0.05 ถือว่ามีความสำคัญ
ระหว่างเดือนมกราคม 2017 ถึงมีนาคม 2021 ผู้ป่วย 455 รายได้รับการคัดกรองการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1/2 ของเชื้อพันธุ์ การทดสอบการกลายพันธุ์ดำเนินการที่ศูนย์มะเร็งวิทยาและโลหิตวิทยาเชิงทดลองของโรงพยาบาล Policlinico ตามแนวทางของซิซิลี (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020) โดยรวม ผู้ป่วย 389 ราย ได้แก่ มะเร็งเต้านม 37 ราย มะเร็งรังไข่ 16 ราย มะเร็งตับอ่อน 8 ราย มะเร็งต่อมลูกหมาก และ 5 ราย การกระจายของผู้ป่วยตามประเภทของมะเร็งและผลการวิเคราะห์แสดงไว้ในรูปที่ 1
รูปที่ 1 แสดงแผนผังกระแสข้อมูลที่แสดงภาพรวมของการศึกษา ผู้ป่วยที่มีเนื้องอกที่เต้านม มะเร็งผิวหนัง มะเร็งตับอ่อน มะเร็งต่อมลูกหมาก หรือมะเร็งรังไข่ ได้รับการทดสอบการกลายพันธุ์ในยีน BRCA1 และ BRCA2
คำย่อ: PVs, pathogenic variant; VUS, variant of uncertain significance; WT, ลำดับ BRCA1/2 ชนิดป่า
เราเน้นการศึกษาของเราไปที่กลุ่มผู้ป่วยมะเร็งเต้านมโดยเฉพาะ ผู้ป่วยมีอายุเฉลี่ย 49 ปี (ช่วง 23-89 ปี) และส่วนใหญ่เป็นผู้หญิง (n=376 หรือ 97%)
ในจำนวนผู้ทดลองเหล่านี้ 64 ราย (17%) มีการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1/2 และเป็นเพศหญิงทั้งหมด 35 ราย (9%) มียีน PV และ 29 ราย (7.5%) มียีน VUS พบการกลายพันธุ์ของยีนที่ก่อโรค 17 ราย (48.6%) จากทั้งหมด 35 รายในยีน BRCA1 และ 18 ราย (51.4%) ในยีน BRCA2 ในขณะที่พบยีน VUS 5 รายในยีน BRCA1 (17.2%) และ 24 ราย (82.8%) ในยีน BRCA2 (รูปที่ 1 และ 2) ไม่พบยีน LGR ในการวิเคราะห์ MLPA
รูปที่ 2 การวิเคราะห์การกลายพันธุ์ของยีน BRCA1 และ BRCA2 ในผู้ป่วยมะเร็งเต้านม 389 ราย (A) การกระจายของ pathogenic variants (PV) (สีแดง) variants ที่มีนัยสำคัญไม่ชัดเจน (VUS) (สีส้ม) และ WT (สีน้ำเงิน) ในผู้ป่วยมะเร็งเต้านม 389 ราย (B) ผู้ป่วยมะเร็งเต้านม 389 ราย มี 35 ราย (ร้อยละ 9) ที่มี pathogenic variants (PV) ในจำนวนนี้ 17 ราย (ร้อยละ 48.6) เป็นพาหะยีน BRCA1 PV (สีแดงเข้ม) และ 18 ราย (ร้อยละ 51.4) เป็นพาหะยีน BRCA2 (สีแดงอ่อน) (C) ผู้ป่วย 29 ราย (ร้อยละ 7.5) จากจำนวน 389 รายมี VUS, ยีน BRCA1 5 ราย (ร้อยละ 17.2) (สีส้มเข้ม) และยีน BRCA2 24 ราย (ร้อยละ 82.8) (สีส้มอ่อน)
คำย่อ: PVs, pathogenic variant; VUS, variant of uncertain significance; WT, ลำดับ BRCA1/2 ชนิดป่า
จากนั้นเราได้ตรวจสอบความชุกของโมเลกุลย่อยชนิด BC ในผู้ป่วยที่มี BRCA1/2 PV การกระจายตัวประกอบด้วย 2 (5.7%) luminal A, 15 (42.9%) luminal B, 3 (8.6%) luminal B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ และ 13 (37.1%) ผู้ป่วย BRCA1 บวก 5 ราย (29.4%) มี BC luminal B, 2 (11.8%) มีโรค HER2+ และ 10 (58.8%) มี TNBC เนื้องอกที่ไม่มีการกลายพันธุ์ BRCA1 เป็นทั้ง luminal A หรือ luminal B-HER2+ (รูปที่ 3) ในกลุ่มย่อยที่เป็น BRCA2 บวก 10 เนื้องอก (55.6%) เป็น luminal B, 3 (16.7%) เป็น luminal B-HER2+, 3 (16.7%) TNBC และ 2 (11.1%) เป็นลูเมน A (รูปที่ 3) ไม่มีเนื้องอก HER2+ อยู่ในกลุ่มนี้ ดังนั้นการกลายพันธุ์ของ BRCA1 จึงแพร่หลายในผู้ป่วย TNBC ในขณะที่การเปลี่ยนแปลงของ BRCA2 พบมากในบุคคลที่มีลูเมน B
รูปที่ 3 อุบัติการณ์ของมะเร็งเต้านมชนิดย่อยในผู้ป่วยที่มียีนก่อโรคในยีน BRCA1 และ BRCA2 ฮิสโทแกรมแสดงการกระจายของ PV ของยีน BRCA1 (สีแดงเข้ม) และยีน BRCA2 (สีแดงอ่อน) ในกลุ่มโมเลกุลย่อยของผู้ป่วยมะเร็งเต้านม จำนวนที่รายงานภายในแต่ละกล่องแสดงถึงเปอร์เซ็นต์ของผู้ป่วยที่มี PV ของยีน BRCA1 และยีน BRCA2 สำหรับมะเร็งเต้านมแต่ละชนิดย่อย
คำย่อ: PVs, pathogenic variant; HER2+, human epidermal growth factor receptor 2 positive; TNBC, มะเร็งเต้านม triple-negative
จากนั้น เราประเมินชนิดและตำแหน่งยีนของ BRCA1 และ BRCA2 PV ใน BRCA1 PV เราพบตัวแปรนิวคลีโอไทด์เดี่ยว (SNV) จำนวน 7 ตัว การลบออก 6 ตัว การซ้ำซ้อน 3 ตัว และการแทรก 1 ตัว การกลายพันธุ์เพียงครั้งเดียว (c.5522delG) ถือเป็นการค้นพบใหม่ BRCA1 PV ที่พบมากที่สุดที่ตรวจพบในทั้งสองรายคือ c.5035_5039delCTAAT การเปลี่ยนแปลงนี้เกี่ยวข้องกับการลบนิวคลีโอไทด์ห้าตัว (CTAAT) ในเอกซอน 15 ของ BRCA1 ส่งผลให้กรดอะมิโนลูซีนถูกแทนที่ด้วยไทโรซีนที่โคดอน 1679 และเนื่องมาจากการเลื่อนเฟรมการแปลด้วยโคดอนหยุดทางเลือกที่คาดการณ์ไว้ทำให้โปรตีนถูกตัดทอนก่อนเวลาอันควร การเปลี่ยนแปลงอื่นๆ ทั้งหมดตรวจพบในกรณีเดียวเท่านั้น โดยเฉพาะอย่างยิ่ง PV ที่รายงานหนึ่งตั้งอยู่ในภูมิภาคคอนเซนซัสของไซต์สไปซ์ (c.4357+1G>T) (ตารางที่ 1)
เกี่ยวกับ BRCA2 PV เราสังเกตเห็นการลบ 6 รายการ SNV 6 รายการและการซ้ำซ้อน 2 รายการ การเปลี่ยนแปลงที่พบไม่มีอันไหนแปลกใหม่ การกลายพันธุ์สามครั้งเกิดขึ้นซ้ำในประชากรของเรา โดยสังเกต c.428dup และ c.8487+1G>A ใน 3 ราย ตามด้วย c.5851_5854delAGTT ที่ดึงข้อมูลมาได้ใน 2 กรณี การเปลี่ยนแปลง c.428dup เกี่ยวข้องกับการทำซ้ำของ C ในเอกซอน 5 ของ BRCA2 ซึ่งคาดการณ์ว่าจะเข้ารหัสโปรตีนที่ถูกตัดทอนและไม่ทำงาน การกลายพันธุ์ c.8487+1G>A เกิดขึ้นในบริเวณอินทรอนของอินทรอน 19 ของ BRCA2 (± 1,2) และส่งผลต่อลำดับคอนเซนซัสของการตัดต่อ ส่งผลให้เกิดการตัดต่อที่เปลี่ยนแปลงไป ซึ่งส่งผลให้มีโปรตีนที่ผิดปกติหรือไม่มีเลย ตัวแปรก่อโรค c.5851_5854delAGTT เกิดจากการลบ 4 นิวคลีโอไทด์จากตำแหน่งนิวคลีโอไทด์ 5851 ถึง 5854 ในเอกซอนที่เข้ารหัส 10 ของยีน BRCA2 และส่งผลให้เกิดการเลื่อนเฟรมการแปลด้วยโคดอนหยุดทางเลือกที่คาดการณ์ไว้ (p.S1951WfsTer) โดยเฉพาะอย่างยิ่ง ตามที่รายงานไว้ก่อนหน้านี้ การเปลี่ยนแปลงทั้งสอง c.631G>A และ c.7008-2A>T ถูกตรวจพบในผู้ป่วยรายเดียวกัน34 การกลายพันธุ์ครั้งแรกเกี่ยวข้องกับการแทนที่อะดีโนซีน (A) ในเอกซอนที่ 7 ของ BRCA2 ด้วยกัวนีน (G) ที่มีนิวคลีโอไทด์ส่งผลให้วาลีนเปลี่ยนเป็นไอโซลิวซีนที่โคดอน 211 ไอโซลิวซีน กรดอะมิโนเป็นกรดอะมิโนที่มีคุณสมบัติคล้ายกันมาก การเปลี่ยนแปลงนี้ส่งผลต่อการตัดต่อ mRNA ตามปกติ ตัวแปรที่สองตั้งอยู่ในบริเวณอินทรอนและส่งผลให้เกิดการแทนที่ดับเบิล A เป็นไทมีน (T) ก่อนเอกซอนที่ 13 ของยีนที่เข้ารหัส BRCA2 การเปลี่ยนแปลง c.7008-2A>T อาจสร้างทรานสคริปต์หลายรายการของยีนที่แตกต่างกัน ความยาว นอกจากนี้ ในกลุ่ม BRCA2 PVs มีการเปลี่ยนแปลง 4 ใน 18 รายการ (22.2%) ที่เป็นแบบอินทรอน
จากนั้นเราจึงทำการแมปการกลายพันธุ์ที่เป็นอันตรายของ BRCA1/2 ในโดเมนการทำงานและบริเวณที่จับโปรตีน (รูปที่ 4) ในยีน BRCA1 PV ร้อยละ 50 อยู่ในบริเวณคลัสเตอร์มะเร็งเต้านม (BCCR) ในขณะที่การกลายพันธุ์ร้อยละ 22 อยู่ในบริเวณคลัสเตอร์มะเร็งรังไข่ (OCCR) (รูปที่ 4A) ใน PV ของ BRCA2 PV ร้อยละ 35.7 ของตัวแปรอยู่ในบริเวณ BCCR และการกลายพันธุ์ร้อยละ 42.8 อยู่ใน OCCR (รูปที่ 4B) จากนั้น เราประเมินตำแหน่งของ PV ภายในโดเมนโปรตีน BRCA1 และ BRCA2 สำหรับโปรตีน BRCA1 เราพบ PV สามตัวในโดเมนคอยล์และคอยล์ขด และการกลายพันธุ์สองครั้งในโดเมน BRCT (รูปที่ 4A) สำหรับโปรตีน BRCA2 PV สี่ตัวถูกแมปกับโดเมนการทำซ้ำของ BRC ในขณะที่ตรวจพบการเปลี่ยนแปลงอินทรอน 3 รายการและการเปลี่ยนแปลงเอ็กซอน 3 รายการใน โดเมนที่จับโอลิโก/โอลิโกแซกคาไรด์ (OB) และโดเมนทาวเวอร์ (T) ( รูปที่ 4B)
รูปที่ 4 การแสดงภาพแบบแผนผังของโปรตีน BRCA1 และ BRCA2 และตำแหน่งของตัวแปรก่อโรค รูปนี้แสดงการกระจายของตัวแปรก่อโรค BRCA1 (A) และ BRCA2 (B) ในผู้ป่วยมะเร็งเต้านม การกลายพันธุ์แบบเอ็กซอนจะแสดงเป็นสีน้ำเงิน ในขณะที่ตัวแปรแบบอินทรอนจะแสดงเป็นสีส้ม ความสูงของแถบแสดงจำนวนเคส โปรตีน BRCA1 และ BRCA2 และโดเมนการทำงานของโปรตีนเหล่านี้ได้รับการรายงานไว้แล้ว (A) โปรตีน BRCA1 มีโดเมนลูป (RING) และลำดับการแปลตำแหน่งนิวเคลียร์ (NLS) โดเมนคอยล์คอยล์ โดเมนคลัสเตอร์ SQ/TQ (SCD) และโดเมนปลาย C ของ BRCA1 (BRCT) (B) โปรตีน BRCA2 มี BRC ซ้ำ 8 รายการ โดเมนที่จับ DNA พร้อมโดเมนเกลียว (เกลียว) รอยพับที่จับโอลิโกนิวคลีโอไทด์/โอลิโกแซ็กคาไรด์ (OB) สามจุด โดเมนทาวเวอร์ (T) และ NLS ทางด้าน C พื้นที่ที่เรียกว่าบริเวณคลัสเตอร์มะเร็งเต้านม (BCCR) และ Ovarian Cancer Cluster Region (OCCR) จะแสดงที่ด้านล่าง*แสดงถึงการกลายพันธุ์ที่กำหนดโคดอนหยุด
จากนั้นเราจึงตรวจสอบลักษณะทางคลินิกและพยาธิวิทยาของ BC ที่อาจมีความสัมพันธ์กับการมีอยู่ของ BRCA1/2 PV บันทึกทางคลินิกที่สมบูรณ์มีอยู่สำหรับผู้ป่วยที่ผล BRCA1/2 เป็นลบ 181 ราย (ไม่ใช่พาหะ) และพาหะทั้งหมด (n = 35) มีความสัมพันธ์ระหว่างอัตราการแพร่กระจายของเนื้องอกและเกรด
เราคำนวณการกระจายของ Ki-67 โดยอิงจากค่ามัธยฐานของกลุ่มของเรา (25%, ช่วง <10-90%) ผู้ที่มี Ki-67 < 25% ถูกกำหนดให้เป็น “Ki-67 ต่ำ” ในขณะที่บุคคลที่มีค่า ≥ 25% ถือว่าเป็น “Ki-67 สูง” พบความแตกต่างของ Ki-67 อย่างมีนัยสำคัญ (p<0.01) ระหว่างผู้ที่ไม่ได้เป็นพาหะและผู้ที่เป็นพาหะ BRCA1 PV (รูปที่ 5A)
รูปที่ 5 ความสัมพันธ์ระหว่าง Ki-67 กับการกระจายเกรดในสตรีมะเร็งเต้านมที่มีและไม่มี PV ของ BRCA1 และ BRCA2 (A) แผนภูมิกล่องแสดงค่ามัธยฐานของ Ki-67 ในผู้ป่วยมะเร็งเต้านมที่ไม่ใช่พาหะจำนวน 181 ราย เทียบกับผู้ป่วย PV ของ BRCA1 (18) หรือ BRCA2 (17) ค่า P ที่ต่ำกว่า 0.5 ถือว่ามีความสำคัญทางสถิติ (B) ฮิสโทแกรมแสดงการจัดผู้ป่วยมะเร็งมะเร็งเต้านมเข้าในกลุ่มเกรดทางเนื้อเยื่อวิทยา (G2 และ G3) ตามสถานะการกลายพันธุ์ของ BRCA1 และ BRCA2 (ผู้ป่วย WT, พาหะ PV ของ BRCA1 และ BRCA2)
ในทำนองเดียวกัน เราตรวจสอบว่าเกรดของเนื้องอกมีความสัมพันธ์กับการมีอยู่ของ BRCA1/2 PV หรือไม่ เนื่องจาก G1 BC ไม่มีอยู่ในประชากรของเรา เราจึงแบ่งผู้ป่วยออกเป็นสองกลุ่ม (G2 หรือ G3) สอดคล้องกับผล Ki-67 การวิเคราะห์เผยให้เห็นความสัมพันธ์ที่มีนัยสำคัญทางสถิติระหว่างเกรดของเนื้องอกและการกลายพันธุ์ของ BRCA1 โดยมีสัดส่วนของเนื้องอก G3 ที่สูงกว่าในผู้ที่มี BRCA1 เมื่อเทียบกับผู้ที่ไม่มี (p<0.005) (รูปที่ 5B)
ความก้าวหน้าในเทคโนโลยีการจัดลำดับดีเอ็นเอทำให้มีความก้าวหน้าที่ไม่เคยเกิดขึ้นมาก่อนในการตรวจยีน BRCA1/2 ซึ่งมีความสำคัญอย่างยิ่งต่อผู้ป่วยที่มีประวัติครอบครัวเป็นมะเร็ง จนถึงปัจจุบัน มีการระบุและจำแนกสายพันธุ์ BRCA1/2 ประมาณ 20,000 สายพันธุ์ตามข้อมูลของ American Society of Medical Genetics 35 และระบบ ENIGMA35,36 เป็นที่ทราบกันดีว่าสเปกตรัมการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1/2 มีความหลากหลายอย่างมากในแต่ละภูมิภาค37 ในอิตาลี อัตราของยีน BRCA1/2 PV อยู่ในช่วง 8% ถึง 37% ซึ่งแสดงให้เห็นถึงความแปรปรวนภายในประเทศที่กว้าง38,39 ด้วยประชากรเกือบ 5 ล้านคน ซิซิลีจึงเป็นภูมิภาคที่ใหญ่เป็นอันดับ 5 ของอิตาลีในแง่ของจำนวนประชากร แม้ว่าจะมีข้อมูลเกี่ยวกับการกระจายตัวของยีน BRCA1/2 ในซิซิลีตะวันตก แต่ก็ไม่มีหลักฐานที่ครอบคลุมในส่วนตะวันออกของเกาะ
การศึกษาของเราเป็นหนึ่งในรายงานแรกๆ เกี่ยวกับอุบัติการณ์ของ BRCA1/2 PV ในผู้ป่วย BC ในซิซิลีตะวันออก28 เราเน้นการวิเคราะห์ของเราไปที่ BC เนื่องจากเป็นโรคที่พบบ่อยที่สุดในกลุ่มผู้ป่วยของเรา
เมื่อทำการทดสอบผู้ป่วย BC จำนวน 389 ราย พบว่า 9% มี BRCA1/2 PV ซึ่งกระจายเท่าๆ กันระหว่าง BRCA1 และ BRCA2 ผลลัพธ์เหล่านี้สอดคล้องกับผลลัพธ์ที่รายงานไว้ก่อนหน้านี้ในกลุ่มประชากรชาวอิตาลี28 ที่น่าสนใจคือ 3% (13/389) ของกลุ่มตัวอย่างของเราเป็นเพศชาย อัตราดังกล่าวสูงกว่าที่คาดไว้สำหรับมะเร็งเต้านมในเพศชาย (1% ของกลุ่ม BC ทั้งหมด)40 ซึ่งสะท้อนถึงการคัดเลือกประชากรของเราโดยพิจารณาจากความเสี่ยงของการกลายพันธุ์ของ BRCA1/2 อย่างไรก็ตาม ผู้ชายเหล่านี้ไม่ได้เกิด BRCA1/2 PV ดังนั้นพวกเขาจึงเป็นผู้สมัครสำหรับการวิเคราะห์ทางโมเลกุลเพิ่มเติมเพื่อตัดทิ้งการมีอยู่ของการกลายพันธุ์ที่พบได้น้อยกว่า เช่น PALB2, RAD51C และ D เป็นต้น พบตัวแปรที่มีนัยสำคัญที่ไม่แน่นอนใน 7% ของผู้ป่วยที่พบ BRCA2 VUS แม้แต่ผลลัพธ์นี้ก็สอดคล้องกับหลักฐานที่มีอยู่ก่อนหน้านี้28,41,42
เมื่อเราวิเคราะห์การกระจายของโมเลกุลย่อยประเภท BC ในผู้หญิงที่มีการกลายพันธุ์ BRCA1/2 เราได้ยืนยันความสัมพันธ์ที่ทราบระหว่าง TNBC และ BRCA1 PV (58.8%) และระหว่าง BC ในลูมินัล B และ BRCA2 PV (55.6%)16,43 เนื้องอกในลูมินัล A และ HER2+ ในผู้ที่มียีน BRCA1 และ BRCA2 PV สอดคล้องกับข้อมูลวรรณกรรมที่มีอยู่16,43
จากนั้นเราจะมุ่งเน้นไปที่ประเภทและตำแหน่งของ BRCA1/2 PV ในกลุ่มของเรา BRCA1 PV ที่พบมากที่สุดคือ c.5035_5039delCTAAT แม้ว่า Incorvaia et al. ไม่ได้อธิบายรูปแบบนี้ในกลุ่มผู้ป่วยที่ศึกษาในซิซิลี แต่ผู้เขียนรายอื่นได้รายงานว่าเป็น BRCA1 PV34 พบ BRCA1 PV หลายตัวในกลุ่มผู้ป่วยของเรา เช่น c.181T>G, c.514del, c.3253dupA และ c.5266dupC ซึ่งพบในซิซิลี28 ในจำนวนนี้ การกลายพันธุ์ของยีน BRCA1 สองแบบ (c.181T>G และ c.5266dupC) มักพบในชาวยิวแอชเคนาซีในยุโรปตะวันออกและยุโรปกลาง (โปแลนด์ เช็ก) สโลวีเนีย ออสเตรีย ฮังการี เบลารุส และเยอรมนี)44,45 และในสหรัฐอเมริกาและอาร์เจนตินา เพิ่งได้รับการกำหนดให้เป็น "รูปแบบสายพันธุ์ที่เกิดซ้ำ" ในผู้ป่วยชาวอิตาลีที่มีมะเร็งเต้านมและมะเร็งเต้านมระยะลุกลาม ตัวแปร 34c.514del เคยระบุแล้วในผู้ป่วยมะเร็งเต้านม 8 รายจากซิซิลีตอนเหนือในปาแลร์โมและเมสซีนา ที่น่าสนใจคือ แม้แต่ Incorvaia และคณะ พบยีนกลายพันธุ์ c.3253dupA ในบางครอบครัวในเมือง Catania28 PVs ที่เป็นตัวแทนมากที่สุดคือ c.428dup, c.5851_5854delAGTT และยีนกลายพันธุ์ intronic c.8487+1G>A ซึ่งมีการรายงานรายละเอียดเพิ่มเติม28ในผู้ป่วยในเมืองปาแลร์โมที่มียีนกลายพันธุ์ c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV ซึ่งพบได้ในครัวเรือนที่ทางตะวันตกเฉียงเหนือของซิซิลี โดยส่วนใหญ่อยู่ในภูมิภาค Trapani และ Palermo ในขณะที่ยีนกลายพันธุ์ c.5851_5854delAGTT PV พบได้ในครัวเรือนที่ทางตะวันตกเฉียงเหนือของซิซิลี ยีนกลายพันธุ์ 8487+1G>A พบได้บ่อยกว่าในผู้ป่วยจากเมือง Messina, Palermo และ Caltanissetta28 Rebbeck et al. ก่อนหน้านี้ได้อธิบายถึงการเปลี่ยนแปลง c.5851_5854delAGTT ในโคลอมเบีย37 พบ BRCA2 PV อีกตัวหนึ่ง c.631+1G>A ในผู้ป่วย BC และ OC จากซิซิลี (อากริเจนโต ซีราคูซา และราคุซา)28 สิ่งที่น่าสังเกตคือ เราสังเกตเห็นการมีอยู่ร่วมกันของตัวแปร BRCA2 สองแบบ (BRCA2 c.631G>A และ c.7008-2A>T) ในผู้ป่วยรายเดียวกัน ซึ่งเราสันนิษฐานว่าแยกออกจากกันในโหมด cis ตามที่รายงานไปก่อนหน้านี้34,46 การกลายพันธุ์ของยีน BRCA2 uble เหล่านี้พบได้บ่อยในภูมิภาคอิตาลี และพบว่าทำให้เกิดโคดอนหยุดก่อนกำหนด ส่งผลต่อการตัดต่อของ RNA ผู้ส่งสาร และทำให้โปรตีน BRCA2 ล้มเหลว47,48
นอกจากนี้ เรายังได้ทำการระบุตำแหน่งของ PV ของ BRCA1 และ BRCA2 ในบริเวณที่คาดว่าเป็น OCCR และ BCCR ของโดเมนโปรตีนและยีน โดย Rebbeck และคณะได้อธิบายบริเวณเหล่านี้ว่าเป็นบริเวณเสี่ยงต่อการเกิดมะเร็งรังไข่และมะเร็งเต้านมตามลำดับ49 อย่างไรก็ตาม หลักฐานเกี่ยวกับความสัมพันธ์ระหว่างตำแหน่งของตัวแปรในเซลล์สืบพันธุ์และความเสี่ยงต่อมะเร็งเต้านมหรือรังไข่ยังคงเป็นที่ถกเถียงกัน28,50-52 ในประชากรของเรา PV ของ BRCA1 ส่วนใหญ่ตั้งอยู่ในบริเวณ BCCR ในขณะที่ PV ของ BRCA2 ส่วนใหญ่ตั้งอยู่ในบริเวณ OCCR อย่างไรก็ตาม เราไม่สามารถพบความสัมพันธ์ใดๆ ระหว่างบริเวณที่คาดว่าเป็น OCCR และ BCCR กับลักษณะของ BC ได้ ซึ่งอาจเกิดจากจำนวนผู้ป่วยที่มีการกลายพันธุ์ของ BRCA1/2 มีจำกัด จากมุมมองของโดเมนโปรตีน PV ของ BRCA1 จะกระจายไปทั่วทั้งโปรตีน และการเปลี่ยนแปลงของ BRCA2 จะพบได้โดยเฉพาะในโดเมนซ้ำของ BRC
ในที่สุด เราได้เชื่อมโยงลักษณะทางคลินิกพยาธิวิทยาของ BC กับ PV ของ BRCA1/2 เนื่องจากจำนวนผู้ป่วยที่รวมอยู่มีจำกัด เราจึงพบความสัมพันธ์ที่สำคัญระหว่าง Ki-67 และเกรดของเนื้องอกเท่านั้น แม้ว่าการประเมินและการตีความ Ki-67 ยังคงเป็นที่ถกเถียงกันอยู่บ้าง แต่ก็เป็นที่แน่ชัดว่าอัตราการแบ่งตัวที่สูงมีความเกี่ยวข้องกับความเสี่ยงที่เพิ่มขึ้นของการกลับเป็นซ้ำของโรคและการอยู่รอดที่ลดลง จนถึงปัจจุบัน เกณฑ์ตัดสินสำหรับการแยกแยะระหว่าง Ki-67 "สูง" และ "ต่ำ" คือ 20% อย่างไรก็ตาม เกณฑ์นี้ไม่ได้นำไปใช้กับประชากรผู้ป่วยที่มีการกลายพันธุ์ BRCA1/2 ของเรา ซึ่งมีค่า Ki-67 มัธยฐานที่ 25% แนวโน้มในอัตรา Ki-67 ที่สูงนี้สามารถอธิบายได้จากการแพร่ระบาดในกลุ่มผู้ป่วยลูมินัล B และ TNBC ของเรา ซึ่งมีเนื้องอกลูมินัล A เพียงไม่กี่ตัว อย่างไรก็ตาม หลักฐานบางอย่างดูเหมือนจะบ่งชี้ว่าเกณฑ์ตัดสิน Ki-67 ที่สูงขึ้น (25–30%) อาจแบ่งผู้ป่วยตามการพยากรณ์โรคได้ดีกว่า53,54 จากผลลัพธ์ของ การวิเคราะห์ของเรา พบว่าความสัมพันธ์ที่สำคัญนั้นไม่น่าแปลกใจ เกิดขึ้นระหว่าง Ki-67 และเกรดที่สูงและการมีอยู่ของ BRCA1 PV ในความเป็นจริง เนื้องอกที่เกี่ยวข้องกับ BRCA1 ถือเป็นลักษณะเฉพาะของ TNBC และแสดงลักษณะที่ก้าวร้าวมากขึ้น16,17
โดยสรุป การศึกษานี้ให้รายงานสถานะการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1/2 ในกลุ่มผู้ป่วยมะเร็งปอดชนิด BC จากซิซิลีตะวันออก โดยรวมแล้ว ผลการค้นพบของเราสอดคล้องกับหลักฐานที่มีอยู่ก่อนแล้ว ทั้งในแง่ของอัตราการเกิดการกลายพันธุ์และลักษณะทางคลินิกและพยาธิวิทยาในมะเร็งปอดชนิด BC การศึกษาเพิ่มเติมในกลุ่มประชากรขนาดใหญ่ของผู้ป่วยมะเร็งปอดชนิด BC ที่มีการกลายพันธุ์ยีน BRCA1/2 เช่น การใช้การวิเคราะห์การกลายพันธุ์แบบขยายหลายจีโนม มีความจำเป็นเพื่อประเมินการมีอยู่ของยีน PV ที่แตกต่างกันและเกิดขึ้นน้อยกว่ายีน BRCA1/2 ซึ่งจะทำให้สามารถระบุและจัดการผู้ป่วยที่มีจำนวนเพิ่มมากขึ้นที่มีความเสี่ยงต่อการเกิดมะเร็งเนื่องจากการกลายพันธุ์ทางพันธุกรรมได้อย่างเหมาะสม
เราได้ยืนยันว่าผู้ป่วยได้ลงนามในหนังสือยินยอมเปิดเผยตัวอย่างเนื้องอกของตนโดยไม่เปิดเผยชื่อเพื่อวัตถุประสงค์ในการวิจัย ผู้ป่วยทุกรายลงนามในหนังสือยินยอมเปิดเผยข้อมูลเป็นลายลักษณ์อักษรตามคำประกาศของเฮลซิงกิ ตามนโยบายของ AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco” การศึกษานี้ได้รับการยกเว้นจากการตรวจสอบทางจริยธรรมเนื่องจากการวิเคราะห์ BRCA1/2 ดำเนินการตามแนวทางปฏิบัติทางคลินิกและผู้ป่วยทุกรายให้ความยินยอมเปิดเผยข้อมูลเป็นลายลักษณ์อักษร ผู้ป่วยยังยินยอมให้ใช้ข้อมูลของตนเพื่อวัตถุประสงค์ในการวิจัยอีกด้วย
เราขอขอบคุณศาสตราจารย์ Paolo Vigneri สำหรับความช่วยเหลือในการดูแลผู้ป่วยมะเร็งเต้านมตามที่คณะกรรมการจริยธรรมร้องขอ
Federica Martorana รายงานค่าตอบแทนจาก Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer ผู้เขียนท่านอื่นๆ ยืนยันว่าไม่มีผลประโยชน์ทับซ้อนใดๆ ในงานนี้
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL และคณะ Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN ประมาณการอุบัติการณ์และอัตราการเสียชีวิตจากโรคมะเร็ง 36 รายใน 185 ประเทศทั่วโลก CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660