ขณะนี้ JavaScript ถูกปิดใช้งานในเบราว์เซอร์ของคุณ ฟังก์ชันบางอย่างของเว็บไซต์นี้จะไม่ทำงานเมื่อปิดใช้งาน JavaScript
ลงทะเบียนโดยระบุรายละเอียดเฉพาะของคุณและยาที่คุณสนใจ เราจะจับคู่ข้อมูลที่คุณให้ไว้กับบทความในฐานข้อมูลขนาดใหญ่ของเรา และส่งสำเนา PDF ให้คุณทางอีเมลโดยเร็วที่สุด
จาก Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
สเตฟาเนีย สเตลลา, 1,2 ซิลเวีย ริต้า วิตาเล, 1,2 เฟเดริกา มาร์โตรานา, 1,2 มิเชล มาสซิมิโน, 1,2 จูเลียนา ปาโวเน, 3 คาเทีย ลานซาฟาเม, 3 เซบาสเตียโน บิอันกา, 4 เคียรา บาโรเน, 5 คริสตินา กอร์โกเน, 6 มาร์โก ฟิเชรา, 6, 7 ลิเวีย แมนเซลลา 1,21 ภาควิชาเวชศาสตร์คลินิกและการทดลอง มหาวิทยาลัยคาตาเนีย, Catania, 95123, Italy;2 ศูนย์ทดลองมะเร็งวิทยาและโลหิตวิทยา, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, อิตาลี; 3 เนื้องอกวิทยาทางการแพทย์, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, อิตาลี; 4 พันธุศาสตร์การแพทย์, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, อิตาลี; 5 เวชศาสตร์พันธุศาสตร์, ASP, ซีราคิวส์, 96100, อิตาลี; 6 ภาควิชาวิทยาศาสตร์ชีวการแพทย์และเทคโนโลยีชีวภาพ, มหาวิทยาลัยคาตาเนีย, เวชศาสตร์พันธุศาสตร์, คาตาเนีย, อิตาลี, 95123; 7 สถาบันวิจัยโออาซี-IRCCS, โทรอินา, 94018, อิตาลี ติดต่อ: Stefania Stella, โทร +39 095 378 1946, อีเมล [email protected]; [email protected] วัตถุประสงค์: การกลายพันธุ์ของยีน BRCA1 และ BRCA2 ในเซลล์สืบพันธุ์มีความเกี่ยวข้องกับมะเร็งเต้านม (BC) มะเร็งรังไข่ (OC) และมะเร็งชนิดอื่นๆ ตลอดชีวิต การตรวจหายีน BRCA เป็นสิ่งสำคัญในการประเมินความเสี่ยงของแต่ละบุคคล รวมถึงการหาวิธีป้องกันในผู้ที่มียีนกลายพันธุ์แต่ไม่มีอาการ และการปรับแต่งการรักษาในผู้ป่วยมะเร็ง ความชุกของการเปลี่ยนแปลงของยีน BRCA1 และ BRCA2 แตกต่างกันอย่างมากในแต่ละภูมิภาค และถึงแม้จะมีข้อมูลเกี่ยวกับการกลายพันธุ์ของยีน BRCA ที่ก่อให้เกิดโรคในครอบครัวชาวซิซิลี แต่ก็ยังขาดการศึกษาที่มุ่งเป้าไปที่ประชากรในซิซิลีตะวันออกโดยเฉพาะ จุดมุ่งหมายของการศึกษาของเราคือการตรวจสอบอุบัติการณ์และการกระจายตัวของการกลายพันธุ์ของยีน BRCA ในเซลล์สืบพันธุ์ที่ก่อให้เกิดโรคในกลุ่มผู้ป่วยมะเร็งเต้านมจากซิซิลีตะวันออก และประเมินความสัมพันธ์กับลักษณะเฉพาะของมะเร็งเต้านมโดยใช้การจัดลำดับดีเอ็นเอรุ่นใหม่ การมีอยู่ของการกลายพันธุ์มีความสัมพันธ์กับระดับความรุนแรงของเนื้องอกและดัชนีการแพร่กระจาย ผลลัพธ์: โดยรวมแล้ว ผู้ป่วย 35 ราย (9%) มีการกลายพันธุ์ของยีน BRCA ที่ก่อให้เกิดโรค โดย 17 ราย (49%) อยู่ในยีน BRCA1 และ 18 ราย (51%) ใน BRCA2 การเปลี่ยนแปลงของ BRCA1 พบได้บ่อยในผู้ป่วยมะเร็งเต้านมชนิดสามลบ ในขณะที่การกลายพันธุ์ของ BRCA2 พบได้บ่อยกว่าในผู้ป่วยมะเร็งเต้านมชนิดลูมินัล เมื่อเปรียบเทียบกับผู้ที่ไม่มียีนกลายพันธุ์ ผู้ที่มียีนกลายพันธุ์ BRCA1 มีระดับความรุนแรงของเนื้องอกและดัชนีการแพร่กระจายสูงกว่าอย่างมีนัยสำคัญ สรุป: ผลการศึกษาของเราให้ภาพรวมของสถานะการกลายพันธุ์ของ BRCA ในผู้ป่วยมะเร็งเต้านมจากทางตะวันออกของซิซิลี และยืนยันบทบาทของการวิเคราะห์ NGS ในการระบุผู้ป่วยมะเร็งเต้านมทางพันธุกรรม โดยรวมแล้ว ข้อมูลเหล่านี้สอดคล้องกับหลักฐานก่อนหน้านี้ที่สนับสนุนการตรวจคัดกรอง BRCA เพื่อการป้องกันและรักษาโรคมะเร็งอย่างเหมาะสมในผู้ที่มียีนกลายพันธุ์
มะเร็งเต้านม (BC) เป็นมะเร็งที่พบได้บ่อยที่สุดทั่วโลกและเป็นมะเร็งที่ร้ายแรงที่สุดในผู้หญิง¹ ลักษณะทางชีววิทยาที่กำหนดการพยากรณ์โรคและพฤติกรรมทางคลินิกของมะเร็งเต้านมได้รับการศึกษาอย่างกว้างขวางและได้รับการอธิบายอย่างครบถ้วนบางส่วนเมื่อเวลาผ่านไป ในความเป็นจริง ปัจจุบันมีการใช้ตัวบ่งชี้ทดแทนหลายตัวเพื่อจำแนกมะเร็งเต้านมออกเป็นชนิดย่อยทางโมเลกุลต่างๆ ได้แก่ ตัวรับเอสโตรเจน (ER) และ/หรือโปรเจสเตอโรน (PgR) การขยายตัวของตัวรับปัจจัยการเจริญเติบโตของผิวหนังมนุษย์ 2 (HER2) ดัชนีการแพร่กระจาย Ki-67 และเกรดของเนื้องอก (G)² การรวมกันของตัวแปรเหล่านี้ระบุประเภทของมะเร็งเต้านมดังต่อไปนี้: 1) เนื้องอกชนิดลูมินัล ซึ่งแสดงการแสดงออกของ ER และ/หรือ PgR คิดเป็น 75% ของมะเร็งเต้านม เนื้องอกเหล่านี้ถูกแบ่งออกเป็นลูมินัล A เมื่อ Ki-67 ต่ำกว่า 20% และ HER2 เป็นลบ และลูมินัล B เมื่อ Ki-67 เท่ากับหรือสูงกว่า 20% และมีการขยายตัวของ HER2 โดยไม่คำนึงถึงการแพร่กระจาย ดัชนี; 2) เนื้องอก HER2+ ที่เป็น ER และ PgR ลบ แต่มีการขยายตัวของ HER2 กลุ่มนี้คิดเป็น 10% ของเนื้องอกเต้านมทั้งหมด; 3) มะเร็งเต้านมชนิดสามลบ (TNBC) ซึ่งไม่แสดงการแสดงออกของ ER และ PgR และไม่มีการขยายตัวของ HER2 คิดเป็นประมาณ 15% ของมะเร็งเต้านม2-4
ในบรรดาชนิดย่อยของมะเร็งเต้านมเหล่านี้ ระดับความรุนแรงของเนื้องอกและดัชนีการแพร่กระจายถือเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพแบบภาคตัดขวางที่เกี่ยวข้องโดยตรงและเป็นอิสระกับความรุนแรงของเนื้องอกและการพยากรณ์โรค5,6
นอกเหนือจากลักษณะทางชีวภาพที่กล่าวมาข้างต้นแล้ว บทบาทของการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมที่ถ่ายทอดทางกรรมพันธุ์ซึ่งนำไปสู่การพัฒนาของมะเร็งเต้านมมีความสำคัญมากขึ้นเรื่อยๆ ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา7 ประมาณ 1 ใน 10 ของเนื้องอกเต้านมเกิดจากการถ่ายทอดทางกรรมพันธุ์เนื่องจากการเปลี่ยนแปลงของยีนเฉพาะในเซลล์สืบพันธุ์8 การศึกษาทางระบาดวิทยาขนาดใหญ่สองครั้งที่เกี่ยวข้องกับผู้หญิงมากกว่า 180,000 คน ได้ระบุกลุ่มยีนแปดตัว (เช่น ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C และ RAD51D) ที่เป็นสาเหตุหลักของมะเร็งเต้านมที่ถ่ายทอดทางกรรมพันธุ์ ในบรรดายีนเหล่านี้ BRCA1 และ BRCA2 (ต่อไปนี้จะเรียกว่า BRCA1/2) แสดงความสัมพันธ์ที่แข็งแกร่งที่สุดกับการพัฒนาของเนื้องอกเต้านม9-12 ในความเป็นจริง การกลายพันธุ์ของยีน BRCA1/2 ในเซลล์สืบพันธุ์เพิ่มความเสี่ยงตลอดชีวิตของมะเร็งเต้านมอย่างมีนัยสำคัญ เช่นเดียวกับมะเร็งชนิดอื่นๆ เช่น มะเร็งรังไข่ มะเร็งต่อมลูกหมาก มะเร็งตับอ่อน มะเร็งลำไส้ใหญ่ และมะเร็งผิวหนัง ตั้งแต่อายุ 13 ถึง 80 ปี อุบัติการณ์สะสมของมะเร็งเต้านมอยู่ที่ 72% ในผู้หญิงที่มีการกลายพันธุ์ก่อโรคของยีน BRCA1 (PV) และ 69% ในผู้หญิงที่มีการกลายพันธุ์ก่อโรคของยีน BRCA2 (PV)14
ที่น่าสังเกตคือ บทความตีพิมพ์ล่าสุดชี้ให้เห็นว่าความเสี่ยงต่อมะเร็งเต้านมขึ้นอยู่กับชนิดของ PV อันที่จริง เมื่อเปรียบเทียบกับตัวแปรตัดทอนที่ก่อโรค ตัวแปรมิสเซนส์ที่เด่นชัด โดยเฉพาะในยีน BRCA1 เกี่ยวข้องกับความเสี่ยงต่อมะเร็งเต้านมที่ลดลง โดยเฉพาะในผู้หญิงสูงอายุ15
การมีอยู่ของ BRCA1 หรือ BRCA2 PV เกี่ยวข้องกับลักษณะทางชีววิทยาและพยาธิวิทยาทางคลินิกที่แตกต่างกัน16,17 มะเร็งเต้านมที่เกี่ยวข้องกับ BRCA1 มักมีความรุนแรงทางคลินิก การแยกเซลล์ไม่ดี และมีการแพร่กระจายสูง เนื้องอกเหล่านี้มักเป็นมะเร็งเต้านมชนิดสามลบ (triple negative) และมีอายุเริ่มต้นที่น้อย เนื้องอกที่เกิดขึ้นในผู้ป่วยที่มีการกลายพันธุ์ของ BRCA2 มักแสดงระดับการแยกเซลล์ปานกลางถึงดี และมีดัชนีการแพร่กระจายที่แปรผัน เนื้องอกเหล่านี้พบได้บ่อยในลูเมน B และมักเกิดขึ้นในผู้สูงอายุ16-18 ที่น่าสังเกตคือ การกลายพันธุ์ใน BRCA1 และ BRCA2 เพิ่มความไวต่อการรักษาเฉพาะบางอย่าง รวมถึงเกลือแพลทินัมและยาที่มุ่งเป้า เช่น สารยับยั้งโพลี(ADP-ริโบส) โพลีเมอเรส (PARPi)19,20
ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา การนำเทคโนโลยีการจัดลำดับดีเอ็นเอรุ่นใหม่ (NGS) มาใช้ในทางคลินิก ทำให้ผู้ป่วยมะเร็งเต้านมจำนวนมากขึ้นสามารถเข้ารับการตรวจทางโมเลกุลเพื่อหาความเสี่ยงต่อการเกิดมะเร็ง รวมถึงยีน BRCA1/2²¹ ในขณะเดียวกัน คำจำกัดความที่อิงตามเกณฑ์ที่แม่นยำเกี่ยวกับประวัติครอบครัว ลักษณะทางประชากร และลักษณะทางคลินิกและพยาธิวิทยา ก็ถูกนำมาใช้เพื่อระบุบุคคลที่ควรได้รับการตรวจ BRCA1/2 ได้ดียิ่งขึ้น^22,23 ในบริบทนี้ หลักฐานเกี่ยวกับการตรวจคัดกรอง BRCA1/2 ในประชากรเฉพาะกลุ่มกำลังเพิ่มมากขึ้น โดยเน้นให้เห็นถึงความแตกต่างในแต่ละภูมิภาค^24–27 แม้ว่าจะมีรายงานเกี่ยวกับกลุ่มผู้ป่วยมะเร็งเต้านมในซิซิลีตะวันตก แต่ก็มีข้อมูลน้อยกว่าเกี่ยวกับการตรวจคัดกรอง BRCA1/2 ในประชากรซิซิลีตะวันออก^28,29
ในบทความนี้ เราจะนำเสนอผลการตรวจคัดกรองยีน BRCA1/2 ในผู้ป่วยมะเร็งเต้านมจากทางตะวันออกของเกาะซิซิลี พร้อมทั้งเชื่อมโยงการมีอยู่ของการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1 หรือ BRCA2 กับลักษณะทางคลินิกและพยาธิวิทยาหลักของเนื้องอกเหล่านี้
การศึกษาแบบย้อนหลังนี้ดำเนินการที่ “ศูนย์มะเร็งวิทยาและโลหิตวิทยาเชิงทดลอง” ณ โรงพยาบาลโพลีคลินิก โรโดลิโก-ซานมาร์โก ในเมืองคาตาเนีย ตั้งแต่เดือนมกราคม 2560 ถึงเดือนมีนาคม 2564 มีผู้ป่วยมะเร็งเต้านม รังไข่ เมลาโนมา ตับอ่อน หรือต่อมลูกหมาก รวม 455 ราย ถูกส่งตัวมายังห้องปฏิบัติการวินิจฉัยระดับโมเลกุลของเราเพื่อทำการตรวจทางพันธุกรรม BRCA/2 การศึกษานี้ดำเนินการตามปฏิญญาเฮลซิงกิ และผู้เข้าร่วมทุกคนได้ให้ความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรก่อนการวิเคราะห์ระดับโมเลกุล
ลักษณะทางเนื้อเยื่อวิทยาและชีววิทยา (สถานะ ER, PgR, HER2, Ki-67 และเกรด) ของมะเร็งเต้านมได้รับการประเมินจากชิ้นเนื้อที่ได้จากการเจาะตรวจหรือการผ่าตัด โดยพิจารณาเฉพาะส่วนประกอบของเนื้องอกที่มีความรุนแรงเท่านั้น จากลักษณะเหล่านี้ มะเร็งเต้านมถูกจัดประเภทดังนี้: ลูมินัล A (ER+ และ/หรือ PgR+, HER2-, Ki-67<20%), ลูมินัล B (ER+ และ/หรือ PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), ลูมินัล B-HER2+ (ER และ/หรือ PgR+, HER2+), HER2+ (ER และ PgR-, HER2+) หรือทริปเปิลเนกาทีฟ (ER และ PgR-, HER2-)
ก่อนประเมินสถานะการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1 และ BRCA2 ทีมสหวิชาชีพซึ่งประกอบด้วยแพทย์ผู้เชี่ยวชาญด้านมะเร็ง นักพันธุศาสตร์ และนักจิตวิทยา ได้ทำการปรึกษาด้านพันธุศาสตร์ของเนื้องอกสำหรับผู้ป่วยแต่ละรายเพื่อตรวจสอบการมีอยู่ของยีน BRCA1 และ/หรือ BRCA2 หรือบุคคลที่มีความเสี่ยงสูงต่อ PV ในยีน BRCA2 การคัดเลือกผู้ป่วยดำเนินการตามแนวทางของสมาคมมะเร็งวิทยาแห่งอิตาลี (AIOM) และคำแนะนำในท้องถิ่นของซิซิลี30,31 เกณฑ์เหล่านี้รวมถึง: (i) ประวัติครอบครัวของการกลายพันธุ์ที่ก่อโรคที่ทราบในยีนที่ไวต่อโรค (เช่น BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) เพศชายที่เป็นมะเร็งเต้านม; (iii) ผู้ที่เป็นมะเร็งเต้านมและมะเร็งรังไข่; (iv) เพศหญิงที่เป็นมะเร็งเต้านม <36 ปี, มะเร็งเต้านมชนิด TNBC <60 ปี หรือมะเร็งเต้านมสองข้าง <50 ปี; (v) ประวัติทางการแพทย์ส่วนบุคคลของมะเร็งเต้านม <50 ปี และอย่างน้อยหนึ่งคนในญาติสายตรง: (a) มะเร็งเต้านม <50 ปี (b) มะเร็งรังไข่ชนิดไม่สร้างเมือกและไม่ก้ำกึ่งในทุกช่วงอายุ; (c) มะเร็งเต้านมสองข้าง; (d) มะเร็งเต้านมในผู้ชาย; (e) มะเร็งตับอ่อน; (f) มะเร็งต่อมลูกหมาก; (vi) ประวัติส่วนตัวเป็นมะเร็งเต้านมมากกว่า 50 ปี และประวัติครอบครัวเป็นมะเร็งเต้านม มะเร็งรังไข่ หรือมะเร็งตับอ่อนสำหรับญาติสนิทลำดับที่หนึ่งสองคนขึ้นไป (รวมถึงญาติสนิทลำดับที่หนึ่งของเธอเอง); (vii) ประวัติส่วนตัวเป็นมะเร็งรังไข่และอย่างน้อยหนึ่งคนในญาติสนิทลำดับที่หนึ่ง: (a) มะเร็งเต้านมน้อยกว่า 50 ปี; (b) มะเร็งรังไข่ชนิดไม่สร้างเมือก; (c) มะเร็งเต้านมสองข้าง; (d) มะเร็งเต้านมในผู้ชาย; (vii) ผู้หญิงที่เป็นมะเร็งรังไข่ชนิดซีรัสเกรดสูง
ทำการเก็บตัวอย่างเลือดจากหลอดเลือดส่วนปลายปริมาณ 20 มิลลิลิตรจากผู้ป่วยแต่ละรายลงในหลอดบรรจุสารกันเลือดแข็ง EDTA (BD Biosciences) จากนั้นทำการแยกดีเอ็นเอจีโนมจากตัวอย่างเลือดครบส่วนปริมาณ 0.7 มิลลิลิตรโดยใช้ชุดอุปกรณ์แยกดีเอ็นเอ QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italy) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต และนำไปวิเคราะห์หาปริมาณด้วยเครื่อง Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) การเพิ่มความเข้มข้นของเป้าหมายและการเตรียมไลบรารีจะดำเนินการโดย Oncomine™ BRCA Research Assay Chef พร้อมที่จะโหลดลงในชุดน้ำยา Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit สำหรับการเตรียมไลบรารีแบบอัตโนมัติตามคำแนะนำของผู้ผลิต ชุดอุปกรณ์ประกอบด้วยกลุ่มไพรเมอร์ PCR แบบมัลติเพล็กซ์สองกลุ่มที่สามารถใช้ศึกษา BRCA1 (NM_007300.3) และ BRCA2 (NM_000059.3) ทั้งหมด โดยสรุปคือ เติม DNA ตัวอย่างที่เจือจางแล้ว 15 µL (10 ng) ลงในเพลทที่มีบาร์โค้ดสำหรับการเตรียมไลบรารี และโหลดน้ำยาและวัสดุสิ้นเปลืองทั้งหมดลงในเครื่อง Ion Chef™ จากนั้นจึงทำการเตรียมไลบรารีแบบอัตโนมัติและการรวมไลบรารีตัวอย่างที่มีบาร์โค้ดบนเครื่อง Ion Chef™ จำนวนไลบรารีที่เตรียมไว้จะถูกประเมินโดยเครื่องวัดฟลูออโรเมตร Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต สุดท้าย ไลบรารีจะถูกรวมเข้าด้วยกันในอัตราส่วนโมลเท่ากันใน Ion Chef™ นำหลอดตัวอย่างจากห้องสมุด (หลอดที่มีบาร์โค้ด) ไปใส่ในเครื่อง Ion Chef™ ทำการจัดลำดับดีเอ็นเอโดยใช้เครื่อง Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) ร่วมกับชิป Ion 510 (Thermo Fisher Scientific) วิเคราะห์ข้อมูลโดยใช้โปรแกรม Amplicon Suite (SmartSeq srl) และซอฟต์แวร์ Ion Reporter
การตั้งชื่อตัวแปรทั้งหมดเป็นไปตามแนวทางปัจจุบันของ Human Genome Variation Consortium ซึ่งสามารถดูได้ทางออนไลน์ (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen) ความสำคัญทางคลินิกของตัวแปร BRCA1/2 ถูกกำหนดโดยใช้การจำแนกประเภทของ International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) และการปรึกษาฐานข้อมูลต่างๆ เช่น ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD และ UMD การจำแนกประเภทนี้ประกอบด้วยห้าประเภทความเสี่ยงที่แตกต่างกัน ได้แก่ ไม่เป็นอันตราย (ประเภทที่ 1), มีแนวโน้มไม่เป็นอันตราย (ประเภทที่ 2), ตัวแปรที่มีความสำคัญไม่แน่นอน (VUS, ประเภทที่ 3), มีแนวโน้มก่อโรค (ประเภทที่ 4) และก่อโรค (ประเภทที่ 5) VarSome ยังวิเคราะห์ผลกระทบของการกลายพันธุ์ต่อโครงสร้างและหน้าที่ของโปรตีน ซึ่งเป็นเครื่องมือที่มีประโยชน์ที่สามารถเข้าถึงฐานข้อมูลได้ 30 ฐานข้อมูล32
เพื่อกำหนดความสำคัญทางคลินิกที่เป็นไปได้ให้กับ VUS แต่ละตัว ได้มีการใช้อัลกอริทึมการทำนายโปรตีนด้วยคอมพิวเตอร์ดังต่อไปนี้: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) และ Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php) ตัวแปรที่จัดอยู่ในคลาส 1 และ 2 ถือว่าเป็นแบบปกติ (wild type)
การจัดลำดับดีเอ็นเอแบบ Sanger ยืนยันการมีอยู่ของตัวแปรก่อโรคแต่ละตัว โดยสรุปคือ มีการออกแบบไพรเมอร์เฉพาะคู่หนึ่งสำหรับตัวแปรที่ตรวจพบแต่ละตัว โดยใช้ลำดับอ้างอิงของยีน BRCA1 และ BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 และ NG_012772.3, NM_000059.3 ตามลำดับ) จากนั้นจึงทำการ PCR แบบกำหนดเป้าหมาย ตามด้วยการจัดลำดับดีเอ็นเอแบบ Sanger
ผู้ป่วยที่ตรวจไม่พบยีน BRCA1/2 จะได้รับการตรวจซ้ำด้วยวิธี multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) ตามคำแนะนำของผู้ผลิต เพื่อประเมินการมีอยู่ของการจัดเรียงจีโนมขนาดใหญ่ (LGR) โดยสรุปคือ ตัวอย่าง DNA จะถูกทำให้เสียสภาพ และใช้โพรบเฉพาะยีน BRCA1 และ BRCA2 มากถึง 60 ตัว ซึ่งแต่ละตัวจะตรวจจับลำดับ DNA เฉพาะที่มีความยาวประมาณ 60 นิวคลีโอไทด์ ผลิตภัณฑ์จากการขยายโพรบ ซึ่งประกอบด้วยชุดของแอมพลิคอน PCR ที่ไม่ซ้ำกัน จะถูกวิเคราะห์โดยวิธี capillary electrophoresis และซอฟต์แวร์ Cofalyser.Net ร่วมกับตาราง Cofalyser เฉพาะชุดที่เหมาะสม (www.mrcholland.com)
ตัวแปรทางคลินิกและพยาธิวิทยาที่เลือก (ระดับเนื้อเยื่อวิทยาและดัชนีการแพร่กระจาย Ki-67%) มีความสัมพันธ์กับการมีอยู่ของ BRCA1/2 PV โดยคำนวณโดยใช้ซอฟต์แวร์ Prism เวอร์ชัน 8.4 โดยใช้การทดสอบ Fisher's exact test โดยถือว่าค่า p < 0.05 มีนัยสำคัญทางสถิติ
ระหว่างเดือนมกราคม 2560 ถึงมีนาคม 2564 มีผู้ป่วย 455 รายได้รับการตรวจคัดกรองการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1/2 ในเซลล์สืบพันธุ์ การทดสอบการกลายพันธุ์ดำเนินการที่ศูนย์มะเร็งวิทยาและโลหิตวิทยาเชิงทดลองของโรงพยาบาลโพลีคลินิก ตามแนวทางของซิซิลี (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020) ในเขตซานมาร์โค เมืองคาตาเนีย มีผู้ป่วยมะเร็งเต้านม 389 ราย มะเร็งรังไข่ 37 ราย มะเร็งตับอ่อน 16 ราย มะเร็งต่อมลูกหมาก 8 ราย และมะเร็งผิวหนังเมลาโนมา 5 ราย การกระจายของผู้ป่วยตามประเภทของมะเร็งและผลการวิเคราะห์แสดงในรูปที่ 1
รูปที่ 1 แสดงแผนผังขั้นตอนการศึกษาโดยสรุป ผู้ป่วยที่เป็นมะเร็งเต้านม เมลาโนมา ตับอ่อน ต่อมลูกหมาก หรือรังไข่ จะได้รับการตรวจหาการกลายพันธุ์ในยีน BRCA1 และ BRCA2
คำย่อ: PVs, ตัวแปรก่อโรค; VUS, ตัวแปรที่มีความสำคัญไม่แน่นอน; WT, ลำดับ BRCA1/2 แบบปกติ
เราเลือกทำการศึกษาเฉพาะกลุ่มผู้ป่วยมะเร็งเต้านม โดยผู้ป่วยมีอายุเฉลี่ย 49 ปี (ช่วงอายุ 23-89 ปี) และส่วนใหญ่เป็นเพศหญิง (n=376 หรือ 97%)
ในจำนวนผู้เข้าร่วมการศึกษาทั้งหมด 64 คน (17%) มีการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1/2 และทั้งหมดเป็นเพศหญิง 35 คน (9%) มี PV และ 29 คน (7.5%) มี VUS โดย 17 คน (48.6%) จาก 35 ตัวแปรที่ก่อให้เกิดโรค เกิดขึ้นในยีน BRCA1 และ 18 คน (51.4%) ในยีน BRCA2 ขณะที่ 5 VUS เกิดขึ้นในยีน BRCA1 (17.2%) และ 24 คน (82.8%) ในยีน BRCA2 (ภาพที่ 1 และ 2) ไม่พบ LGR ในการวิเคราะห์ MLPA
รูปที่ 2 การวิเคราะห์การกลายพันธุ์ของยีน BRCA1 และ BRCA2 ในผู้ป่วยมะเร็งเต้านม 389 ราย (A) การกระจายตัวของตัวแปรที่ก่อโรค (PV) (สีแดง) ตัวแปรที่มีความสำคัญไม่แน่นอน (VUS) (สีส้ม) และ WT (สีน้ำเงิน) ในผู้ป่วยมะเร็งเต้านม 389 ราย (B) ผู้ป่วยมะเร็งเต้านม 389 ราย มี 35 ราย (9%) ที่มีตัวแปรที่ก่อโรค (PV) ของยีน BRCA1/2 ในจำนวนนี้ 17 ราย (48.6%) เป็นพาหะของตัวแปร PV ของยีน BRCA1 (สีแดงเข้ม) และ 18 ราย (51.4%) เป็นพาหะของตัวแปร PV ของยีน BRCA2 (สีแดงอ่อน) (C) ผู้ป่วย 29 ราย (7.5%) จาก 389 ราย เป็นพาหะของตัวแปร VUS โดย 5 ราย (17.2%) เป็นพาหะของยีน BRCA1 (สีส้มเข้ม) และ 24 ราย (82.8%) เป็นพาหะของยีน BRCA2 (สีส้มอ่อน)
คำย่อ: PVs, ตัวแปรก่อโรค; VUS, ตัวแปรที่มีความสำคัญไม่แน่นอน; WT, ลำดับ BRCA1/2 แบบปกติ
ต่อไปเราได้ตรวจสอบความชุกของชนิดย่อยโมเลกุลของมะเร็งเต้านมในผู้ป่วยที่มีการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1/2 การกระจายตัวประกอบด้วย ลูมินัล A 2 ราย (5.7%), ลูมินัล B 15 ราย (42.9%), ลูมินัล B-HER2+ 3 ราย (8.6%), HER2+ 2 ราย (5.7%) และ TNBC 13 ราย (37.1%) ในกลุ่มผู้ป่วยที่มี BRCA1 เป็นบวก พบว่า 5 ราย (29.4%) เป็นมะเร็งเต้านมชนิดลูมินัล B, 2 ราย (11.8%) เป็นโรค HER2+ และ 10 ราย (58.8%) เป็น TNBC เนื้องอกที่ไม่มีการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1 จะเป็นลูมินัล A หรือลูมินัล B-HER2+ (รูปที่ 3) ในกลุ่มย่อยที่มี BRCA2 เป็นบวก พบว่า 10 ราย (55.6%) เป็นลูมินัล B, 3 ราย (16.7%) เป็นลูมินัล B-HER2+, 3 ราย (16.7%) เป็น TNBC และ 2 ราย (58.8%) เป็น TNBC (11.1%) เป็นชนิดลูมินัล A (รูปที่ 3) ไม่พบเนื้องอก HER2+ ในกลุ่มนี้ ดังนั้น การกลายพันธุ์ของยีน BRCA1 พบได้บ่อยในผู้ป่วย TNBC ในขณะที่การเปลี่ยนแปลงของยีน BRCA2 พบได้มากในบุคคลชนิดลูมินัล B
รูปที่ 3 ความชุกของชนิดย่อยของมะเร็งเต้านมในผู้ป่วยที่มีการกลายพันธุ์ก่อโรคในยีน BRCA1 และ BRCA2 ฮิสโตแกรมแสดงการกระจายตัวของการกลายพันธุ์ BRCA1- (สีแดงเข้ม) และ BRCA2- (สีแดงอ่อน) ในกลุ่มชนิดย่อยทางโมเลกุลของมะเร็งเต้านม ตัวเลขที่รายงานภายในแต่ละช่องแสดงถึงเปอร์เซ็นต์ของผู้ป่วยที่มีการกลายพันธุ์ BRCA1 และ BRCA2 สำหรับชนิดย่อยของมะเร็งเต้านมแต่ละชนิด
คำย่อ: PVs, การกลายพันธุ์ที่ก่อให้เกิดโรค; HER2+, ตัวรับปัจจัยการเจริญเติบโตของผิวหนังมนุษย์ 2 ที่เป็นบวก; TNBC, มะเร็งเต้านมชนิดสามลบ
ต่อมา เราได้ประเมินประเภทและตำแหน่งของยีน BRCA1 และ BRCA2 PV ใน BRCA1 PV เราพบการกลายพันธุ์แบบจุดเดียว (SNV) 7 ตำแหน่ง การลบ 6 ตำแหน่ง การเพิ่มจำนวน 3 ตำแหน่ง และการแทรก 1 ตำแหน่ง มีเพียงการกลายพันธุ์เดียว (c.5522delG) ที่เป็นการค้นพบใหม่ การกลายพันธุ์ BRCA1 PV ที่พบได้บ่อยที่สุดในผู้ป่วยทั้งสองรายคือ c.5035_5039delCTAAT การเปลี่ยนแปลงนี้เกี่ยวข้องกับการลบนิวคลีโอไทด์ห้าตัว (CTAAT) ในเอ็กซอน 15 ของ BRCA1 ส่งผลให้กรดอะมิโนลิวซีนถูกแทนที่ด้วยไทโรซีนที่โคดอน 1679 และเนื่องจากการเลื่อนเฟรมการแปลที่มีโคดอนหยุดทางเลือกที่คาดการณ์ไว้ ทำให้เกิดการตัดทอนโปรตีนก่อนกำหนด การเปลี่ยนแปลงอื่นๆ ทั้งหมดตรวจพบเพียงกรณีเดียวเท่านั้น ที่น่าสังเกตคือ หนึ่งใน PV ที่รายงานตั้งอยู่ในบริเวณคอนเซนซัสของไซต์การเชื่อมต่อ (c.4357+1G>T) (ตาราง) 1).
เกี่ยวกับการตรวจหา BRCA2 PV เราพบการลบ 6 ตำแหน่ง, SNV 6 ตำแหน่ง และการเพิ่มจำนวน 2 ตำแหน่ง ไม่มีการเปลี่ยนแปลงใดที่พบเป็นของใหม่ มีการกลายพันธุ์ซ้ำ 3 ตำแหน่งในกลุ่มตัวอย่างของเรา ได้แก่ c.428dup และ c.8487+1G>A พบใน 3 ราย ตามด้วย c.5851_5854delAGTT พบใน 2 ราย การเปลี่ยนแปลง c.428dup เกี่ยวข้องกับการเพิ่มจำนวน C ในเอ็กซอน 5 ของ BRCA2 ซึ่งคาดว่าจะสร้างโปรตีนที่สั้นลงและไม่ทำงาน การกลายพันธุ์ c.8487+1G>A เกิดขึ้นในบริเวณอินทรอนของ BRCA2 อินทรอน 19 (± 1,2) และส่งผลต่อลำดับคอนเซนซัสของการสไปลซ์ ส่งผลให้การสไปลซ์เปลี่ยนแปลงไป ทำให้โปรตีนผิดปกติหรือไม่มีอยู่ การกลายพันธุ์ที่ก่อโรค c.5851_5854delAGTT เกิดจากการลบ 4 นิวคลีโอไทด์จากตำแหน่งนิวคลีโอไทด์ 5851 ถึง การกลายพันธุ์ 5854 ในเอ็กซอนที่ 10 ของยีน BRCA2 ส่งผลให้เกิดการเลื่อนเฟรมการแปลรหัสโดยมีรหัสหยุดทางเลือกที่คาดการณ์ไว้ (p.S1951WfsTer) ที่น่าสังเกตคือ ดังที่ได้รายงานไว้ก่อนหน้านี้ การเปลี่ยนแปลงทั้ง c.631G>A และ c.7008-2A>T ถูกตรวจพบในผู้ป่วยรายเดียวกัน34 การกลายพันธุ์แรกเกี่ยวข้องกับการแทนที่อะดีโนซีน (A) ในเอ็กซอนที่ 7 ของ BRCA2 ด้วยนิวคลีโอไทด์ที่มีกัวนีน (G) ส่งผลให้เกิดการเปลี่ยนแปลงจากวาลีนเป็นไอโซลิวซีนที่รหัส 211 กรดอะมิโนไอโซลิวซีนเป็นกรดอะมิโนที่มีคุณสมบัติคล้ายคลึงกันมาก การเปลี่ยนแปลงนี้ส่งผลต่อการตัดต่อ mRNA ปกติ การกลายพันธุ์ที่สองตั้งอยู่ในบริเวณอินทรอนิกและส่งผลให้เกิดการแทนที่ A สองครั้งด้วยไทมีน (T) ก่อนเอ็กซอนที่ 13 ของยีนที่เข้ารหัส BRCA2 การเปลี่ยนแปลง c.7008-2A>T อาจสร้างทรานสคริปต์หลายรายการที่มีความยาวต่างกัน นอกจากนี้ ใน ในกลุ่ม BRCA2 PVs พบว่า 4 ใน 18 การเปลี่ยนแปลง (22.2%) เกิดขึ้นในบริเวณอินทรอน
จากนั้น เราได้ทำการแมปตำแหน่งการกลายพันธุ์ที่เป็นอันตรายของ BRCA1/2 ในโดเมนการทำงานและบริเวณการจับโปรตีน (รูปที่ 4) ในยีน BRCA1 พบว่า 50% ของ PV อยู่ในบริเวณคลัสเตอร์มะเร็งเต้านม (BCCR) ในขณะที่ 22% ของการกลายพันธุ์อยู่ในบริเวณคลัสเตอร์มะเร็งรังไข่ (OCCR) (รูปที่ 4A) ใน BRCA2 PV พบว่า 35.7% ของตัวแปรอยู่ในบริเวณ BCCR และ 42.8% ของการกลายพันธุ์อยู่ใน OCCR (รูปที่ 4B) ต่อมา เราได้ประเมินตำแหน่งของ PV ภายในโดเมนโปรตีน BRCA1 และ BRCA2 สำหรับโปรตีน BRCA1 เราพบ PV สามตำแหน่งในโดเมนลูปและคอยล์คอยล์ และการกลายพันธุ์สองตำแหน่งในโดเมน BRCT (รูปที่ 4A) สำหรับโปรตีน BRCA2 พบว่า PV 4 ตำแหน่งอยู่ในโดเมน BRC repeat ในขณะที่ตรวจพบการเปลี่ยนแปลงในอินทรอนิก 3 ตำแหน่งและเอ็กซอน 3 ตำแหน่งในบริเวณการจับโอลิโก/โอลิโกแซ็กคาไรด์ โดเมน (OB) และหอคอย (T) (รูปที่ 4B)
รูปที่ 4 แผนภาพแสดงโครงสร้างโปรตีน BRCA1 และ BRCA2 และตำแหน่งของตัวแปรที่ก่อโรค รูปนี้แสดงการกระจายตัวของตัวแปรที่ก่อโรค BRCA1 (A) และ BRCA2 (B) ในผู้ป่วยมะเร็งเต้านม การกลายพันธุ์ในส่วนเอ็กซอนแสดงด้วยสีน้ำเงิน ในขณะที่การกลายพันธุ์ในส่วนอินทรอนแสดงด้วยสีส้ม ความสูงของแท่งกราฟแสดงจำนวนผู้ป่วย โปรตีน BRCA1 และ BRCA2 และโดเมนการทำงานของพวกมันแสดงไว้ในรูป (A) โปรตีน BRCA1 ประกอบด้วยโดเมนแบบวน (RING) และลำดับการกำหนดตำแหน่งในนิวเคลียส (NLS) โดเมนแบบขดเกลียว โดเมนคลัสเตอร์ SQ/TQ (SCD) และโดเมนปลาย C ของ BRCA1 (BRCT) (B) โปรตีน BRCA2 ประกอบด้วย BRC ซ้ำ 8 ครั้ง โดเมนจับกับ DNA ที่มีโดเมนแบบเกลียว (Helical) โครงสร้างจับกับโอลิโกนิวคลีโอไทด์/โอลิโกแซ็กคาไรด์ (OB) 3 โครงสร้าง โดเมนแบบหอคอย (T) และ NLS ที่ด้าน C บริเวณที่เรียกว่า Breast Cancer Cluster Region (BCCR) และ บริเวณคลัสเตอร์มะเร็งรังไข่ (OCCR) แสดงอยู่ด้านล่าง* แสดงถึงการกลายพันธุ์ที่กำหนดรหัสหยุด
จากนั้นเราได้ตรวจสอบลักษณะทางคลินิกและพยาธิวิทยาของมะเร็งเต้านมที่อาจมีความสัมพันธ์กับการมีอยู่ของ BRCA1/2 PV โดยมีบันทึกทางการแพทย์ที่สมบูรณ์สำหรับผู้ป่วย 181 รายที่ไม่มี BRCA1/2 (ผู้ที่ไม่มียีนกลายพันธุ์) และผู้ป่วยที่มียีนกลายพันธุ์ทั้งหมด (n = 35) พบความสัมพันธ์ระหว่างอัตราการเพิ่มจำนวนของเซลล์มะเร็งและระดับความรุนแรง
เราคำนวณการกระจายตัวของ Ki-67 โดยอิงจากค่ามัธยฐานของกลุ่มตัวอย่างของเรา (25%, ช่วง <10-90%) ผู้ที่มีค่า Ki-67 < 25% ถูกกำหนดให้เป็น "Ki-67 ต่ำ" ในขณะที่บุคคลที่มีค่า ≥ 25% ถือว่าเป็น "Ki-67 สูง" พบความแตกต่างของ Ki-67 อย่างมีนัยสำคัญ (p<0.01) ระหว่างผู้ที่ไม่มียีนกลายพันธุ์และผู้ที่มียีนกลายพันธุ์ BRCA1 PV (รูปที่ 5A)
รูปที่ 5 ความสัมพันธ์ของ Ki-67 กับการกระจายเกรดในผู้หญิงที่เป็นมะเร็งเต้านมที่มีและไม่มี BRCA1 และ BRCA2 PVs (A) แผนภาพกล่องแสดงค่ามัธยฐานของ Ki-67 ในผู้ป่วยมะเร็งเต้านมที่ไม่มียีนกลายพันธุ์ 181 ราย เทียบกับผู้ป่วยที่มี BRCA1 (18) หรือ BRCA2 (17) PVs ค่า P ที่ต่ำกว่า 0.5 ถือว่ามีความสำคัญทางสถิติ (B) ฮิสโตแกรมแสดงการจัดกลุ่มผู้ป่วยมะเร็งเต้านมออกเป็นกลุ่มเกรดทางเนื้อเยื่อวิทยา (G2 และ G3) ตามสถานะการกลายพันธุ์ของ BRCA1 และ BRCA2 (ผู้ป่วย WT, ผู้ที่มียีนกลายพันธุ์ BRCA1 และ BRCA2 PVs)
ในทำนองเดียวกัน เราได้ตรวจสอบว่าระดับความรุนแรงของเนื้องอกมีความสัมพันธ์กับการมีอยู่ของ BRCA1/2 PV หรือไม่ เนื่องจากไม่มีมะเร็งเต้านมระดับ G1 ในกลุ่มประชากรของเรา เราจึงแบ่งผู้ป่วยออกเป็นสองกลุ่ม (G2 หรือ G3) สอดคล้องกับผลลัพธ์ของ Ki-67 การวิเคราะห์เผยให้เห็นความสัมพันธ์ที่มีนัยสำคัญทางสถิติระหว่างระดับความรุนแรงของเนื้องอกและการกลายพันธุ์ของ BRCA1 โดยพบเนื้องอกระดับ G3 ในผู้ที่มียีนกลายพันธุ์ BRCA1 มากกว่าผู้ที่ไม่มียีนกลายพันธุ์ (p<0.005) (รูปที่ 5B)
ความก้าวหน้าในเทคโนโลยีการจัดลำดับดีเอ็นเอทำให้เกิดความก้าวหน้าอย่างที่ไม่เคยมีมาก่อนในการตรวจทางพันธุกรรม BRCA1/2 ซึ่งมีนัยสำคัญอย่างยิ่งสำหรับผู้ป่วยที่มีประวัติครอบครัวเป็นมะเร็ง จนถึงปัจจุบัน มีการระบุและจำแนกรูปแบบ BRCA1/2 ประมาณ 20,000 รูปแบบตามมาตรฐานของ American Society of Medical Genetics 35 และระบบ ENIGMA 35,36 เป็นที่ทราบกันดีว่าสเปกตรัมการกลายพันธุ์ของ BRCA1/2 มีความแตกต่างกันอย่างมากในแต่ละภูมิภาคทางภูมิศาสตร์ 37 ภายในประเทศอิตาลี อัตราการกลายพันธุ์ของ BRCA1/2 อยู่ในช่วง 8% ถึง 37% ซึ่งแสดงให้เห็นถึงความแปรปรวนภายในประเทศที่กว้างขวาง 38,39 ด้วยประชากรเกือบ 5 ล้านคน ซิซิลีเป็นภูมิภาคที่ใหญ่เป็นอันดับห้าของอิตาลีในแง่ของจำนวนประชากร แม้ว่าจะมีข้อมูลเกี่ยวกับการกระจายตัวของ BRCA1/2 ในซิซิลีตะวันตก แต่ก็ไม่มีหลักฐานที่ครอบคลุมในส่วนตะวันออกของเกาะ
การศึกษาของเราเป็นหนึ่งในรายงานแรกๆ เกี่ยวกับอุบัติการณ์ของ BRCA1/2 PV ในผู้ป่วยมะเร็งเต้านมในซิซิลีตะวันออก²⁸ เรามุ่งเน้นการวิเคราะห์ไปที่มะเร็งเต้านม เนื่องจากเป็นโรคที่พบได้บ่อยที่สุดในกลุ่มตัวอย่างของเรา
เมื่อทำการทดสอบผู้ป่วยมะเร็งเต้านม 389 ราย พบว่า 9% มีการกลายพันธุ์แบบ PV ของยีน BRCA1/2 โดยกระจายอย่างเท่าๆ กันระหว่างยีน BRCA1 และ BRCA2 ผลลัพธ์เหล่านี้สอดคล้องกับผลที่เคยรายงานไว้ในประชากรชาวอิตาลี²⁸ ที่น่าสนใจคือ 3% (13/389) ของกลุ่มตัวอย่างของเราเป็นเพศชาย อัตรานี้สูงกว่าที่คาดไว้สำหรับมะเร็งเต้านมในเพศชาย (1% ของมะเร็งเต้านมทั้งหมด)⁴⁰ ซึ่งสะท้อนให้เห็นถึงการคัดเลือกประชากรของเราโดยพิจารณาจากความเสี่ยงของการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1/2 อย่างไรก็ตาม ไม่มีผู้ชายคนใดในกลุ่มนี้พัฒนาการกลายพันธุ์แบบ PV ของยีน BRCA1/2 ดังนั้นพวกเขาจึงเป็นผู้ที่มีคุณสมบัติเหมาะสมสำหรับการวิเคราะห์ทางโมเลกุลเพิ่มเติมเพื่อตัดความเป็นไปได้ของการกลายพันธุ์ที่พบได้น้อยกว่า เช่น PALB2, RAD51C และ D เป็นต้น การกลายพันธุ์ที่มีความสำคัญไม่แน่นอนถูกค้นพบใน 7% ของผู้ป่วยที่พบการกลายพันธุ์แบบ VUS ของยีน BRCA2 แม้แต่ผลลัพธ์นี้ก็สอดคล้องกับหลักฐานที่มีอยู่ก่อนหน้านี้^28,41,42
เมื่อเราวิเคราะห์การกระจายตัวของชนิดย่อยโมเลกุลของมะเร็งเต้านมในผู้หญิงที่มีการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1/2 เราได้ยืนยันความสัมพันธ์ที่ทราบกันดีอยู่แล้วระหว่าง TNBC และ BRCA1 PV (58.8%) และระหว่างมะเร็งเต้านมชนิดลูมินัล B และ BRCA2 PV (55.6%)16,43 เนื้องอกชนิดลูมินัล A และ HER2+ ในผู้ที่มียีน BRCA1 และ BRCA2 PV สอดคล้องกับข้อมูลวรรณกรรมที่มีอยู่แล้ว16,43
จากนั้นเราจะมุ่งเน้นไปที่ประเภทและตำแหน่งของ BRCA1/2 PV ในกลุ่มตัวอย่างของเรา BRCA1 PV ที่พบมากที่สุดคือ c.5035_5039delCTAAT แม้ว่า Incorvaia et al. แม้ว่าจะไม่ได้อธิบายรูปแบบนี้ในกลุ่มผู้ป่วยชาวซิซิลี แต่ผู้เขียนคนอื่นๆ ได้รายงานว่าเป็น BRCA1 PV ในเซลล์สืบพันธุ์34 พบ BRCA1 PV หลายตัวในกลุ่มผู้ป่วยของเรา เช่น c.181T>G, c.514del, c.3253dupA และ c.5266dupC ซึ่งพบในซิซิลี28 ในจำนวนนี้ การกลายพันธุ์ของ BRCA1 สองแบบ (c.181T>G และ c.5266dupC) พบได้ทั่วไปในชาวยิวแอชเคนาซีในยุโรปตะวันออกและกลาง (โปแลนด์ เช็ก สโลวีเนีย ออสเตรีย ฮังการี เบลารุส และเยอรมัน) 44,45 และในสหรัฐอเมริกาและอาร์เจนตินา เพิ่งได้รับการกำหนดให้เป็น "รูปแบบเซลล์สืบพันธุ์ที่เกิดขึ้นซ้ำ" ในผู้ป่วยชาวอิตาลีที่เป็นมะเร็งเต้านมและมะเร็งรังไข่ รูปแบบ 34c.514del เคยถูกระบุในผู้ป่วยมะเร็งเต้านม 8 รายจากทางตอนเหนือของซิซิลีในปาแลร์โมและเมสซีนา ที่น่าสนใจคือ แม้แต่ Incorvaia et al. พบตัวแปร c.3253dupA ในบางครอบครัวในเมืองคาตาเนีย28 ตัวแปร BRCA2 PV ที่เป็นตัวแทนมากที่สุดคือ c.428dup, c.5851_5854delAGTT และตัวแปรอินทรอนิกส์ c.8487+1G>A ซึ่งได้รับการรายงานโดยละเอียดมากขึ้น 28 ในผู้ป่วยในเมืองปาแลร์โมที่มี c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV พบในครัวเรือนทางตะวันตกเฉียงเหนือของซิซิลี โดยส่วนใหญ่ในภูมิภาคทราปานีและปาแลร์โม ในขณะที่ c.5851_5854delAGTT PV พบในครัวเรือนทางตะวันตกเฉียงเหนือของซิซิลี ตัวแปร 8487+1G>A พบได้บ่อยกว่าในผู้ป่วยจากเมืองเมสซีนา ปาแลร์โม และกัลตานิสเซตตา28 Rebbeck et al. ก่อนหน้านี้ได้มีการอธิบายถึงการเปลี่ยนแปลง c.5851_5854delAGTT ในโคลอมเบีย37 การกลายพันธุ์ BRCA2 PV อีกแบบหนึ่งคือ c.631+1G>A พบในผู้ป่วยมะเร็งเต้านมและมะเร็งรังไข่จากซิซิลี (อากริเจนโต ซิรากูซา และรากูซา)28 ที่น่าสังเกตคือ เราพบการอยู่ร่วมกันของการกลายพันธุ์ BRCA2 สองแบบ (BRCA2 c.631G>A และ c.7008-2A>T) ในผู้ป่วยรายเดียวกัน ซึ่งเราสันนิษฐานว่ามีการแยกตัวแบบซิส ดังที่เคยมีรายงานไว้ก่อนหน้านี้34,46 การกลายพันธุ์แบบคู่ของ BRCA2 เหล่านี้พบได้บ่อยในภูมิภาคอิตาลี และพบว่าทำให้เกิดรหัสหยุดก่อนกำหนด ส่งผลต่อการตัดต่อ mRNA และทำให้โปรตีน BRCA2 ทำงานล้มเหลว47,48
นอกจากนี้ เรายังทำการแมป PV ของ BRCA1 และ BRCA2 ในบริเวณ OCCR และ BCCR ที่คาดการณ์ไว้ในโดเมนโปรตีนและยีน ซึ่งบริเวณเหล่านี้ได้รับการอธิบายโดย Rebbeck et al. ว่าเป็นพื้นที่เสี่ยงต่อการเกิดมะเร็งรังไข่และมะเร็งเต้านมตามลำดับ49 อย่างไรก็ตาม หลักฐานเกี่ยวกับความสัมพันธ์ระหว่างตำแหน่งของตัวแปรทางพันธุกรรมและความเสี่ยงต่อมะเร็งเต้านมหรือมะเร็งรังไข่ยังคงเป็นที่ถกเถียงกันอยู่28,50-52 ในประชากรของเรา PV ของ BRCA1 ส่วนใหญ่ตั้งอยู่ในบริเวณ BCCR ในขณะที่ PV ของ BRCA2 ส่วนใหญ่ตั้งอยู่ในบริเวณ OCCR อย่างไรก็ตาม เราไม่สามารถหาความสัมพันธ์ใดๆ ระหว่างบริเวณ OCCR และ BCCR ที่คาดการณ์ไว้กับลักษณะของมะเร็งเต้านมได้ นี่อาจเป็นเพราะจำนวนผู้ป่วยที่มีการกลายพันธุ์ของ BRCA1/2 มีจำกัด จากมุมมองของโดเมนโปรตีน PV ของ BRCA1 กระจายอยู่ทั่วทั้งโปรตีน และการเปลี่ยนแปลงของ BRCA2 พบได้มากในโดเมน BRC repeat
สุดท้ายนี้ เราได้ทำการหาความสัมพันธ์ระหว่างลักษณะทางคลินิกและพยาธิวิทยาของมะเร็งเต้านมกับ BRCA1/2 PV เนื่องจากจำนวนผู้ป่วยที่รวมอยู่ในการศึกษามีจำกัด เราจึงพบความสัมพันธ์ที่มีนัยสำคัญระหว่าง Ki-67 กับเกรดของเนื้องอกเท่านั้น แม้ว่าการประเมินและการตีความ Ki-67 ยังคงเป็นที่ถกเถียงกันอยู่บ้าง แต่ก็เป็นที่แน่นอนว่าอัตราการเพิ่มจำนวนเซลล์ที่สูงนั้นสัมพันธ์กับความเสี่ยงที่เพิ่มขึ้นของการกลับมาเป็นซ้ำของโรคและอัตราการรอดชีวิตที่ลดลง ปัจจุบัน ค่าตัดสำหรับการแยกแยะระหว่าง Ki-67 “สูง” และ “ต่ำ” คือ 20% อย่างไรก็ตาม เกณฑ์นี้ใช้ไม่ได้กับกลุ่มผู้ป่วยที่มีการกลายพันธุ์ของ BRCA1/2 ของเรา ซึ่งมีค่า Ki-67 มัธยฐานอยู่ที่ 25% แนวโน้มของอัตรา Ki-67 ที่สูงนี้สามารถอธิบายได้จากความชุกในกลุ่มผู้ป่วย luminal B และ TNBC ของเรา ซึ่งมีเนื้องอก luminal A อยู่เพียงเล็กน้อย อย่างไรก็ตาม หลักฐานบางอย่างดูเหมือนจะชี้ให้เห็นว่าค่าตัด Ki-67 ที่สูงกว่า (25–30%) อาจช่วยจำแนกผู้ป่วยตามการพยากรณ์โรคได้ดีขึ้น53,54 จากผลการวิเคราะห์ของเรา ความสัมพันธ์ที่มีนัยสำคัญนั้นไม่ใช่เรื่องน่าแปลกใจ เกิดขึ้นระหว่างค่า Ki-67 สูงและเกรด รวมถึงการมีอยู่ของ BRCA1 PV อันที่จริง เนื้องอกที่เกี่ยวข้องกับ BRCA1 มักเป็น TNBC และแสดงลักษณะที่รุนแรงกว่า 16,17
โดยสรุปแล้ว การศึกษาครั้งนี้ได้รายงานสถานะการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1/2 ในกลุ่มผู้ป่วยมะเร็งเต้านมจากทางตะวันออกของเกาะซิซิลี โดยรวมแล้ว ผลการศึกษาของเราสอดคล้องกับหลักฐานที่มีอยู่ก่อนหน้านี้ ทั้งในแง่ของความชุกของการกลายพันธุ์และลักษณะทางคลินิกและพยาธิวิทยาในมะเร็งเต้านม จำเป็นต้องมีการศึกษาเพิ่มเติมในกลุ่มประชากรขนาดใหญ่ขึ้นของผู้ป่วยมะเร็งเต้านมที่มีการกลายพันธุ์ของยีน BRCA1/2 เช่น การวิเคราะห์การกลายพันธุ์แบบขยายหลายจีโนม เพื่อประเมินการมีอยู่ของการกลายพันธุ์แบบ PV ที่แตกต่างและพบได้น้อยกว่า BRCA1/2 ซึ่งจะช่วยให้สามารถระบุและจัดการผู้ป่วยที่มีความเสี่ยงต่อมะเร็งเพิ่มขึ้นเนื่องจากการกลายพันธุ์ทางพันธุกรรมได้อย่างเหมาะสมยิ่งขึ้น
เราได้ยืนยันแล้วว่าผู้ป่วยได้ลงนามในแบบฟอร์มยินยอมให้เปิดเผยตัวอย่างเนื้องอกของตนโดยไม่ระบุชื่อเพื่อวัตถุประสงค์ในการวิจัย ผู้ป่วยทุกรายได้ลงนามในแบบฟอร์มยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษรตามปฏิญญาเฮลซิงกิ ตามนโยบายของ AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco” การศึกษานี้ได้รับการยกเว้นจากการตรวจสอบด้านจริยธรรมเนื่องจากการวิเคราะห์ BRCA1/2 ดำเนินการตามแนวทางการปฏิบัติทางคลินิกและผู้ป่วยทุกรายได้ให้ความยินยอมเป็นลายลักษณ์อักษร ผู้ป่วยยังยินยอมให้ใช้ข้อมูลของตนเพื่อวัตถุประสงค์ในการวิจัยด้วย
เราขอขอบคุณศาสตราจารย์เปาโล วิกเนรี ที่ให้ความช่วยเหลือในการดูแลผู้ป่วยมะเร็งเต้านมตามที่คณะกรรมการจริยธรรมร้องขอ
เฟเดริกา มาร์โตรานา รายงานว่าได้รับค่าตอบแทนจาก Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis และ Pfizer ส่วนผู้เขียนคนอื่นๆ ไม่มีผลประโยชน์ทับซ้อนใดๆ ในงานวิจัยนี้
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL และคณะ สถิติโรคมะเร็งทั่วโลกปี 2020: GLOBOCAN ประมาณการอุบัติการณ์และอัตราการเสียชีวิตของมะเร็ง 36 ชนิดใน 185 ประเทศทั่วโลก CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249. doi: 10.3322/caac.21660