Javascript este dezactivat în browserul dvs. Unele funcții ale acestui site web nu vor funcționa atunci când Javascript este dezactivat.
Înregistrează-te cu detaliile tale specifice și medicamentul specific de interes, iar noi vom potrivi informațiile pe care le furnizezi cu articolele din baza noastră de date extinsă și îți vom trimite prompt prin e-mail o copie în format PDF.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella, Clinica de Medicină Livia Manzella1, Universitatea din Cataperia, Departamentul de Medicină din Cataperia1,21 95123, Italia; 2 Centrul de Oncologie și Hematologie Experimentală, AOU Policlinico „G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Italia; 3 Oncologie Medicală, AOU Policlinico „G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italia; 4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italia; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italia; 6 Departamentul de Științe Biomedicale și Biotehnologice, Universitatea din Catania, Genetică Medicală, Catania, Italia, 95123; 7Institutul de Cercetare Oasi-IRCCS, Troina, 94018, Italia Comunicări: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected]; [email protected] Scop: Mutații germinale în BRCA1 și BRCA2 și cancer mamar (CM) stabilit, ovarian (CO) și altele asociate cu un risc de cancer pe parcursul vieții. Testarea pentru gena BRCA este esențială pentru evaluarea riscului individual, precum și pentru găsirea metodelor de prevenție la purtătorii sănătoși și adaptarea tratamentelor la pacienții cu cancer. Prevalența modificărilor BRCA1 și BRCA2 variază foarte mult în funcție de regiunile geografice și, deși există date despre variantele patogene BRCA în familiile siciliene, studiile care vizează în mod specific populațiile din estul Siciliei lipsesc. Scopul studiului nostru a fost de a investiga incidența și distribuția modificărilor germinale patogene BRCA într-o cohortă de pacienți cu CM din estul Siciliei și de a evalua asocierea acestora cu trăsături specifice CM utilizând secvențierea de generație următoare. Prezența modificărilor a fost corelată cu gradul tumoral și indicele de proliferare. REZULTATE: În total, 35 de pacienți (9%) au avut o variantă patogenă BRCA, 17 (49%) în BRCA1 și 18 (51%) în BRCA2. Modificările BRCA1 sunt prevalente la pacienții cu CM triplu negativ, în timp ce mutațiile BRCA2 sunt mai frecvente la pacienții cu CM luminal. Comparat În cazul persoanelor fără variante de cancer, subiecții cu variante BRCA1 au prezentat un grad tumoral și un indice proliferativ semnificativ mai mari. Concluzii: Constatările noastre oferă o imagine de ansamblu asupra stării mutaționale BRCA la pacienții cu cancer de mama din estul Siciliei și confirmă rolul analizei NGS în identificarea pacienților cu cancer de mama ereditar. Per total, aceste date sunt în concordanță cu dovezile anterioare care susțin screening-ul BRCA pentru prevenirea și tratamentul adecvat al cancerului la purtătorii de mutații.
Cancerul de sân (CM) este cea mai frecventă malignitate la nivel mondial și cel mai mortal cancer la femei.1 Caracteristicile biologice care determină prognosticul și comportamentul clinic al CM au fost studiate pe larg și parțial elucidate de-a lungul timpului. De fapt, în prezent sunt utilizați mai mulți markeri surogat pentru a clasifica CM în diferite subtipuri moleculare. Aceștia sunt receptorul de estrogen (ER) și/sau progesteron (PgR), amplificarea receptorului 2 al factorului de creștere epidermal uman (HER2), indicele de proliferare Ki-67 și gradul tumoral (G).2 Combinarea acestor variabile a identificat următoarele categorii de CM: 1) Tumorile luminale, care prezintă expresie ER și/sau PgR, au reprezentat 75% din CM. Aceste tumori au fost împărțite în continuare în Luminal A, când Ki-67 a fost sub 20% și HER2 negativ, și Luminal B, când Ki-67 a fost egal sau peste 20% și în prezența amplificării HER2, indiferent de indicele de proliferare; 2) Tumorile HER2+ care sunt ER și PgR negative, dar prezintă amplificare HER2. Acest grup reprezintă 10% din totalul tumorilor mamare; 3) Cancerul mamar triplu negativ (TNBC), care nu prezintă expresie ER și PgR și amplificare HER2, reprezintă aproximativ 15% din cazurile de cancer mamar.2-4
Printre aceste subtipuri de cancer de mama, gradul tumoral și indicele de proliferare reprezintă biomarkeri transversali care sunt asociați direct și independent cu agresivitatea și prognosticul tumoral.5,6
Pe lângă caracteristicile biologice menționate anterior, rolul modificărilor genetice moștenite care duc la dezvoltarea cancerului mamar (BC) a devenit din ce în ce mai important în ultimii ani.7 Aproximativ 1 din 10 tumori mamare sunt moștenite din cauza modificărilor germinale ale unor gene specifice.8 Două studii epidemiologice ample care au implicat peste 180.000 de femei au identificat recent un grup de opt gene (de exemplu, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C și RAD51D) responsabile în principal pentru BC ereditar. Printre aceste gene, BRCA1 și BRCA2 (denumite în continuare BRCA1/2) au arătat cea mai puternică corelație cu dezvoltarea tumorilor mamare.9-12 De fapt, mutațiile germinale BRCA1/2 cresc semnificativ riscul de BC pe parcursul vieții, precum și al altor tumori maligne, inclusiv cele ovariane, prostatice, pancreatice, colorectale și melanom. De la vârsta de 13 până la 80 de ani, incidența cumulată a BC este de 72% la femeile cu o variantă patogenă (PV) BRCA1 și de 69% la femeile cu o variantă patogenă BRCA2. PV.14
În mod special, o publicație recentă sugerează că riscul de cancer macular depinde de tipul de PV. De fapt, în comparație cu variantele patogene trunchiante, variantele missense evidente, în special în gena BRCA1, sunt asociate cu un risc redus de cancer macular, în special la femeile în vârstă.15
Prezența tumorilor paracetamol (PV) asociate cu BRCA1 sau BRCA2 a fost asociată cu diferite caracteristici biologice și clinicopatologice.16,17 Tumorile bazale asociate cu BRCA1 tind să fie agresive clinic, slab diferențiate și foarte proliferative. Aceste tumori sunt de obicei triple negative și au un debut timpuriu. Tumorile care apar la pacienții cu mutație BRCA2 prezintă de obicei grade moderate până la bine diferențiate și indici proliferativi variabili. Aceste tumori sunt mai frecvente în lumenul B și apar de obicei la adulții în vârstă.16-18 În mod special, mutațiile în BRCA1 și BRCA2 cresc sensibilitatea la tratamente specifice, inclusiv săruri de platină și medicamente țintite, cum ar fi inhibitorii de poli(ADP-riboză) polimerază (PARPi).19,20
În ultimii ani, implementarea secvențierii de generație următoare (NGS) în practica clinică a permis unui număr tot mai mare de pacienți cu cancer de mama să fie supuși testelor moleculare pentru sindroamele de susceptibilitate la cancer, inclusiv BRCA1/2.21 Concomitent, definițiile bazate pe criterii precise privind istoricul familial, caracteristicile demografice și clinicopatologice permit o mai bună identificare a persoanelor demne de testarea BRCA1/2.22,23 În acest context, se acumulează dovezi privind screening-ul BRCA1/2 în anumite populații, evidențiind diferențele între regiunile geografice.24–27 Deși există rapoarte despre cohorta de cancer de mama din vestul Siciliei, sunt disponibile mai puține date despre screening-ul BRCA1/2 în populația din estul Siciliei.28,29
Descriem aici rezultatele screening-ului germinal BRCA1/2 la pacienții cu cancer de sân din estul Siciliei, corelând în continuare prezența mutațiilor BRCA1 sau BRCA2 cu principalele caracteristici clinicopatologice ale acestor tumori.
Un studiu retrospectiv a fost efectuat la „Centrul de Oncologie Experimentală și Hematologie” din cadrul Spitalului Policlinico Rodolico – San Marco din Catania. Din ianuarie 2017 până în martie 2021, un total de 455 de pacienți cu cancer mamar și ovarian, melanom, pancreatic sau de prostată au fost trimiși la laboratorul nostru de diagnostic molecular pentru testarea genetică BRCA/2. Acest studiu a fost realizat în conformitate cu Declarația de la Helsinki, iar toți participanții și-au dat consimțământul informat în scris înainte de analiza moleculară.
Caracteristicile histologice și biologice (RE, PgR, statusul HER2, Ki-67 și gradul) ale cancerului de mama au fost evaluate pe bază de biopsie prelevată sau probe chirurgicale, luând în considerare doar componentele tumorale agresive. Pe baza acestor caracteristici, cancerul de mama a fost clasificat după cum urmează: luminal A (RE+ și/sau PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (RE+ și/sau PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (RE și/sau PgR+, HER2+), HER2+ (RE și PgR-, HER2+) sau triplu negativ (RE și PgR-, HER2-).
Înainte de a evalua statusul mutațiilor BRCA1 și BRCA2, o echipă multidisciplinară, formată din un oncolog, un genetician și un psiholog, a efectuat o consultație genetică tumorală pentru fiecare pacient pentru a determina prezența BRCA1 și/sau BRCA1 sau a persoanelor cu risc crescut de PV în gena BRCA2. Selecția pacienților a fost efectuată conform ghidurilor Societății Italiene de Oncologie Medicală (AIOM) și recomandărilor locale siciliene.30,31 Aceste criterii includ: (i) antecedente familiale de variante patogene cunoscute în genele de susceptibilitate (de exemplu, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) bărbați cu cancer macular (BC); (iii) cei cu BC și carcinom ocular (CO); (iv) femei cu BC <36 de ani, BC transnațional (TNBC) <60 de ani sau BC bilateral <50 de ani; (v) antecedente medicale personale de BC <50 de ani și cel puțin o rudă de gradul întâi: (a) BC <50 de ani; (b) CO non-mucinos și non-borderline de orice vârstă; (c) BC bilateral; (d) BC masculin; (e) cancer pancreatic; (f) cancer de prostată; (vi) două sau mai multe antecedente personale de cancer canceros (CM) > 50 de ani și antecedente familiale de CM, cancer ovariu (CO) sau cancer pancreatic pentru rudele care sunt rude de gradul întâi una cu cealaltă (inclusiv rudele cu care persoana respectivă este rudă de gradul întâi); (vii) Antecedente personale de CO și cel puțin o rudă de gradul întâi: (a) CM <50 de ani; (b) cancer nodular (NOC); (c) CM bilateral; (d) CM masculin; (vii) femeie cu CO seros de grad înalt.
O probă de sânge periferic de 20 ml a fost obținută de la fiecare pacient și colectată în tuburi EDTA (BD Biosciences). ADN-ul genomic a fost izolat din probe de sânge integral de 0,7 ml utilizând kitul de izolare QIAsymphony DSP DNA Midi (QIAGEN, Hilden, Italia), conform instrucțiunilor producătorului, și trecut printr-un fluorometru Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, SUA). S-a efectuat cuantificarea. Îmbogățirea țintelor și pregătirea bibliotecii sunt efectuate de Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, gata de încărcare în kitul Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 pentru pregătirea automată a bibliotecii, conform instrucțiunilor producătorului. Kitul constă din două seturi multiplex de primeri PCR care pot fi utilizate pentru a studia toate genele BRCA1 (NM_007300.3) și BRCA2 (NM_000059.3). Pe scurt, 15 µL din fiecare probă de ADN diluată (10 ng) au fost adăugați pe plăci cu coduri de bare pentru pregătirea bibliotecii, iar toți reactivii și consumabilele au fost încărcate pe instrumentul Ion Chef™. Prepararea automată a bibliotecii și gruparea bibliotecii de probe cu coduri de bare au fost apoi efectuate pe instrumentul Ion Chef™. Numărul de biblioteci preparate a fost apoi evaluat cu un fluorometru Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, SUA), conform instrucțiunilor producătorului. În final, bibliotecile sunt combinate în raporturi echimolare în tuburile de probă ale bibliotecii Ion Chef™ (tuburi cu coduri de bare) și încărcate. pe instrumentul Ion Chef™. Secvențierea a fost efectuată utilizând un instrument Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) folosind un cip Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Analiza datelor a fost efectuată cu Amplicon Suite (SmartSeq srl) și software-ul Ion Reporter.
Toată nomenclatura variantelor a urmat ghidurile actuale ale Consorțiului pentru Variația Genomului Uman, disponibile online (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Semnificația clinică a variantelor BRCA1/2 a fost definită utilizând clasificarea Consorțiului Internațional ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) și consultând diferite baze de date precum ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD și UMD. Clasificarea include cinci categorii distincte de risc: benignă (categoria I), probabil benignă (categoria II), variantă cu semnificație incertă (VUS, categoria III), probabil patogenă (categoria IV) și patogenă (categoria V). VarSome a analizat, de asemenea, efectul mutațiilor asupra structurii și funcției proteinelor, un instrument informativ cu acces la 30 de baze de date.32
Pentru a atribui o semnificație clinică potențială fiecărui VUS, au fost utilizați următorii algoritmi computaționali de predicție a proteinelor: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) și Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Variantele clasificate în clasa 1 și 2 au fost considerate de tip sălbatic.
Secvențierea Sanger a confirmat prezența fiecărei variante patogene. Pe scurt, a fost proiectată o pereche de primeri specifici pentru fiecare variantă detectată utilizând secvențele de referință ale genelor BRCA1 și BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 și NG_012772.3, respectiv NM_000059.3). Prin urmare, s-a efectuat PCR țintit, urmat de secvențierea Sanger.
Pacienții care au avut rezultate negative la testul pentru gena BRCA1/2 au fost testați prin amplificare multiplex dependentă de ligatură (MLPA) conform instrucțiunilor producătorului pentru a evalua prezența rearanjărilor genomice mari (LGR). Pe scurt, probele de ADN sunt denaturate și se utilizează până la 60 de sonde specifice genelor BRCA1 și BRCA2, fiecare detectând o secvență specifică de ADN cu o lungime de aproximativ 60 de nucleotide. Produșii de amplificare a sondei, constând dintr-un set unic de ampliconi PCR, au fost apoi analizați prin electroforeză capilară și cu ajutorul software-ului Cofalyser.Net, împreună cu tabelele Cofalyser specifice lotului (www.mrcholland.com).
Variabilele clinicopatologice selectate (gradul histologic și indicele de proliferare Ki-67%) au fost asociate cu prezența paraventriculelor (PV) BRCA1/2, calculate folosind software-ul Prism v. 8.4 folosind testul exact Fisher, presupunând că o valoare p <0,05 este semnificativă.
Între ianuarie 2017 și martie 2021, 455 de pacienți au fost evaluați pentru mutații germinale BRCA1/2. Testarea mutațiilor a fost efectuată la Centrul de Oncologie Experimentală și Hematologie al Spitalului Policlinico. Conform ghidului sicilian (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Vineri 10 ianuarie 2020), la Rodolico din Catania – San Marco au fost incluși în total 389 de pacienți: cancer de sân, 37 de cancer ovarian, 16 cancer pancreatic, 8 cancer de prostată și 5 melanom. Distribuția pacienților în funcție de tipul de cancer și rezultatele analizelor este prezentată în Figura 1.
Figura 1 prezintă o diagramă de flux care prezintă o prezentare generală a studiului. Pacienții cu tumori de sân, melanom, pancreatic, prostată sau ovarian au fost testați pentru mutații în genele BRCA1 și BRCA2.
Abrevieri: PVs, variantă patogenă; VUS, variantă cu semnificație incertă; WT, secvență BRCA1/2 de tip sălbatic.
Ne-am concentrat selectiv studiile asupra cohortelor cu cancer mamar. Pacientele aveau o vârstă mediană de 49 de ani (interval 23-89) și erau predominant femei (n=376, sau 97%).
Dintre acești subiecți, 64 (17%) au prezentat mutații BRCA1/2 și toți au fost femei. Treizeci și cinci (9%) au avut PV și 29 (7,5%) au avut VUS. Șaptesprezece (48,6%) din cele 35 de variante patogene au apărut în BRCA1 și 18 (51,4%) în BRCA2, în timp ce 5 VUS au apărut în BRCA1 (17,2%) și 24 (82,8%) în BRCA2 (Figurile 1 și 2). LGR nu a fost prezent în analiza MLPA.
Figura 2. Analiza mutațiilor BRCA1 și BRCA2 la 389 de paciente cu cancer mamar. (A) Distribuția variantelor patogene (PV) (roșu), variantelor cu semnificație incertă (VUS) (portocaliu) și WT (albastru) la 389 de paciente cu cancer mamar; (B) 389 de paciente cu cancer mamar. Treizeci și cinci (9%) au avut variante patogene (PV) BRCA1/2. Dintre acestea, 17 (48,6%) au fost purtătoare de PV BRCA1 (roșu închis) și 18 (51,4%) au fost purtătoare de BRCA2 (roșu deschis); (C) 29 (7,5%) din 389 de subiecți au fost purtătoare de VUS, 5 (17,2%) au fost purtătoare de gene BRCA1 (portocaliu închis) și 24 (82,8%) au fost purtătoare de gene BRCA2 (portocaliu deschis).
Abrevieri: PVs, variantă patogenă; VUS, variantă cu semnificație incertă; WT, secvență BRCA1/2 de tip sălbatic.
În continuare, am investigat prevalența subtipurilor moleculare de cancer canceros (BC) la pacienții cu VP BRCA1/2. Distribuția a inclus 2 (5,7%) pacienți cu tumori luminale A, 15 (42,9%) pacienți luminale B, 3 (8,6%) pacienți luminale B-HER2+, 2 (5,7%) pacienți HER2+ și 13 (37,1%) pacienți cu tumori trifazice cu celule terțe (TNBC). Dintre pacienții BRCA1-pozitivi, 5 (29,4%) au avut BC luminale B, 2 (11,8%) au avut boală HER2+, iar 10 (58,8%) au avut TNBC. Tumorile fără mutații BRCA1 au fost fie luminale A, fie luminale B-HER2+ (Figura 3). În subgrupul BRCA2-pozitiv, 10 (55,6%) tumori au fost luminale B, 3 (16,7%) au fost luminale B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC și 2 (11,1%) au fost luminale A (Figura 3). 3). Nu au fost prezente tumori HER2+ în acest grup. Prin urmare, mutațiile BRCA1 sunt prevalente la pacienții cu TNBC, în timp ce modificările BRCA2 sunt predominante la indivizii cu lumen B.
Figura 3 Prevalența subtipurilor de cancer mamar la pacientele cu variante patogene în BRCA1 și BRCA2. Histograme care arată distribuția PV BRCA1- (roșu închis) și BRCA2- (roșu deschis) între subtipurile moleculare ale pacientelor cu cancer mamar. Numerele raportate în fiecare casetă reprezintă procentul de paciente cu PV BRCA1 și BRCA2 pentru fiecare subtip de cancer mamar.
Abrevieri: PV, variantă patogenă; HER2+, receptor 2 pozitiv pentru factorul de creștere epidermal uman; TNBC, cancer mamar triplu negativ.
Ulterior, am evaluat tipul și localizarea genică a PV-urilor BRCA1 și BRCA2. În PV-ul BRCA1, am observat 7 variante cu un singur nucleotid (SNV), 6 deleții, 3 duplicări și 1 inserție. Doar o mutație (c.5522delG) reprezintă o nouă descoperire. Cel mai frecvent PV BRCA1 detectat la ambii subiecți a fost c.5035_5039delCTAAT. Această modificare implică o deleție a cinci nucleotide (CTAAT) în exonul 15 BRCA1, rezultând substituția aminoacidului leucină cu tirozină la codonul 1679 și, datorită unei schimbări a cadrului de translație cu un codon stop alternativ prezis, duce la trunchierea prematură a proteinei. Toate celelalte modificări sunt detectate într-un singur caz. În mod special, unul dintre PV-urile raportate a fost localizat în regiunea de consens a situsului de îmbinare (c.4357+1G>T) (Tabelul 1).
În ceea ce privește mutațiile paracetamol (PV) ale genei BRCA2, am observat 6 deleții, 6 SNV-uri și 2 duplicări. Niciuna dintre modificările găsite nu este nouă. Trei mutații au reapărut în populația noastră, c.428dup și c.8487+1G>A observate la 3 subiecți, urmate de c.5851_5854delAGTT, recuperat în două cazuri. Alterarea c.428dup implică o repetare a genei C în exonul 5 al genei BRCA2, despre care se presupune că codifică o proteină trunchiată, nefuncțională. Mutația c.8487+1G>A apare în regiunea intronică a intronului 19 al genei BRCA2 (± 1,2) și afectează secvența consens de splicing, rezultând un splicing alterat, rezultând o proteină anormală sau absentă. Varianta patogenă c.5851_5854delAGTT se datorează unei deleții de 4 nucleotide din pozițiile nucleotidice 5851 până la 5854 din exonul codificator 10 al genei BRCA2 și are ca rezultat o... schimbarea cadrului de citire a translației cu un codon stop alternativ prezis (p.S1951WfsTer). În mod notabil, așa cum s-a raportat anterior, ambele modificări c.631G>A și c.7008-2A>T au fost detectate la același pacient.34 Prima mutație implică înlocuirea adenozinei (A) în exonul 7 al BRCA2 cu un nucleotid care conține guanină (G), rezultând o schimbare a valinei în izoleucină la codonul 211, izoleucina. Aminoacidul este un aminoacid cu proprietăți foarte similare. Această modificare afectează splicing-ul normal al ARNm. A doua variantă este localizată într-o regiune intronică și are ca rezultat o substituție dublă de la A la timină (T) înainte de exonul 13 al genei care codifică BRCA2. Modificarea c.7008-2A>T poate genera transcrieri multiple de lungimi diferite. În plus, în grupul de PV-uri BRCA2, 4 din 18 modificări (22,2%) au fost intronice.
Apoi am cartografiat mutațiile dăunătoare BRCA1/2 în domeniile funcționale și regiunile de legare a proteinelor (Fig. 4). În gena BRCA1, 50% din PV-uri au fost localizate în regiunea cluster a cancerului mamar (BCCR), în timp ce 22% din mutații au fost localizate în regiunea cluster a cancerului ovarian (OCCR) (Fig. 4A). În PV-ul BRCA2, 35,7% din variante au fost localizate în regiunea BCCR, iar 42,8% din mutații au fost localizate în OCCR (Fig. 4B). În continuare, am evaluat locația PV-urilor în domeniile proteice BRCA1 și BRCA2. Pentru proteina BRCA1, am găsit trei PV-uri în domeniile loop și coiled coil și două mutații în domeniul BRCT (Fig. 4A). Pentru proteina BRCA2, 4 PV-uri au fost mapate în domeniul repetitiv BRC, în timp ce 3 modificări intronice și 3 modificări exonice au fost detectate în domeniile de legare a oligo/oligozaharidelor (OB) și tower (T) (Figura 4B).
Figura 4 Reprezentare schematică a proteinelor BRCA1 și BRCA2 și localizarea variantelor patogene. Această figură prezintă distribuția variantelor patogene BRCA1 (A) și BRCA2 (B) la pacientele cu cancer mamar. Mutațiile exonice sunt prezentate în albastru, în timp ce variantele intronice sunt prezentate în portocaliu. Înălțimea barei reprezintă numărul de cazuri. Sunt raportate proteinele BRCA1 și BRCA2 și domeniile lor funcționale. (A) Proteina BRCA1 conține un domeniu buclă (RING) și o secvență de localizare nucleară (NLS), un domeniu spiralat-spiralat, un domeniu cluster SQ/TQ (SCD) și un domeniu C-terminal BRCA1 (BRCT). (B) Proteina BRCA2 conține opt repetiții BRC, un domeniu de legare a ADN-ului cu un domeniu elicoidal (Helical), trei pliuri de legare a oligonucleotidelor/oligozaharidelor (OB), un domeniu turn (T) și un NLS pe ​​partea C. Zonele numite Regiunea Clusterului de Cancer Mamar (BCCR) și Regiunea Clusterului de Cancer Ovarian (OCCR) sunt prezentate în partea de jos. *Reprezintă mutații care determinarea codonilor stop.
Apoi am investigat caracteristicile clinicopatologice ale cancerului de mama care s-ar putea corela cu prezența paraventriculară (PV) BRCA1/2. Au fost disponibile dosare clinice complete pentru 181 de pacienți BRCA1/2-negativi (non-purtători) și toți purtătorii (n = 35). A existat o corelație între rata de proliferare tumorală și grad.
Am calculat distribuția Ki-67 pe baza medianei cohortei noastre (25%, interval <10-90%). Subiecții cu Ki-67 < 25% au fost definiți ca „Ki-67 scăzut”, în timp ce indivizii cu valori ≥ 25% au fost considerați „Ki-67 ridicat”. S-au constatat diferențe semnificative în ceea ce privește Ki-67 (p<0,01) între persoanele nepurtătoare și purtătoare de BRCA1 PV (Fig. 5A).
Figura 5 Corelația Ki-67 cu distribuția gradelor la femeile cu cancer mamar cu și fără PV BRCA1 și BRCA2. (A) Boxplot care prezintă valorile mediane ale Ki-67 la 181 de paciente cu cancer mamar fără purtătoare față de paciente cu PV BRCA1 (18) sau BRCA2 (17). Valorile p sub 0,5 au fost considerate semnificative statistic. (B) Histogramă care reprezintă repartizarea pacientelor cu cancer mamar în grupe de grad histologic (G2 și G3) în funcție de statusul mutației BRCA1 și BRCA2 (subiecte din rasa WT, purtătoare de PV BRCA1 și BRCA2).
De asemenea, am examinat dacă gradul tumorii a fost corelat cu prezența mutațiilor paracetamol (PV) BRCA1/2. Deoarece BC G1 a fost absent în populația noastră, am împărțit pacienții în două grupuri (G2 sau G3). În concordanță cu rezultatele Ki-67, analiza a relevat o corelație statistic semnificativă între gradul tumorii și mutația BRCA1, cu o proporție mai mare de tumori G3 la purtătorii de BRCA1 comparativ cu cei fără mutație (p<0,005) (Figura 5B).
Progresele în tehnologia de secvențiere a ADN-ului au permis progrese fără precedent în testarea genetică BRCA1/2, cu implicații cruciale pentru pacienții cu antecedente familiale de cancer. Până în prezent, aproximativ 20.000 de variante BRCA1/2 au fost identificate și clasificate conform Societății Americane de Genetică Medicală 35 și sistemului ENIGMA. 35,36 Este bine cunoscut faptul că spectrul mutațional BRCA1/2 variază foarte mult în funcție de regiunile geografice. 37 În Italia, rata variantelor parazitare BRCA1/2 a variat de la 8% la 37%, prezentând o variabilitate intra-țară largă. 38,39 Cu o populație de aproape 5 milioane, Sicilia este a cincea regiune ca mărime din Italia în ceea ce privește numărul de locuitori. Deși există date privind distribuția BRCA1/2 în vestul Siciliei, nu există dovezi extinse în partea de est a insulei.
Studiul nostru este unul dintre primele rapoarte privind incidența PV BRCA1/2 la pacienții cu cancer de mama (BC) din estul Siciliei.28 Ne-am concentrat analiza asupra BC, deoarece aceasta este de departe cea mai frecventă boală din cohorta noastră.
La testarea a 389 de pacienți cu cancer mamar (BC), 9% prezentau PV BRCA1/2, distribuite uniform între BRCA1 și BRCA2. Aceste rezultate sunt în concordanță cu cele raportate anterior în populația italiană.28 Interesant este că 3% (13/389) din cohorta noastră erau bărbați. Această rată este mai mare decât cea așteptată pentru cancerul de sân la bărbați (1% din totalul BC),40 reflectând selecția noastră de populații pe baza riscului de mutație BRCA1/2. Cu toate acestea, niciunul dintre acești bărbați nu a dezvoltat un PV BRCA1/2, așa că au fost candidați pentru analize moleculare suplimentare pentru a exclude prezența unor mutații mai puțin frecvente, cum ar fi PALB2, RAD51C și D, printre altele. Variante cu semnificație incertă au fost găsite la 7% dintre subiecții la care BRCA2 VUS a fost evident. Chiar și acest rezultat este în concordanță cu dovezile preexistente.28,41,42
Când am analizat distribuția subtipurilor moleculare de cancer macular (BC) la femeile cu mutații BRCA1/2, am confirmat asocierile cunoscute între TNBC și BRCA1 PV (58,8%) și între BC luminal B și BRCA2 PV (55,6%).16,43 Tumorile luminal A și HER2+ la purtătoarele de BRCA1 și BRCA2 PV sunt în concordanță cu datele existente din literatura de specialitate.16,43
Apoi ne concentrăm asupra tipului și localizării PV BRCA1/2. În cohorta noastră, cel mai frecvent PV BRCA1 a fost c.5035_5039delCTAAT. Deși Incorvaia și colab. Nu au descris această variantă în cohorta lor siciliană, alți autori au raportat-o ​​ca o variantă germinală BRCA1.34 Mai multe PV BRCA1 au fost găsite în cohorta noastră - de exemplu c.181T>G, c.514del, c.3253dupA și c.5266dupC - care au fost observate în Sicilia.28 Dintre acestea, două mutații fondatoare BRCA1 (c.181T>G și c.5266dupC) se găsesc frecvent la evreii așkenazi din Europa de Est și Centrală (Polonia, Cehia), slovenă, austriacă, maghiară, belarusă și germană), 44,45 și, în Statele Unite și Argentina, a fost recent definită ca o „variantă germinală recurentă” la pacientele italiene cu cancer mamar și cancer ocular. Varianta 34c.514del a fost identificată anterior la 8 paciente cu cancer mamar din nordul Siciliei, în Palermo și Messina. Interesant este că, chiar și Incorvaia și colab. s-a descoperit varianta c.3253dupA în unele familii din Catania.28 Cele mai reprezentative PV BRCA2 sunt c.428dup, c.5851_5854delAGTT și varianta intronică c.8487+1G>A, care au fost raportate mai detaliat28 la un pacient din Palermo cu PV c.428dup, c.5851_5854delAGTT a fost observat în gospodăriile din nord-vestul Siciliei, în principal în regiunile Trapani și Palermo, în timp ce PV c.5851_5854delAGTT a fost observat în gospodăriile din nord-vestul Siciliei. Varianta 8487+1G>A a fost mai frecventă la subiecții din Messina, Palermo și Caltanissetta.28 Rebbeck și colab. a descris anterior alterarea c.5851_5854delAGTT în Columbia.37 O altă variantă virală BRCA2, c.631+1G>A, a fost găsită la pacienții cu cancer de sân și coș de ovar din Sicilia (Agrigento, Siracusa și Ragusa).28 În mod notabil, am observat coexistența a două variante BRCA2 (BRCA2 c.631G>A și c.7008-2A>T) la același pacient, despre care am presupus că este segregată în mod cis, așa cum s-a raportat anterior în acest fel.34,46 Aceste mutații BRCA2 sunt într-adevăr frecvent observate în regiunea italiană și s-a constatat că introduc codoni stop prematur, afectând splicing-ul ARN-ului mesager și provocând eșecul proteinei BRCA2.47,48
De asemenea, am cartografiat PV-urile BRCA1 și BRCA2 în regiunile putative OCCR și BCCR ale domeniilor proteice și genelor. Aceste regiuni au fost descrise de Rebbeck și colab. ca zone de risc pentru dezvoltarea cancerului ovarian, respectiv mamar.49 Cu toate acestea, dovezile privind asocierea dintre localizarea variantelor germinale și riscul de cancer mamar sau ovarian rămân controversate.28,50-52 În populația noastră, PV-urile BRCA1 au fost localizate predominant în regiunea BCCR, în timp ce PV-urile BRCA2 au fost localizate predominant în regiunea OCCR. Cu toate acestea, nu am putut găsi nicio asociere între regiunile putative OCCR și BCCR și caracteristicile BC. Acest lucru se poate datora numărului limitat de paciente cu mutații BRCA1/2. Din perspectiva domeniului proteic, PV-urile BRCA1 sunt distribuite de-a lungul întregii proteine, iar modificările BRCA2 se găsesc preferențial în domeniul repetitiv BRC.
În cele din urmă, am corelat caracteristicile clinicopatologice ale cancerului de mama cu tumorile proximale (PV) cauzate de BRCA1/2. Datorită numărului limitat de pacienți incluși, am găsit o corelație semnificativă doar între Ki-67 și gradul tumoral. Deși evaluarea și interpretarea Ki-67 rămân oarecum controversate, este cert că ratele proliferative ridicate sunt asociate cu un risc crescut de recurență a bolii și o supraviețuire scăzută. Până în prezent, pragul pentru a distinge între Ki-67 „ridicat” și „scăzut” este de 20%. Cu toate acestea, acest prag nu se aplică populației noastre de pacienți cu mutații BRCA1/2, care are o valoare mediană a Ki-67 de 25%. Această tendință a ratelor ridicate de Ki-67 poate fi explicată prin prevalența în cohortele noastre luminale B și TNBC, dintre care au fost prezente puține tumori luminale A. Cu toate acestea, unele dovezi par să sugereze că un prag mai mare de Ki-67 (25-30%) ar putea stratifica mai bine pacienții în funcție de prognosticul lor.53,54 Din rezultatele analizei noastre, o corelație semnificativă nu este surprinzătoare. Apare între gradele ridicate de Ki-67 și prezența BRCA1 PV. De fapt, tumorile legate de BRCA1 sunt tipice pentru TNBC și prezintă caracteristici mai agresive.16,17
În concluzie, acest studiu oferă un raport asupra stării mutaționale a genei BRCA1/2 într-o cohortă de cancer canceros (BC) din estul Siciliei. Per total, descoperirile noastre sunt în concordanță cu dovezile preexistente, atât în ​​ceea ce privește prevalența mutațiilor, cât și caracteristicile clinicopatologice în BC. Sunt necesare mai multe studii pe populații mai mari de pacienți cu BC cu mutație BRCA1/2, cum ar fi utilizarea analizei mutaționale extinse multigenom, pentru a evalua prezența unor vene paracetamol (PV) distincte și mai puțin frecvente decât BRCA1/2. Acest lucru va permite identificarea și gestionarea adecvată a numărului tot mai mare de subiecți cu risc crescut de cancer din cauza mutațiilor genetice.
Am confirmat că pacienții au semnat consimțământul informat pentru a-și elibera anonim probele tumorale în scopuri de cercetare. Toți pacienții au semnat un consimțământ informat în scris, conform Declarației de la Helsinki. Conform politicii AOU Policlinico „G. Rodolico – S. Marco”, acest studiu a fost exceptat de la evaluarea etică, deoarece analiza BRCA1/2 a fost efectuată conform practicii clinice și toți pacienții și-au dat consimțământul informat în scris. De asemenea, pacienții își dau consimțământul informat pentru utilizarea datelor lor în scopuri de cercetare.
Îi mulțumim prof. Paolo Vigneri pentru asistența acordată în îngrijirea pacientelor cu cancer la sân, așa cum a solicitat Comitetul de Etică.
Federica Martorana primește onorarii de la Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Ceilalți autori declară că nu au conflicte de interese în această lucrare.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL și colab. Statistici globale privind cancerul 2020: GLOBOCAN estimează incidența și mortalitatea a 36 de tipuri de cancer în 185 de țări din întreaga lume. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249. doi: 10.3322/caac.21660