Хәзерге вакытта сезнең браузерда Javascript сүндерелгән. Javascript сүндерелгән вакытта бу вебсайтның кайбер функцияләре эшләмәячәк.
Үзегезнең конкрет мәгълүматларыгыз һәм кызыксындырган конкрет даруларыгыз белән теркәлегез, без сез биргән мәгълүматны киң мәгълүмат базасындагы мәкаләләр белән туры китерәчәкбез һәм сезгә PDF күчермәсен тиз арада электрон почта аша җибәрәчәкбез.
作者 Стелла С, Витале СР, Марторана Ф, Массимино М, Павоне Г, Ланзафаме К, Бианка С, Барон С, Горгон С, Фичера М, Манзелла Л
Стефания Стелла, 1,2 Силвия Рита Витале, 1,2 Федерика Марторана, 1,2 Мишель Массимино, 1,2 Джулиана Павоне, 3 Катия Ланзафаме, 3 Себастьяно Бианка, 4 Чиара Бароне, 5 Кристина Горгон, 6 Марко Фичера, 6, 7 Ливия Манзелла1, Клиника Италия; 2 эксперименталь онкология һәм гематология үзәге, "Г.Родолико - Сан-Марко" поликлиникасы, Катания, 95123, Италия; 3 Медицина онкологиясе, "Г. Родолико - Сан Марко" поликлиникасы, Катания, 95123, Италия; 4 Медицина генетикасы, ARNAS Гарибальди, Катания, 95123, Италия; 5 Медицина генетикасы, ASP, Сиракуза, 96100, Италия; 6 Биомедицина һәм биотехнология фәннәре кафедрасы, Катания университеты, Медицина генетикасы, Катания, Италия, 95123; 7Oasi тикшеренү институты-IRCCS, Тройна, 94018, Италия Элемтә: Стефания Стелла, тел +39 095 378 1946, электрон почта [email protected]; [email protected] Максат: BRCA1 һәм BRCA2 геннарындагы мутацияләр һәм күкрәк яман шеше (BC), йомыркалык яман шеше (OC) һәм гомерлек яман шеш куркынычы белән бәйле башка авырулар. BRCA генын тикшерү шәхси куркынычны бәяләү өчен, шулай ук ​​сәламәт йөртүчеләрдә профилактика ысулларын табу һәм яман шеш авырулары белән авыручыларда дәвалауны махсус билгеләү өчен мөһим. BRCA1 һәм BRCA2 үзгәрешләренең таралышы географик төбәкләрдә төрлечә була, һәм Сицилия гаиләләрендә BRCA патоген вариантлары турында мәгълүматлар булса да, көнчыгыш Сицилиядәге халыкка юнәлтелгән тикшеренүләр җитәрлек түгел. Безнең тикшеренүнең максаты - көнчыгыш Сицилиядән килгән БК пациентлары когортасында BRCA патоген җенес геннары үзгәрешләренең ешлыгын һәм таралышын тикшерү һәм киләсе буын секвенирлавын кулланып, аларның БКның билгеле бер билгеләре белән бәйләнешен бәяләү. Үзгәрешләрнең булуы шеш дәрәҗәсе һәм пролиферация индексы белән бәйле. НӘТИҖӘЛӘР: Гомумән алганда, 35 пациентта (9%) BRCA патоген варианты булган, 17 пациентта (49%) BRCA1 һәм 18 пациентта (51%) BRCA2. BRCA1 үзгәрешләре өчләтә тискәре нәтиҗәләрдә таралган. БК белән авыручыларда, ә BRCA2 мутацияләре люминаль БК белән авыручыларда ешрак очрый. Йөк ташучы булмаган кешеләр белән чагыштырганда, BRCA1 вариантлары булган кешеләрдә шеш дәрәҗәсе һәм пролифератив индекс шактый югарырак булган. Нәтиҗәләр: Безнең ачышлар көнчыгыш Сицилиядән килгән БК белән авыручыларда BRCA мутация статусына гомуми күзәтү бирә һәм нәселдәнлекле БК белән авыручыларны ачыклауда NGS анализының ролен раслый. Гомумән алганда, бу мәгълүматлар мутация йөртүчеләрдә яман шешне дөрес профилактикалау һәм дәвалау өчен BRCA скринингын хуплаучы элеккеге дәлилләр белән туры килә.
Күкрәк яман шеше (КР) дөнья күләмендә иң еш очрый торган яман шеш һәм хатын-кызларда иң үлемечле яман шеш.1 КР фаразын һәм клиник үз-үзен тотышын билгеләүче биологик үзенчәлекләр вакыт узу белән киң өйрәнелде һәм өлешчә ачыкланды. Чынлыкта, хәзерге вакытта КРны төрле молекуляр төрләргә бүлү өчен берничә суррогат маркер кулланыла. Алар - эстроген (ER) һәм/яки прогестерон рецепторы (PgR), кеше эпидермаль үсеш факторы рецепторы 2 (HER2) көчәйтүе, пролиферация индексы Ki-67 һәм шеш дәрәҗәсе (G).2 Бу үзгәрүчәннәрнең берләшмәсе түбәндәге КР категорияләрен ачыклады: 1) ER һәм/яки PgR экспрессиясен күрсәтүче люминаль шешләр КРның 75% тәшкил итте. Бу шешләр шулай ук ​​​​Luminal A, Ki-67 20% тан түбән һәм HER2 тискәре булганда һәм пролиферация индексына карамастан, Ki-67 20% тан югарырак булганда һәм HER2 көчәйтү булганда, люминаль Bга бүленде; 2) ER һәм PgR тискәре, ләкин HER2 көчәюен күрсәтүче HER2+ шешләре. Бу төркем барлык күкрәк шешләренең 10% ын тәшкил итә; 3) ER һәм PgR экспрессиясен һәм HER2 көчәюен күрсәтмәгән өчләтә тискәре күкрәк яман шеше (TNBC) күкрәк яман шешләренең якынча 15% ын тәшкил итә.2-4
Бу БС төрләре арасында шеш дәрәҗәсе һәм пролиферация индексы шешнең агрессивлыгы һәм фараз белән турыдан-туры һәм бәйсез рәвештә бәйле кисемтә биомаркерларын күрсәтә.5,6
Югарыда телгә алынган биологик үзенчәлекләрдән тыш, соңгы берничә елда БК үсешенә китерә торган нәселдәнлек генетик үзгәрешләрнең роле тагын да мөһимрәк була бара.7 Күкрәк шешләренең якынча 10нан 1е билгеле геннардагы җенес линиясе үзгәрешләре аркасында нәселдәнлек белән бирелә.8 180 000 нән артык хатын-кыз катнашкан ике зур эпидемиологик тикшеренүдә күптән түгел сигез геннан торган төркем ачыкланды (мәсәлән, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C һәм RAD51D), алар нигездә нәселдәнлек БК өчен җаваплы. Бу геннар арасында BRCA1 һәм BRCA2 (алга таба BRCA1/2 дип атала) күкрәк шешләре үсеше белән иң көчле корреляция күрсәтте.9-12 Чынлыкта, BRCA1/2 җенес линиясе мутацияләре БК, шулай ук ​​башка яман шешләрнең, шул исәптән йомыркалык, простата, ашказаны асты бизе, колоректаль һәм меланоманың гомерлек куркынычын сизелерлек арттыра. 13 яшьтән 80 яшькә кадәр, BRCA1 патоген варианты (PV) булган хатын-кызларда БКның гомуми очраклары 72% тәшкил итә һәм BRCA2 PV.14 белән авыручы хатын-кызларда 69%
Шунысы игътибарга лаек, күптән түгел бастырылган бер басмада БЦ куркынычы ПВ төренә бәйле дип фаразлана. Чынлыкта, патоген кыскартучы вариантлар белән чагыштырганда, аеруча BRCA1 генындагы ачык миссенс вариантлары, бигрәк тә өлкән яшьтәге хатын-кызларда, БЦ куркынычын киметү белән бәйле.15
BRCA1 яки BRCA2 PV булуы төрле биологик һәм клиник-патологик үзенчәлекләр белән бәйле иде.16,17 BRCA1 белән бәйле БКлар клиник яктан агрессив, начар дифференциацияләнгән һәм югары пролиферациягә омтыла. Бу шешләр гадәттә өчләтә тискәре һәм иртә яшьтә башлана. BRCA2 мутацияләнгән пациентларда барлыкка килгән шешләр гадәттә уртача яки яхшы дифференциацияләнгән дәрәҗәләр һәм үзгәрүчән пролиферация индекслары күрсәтә. Бу шешләр B люменында ешрак очрый һәм гадәттә өлкән яшьтәге кешеләрдә очрый.16-18 Шунысы игътибарга лаек, BRCA1 һәм BRCA2 мутацияләре платина тозлары һәм поли(ADP-рибоза) полимераза ингибиторлары (PARPi) кебек максатчан препаратлар кебек махсус дәвалауга сизгерлекне арттыра.19,20
Соңгы берничә ел эчендә клиник практикада киләсе буын секвенирлавын (NGS) гамәлгә ашыру БК белән авыручыларның саны артуга, шул исәптән BRCA1/2 өчен молекуляр тестлар узарга мөмкинлек бирде.21 Шул ук вакытта, гаилә тарихы, демографик һәм клиник-патологик үзенчәлекләргә кагылышлы төгәл критерийларга нигезләнгән билгеләмәләр BRCA1/2 тестларына лаеклы кешеләрне яхшырак ачыклау өчен кулланыла.22,23 Бу контекстта, билгеле бер популяцияләрдә BRCA1/2 скринингы турында дәлилләр туплана, бу географик төбәкләр арасындагы аермаларны күрсәтә.24–27 Сицилиянең көнбатышындагы БК когортасы турында хәбәрләр булса да, Сицилиянең көнчыгыш популяциясендә BRCA1/2 скринингы турында мәгълүмат азрак.28,29
Без монда көнчыгыш Сицилиядән килгән БК пациентларында BRCA1/2 җенес линияләре буенча скрининг нәтиҗәләрен сурәтлибез, BRCA1 яки BRCA2 мутацияләренең булуын бу шешләрнең төп клиник-патологик үзенчәлекләре белән тагын да бәйләп күрсәтәбез.
Катаниядәге Поликлинико хастаханәсендәге "Эксперименталь онкология һәм гематология үзәге"ндә ретроспектив тикшеренү үткәрелде. Родолико - Сан-Марко, Катания. 2017 елның гыйнварыннан 2021 елның мартына кадәр күкрәк һәм аналык бизе, меланома, ашказаны асты бизе яки простата яман шеше белән авыручы барлыгы 455 пациент BRCA/2 генетик тикшерүе өчен безнең молекуляр диагностик лабораториягә җибәрелде. Бу тикшеренү Хельсинки декларациясенә туры китереп үткәрелде, һәм барлык катнашучылар да молекуляр анализ алдыннан язмача ризалык бирделәр.
БКның гистологик һәм биологик үзенчәлекләре (ER, PgR, HER2 статусы, Ki-67 һәм дәрәҗәсе) үзәк биопсия яки хирургик үрнәкләрдә бәяләнде, бары тик агрессив шеш компонентларын гына исәпкә алып. Бу үзенчәлекләргә нигезләнеп, БКлар түбәндәгечә классификацияләнде: люминаль А (ER+ һәм/яки PgR+, HER2-, Ki-67<20%), люминаль В (ER+ һәм/яки PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), люминаль B-HER2+ (ER һәм/яки PgR+, HER2+), HER2+ (ER һәм PgR-, HER2+) яки өчләтә тискәре (ER һәм PgR-, HER2-).
BRCA1 һәм BRCA2 мутация статусын бәяләү алдыннан, онколог, генетик һәм психологны үз эченә алган күп дисциплинар төркем һәр пациент өчен BRCA1 һәм/яки BRCA1 булуын яки BRCA2 генында ПВ куркынычы югары булган кешеләрне билгеләү өчен шеш генетикасы буенча консультация үткәрде. Пациентларны сайлау Италия медицина онкология җәмгыяте (AIOM) күрсәтмәләренә һәм җирле Сицилия тәкъдимнәренә туры китереп башкарылды.30,31 Бу критерийларга түбәндәгеләр керә: (i) сизгерлек геннарында билгеле патоген вариантларның гаилә тарихы (мәсәлән, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) БК белән авыручы ир-атлар; (iii) БК һәм ОК белән авыручылар; (iv) БК <36 яшь, TNBC <60 яшь, яки ике яклы БК <50 яшь булган хатын-кызлар; (v) БК <50 яшь һәм ким дигәндә бер беренче дәрәҗә туганының шәхси медицина тарихы: (a) БК < 50 яшь; (b) теләсә нинди яшьтәге муцинлы булмаган һәм чиксез ОК; (c) ике яклы БК; (d) ир-атта БК; (e) ашказаны асты бизе яман шеше; (f) простата яман шеше; (vi) ике яки аннан да күбрәк шәхси БК тарихы > 50 ел һәм гаиләдә БК, ОК яки ашказаны асты бизе яман шеше тарихы булган туганнарның берсе (шул исәптән ул беренче дәрәҗә туган булган туганнар); (vii) ОК тарихы һәм ким дигәндә бер беренче дәрәҗә туганы: (a) БК <50 ел; (b) БӨЯ; (c) ике яклы БК; (d) ир-атта БК; (vii) югары дәрәҗәдәге сероз ОК белән авыручы хатын-кыз.
Һәр пациенттан 20 мл периферик кан үрнәге алынды һәм ЭДТА пробиркаларына җыелды (BD Biosciences). Геном ДНК 0,7 мл тулы кан үрнәкләреннән QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Хильден, Италия) кулланып, җитештерүче күрсәтмәләренә туры китереп аерылды һәм Qubit® 3.0 флуорометры (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, АКШ) аша үткәрелде. Саннарны билгеләүне башкарыгыз. Максатлы баету һәм китапханә әзерләү Oncomine™ BRCA Research Assay Chef тарафыннан башкарыла, ул җитештерүче күрсәтмәләренә туры китереп автоматлаштырылган китапханә әзерләү өчен Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 комплектына йөкләнергә әзер. Комплект ике мультиплекслы ПЦР праймер пулыннан тора, аларны барлык BRCA1 (NM_007300.3) һәм BRCA2 (NM_000059.3) геннарын өйрәнү өчен кулланырга мөмкин. Кыскасы, һәр сыекландырылган үрнәк ДНКның 15 мкл (10 нг) китапханә әзерләү өчен штрих-кодлы пластиналарга өстәлде һәм барлык реагентлар һәм чыгым материаллары Ion Chef™ коралына йөкләнде. Аннары Ion Chef™ коралында автоматлаштырылган китапханә әзерләү һәм штрих-кодлы үрнәк китапханәсен туплау башкарылды. Аннары әзерләнгән китапханәләр саны җитештерүче күрсәтмәләренә туры китереп Qubit® 3.0 флуорометры (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, АКШ) белән бәяләнде. Ниһаять, китапханәләр Ion Chef™ китапханә үрнәк пробиркаларында эквимоляр нисбәтләрдә берләштерелә. (штрих-кодлы трубкалар) һәм Ion Chef™ коралына йөкләнде. Секвенирлау Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) коралы (Thermo Fisher Scientific) ярдәмендә Ion 510 чипы (Thermo Fisher Scientific) ярдәмендә башкарылды. Мәгълүматлар анализы Amplicon Suite (SmartSeq srl) һәм Ion Reporter Software тарафыннан башкарылды.
Барлык вариантлар номенклатурасы да онлайн режимда (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen) урнаштырылган Кеше геномы вариациясе консорциумының гамәлдәге күрсәтмәләренә туры килде. BRCA1/2 вариантларының клиник әһәмияте Халыкара консорциум ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) классификациясен кулланып һәм ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD һәм UMD кебек төрле мәгълүмат базаларына мөрәҗәгать итеп билгеләнде. Классификация биш төрле куркыныч категориясен үз эченә ала: зарарсыз (I категория), ихтимал зарарсыз (II категория), билгесез әһәмияткә ия вариант (VUS, III категория), ихтимал патоген (IV категория) һәм патоген (V категория). VarSome шулай ук ​​мутацияләрнең аксым структурасына һәм функциясенә йогынтысын анализлады, бу 30 мәгълүмат базасына керү мөмкинлеге булган мәгълүмати корал.32
Һәр VUS өчен потенциаль клиник әһәмиятне билгеләү өчен, түбәндәге исәпләү аксымын фаразлау алгоритмнары кулланылды: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) һәм Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). 1 һәм 2 нче класс дип классификацияләнгән вариантлар кыргый тип дип саналды.
Сэнгер секвенирлавы һәр патоген вариантның булуын раслады. Кыскасы, һәр ачыкланган вариант өчен BRCA1 һәм BRCA2 геннарының белешмә эзлеклелекләрен (NG_005905.2, NM_007294.3 һәм NG_012772.3, NM_000059.3) кулланып, бер пар махсус праймер эшләнгән. Шуңа күрә, максатчан ПЦР, аннары Сэнгер секвенирлавы башкарылды.
BRCA1/2 генына тискәре тест нәтиҗәсе булган пациентлар җитештерүче күрсәтмәләренә туры китереп, зур геном үзгәртеп коруларның (LGR) булуын бәяләү өчен мультиплекс лигациягә бәйле зонд амплификациясе (MLPA) ярдәмендә тикшерелделәр. Кыскасы, ДНК үрнәкләре денатурацияләнә һәм 60ка кадәр BRCA1 һәм BRCA2 генына хас зондлар кулланыла, аларның һәрберсе якынча 60 нуклеотид озынлыгындагы билгеле бер ДНК эзлеклелеген ачыклый. Аннары уникаль ПЦР ампликоннар җыелмасыннан торган зонд амплификациясе продуктлары капилляр электрофорез һәм Cofalyser.Net программасы ярдәмендә тиешле партиягә хас Cofalyser таблицалары белән берлектә анализланды (www.mrcholland.com).
Сайланган клиник-патологик үзгәрүчәннәр (гистологик дәрәҗә һәм Ki-67% пролиферация индексы) BRCA1/2 PV булуы белән бәйле иде, алар Prism программа тәэминаты v. 8.4 ярдәмендә Фишерның төгәл тесты ярдәмендә исәпләнде, p-кыйммәте <0.05 әһәмиятле дип фаразланды.
2017 елның гыйнварыннан 2021 елның мартына кадәр 455 пациент BRCA1/2 җенес мутацияләренә тикшерелде. Мутация тесты Поликлинико хастаханәсенең Эксперименталь онкология һәм гематология үзәгендә үткәрелде. Сицилия күрсәтмәләре буенча (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), Катания Родоликосы - Сан-Марко" клиникасында барлыгы 389 пациент теркәлгән. Күкрәк яман шеше, 37 йомыркалык яман шеше, 16 ашказаны асты бизе яман шеше, 8 простата яман шеше һәм 5 меланома бар иде. Пациентларның яман шеш төре һәм анализ нәтиҗәләре буенча бүленеше 1 нче рәсемдә күрсәтелгән.
1 нче рәсемдә тикшеренүгә гомуми күзәтүне күрсәтүче блок-схема күрсәтелгән. Күкрәк, меланома, ашказаны асты бизе, простата яки йомыркалык шешләре булган пациентлар BRCA1 һәм BRCA2 геннарындагы мутацияләргә тикшерелгән.
Кыскартулар: PV, патоген вариант; VUS, билгесез әһәмияткә ия вариант; WT, кыргый типтагы BRCA1/2 эзлеклелеге.
Без тикшеренүләребезне сайлап күкрәк яман шеше когорталарына юнәлттек. Пациентларның уртача яше 49 яшь иде (диапазоны 23-89) һәм күбесенчә хатын-кызлар иде (n=376, яки 97%).
Бу катнашучыларның 64ендә (17%) BRCA1/2 мутацияләре булган һәм алар барысы да хатын-кызлар булган. Утыз бишендә (9%) PV, ә 29ында (7,5%) VUS булган. 35 патоген вариантның унҗидесе (48,6%) BRCA1да һәм 18е (51,4%) BRCA2да, ә 5 VUS BRCA1да (17,2%) һәм 24е (82,8%) BRCA2да булган (1 һәм 2 нче рәсемнәр). LGR MLPA анализында булмаган.
2 нче рәсем. 389 күкрәк яман шеше белән авыручыда BRCA1 һәм BRCA2 мутацияләрен анализлау.(A) 389 күкрәк яман шеше белән авыручыда патоген вариантларның (PV) (кызыл), билгесез әһәмияткә ия вариантларның (VUS) (кызгылт сары) һәм WT (зәңгәр) бүленеше; (B) 389 күкрәк яман шеше белән авыручы Утыз бишендә (9%) BRCA1/2 патоген вариантлары (PV) булган. Алар арасында 17се (48,6%) BRCA1 PV йөртүчеләре (караңгы кызыл) һәм 18е (51,4%) BRCA2 йөртүчеләре (ачык кызыл) булган; (C) 389 кешедән 29ы (7,5%) VUS, 5е (17,2%) BRCA1 геннары (караңгы кызгылт сары) һәм 24е (82,8%) BRCA2 геннары (ачык кызгылт сары) булган.
Кыскартулар: PV, патоген вариант; VUS, билгесез әһәмияткә ия вариант; WT, кыргый типтагы BRCA1/2 эзлеклелеге.
Аннары без BRCA1/2 PV белән авыручыларда BC молекуляр субтипларының таралуын тикшердек. Таралыш 2 (5,7%) люминаль A, 15 (42,9%) люминаль B, 3 (8,6%) люминаль B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ һәм 13 (37,1%) TNBC пациентларын үз эченә алды. BRCA1-позитив пациентлар арасында 5 (29,4%) люминаль B BC, 2 (11,8%) HER2+ авыруы, һәм 10 (58,8%) TNBC булган. BRCA1 мутацияләре булмаган шешләр я люминаль A, я люминаль B-HER2+ булган (3 нче рәсем). BRCA2-позитив төркемчәсендә 10 (55,6%) шеш люминаль B, 3 (16,7%) люминаль B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC һәм 2 (11,1%) ... булган. А люмены (3 нче рәсем). Бу төркемдә HER2+ шешләре юк иде. Шулай итеп, BRCA1 мутацияләре TNBC пациентларында киң таралган, ә BRCA2 үзгәрешләре В люмены кешеләрендә өстенлек итә.
3 нче рәсем. BRCA1 һәм BRCA2 патоген вариантлары булган пациентларда күкрәк яман шеше төрләренең таралышы. Күкрәк яман шеше белән авыручыларның молекуляр төрләре арасында BRCA1- (караңгы кызыл) һәм BRCA2- (ачык кызыл) PV бүленешен күрсәтүче гистограммалар. Һәрбер рамка эчендә күрсәтелгән саннар күкрәк яман шеше төрләренең һәрберсе өчен BRCA1 һәм BRCA2 PV булган пациентларның процентын күрсәтә.
Кыскартулар: PV, патоген вариант; HER2+, кеше эпидермис үсеш факторы рецепторы 2 уңай; TNBC, өчләтә тискәре күкрәк яман шеше.
Аннары без BRCA1 һәм BRCA2 PV типын һәм ген локализациясен бәяләдек. BRCA1 PV тикшеренүендә без 7 бер нуклеотид вариантын (SNV), 6 делецияне, 3 дупликацияне һәм 1 инсерцияне күзәттек. Бары тик бер мутация (c.5522delG) яңа ачышны күрсәтә. Ике субъектта да ачыкланган иң еш очрый торган BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT иде. Бу үзгәреш BRCA1 экзон 15 тә биш нуклеотидның (CTAAT) делециясен үз эченә ала, бу 1679 кодонында аминокислота лейцинының тирозин белән алышынуына китерә, һәм фаразланган альтернатив стоп-кодон белән трансляция рамкасының күчеше аркасында аксымның вакытыннан алда киселүе барлыкка килә. Башка барлык үзгәрешләр бары тик бер очракта гына ачыклана. Шунысы игътибарга лаек, хәбәр ителгән PV ларның берсе сплайс сайты консенсус өлкәсендә урнашкан (c.4357+1G>T) (1 нче таблица).
BRCA2 PVга килгәндә, без 6 делеция, 6 SNV һәм 2 дупликация күзәттек. Табылган үзгәрешләрнең берсе дә яңа түгел. Безнең популяциядә өч мутация кабатланды, 3 кешедә c.428dup һәм c.8487+1G>A күзәтелде, аннары ике очракта c.5851_5854delAGTT алынды. c.428dup үзгәртүе BRCA2-нең 5 нче экзонында C-ның кабатлануын үз эченә ала, ул кыскартылган, функциональ булмаган аксымны кодлый дип фаразлана. c.8487+1G>A мутациясе BRCA2 интронының 19 интрон өлкәсендә (± 1,2) барлыкка килә һәм сплайсинг консенсус эзлеклелегенә тәэсир итә, нәтиҗәдә сплайсинг үзгәрә, нәтиҗәдә аномаль яки аксым юк. c.5851_5854delAGTT патоген варианты BRCA2-нең 10 нчы кодлаучы экзонында 5851 дән 5854 гә кадәр нуклеотид позицияләреннән 4-нуклеотид делециясе аркасында барлыкка килә. ген һәм фаразланган альтернатив стоп-кодон (p.S1951WfsTer) белән трансляция рамка күчешенә китерә. Шунысы игътибарга лаек, элек хәбәр ителгәнчә, бер үк пациентта c.631G>A һәм c.7008-2A>T үзгәрешләре ачыкланган.34 Беренче мутация BRCA2 экзон 7 дә аденозинны (A) нуклеотидлы гуанин (G) белән алыштыруны үз эченә ала, нәтиҗәдә 211 кодонында валин изолейцинга үзгәрә, изолейцин Аминокислота - бик охшаш үзлекләргә ия аминокислота. Бу үзгәреш нормаль мРНК сплайсингына тәэсир итә. Икенче вариант интрон өлкәсендә урнашкан һәм BRCA2 кодлаучы генның 13 экзоныннан алда икеләтә А-га тимин (T) алыштыруына китерә. c.7008-2A>T үзгәреше төрле озынлыктагы берничә транскрипт тудырырга мөмкин. Моннан тыш, BRCA2 PV төркемендә 18 үзгәрешнең 4е (22,2%) интроник булган.
Аннары без функциональ доменнарда һәм аксымнар белән бәйләнеш өлкәләрендә BRCA1/2 зарарлы мутацияләрен картага төшердек (4 нче рәсем). BRCA1 генында PVларның 50% күкрәк яман шеше кластеры өлкәсендә (BCCR), ә мутацияләрнең 22% ы йомырка яман шеше кластеры өлкәсендә (OCCR) урнашкан (4А рәсем). BRCA2 PVда вариантларның 35,7% ы BCCR өлкәсендә һәм мутацияләрнең 42,8% ы OCCRда урнашкан (4Б рәсем). Аннары без PVның BRCA1 һәм BRCA2 аксым доменнарында урнашуын бәяләдек. BRCA1 аксымы өчен без элмәк һәм спираль спираль доменнарында өч PV, ә BRCT доменында ике мутация таптык (4А рәсем). BRCA2 аксымы өчен BRC кабатлау доменына 4 PV картага төшерелде, ә 3 интрон һәм 3 экзоник үзгәреш ачыкланды. олиго/олигосахарид белән бәйләнеш (OB) һәм манара (T) доменнары (4B рәсем).
4 нче рәсем. BRCA1 һәм BRCA2 аксымнарының схематик күрсәткече һәм патоген вариантларның локализациясе. Бу рәсемдә күкрәк яман шеше белән авыручыларда BRCA1 (A) һәм BRCA2 (B) патоген вариантларының таралышы күрсәтелгән. Экзоник мутацияләр зәңгәр төстә, ә интрон вариантлары кызгылт сары төстә күрсәтелгән. Сызык биеклеге очраклар санын күрсәтә. BRCA1 һәм BRCA2 аксымнары һәм аларның функциональ доменнары күрсәтелгән.(A) BRCA1 аксымында элмәк домены (RING) һәм ядро ​​локализациясе эзлеклелеге (NLS), спиральле спираль домены, SQ/TQ кластер домены (SCD) һәм BRCA1 C-терминаль домены (BRCT) бар.(B) BRCA2 аксымында сигез BRC кабатлануы, спираль доменлы ДНК белән бәйләүче домен (Helical), өч олигонуклеотид/олигосахарид белән бәйләүче (OB) бөкләнеш, манара домены (T) һәм С ягында NLS бар. Күкрәк яман шеше кластеры өлкәсе (BCCR) һәм аналык яман шеше кластеры дип аталган өлкәләр. Аста өлкә (OCCR) күрсәтелгән.*Стоп-кодоннарны билгеләүче мутацияләрне күрсәтә.
Аннары без BRCA1/2 PV булуы белән бәйле булырга мөмкин булган б.э.к. клиник-патологик үзенчәлекләрен тикшердек. 181 BRCA1/2-тискәре пациент (ташучы булмаганнар) һәм барлык ташучылар (n = 35) өчен тулы клиник язмалар бар иде. Шешнең таралу тизлеге һәм дәрәҗәсе арасында корреляция бар иде.
Без Ki-67 бүленешен безнең когортаның медианасы нигезендә исәпләдек (25%, диапазон <10-90%). Ki-67 < 25% булган субъектлар "түбән Ki-67" дип билгеләнде, ә кыйммәтләре ≥ 25% булган кешеләр "югары Ki-67" дип саналды. Ташучы булмаганнар һәм BRCA1 PV ташучылар арасында Ki-67 аермалары (p<0.01) табылды (5А рәсем).
5 нче рәсем. BRCA1 һәм BRCA2 PV белән һәм аннан башка күкрәк яман шеше белән авыручы хатын-кызларда Ki-67 һәм дәрәҗә бүленешенең корреляциясе.(A) 181 БК йөртүче булмаган пациентта BRCA1 (18) яки BRCA2 (17) PV белән авыручы пациентларда Ki-67 уртача кыйммәтләрен күрсәтүче тартма графигы. 0,5 тән түбән P кыйммәтләре статистик яктан әһәмиятле дип саналды.(B) БК яман шеше белән авыручыларны BRCA1 һәм BRCA2 мутация статусына карап гистологик дәрәҗә төркемнәренә (G2 һәм G3) бүлүне күрсәтүче гистограмма (WT субъектлары, BRCA1 һәм BRCA2 PV йөртүчеләре).
Шулай ук, без шеш дәрәҗәсе BRCA1/2 PV булуы белән бәйлеме-юкмы икәнен тикшердек. Безнең популяциядә G1 BC булмаганлыктан, без пациентларны ике төркемгә бүлдек (G2 яки G3). Ki-67 нәтиҗәләренә туры китереп, анализ шеш дәрәҗәсе һәм BRCA1 мутациясе арасында статистик яктан әһәмиятле корреляцияне күрсәтте, BRCA1 йөртүчеләрендә G3 шешләренең өлеше йөртүче булмаганнарга караганда югарырак (p<0,005) (5B рәсем).
ДНК секвенирлау технологиясендәге казанышлар BRCA1/2 генетик тестлауда күрелмәгән казанышларга мөмкинлек бирде, бу гаиләдә яман шеш тарихы булган пациентлар өчен бик мөһим нәтиҗәләргә китерә. Бүгенге көнгә кадәр якынча 20 000 BRCA1/2 варианты ачыкланган һәм Америка медицина генетикасы җәмгыяте 35 һәм ENIGMA системасы буенча классификацияләнгән.35,36 BRCA1/2 мутация спектры географик төбәкләрдә төрлечә булуы билгеле.37 Италия эчендә BRCA1/2 PV күрсәткече 8% тан 37% ка кадәр булган, бу ил эчендә киң үзгәрүчәнлек күрсәтә.38,39 Якынча 5 миллион халкы булган Сицилия - Италиядә яшәүчеләр саны буенча бишенче зур төбәк. BRCA1/2 таралышы турында мәгълүматлар көнбатыш Сицилиядә булса да, утрауның көнчыгыш өлешендә бу турыда киң дәлилләр юк.
Безнең тикшеренү - Сицилиянең көнчыгышында BC пациентларында BRCA1/2 PV очраклары турында беренче хәбәрләрнең берсе.28 Без анализыбызны BCга юнәлттек, чөнки бу безнең когортада иң еш очрый торган авыру.
389 б.э.к. пациентын тикшергәндә, 9% BRCA1/2 PV йөрткән, алар BRCA1 һәм BRCA2 арасында тигез бүленгән. Бу нәтиҗәләр Италия популяциясендә элек хәбәр ителгән нәтиҗәләр белән туры килә.28 Кызыклысы шунда ки, безнең когортаның 3% (13/389) ир-атлар иде. Бу күрсәткеч ир-атларның күкрәк яман шеше өчен көтелгәннән югарырак (барлык б.э.к. 1%),40 BRCA1/2 мутация куркынычына нигезләнгән популяцияләрне сайлауны чагылдыра. Ләкин бу ирләрнең берсе дә BRCA1/2 PV үстермәгән, шуңа күрә алар PALB2, RAD51C һәм D кебек сирәгрәк очрый торган мутацияләрнең булуын бетерү өчен молекуляр анализ өчен кандидатлар иде. BRCA2 VUS ачыкланган кешеләрнең 7% ында билгесез әһәмияткә ия вариантлар табылган. Хәтта бу нәтиҗә дә алдан булган дәлилләр белән туры килә.28,41,42
BRCA1/2 мутант хатын-кызларда BC молекуляр субтипларының таралышын анализлаганда, без TNBC һәм BRCA1 PV (58,8%) һәм люминаль B BC һәм BRCA2 PV (55,6%) арасындагы билгеле бәйләнешләрне расладык.16,43 BRCA1 һәм BRCA2 PV йөртүчеләрендә люминаль A һәм HER2+ шешләре гамәлдәге әдәбият мәгълүматлары белән туры килә.16,43
Аннары без BRCA1/2 PV төренә һәм урнашуына игътибар итәбез. Безнең когортада иң еш очрый торган BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT иде. Инкорвая һ.б. бу вариантны үзләренең Сицилия когортасында тасвирламаганнар, башка авторлар аны BRCA1 PV җенес линиясе буларак хәбәр иткәннәр.34 Безнең когортада берничә BRCA1 PV табылган - мәсәлән, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA һәм c.5266dupC - алар Сицилиядә күзәтелгән.28 Шуларның икесе BRCA1 нигезләүче мутациясе (c.181T>G һәм c.5266dupC) Көнчыгыш һәм Үзәк Европаның (Польша, Чехия), Словения, Австрия, Венгрия, Беларусь һәм Алмания) ашкенази яһүдләрендә еш очрый, 44,45 һәм, АКШта һәм Аргентинада, күптән түгел БЦ һәм ОК белән авыручы итальян пациентларында "рецидив җенес линиясе варианты" дип билгеләнгән. 34c.514del варианты элек Палермо һәм Мессинада төньяк Сицилиядән 8 күкрәк яман шеше пациентында ачыкланган иде. Кызыклысы шунда ки, хәтта Инкорвая һ.б. Катаниядәге кайбер гаиләләрдә c.3253dupA вариантын таптылар.28 Иң күп BRCA2 PVлары - c.428dup, c.5851_5854delAGTT һәм интрон варианты c.8487+1G>A, алар Палермодагы c.428dup, c.5851_5854delAGTT пациентында тулырак хәбәр ителгән 28. PV Сицилиянең төньяк-көнбатышындагы хуҗалыкларда, нигездә, Трапани һәм Палермо төбәкләрендә күзәтелгән, ә c.5851_5854delAGTT PV Сицилиянең төньяк-көнбатышындагы хуҗалыкларда күзәтелгән. 8487+1G>A варианты Мессина, Палермо һәм Калтаниссетта кешеләрендә ешрак очрый.28 Реббек һ.б. Колумбиядә c.5851_5854delAGTT үзгәреше элек тасвирланган иде.37 Тагын бер BRCA2 PV, c.631+1G>A, Сицилиядән килгән БК һәм ОК пациентларында табылган (Агридженто, Сиракуза һәм Рагуса).28 Шунысы игътибарга лаек, без шул ук пациентта ике BRCA2 вариантының (BRCA2 c.631G>A һәм c.7008-2A>T) бергә яшәвен күзәттек, алар элек шулай хәбәр ителгәнчә, цис режимында аерылган дип фаразладык.34,46 Бу BRCA2 мутацияләре чыннан да Италия төбәгендә еш күзәтелә һәм вакытыннан алда туктату кодоннарын кертүе, хәбәрче РНК сплайсингына тәэсир итүе һәм BRCA2 аксымының эшләмәвенә китерүе ачыкланган.47,48
Шулай ук ​​без BRCA1 һәм BRCA2 PV'ларын аксым доменнары һәм геннарының фаразланган OCCR һәм BCCR өлкәләрендә картага төшердек. Бу өлкәләрне Реббек һ.б. аналык һәм күкрәк яман шеше үсеш куркынычы өлкәләре дип сурәтләделәр.49 Ләкин, җенес сызыгы вариантларының урнашуы белән күкрәк яки аналык яман шеше куркынычы арасындагы бәйләнеш турындагы дәлилләр бәхәсле булып кала.28,50-52 Безнең популяциядә BRCA1 PV'лары күбесенчә BCCR өлкәсендә урнашкан, ә BRCA2 PV'лары күбесенчә OCCR өлкәсендә урнашкан. Ләкин, без фаразланган OCCR һәм BCCR өлкәләре белән BC үзенчәлекләре арасында бернинди бәйләнеш таба алмадык. Бу BRCA1/2 мутацияләре булган пациентлар саны чикләнгән булу сәбәпле булырга мөмкин. Аксым домены ягыннан караганда, BRCA1 PV'лары бөтен аксым буенча таралган, һәм BRCA2 үзгәрешләре өстенлекле рәвештә BRC кабатлау доменында очрый.
Ниһаять, без БЦ клиник-патологик үзенчәлекләрен BRCA1/2 PV белән корреляцияләдек. Пациентлар саны чикләнгән булу сәбәпле, без Ki-67 һәм шеш дәрәҗәсе арасында гына мөһим корреляция таптык. Ki-67 бәяләү һәм интерпретациясе бәхәсле булып калса да, югары пролиферация күрсәткечләре авыруның кабатлану куркынычы артуы һәм яшәүнең кимүе белән бәйле булуы билгеле. Бүгенге көнгә "югары" һәм "түбән" Ki-67 арасындагы аерма өчен чик 20% тәшкил итә. Ләкин бу чик BRCA1/2 мутациясе булган пациентлар популяциясенә кагылмый, аларның уртача Ki-67 кыйммәте 25% тәшкил итә. Югары Ki-67 күрсәткечләрендәге бу тенденцияне безнең люминаль B һәм TNBC когорталарындагы таралу белән аңлатырга мөмкин, аларда люминаль А шешләре аз иде. Ләкин, кайбер дәлилләр югарырак Ki-67 чик сызыгы (25–30%) пациентларны аларның фаразларына карап яхшырак стратификацияләргә мөмкин дип күрсәтә кебек.53,54 Безнең анализ нәтиҗәләреннән күренгәнчә, мөһим корреляция гаҗәп түгел. Югары Ki-67 һәм дәрәҗәләр һәм ... булу арасында була. BRCA1 PV. Чынлыкта, BRCA1 белән бәйле шешләр TNBC өчен типик һәм агрессиврак үзенчәлекләр күрсәтә.16,17
Йомгаклап әйткәндә, бу тикшеренү көнчыгыш Сицилиядән килгән BC когортасында BRCA1/2 мутация статусы турында отчет бирә. Гомумән алганда, безнең ачышлар мутация таралуы һәм BC клиник-патологик үзенчәлекләре ягыннан алдан булган дәлилләргә туры килә. BRCA1/2-мутант BC пациентларының зуррак популяцияләрендә күбрәк тикшеренүләр үткәрү, мәсәлән, күп геномлы киңәйтелгән мутация анализын куллану, BRCA1/2-гә караганда аерым һәм сирәгрәк очрый торган PV барлыгын бәяләү өчен кирәк. Бу генетик мутацияләр аркасында яман шеш авыруы куркынычы арткан кешеләр санын ачыкларга һәм дөрес дәваларга мөмкинлек бирәчәк.
Без пациентларның тикшеренү максатларында шеш үрнәкләрен аноним рәвештә чыгару турында хәбәрдар ризалык имзалаганнарын расладык. Барлык пациентлар да Хельсинки декларациясенә туры китереп, язмача хәбәрдар ризалык имзаладылар. AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco” политикасына ярашлы, бу тикшеренү этик караудан азат ителде, чөнки BRCA1/2 анализы клиник практика нигезендә башкарылды һәм барлык пациентлар да язмача хәбәрдар ризалык бирделәр. Пациентлар шулай ук ​​үз мәгълүматларын тикшеренү максатларында кулланырга ризалык бирәләр.
Этика комитеты үтенече буенча күкрәк яман шеше белән авыручыларны дәвалауда күрсәткән ярдәме өчен профессор Паоло Виньерига рәхмәт белдерәбез.
Федерика Марторана Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer компанияләреннән гонорарлар турында хәбәр итә. Башка авторлар бу эштә мәнфәгатьләр конфликты юк дип белдерәләр.
1. Сунг Х, Ферлай Дж, Сигел РЛ һ.б. Глобаль яман шеш статистикасы 2020: GLOBOCAN дөньяның 185 илендә 36 яман шеш авыруының очракларын һәм үлем очракларын бәяли. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660