Јаваскрипт је тренутно онемогућен у вашем прегледачу. Неке функције ове веб странице неће радити када је јаваскрипт онемогућен.
Региструјте се са својим специфичним подацима и специфичним леком који вас занима, а ми ћемо упарити информације које наведете са чланцима у нашој опсежној бази података и одмах вам послати ПДФ копију е-поштом.
作者 Стелла С, Витале СР, Марторана Ф, Массимино М, Павоне Г, Ланзафаме К, Бианца С, Бароне Ц, Горгоне Ц, Фицхера М, Манзелла Л
Стефанија Стела, 1,2 Силвија Рита Витале, 1,2 Федерика Марторана, 1,2 Микеле Масимино, 1,2 Ђулијана Павоне, 3 Катиа Ланзафаме, 3 Себастијано Бјанка, 4 Кјара Бароне, 5 Кристина Горгоне, 6, 6 Марко Физела, 1 Департман Ц, Ликија, 7 и експерименталну медицину, Универзитет у Катанији, Катанија, 95123, Италија;2 Центар за експерименталну онкологију и хематологију, АОУ Полицлиницо “Г.Родолицо – Сан Марцо”, Катанија, 95123, Италија; 3 Медицинска онкологија, АОУ Полицлиницо “Г. Родолицо – Сан Марцо”, Катанија, 95123, Италија; 4 Медицинска генетика, АРНАС Гарибалди, Катанија, 95123, Италија; 5 Медицинска генетика, АСП, Сиракуза, 96100, Италија; 6 Одељење за биомедицинске и биотехнолошке науке, Универзитет у Катанији, Медицинска генетика, Катанија, Италија, 95123; 7 Истраживачки институт Оаси-IRCCS, Троина, 94018, Италија Комуникације: Стефанија Стела, тел +39 095 378 1946, имејл [email protected]; [email protected] Сврха: Мутације герминативне линије у BRCA1 и BRCA2 и утврђени рак дојке (РД), јајника (РЈ) и други повезани са доживотним ризиком од рака. Тестирање на BRCA ген је кључно за процену индивидуалног ризика, као и за проналажење метода превенције код здравих носилаца и прилагођавање третмана код пацијената оболелих од рака. Преваленција промена BRCA1 и BRCA2 значајно варира у зависности од географских региона, и иако постоје подаци о патогеним варијантама BRCA у сицилијанским породицама, недостају студије које су посебно усмерене на популације у источној Сицилији. Циљ наше студије био је да истражимо инциденцу и дистрибуцију патогених промена герминативне линије BRCA у кохорти пацијената са РД из источне Сицилије и да проценимо њихову повезаност са специфичним особинама РД користећи секвенцирање следеће генерације. Присуство промена је у корелацији са степеном тумора и индексом пролиферације. РЕЗУЛТАТИ: Укупно, 35 пацијената (9%) је имало патогену варијанту BRCA, 17 (49%) код BRCA1 и 18 (51%) код BRCA2. Промене BRCA1 су присутне код пацијената са троструко негативним РД, док су мутације BRCA2 чешће код пацијената са луминалним РД. У поређењу са Код неносилаца, испитаници са BRCA1 варијантама имали су значајно виши степен тумора и пролиферативни индекс. Закључци: Наши налази пружају преглед статуса мутација BRCA код пацијената са раком дојке из источне Сицилије и потврђују улогу NGS анализе у идентификацији пацијената са наследним раком дојке. Генерално, ови подаци су у складу са претходним доказима који подржавају BRCA скрининг за правилну превенцију и лечење рака код носилаца мутација.
Рак дојке (РД) је најчешћи малигнитет у свету и најсмртоноснији рак код жена.1 Биолошке карактеристике које одређују прогнозу и клиничко понашање РД су опсежно проучаване и делимично разјашњене током времена. У ствари, тренутно се користи неколико сурогат маркера за класификацију РД у различите молекуларне подтипове. То су рецептор естрогена (ЕР) и/или прогестерона (ПгР), амплификација рецептора 2 људског епидермалног фактора раста (HER2), индекс пролиферације Ki-67 и степен тумора (G).2 Комбинација ових варијабли идентификовала је следеће категорије РД: 1) Луминални тумори, који показују експресију ЕР и/или ПгР, чинили су 75% РД. Ови тумори су даље подељени на Луминал А, када је Ki-67 био испод 20% и HER2 негативан, и Луминал Б, када је Ki-67 био једнак или изнад 20% и у присуству HER2 амплификације, без обзира на индекс пролиферације; 2) HER2+ тумори који су негативни на ЕР и ПгР, али показују HER2 амплификацију. Ова група чини 10% свих тумора дојке; 3) Троструко негативни рак дојке (TNBC), који не показује експресију ER и PgR и амплификацију HER2, чини око 15% карцинома дојке.2-4
Међу овим подтиповима рака дојке, степен тумора и индекс пролиферације представљају попречне биомаркере који су директно и независно повезани са агресивношћу и прогнозом тумора.5,6
Поред горе поменутих биолошких карактеристика, улога наслеђених генетских промена које доводе до развоја рака дојке постала је све важнија у последњих неколико година.7 Око 1 од 10 тумора дојке наслеђује се због промена герминативне линије у специфичним генима.8 Две велике епидемиолошке студије које су обухватиле више од 180.000 жена недавно су идентификовале групу од осам гена (тј. ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C и RAD51D) првенствено одговорних за наследни рак дојке. Међу овим генима, BRCA1 и BRCA2 (у даљем тексту BRCA1/2) показали су најјачу корелацију са развојем тумора дојке.9-12 У ствари, мутације герминативне BRCA1/2 значајно повећавају доживотни ризик од рака дојке, као и других малигнитета, укључујући обољења јајника, простате, панкреаса, колоректалног карцинома и меланома. Од 13. до 80. године, кумулативна инциденца рака дојке је 72% код жена са патогеном варијантом (ПВ) BRCA1 и 69% код жена са BRCA2. ПВ.14
Приметно је да једна недавна публикација сугерише да ризик од рака дојке зависи од врсте парализне панкреасне венозе. У ствари, у поређењу са патогеним скраћеним варијантама, очигледне мисенс варијанте, посебно у гену BRCA1, повезане су са смањеним ризиком од рака дојке, посебно код старијих жена.15
Присуство BRCA1 или BRCA2 полиморфних тумора повезано је са различитим биолошким и клиничко-патолошким карактеристикама.16,17 BRCA1-асоцирани ракови плућа имају тенденцију да буду клинички агресивни, слабо диференцирани и високо пролиферативни. Ови тумори су обично троструко негативни и имају рану старост почетка. Тумори који се јављају код пацијената са BRCA2-мутацијама обично показују умерене до добро диференциране степенице и варијабилне пролиферативне индексе. Ови тумори су чешћи у лумену Б и обично се јављају код старијих особа.16-18 Приметно је да мутације у BRCA1 и BRCA2 повећавају осетљивост на специфичне третмане, укључујући соли платине и циљане лекове као што су инхибитори поли(АДП-рибозе) полимеразе (PARPi).19,20
Током протеклих неколико година, примена секвенцирања следеће генерације (NGS) у клиничкој пракси омогућила је све већем броју пацијената са раком дојке да се подвргну молекуларном тестирању на синдроме подложности раку, укључујући BRCA1/2.21 Истовремено, дефиниције засноване на прецизним критеријумима у вези са породичном историјом, демографским и клиничко-патолошким карактеристикама како би се боље идентификовале особе достојне тестирања на BRCA1/2.22,23 У овом контексту, акумулирају се докази о скринингу BRCA1/2 у специфичним популацијама, истичући разлике између географских региона.24–27 Иако постоје извештаји о кохорти пацијената са раком дојке у западној Сицилији, мање је података доступно о скринингу BRCA1/2 у популацији источне Сицилије.28,29
Овде описујемо резултате скрининга герминативне линије BRCA1/2 код пацијената са раком дојке из источне Сицилије, додатно корелирајући присуство мутација BRCA1 или BRCA2 са главним клиничко-патолошким карактеристикама ових тумора.
Ретроспективна студија спроведена је у „Центру за експерименталну онкологију и хематологију“ у Поликлиничкој болници Родолико – Сан Марко у Катанији. Од јануара 2017. до марта 2021. године, укупно 455 пацијената са раком дојке и јајника, меланомом, панкреаса или простате упућено је у нашу молекуларно-дијагностичку лабораторију на генетско тестирање BRCA/2. Ова студија је спроведена у складу са Хелсиншком декларацијом, а сви учесници су дали писани информисани пристанак пре молекуларне анализе.
Хистолошке и биолошке карактеристике (ER, PgR, HER2 статус, Ki-67 и градус) карцинома доњег мозга (BC) процењене су на узорцима биопсије језгра или хируршким узорцима, узимајући у обзир само агресивне компоненте тумора. На основу ових карактеристика, карциноми доњег мозга (BC) су класификовани на следећи начин: луминални A (ER+ и/или PgR+, HER2-, Ki-67 <20%), луминални B (ER+ и/или PgR+, HER2-, Ki-67 ≥20%), луминални B-HER2+ (ER и/или PgR+, HER2+), HER2+ (ER и PgR-, HER2+) или троструко негативни (ER и PgR-, HER2-).
Пре процене статуса мутација BRCA1 и BRCA2, мултидисциплинарни тим који је укључивао онколога, генетичара и психолога спровео је консултације о генетици тумора за сваког пацијента како би се утврдило присуство BRCA1 и/или BRCA1 или особа са високим ризиком од парализе плућа у гену BRCA2. Селекција пацијената је извршена у складу са смерницама Италијанског друштва за медицинску онкологију (AIOM) и локалним сицилијанским препорукама.30,31 Ови критеријуми укључују: (i) породичну историју познатих патогених варијанти у генима осетљивости (нпр. BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) мушкарце са карциномом дојке; (iii) оне са карциномом дојке и раком простате; (iv) жене са карциномом дојке <36 година, немутансним карциномом дојке <60 година или билатералним карциномом дојке <50 година; (v) лична медицинска историја карцинома дојке <50 година и најмање једног рођака првог степена: (a) карцином дојке < 50 година; (b) немуцинозни и негранични карцином дојке било које старости; (c) билатерални карцином дојке; (d) мушки карцином дојке; (е) рак панкреаса; (ф) рак простате; (ви) две или више личних историја рака дојке > 50 година и породична историја рака дојке, рака простате или рака панкреаса за рођаке који су међусобно у сродству првог степена (укључујући рођаке са којима је она у сродству првог степена); (вии) Лична историја рака дојке и најмање један рођак првог степена: (а) рак дојке <50 година; (б) неоцрвени рак дојке; (ц) билатерални рак дојке; (д) мушки рак дојке; (вии) жена са високостепеним серозним раком дојке.
Узорак периферне крви од 20 мл је узет од сваког пацијента и сакупљен у ЕДТА епрувете (BD Biosciences). Геномска ДНК је изолована из 0,7 мл узорака пуне крви коришћењем QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Италија) према упутствима произвођача и пропуштена кроз Qubit® 3.0 флуорометар (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, САД). Извршена је квантификација. Обогаћивање циља и припрема библиотеке се врше помоћу Oncomine™ BRCA Research Assay Chef-а, спремног за учитавање у Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit за аутоматизовану припрему библиотеке према упутствима произвођача. Комплет се састоји од два мултиплекс PCR прајмер пула који се могу користити за проучавање свих BRCA1 (NM_007300.3) и BRCA2 (NM_000059.3) гена. Укратко, 15 µL сваког разблаженог узорка ДНК (10 нг) је додато на плоче са баркодовима за припрему библиотеке и сви реагенси и потрошни материјал су учитани на Ion Chef™ инструмент. Аутоматизована припрема библиотеке и обједињавање библиотеке са баркодовима узорака су затим извршени на Ion Chef™ инструменту. Број припремљених библиотека је затим процењен помоћу Qubit® 3.0 флуорометра (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, САД) према упутствима произвођача. Коначно, библиотеке се комбинују у еквимоларним односима у Ion Chef™ епруветама за узорке библиотеке (епрувете са баркодовима) и учитавају на инструмент Ion Chef™. Секвенцирање је извршено помоћу инструмента Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) са чипом Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Анализа података је извршена помоћу програма Amplicon Suite (SmartSeq srl) и софтвера Ion Reporter.
Сва номенклатура варијанти пратила је тренутне смернице Конзорцијума за варијације људског генома, доступне онлајн (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Клинички значај BRCA1/2 варијанти дефинисан је коришћењем класификације Међународног конзорцијума ENIGMA (Мрежа заснована на доказима за тумачење алела мутанта герминативне линије, https://enigmaconsortium.org/) и консултовањем различитих база података као што су ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD и UMD. Класификација укључује пет различитих категорија ризика: бенигна (категорија I), вероватно бенигна (категорија II), варијанта неизвесног значаја (VUS, категорија III), вероватно патогена (категорија IV) и патогена (категорија V). VarSome је такође анализирао ефекат мутација на структуру и функцију протеина, информативни алат са приступом 30 база података.32
Да би се сваком ВУС-у доделио потенцијални клинички значај, коришћени су следећи рачунарски алгоритми за предвиђање протеина: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) и Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Варијанте класификоване као класа 1 и 2 сматране су дивљим типом.
Сангерово секвенцирање је потврдило присуство сваке патогене варијанте. Укратко, пар специфичних прајмера је дизајниран за сваку детектовану варијанту коришћењем референтних секвенци гена BRCA1 и BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 и NG_012772.3, NM_000059.3, респективно). Стога је извршена циљана PCR, а затим Сангерово секвенцирање.
Пацијенти који су били негативни на ген BRCA1/2 тестирани су мултиплекс лигацијом зависном амплификацијом сонде (MLPA) према упутствима произвођача како би се проценило присуство великих геномских преуређења (LGR). Укратко, узорци ДНК су денатурисани и користи се до 60 сонди специфичних за ген BRCA1 и BRCA2, од којих свака детектује специфичну ДНК секвенцу дужине приближно 60 нуклеотида. Производи амплификације сонде, који се састоје од јединственог скупа PCR ампликона, затим су анализирани капиларном електрофорезом и помоћу Cofalyser.Net софтвера у комбинацији са одговарајућим Cofalyser табелама специфичним за серију (www.mrcholland.com).
Одабране клиничко-патолошке варијабле (хистолошки степен и Ki-67% индекс пролиферације) биле су повезане са присуством BRCA1/2 PV, израчунато помоћу Prism софтвера v. 8.4 користећи Фишеров егзактни тест, претпостављајући да је p-вредност <0,05 значајна.
Између јануара 2017. и марта 2021. године, 455 пацијената је тестирано на мутације BRCA1/2 гена. Тестирање мутација је спроведено у Центру за експерименталну онкологију и хематологију болнице Поликлинико. Према сицилијанским смерницама (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Jannaio 2020), у болници „Родолико у Катанији – Сан Марко“, укупно је 389 пацијената имало рак дојке, 37 рака јајника, 16 рака панкреаса, 8 рака простате и 5 меланома. Дистрибуција пацијената према типу рака и резултатима анализе приказана је на слици 1.
Слика 1 приказује дијаграм тока који приказује преглед студије. Пацијенти са туморима дојке, меланома, панкреаса, простате или јајника тестирани су на мутације у генима BRCA1 и BRCA2.
Скраћенице: PV, патогена варијанта; VUS, варијанта неизвесног значаја; WT, секвенца дивљег типа BRCA1/2.
Селективно смо фокусирали наше студије на кохорте оболелих од рака дојке. Пацијенткиње су имале средњу старост од 49 година (распон 23-89) и биле су претежно женског пола (n=376, или 97%).
Од ових испитаника, 64 (17%) је имало BRCA1/2 мутације и све су биле женског пола. Тридесет пет (9%) је имало PV, а 29 (7,5%) VUS. Седамнаест (48,6%) од 35 патогених варијанти јавило се код BRCA1 и 18 (51,4%) код BRCA2, док се 5 VUS јавило код BRCA1 (17,2%) и 24 (82,8%) код BRCA2 (слике 1 и 2). LGR није био присутан у MLPA анализи.
Слика 2. Анализа мутација BRCA1 и BRCA2 код 389 пацијената са раком дојке. (А) Дистрибуција патогених варијанти (PV) (црвена), варијанти неизвесног значаја (VUS) (наранџаста) и WT (плава) код 389 пацијената са раком дојке; (Б) 389 пацијената са раком дојке Тридесет пет (9%) је имало патогене варијанте (PV) BRCA1/2. Међу њима, 17 (48,6%) су били носиоци BRCA1 PV (тамноцрвена) и 18 (51,4%) су били носиоци BRCA2 (светлоцрвена); (Ц) 29 (7,5%) од 389 испитаница је носило VUS, 5 (17,2%) BRCA1 гене (тамнонаранџаста) и 24 (82,8%) BRCA2 гене (светлонаранџаста).
Скраћенице: PV, патогена варијанта; VUS, варијанта неизвесног значаја; WT, секвенца дивљег типа BRCA1/2.
Затим смо испитали преваленцију молекуларних подтипова карцинома дојке код пацијената са BRCA1/2 парализом плућа. Дистрибуција је обухватала 2 (5,7%) луминални А, 15 (42,9%) луминални Б, 3 (8,6%) луминални Б-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ и 13 (37,1%) пацијенткиња са нелатентним карциномом дојке. Међу BRCA1-позитивним пацијентима, 5 (29,4%) је имало луминални Б карцином дојке, 2 (11,8%) су имала HER2+ болест, а 10 (58,8%) је имало нелатентни карцином дојке. Тумори без BRCA1 мутација били су или луминални А или луминални Б-HER2+ (Слика 3). У BRCA2-позитивној подгрупи, 10 (55,6%) тумора су били луминални Б, 3 (16,7%) су били луминални Б-HER2+, 3 (16,7%) TNBC и 2 (11,1%) су били луминални А (Слика 3). Није било HER2+ тумора. биле су присутне у овој групи. Дакле, мутације BRCA1 су распрострањене код пацијената са TNBC, док су промене BRCA2 доминантне код особа са луменом Б.
Слика 3 Преваленција подтипова рака дојке код пацијената са патогеним варијантама у BRCA1 и BRCA2. Хистограми који приказују дистрибуцију BRCA1- (тамноцрвена) и BRCA2- (светлоцрвена) паравенских вирусних варијанти међу молекуларним подтиповима пацијената са раком дојке. Бројеви приказани у сваком оквиру представљају проценат пацијената са BRCA1 и BRCA2 паравенским вирусним варијантама за сваки подтип рака дојке.
Скраћенице: PV, патогена варијанта; HER2+, позитиван на рецептор 2 хуманог епидермалног фактора раста; TNBC, троструко негативан рак дојке.
Након тога, проценили смо тип и локализацију гена BRCA1 и BRCA2 паранормалних варијација (ПВ). Код BRCA1 ПВ, уочили смо 7 варијација једног нуклеотида (SNV), 6 делеција, 3 дупликације и 1 инсерцију. Само једна мутација (c.5522delG) представља ново откриће. Најчешћи BRCA1 ПВ откривен код оба субјекта био је c.5035_5039delCTAAT. Ова промена укључује делецију пет нуклеотида (CTAAT) у BRCA1 ексону 15, што резултира супституцијом аминокиселине леуцин тирозином на кодону 1679, а због померања оквира читања транслације са предвиђеним алтернативним стоп кодоном доводи до превременог скраћивања протеина. Све остале промене су откривене само у једном случају. Приметно је да је један од пријављених ПВ био лоциран у консензусном региону места сплајсовања (c.4357+1G>T) (Табела 1).
Што се тиче BRCA2 PV, приметили смо 6 делеција, 6 SNV и 2 дупликације. Ниједна од пронађених промена није нова. Три мутације су се поново појавиле у нашој популацији, c.428dup и c.8487+1G>A примећене су код 3 испитаника, а затим c.5851_5854delAGTT враћена у два случаја. Промена c.428dup укључује понављање C у ексону 5 BRCA2, за који се предвиђа да кодира скраћени, нефункционални протеин. Мутација c.8487+1G>A се јавља у интронском региону интрона 19 BRCA2 (± 1,2) и утиче на консензусну секвенцу сплајсинга, што резултира измењеним сплајсингом, што резултира абнормалним или одсутним протеином. Патогена варијанта c.5851_5854delAGTT је последица делеције од 4 нуклеотида са нуклеотидних позиција 5851 до 5854 у кодирајућем ексону 10 гена BRCA2 и резултира транслационом грешком. померање оквира читања са предвиђеним алтернативним стоп кодоном (p.S1951WfsTer). Приметно је да су, као што је раније објављено, обе промене c.631G>A и c.7008-2A>T откривене код истог пацијента.34 Прва мутација укључује замену аденозина (A) у BRCA2 ексону 7 са нуклеотидом који садржи гуанин (G), што резултира променом валина у изолеуцин на кодону 211, изолеуцин је аминокиселина са веома сличним својствима. Ова промена утиче на нормално сплајсовање мРНК. Друга варијанта се налази у интронском региону и резултира двоструком супституцијом А у тимин (T) пре ексона 13 гена који кодира BRCA2. Промена c.7008-2A>T може генерисати више транскрипата различитих дужина. Штавише, у групи BRCA2 PV, 4 од 18 промена (22,2%) биле су интронске.
Затим смо мапирали штетне мутације BRCA1/2 у функционалним доменима и регионима који везују протеине (Слика 4). У гену BRCA1, 50% PV је било лоцирано у региону кластера рака дојке (BCCR), док је 22% мутација било лоцирано у региону кластера рака јајника (OCCR) (Слика 4А). У BRCA2 PV, 35,7% варијанти је било лоцирано у BCCR региону, а 42,8% мутација је било лоцирано у OCCR (Слика 4Б). Затим смо проценили локацију PV унутар домена протеина BRCA1 и BRCA2. За протеин BRCA1, пронашли смо три PV у доменима петље и спиралне спирале и две мутације у домену BRCT (Слика 4А). За протеин BRCA2, 4 PV су мапирана на BRC домен понављања, док су 3 интронске и 3 егзонске промене откривене у доменима који везују олиго/олигосахариде (OB) и торњевима (T) (Слика 4Б).
Слика 4 Шематски приказ BRCA1 и BRCA2 протеина и локализација патогених варијанти. Ова слика приказује дистрибуцију патогених варијанти BRCA1 (А) и BRCA2 (Б) код пацијената оболелих од рака дојке. Егзонске мутације су приказане плавом бојом, док су интронске варијанте приказане наранџастом бојом. Висина траке представља број случајева. Приказани су протеини BRCA1 и BRCA2 и њихови функционални домени. (А) Протеин BRCA1 садржи домен петље (RING) и секвенцу нуклеарне локализације (NLS), домен спиралне завојнице, SQ/TQ кластер домен (SCD) и C-терминални домен BRCA1 (BRCT). (Б) Протеин BRCA2 садржи осам BRC понављања, домен који везује ДНК са хеликалним доменом (Helic), три набора који везују олигонуклеотиде/олигосахариде (OB), домен куле (T) и NLS на C страни. Области назване Регион кластера рака дојке (BCCR) и Регион кластера рака јајника (OCCR) су приказане на дну.*Представља мутације које одређују заустављање кодони.
Затим смо истражили клиничко-патолошке карактеристике карцинома бркства које би могле бити у корелацији са присуством BRCA1/2 паравентрикуларног панкреатитиса. Комплетни клинички картони били су доступни за 181 BRCA1/2-негативну пацијенткињу (не-носиоце) и све носиоце (n = 35). Постојала је корелација између стопе пролиферације тумора и степена.
Дистрибуцију Ki-67 смо израчунали на основу медијане наше кохорте (25%, распон <10-90%). Субјекти са Ki-67 < 25% су дефинисани као „низак Ki-67“, док су особе са вредностима ≥ 25% сматране „високим Ki-67“. Значајне разлике у Ki-67 (p<0,01) су пронађене између не-носилаца и носилаца BRCA1 PV гена (Слика 5А).
Слика 5 Корелација Ki-67 са дистрибуцијом степена код жена са раком дојке са и без BRCA1 и BRCA2 паравентрикуларних мутација. (А) Boxplot који приказује средње вредности Ki-67 код 181 пацијенткиње са раком дојке која није носилац у односу на пацијенткиње са BRCA1 (18) или BRCA2 (17) паравентрикуларним мутацијама. P вредности испод 0,5 сматране су статистички значајним. (Б) Хистограм који представља расподелу пацијенткиња са раком дојке у хистолошке групе степена (G2 и G3) према статусу мутације BRCA1 и BRCA2 (WT испитанице, носиоци BRCA1 и BRCA2 паравентрикуларних мутација).
Исто тако, испитали смо да ли је степен тумора у корелацији са присуством BRCA1/2 паравентрикуларних тумора. Пошто је G1 степен рака дојке био одсутан у нашој популацији, пацијенте смо поделили у две групе (G2 или G3). У складу са резултатима Ki-67, анализа је открила статистички значајну корелацију између степена тумора и BRCA1 мутације, са већим уделом G3 тумора код носилаца BRCA1 у поређењу са неносиоцима (p<0,005) (Слика 5Б).
Напредак у технологији секвенцирања ДНК омогућио је невиђени напредак у генетском тестирању BRCA1/2, са кључним импликацијама за пацијенте са породичном историјом рака. До данас је идентификовано и класификовано приближно 20.000 BRCA1/2 варијанти према Америчком друштву за медицинску генетику35 и ENIGMA систему.35,36 Добро је познато да се BRCA1/2 мутациони спектар значајно разликује у зависности од географских региона.37 Унутар Италије, стопа BRCA1/2 PV кретала се од 8% до 37%, што показује широку варијабилност унутар земље.38,39 Са популацијом од скоро 5 милиона, Сицилија је пети највећи регион у Италији по броју становника. Иако постоје подаци о дистрибуцији BRCA1/2 у западној Сицилији, нема опсежних доказа у источном делу острва.
Наша студија је један од првих извештаја о учесталости BRCA1/2 поливаскуларних болести код пацијената са раком дојке у источној Сицилији.28 Фокусирали смо нашу анализу на рак дојке, јер је то убедљиво најчешћа болест у нашој кохорти.
Приликом тестирања 389 пацијената са раком дојке, 9% је носило BRCA1/2 парализне варијанте (ПВ), равномерно распоређене између BRCA1 и BRCA2. Ови резултати су у складу са онима који су претходно објављени у италијанској популацији.28 Занимљиво је да су 3% (13/389) наше кохорте били мушкарци. Ова стопа је већа од очекиване за мушки рак дојке (1% свих РД),40 што одражава наш избор популација на основу ризика од мутације BRCA1/2. Међутим, ниједан од ових мушкараца није развио ПВ BRCA1/2, па су били кандидати за даљу молекуларну анализу како би се искључило присуство мање уобичајених мутација као што су PALB2, RAD51C и D, између осталих. Варијанте неизвесног значаја пронађене су код 7% испитаника код којих је био евидентан BRCA2 VUS. Чак је и овај резултат у складу са постојећим доказима.28,41,42
Када смо анализирали дистрибуцију молекуларних подтипова BC код жена са BRCA1/2 мутацијом, потврдили смо познате везе између TNBC и BRCA1 PV (58,8%) и између луминалног B BC и BRCA2 PV (55,6%).16,43 Луминални A и HER2+ тумори код носилаца BRCA1 и BRCA2 PV су у складу са постојећим подацима из литературе.16,43
Затим се фокусирамо на тип и локацију BRCA1/2 паравентрикуларног тумора. У нашој кохорти, најчешћи BRCA1 паравенски тумор био је c.5035_5039delCTAAT. Иако су Инкорваја и др. нису описали ову варијанту у својој сицилијанској кохорти, други аутори су је пријавили као герминативну BRCA1 PV.34 У нашој кохорти пронађено је неколико BRCA1 PV – нпр. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA и c.5266dupC – које су примећене на Сицилији.28 Од њих, две оснивачке мутације BRCA1 (c.181T>G и c.5266dupC) се често налазе код ашкенаских Јевреја источне и централне Европе (Пољска, Чешка), Словеначка, Аустријска, Мађарска, Белорусија и Немачка), 44,45 а у Сједињеним Државама и Аргентини је недавно дефинисана као „рекурентна варијанта герминативне линије“ код италијанских пацијената са раком дојке и раком дојке. Варијанта 34c.514del је претходно идентификована код 8 пацијената са раком дојке из северне Сицилије у Палерму и Месини. Занимљиво је да су чак и Инкорваја и др. пронашли су варијанту c.3253dupA у неким породицама у Катанији.28 Најрепрезентативнији BRCA2 PV су c.428dup, c.5851_5854delAGTT и интронична варијанта c.8487+1G>A, које су детаљније описане28 код пацијента у Палерму са c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV је примећен у домаћинствима на северозападу Сицилије, углавном у регионима Трапани и Палермо, док је c.5851_5854delAGTT PV примећен у домаћинствима на северозападу Сицилије. Варијанта 8487+1G>A била је чешћа код испитаника из Месине, Палерма и Калтанисете.28 Ребек и др. претходно је описана алтерација c.5851_5854delAGTT у Колумбији.37 Још један BRCA2 PV, c.631+1G>A, пронађен је код пацијената са BC и OC из Сицилије (Агриђенто, Сиракуза и Рагуза).28 Приметно је да смо код истог пацијента приметили коегзистенцију две BRCA2 варијанте (BRCA2 c.631G>A и c.7008-2A>T), за које смо претпоставили да су раздвојене у cis моду, као што је раније објављено.34,46 Ове BRCA2 мутације се заиста често примећују у италијанском региону и утврђено је да уводе превремене стоп кодоне, утичући на сплајсовање информационе РНК и узрокујући отказ BRCA2 протеина.47,48
Такође смо мапирали BRCA1 и BRCA2 PV у претпостављеним OCCR и BCCR регионима протеинских домена и гена. Ове регионе су Ребек и др. описали као подручја ризика за развој рака јајника и дојке, респективно.49 Међутим, докази о повезаности између локације варијанти герминативне линије и ризика од рака дојке или јајника остају контроверзни.28,50-52 У нашој популацији, BRCA1 PV су претежно били лоцирани у BCCR региону, док су BRCA2 PV претежно били лоцирани у OCCR региону. Међутим, нисмо могли да пронађемо никакву повезаност између претпостављених OCCR и BCCR региона и BC карактеристика. То може бити због ограниченог броја пацијената са BRCA1/2 мутацијама. Са становишта протеинског домена, BRCA1 PV су распоређени дуж целог протеина, а BRCA2 промене се преференцијално налазе у BRC понављајућем домену.
Коначно, корелирали смо клиничко-патолошке карактеристике карцинома дојке са BRCA1/2 парализом. Због ограниченог броја укључених пацијената, пронашли смо значајну корелацију само између Ki-67 и степена тумора. Иако процена и интерпретација Ki-67 остају донекле контроверзни, сигурно је да су високе стопе пролиферације повезане са повећаним ризиком од поновног појављивања болести и смањеним преживљавањем. До данас, гранична вредност за разликовање између „високог“ и „ниског“ Ki-67 је 20%. Међутим, овај праг се не односи на нашу популацију пацијената са BRCA1/2 мутацијом, која има средњу вредност Ki-67 од 25%. Овај тренд високих стопа Ki-67 може се објаснити преваленцијом у нашим кохортама луминалног B и TNBC, од којих је било присутно мало луминалних A тумора. Међутим, неки докази указују на то да виша гранична вредност Ki-67 (25–30%) може боље стратификовати пацијенте према њиховој прогнози.53,54 Из резултата наше анализе, значајна корелација није изненађујућа. Јавља се између високог Ki-67 и степена и присуства BRCA1. ПВ. У ствари, тумори повезани са BRCA1 су типични за TNBC и показују агресивније карактеристике.16,17
Закључно, ова студија пружа извештај о мутацијском статусу BRCA1/2 у кохорти пацијената са раком дојке из источне Сицилије. Генерално, наши налази су у складу са постојећим доказима, како у погледу преваленције мутација, тако и у погледу клиничко-патолошких карактеристика код рака дојке. Потребне су додатне студије на већим популацијама пацијената са раком дојке са BRCA1/2 мутацијом, као што је коришћење мултигеномске проширене мутационе анализе, како би се проценило присуство паралипомоћних венозних варијанти које су различите и ређе од BRCA1/2. Ово ће омогућити идентификацију и правилно лечење све већег броја испитаника са повећаним ризиком од рака услед генетских мутација.
Потврдили смо да су пацијенти потписали информисани пристанак за анонимно пуштање узорака својих тумора у истраживачке сврхе. Сви пацијенти су потписали писани информисани пристанак у складу са Хелсиншком декларацијом. Према политици AOU Policlinico „G.Rodolico – S.Marco“, ова студија је изузета од етичке рецензије јер је анализа BRCA1/2 спроведена у складу са клиничком праксом и сви пацијенти су дали писани информисани пристанак. Пацијенти такође пристају на коришћење њихових података у истраживачке сврхе.
Захваљујемо се проф. Паолу Вињерију на помоћи у збрињавању пацијената оболелих од рака дојке, како је затражио Етички комитет.
Федерика Марторана извештава о хонорарам од Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Остали аутори изјављују да немају сукоб интереса у овом раду.
1. Сунг Х, Ферлеј Ј, Сигел РЛ и др. Глобална статистика рака 2020: GLOBOCAN процењује инциденцу и морталитет од 36 врста рака у 185 земаља широм света. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660