Mae Javascript wedi'i analluogi yn eich porwr ar hyn o bryd. Ni fydd rhai nodweddion y wefan hon yn gweithio pan fydd javascript wedi'i analluogi.
Cofrestrwch gyda'ch manylion penodol a'r cyffur penodol sydd o ddiddordeb i chi a byddwn yn paru'r wybodaeth a ddarparwch ag erthyglau yn ein cronfa ddata helaeth ac yn e-bostio copi PDF atoch ar unwaith.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Adran Feddygaeth Manzella, Experimental, 6, 7, Livia Experimental, 6, 7 Marco Fichera, 6, 7, Livia Experimental, 6, 1, Livia Experimental Adran Meddygaeth Catania, Catania, 95123, yr Eidal;2 Canolfan Oncoleg a Haematoleg Arbrofol, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, yr Eidal; 3 Oncoleg Feddygol, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, yr Eidal; 4 Geneteg Feddygol, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, yr Eidal; 5 Geneteg Meddygaeth, ASP, Syracuse, 96100, yr Eidal; 6 Adran Gwyddorau Biofeddygol a Biotechnoleg, Prifysgol Catania, Geneteg Feddygol, Catania, yr Eidal, 95123; 7 Sefydliad Ymchwil Oasi-IRCCS, Troina, 94018, yr Eidal Cyfathrebu: Stefania Stella, ffôn +39 095 378 1946, e-bost [email protected]; [email protected] Diben: Mwtaniadau llinell germau yn BRCA1 a BRCA2 a chanser y fron (BC) sefydledig, yr ofari (OC) a chanserau eraill sy'n gysylltiedig â risg oes o ganser. Mae profi am y genyn BRCA yn allweddol i asesu risg unigol, yn ogystal ag ar gyfer dod o hyd i ddulliau atal mewn cludwyr iach a theilwra triniaethau mewn cleifion canser. Mae nifer yr achosion o newidiadau BRCA1 a BRCA2 yn amrywio'n fawr ar draws rhanbarthau daearyddol, ac er bod data ar gael ar amrywiadau pathogenig BRCA mewn teuluoedd Sisilaidd, mae astudiaethau sy'n targedu poblogaethau yn nwyrain Sisili yn brin. Nod ein hastudiaeth oedd ymchwilio i nifer yr achosion a dosbarthiad newidiadau llinell germau pathogenig BRCA mewn carfan o gleifion BC o ddwyrain Sisili ac asesu eu cysylltiad â nodweddion BC penodol gan ddefnyddio dilyniannu'r genhedlaeth nesaf. Roedd presenoldeb newidiadau yn cydberthyn â gradd tiwmor a mynegai amlhau. CANLYNIADAU: Ar y cyfan, roedd gan 35 o gleifion (9%) amrywiad pathogenig BRCA, 17 (49%) yn BRCA1 a 18 (51%) yn BRCA2. Mae newidiadau BRCA1 yn gyffredin mewn cleifion BC triphlyg-negatif, tra bod mwtaniadau BRCA2 yn fwy cyffredin mewn cleifion BC luminal. O'i gymharu â Gan nad oeddent yn gludwyr, roedd gan bynciau ag amrywiadau BRCA1 radd tiwmor a mynegai ymledol sylweddol uwch. Casgliadau: Mae ein canfyddiadau'n rhoi trosolwg o statws mwtaniadol BRCA mewn cleifion BC o ddwyrain Sisili ac yn cadarnhau rôl dadansoddiad NGS wrth nodi cleifion â BC etifeddol. Ar y cyfan, mae'r data hyn yn gyson â thystiolaeth flaenorol sy'n cefnogi sgrinio BRCA ar gyfer atal a thrin canser yn briodol mewn cludwyr mwtaniad.
Canser y fron (BC) yw'r malaenedd mwyaf cyffredin ledled y byd a'r canser mwyaf marwol mewn menywod.1 Mae'r nodweddion biolegol sy'n pennu prognosis ac ymddygiad clinigol BC wedi'u hastudio'n helaeth ac wedi'u hegluro'n rhannol dros amser. Mewn gwirionedd, defnyddir sawl marcwr dirprwyol ar hyn o bryd i ddosbarthu BC i isdeipiau moleciwlaidd gwahanol. Nhw yw derbynnydd estrogen (ER) a/neu progesteron (PgR), ymhelaethiad derbynnydd ffactor twf epidermaidd dynol 2 (HER2), mynegai amlhau Ki-67 a gradd tiwmor (G).2 Nododd y cyfuniad o'r newidynnau hyn y categorïau BC canlynol: 1) Roedd tiwmorau luminal, yn dangos mynegiant ER a/neu PgR, yn cyfrif am 75% o BCs. Rhannwyd y tiwmorau hyn ymhellach yn Luminal A, pan oedd Ki-67 islaw 20% ac yn HER2 negatif, a Luminal B, pan oedd Ki-67 yn hafal i neu'n uwch na 20% ac ym mhresenoldeb ymhelaethiad HER2, waeth beth fo'r mynegai amlhau; 2) Tiwmorau HER2+ sy'n ER a PgR negatif ond sy'n dangos ymhelaethiad HER2. Mae'r grŵp hwn yn cyfrif am 10% o'r holl diwmorau'r fron; 3) Canser y fron triphlyg negatif (TNBC), nad yw'n dangos mynegiant ER a PgR ac ymhelaethiad HER2, sy'n cyfrif am tua 15% o ganserau'r fron.2-4
Ymhlith yr isdeipiau BC hyn, mae gradd tiwmor a mynegai amlhau yn cynrychioli biomarcwyr trawsdoriadol sy'n gysylltiedig yn uniongyrchol ac yn annibynnol ag ymosodolrwydd a phrognosis tiwmor.5,6
Yn ogystal â'r nodweddion biolegol a grybwyllwyd uchod, mae rôl newidiadau genetig etifeddol sy'n arwain at ddatblygiad BC wedi dod yn gynyddol bwysig dros yr ychydig flynyddoedd diwethaf.7 Mae tua 1 o bob 10 tiwmor y fron yn cael eu hetifeddu oherwydd newidiadau i'r llinell germ mewn genynnau penodol.8 Mae dwy astudiaeth epidemiolegol fawr sy'n cynnwys mwy na 180,000 o fenywod wedi nodi grŵp o wyth genyn yn ddiweddar (h.y., ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, a RAD51D) sy'n bennaf gyfrifol am BC etifeddol. Ymhlith y genynnau hyn, dangosodd BRCA1 a BRCA2 (y cyfeirir atynt o hyn ymlaen fel BRCA1/2) y gydberthynas gryfaf â datblygiad tiwmorau'r fron.9-12 Mewn gwirionedd, mae mwtaniadau llinell germ BRCA1/2 yn cynyddu'r risg oes o BC yn sylweddol yn ogystal â thyfiannau malaen eraill, gan gynnwys yr ofari, y prostad, y pancreas, y colon a'r rhefrwm, a melanoma. O 13 i 80 oed, mae nifer yr achosion cronnus o BC yn 72% mewn menywod ag amrywiad pathogenig (PV) BRCA1 a 69% mewn menywod ag BRCA2. PV.14
Yn arbennig, mae cyhoeddiad diweddar yn awgrymu bod risg BC yn dibynnu ar y math o PV. Mewn gwirionedd, o'i gymharu ag amrywiadau cwtogi pathogenig, mae amrywiadau camsynnwyr amlwg, yn enwedig yn y genyn BRCA1, yn gysylltiedig â risg is o BC, yn enwedig mewn menywod hŷn.15
Roedd presenoldeb BRCA1 neu BRCA2 PV yn gysylltiedig â gwahanol nodweddion biolegol a chlinigopatholegol.16,17 Mae BC sy'n gysylltiedig â BRCA1 yn tueddu i fod yn ymosodol yn glinigol, wedi'u gwahaniaethu'n wael, ac yn amlhau'n fawr. Mae'r tiwmorau hyn fel arfer yn driphlyg negatif ac mae ganddynt oedran cynnar o ddechrau. Mae tiwmorau sy'n digwydd mewn cleifion sydd wedi'u mwtanu â BRCA2 fel arfer yn arddangos graddau cymedrol i wahaniaethol iawn a mynegeion amlhau amrywiol. Mae'r tiwmorau hyn yn fwy cyffredin yn lumen B ac fel arfer maent yn digwydd mewn oedolion hŷn.16-18 Yn nodedig, mae mwtaniadau yn BRCA1 a BRCA2 yn cynyddu sensitifrwydd i driniaethau penodol, gan gynnwys halwynau platinwm a chyffuriau wedi'u targedu fel atalyddion polymeras poly(ADP-ribose) (PARPi).19,20
Dros yr ychydig flynyddoedd diwethaf, mae gweithredu dilyniannu'r genhedlaeth nesaf (NGS) mewn ymarfer clinigol wedi galluogi nifer cynyddol o gleifion BC i gael profion moleciwlaidd ar gyfer syndromau tueddiad i ganser, gan gynnwys BRCA1/2.21 Ar yr un pryd, diffiniadau yn seiliedig ar feini prawf manwl gywir ynghylch hanes teuluol, nodweddion demograffig a chlinigopatholegol i nodi unigolion sy'n deilwng o brofion BRCA1/2 yn well.22,23 Yn y cyd-destun hwn, mae tystiolaeth yn cronni ar sgrinio BRCA1/2 mewn poblogaethau penodol, gan amlygu gwahaniaethau ar draws rhanbarthau daearyddol.24–27 Er bod adroddiadau ar y garfan BC yng ngorllewin Sisili, mae llai o ddata ar gael ar sgrinio BRCA1/2 ym mhoblogaeth dwyrain Sisili.28,29
Rydym yn disgrifio yma ganlyniadau sgrinio llinell germ BRCA1/2 mewn cleifion BC o ddwyrain Sisili, gan gysylltu ymhellach bresenoldeb mwtaniadau BRCA1 neu BRCA2 â phrif nodweddion clinigopatholegol y tiwmorau hyn.
Cynhaliwyd astudiaeth ôl-weithredol yn y “Ganolfan ar gyfer Oncoleg Arbrofol a Hematoleg” yn Ysbyty Policlinico.Rodolico – San Marco yn Catania.Rhwng Ionawr 2017 a Mawrth 2021, atgyfeiriwyd cyfanswm o 455 o gleifion â chanser y fron a’r ofari, melanoma, pancreatig neu brostad i’n labordy diagnostig moleciwlaidd ar gyfer profion genetig BRCA/2.Cynhaliwyd yr astudiaeth hon yn unol â Datganiad Helsinki, a rhoddodd yr holl gyfranogwyr ganiatâd gwybodus ysgrifenedig cyn y dadansoddiad moleciwlaidd.
Aseswyd nodweddion histolegol a biolegol (ER, PgR, statws HER2, Ki-67, a gradd) BC ar samplau biopsi craidd neu lawfeddygol, gan ystyried cydrannau tiwmor ymosodol yn unig. Yn seiliedig ar y nodweddion hyn, dosbarthwyd BC fel a ganlyn: luminal A (ER+ a/neu PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ a/neu PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER a/neu PgR+, HER2+), HER2+ (ER a PgR-, HER2+) neu driphlyg negatif (ER a PgR-, HER2-).
Cyn asesu statws mwtaniad BRCA1 a BRCA2, cynhaliodd tîm amlddisgyblaethol gan gynnwys oncolegydd, genetegydd, a seicolegydd ymgynghoriad geneteg tiwmor ar gyfer pob claf i bennu presenoldeb BRCA1 a/neu BRCA1, neu unigolion â risg uchel o PV yn y genyn BRCA2. Dewiswyd cleifion yn unol â chanllawiau Cymdeithas Oncoleg Feddygol yr Eidal (AIOM) ac argymhellion lleol Sisilaidd.30,31 Mae'r meini prawf hyn yn cynnwys: (i) hanes teuluol o amrywiadau pathogenig hysbys mewn genynnau tueddol (e.e., BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) gwrywod â BC; (iii) y rhai â BC ac OC; (iv) menywod â BC <36 oed, TNBC <60 oed, neu BC dwyochrog <50 oed; (v) hanes meddygol personol o BC <50 oed ac o leiaf un perthynas gradd gyntaf: (a) BC < 50 oed; (b) OC nad yw'n fwcinaidd ac nad yw'n ymylol o unrhyw oedran; (c) BC dwyochrog; (d) BC gwrywaidd; (e) canser y pancreas; (f) canser y prostad; (vi) dau neu fwy Hanes personol o ganser y pancreas > 50 mlynedd a hanes teuluol o ganser y pancreas, canser y pancreas (OC), neu ganser y pancreas ar gyfer perthnasau sy'n berthnasau gradd gyntaf i'w gilydd (gan gynnwys perthnasau y mae hi'n berthnasau gradd gyntaf gyda nhw); (vii) Hanes personol o ganser y pancreas ac o leiaf un perthynas gradd gyntaf: (a) canser y pancreas <50 mlynedd; (b) canser y pancreas heb ganser; (c) canser y pancreas dwyochrog; (d) canser y pancreas gwrywaidd; (vii) benywaidd ag OC serws gradd uchel.
Cafwyd sampl gwaed ymylol o 20 mL gan bob claf a'i gasglu i mewn i diwbiau EDTA (BD Biosciences). Ynyswyd DNA genomig o samplau gwaed cyflawn 0.7 mL gan ddefnyddio'r Pecyn Ynysu QIAsymphony DSP DNA Midi (QIAGEN, Hilden, yr Eidal) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr a'i basio trwy Fflworomedr Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA). Perfformiwch feintioli. Mae cyfoethogi targedau a pharatoi llyfrgell yn cael eu perfformio gan y Cogydd Ymchwil BRCA Oncomine™, yn barod i'w llwytho i mewn i Becyn Adweithyddion Cogydd Ion AmpliSeq™ DL8 ar gyfer paratoi llyfrgell awtomataidd yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Mae'r pecyn yn cynnwys dau bwll primer PCR amlblecs y gellir eu defnyddio i astudio'r holl enynnau BRCA1 (NM_007300.3) a BRCA2 (NM_000059.3). Yn gryno, ychwanegwyd 15 µL o bob DNA sampl gwanedig (10 ng) at blatiau â chod bar ar gyfer paratoi llyfrgell a llwythwyd yr holl adweithyddion a nwyddau traul ar offeryn Ion Chef™. Yna perfformiwyd paratoi llyfrgell awtomataidd a phwll llyfrgell sampl â chod bar ar offeryn Ion Chef™. Yna aseswyd nifer y llyfrgelloedd a baratowyd gan Fflworomedr Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, UDA) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr. Yn olaf, cyfunir llyfrgelloedd mewn cymhareb ecwimolar mewn tiwbiau sampl llyfrgell Ion Chef™ (â chod bar tiwbiau) a'u llwytho ar offeryn Ion Chef™. Perfformiwyd dilyniannu gan ddefnyddio offeryn Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) gan ddefnyddio Sglodion Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Perfformiwyd dadansoddiad data gan Amplicon Suite (SmartSeq srl) ac Ion Reporter Software.
Dilynodd pob enwi amrywiadau ganllawiau cyfredol Consortiwm Amrywiad y Genom Dynol, sydd ar gael ar-lein (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Diffinwyd arwyddocâd clinigol amrywiadau BRCA1/2 gan ddefnyddio dosbarthiad Consortiwm Rhyngwladol ENIGMA (Rhwydwaith Seiliedig ar Dystiolaeth ar gyfer Dehongli Allelau Mwtanedig Germlinell, https://enigmaconsortium.org/) ac ymgynghori â gwahanol gronfeydd data fel ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, ac UMD. Mae'r dosbarthiad yn cynnwys pum categori risg penodol: diniwed (categori I), diniwed tebygol (categori II), amrywiad o arwyddocâd ansicr (VUS, categori III), pathogenig tebygol (categori IV), a pathogenig (categori V). Dadansoddodd VarSome hefyd effaith mwtaniadau ar strwythur a swyddogaeth protein, offeryn addysgiadol gyda mynediad i 30 o gronfeydd data.32
I aseinio arwyddocâd clinigol posibl i bob VUS, defnyddiwyd yr algorithmau rhagfynegi protein cyfrifiadurol canlynol: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) ac Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Ystyriwyd bod amrywiadau a ddosbarthwyd fel dosbarth 1 a 2 yn fath gwyllt.
Cadarnhaodd dilyniannu Sanger bresenoldeb pob amrywiad pathogenig. Yn gryno, cynlluniwyd pâr o brimerau penodol ar gyfer pob amrywiad a ganfuwyd gan ddefnyddio dilyniannau cyfeirio genynnau BRCA1 a BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 ac NG_012772.3, NM_000059.3, yn y drefn honno). Felly, perfformiwyd PCR wedi'i dargedu ac yna dilyniannu Sanger.
Cafodd cleifion a brofodd yn negatif am y genyn BRCA1/2 eu profi gan ddefnyddio ymhelaethiad chwiliedydd sy'n ddibynnol ar glymu amlblecs (MLPA) yn unol â chyfarwyddiadau'r gwneuthurwr i asesu presenoldeb aildrefniadau genomig mawr (LGR). Yn gryno, caiff samplau DNA eu dadnatureiddio a defnyddir hyd at 60 o chwiliedydd penodol i'r genyn BRCA1 a BRCA2, pob un yn canfod dilyniant DNA penodol tua 60 niwcleotid o hyd. Yna dadansoddwyd cynhyrchion ymhelaethiad chwiliedydd, sy'n cynnwys set unigryw o ampliconau PCR, gan ddefnyddio electrofforesis capilar a thrwy feddalwedd Cofalyser.Net ar y cyd â'r tablau Cofalyser priodol sy'n benodol i'r swp (www.mrcholland.com).
Roedd newidynnau clinigopatholegol dethol (gradd histolegol a mynegai amlhau Ki-67%) yn gysylltiedig â phresenoldeb PV BRCA1/2, a gyfrifwyd gan ddefnyddio'r feddalwedd Prism v. 8.4 gan ddefnyddio prawf union Fisher gan dybio bod gwerth-p <0.05 yn arwyddocaol.
Rhwng Ionawr 2017 a Mawrth 2021, sgriniwyd 455 o gleifion am dreigladau BRCA1/2 yn y llinell germau. Perfformiwyd profion mwtaniad yng Nghanolfan Oncoleg Arbrofol a Hematoleg Ysbyty Policlinico. Yn ôl canllaw Sisilaidd (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Gwenerdì 10 Gennaio 2020), yn gyffredinol, roedd 389 o gleifion yn Rodolico Catania – San Marco. Roedd canser y fron, 37 o ganser yr ofari, 16 o ganser y pancreas, 8 o ganser y prostad a 5 o melanoma. Dangosir dosbarthiad y cleifion yn ôl math o ganser a chanlyniadau'r dadansoddiad yn Ffigur 1.
Mae Ffigur 1 yn dangos siart llif sy'n dangos trosolwg o'r astudiaeth. Profwyd cleifion â thiwmorau'r fron, melanoma, pancreatig, prostad, neu ofarïaidd am dreigladau yn y genynnau BRCA1 a BRCA2.
Talfyriadau: PVs, amrywiad pathogenig; VUS, amrywiad o arwyddocâd ansicr; WT, dilyniant BRCA1/2 math gwyllt.
Fe wnaethon ni ganolbwyntio ein hastudiaethau'n ddetholus ar garfannau canser y fron. Roedd gan y cleifion oedran canolrifol o 49 mlynedd (amrediad 23-89) ac roedden nhw'n fenywod yn bennaf (n=376, neu 97%).
O'r pynciau hyn, roedd gan 64 (17%) dreigladau BRCA1/2 ac roeddent i gyd yn fenywod. Roedd gan dri deg pump (9%) PV ac roedd gan 29 (7.5%) VUS. Digwyddodd dau ar bymtheg (48.6%) o'r 35 amrywiad pathogenig yn BRCA1 ac 18 (51.4%) yn BRCA2, tra digwyddodd 5 VUS yn BRCA1 (17.2%) a 24 (82.8%) yn BRCA2 (Ffigurau 1 a 2). Nid oedd LGR yn bresennol yn y dadansoddiad MLPA.
Ffigur 2. Dadansoddiad o dreigladau BRCA1 a BRCA2 mewn 389 o gleifion canser y fron. (A) Dosbarthiad amrywiadau pathogenig (PV) (coch), amrywiadau o arwyddocâd ansicr (VUS) (oren), a WT (glas) mewn 389 o gleifion canser y fron; (B) 389 o gleifion canser y fron Roedd gan dri deg pump (9%) amrywiadau pathogenig (PVs) BRCA1/2. Yn eu plith, roedd 17 (48.6%) yn gludwyr PV BRCA1 (coch tywyll) ac roedd 18 (51.4%) yn gludwyr BRCA2 (coch golau); (C) roedd 29 (7.5%) o 389 o bynciau yn cario VUS, 5 (17.2%) o enynnau BRCA1 (oren tywyll) a 24 (82.8%) o enynnau BRCA2 (oren golau).
Talfyriadau: PVs, amrywiad pathogenig; VUS, amrywiad o arwyddocâd ansicr; WT, dilyniant BRCA1/2 math gwyllt.
Nesaf, fe wnaethom ymchwilio i gyffredinolrwydd isdeipiau moleciwlaidd BC mewn cleifion â BRCA1/2 PV. Roedd y dosbarthiad yn cynnwys 2 (5.7%) o gleifion luminal A, 15 (42.9%) luminal B, 3 (8.6%) luminal B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ a 13 (37.1%) o gleifion TNBC. Ymhlith cleifion BRCA1-positif, roedd gan 5 (29.4%) luminal B BC, roedd gan 2 (11.8%) glefyd HER2+, ac roedd gan 10 (58.8%) TNBC. Roedd tiwmorau heb dreigladau BRCA1 naill ai'n luminal A neu'n luminal B-HER2+ (Ffigur 3). Yn yr is-grŵp BRCA2-positif, roedd 10 (55.6%) o diwmorau yn luminal B, 3 (16.7%) yn luminal B-HER2+, 3 (16.7%) TNBC a 2 (11.1%) yn luminal A (Ffigur 3). Nid oedd unrhyw diwmorau HER2+ yn bresennol yn y grŵp hwn. Felly, mae mwtaniadau BRCA1 yn gyffredin mewn cleifion TNBC, tra bod newidiadau BRCA2 yn amlwg mewn unigolion lumen B.
Ffigur 3 Cyffredinolrwydd isdeipiau canser y fron mewn cleifion ag amrywiadau pathogenig yn BRCA1 a BRCA2. Histogramau sy'n dangos dosbarthiad PV BRCA1- (coch tywyll) a BRCA2- (coch golau) ymhlith isdeipiau moleciwlaidd cleifion canser y fron. Mae'r niferoedd a adroddir ym mhob blwch yn cynrychioli canran y cleifion â PV BRCA1 a BRCA2 ar gyfer pob isdeip o ganser y fron.
Talfyriadau: PV, amrywiad pathogenig; HER2+, derbynnydd ffactor twf epidermaidd dynol 2 positif; TNBC, canser y fron triphlyg-negatif.
Wedi hynny, fe wnaethom asesu math a lleoliad genynnau PV BRCA1 a BRCA2. Yn PV BRCA1, gwelsom 7 amrywiad niwcleotid sengl (SNVs), 6 dileu, 3 dyblygu ac 1 mewnosodiad. Dim ond un mwtaniad (c.5522delG) sy'n cynrychioli darganfyddiad newydd. Y PV BRCA1 mwyaf cyffredin a ganfuwyd yn y ddau bwnc oedd c.5035_5039delCTAAT. Mae'r newid hwn yn cynnwys dileu pum niwcleotid (CTAAT) yn exon 15 BRCA1, gan arwain at amnewid yr asid amino leucine gan tyrosine ar godon 1679, ac oherwydd newid ffrâm cyfieithu gyda chodon stop amgen a ragfynegwyd yn arwain at gwtogi protein cynamserol. Canfyddir yr holl newidiadau eraill mewn un achos yn unig. Yn nodedig, roedd un o'r PVs a adroddwyd wedi'i leoli yn rhanbarth consensws safle'r asgwrn (c.4357+1G>T) (Tabl 1).
O ran BRCA2 PV, gwelsom 6 dileu, 6 SNV a 2 ddyblygiad. Nid yw'r un o'r newidiadau a ganfuwyd yn newydd. Ailddigwyddodd tri mwtaniad yn ein poblogaeth, c.428dup a c.8487+1G>A a welwyd mewn 3 phwnc, ac yna c.5851_5854delAGTT a adferwyd mewn dau achos. Mae'r newidiad c.428dup yn cynnwys ailadrodd C yn exon 5 o BRCA2, a ragwelir i amgodio protein cwtogi, anweithredol. Mae'r mwtaniad c.8487+1G>A yn digwydd yn rhanbarth intronig intron 19 BRCA2 (± 1,2) ac yn effeithio ar y dilyniant consensws ysbeilio, gan arwain at ysbeilio wedi'i newid sy'n arwain at brotein annormal neu absennol. Mae'r amrywiad pathogenig c.5851_5854delAGTT oherwydd dileu 4-niwcleotid o safleoedd niwcleotid 5851 i 5854 yn yr exon codio 10 o'r genyn BRCA2 ac yn arwain at newid ffrâm gyfieithiadol gyda chodon stop amgen a ragfynegwyd (p.S1951WfsTer). Yn arbennig, fel yr adroddwyd yn flaenorol, canfuwyd y ddau newid c.631G>A a c.7008-2A>T yn yr un claf.34 Mae'r mwtaniad cyntaf yn cynnwys disodli adenosin (A) yn exon 7 BRCA2 gyda niwcleotid sy'n cynnwys gwanîn (G) gan arwain at newid o falîn i isolewsin yng nghodon 211, mae asid amino isolewsin yn asid amino sydd â phriodweddau tebyg iawn. Mae'r newid hwn yn effeithio ar ysbeilio mRNA arferol. Mae'r ail amrywiad wedi'i leoli mewn rhanbarth intronig ac yn arwain at amnewid dwbl o A i thymîn (T) cyn exon 13 o'r genyn sy'n amgodio BRCA2. Gall y newid c.7008-2A>T gynhyrchu trawsgrifiadau lluosog o wahanol hyd. Ar ben hynny, yn y grŵp o PVs BRCA2, roedd 4 allan o 18 newid (22.2%) yn intronig.
Yna fe wnaethom fapio mwtaniadau niweidiol BRCA1/2 mewn parthau swyddogaethol a rhanbarthau sy'n rhwymo protein (Ffig. 4). Yn y genyn BRCA1, roedd 50% o'r PVs wedi'u lleoli yn rhanbarth clwstwr canser y fron (BCCR), tra bod 22% o'r mwtaniadau wedi'u lleoli yn rhanbarth clwstwr canser yr ofari (OCCR) (Ffig. 4A). Yn BRCA2 PV, roedd 35.7% o'r amrywiadau wedi'u lleoli yn rhanbarth BCCR a 42.8% o'r mwtaniadau wedi'u lleoli yn yr OCCR (Ffig. 4B). Nesaf, fe wnaethom asesu lleoliad PV o fewn parthau protein BRCA1 a BRCA2. Ar gyfer y protein BRCA1, fe wnaethom ganfod tri PV yn y parthau dolen a choil coiled, a dau fwtaniad yn y parth BRCT (Ffig. 4A). Ar gyfer y protein BRCA2, mapio 4 PV i'r parth ailadrodd BRC, tra canfuwyd 3 newid intronig a 3 newid exonig yn y parthau rhwymo oligo/oligosacarid (OB) a thŵr (T) (Ffigur 4B).
Ffigur 4 Cynrychiolaeth sgematig o broteinau BRCA1 a BRCA2 a lleoliad amrywiadau pathogenig. Mae'r ffigur hwn yn dangos dosbarthiad amrywiadau pathogenig BRCA1 (A) a BRCA2 (B) mewn cleifion canser y fron. Dangosir mwtaniadau esonig mewn glas, tra bod amrywiadau intronig mewn oren. Mae uchder y bar yn cynrychioli nifer yr achosion. Adroddir ar y proteinau BRCA1 a BRCA2 a'u parthau swyddogaethol. (A) Mae'r protein BRCA1 yn cynnwys parth dolen (RING) a dilyniant lleoleiddio niwclear (NLS), parth coil-coil, parth clwstwr SQ/TQ (SCD), a pharth C-derfynol BRCA1 (BRCT). (B) Mae'r protein BRCA2 yn cynnwys wyth ailadrodd BRC, parth rhwymo DNA gyda pharth helical (Helical), tri phlyg oligoniwcleotid/oligosacarid-rhwymo (OB), parth tŵr (T), ac NLS ar yr ochr C. Dangosir ardaloedd o'r enw Rhanbarth Clwstwr Canser y Fron (BCCR) a Rhanbarth Clwstwr Canser yr Ofari (OCCR) ar y gwaelod. *Yn cynrychioli mwtaniadau sy'n pennu stop codonau.
Yna fe wnaethom ymchwilio i nodweddion clinigopatholegol BC a allai gydberthyn â phresenoldeb BRCA1/2 PV. Roedd cofnodion clinigol cyflawn ar gael ar gyfer 181 o gleifion BRCA1/2-negatif (nad oeddent yn gludwyr) a phob cludwr (n = 35). Roedd cydberthynas rhwng cyfradd amlhau tiwmor a'i radd.
Fe wnaethom gyfrifo dosbarthiad Ki-67 yn seiliedig ar ganolrif ein cohort (25%, amrediad <10-90%). Diffinwyd pynciau â Ki-67 < 25% fel “Ki-67 isel”, tra ystyriwyd unigolion â gwerthoedd ≥ 25% yn “Ki-67 uchel”. Canfuwyd gwahaniaethau Ki-67 arwyddocaol (p<0.01) rhwng pobl nad oeddent yn gludwyr a chludwyr BRCA1 PV (Ffig. 5A).
Ffigur 5 Cydberthynas Ki-67 â dosbarthiad gradd mewn menywod canser y fron gyda a heb PVs BRCA1 a BRCA2. (A) Plot bocs yn dangos gwerthoedd canolrifol Ki-67 mewn 181 o gleifion canser y fron nad ydynt yn gludwyr o'i gymharu â chleifion PV BRCA1 (18) neu BRCA2 (17). Ystyriwyd bod gwerthoedd P islaw 0.5 yn ystadegol arwyddocaol. (B) Histogram yn cynrychioli aseiniad cleifion canser y fron i grwpiau gradd histolegol (G2 a G3) yn ôl statws mwtaniad BRCA1 a BRCA2 (pynciau WT, cludwyr PVs BRCA1 a BRCA2).
Yn yr un modd, fe wnaethom archwilio a oedd gradd y tiwmor yn cydberthyn â phresenoldeb BRCA1/2 PV. Gan fod G1 BC yn absennol yn ein poblogaeth, fe wnaethom rannu'r cleifion yn ddau grŵp (G2 neu G3). Yn gyson â chanlyniadau Ki-67, datgelodd y dadansoddiad gydberthynas ystadegol arwyddocaol rhwng gradd y tiwmor a mwtaniad BRCA1, gyda chyfran uwch o diwmorau G3 mewn cludwyr BRCA1 o'i gymharu â rhai nad ydynt yn gludwyr (p<0.005) (Ffigur 5B).
Mae datblygiadau mewn technoleg dilyniannu DNA wedi galluogi datblygiadau digynsail mewn profion genetig BRCA1/2, gyda goblygiadau hollbwysig i gleifion sydd â hanes teuluol o ganser. Hyd yn hyn, mae tua 20,000 o amrywiadau BRCA1/2 wedi'u nodi a'u dosbarthu yn ôl Cymdeithas Geneteg Feddygol America 35 a system ENIGMA.35,36 Mae'n hysbys bod sbectrwm mwtaniadol BRCA1/2 yn amrywio'n fawr ar draws rhanbarthau daearyddol.37 O fewn yr Eidal, roedd cyfradd PV BRCA1/2 yn amrywio o 8% i 37%, gan ddangos amrywioldeb eang o fewn y wlad.38,39 Gyda phoblogaeth o bron i 5 miliwn, Sisili yw'r pumed rhanbarth mwyaf yn yr Eidal o ran nifer y trigolion. Er bod data'n bodoli ar ddosbarthiad BRCA1/2 yng ngorllewin Sisili, nid oes tystiolaeth helaeth yn rhan ddwyreiniol yr ynys.
Ein hastudiaeth ni yw un o'r adroddiadau cyntaf ar nifer yr achosion o BRCA1/2 PV mewn cleifion BC yn nwyrain Sisili.28 Canolbwyntiom ein dadansoddiad ar BC, gan mai dyma'r clefyd mwyaf cyffredin yn ein cohort o bell ffordd.
Wrth brofi 389 o gleifion canser y fron (BC), roedd gan 9% ohonynt PV BRCA1/2, wedi'u dosbarthu'n gyfartal rhwng BRCA1 a BRCA2. Mae'r canlyniadau hyn yn gyson â'r rhai a adroddwyd yn flaenorol ym mhoblogaeth yr Eidal.28 Yn ddiddorol, roedd 3% (13/389) o'n carfan yn wrywod. Mae'r gyfradd hon yn uwch na'r disgwyl ar gyfer canser y fron gwrywaidd (1% o'r holl ganser y fron),40 gan adlewyrchu ein dewis o boblogaethau yn seiliedig ar risg mwtaniad BRCA1/2. Fodd bynnag, ni ddatblygodd yr un o'r dynion hyn PV BRCA1/2, felly roeddent yn ymgeiswyr ar gyfer dadansoddiad moleciwlaidd pellach i ddiystyru presenoldeb mwtaniadau llai cyffredin fel PALB2, RAD51C a D, ymhlith eraill. Cafwyd amrywiadau o arwyddocâd ansicr mewn 7% o bynciau lle'r oedd VUS BRCA2 yn amlwg. Mae hyd yn oed y canlyniad hwn yn gyson â thystiolaeth sy'n bodoli eisoes.28,41,42
Pan wnaethom ddadansoddi dosbarthiad isdeipiau moleciwlaidd BC mewn menywod â mwtant BRCA1/2, fe wnaethom gadarnhau cysylltiadau hysbys rhwng TNBC a BRCA1 PV (58.8%) a rhwng BC luminal B a BRCA2 PV (55.6%).16,43 Mae'r tiwmorau luminal A a HER2+ mewn cludwyr BRCA1 a BRCA2 PV yn gyson â data llenyddiaeth sy'n bodoli eisoes.16,43
Yna rydym yn canolbwyntio ar fath a lleoliad y PV BRCA1/2. Yn ein carfan ni, y PV BRCA1 mwyaf cyffredin oedd c.5035_5039delCTAAT. Er bod Incorvaia et al. heb ddisgrifio'r amrywiad hwn yn eu cohort Sisilaidd, mae awduron eraill wedi'i adrodd fel PV llinell germ BRCA1.34 Canfuwyd sawl PV BRCA1 yn ein cohort ni – e.e. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA a c.5266dupC – sydd wedi'u harsylwi yn Sisili.28 O'r rhain, mae dau dreigliad sylfaen BRCA1 (c.181T>G a c.5266dupC) i'w cael yn gyffredin mewn Iddewon Ashkenazi yn Nwyrain a Chanol Ewrop (Gwlad Pwyl, Tsiec), Slofenia, Awstria, Hwngari, Belarws ac Almaeneg), 44,45 ac, yn yr Unol Daleithiau a'r Ariannin, fe'i diffiniwyd yn ddiweddar fel "amrywiad llinell germ rheolaidd" mewn cleifion Eidalaidd â BC ac OC. Nodwyd yr amrywiad 34c.514del yn flaenorol mewn 8 claf canser y fron o ogledd Sisili yn Palermo a Messina. Yn ddiddorol, hyd yn oed Incorvaia et al. canfuwyd yr amrywiad c.3253dupA mewn rhai teuluoedd yn Catania.28 Y PVs BRCA2 mwyaf cynrychioliadol yw c.428dup, c.5851_5854delAGTT a'r amrywiad intronig c.8487+1G>A, a adroddwyd yn fanylach 28 mewn claf yn Palermo gyda c.428dup, c.5851_5854delAGTT Gwelwyd PV mewn cartrefi yng ngogledd-orllewin Sisili, yn bennaf yn rhanbarthau Trapani a Palermo, tra gwelwyd PV c.5851_5854delAGTT mewn cartrefi yng ngogledd-orllewin Sisili. Roedd yr amrywiad 8487+1G>A yn fwy cyffredin mewn pynciau o Messina, Palermo, a Caltanissetta.28 Rebbeck et al. disgrifiwyd y newid c.5851_5854delAGTT yng Ngholombia yn flaenorol.37 Mae BRCA2 PV arall, c.631+1G>A, wedi'i ganfod mewn cleifion BC ac OC o Sisili (Agrigento, Siracusa a Ragusa).28 Yn nodedig, gwelsom gydfodolaeth dau amrywiad BRCA2 (BRCA2 c.631G>A a c.7008-2A>T) yn yr un claf, a dybiwyd gennym eu bod wedi'u gwahanu yn y modd cis, fel yr adroddwyd yn flaenorol fel 'na.34,46 Mae'r mwtaniadau BRCA2 uble hyn yn wir yn cael eu gweld yn aml yn rhanbarth yr Eidal ac fe'u canfuwyd yn cyflwyno codonau stop cynamserol, gan effeithio ar ysbeilio RNA negesydd ac achosi i'r protein BRCA2 fethu.47,48
Fe wnaethon ni hefyd fapio PV BRCA1 a BRCA2 mewn rhanbarthau OCCR a BCCR tybiedig o barthau a genynnau protein. Disgrifiwyd y rhanbarthau hyn gan Rebbeck et al. fel ardaloedd risg ar gyfer datblygu canser yr ofari a chanser y fron, yn y drefn honno.49 Fodd bynnag, mae'r dystiolaeth ynghylch y cysylltiad rhwng lleoliad amrywiadau llinell germ a risg canser y fron neu'r ofari yn parhau i fod yn ddadleuol.28,50-52 Yn ein poblogaeth, roedd PV BRCA1 wedi'u lleoli'n bennaf yn rhanbarth BCCR, tra bod PV BRCA2 wedi'u lleoli'n bennaf yn rhanbarth OCCR. Fodd bynnag, ni allem ddod o hyd i unrhyw gysylltiad rhwng rhanbarthau OCCR a BCCR tybiedig a nodweddion BC. Gall hyn fod oherwydd y nifer gyfyngedig o gleifion â mwtaniadau BRCA1/2. O safbwynt parth protein, mae PV BRCA1 wedi'u dosbarthu ar hyd y protein cyfan, ac mae newidiadau BRCA2 i'w cael yn ffafriol yn y parth ailadrodd BRC.
Yn olaf, fe wnaethom gydberthyn nodweddion clinigopatholegol BC â PV BRCA1/2. Oherwydd y nifer gyfyngedig o gleifion a gynhwyswyd, dim ond cydberthynas arwyddocaol a ganfuom rhwng Ki-67 a gradd y tiwmor. Er bod yr asesiad a'r dehongliad o Ki-67 yn parhau i fod braidd yn ddadleuol, mae'n sicr bod cyfraddau amlhau uchel yn gysylltiedig â risg uwch o ailddigwyddiad clefyd a gostyngiad mewn goroesiad. Hyd yn hyn, y torbwynt ar gyfer gwahaniaethu rhwng Ki-67 “uchel” ac “isel” yw 20%. Fodd bynnag, nid yw'r trothwy hwn yn berthnasol i'n poblogaeth cleifion mwtaniad BRCA1/2, sydd â gwerth canolrifol Ki-67 o 25%. Gellir esbonio'r duedd hon mewn cyfraddau Ki-67 uchel gan y nifer yn ein carfannau luminal B a TNBC, lle'r oedd ychydig o diwmorau luminal A yn bresennol. Fodd bynnag, mae rhywfaint o dystiolaeth yn awgrymu y gallai torbwynt Ki-67 uwch (25–30%) haenu cleifion yn well yn ôl eu prognosis.53,54 O ganlyniadau ein dadansoddiad, nid yw cydberthynas arwyddocaol yn syndod. Yn digwydd rhwng Ki-67 uchel a graddau a phresenoldeb BRCA1 PV. Mewn gwirionedd, mae tiwmorau sy'n gysylltiedig â BRCA1 yn nodweddiadol o TNBC ac yn arddangos nodweddion mwy ymosodol.16,17
I gloi, mae'r astudiaeth hon yn darparu adroddiad ar statws mwtaniadol BRCA1/2 mewn carfan BC o ddwyrain Sisili. Ar y cyfan, mae ein canfyddiadau'n gyson â thystiolaeth sy'n bodoli eisoes, o ran nifer yr achosion o mwtaniadau a nodweddion clinigopatholegol mewn BC. Mae angen mwy o astudiaethau mewn poblogaethau mwy o gleifion BC â mwtaniad BRCA1/2, megis defnyddio dadansoddiad mwtaniadol estynedig aml-genom, i asesu presenoldeb PV sy'n wahanol ac yn llai aml na BRCA1/2. Bydd hyn yn caniatáu adnabod a rheoli'n briodol y nifer cynyddol o bynciau sydd mewn mwy o berygl o ganser oherwydd mwtaniadau genetig.
Cadarnhawyd gennym fod cleifion wedi llofnodi caniatâd gwybodus i ryddhau eu samplau tiwmor yn ddienw at ddibenion ymchwil. Llofnododd pob claf ganiatâd gwybodus ysgrifenedig yn unol â Datganiad Helsinki. Yn unol â pholisi AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco”, eithriwyd yr astudiaeth hon rhag adolygiad moesegol oherwydd bod y dadansoddiad BRCA1/2 wedi'i berfformio yn unol ag arfer clinigol a rhoddodd pob claf ganiatâd gwybodus ysgrifenedig. Mae cleifion hefyd yn cydsynio i ddefnyddio eu data at ddibenion ymchwil.
Diolchwn i'r Athro Paolo Vigneri am ei gymorth wrth ofalu am gleifion canser y fron yn unol â chais y Pwyllgor Moeseg.
Mae Federica Martorana yn adrodd ar honoraria gan Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Nid yw'r awduron eraill yn datgan unrhyw wrthdaro buddiannau yn y gwaith hwn.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, ac eraill.Ystadegau Canser Byd-eang 2020: Mae GLOBOCAN yn amcangyfrif nifer yr achosion a marwolaethau 36 o ganserau mewn 185 o wledydd ledled y byd.CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660