Javascript saiki dipateni ing browser sampeyan. Sawetara fitur situs web iki ora bakal bisa digunakake nalika javascript dipateni.
Ndhaptar nganggo rincian khusus lan obat tartamtu sing sampeyan minati lan kita bakal cocogake informasi sing sampeyan wenehake karo artikel ing database ekstensif kita lan langsung ngirim salinan PDF liwat email.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 17 Klinik Kedokteran Universitas Manzella, 17 Livia Catania, Catania, 95123, Italia;2 Center for Experimental Oncology and Hematology, AOU Policlinico "G.Rodolico - San Marco", Catania , 95123, Italia; 3 Onkologi Medis, AOU Policlinico "G. Rodolico - San Marco", Catania, 95123, Italia; 4 Genetika Medis, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italia; 5 Genetika Kedokteran, ASP, Syracuse, 96100, Italia; 6 Departemen Ilmu Biomedis lan Bioteknologi, Universitas Catania, Genetika Medis, Catania, Italia, 95123; 7 Institut Riset Oasi-IRCCS, Troina, 94018, Italia Komunikasi: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected]; [email protected] Tujuan: Mutasi germline ing BRCA1 lan BRCA2 lan kanker payudara (BC), ovarium (OC) sing wis ditetepake, lan liya-liyane sing ana gandhengane karo risiko kanker sajrone urip. Tes gen BRCA minangka kunci kanggo netepake risiko individu, uga kanggo nemokake metode pencegahan ing operator sing sehat lan nyetel perawatan ing pasien kanker. Prevalensi perubahan BRCA1 lan BRCA2 beda-beda banget ing antarane wilayah geografis, lan sanajan ana data babagan varian patogen BRCA ing kulawarga Sisilia, panliten sing khusus nargetake populasi ing Sisilia sisih wétan isih kurang. Tujuan saka panliten iki yaiku kanggo nyelidiki kedadeyan lan distribusi perubahan germline patogen BRCA ing kohort pasien BC saka Sisilia sisih wétan lan kanggo netepake hubungane karo sipat BC tartamtu nggunakake sekuensing generasi sabanjure. Anane perubahan sing ana gandhengane karo tingkat tumor lan indeks proliferasi. HASIL: Sakabèhé, 35 pasien (9%) duwe varian patogen BRCA, 17 (49%) ing BRCA1 lan 18 (51%) ing BRCA2. Perubahan BRCA1 umum ing pasien BC triple-negatif, dene mutasi BRCA2 luwih umum ing pasien BC luminal. Dibandhingake karo non-carrier, subjek kanthi varian BRCA1 duwe tingkat tumor lan indeks proliferatif sing luwih dhuwur. Kesimpulan: Temuan kita menehi gambaran umum babagan status mutasi BRCA ing pasien BC saka Sisilia wétan lan ngonfirmasi peran analisis NGS kanggo ngenali pasien kanthi BC turun temurun. Sakabèhé, data iki konsisten karo bukti sadurungé sing ndhukung skrining BRCA kanggo pencegahan lan perawatan kanker sing tepat ing pembawa mutasi.
Kanker payudara (BC) minangka keganasan sing paling umum ing saindenging jagad lan kanker paling mematikan ing wanita.1 Fitur biologis sing nemtokake prognosis BC lan prilaku klinis wis ditliti kanthi ekstensif lan sebagian dijlentrehake sajrone wektu. Nyatane, sawetara penanda pengganti saiki digunakake kanggo nglasifikasikake BC dadi subtipe molekuler sing beda. Yaiku reseptor estrogen (ER) lan/utawa progesteron (PgR), amplifikasi reseptor faktor pertumbuhan epidermal manungsa 2 (HER2), indeks proliferasi Ki-67 lan tingkat tumor (G).2 Kombinasi variabel kasebut ngidentifikasi kategori BC ing ngisor iki: 1) Tumor luminal, sing nuduhake ekspresi ER lan/utawa PgR, nyumbang 75% saka BC. Tumor kasebut luwih dipérang dadi Luminal A, nalika Ki-67 kurang saka 20% lan HER2 negatif, lan Luminal B, nalika Ki-67 padha karo utawa luwih saka 20% lan ana amplifikasi HER2, preduli saka indeks proliferasi; 2) Tumor HER2+ sing ER lan PgR negatif nanging nuduhake amplifikasi HER2. Kelompok iki nyumbang 10% saka kabeh tumor payudara; 3) Kanker payudara triple-negatif (TNBC), sing ora nuduhake ekspresi ER lan PgR lan amplifikasi HER2, nyumbang udakara 15% saka kanker payudara.2-4
Antarane subtipe BC iki, tingkat tumor lan indeks proliferasi makili biomarker cross-sectional sing langsung lan independen ana gandhengane karo agresivitas tumor lan prognosis.5,6
Saliyané fitur biologis sing wis kasebut ing ndhuwur, peran owah-owahan genetik turunan sing ndadékaké perkembangan BC saya tambah penting sajrone sawetara taun kepungkur.7 Kira-kira 1 saka 10 tumor payudara diturunake amarga owah-owahan germline ing gen tartamtu.8 Rong studi epidemiologis gedhe sing nglibatake luwih saka 180.000 wanita bubar ngidentifikasi klompok wolung gen (yaiku, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, lan RAD51D) sing utamane tanggung jawab kanggo BC turunan. Antarane gen kasebut, BRCA1 lan BRCA2 (sabanjure diarani BRCA1/2) nuduhake korelasi paling kuat karo perkembangan tumor payudara.9-12 Nyatane, mutasi germline BRCA1/2 sacara signifikan nambah risiko BC sajrone urip uga keganasan liyane, kalebu ovarium, prostat, pankreas, kolorektal, lan melanoma. Saka umur 13 nganti 80 taun, insiden kumulatif BC yaiku 72% ing wanita kanthi varian patogen BRCA1 (PV) lan 69% ing wanita kanthi BRCA2. PV.14
Khususé, publikasi anyar nuduhaké yèn risiko BC gumantung saka jinis PV. Nyatane, dibandhingake karo varian truncating patogen, varian missense sing mencolok, utamane ing gen BRCA1, ana gandhèngané karo risiko BC sing luwih murah, utamane ing wanita sing luwih tuwa.15
Anane BRCA1 utawa BRCA2 PV digandhengake karo fitur biologis lan klinikopatologis sing beda.16,17 BC sing ana gandhengane karo BRCA1 cenderung agresif sacara klinis, kurang terdiferensiasi, lan proliferatif banget. Tumor iki biasane triple negative lan duwe umur wiwitan sing luwih awal. Tumor sing kedadeyan ing pasien sing dimutasi BRCA2 biasane nuduhake tingkat terdiferensiasi moderat nganti apik lan indeks proliferatif variabel. Tumor iki luwih umum ing lumen B lan biasane kedadeyan ing wong diwasa sing luwih tuwa.16-18 Khususé, mutasi ing BRCA1 lan BRCA2 nambah sensitivitas kanggo perawatan tartamtu, kalebu uyah platinum lan obat sing ditargetake kayata inhibitor poli (ADP-ribose) polimerase (PARPi).19,20
Sajrone sawetara taun kepungkur, implementasine sekuensing generasi sabanjure (NGS) ing praktik klinis wis ndadekake saya akeh pasien BC sing ngalami tes molekuler kanggo sindrom kerentanan kanker, kalebu BRCA1/2.21 Bebarengan, definisi adhedhasar kriteria sing tepat babagan riwayat kulawarga, demografi, lan karakteristik klinikopatologis kanggo luwih ngenali individu sing pantes dites BRCA1/2.22,23 Ing konteks iki, bukti saya akeh babagan skrining BRCA1/2 ing populasi tartamtu, sing nyoroti beda-beda ing antarane wilayah geografis.24-27 Sanajan ana laporan babagan kohort BC ing Sisilia sisih kulon, data sing kasedhiya babagan skrining BRCA1/2 ing populasi Sisilia sisih wétan luwih sithik.28,29
Ing kene kita njlèntrèhaké asil skrining germline BRCA1/2 ing pasien BC saka Sisilia wétan, sing luwih nggandhèngaké anané mutasi BRCA1 utawa BRCA2 karo fitur klinikopatologis utama tumor kasebut.
Panliten retrospektif ditindakake ing "Pusat Onkologi lan Hematologi Eksperimental" ing Rumah Sakit Policlinico. Rodolico - San Marco ing Catania. Saka Januari 2017 nganti Maret 2021, total 455 pasien kanker payudara lan ovarium, melanoma, pankreas utawa prostat dirujuk menyang laboratorium diagnostik molekuler kanggo tes genetik BRCA/2. Panliten iki ditindakake miturut Deklarasi Helsinki, lan kabeh peserta menehi idin tertulis sadurunge analisis molekuler.
Karakteristik histologis lan biologis (ER, PgR, status HER2, Ki-67, lan grade) saka BC ditaksir ing biopsi inti utawa sampel bedhah, mung nganggep komponen tumor sing agresif. Adhedhasar karakteristik kasebut, BC diklasifikasikake kaya ing ngisor iki: luminal A (ER+ lan/utawa PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ lan/utawa PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER lan/utawa PgR+, HER2+), HER2+ (ER lan PgR-, HER2+) utawa triple negative (ER lan PgR-, HER2-).
Sadurunge netepake status mutasi BRCA1 lan BRCA2, tim multidisiplin kalebu ahli onkologi, ahli genetika, lan psikolog nganakake konsultasi genetika tumor kanggo saben pasien kanggo nemtokake anané BRCA1 lan/utawa BRCA1. utawa individu kanthi risiko PV sing dhuwur ing gen BRCA2. Seleksi pasien ditindakake miturut pedoman Italian Society of Medical Oncology (AIOM) lan rekomendasi lokal Sisilia.30,31 Kriteria kasebut kalebu: (i) riwayat kulawarga varian patogen sing dikenal ing gen kerentanan (contone, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) lanang kanthi BC; (iii) sing duwe BC lan OC; (iv) wanita kanthi BC <36 taun, TNBC <60 taun, utawa BC bilateral <50 taun; (v) riwayat medis pribadi BC <50 taun lan paling ora siji sedulur tingkat pertama: (a) BC <50 taun; (b) OC non-mucinous lan non-borderline saka umur apa wae; (c) BC bilateral; (d) BC lanang; (e) kanker pankreas; (f) kanker prostat; (vi) rong utawa luwih Riwayat pribadi BC > 50 taun lan riwayat kulawarga BC, OC, utawa kanker pankreas kanggo sedulur sing sedulur tingkat siji lan sijine (kalebu sedulur sing sedulur tingkat siji karo dheweke); (vii) Riwayat pribadi OC lan paling ora siji sedulur tingkat siji: (a) BC <50 taun; (b) NOC; (c) BC bilateral; (d) BC lanang; (vii) wadon kanthi OC serous tingkat dhuwur.
Sampel getih perifer 20 mL dijupuk saka saben pasien lan dikumpulake menyang tabung EDTA (BD Biosciences). DNA genomik diisolasi saka sampel getih utuh 0,7 mL nggunakake QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italia) miturut pandhuan pabrikan lan dilewati liwat Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Nindakake kuantifikasi. Pengayaan target lan persiapan perpustakaan ditindakake dening Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, siap dimuat menyang Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit kanggo persiapan perpustakaan otomatis miturut pandhuan pabrikan. Kit kasebut kasusun saka rong kolam primer PCR multipleks sing bisa digunakake kanggo nyinaoni kabeh gen BRCA1 (NM_007300.3) lan BRCA2 (NM_000059.3). Sakcepete, 15 µL saben DNA sampel sing diencerake (10 ng) ditambahake menyang piring barcode kanggo persiapan perpustakaan lan kabeh reagen lan bahan habis pakai dimuat ing instrumen Ion Chef™. Persiapan perpustakaan otomatis lan penyatuan perpustakaan sampel barcode banjur ditindakake ing instrumen Ion Chef™. Jumlah perpustakaan sing disiapake banjur ditaksir dening Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) miturut pandhuan pabrikan. Pungkasan, perpustakaan digabungake ing rasio equimolar ing tabung sampel perpustakaan Ion Chef™ (tabung barcode). lan dimuat menyang instrumen Ion Chef™. Urutan ditindakake nggunakake instrumen Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) nggunakake Chip Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Analisis data ditindakake dening Amplicon Suite (SmartSeq srl) lan Piranti Lunak Ion Reporter.
Kabeh nomenklatur varian ngetutake pedoman saiki saka Human Genome Variation Consortium, sing kasedhiya online (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Signifikansi klinis varian BRCA1/2 ditetepake nggunakake klasifikasi International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) lan konsultasi karo macem-macem database kayata ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, lan UMD. Klasifikasi kasebut kalebu limang kategori risiko sing beda: jinak (kategori I), kemungkinan jinak (kategori II), varian sing ora mesthi signifikansi (VUS, kategori III), kemungkinan patogen (kategori IV), lan patogen (kategori V). VarSome uga nganalisa efek mutasi ing struktur lan fungsi protein, alat informatif kanthi akses menyang 30 database.32
Kanggo menehi potensial signifikansi klinis kanggo saben VUS, algoritma prediksi protein komputasi ing ngisor iki digunakake: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) lan Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Varian sing diklasifikasikake minangka kelas 1 lan 2 dianggep minangka tipe liar.
Sekuensing Sanger ngonfirmasi anané saben varian patogen. Cekakipun, sepasang primer tartamtu dirancang kanggo saben varian sing dideteksi kanthi nggunakake urutan referensi gen BRCA1 lan BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 lan NG_012772.3, NM_000059.3). Mulane, PCR sing ditargetake ditindakake banjur diterusake karo sekuensing Sanger.
Pasien sing dites negatif kanggo gen BRCA1/2 dites nganggo amplifikasi probe sing gumantung karo ligasi multipleks (MLPA) miturut pandhuan pabrikan kanggo netepake anané penyusunan ulang genomik gedhe (LGR). Cekakipun, sampel DNA didenaturasi lan nganti 60 probe khusus gen BRCA1 lan BRCA2 digunakake, saben-saben ndeteksi urutan DNA tartamtu sing dawane kira-kira 60 nukleotida. Produk amplifikasi probe, sing kasusun saka sakumpulan amplikon PCR sing unik, banjur dianalisis nganggo elektroforesis kapiler lan nganggo piranti lunak Cofalyser.Net bebarengan karo tabel Cofalyser khusus batch sing cocog (www.mrcholland.com).
Variabel klinikopatologis sing dipilih (tingkat histologis lan indeks proliferasi Ki-67%) digandhengake karo anané BRCA1/2 PV, sing diitung nggunakake piranti lunak Prism v. 8.4 nggunakake uji eksak Fisher kanthi nganggep nilai-p <0,05 signifikan.
Antarane Januari 2017 lan Maret 2021, 455 pasien disaring kanggo mutasi germline BRCA1/2. Tes mutasi ditindakake ing Pusat Onkologi lan Hematologi Eksperimental Rumah Sakit Policlinico. Miturut pedoman Sisilia (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), Rodolico of Catania - San Marco” sakabane, ana 389 pasien. Ana kanker payudara, 37 kanker ovarium, 16 kanker pankreas, 8 kanker prostat lan 5 melanoma. Distribusi pasien miturut jinis kanker lan asil analisis dituduhake ing Gambar 1.
Gambar 1 nuduhake diagram alur sing nuduhake ringkesan panliten. Pasien kanthi tumor payudara, melanoma, pankreas, prostat, utawa ovarium dites kanggo mutasi ing gen BRCA1 lan BRCA2.
Singkatan: PV, varian patogen; VUS, varian sing ora mesthi signifikansine; WT, urutan BRCA1/2 tipe liar.
Kita milih fokus panliten kita ing kohort kanker payudara. Pasien kasebut duwe umur rata-rata 49 taun (kisaran 23-89) lan umume wanita (n = 376, utawa 97%).
Saka subjek kasebut, 64 (17%) duwe mutasi BRCA1/2 lan kabeh wadon. Telung puluh lima (9%) duwe PV lan 29 (7,5%) duwe VUS. Pitulas (48,6%) saka 35 varian patogen kedadeyan ing BRCA1 lan 18 (51,4%) ing BRCA2, dene 5 VUS kedadeyan ing BRCA1 (17,2%) lan 24 (82,8%) ing BRCA2 (Gambar 1 lan 2). LGR ora ana ing analisis MLPA.
Gambar 2. Analisis mutasi BRCA1 lan BRCA2 ing 389 pasien kanker payudara. (A) Distribusi varian patogen (PV) (abang), varian sing ora mesthi signifikansi (VUS) (oranye), lan WT (biru) ing 389 pasien kanker payudara; (B) 389 pasien kanker payudara Telung puluh lima (9%) duwe varian patogen BRCA1/2 (PV). Antarane, 17 (48,6%) minangka operator BRCA1 PV (abang peteng) lan 18 (51,4%) minangka operator BRCA2 (abang enom); (C) 29 (7,5%) saka 389 subjek nggawa VUS, 5 (17,2%) gen BRCA1 (oranye peteng) lan 24 (82,8%) gen BRCA2 (oranye enom).
Singkatan: PV, varian patogen; VUS, varian sing ora mesthi signifikansine; WT, urutan BRCA1/2 tipe liar.
Sabanjure, kita nyelidiki prevalensi subtipe molekuler BC ing pasien kanthi BRCA1/2 PV. Distribusi kasebut kalebu 2 (5,7%) luminal A, 15 (42,9%) luminal B, 3 (8,6%) luminal B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ lan 13 (37,1%) pasien TNBC. Antarane pasien BRCA1-positif, 5 (29,4%) duwe luminal B BC, 2 (11,8%) duwe penyakit HER2+, lan 10 (58,8%) duwe TNBC. Tumor tanpa mutasi BRCA1 yaiku luminal A utawa luminal B-HER2+ (Gambar 3). Ing subkelompok BRCA2-positif, 10 (55,6%) tumor yaiku luminal B, 3 (16,7%) yaiku luminal B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC lan 2 (11,1%) yaiku luminal A (Gambar 3). Ora ana tumor HER2+. ana ing klompok iki. Dadi, mutasi BRCA1 umum ing pasien TNBC, dene owah-owahan BRCA2 dominan ing individu lumen B.
Gambar 3 Prevalensi subtipe kanker payudara ing pasien kanthi varian patogen ing BRCA1 lan BRCA2. Histogram nuduhake distribusi PV BRCA1- (abang peteng) lan BRCA2- (abang enom) ing antarane subtipe molekuler pasien kanker payudara. Angka sing dilapurake ing saben kothak makili persentase pasien kanthi PV BRCA1 lan BRCA2 kanggo saben subtipe kanker payudara.
Singkatan: PV, varian patogen; HER2+, reseptor faktor pertumbuhan epidermal manungsa 2 positif; TNBC, kanker payudara triple-negatif.
Sabanjure, kita ngevaluasi jinis lan lokalisasi gen BRCA1 lan BRCA2 PV. Ing BRCA1 PV, kita mirsani 7 varian nukleotida tunggal (SNV), 6 delesi, 3 duplikasi lan 1 penyisipan. Mung siji mutasi (c.5522delG) sing makili panemuan anyar. BRCA1 PV sing paling umum dideteksi ing loro subjek yaiku c.5035_5039delCTAAT. Owah-owahan iki kalebu delesi limang nukleotida (CTAAT) ing ekson BRCA1 15, sing nyebabake substitusi asam amino leusin dening tirosin ing kodon 1679, lan amarga frameshift terjemahan karo kodon stop alternatif sing diprediksi nyebabake pemotongan protein prematur. Kabeh owah-owahan liyane mung dideteksi ing siji kasus. Khususé, salah sawijining PV sing dilapurake dumunung ing wilayah konsensus situs sambatan (c.4357 + 1G>T) (Tabel 1).
Babagan BRCA2 PV, kita mirsani 6 delesi, 6 SNV lan 2 duplikasi. Ora ana owah-owahan sing ditemokake sing anyar. Telung mutasi kambuh ing populasi kita, c.428dup lan c.8487+1G>A diamati ing 3 subjek, diikuti dening c.5851_5854delAGTT sing dijupuk ing rong kasus. Owah-owahan c.428dup nglibatake pengulangan C ing ekson 5 saka BRCA2, sing diprediksi bakal ngode protein sing dipotong lan ora fungsional. Mutasi c.8487+1G>A kedadeyan ing wilayah intron BRCA2 intron 19 (± 1,2) lan mengaruhi urutan konsensus splicing, sing nyebabake splicing sing diganti sing nyebabake protein sing ora normal utawa ora ana. Varian patogen c.5851_5854delAGTT amarga delesi 4-nukleotida saka posisi nukleotida 5851 nganti 5854 ing ekson kode 10 saka gen BRCA2 lan nyebabake Pergeseran pigura translasi kanthi kodon stop alternatif sing diprediksi (p.S1951WfsTer). Khususé, kaya sing dilapurake sadurunge, loro owah-owahan c.631G>A lan c.7008-2A>T dideteksi ing pasien sing padha.34 Mutasi pisanan nglibatake panggantos adenosin (A) ing ekson BRCA2 7 karo nukleotida sing ngemot guanin (G) sing nyebabake owah-owahan valin dadi isoleusin ing kodon 211, isoleusin Asam amino minangka asam amino kanthi sifat sing padha banget. Owah-owahan iki mengaruhi splicing mRNA normal. Varian kapindho dumunung ing wilayah intron lan nyebabake substitusi A dobel dadi timin (T) sadurunge ekson 13 saka gen sing ngode BRCA2. Owah-owahan c.7008-2A>T bisa ngasilake pirang-pirang transkrip kanthi dawa sing beda. Salajengipun, ing klompok PV BRCA2, 4 saka 18 owah-owahan (22,2%) yaiku intron.
Banjur kita memetakan mutasi sing ngrusak BRCA1/2 ing domain fungsional lan wilayah sing ngiket protein (Gambar 4). Ing gen BRCA1, 50% PV dumunung ing wilayah kluster kanker payudara (BCCR), dene 22% mutasi dumunung ing wilayah kluster kanker ovarium (OCCR) (Gambar 4A). Ing BRCA2 PV, 35,7% varian dumunung ing wilayah BCCR lan 42,8% mutasi dumunung ing OCCR (Gambar 4B). Sabanjure, kita neliti lokasi PV ing domain protein BRCA1 lan BRCA2. Kanggo protein BRCA1, kita nemokake telung PV ing domain loop lan coil coil, lan rong mutasi ing domain BRCT (Gambar 4A). Kanggo protein BRCA2, 4 PV dipetakan menyang domain pengulangan BRC, dene 3 owah-owahan intron lan 3 eksonik dideteksi ing domain oligo/oligosakarida-binding (OB) lan menara (T) (Gambar 4B).
Gambar 4 Representasi skematis protein BRCA1 lan BRCA2 lan lokalisasi varian patogen. Gambar iki nuduhake distribusi varian patogen BRCA1 (A) lan BRCA2 (B) ing pasien kanker payudara. Mutasi eksonik dituduhake kanthi warna biru, dene varian intron dituduhake kanthi warna oranye. Dhuwur bar nggambarake jumlah kasus. Protein BRCA1 lan BRCA2 lan domain fungsional dilapurake. (A) Protein BRCA1 ngemot domain loop (RING) lan urutan lokalisasi nuklir (NLS), domain coiled-coil, domain kluster SQ/TQ (SCD), lan domain C-terminal BRCA1 (BRCT). (B) Protein BRCA2 ngemot wolung pengulangan BRC, domain pengikat DNA kanthi domain heliks (Heliks), telung lipatan oligonukleotida/pengikat oligosakarida (OB), domain menara (T), lan An NLS ing sisih C. Area sing diarani Wilayah Kluster Kanker Payudara (BCCR) lan Wilayah Kluster Kanker Ovarium (OCCR) dituduhake ing sisih ngisor. *Makili mutasi sing nemtokake mandheg kodon.
Banjur kita nyelidiki fitur klinikopatologis BC sing bisa uga ana hubungane karo anane BRCA1/2 PV. Cathetan klinis lengkap kasedhiya kanggo 181 pasien BRCA1/2-negatif (non-carrier) lan kabeh carrier (n = 35). Ana korelasi antarane tingkat proliferasi tumor lan tingkat.
Kita ngetung distribusi Ki-67 adhedhasar median kohort kita (25%, kisaran <10-90%). Subjek kanthi Ki-67 < 25% ditetepake minangka "Ki-67 endhek", dene individu kanthi nilai ≥ 25% dianggep "Ki-67 dhuwur". Bedane Ki-67 sing signifikan (p <0,01) ditemokake antarane non-pembawa lan pembawa PV BRCA1 (Gambar 5A).
Gambar 5 Korelasi Ki-67 karo distribusi kelas ing wanita kanker payudara kanthi lan tanpa BRCA1 lan BRCA2 PV. (A) Boxplot sing nuduhake nilai median Ki-67 ing 181 pasien BC non-carrier dibandhingake karo pasien BRCA1 (18) utawa BRCA2 (17) PV. Nilai P ing ngisor 0,5 dianggep signifikan sacara statistik. (B) Histogram sing makili penetapan pasien kanker BC menyang klompok kelas histologis (G2 lan G3) miturut status mutasi BRCA1 lan BRCA2 (subjek WT, pembawa BRCA1 lan BRCA2 PV).
Semono uga, kita nliti apa tingkat tumor ana hubungane karo anane BRCA1/2 PV. Amarga G1 BC ora ana ing populasi kita, kita mbagi pasien dadi rong klompok (G2 utawa G3). Konsisten karo asil Ki-67, analisis kasebut nuduhake korelasi sing signifikan sacara statistik antarane tingkat tumor lan mutasi BRCA1, kanthi proporsi tumor G3 sing luwih dhuwur ing operator BRCA1 dibandhingake karo sing ora operator (p <0,005) (Gambar 5B).
Kemajuan ing teknologi sekuensing DNA wis ndadekake kemajuan sing durung tau ana sadurunge ing tes genetik BRCA1/2, kanthi implikasi penting kanggo pasien sing duwe riwayat kanker kulawarga. Nganti saiki, kira-kira 20.000 varian BRCA1/2 wis diidentifikasi lan diklasifikasikake miturut American Society of Medical Genetics 35 lan sistem ENIGMA.35,36 Wis dingerteni manawa spektrum mutasi BRCA1/2 beda-beda ing antarane wilayah geografis.37 Ing Italia, tingkat PV BRCA1/2 kisaran saka 8% nganti 37%, nuduhake variabilitas intra-negara sing amba.38,39 Kanthi populasi meh 5 yuta, Sisilia minangka wilayah paling gedhe nomer lima ing Italia babagan jumlah penduduk. Sanajan ana data babagan distribusi BRCA1/2 ing Sisilia sisih kulon, ora ana bukti sing ekstensif ing sisih wétan pulo kasebut.
Panliten kita minangka salah sawijining laporan pisanan babagan kedadeyan BRCA1/2 PV ing pasien BC ing sisih wétan Sisilia.28 Kita fokus analisis ing BC, amarga iki minangka penyakit sing paling umum ing kohort kita.
Nalika nguji 389 pasien BC, 9% nggawa PV BRCA1/2, sing disebarake kanthi rata antarane BRCA1 lan BRCA2. Asil kasebut konsisten karo sing dilapurake sadurunge ing populasi Italia.28 Menariknya, 3% (13/389) saka kohort kita lanang. Tingkat iki luwih dhuwur tinimbang sing diarepake kanggo kanker payudara lanang (1% saka kabeh BC),40 sing nggambarake pilihan populasi adhedhasar risiko mutasi BRCA1/2. Nanging, ora ana wong lanang iki sing ngembangake PV BRCA1/2, mula dheweke dadi calon kanggo analisis molekuler luwih lanjut kanggo ngilangi anané mutasi sing kurang umum kayata PALB2, RAD51C lan D, lan liya-liyane. Varian sing ora mesthi signifikansi dijupuk ing 7% subjek sing BRCA2 VUS katon. Malah asil iki konsisten karo bukti sing wis ana.28,41,42
Nalika kita nganalisa distribusi subtipe molekuler BC ing wanita mutan BRCA1/2, kita ngonfirmasi hubungan sing dikenal antarane TNBC lan BRCA1 PV (58,8%) lan antarane luminal B BC lan BRCA2 PV (55,6%).16,43 Tumor luminal A lan HER2+ ing operator BRCA1 lan BRCA2 PV konsisten karo data literatur sing ana.16,43
Banjur kita fokus ing jinis lan lokasi PV BRCA1/2. Ing kohort kita, PV BRCA1 sing paling umum yaiku c.5035_5039delCTAAT. Sanajan Incorvaia et al. ora njlèntrèhaké varian iki ing kohort Sisilia, penulis liyané wis nglaporaké minangka germline BRCA1 PV.34 Sawetara PV BRCA1 ditemokaké ing kohort kita - contoné c.181T>G, c.514del, c.3253dupA lan c.5266dupC - sing wis diamati ing Sisilia.28 Saka jumlah kasebut, rong mutasi pangadeg BRCA1 (c.181T>G lan c.5266dupC) umum ditemokaké ing wong Yahudi Ashkenazi ing Eropa Wétan lan Tengah (Polandia, Ceko), Slovenia, Austria, Hongaria, Belarusia lan Jerman), 44,45 lan, ing Amerika Serikat lan Argentina, bubar ditegesaké minangka "varian germline kambuh" ing pasien Italia karo BC lan OC. Varian 34c.514del sadurungé diidentifikasi ing 8 pasien kanker payudara saka Sisilia lor ing Palermo lan Messina. Menarik, malah Incorvaia et al. nemokake varian c.3253dupA ing sawetara kulawarga ing Catania.28 PV BRCA2 sing paling representatif yaiku c.428dup, c.5851_5854delAGTT lan varian intronik c.8487+1G>A, sing wis dilapurake kanthi luwih rinci 28 ing pasien ing Palermo kanthi c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV diamati ing rumah tangga ing sisih lor-kulon Sisilia, utamane ing wilayah Trapani lan Palermo, dene PV c.5851_5854delAGTT diamati ing rumah tangga ing sisih lor-kulon Sisilia. Varian 8487+1G>A luwih umum ing subjek saka Messina, Palermo, lan Caltanissetta.28 Rebbeck et al. sadurunge wis njlentrehake owah-owahan c.5851_5854delAGTT ing Kolombia.37 PV BRCA2 liyane, c.631+1G>A, wis ditemokake ing pasien BC lan OC saka Sisilia (Agrigento, Siracusa lan Ragusa).28 Khususé, kita mirsani koeksistensi rong varian BRCA2 (BRCA2 c.631G>A lan c.7008-2A>T) ing pasien sing padha, sing dianggep dipisahake ing mode cis, kaya sing dilapurake sadurunge kaya ngono.34,46 Mutasi BRCA2 iki pancen kerep diamati ing wilayah Italia lan wis ditemokake ngenalake kodon stop prematur, sing mengaruhi splicing RNA messenger lan nyebabake protein BRCA2 gagal.47,48
Kita uga memetakan PV BRCA1 lan BRCA2 ing wilayah OCCR lan BCCR putatif saka domain lan gen protein. Wilayah kasebut diterangake dening Rebbeck et al. minangka wilayah risiko kanggo ngembangake kanker ovarium lan payudara.49 Nanging, bukti babagan hubungan antarane lokasi varian germline lan risiko kanker payudara utawa ovarium isih kontroversial.28,50-52 Ing populasi kita, PV BRCA1 utamane dumunung ing wilayah BCCR, dene PV BRCA2 utamane dumunung ing wilayah OCCR. Nanging, kita ora bisa nemokake hubungan antarane wilayah OCCR lan BCCR putatif lan fitur BC. Iki bisa uga amarga jumlah pasien sing winates kanthi mutasi BRCA1/2. Saka perspektif domain protein, PV BRCA1 disebar ing sadawane kabeh protein, lan perubahan BRCA2 luwih disenengi ditemokake ing domain pengulangan BRC.
Pungkasan, kita nggandhengake fitur klinikopatologis BC karo BRCA1/2 PV. Amarga jumlah pasien sing winates, kita mung nemokake korelasi sing signifikan antarane Ki-67 lan tingkat tumor. Sanajan penilaian lan interpretasi Ki-67 isih rada kontroversial, mesthi wae tingkat proliferatif sing dhuwur ana gandhengane karo tambah risiko kambuh penyakit lan penurunan kaslametan. Nganti saiki, cutoff kanggo mbedakake antarane Ki-67 "dhuwur" lan "endhek" yaiku 20%. Nanging, ambang batas iki ora ditrapake kanggo populasi pasien mutasi BRCA1/2 kita, sing duwe nilai Ki-67 rata-rata 25%. Tren tingkat Ki-67 sing dhuwur iki bisa diterangake dening prevalensi ing kohort luminal B lan TNBC kita, sing sawetara tumor luminal A ana. Nanging, sawetara bukti katon nuduhake yen cutoff Ki-67 sing luwih dhuwur (25-30%) bisa luwih apik stratifikasi pasien miturut prognosis.53,54 Saka asil analisis kita, korelasi sing signifikan ora nggumunake. Kedadeyan antarane Ki-67 sing dhuwur lan tingkat lan anané BRCA1 PV. Nyatane, tumor sing ana gandhengane karo BRCA1 minangka ciri khas TNBC lan nuduhake fitur sing luwih agresif.16,17
Kesimpulane, panliten iki nyedhiyakake laporan babagan status mutasi BRCA1/2 ing kohort BC saka Sisilia sisih wétan. Sakabèhé, temuan kita konsisten karo bukti sing wis ana, saka segi prevalensi mutasi lan fitur klinikopatologis ing BC. Panliten luwih akeh ing populasi pasien BC mutan BRCA1/2 sing luwih gedhe, kayata nggunakake analisis mutasi sing diperluas multigenome, dibutuhake kanggo netepake anané PV sing béda lan kurang kerep tinimbang BRCA1/2. Iki bakal ngidini identifikasi lan manajemen sing tepat saka jumlah subjek sing saya tambah kanthi risiko kanker sing tambah amarga mutasi genetik.
Kita ngonfirmasi manawa pasien wis nandatangani persetujuan tertulis kanggo ngeculake sampel tumor kanthi anonim kanggo tujuan riset. Kabeh pasien nandatangani persetujuan tertulis miturut Deklarasi Helsinki. Miturut kabijakan AOU Policlinico "G.Rodolico - S.Marco", panliten iki dibebasake saka tinjauan etis amarga analisis BRCA1/2 ditindakake miturut praktik klinis lan kabeh pasien menehi persetujuan tertulis. Pasien uga setuju kanggo panggunaan data kanggo tujuan riset.
Kita ngucapake matur nuwun marang Prof. Paolo Vigneri kanggo pitulungane ing perawatan pasien kanker payudara kaya sing dijaluk dening Komite Etik.
Federica Martorana nglaporake honoraria saka Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Penulis liyane nyatakake ora ana konflik kepentingan ing karya iki.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, dkk. Statistik Kanker Global 2020: GLOBOCAN ngira-ira kedadeyan lan kematian 36 kanker ing 185 negara ing saindenging jagad. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660