Javascript hazırda brauzerinizdə deaktivdir. Javascript deaktiv edildikdə bu vebsaytın bəzi funksiyaları işləməyəcək.
Xüsusi təfərrüatlarınız və xüsusi maraq doğuran dərmanlarınızla qeydiyyatdan keçin və biz sizə təqdim etdiyiniz məlumatı geniş məlumat bazamızda məqalələrlə uyğunlaşdıracağıq və dərhal PDF nüsxəsini sizə e-poçtla göndərəcəyik.
məsələn Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federika Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Ficherella Liz12, C6112, və Eksperimental Tibb, Kataniya Universiteti, Kataniya, 95123, İtaliya;2 Eksperimental Onkologiya və Hematologiya Mərkəzi, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Kataniya, 95123, İtaliya; 3 Tibbi Onkologiya, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Kataniya, 95123, İtaliya; 4 Tibbi Genetika, ARNAS Garibaldi, Kataniya, 95123, İtaliya; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, İtaliya; 6 Biotibbi və Biotexnologiya Elmləri Bölməsi, Kataniya Universiteti, Tibbi Genetika, Kataniya, İtaliya, 95123; 7Oasi Tədqiqat İnstitutu-IRCCS, Troina, 94018, İtaliya Kommunikasiyalar: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, e-poçt [email protected]; [email protected] Məqsəd: BRCA1 və BRCA2 və ömür boyu xərçəng riski ilə əlaqəli müəyyən edilmiş döş xərçəngi (BC), yumurtalıq (OC) və digərlərində rüşeym xətti mutasiyaları. BRCA geni üçün test fərdi riski qiymətləndirmək, həmçinin sağlam daşıyıcılarda profilaktika üsullarını tapmaq və xərçəng xəstələrində xüsusi müalicə üsullarını tapmaq üçün əsasdır. regionlarda və Siciliya ailələrində BRCA patogen variantları ilə bağlı məlumatlar mövcud olsa da, şərq Siciliyadakı populyasiyaları hədəf alan tədqiqatlar yoxdur. Tədqiqatımızın məqsədi Şərqi Siciliyadan olan BC xəstələrinin bir qrupunda BRCA patogen mikrob xətti dəyişikliklərinin tezliyini və paylanmasını araşdırmaq və onların sonrakı BC-nin spesifik varlığı ilə əlaqəsini qiymətləndirmək idi. şiş dərəcəsi və proliferasiya indeksi ilə əlaqələndirilir. NƏTİCƏLƏR: Ümumilikdə, 35 xəstədə (9%) BRCA patogen variantı var, BRCA1-də 17 (49%) və BRCA2-də 18 (51%). BRCA1 dəyişiklikləri üçlü mənfi BC olan xəstələrdə üstünlük təşkil edir, halbuki BRCA2-li olmayan mutasiyalar daha çox rast gəlinir. BRCA1 variantları olan subyektlər əhəmiyyətli dərəcədə daha yüksək şiş dərəcəsi və proliferativ indeksə malik idi. Nəticələr: Bizim tapıntılarımız Siciliyanın şərqindən olan BC xəstələrinin BRCA mutasiya vəziyyətinin icmalını təqdim edir və irsi BC olan xəstələrin müəyyən edilməsində NGS analizinin rolunu təsdiqləyir. Ümumilikdə, bu məlumatlar BRCA mutasiyasının qarşısının alınması və xərçəngin qarşısının alınması üçün avtomobil skrininqinin müalicəsi üçün əvvəlki sübutlarla uyğundur.
Döş xərçəngi (BC) dünyada ən çox rast gəlinən bədxassəli xəstəlikdir və qadınlarda ən ölümcül xərçəngdir.1 BC proqnozunu və klinik davranışını müəyyən edən bioloji xüsusiyyətlər geniş şəkildə öyrənilmiş və zamanla qismən aydınlaşdırılmışdır. Əslində, hazırda BC-ni müxtəlif molekulyar alt tiplərə təsnif etmək üçün bir neçə surroqat markerdən istifadə olunur.Onlar estrogen/reseptor (ERR) və insan reseptorlarıdır. epidermal böyümə faktoru reseptor 2 (HER2) gücləndirilməsi, yayılma indeksi Ki-67 və şiş dərəcəsi (G).2 Bu dəyişənlərin birləşməsi aşağıdakı BC kateqoriyalarını müəyyən etdi: 1) ER və/və ya PgR ifadəsini göstərən lüminal şişlər BC-lərin 75%-ni təşkil edirdi. mənfi və Luminal B, Ki-67 20%-ə bərabər və ya yuxarı olduqda və yayılma indeksindən asılı olmayaraq HER2 gücləndirilməsinin mövcudluğunda; 2) ER və PgR mənfi olan, lakin HER2 gücləndirilməsini göstərən HER2+ şişləri. Bu qrup bütün döş şişlərinin 10%-ni təşkil edir; 3) ER və PgR ifadəsini və HER2 amplifikasiyasını göstərməyən üçlü mənfi döş xərçəngi (TNBC) döş xərçənginin təxminən 15%-ni təşkil edir.2-4
Bu BC alt tipləri arasında şiş dərəcəsi və proliferasiya indeksi birbaşa və müstəqil olaraq şişin aqressivliyi və proqnozu ilə əlaqəli olan kəsikli biomarkerləri təmsil edir.5,6
Yuxarıda qeyd olunan bioloji xüsusiyyətlərə əlavə olaraq, BC-nin inkişafına səbəb olan irsi genetik dəyişikliklərin rolu son bir neçə ildə getdikcə daha çox əhəmiyyət kəsb edir.7 Təxminən 10 döş şişindən 1-i spesifik genlərdə cücərmə xəttinin dəyişməsi səbəbindən miras alınır.8 Bu yaxınlarda 180,000-dən çox qadını əhatə edən iki böyük epidemioloji tədqiqat (AARD, e. BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C və RAD51D) ilk növbədə irsi BC-dən məsuldur. Bu genlər arasında BRCA1 və BRCA2 (bundan sonra BRCA1/2) döş şişlərinin inkişafı ilə ən güclü korrelyasiya göstərmişdir. BC, eləcə də yumurtalıq, prostat, mədəaltı vəzi, kolorektal və melanoma daxil olmaqla digər bədxassəli şişlərin həyat boyu riski. 13 yaşdan 80 yaşa qədər BC-nin kümülatif tezliyi BRCA1 patogen variantı (PV) olan qadınlarda 72% və BRCA42 olan qadınlarda 69% təşkil edir.
Qeyd etmək lazımdır ki, son nəşrdə BC riskinin PV tipindən asılı olduğu göstərilir. Əslində, patogen kəsilmə variantları ilə müqayisədə, xüsusilə də BRCA1 genində gözə çarpan missense variantları, xüsusilə yaşlı qadınlarda BC riskinin azalması ilə əlaqələndirilir.15
BRCA1 və ya BRCA2 PV-nin olması müxtəlif bioloji və klinikopatoloji xüsusiyyətlərlə əlaqələndirilirdi.16,17 BRCA1 ilə əlaqəli BC-lər kliniki cəhətdən aqressiv, zəif differensial və yüksək proliferativ olur. Bu şişlər adətən üçqat mənfi olur və erkən başlanğıc yaşına malikdirlər. yaxşı differensiallaşdırılmış dərəcələr və dəyişən proliferativ indekslər. Bu şişlər B lümenində daha çox rast gəlinir və adətən yaşlı yetkinlərdə baş verir.16-18 Qeyd etmək lazımdır ki, BRCA1 və BRCA2-dəki mutasiyalar xüsusi müalicələrə, o cümlədən platin duzlarına və poli(ADP-riboz, PAR19 inhibitorları, PAR2) polimeraza kimi hədəflənmiş dərmanlara həssaslığı artırır.
Son bir neçə il ərzində klinik praktikada yeni nəsil sekvensiyanın (NGS) tətbiqi BC xəstələrinin sayının artmasına BRCA1/2.21 daxil olmaqla, xərçəngə qarşı həssaslıq sindromları üçün molekulyar testlərdən keçməyə imkan verdi. test.22,23 Bu kontekstdə coğrafi bölgələr üzrə fərqləri vurğulayan spesifik populyasiyalarda BRCA1/2 skrininqinə dair sübutlar toplanır.24-27 Qərbi Siciliyada BC kohortu haqqında hesabatlar olsa da, Siciliyanın şərqində BRCA1/2 skrininqinə dair daha az məlumat mövcuddur.28,29
Biz burada BRCA1 və ya BRCA2 mutasiyalarının mövcudluğunu bu şişlərin əsas klinikopatoloji xüsusiyyətləri ilə daha da əlaqələndirərək, Siciliyanın şərqindən olan BC xəstələrində germline BRCA1/2 skrininqinin nəticələrini təsvir edirik.
Kataniyadakı Policlinico Hospital.Rodolico-San Marco nəzdindəki “Eksperimental Onkologiya və Hematologiya Mərkəzində” retrospektiv tədqiqat aparılmışdır. 2017-ci ilin yanvarından 2021-ci ilin martına qədər süd vəzi və yumurtalıq, melanoma, mədəaltı vəzi və ya prostat vəzinin xərçəngi və ya prostat vəzi xərçəngi diaqnozu ilə 455 xəstə göndərilmişdir. genetik test. Bu tədqiqat Helsinki Bəyannaməsinə uyğun olaraq aparılıb və bütün iştirakçılar molekulyar analizdən əvvəl yazılı məlumatlı razılıq veriblər.
BC-nin histoloji və bioloji xüsusiyyətləri (ER, PgR, HER2 statusu, Ki-67 və dərəcəsi) yalnız aqressiv şiş komponentləri nəzərə alınmaqla əsas biopsiya və ya cərrahi nümunələrdə qiymətləndirilmişdir. Bu xüsusiyyətlərə əsasən, BC-lər aşağıdakı kimi təsnif edilmişdir: luminal A (ER+ və/və ya PgR+, HER2-2/0, HER2-2/0, HER2-2%, B və ya PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER və/və ya PgR+, HER2+), HER2+ (ER və PgR-, HER2+) və ya üçlü mənfi (ER və PgR-, HER2-).
BRCA1 və BRCA2 mutasiyalarının vəziyyətini qiymətləndirməzdən əvvəl onkoloq, genetik və psixoloq daxil olmaqla multidissiplinar komanda BRCA1 və/və ya BRCA1-in mövcudluğunu müəyyən etmək üçün hər bir xəstə üçün şiş genetikası üzrə məsləhətləşmələr aparmışdır. və ya BRCA2 genində PV riski yüksək olan şəxslər. Xəstə seçimi İtaliya Tibbi Onkologiya Cəmiyyətinin (AIOM) təlimatlarına və yerli Siciliya tövsiyələrinə uyğun olaraq aparılmışdır.30,31 Bu meyarlara aşağıdakılar daxildir: (i) həssaslıq genlərində məlum patogen variantların ailə tarixi (məsələn, BRCA1, BRCA2, EN); (ii) BC olan kişilər; (iii) BC və OC olanlar; (iv) BC <36 yaş, TNBC <60 yaş və ya ikitərəfli BC <50 yaş olan qadınlar; (v) BC <50 il və ən azı bir birinci dərəcəli qohumun şəxsi xəstəlik tarixi: (a) BC <50 il; (b) istənilən yaşda qeyri-musinoz və qeyri-sərhəd OK; (c) ikitərəfli BC; (d) kişi BC; (e) mədəaltı vəzi xərçəngi; (f) prostat xərçəngi; (vi) iki və ya daha çox şəxsi tarixdə BC > 50 yaş və ailədə BC, OK və ya bir-biri ilə birinci dərəcəli qohum olan qohumlar üçün mədəaltı vəzi xərçəngi (o cümlədən onun birinci dərəcəli qohum olduğu qohumlar); (vii) OK-nin şəxsi tarixi və ən azı bir birinci dərəcə qohumu: (a) BC <50 yaş; (b) NOC; (c) ikitərəfli BC; (d) kişi BC; (vii) yüksək dərəcəli seroz OC olan qadın.
Hər bir xəstədən 20 mL periferik qan nümunəsi alınmış və EDTA borularına (BD Biosciences) yığılmışdır. Genomik DNT istehsalçının təlimatlarına uyğun olaraq QIAsymphony DSP DNT Midi dəsti İzolyasiya Kitindən (QIAGEN, Hilden, İtaliya) istifadə edərək 0,7 mL tam qan nümunələrindən təcrid edilmişdir (Qubit®mometrdən və Qubit®mometrdən keçirilmişdir. Scientific, Waltham, MA, USA) Kəmiyyəti təyin edin. Hədəfin zənginləşdirilməsi və kitabxananın hazırlanması istehsalçının təlimatlarına uyğun olaraq avtomatlaşdırılmış kitabxana hazırlamaq üçün Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kitinə yüklənməyə hazır olan Oncomine™ BRCA Research Assay Chef tərəfindən həyata keçirilir. Dəst bütün BRCA1 və (NMCA_07) öyrənmək üçün istifadə oluna bilən iki multipleks PCR primer hovuzundan ibarətdir. (NM_000059.3) genləri. Qısaca, hər bir seyreltilmiş nümunə DNT-dən 15 µL (10 ng) kitabxananın hazırlanması üçün ştrix kodlu lövhələrə əlavə edildi və bütün reagentlər və sərf olunan materiallar Ion Chef™ alətinə yükləndi. Avtomatlaşdırılmış kitabxananın hazırlanması və ştrix kodlu nümunə kitabxanasının birləşdirilməsi daha sonra Ion Chef aləti ilə hazırlanmışdır. Qubit® 3.0 Fluorometr (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, ABŞ) istehsalçının təlimatlarına uyğun olaraq. Nəhayət, kitabxanalar Ion Chef™ kitabxana nümunə borularında (barkodlu borular) ekvimolyar nisbətlərdə birləşdirilir və Ion Chef™ alətinə yüklənir. (Thermo Fisher Scientific) Ion 510 Chip (Thermo Fisher Scientific) istifadə edərək. Məlumatların təhlili Amplicon Suite (SmartSeq srl) və Ion Reporter Software tərəfindən həyata keçirilib.
Bütün variant nomenklaturası İnsan Genomunun Dəyişikliyi Konsorsiumunun onlayn (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen) mövcud təlimatlarına əməl etdi. BRCA1/2 variantlarının klinik əhəmiyyəti ENIGMA Beynəlxalq Konsorsiumunun (Evidence-Based Germ Network for Interpreting All Interpreting All Germline Network) təsnifatından istifadə etməklə müəyyən edilmişdir. https://enigmaconsortium.org/) və ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD və UMD kimi müxtəlif verilənlər bazaları ilə məsləhətləşmə. Təsnifat beş fərqli risk kateqoriyasını ehtiva edir: xoşxassəli (I kateqoriya), ehtimal olunan xoşxassəli (II kateqoriya), qeyri-müəyyən əhəmiyyətə malik variant (VUS, kateqoriya (III kateqoriya), ehtimal olunan patogenlik (IV kateqoriya) V).VarSome həmçinin mutasiyaların zülal strukturu və funksiyasına təsirini, 30 verilənlər bazasına çıxışı olan informativ aləti təhlil edib.32
Hər bir VUS-a potensial klinik əhəmiyyət təyin etmək üçün aşağıdakı hesablama zülal proqnozlaşdırma alqoritmlərindən istifadə edilmişdir: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph-DVG) və Align-DG (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). 1 və 2-ci sinif kimi təsnif edilən variantlar vəhşi tip hesab olunurdu.
Sanger ardıcıllığı hər bir patogen variantın mövcudluğunu təsdiqlədi. Qısaca olaraq, BRCA1 və BRCA2 gen istinad ardıcıllığından (NG_005905.2, NM_007294.3 və NG_012772.3, NM9.030-a uyğun olaraq hədəf alındı, PC5-ə uyğun olaraq) istifadə edilməklə, aşkar edilmiş hər bir variant üçün bir cüt xüsusi primerlər işlənib hazırlanmışdır. yerinə yetirildi, sonra Sanger ardıcıllığı.
BRCA1/2 geni üçün mənfi test edən xəstələr, istehsalçının göstərişlərinə uyğun olaraq, böyük genomik rearrangementlərin (LGR) mövcudluğunu qiymətləndirmək üçün multipleks liqasiyadan asılı zond gücləndirilməsi (MLPA) ilə sınaqdan keçirilmişdir. Qısaca olaraq, DNT nümunələri denatürasiya olunur və 60-a qədər BRCA1 və BRCA2 geninin təqribən hər birində spesifik DNA60 aşkarlanması üçün istifadə olunur. uzunluqdakı nukleotidlər. Unikal PCR amplikon dəstindən ibarət olan zond gücləndirmə məhsulları daha sonra kapilyar elektroforez və Cofalyser.Net proqramı ilə müvafiq partiyaya aid Cofalyser cədvəlləri (www.mrcholland.com) ilə birlikdə təhlil edilmişdir.
Seçilmiş klinikopatoloji dəyişənlər (histoloji dərəcə və Ki-67% proliferasiya indeksi) BRCA1/2 PV-nin mövcudluğu ilə əlaqələndirilmişdir, Prism proqram təminatı v. 8.4-dən istifadə etməklə hesablanmış, Fisherin dəqiq testindən istifadə edərək p-dəyərinin <0.05 əhəmiyyətli olduğunu fərz etməklə hesablanmışdır.
2017-ci ilin yanvarından 2021-ci ilin martına qədər 455 xəstə rüşeym xətti BRCA1/2 mutasiyaları üçün yoxlanılıb. Mutasiya testi Policlinico Xəstəxanasının Eksperimental Onkologiya və Hematologiya Mərkəzində aparılıb. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), Catania Rodolico – San Marco” ümumi, 389 xəstə Döş xərçəngi, 37 yumurtalıq xərçəngi, 16 mədəaltı vəzi xərçəngi, 8 prostat xərçəngi və 5 melanoma.Xəstələrin xərçəng növünə görə bölgüsü və analiz nəticələri Şəkil 1-də göstərilmişdir.
Şəkil 1 tədqiqatın icmalını göstərən axın cədvəlini göstərir. Döş, melanoma, mədəaltı vəzi, prostat və ya yumurtalıq şişləri olan xəstələr BRCA1 və BRCA2 genlərində mutasiyalar üçün sınaqdan keçirilmişdir.
İxtisarlar: PVs, patogen variant; VUS, qeyri-müəyyən əhəmiyyətin variantı; WT, vəhşi tipli BRCA1/2 ardıcıllığı.
Biz tədqiqatlarımızı seçmə şəkildə döş xərçəngi kohortlarına yönəltdik. Xəstələrin orta yaşı 49 (aralıq 23-89) idi və əsasən qadınlar (n=376 və ya 97%) idi.
Bu subyektlərdən 64-ü (17%) BRCA1/2 mutasiyasına malik idi və hamısı qadın idi. Otuz beşində (9%) PV, 29-da (7.5%) isə VUS var. 35 patogen variantdan on yeddisi (48.6%) BRCA1-də, 18-i (51.4%) BRCA2-də, 52-si isə BRCA2-də (52-də) baş verib. BRCA2-də (82,8%) (Şəkil 1 və 2). LGR MLPA analizində mövcud deyildi.
Şəkil 2. 389 döş xərçəngi xəstəsində BRCA1 və BRCA2 mutasiyalarının təhlili.(A) 389 süd vəzi xərçəngi xəstəsində patogen variantların (PV) (qırmızı), qeyri-müəyyən əhəmiyyətə malik variantların (VUS) (narıncı) və WT (mavi) paylanması; (B) 389 döş xərçəngi xəstəsi Otuz beşində (9%) BRCA1/2 patogen variantları (PV) var idi. Onların 17-si (48.6%) BRCA1 PV daşıyıcısı (tünd qırmızı) və 18-i (51.4%) BRCA2 daşıyıcısı (açıq qırmızı) idi; (C) 389 subyektdən 29-u (7.5%) VUS, 5-i (17.2%) BRCA1 geni (tünd narıncı) və 24-ü (82.8%) BRCA2 geni (açıq narıncı) daşımışdır.
İxtisarlar: PVs, patogen variant; VUS, qeyri-müəyyən əhəmiyyətin variantı; WT, vəhşi tipli BRCA1/2 ardıcıllığı.
Biz daha sonra BRCA1/2 PV olan xəstələrdə BC molekulyar alt tiplərinin yayılmasını araşdırdıq. Paylanmaya 2 (5,7%) luminal A, 15 (42,9%) luminal B, 3 (8,6%) luminal B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ və 13 (37%) HER2+ və 13 (37%) TAA11g lüminal daxildir. xəstələrin 5-də (29.4%) luminal B BC, 2-də (11.8%) HER2+ xəstəliyi, 10-da (58.8%) TNBC var idi. BRCA1 mutasiyaları olmayan şişlər ya luminal A, ya da luminal B-HER2+ idi (Şəkil 3). BRCA2-müsbət xəstələrdə B-10-altı beş şişlər (%3) idi. (16,7%) luminal B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC və 2 (11,1%) luminal A idi (Şəkil 3).
Şəkil 3 BRCA1 və BRCA2-də patogen variantları olan xəstələrdə döş xərçəngi alt növlərinin yayılması. Döş xərçəngi xəstələrinin molekulyar alt tipləri arasında BRCA1- (tünd qırmızı) və BRCA2- (açıq qırmızı) PV-lərin paylanmasını göstərən histoqramlar. Hər qutuda bildirilən rəqəmlər BRCA1 və BRCA2 alt tipləri üçün döş xərçəngi olan xəstələrin faizini təmsil edir.
İxtisarlar: PVs, patogen variant; HER2+, insan epidermal böyümə faktoru reseptoru 2 müsbət; TNBC, üçlü mənfi döş xərçəngi.
Sonradan biz BRCA1 və BRCA2 PV-lərin növünü və gen lokalizasiyasını qiymətləndirdik. BRCA1 PV-də biz 7 tək nukleotid variantı (SNV), 6 silinmə, 3 dublikasiya və 1 insertion müşahidə etdik. Yalnız bir mutasiya (c.5522delG) BRCA-da aşkar edilən yeni kəşfi təmsil edir. c.5035_5039delCTAAT.Bu dəyişiklik BRCA1 ekson 15-də beş nukleotidin (CTAAT) silinməsini əhatə edir, nəticədə amin turşusu leysini 1679-cu kodonda tirozinlə əvəz edir və translyasiya çərçivəsinin dəyişdirilməsi ilə əlaqədar olaraq proqnozlaşdırılan alternativ zülalın aşkarlanmasına gətirib çıxaran yalnız bir başqa dəyişiklikdir. Qeyd edək ki, bildirilmiş PV-lərdən biri birləşmə sahəsinin konsensus bölgəsində yerləşirdi (c.4357+1G>T) (Cədvəl 1).
BRCA2 PV ilə bağlı biz 6 delesiya, 6 SNV və 2 dublikasiya müşahidə etdik. Tapılan dəyişikliklərin heç biri yeni deyil. Populyasiyamızda üç mutasiya təkrarlandı, c.428dup və c.8487+1G>A, 3 subyektdə müşahidə edildi, sonra c.5851_5854delAG4-də iki dəfə təkrarlandı. BRCA2-nin 5-ci ekzonunda C təkrarını əhatə edir, kəsilmiş, qeyri-funksional zülalın kodlaşdırılması nəzərdə tutulur. C.8487+1G>A mutasiyası BRCA2 intron 19-un intronik bölgəsində baş verir (± 1,2) və splicing konsensus ardıcıllığına təsir edir, nəticədə anormal splicing və ya zülalın dəyişməsi ilə nəticələnir. c.5851_5854delAGTT patogen variantı BRCA2 geninin kodlaşdırma ekson 10-da 5851-dən 5854-ə qədər olan nukleotid mövqelərindən 4-nukleotidin silinməsi ilə əlaqədardır və proqnozlaşdırılan alternativ dayanma kodonu ilə translyasiya çərçivəsinin dəyişməsi ilə nəticələnir (s.S1951Wf, hər ikisi də əvvəlki kimi bildirilməyib). c.631G>A və c.7008-2A>T eyni xəstədə aşkar edilmişdir.34 Birinci mutasiya BRCA2 ekson 7-də adenozinin (A) guanin (G) tərkibli nukleotidlə əvəzlənməsini əhatə edir və nəticədə valinin kodon 211-də izolösinlə dəyişməsi, izolösin turşusu ilə izolösin turşusuna yüksək dərəcədə təsir göstərir. mRNA birləşməsi. İkinci variant intronik bölgədə yerləşir və BRCA2-ni kodlayan genin 13-cü eksonundan əvvəl ikiqat A-nın timin (T) əvəzlənməsi ilə nəticələnir. Bu c.7008-2A>T dəyişikliyi müxtəlif uzunluqda çoxlu transkript yarada bilər. Bundan başqa, BRCA2 qrupunda PV-lərdən 2%, 184-də dəyişikliklər olmuşdur.
Daha sonra funksional domenlərdə və zülal bağlayan bölgələrdə BRCA1/2 zərərli mutasiyaların xəritəsini çəkdik (Şəkil 4). BRCA1 genində PV-lərin 50%-i döş xərçəngi klaster bölgəsində (BCCR), mutasiyaların 22%-i isə yumurtalıq xərçəngi klaster bölgəsində (OCCR) yerləşirdi (Şəkil 42. PVBR3-ün variantı). BCCR bölgəsində yerləşir və mutasiyaların 42,8%-i OCCR-də yerləşmişdir (Şəkil. 4B). Sonra, biz BRCA1 və BRCA2 zülal domenləri daxilində PV-nin yerini qiymətləndirdik. BRCA1 zülalı üçün biz döngə və qıvrımlı rulon domenlərində üç PV və BRCT domenində iki mutasiya tapdıq. BRC təkrar domeninə uyğunlaşdırıldı, oliqo/oliqosaxarid bağlayan (OB) və qala (T) domenlərində 3 intronik və 3 ekzonik dəyişiklik aşkar edildi (Şəkil 4B).
Şəkil 4 BRCA1 və BRCA2 zülallarının sxematik təsviri və patogen variantların lokalizasiyası. Bu rəqəm süd vəzisi xərçəngi xəstələrində BRCA1 (A) və BRCA2 (B) patogen variantlarının paylanmasını göstərir. Ekzonik mutasiyalar mavi, intronik variantlar isə narıncı rəngdə göstərilmişdir. Çubuğun hündürlüyü halların sayını və onların BRCA2 funksiyasını təmsil edir. BRCA1 zülalı bir döngə domeni (RING) və nüvə lokalizasiya ardıcıllığı (NLS), qıvrımlı domen, SQ/TQ klaster domeni (SCD) və BRCA1 C-terminal domeni (BRCT) ehtiva edir. (B) BRCA2 zülalında səkkiz BRC təkrarı, DNT-ni bağlayan domen (H helikli üç domen) var. oliqonukleotid/oliqosaxarid bağlayan (OB) qatlar, qüllə sahəsi (T) və C tərəfində NLS. Aşağıda Döş Xərçəngi Klaster Regionu (BCCR) və Yumurtalıq Xərçəngi Bölgəsi (OCCR) adlanan ərazilər göstərilir.*Stop kodonlarını təyin edən mutasiyaları təmsil edir.
Daha sonra BRCA1/2 PV-nin mövcudluğu ilə əlaqələndirilə bilən BC klinikopatoloji xüsusiyyətlərini araşdırdıq. 181 BRCA1/2-mənfi xəstə (daşıyıcı olmayan) və bütün daşıyıcı (n = 35) üçün tam klinik qeydlər mövcud idi. Şişin yayılma sürəti və dərəcəsi arasında korrelyasiya var idi.
Biz Ki-67-nin paylanmasını kohortumuzun mediana əsasən hesabladıq (25%, diapazon <10-90%). Ki-67 <25% olan subyektlər “aşağı Ki-67” olaraq təyin olundu, ≥ 25% dəyərə malik şəxslər isə “yüksək Ki-67” hesab edildi. BRCA1 PV daşıyıcıları (Şəkil 5A).
Şəkil 5 BRCA1 və BRCA2 PV-ləri olan və olmayan döş xərçəngi olan qadınlarda dərəcə paylanması ilə Ki-67-nin korrelyasiyası. (A) BRCA1 (18) və ya BRCA2 (17) PV xəstəsinə qarşı 181 daşıyıcı olmayan BC xəstəsində median Ki-67 dəyərlərini göstərən qutu grafiği. BC xərçəng xəstələri BRCA1 və BRCA2 mutasiya vəziyyətinə (WT subyektləri, BRCA1 və BRCA2 PV daşıyıcıları) görə histoloji dərəcə qruplarına (G2 və G3) bölünür.
Eyni şəkildə, biz şiş dərəcəsinin BRCA1/2 PV-nin olması ilə korrelyasiya olub-olmadığını araşdırdıq. G1 BC populyasiyamızda olmadığı üçün xəstələri iki qrupa (G2 və ya G3) ayırdıq. Ki-67 nəticələrinə uyğun olaraq, analiz şiş dərəcəsi ilə BRCA1 proportlu GBR1 mutasiyasının yüksək olması arasında statistik əhəmiyyətli korrelyasiya aşkarladı. daşıyıcı olmayanlarla müqayisədə (p<0.005) (Şəkil 5B).
DNT sıralama texnologiyasındakı irəliləyişlər BRCA1/2 genetik testlərində görünməmiş irəliləyişlərə imkan verdi və bu, ailədə xərçəng tarixi olan xəstələr üçün mühüm nəticələrə səbəb oldu. Bu günə qədər təxminən 20.000 BRCA1/2 variantı müəyyən edilmiş və Amerika Tibbi Genetika Cəmiyyəti 35 və EN5CA3BR sisteminə uyğun olaraq təsnif edilmişdir. mutasiya spektri coğrafi bölgələr arasında geniş şəkildə dəyişir.37 İtaliya daxilində BRCA1/2 PV-lərin nisbəti geniş ölkədaxili dəyişkənlik nümayiş etdirərək 8%-dən 37%-ə qədər dəyişdi.38,39 Demək olar ki, 5 milyon əhalisi olan Siciliya sakinlərin sayına görə İtaliyada beşinci ən böyük bölgədir. adanın şərq hissəsində geniş dəlil yoxdur.
Tədqiqatımız Siciliyanın şərqində BC xəstələrində BRCA1/2 PV tezliyi ilə bağlı ilk hesabatlardan biridir.28 Biz təhlilimizi BC-yə yönəltdik, çünki bu, bizim kohortumuzda ən çox yayılmış xəstəlikdir.
Eramızdan əvvəl 389 xəstəni sınaqdan keçirərkən, 9% BRCA1 və BRCA2 arasında bərabər paylanmış BRCA1/2 PV-ləri daşıdı. Bu nəticələr İtaliya populyasiyasında əvvəllər bildirilənlərə uyğundur.28 Maraqlıdır ki, kohortumuzun 3%-i (13/389) kişi idi. Bu nisbət bizim kişi seçimimizə əsaslanan döş xərçəngi növlərinə (%1) görə gözləniləndən daha yüksəkdir (1) BRCA1/2 mutasiya riski. Bununla belə, bu kişilərin heç biri BRCA1/2 PV inkişaf etdirmədi, ona görə də başqaları arasında PALB2, RAD51C və D kimi daha az rast gəlinən mutasiyaların mövcudluğunu istisna etmək üçün əlavə molekulyar analiz üçün namizəd oldular. Bu nəticədə BRCA2E-nin aşkar olduğu subyektlərin 7%-də qeyri-müəyyən əhəmiyyətə malik variantlar əldə edildi. sübut.28,41,42
BRCA1/2 mutant qadınlarda BC molekulyar alt tiplərinin paylanmasını təhlil etdiyimiz zaman biz TNBC və BRCA1 PV (58,8%) və luminal B BC və BRCA2 PV (55,6%) arasında məlum assosiasiyaları təsdiqlədik. məlumat.16,43
Biz daha sonra BRCA1/2 PV-nin növünə və yerinə diqqət yetiririk. Bizim kohortumuzda ən çox yayılmış BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT idi. Baxmayaraq ki, Incorvaia et al. Siciliya kohortunda bu variantı təsvir etməyiblər, digər müəlliflər onu rüşeym xətti BRCA1 PV kimi bildirmişlər.34 Bizim kohortda bir neçə BRCA1 PV aşkar edilmişdir – məsələn, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA və c.5266dupC – bunlar SBR28-də iki mutasiya aşkar edilmişdir. (c.181T>G və c.5266dupC) adətən Şərqi və Mərkəzi Avropanın Aşkenazi yəhudilərində (Polşa, Çexiya), Sloveniya, Avstriya, Macarıstan, Belarusiya və Alman ), 44,45 və ABŞ və Argentinada bu yaxınlarda “təkrarlanan cücərmə xətti variantı” kimi müəyyən edilmişdir və İtaliyada BC43 variantı OC1 idi. əvvəl Palermo və Messina şimal Siciliya 8 döş xərçəngi xəstələrdə müəyyən edilmişdir. Maraqlıdır, hətta Incorvaia et al. Kataniyadakı bəzi ailələrdə c.3253dupA variantını tapdı.28 Ən çox təmsil olunan BRCA2 PV-lər c.428dup, c.5851_5854delAGTT və intronik variant c.8487+1G>A-dır ki, onlar Palermoda c.425845du c.5TT1delp olan bir xəstədə daha ətraflı məlumat verilmişdir. Siciliyanın şimal-qərbindəki ev təsərrüfatlarında, əsasən Trapani və Palermo bölgələrində müşahidə olundu, halbuki c.5851_5854delAGTT PV Siciliyanın şimal-qərbindəki ev təsərrüfatlarında müşahidə edildi. 8487+1G>A variantı Messina, Palermo və Kaltanissetta et al.28 subyektlərində daha çox yayılmışdı. daha əvvəl Kolumbiyada c.5851_5854delAGTT dəyişikliyini təsvir etmişdi.37 Başqa bir BRCA2 PV, c.631+1G>A, Siciliyadan (Agrigento, Siracusa və Ragusa) BC və OC xəstələrində aşkar edilmişdir.28 Qeyd etmək lazımdır ki, biz iki BRCA2 c.3A variantının (BRCA2 c.36) birgə mövcudluğunu müşahidə etdik. c.7008-2A>T) cis rejimində ayrıldığını güman etdiyimiz eyni xəstədə.34,46 Bu BRCA2 uble mutasiyaları həqiqətən də İtaliya bölgəsində tez-tez müşahidə olunur və messenger RNT-nin birləşdirilməsinə təsir edən və zülalın uğursuzluğuna səbəb olan vaxtından əvvəl dayandırma kodonlarını təqdim etdiyi aşkar edilmişdir847.
Biz həmçinin zülal domenlərinin və genlərinin ehtimal olunan OCCR və BCCR bölgələrində BRCA1 və BRCA2 PV-lərinin xəritəsini çəkdik. Bu bölgələr Rebbeck və digərləri tərəfindən təsvir edilmişdir. müvafiq olaraq yumurtalıq və döş xərçəngi inkişafı üçün risk sahələri kimi.49 Bununla belə, cücərmə xətti variantlarının yeri ilə döş və ya yumurtalıq xərçəngi riski arasındakı əlaqə ilə bağlı sübutlar mübahisəli olaraq qalır.28,50-52 Bizim əhalimizdə BRCA1 PV-lər əsasən BCCR bölgəsində, biz isə BRCA2-dən əvvəlki PVX bölgəsində yerləşirdik. ehtimal olunan OCCR və BCCR bölgələri ilə BC xüsusiyyətləri arasında heç bir əlaqə tapa bilmir. Bu, BRCA1/2 mutasiyaları olan xəstələrin məhdud sayı ilə əlaqədar ola bilər. Protein sahəsi baxımından, BRCA1 PV-ləri bütün protein boyunca paylanır və BRCA2 dəyişiklikləri BRC təkrar domenində üstünlük təşkil edir.
Nəhayət, biz BC klinikopatoloji xüsusiyyətlərini BRCA1/2 PV ilə əlaqələndirdik. Daxil olan xəstələrin məhdud sayına görə biz yalnız Ki-67 ilə şiş dərəcəsi arasında əhəmiyyətli korrelyasiya tapdıq. Ki-67-nin qiymətləndirilməsi və şərhi bir qədər mübahisəli olsa da, yüksək proliferativ nisbətlərin xəstəliyin təkrarlanma riskinin artması və azalma tarixi ilə əlaqəli olduğu şübhəsizdir. “yüksək” və “aşağı” Ki-67 arasında fərq 20% təşkil edir. Bununla belə, bu həddi Ki-67-nin median dəyəri 25% olan BRCA1/2 mutasiya xəstəsi populyasiyamıza şamil edilmir. Ki-67-nin yüksək dərəcələrindəki bu tendensiya bizim luminal B və TNBCH-nin mövcudluğu ilə izah edilə bilər. bəzi sübutlar göstərir ki, daha yüksək Ki-67 kəsimi (25-30%) xəstələri proqnozlarına görə daha yaxşı təbəqələşdirə bilər.53,54 Analizimizin nəticələrinə görə, əhəmiyyətli korrelyasiya təəccüblü deyil. Yüksək Ki-67 və dərəcələri və BRCA1 PV-nin mövcudluğu arasında baş verir. Əslində, BRCA1 ilə əlaqəli daha çox şiş və TNBC-nin təzahürüdür. xüsusiyyətləri.16,17
Nəticə olaraq, bu tədqiqat Siciliyanın şərqindən BC kohortunda BRCA1/2-nin mutasiya statusu haqqında hesabat təqdim edir. Ümumilikdə, tapıntılarımız həm mutasiyaların yayılması, həm də BC-də klinikopatoloji xüsusiyyətlər baxımından əvvəlcədən mövcud sübutlarla uyğundur. BRCA1/2-mutant BCgen analizindən istifadə etməklə, multipl mutasiyaya məruz qalmış BCgen analizindən istifadə etməklə daha geniş tədqiqatlar aparılmışdır. BRCA1/2-dən fərqli və daha az tez-tez olan PV-lərin olması. Bu, genetik mutasiyalar səbəbindən artan xərçəng riski altında olan subyektlərin sayını müəyyən etməyə və düzgün idarə etməyə imkan verəcəkdir.
Biz xəstələrin tədqiqat məqsədləri üçün şiş nümunələrinin anonim şəkildə buraxılması üçün məlumatlı razılıq imzaladığını təsdiqlədik. Bütün xəstələr Helsinki Bəyannaməsinə uyğun olaraq yazılı məlumatlı razılıq imzaladılar. AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco” siyasətinə əsasən, bu tədqiqat etik baxışdan azad edildi, çünki bütün xəstələrə BRCA12 uyğun olaraq məlumat verilmiş və təhlillər yazılı şəkildə verilmişdir. razılıq. Pasientlər də öz məlumatlarının tədqiqat məqsədləri üçün istifadəsinə razılıq verirlər.
Prof. Paolo Viqneriyə Etika Komitəsinin tələbi ilə döş xərçəngi xəstələrinin qayğısına qaldığı üçün təşəkkür edirik.
Federica Martorana, Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer şirkətlərindən qonorar haqqında məlumat verir. Digər müəlliflər bu işdə maraqların toqquşmasını bəyan etmirlər.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Qlobal Xərçəng Statistikası 2020: GLOBOCAN dünyanın 185 ölkəsində 36 xərçəng xəstəliyinin tezliyini və ölümünü təxmin edir. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.ca3632: