Tha Javascript à comas sa bhrobhsair agad an-dràsta. Cha bhith cuid de fheartan na làraich-lìn seo ag obair nuair a bhios javascript à comas.
Clàraich leis na mion-fhiosrachadh sònraichte agad agus an droga sònraichte anns a bheil ùidh agad agus cuiridh sinn am fiosrachadh a bheir thu seachad còmhla ri artaigilean san stòr-dàta fharsaing againn agus cuiridh sinn leth-bhreac PDF thugad sa bhad.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Experimental Roinn an Leigheis, 7 Oilthigh Clinical Livia, 7, 7, 7, 7, 1, 1, 1, 1, 12 Catania, Catania, 95123, an Eadailt; 2 Ionad airson Oncology Deuchainneach agus Hematology, AOU Policlinico “G.Rodolico - San Marco”, Catania , 95123, an Eadailt; 3 Oncology Meidigeach, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, an Eadailt; 4 Gintinneachd Leigheil, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, an Eadailt; 5 Gintinneachd Leigheas, ASP, Syracuse, 96100, an Eadailt; 6 Roinn nan Saidheansan Bith-mheidigeach agus Bith-theicneòlais, Oilthigh Catania, Gintinneachd Mheidigeach, Catania, an Eadailt, 95123; 7 Institiud Rannsachaidh Oasi-IRCCS, Troina, 94018, an Eadailt Conaltradh: Stefania Stella, fòn +39 095 378 1946, post-d [email protected]; [email protected] Adhbhar: Mùthaidhean loidhne-ghine ann am BRCA1 agus BRCA2 agus aillse broilleach (BC) stèidhichte, ubhagán (OC) agus feadhainn eile co-cheangailte ri cunnart aillse fad-beatha. Tha deuchainnean airson a’ ghine BRCA deatamach ann a bhith a’ measadh cunnart fa leth, a bharrachd air a bhith a’ lorg dhòighean casg ann an luchd-giùlain fallain agus a’ dèanamh leigheasan freagarrach ann an euslaintich aillse. Tha tricead atharrachaidhean BRCA1 agus BRCA2 ag atharrachadh gu farsaing thar roinnean cruinn-eòlasach, agus ged a tha dàta ann mu atharrachaidhean pathogenic BRCA ann an teaghlaichean Sicilian, chan eil sgrùdaidhean a tha ag amas gu sònraichte air sluagh ann an ear Shisilia gainnead. B’ e amas an sgrùdaidh againn sgrùdadh a dhèanamh air tricead agus sgaoileadh atharrachaidhean loidhne-ghine pathogenic BRCA ann an cohort de dh’euslaintich BC à ear Shisilia agus measadh a dhèanamh air an ceangal ri feartan BC sònraichte a’ cleachdadh sreath an ath ghinealaich. Làthaireachd atharrachaidhean co-cheangailte ri ìre tumhair agus clàr-amais iomadachaidh. TORAIDHEAN: Gu h-iomlan, bha caochladh pathogenic BRCA aig 35 euslaintich (9%), 17 (49%) ann am BRCA1 agus 18 (51%) ann am BRCA2. Tha atharrachaidhean BRCA1 cumanta ann an euslaintich BC trì-àicheil, ach tha mùthaidhean BRCA2 nas cumanta ann an euslaintich BC luminal. An coimeas ri Neo-ghiùlain, bha ìre tumhair agus clàr-amais iomadachaidh gu math nas àirde aig cuspairean le atharrachaidhean BRCA1. Co-dhùnaidhean: Tha na co-dhùnaidhean againn a’ toirt sealladh farsaing air inbhe mùthaidh BRCA ann an euslaintich BC à taobh an ear Shìcilia agus a’ dearbhadh àite mion-sgrùdadh NGS ann a bhith a’ comharrachadh euslaintich le BC oighreachail. Gu h-iomlan, tha an dàta seo a rèir fianais a bh’ ann roimhe a’ toirt taic do sgrìonadh BRCA airson casg agus làimhseachadh ceart aillse ann an luchd-giùlan mùthaidh.
’S e aillse broilleach (BC) an aillse as cumanta air feadh an t-saoghail agus an aillse as marbhtaiche ann am boireannaich.1 Chaidh na feartan bith-eòlasach a tha a’ dearbhadh prognosis agus giùlan clionaigeach BC a sgrùdadh gu mionaideach agus a shoilleireachadh gu ìre thar ùine. Gu dearbh, thathas a’ cleachdadh grunn chomharran ionaid an-dràsta gus BC a sheòrsachadh ann an diofar fho-sheòrsan moileciuil. Is iad sin gabhadair estrogen (ER) agus/no progesterone (PgR), iomadachadh gabhadair factar fàis epidermal daonna 2 (HER2), clàr-amais iomadachaidh Ki-67 agus ìre tumhair (G).2 Chomharraich measgachadh nan caochladairean sin na roinnean BC a leanas: 1) Bha tumhairean luminal, a’ sealltainn abairt ER agus/no PgR, a’ dèanamh suas 75% de BCn. Chaidh na tumhairean sin a roinn tuilleadh ann an Luminal A, nuair a bha Ki-67 fo 20% agus HER2 àicheil, agus Luminal B, nuair a bha Ki-67 co-ionann ri no os cionn 20% agus ann an làthaireachd iomadachaidh HER2, ge bith dè an clàr-amais iomadachaidh; 2) Tumhairean HER2+ a tha ER agus PgR àicheil ach a tha a’ sealltainn leudachadh HER2. Tha a’ bhuidheann seo a’ dèanamh suas 10% de na tumhairean broilleach uile; 3) Tha aillse broilleach trì-àicheil (TNBC), nach eil a’ sealltainn abairt ER agus PgR agus leudachadh HER2, a’ dèanamh suas mu 15% de aillsean broilleach.2-4
Am measg nan fo-sheòrsan BC seo, tha ìre tumhair agus clàr-amais iomadachaidh a’ riochdachadh comharran bith-eòlasach thar-roinneil a tha ceangailte gu dìreach agus gu neo-eisimeileach ri ionnsaigheachd agus prognosis tumhair.5,6
A bharrachd air na feartan bith-eòlasach a chaidh ainmeachadh, tha àite atharrachaidhean ginteil oighreachail a tha a’ leantainn gu leasachadh BC air a bhith a’ sìor fhàs cudromach thar nam beagan bhliadhnaichean a dh’ fhalbh.7 Tha timcheall air 1 às gach 10 tumhair broilleach air an oighreachdadh mar thoradh air atharrachaidhean loidhne-germ ann an ginean sònraichte.8 Tha dà sgrùdadh epidemio-eòlach mòr anns an robh còrr air 180,000 boireannach air buidheann de ochd ginean a chomharrachadh o chionn ghoirid (ie, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, agus RAD51D) a tha gu sònraichte an urra ri BC oighreachail. Am measg nan ginean sin, sheall BRCA1 agus BRCA2 (ris an canar BRCA1/2 an-seo) an ceangal as làidire ri leasachadh tumhair broilleach.9-12 Gu dearbh, bidh mùthaidhean loidhne-germ BRCA1/2 ag àrdachadh gu mòr cunnart BC fad-beatha a bharrachd air aillsean eile, a’ gabhail a-steach ovarian, prostate, pancreatic, colorectal, agus melanoma. Bho aois 13 gu 80 bliadhna, tha an tricead cruinnichte de BC 72% ann am boireannaich le caochladh pathogenic BRCA1 (PV) agus 69% ann am boireannaich le BRCA2 PV.14
Gu sònraichte, tha foillseachadh o chionn ghoirid a’ moladh gu bheil cunnart BC an urra ris an t-seòrsa PV. Gu dearbh, an taca ri atharrachaidhean gearraidh pathogenic, tha atharrachaidhean follaiseach missense, gu sònraichte anns a’ ghine BRCA1, co-cheangailte ri cunnart nas lugha de BC, gu sònraichte ann am boireannaich nas sine.15
Bha làthaireachd BRCA1 no BRCA2 PV co-cheangailte ri diofar fheartan bith-eòlasach agus clionaigeach-pathologach.16,17 Mar as trice bidh BCan co-cheangailte ri BRCA1 ionnsaigheach gu clionaigeach, air an eadar-dhealachadh gu dona, agus gu math iomadachail. Mar as trice bidh na tumhair sin trì-fhillte àicheil agus bidh aois thràth aca airson tòiseachadh. Mar as trice bidh ìrean meadhanach gu math eadar-dhealaichte agus clàran-amais iomadachaidh caochlaideach aig tumhair a tha a’ tachairt ann an euslaintich le mùthaidhean BRCA2. Tha na tumhair sin nas cumanta ann an lumen B agus mar as trice bidh iad a’ tachairt ann an inbhich nas sine.16-18 Gu sònraichte, bidh mùthaidhean ann am BRCA1 agus BRCA2 ag àrdachadh cugallachd ri leigheasan sònraichte, a’ gabhail a-steach salainn platanam agus drogaichean targaideach leithid luchd-bacadh polymerase poly(ADP-ribose) (PARPi).19,20
Thar nam beagan bhliadhnaichean a dh’fhalbh, tha cur an gnìomh sreath-ghinealach an ath ghinealaich (NGS) ann an cleachdadh clionaigeach air leigeil le àireamh a tha a’ sìor fhàs de dh’euslaintich BC deuchainnean moileciuil fhaighinn airson sionndroman so-leòntachd aillse, a’ gabhail a-steach BRCA1/2.21 Aig an aon àm, mìneachaidhean stèidhichte air slatan-tomhais mionaideach a thaobh eachdraidh teaghlaich, feartan deamografach agus clionaigeach-pathologach gus daoine fa leth a tha airidh air deuchainn BRCA1/2 a chomharrachadh nas fheàrr.22,23 Anns a’ cho-theacsa seo, tha fianais a’ cruinneachadh air sgrìonadh BRCA1/2 ann an sluagh sònraichte, a’ soilleireachadh eadar-dhealachaidhean thar roinnean cruinn-eòlasach.24–27 Ged a tha aithisgean ann air a’ chohort BC ann an iar-dheas Shìcilia, tha nas lugha de dhàta ri fhaighinn air sgrìonadh BRCA1/2 ann an sluagh ear-dheas Shìcilia.28,29
Tha sinn a’ toirt cunntas an seo air toraidhean sgrìonadh loidhne-germ BRCA1/2 ann an euslaintich BC à taobh an ear Shìcilia, a’ ceangal tuilleadh eadar làthaireachd mùthaidhean BRCA1 no BRCA2 agus prìomh fheartan clionaigeach-pathologach nan tumhair sin.
Chaidh sgrùdadh ath-shealladh a dhèanamh aig an “Ionad airson Oncology Deuchainneach agus Hematology” aig Ospadal Policlinico.Rodolico – San Marco ann an Catania. Bho Fhaoilleach 2017 gu Màrt 2021, chaidh 455 euslaintich le aillse broilleach is ovarian, melanoma, pancreatic no prostate a chur chun obair-lann breithneachaidh moileciuil againn airson deuchainnean ginteil BRCA/2. Chaidh an sgrùdadh seo a dhèanamh a rèir Dearbhadh Helsinki, agus thug a h-uile com-pàirtiche cead fiosraichte sgrìobhte mus deach an sgrùdadh moileciuil a dhèanamh.
Chaidh feartan histologach is bith-eòlasach (ER, PgR, inbhe HER2, Ki-67, agus ìre) de BC a mheasadh air biopsy cridhe no sampallan lannsaichte, a’ beachdachadh air co-phàirtean tumhair ionnsaigheach a-mhàin. Stèidhichte air na feartan sin, chaidh BCn a sheòrsachadh mar a leanas: luminal A (ER+ agus/no PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ agus/no PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER agus/no PgR+, HER2+), HER2+ (ER agus PgR-, HER2+) no trì-fhillte àicheil (ER agus PgR-, HER2-).
Mus deach measadh a dhèanamh air inbhe mùthaidh BRCA1 agus BRCA2, rinn sgioba ioma-chuspaireil anns an robh onco-eòlaiche, gine-eòlaiche, agus eòlaiche-inntinn co-chomhairle ginteil tumhair airson gach euslainteach gus làthaireachd BRCA1 agus/no BRCA1 a dhearbhadh, no daoine le cunnart àrd bho PV anns a’ ghine BRCA2. Chaidh taghadh euslaintich a dhèanamh a rèir stiùiridhean Comann Onco-eòlais Meidigeach na h-Eadailt (AIOM) agus molaidhean ionadail Sicilian.30,31 Tha na slatan-tomhais seo a’ toirt a-steach: (i) eachdraidh teaghlaich de atharrachaidhean pathogenic aithnichte ann an ginean so-leòntachd (me, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) fireannaich le BC; (iii) an fheadhainn le BC agus OC; (iv) boireannaich le BC <36 bliadhna, TNBC <60 bliadhna, no BC dà-thaobhach <50 bliadhna; (v) eachdraidh mheidigeach pearsanta de BC <50 bliadhna agus co-dhiù aon chàirdean den chiad ìre: (a) BC < 50 bliadhna; (b) OC neo-mhucinous agus neo-chrìochnach de aois sam bith; (c) BC dà-thaobhach; (d) BC fireann; (e) aillse pancreatic; (f) aillse prostate; (vi) dà no barrachd Eachdraidh phearsanta de BC > 50 bliadhna agus eachdraidh teaghlaich de BC, OC, no aillse pancreatic airson càirdean a tha nan càirdean den chiad ìre dha chèile (a’ gabhail a-steach càirdean leis a bheil i nan càirdean den chiad ìre); (vii) Eachdraidh phearsanta OC agus co-dhiù aon chàirdean den chiad ìre: (a) BC <50 bliadhna; (b) NOC; (c) BC dà-thaobhach; (d) BC fireann; (vii) boireannach le OC serous àrd-ìre.
Chaidh sampall fala imeallach 20 mL fhaighinn bho gach euslainteach agus a chruinneachadh ann an tiùban EDTA (BD Biosciences). Chaidh DNA genomic a sgaradh bho shamhlaichean fala slàn 0.7 mL a’ cleachdadh Kit Iomallach QIAsymphony DSP DNA Midi (QIAGEN, Hilden, an Eadailt) a rèir stiùiridhean an neach-dèanamh agus a chur tro Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Dèan tomhas. Tha beairteachadh targaid agus ullachadh leabharlainn air an dèanamh leis an Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, deiseil airson an luchdachadh a-steach don Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit airson ullachadh leabharlainn fèin-ghluasadach a rèir stiùiridhean an neach-dèanamh. Tha an inneal air a dhèanamh suas de dhà amar primer PCR ioma-fhillte a ghabhas cleachdadh gus sgrùdadh a dhèanamh air a h-uile gine BRCA1 (NM_007300.3) agus BRCA2 (NM_000059.3). Gu h-aithghearr, chaidh 15 µL de gach DNA sampall caolaichte (10 ng) a chur ri truinnsearan còd-barra airson ullachadh leabharlainn agus chaidh a h-uile ath-bheachdan agus stuthan consumichte a luchdachadh air ionnstramaid Ion Chef™. Chaidh ullachadh leabharlainn fèin-ghluasadach agus cruinneachadh leabharlainn sampall còd-barra an uairsin a dhèanamh air ionnstramaid Ion Chef™. Chaidh an àireamh de leabharlannan ullaichte an uairsin a mheasadh le Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) a rèir stiùiridhean an neach-dèanamh. Mu dheireadh, tha leabharlannan air an cur còmhla ann an co-mheasan co-ionann ann an tiùban sampall leabharlainn Ion Chef™ (còd-barra tiùban) agus air an luchdachadh air an inneal Ion Chef™. Rinneadh an t-sreathachadh le bhith a’ cleachdadh inneal Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) a’ cleachdadh Ion 510 Chip (Thermo Fisher Scientific). Rinneadh mion-sgrùdadh dàta le Amplicon Suite (SmartSeq srl) agus Ion Reporter Software.
Lean ainmean nan caochlaidhean uile stiùiridhean gnàthach Consortium Variation Genome Consortium, a tha rim faighinn air-loidhne (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Chaidh cudromachd clionaigeach nan caochlaidhean BRCA1/2 a mhìneachadh le bhith a’ cleachdadh seòrsachadh Consortium Eadar-nàiseanta ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) agus a’ co-chomhairleachadh diofar stòran-dàta leithid ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, agus UMD. Tha an seòrsachadh a’ toirt a-steach còig roinnean cunnairt sònraichte: neo-àbhaisteach (roinn I), dualtach neo-àbhaisteach (roinn II), caochlaideach de chudromachd neo-chinnteach (VUS, roinn III), dualtach pathogenic (roinn IV), agus pathogenic (roinn V). Rinn VarSome mion-sgrùdadh cuideachd air buaidh mùthaidhean air structar agus gnìomh pròtain, inneal fiosrachail le ruigsinneachd air 30 stòr-dàta.32
Gus cudromachd clionaigeach a dh’fhaodadh a bhith ann a shònrachadh do gach VUS, chaidh na h-algairim ro-innse pròtain coimpiutaireachd a leanas a chleachdadh: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) agus Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Chaidh beachdachadh air caochlaidhean a chaidh a sheòrsachadh mar chlas 1 agus 2 mar sheòrsa fiadhaich.
Dhearbh sreath-sgrùdadh Sanger gu robh gach caochladh pathogenic an làthair. Gu h-aithghearr, chaidh paidhir de phrìmearan sònraichte a dhealbhadh airson gach caochladh a chaidh a lorg le bhith a’ cleachdadh sreathan iomraidh gine BRCA1 agus BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 agus NG_012772.3, NM_000059.3, fa leth). Mar sin, chaidh PCR cuimsichte a dhèanamh agus an uairsin sreath-sgrùdadh Sanger.
Chaidh euslaintich a rinn deuchainn àicheil airson a’ ghine BRCA1/2 a dhearbhadh le bhith a’ cleachdadh ioma-fhillteachd ceangail-eisimeileach probe ioma-fhillte (MLPA) a rèir stiùiridhean an neach-dèanamh gus measadh a dhèanamh air làthaireachd ath-rèiteachaidhean genomic mòra (LGR). Gu h-aithghearr, tha sampallan DNA air an dì-nàdarrachadh agus tha suas ri 60 probe sònraichte don ghine BRCA1 agus BRCA2 air an cleachdadh, gach fear a’ lorg sreath DNA sònraichte timcheall air 60 niùclasaid a dh’fhaid. Chaidh toraidhean iomadachaidh probe, anns a bheil seata sònraichte de mhìneachaidhean PCR, an uairsin a sgrùdadh le electrophoresis capillary agus le bathar-bog Cofalyser.Net còmhla ris na clàran Cofalyser sònraichte don bhaidse iomchaidh (www.mrcholland.com).
Bha caochladairean clionaigeach-pathologach taghte (ìre histologach agus clàr-amais iomadachaidh Ki-67%) co-cheangailte ri làthaireachd BRCA1/2 PV, air a thomhas a’ cleachdadh bathar-bog Prism v. 8.4 a’ cleachdadh deuchainn mionaideach Fisher a’ gabhail ris gu robh luach-p <0.05 cudromach.
Eadar an Fhaoilleach 2017 agus am Màrt 2021, chaidh sgrìonadh a dhèanamh air 455 euslaintich airson mùthaidhean BRCA1/2 anns an loidhne-ghinealaich. Chaidh deuchainnean mùthaidh a dhèanamh aig Ionad Oncology Deuchainneach agus Hematology Ospadal Policlinico. A rèir an stiùireadh Sicilian (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), san fharsaingeachd, ann an Rodolico of Catania – San Marco, bha 389 euslaintich ann an aillse broilleach, 37 aillse ubhagach, 16 aillse pancreatic, 8 aillse prostate agus 5 melanoma. Tha sgaoileadh nan euslaintich a rèir seòrsa aillse agus toraidhean an anailis air a shealltainn ann am Figear 1.
Tha Figear 1 a’ sealltainn clàr-sruthadh a’ sealltainn sealladh farsaing air an sgrùdadh. Chaidh euslaintich le tumhair broilleach, melanoma, pancreatic, prostate, no ovarian a dhearbhadh airson mùthaidhean anns na ginean BRCA1 agus BRCA2.
Giorrachaidhean: PV, caochladh pathogenic; VUS, caochladh de chudromachd neo-chinnteach; WT, sreath BRCA1/2 fiadhaich.
Chuir sinn fòcas roghnach air na sgrùdaidhean againn air cohorts aillse broilleach. Bha aois mheadhanach nan euslaintich de 49 bliadhna (raon 23-89) agus b’ e boireannaich a’ mhòr-chuid dhiubh (n = 376, no 97%).
De na cuspairean seo, bha mùthaidhean BRCA1/2 aig 64 (17%) agus bha iad uile boireann. Bha PV aig trithead ’s a còig (9%) agus bha VUS aig 29 (7.5%). Thachair seachd-deug (48.6%) de na 35 atharrachaidhean pathogenic ann am BRCA1 agus 18 (51.4%) ann am BRCA2, agus thachair 5 VUS ann am BRCA1 (17.2%) agus 24 (82.8%) ann am BRCA2 (Figearan 1 agus 2). Cha robh LGR an làthair anns an anailis MLPA.
Figear 2. Mion-sgrùdadh air mùthaidhean BRCA1 agus BRCA2 ann an 389 euslaintich aillse broilleach. (A) Sgaoileadh atharrachaidhean pathogenic (PV) (dearg), atharrachaidhean de chudromachd neo-chinnteach (VUS) (orains), agus WT (gorm) ann an 389 euslaintich aillse broilleach; (B) 389 euslaintich aillse broilleach Bha atharrachaidhean pathogenic BRCA1/2 (PVn) aig trithead ’s a còig (9%). Nam measg, bha 17 (48.6%) nan luchd-giùlain BRCA1 PV (dearg dorcha) agus 18 (51.4%) nan luchd-giùlain BRCA2 (dearg aotrom); (C) Bha 29 (7.5%) de 389 cuspairean a’ giùlan VUS, 5 (17.2%) ginean BRCA1 (orains dorcha) agus 24 (82.8%) ginean BRCA2 (orains aotrom).
Giorrachaidhean: PV, caochladh pathogenic; VUS, caochladh de chudromachd neo-chinnteach; WT, sreath BRCA1/2 fiadhaich.
An ath rud, rinn sinn sgrùdadh air tricead fo-sheòrsachan moileciuil BC ann an euslaintich le BRCA1/2 PV. Bha an sgaoileadh a’ toirt a-steach 2 (5.7%) luminal A, 15 (42.9%) luminal B, 3 (8.6%) luminal B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ agus 13 (37.1%) euslaintich TNBC. Am measg euslaintich BRCA1-deimhinneach, bha luminal B BC aig 5 (29.4%), bha galar HER2+ aig 2 (11.8%), agus bha TNBC aig 10 (58.8%). Bha tumhair às aonais mùthaidhean BRCA1 an dàrna cuid luminal A no luminal B-HER2+ (Figear 3). Anns an fho-bhuidheann BRCA2-deimhinneach, bha 10 (55.6%) tumhair luminal B, 3 (16.7%) luminal B-HER2+, 3 (16.7%) TNBC agus 2 (11.1%) luminal A (Figear 3). Cha robh tumhair HER2+ an làthair sa bhuidheann seo. Mar sin, tha mùthaidhean BRCA1 cumanta ann an euslaintich TNBC, ach tha atharrachaidhean BRCA2 nas cumanta ann an daoine le lumen B.
Figear 3 Tricead fo-sheòrsachan aillse broilleach ann an euslaintich le atharrachaidhean pathogenic ann am BRCA1 agus BRCA2. Histograman a’ sealltainn sgaoileadh PV BRCA1- (dearg dorcha) agus BRCA2- (dearg aotrom) am measg fo-sheòrsachan moileciuil euslaintich aillse broilleach. Tha na h-àireamhan a chaidh aithris anns gach bogsa a’ riochdachadh ceudad nan euslaintich le PV BRCA1 agus BRCA2 airson gach fo-sheòrsa aillse broilleach.
Giorrachaidhean: PV, caochladh pathogenic; HER2+, gabhadair factar fàis epidermal daonna 2 deimhinneach; TNBC, aillse broilleach trì-àicheil.
Às dèidh sin, rinn sinn measadh air seòrsa agus suidheachadh gine PV BRCA1 agus BRCA2. Ann am BRCA1 PV, chunnaic sinn 7 atharrachaidhean niùclasaid singilte (SNVn), 6 sguabadh às, 3 dùblachadh agus 1 cuir a-steach. Chan eil ach aon mhùthadh (c.5522delG) a’ riochdachadh lorg ùr. B’ e c.5035_5039delCTAAT am PV BRCA1 as cumanta a chaidh a lorg anns an dà chuspair. Tha an t-atharrachadh seo a’ toirt a-steach sguabadh às còig niùclasaid (CTAAT) ann an exon 15 BRCA1, agus mar thoradh air sin chaidh an amino-aigéad leucine a chur an àite tyrosine aig codon 1679, agus mar thoradh air gluasad frèam eadar-theangachaidh le codon stad eile a chaidh a ro-innse, dh’ adhbhraich sin gearradh ro-luath de phròtain. Chan eil na h-atharrachaidhean eile uile air an lorg ach ann an aon chùis. Gu sònraichte, bha aon de na PVn a chaidh aithris suidhichte ann an roinn co-aontachd làrach splice (c.4357+1G>T) (Clàr 1).
A thaobh BRCA2 PV, chunnaic sinn 6 sguabadh às, 6 SNVan agus 2 dhùblachadh. Chan eil gin de na h-atharrachaidhean a chaidh a lorg ùr. Thachair trì mùthaidhean a-rithist anns an t-sluagh againn, c.428dup agus c.8487+1G>A a chaidh fhaicinn ann an 3 cuspairean, agus an uairsin c.5851_5854delAGTT air fhaighinn air ais ann an dà chùis. Tha an t-atharrachadh c.428dup a’ toirt a-steach ath-aithris de C ann an exon 5 de BRCA2, a thathar an dùil a chòdachadh pròtain goirid, neo-ghnìomhach. Tha am mùthadh c.8487+1G>A a’ tachairt ann an roinn intronic BRCA2 intron 19 (± 1,2) agus a’ toirt buaidh air an t-sreath co-aontachd splicing, agus mar thoradh air sin tha atharrachadh ann an splicing a’ leantainn gu pròtain neo-àbhaisteach no neo-làthaireach. Tha an caochladh pathogenic c.5851_5854delAGTT mar thoradh air sguabadh às 4-niùclasaid bho shuidheachaidhean niùclasaid 5851 gu 5854 anns an exon còdaidh 10 den ghine BRCA2 agus mar thoradh air sin tha a gluasad frèam eadar-theangachaidh le codon stad eile a thathar a’ ro-innse (p.S1951WfsTer). Gu sònraichte, mar a chaidh aithris roimhe, chaidh an dà atharrachadh c.631G>A agus c.7008-2A>T a lorg san aon euslainteach.34 Tha a’ chiad mhùthadh a’ toirt a-steach ath-chur adenosine (A) ann an exon 7 BRCA2 le nucleotide anns a bheil guanine (G) agus mar thoradh air sin tha atharrachadh valine gu isoleucine aig codon 211, tha amino-aigéid isoleucine na amino-aigéid le feartan glè choltach. Tha an t-atharrachadh seo a’ toirt buaidh air spliseadh mRNA àbhaisteach. Tha an dàrna caochladh suidhichte ann an roinn intronic agus mar thoradh air sin tha ath-chur dùbailte A gu thymine (T) ro exon 13 den ghine a tha a’ còdachadh BRCA2. Faodaidh an t-atharrachadh c.7008-2A>T iomadh tar-sgrìobhadh de dhiofar fhaid a chruthachadh. A bharrachd air an sin, anns a’ bhuidheann de PVan BRCA2, bha 4 a-mach à 18 atharrachaidhean (22.2%) intronic.
An uairsin rinn sinn mapadh de mùthaidhean cronail BRCA1/2 ann an raointean gnìomh agus roinnean ceangailteach pròtain (Figear 4). Anns a’ ghine BRCA1, bha 50% de na PVn suidhichte ann an roinn cruinneachaidh aillse broilleach (BCCR), agus bha 22% de na mùthaidhean suidhichte ann an roinn cruinneachaidh aillse ubhagach (OCCR) (Figear 4A). Ann am BRCA2 PV, bha 35.7% de na caochlaidhean suidhichte ann an roinn BCCR agus bha 42.8% de na mùthaidhean suidhichte san OCCR (Figear 4B). An ath rud, rinn sinn measadh air suidheachadh PV taobh a-staigh raointean pròtain BRCA1 agus BRCA2. Airson a’ phròtain BRCA1, lorg sinn trì PVn anns na raointean lùb agus coil coil, agus dà mhùthadh ann an raon BRCT (Figear 4A). Airson a’ phròtain BRCA2, chaidh 4 PVn a mhapadh chun raon ath-aithris BRC, agus chaidh 3 atharrachaidhean intronic agus 3 exonic a lorg anns na raointean ceangail oligo/oligosaccharide (OB) agus tùr (T) (Figear 4B).
Figear 4 Riochdachadh sgemataigeach de phròtainean BRCA1 agus BRCA2 agus suidheachadh atharrachaidhean pathogenic. Tha an fhigear seo a’ sealltainn sgaoileadh atharrachaidhean pathogenic BRCA1 (A) agus BRCA2 (B) ann an euslaintich aillse broilleach. Tha mùthaidhean exonic air an sealltainn ann an gorm, agus tha atharrachaidhean intronic air an sealltainn ann an orains. Tha àirde a’ bhàr a’ riochdachadh an àireamh de chùisean. Tha na pròtainean BRCA1 agus BRCA2 agus na raointean gnìomh aca air an aithris. (A) Tha raon lùb (RING) agus sreath ionadail niùclasach (NLS), raon coiled-coil, raon cruinneachaidh SQ / TQ (SCD), agus raon C-terminal BRCA1 (BRCT) anns a’ phròtain BRCA1. (B) Tha ochd ath-aithrisean BRC, raon ceangailte ri DNA le raon helical (Helical), trì filltean oligonucleotide / oligosaccharide-connection (OB), raon tùir (T), agus NLS air an taobh C anns a’ phròtain BRCA2. Tha raointean ris an canar Roinn Cruinneachaidh Aillse Broilleach (BCCR) agus Roinn Cruinneachaidh Aillse Ubhagan (OCCR) air an sealltainn aig a’ bhonn. * A’ riochdachadh mùthaidhean a tha a’ dearbhadh stad còdannan.
An uairsin rinn sinn sgrùdadh air feartan clionaigeach-pathologach BC a dh’ fhaodadh a bhith co-cheangailte ri làthaireachd BRCA1/2 PV. Bha clàran clionaigeach coileanta rim faighinn airson 181 euslaintich BRCA1/2-àicheil (neo-ghiùlain) agus a h-uile giùlan (n = 35). Bha co-dhàimh eadar ìre iomadachadh tumhair agus ìre.
Rinn sinn àireamhachadh air sgaoileadh Ki-67 stèidhichte air meadhan ar cohort (25%, raon <10-90%). Chaidh cuspairean le Ki-67 < 25% a mhìneachadh mar “Ki-67 ìosal”, agus chaidh daoine le luachan ≥ 25% a mheas mar “Ki-67 àrd”. Lorgadh eadar-dhealachaidhean mòra Ki-67 (p<0.01) eadar neo-ghiùlain agus luchd-ghiùlain BRCA1 PV (Figear 5A).
Figear 5 Co-dhàimh Ki-67 le sgaoileadh ìrean ann am boireannaich aillse broilleach le agus às aonais PVan BRCA1 agus BRCA2. (A) Bogsa-plot a’ sealltainn luachan meadhanach Ki-67 ann an 181 euslaintich BC neo-ghiùlain an aghaidh euslaintich PV BRCA1 (18) no BRCA2 (17). Chaidh luachan P fo 0.5 a mheas cudromach gu staitistigeil. (B) Histogram a’ riochdachadh sònrachadh euslaintich aillse BC ann am buidhnean ìrean histologach (G2 agus G3) a rèir inbhe mùthaidh BRCA1 agus BRCA2 (cuspairean WT, luchd-giùlain PVan BRCA1 agus BRCA2).
San aon dòigh, rinn sinn sgrùdadh air an robh ìre an tumhair co-cheangailte ri làthaireachd BRCA1/2 PV. Leis nach robh G1 BC an làthair anns an t-sluagh againn, roinn sinn na h-euslaintich ann an dà bhuidheann (G2 no G3). A rèir thoraidhean Ki-67, nochd an anailis co-dhàimh staitistigeil cudromach eadar ìre an tumhair agus mùthadh BRCA1, le co-roinn nas àirde de tumhair G3 ann an luchd-giùlain BRCA1 an taca ri neo-luchd-giùlain (p<0.005) (Figear 5B).
Tha adhartasan ann an teicneòlas sreath DNA air adhartasan gun samhail a chomasachadh ann an deuchainnean ginteil BRCA1/2, le buaidhean deatamach do dh’euslaintich aig a bheil eachdraidh teaghlaich aillse. Gu ruige seo, chaidh timcheall air 20,000 caochlaidhean BRCA1/2 a chomharrachadh agus a sheòrsachadh a rèir Comann Ameireaganach Gintinneachd Meidigeach 35 agus siostam ENIGMA. 35,36 Tha fios gu bheil speactram mùthaidh BRCA1/2 ag atharrachadh gu farsaing thar roinnean cruinn-eòlasach. 37 Taobh a-staigh na h-Eadailt, bha ìre PV BRCA1/2 eadar 8% agus 37%, a’ sealltainn caochlaideachd farsaing taobh a-staigh na dùthcha. 38,39 Le sluagh de faisg air 5 millean, is e Sicily an còigeamh roinn as motha san Eadailt a thaobh àireamh luchd-còmhnaidh. Ged a tha dàta ann mu sgaoileadh BRCA1/2 ann an iar-thuath Sicily, chan eil fianais fharsaing ann an taobh an ear an eilein.
’S e an sgrùdadh againn aon de na ciad aithisgean air tricead BRCA1/2 PV ann an euslaintich BC ann an ear Shisilia.28 Chuir sinn fòcas air BC, leis gur e seo an galar as cumanta san chohort againn.
Nuair a chaidh deuchainnean a dhèanamh air 389 euslaintich BC, bha PV BRCA1/2 aig 9% dhiubh, air an sgaoileadh gu cothromach eadar BRCA1 agus BRCA2. Tha na toraidhean seo a rèir an fheadhainn a chaidh aithris roimhe seo ann an sluagh na h-Eadailt.28 Gu inntinneach, bha 3% (13/389) den chohort againn fireann. Tha an ìre seo nas àirde na bha dùil airson aillse broilleach fireann (1% de na BCn uile),40 a’ nochdadh ar taghadh de shluagh stèidhichte air cunnart mùthaidh BRCA1/2. Ach, cha do leasaich gin de na fir seo PV BRCA1/2, agus mar sin bha iad nan tagraichean airson tuilleadh mion-sgrùdaidh moileciuil gus làthaireachd mùthaidhean nach robh cho cumanta leithid PALB2, RAD51C agus D, am measg feadhainn eile, a dhiùltadh. Chaidh caochlaidhean de chudromachd neo-chinnteach fhaighinn ann an 7% de chuspairean anns an robh BRCA2 VUS follaiseach. Tha an toradh seo eadhon a rèir fianais a bh’ ann roimhe.28,41,42
Nuair a rinn sinn mion-sgrùdadh air sgaoileadh fo-sheòrsan moileciuil BC ann am boireannaich le mùthaidhean BRCA1/2, dhearbh sinn ceanglaichean aithnichte eadar TNBC agus BRCA1 PV (58.8%) agus eadar luminal B BC agus BRCA2 PV (55.6%).16,43 Tha na tumhair luminal A agus HER2+ ann an luchd-giùlain BRCA1 agus BRCA2 PV a rèir dàta litreachas a th’ ann mar-thà.16,43
An uairsin bidh sinn a’ cur fòcas air an t-seòrsa agus an àite a tha aig a’ PV BRCA1/2. Anns a’ chohort againne, b’ e c.5035_5039delCTAAT am PV BRCA1 as cumanta. Ged a tha Incorvaia et al. cha do mhìnich iad an caochladh seo anns a’ chohort Sicilianach aca, tha ùghdaran eile air aithris mar BRCA1 PV loidhne-ghinealach.34 Chaidh grunn PV BRCA1 a lorg anns a’ chohort againn - me c.181T>G, c.514del, c.3253dupA agus c.5266dupC - a chaidh fhaicinn ann an Sicilia.28 Dhiubh sin, lorgar dà mhùthadh stèidheachaidh BRCA1 (c.181T>G agus c.5266dupC) gu cumanta ann an Iùdhaich Ashkenazi ann an taobh an ear agus meadhan na Roinn Eòrpa (a’ Phòlainn, Seiceach), Sloibhiniach, Ostair, Ungairis, Bealaruis agus Gearmailtis), 44,45 agus, anns na Stàitean Aonaichte agus Argentina, chaidh a mhìneachadh o chionn ghoirid mar “atharrachadh loidhne-ghinealach ath-chuairteach” ann an euslaintich Eadailteach le BC agus OC. Chaidh an caochladh 34c.514del a chomharrachadh roimhe seo ann an 8 euslaintich aillse broilleach à ceann a tuath Sicilia ann am Palermo agus Messina. Gu inntinneach, eadhon Incorvaia et al. lorg iad an caochladh c.3253dupA ann an cuid de theaghlaichean ann an Catania.28 Is iad na PVan BRCA2 as riochdaiche c.428dup, c.5851_5854delAGTT agus an caochladh intronic c.8487+1G>A, a chaidh aithris nas mionaidiche 28 ann an euslainteach ann am Palermo le c.428dup, c.5851_5854delAGTT Chaidh PV fhaicinn ann an teaghlaichean ann an iar-thuath Shisilia, gu h-àraidh ann an roinnean Trapani agus Palermo, ach chaidh c.5851_5854delAGTT PV fhaicinn ann an teaghlaichean ann an iar-thuath Shisilia. Bha an caochladh 8487+1G>A nas cumanta ann an cuspairean à Messina, Palermo, agus Caltanissetta.28 Rebbeck et al. mhìnich iad roimhe seo an t-atharrachadh c.5851_5854delAGTT ann an Coloimbia.37 Chaidh BRCA2 PV eile, c.631+1G>A, a lorg ann an euslaintich BC agus OC à Sicily (Agrigento, Siracusa agus Ragusa).28 Gu sònraichte, chunnaic sinn co-sheasmhachd dà atharrachadh BRCA2 (BRCA2 c.631G>A agus c.7008-2A>T) san aon euslainteach, a bha sinn a’ gabhail ris a bhith air an sgaradh ann am modh cis, mar a chaidh aithris roimhe mar sin.34,46 Gu dearbh, chithear na mùthaidhean dùbailte BRCA2 seo gu tric ann an roinn na h-Eadailt agus chaidh a lorg gu bheil iad a’ toirt a-steach codons stad ro-luath, a’ toirt buaidh air spliseadh RNA teachdaire agus ag adhbhrachadh fàilligeadh a’ phròtain BRCA2.47,48
Rinn sinn mapadh cuideachd de PVn BRCA1 agus BRCA2 ann an roinnean OCCR agus BCCR a tha fo amharas de raointean pròtain agus ginean. Chaidh na roinnean sin a mhìneachadh le Rebbeck et al. mar raointean cunnairt airson aillse ubhagach agus aillse broilleach a leasachadh, fa leth.49 Ach, tha an fhianais a thaobh a’ cheangail eadar suidheachadh atharrachaidhean loidhne-germ agus cunnart aillse broilleach no ubhagach fhathast connspaideach.28,50-52 Anns an t-sluagh againn, bha PVn BRCA1 suidhichte sa mhòr-chuid ann an roinn BCCR, ach bha PVn BRCA2 suidhichte sa mhòr-chuid ann an roinn OCCR. Ach, cha b’ urrainn dhuinn ceangal sam bith a lorg eadar roinnean OCCR agus BCCR a tha fo amharas agus feartan BC. Is dòcha gu bheil seo mar thoradh air an àireamh chuingealaichte de dh’euslaintich le mùthaidhean BRCA1/2. Bho shealladh raon pròtain, tha PVn BRCA1 air an sgaoileadh air feadh a’ phròtain gu lèir, agus lorgar atharrachaidhean BRCA2 gu roghnach ann an raon ath-aithris BRC.
Mu dheireadh, rinn sinn ceangal eadar feartan clionaigeach-pathologach BC agus BRCA1/2 PV. Air sgàth an àireamh chuingealaichte de dh’euslaintich a chaidh a ghabhail a-steach, cha d’ fhuair sinn ach ceangal cudromach eadar Ki-67 agus ìre an tumhair. Ged a tha measadh agus mìneachadh Ki-67 fhathast connspaideach, tha e cinnteach gu bheil ìrean àrda iomadachaidh co-cheangailte ri cunnart nas motha bho ath-chuairteachadh galair agus mairsinneachd nas ìsle. ​​Gu ruige seo, is e 20% an gearradh-às airson eadar-dhealachadh a dhèanamh eadar Ki-67 “àrd” agus “ìosal”. Ach, chan eil an stairsneach seo a’ buntainn ris an t-sluagh euslaintich mùthaidh BRCA1/2 againn, aig a bheil luach meadhanach Ki-67 de 25%. Faodar an gluasad seo ann an ìrean àrda Ki-67 a mhìneachadh leis an tricead anns na cohorts luminal B agus TNBC againn, agus cha robh mòran tumhair luminal A an làthair. Ach, tha coltas gu bheil cuid de fhianais a’ moladh gum faodadh gearradh-às Ki-67 nas àirde (25–30%) euslaintich a sgaradh nas fheàrr a rèir an ro-innse.53,54 Bho thoraidhean ar mion-sgrùdaidh, chan eil ceangal cudromach na iongnadh. Tha e a’ tachairt eadar Ki-67 àrd agus ìrean agus làthaireachd BRCA1 PV. Gu dearbh, tha tumhair co-cheangailte ri BRCA1 àbhaisteach do TNBC agus tha feartan nas ionnsaigheach aca.16,17
Mar cho-dhùnadh, tha an sgrùdadh seo a’ toirt seachad aithisg air inbhe mùthaidh BRCA1/2 ann an cohort BC à taobh an ear Shìcilia. Gu h-iomlan, tha na co-dhùnaidhean againn a’ co-chòrdadh ri fianais a bh’ ann roimhe, an dà chuid a thaobh tricead mùthaidhean agus feartan clionaigeach-pathologach ann am BC. Tha barantas air barrachd sgrùdaidhean ann an sluagh nas motha de dh’ euslaintich BC le mùthadh BRCA1/2, leithid a bhith a’ cleachdadh mion-sgrùdadh mùthaidh leudaichte ioma-ghineomach, gus measadh a dhèanamh air làthaireachd PVn a tha eadar-dhealaichte agus nas ainneimhe na BRCA1/2. Leigidh seo le bhith a’ comharrachadh agus a’ riaghladh gu ceart an àireamh a tha a’ sìor fhàs de chuspairean aig a bheil barrachd cunnart aillse mar thoradh air mùthaidhean ginteil.
Dhearbh sinn gun do chuir euslaintich ainm ri cead fiosraichte gus na sampallan tumhair aca a leigeil ma sgaoil gun urra airson adhbharan rannsachaidh. Chuir a h-uile euslainteach ainm ri cead fiosraichte sgrìobhte a rèir Dearbhadh Helsinki. A rèir poileasaidh AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco”, chaidh an sgrùdadh seo a shaoradh bho ath-sgrùdadh beusach leis gun deach mion-sgrùdadh BRCA1/2 a dhèanamh a rèir cleachdadh clionaigeach agus thug a h-uile euslainteach cead fiosraichte sgrìobhte. Tha euslaintich cuideachd a’ toirt cead an dàta aca a chleachdadh airson adhbharan rannsachaidh.
Tha sinn a’ toirt taing don Ollamh Paolo Vigneri airson a chuideachaidh ann an cùram euslaintich aillse broilleach mar a dh’iarr a’ Chomataidh Beusachd.
Tha Federica Martorana ag aithris air duaisean bho Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Chan eil na h-ùghdaran eile ag ràdh gu bheil còmhstri sam bith eadar com-pàirtean san obair seo.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Staitistig Ailse Cruinne 2020: Tha GLOBOCAN a’ meas tricead agus bàsmhorachd 36 aillsean ann an 185 dùthaich air feadh an t-saoghail. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660