Ang Javascript kasamtangang gi-disable sa imong browser. Ang ubang mga bahin niini nga website dili mogana kung ang javascript gi-disable.
Pagparehistro gamit ang imong piho nga mga detalye ug piho nga tambal nga imong gikainteresan ug among ipares ang impormasyon nga imong gihatag sa mga artikulo sa among halapad nga database ug dayon ipadala kanimo ang usa ka kopya sa PDF pinaagi sa email.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 1,2 sa Departamento sa Medisina ug 7 sa Manzella2 Livia Catania, Catania, 95123, Italy;2 Center for Experimental Oncology and Hematology, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Italy; 3 Medical Oncology, AOU Policlinico "G. Rodolico - San Marco", Catania, 95123, Italy; 4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italy; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italy; 6 Departamento sa Biomedikal ug Bioteknolohiya nga mga Siyensiya, Unibersidad sa Catania, Medical Genetics, Catania, Italya, 95123; 7 Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italya Komunikasyon: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected]; [email protected] Katuyoan: Mga mutasyon sa germline sa BRCA1 ug BRCA2 ug natukod nga kanser sa suso (BC), obaryo (OC) ug uban pa nga nalangkit sa tibuok kinabuhi nga risgo sa kanser. Ang pagsulay sa gene sa BRCA hinungdanon sa pagtimbang-timbang sa indibidwal nga risgo, ingon man sa pagpangita og mga pamaagi sa pagpugong sa himsog nga mga tigdala ug pagpahaom sa mga pagtambal sa mga pasyente sa kanser. Ang pagkaylap sa mga pagbag-o sa BRCA1 ug BRCA2 managlahi sa lainlaing mga rehiyon sa heyograpiya, ug bisan kung adunay datos sa mga variant sa pathogenic sa BRCA sa mga pamilyang Sicilian, ang mga pagtuon nga espesipikong nagtumong sa mga populasyon sa silangang Sicily kulang. Ang tumong sa among pagtuon mao ang pag-imbestiga sa insidente ug pag-apod-apod sa mga pagbag-o sa pathogenic germline sa BRCA sa usa ka cohort sa mga pasyente sa BC gikan sa silangang Sicily ug aron masusi ang ilang kalambigitan sa piho nga mga kinaiya sa BC gamit ang sunod nga henerasyon nga pag-sequencing. Ang presensya sa mga pagbag-o nakig-uban sa grado sa tumor ug indeks sa pagdaghan. MGA RESULTA: Sa kinatibuk-an, 35 ka mga pasyente (9%) adunay usa ka pathogenic variant sa BRCA, 17 (49%) sa BRCA1 ug 18 (51%) sa BRCA2. Ang mga pagbag-o sa BRCA1 kaylap sa mga pasyente sa triple-negative BC, samtang ang mga mutasyon sa BRCA2 mas komon sa mga pasyente sa luminal BC. Kung itandi sa sa mga dili-carrier, ang mga subject nga adunay mga variant sa BRCA1 adunay mas taas nga grado sa tumor ug proliferative index. Konklusyon: Ang among mga nahibal-an naghatag usa ka kinatibuk-ang pagtan-aw sa kahimtang sa mutasyon sa BRCA sa mga pasyente sa BC gikan sa silangang Sicily ug gikumpirma ang papel sa pag-analisa sa NGS sa pag-ila sa mga pasyente nga adunay hereditary BC. Sa kinatibuk-an, kini nga datos nahiuyon sa nangaging ebidensya nga nagsuporta sa screening sa BRCA alang sa husto nga pagpugong ug pagtambal sa kanser sa mga nagdala sa mutation.
Ang kanser sa suso (BC) mao ang labing komon nga kanser sa tibuok kalibutan ug ang labing makamatay nga kanser sa mga babaye.1 Ang mga biyolohikal nga bahin nga nagtino sa prognosis sa BC ug klinikal nga pamatasan gitun-an pag-ayo ug partially nga gipatin-aw sa paglabay sa panahon. Sa tinuud, daghang mga surrogate marker ang gigamit karon aron maklasipikar ang BC ngadto sa lainlaing mga molecular subtypes. Kini mao ang estrogen (ER) ug/o progesterone receptor (PgR), human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) amplification, proliferation index Ki-67 ug tumor grade (G).2 Ang kombinasyon niining mga variable nagpaila sa mosunod nga mga kategorya sa BC: 1) Ang mga tumor sa Luminal, nga nagpakita sa ekspresyon sa ER ug/o PgR, nagkantidad sa 75% sa mga BC. Kini nga mga tumor gibahin pa sa Luminal A, kung ang Ki-67 ubos sa 20% ug negatibo ang HER2, ug Luminal B, kung ang Ki-67 katumbas o labaw sa 20% ug sa presensya sa amplification sa HER2, bisan unsa pa ang proliferation index; 2) Mga tumor sa HER2+ nga negatibo ang ER ug PgR apan nagpakita sa amplification sa HER2. Kini nga grupo nagkantidad sa 10% sa tanan nga mga tumor sa suso; 3) Ang triple-negative breast cancer (TNBC), nga wala magpakita og ER ug PgR expression ug HER2 amplification, naglangkob sa mga 15% sa mga kanser sa suso.2-4
Lakip niining mga BC subtypes, ang tumor grade ug proliferation index nagrepresentar sa cross-sectional biomarkers nga direkta ug independente nga nalangkit sa pagkaagresibo sa tumor ug prognosis.5,6
Gawas pa sa nahisgutang mga biyolohikal nga bahin, ang papel sa napanunod nga mga pagbag-o sa henetiko nga nagdala sa pag-uswag sa BC nahimong labi ka hinungdanon sa miaging pipila ka tuig.7 Mga 1 sa 10 ka mga tumor sa suso ang napanunod tungod sa mga pagbag-o sa germline sa piho nga mga gene.8 Duha ka dagkong mga pagtuon sa epidemiolohiya nga naglambigit sa kapin sa 180,000 ka mga babaye ang bag-o lang nakaila sa usa ka grupo sa walo ka mga gene (ie, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, ug RAD51D) nga panguna nga responsable sa napanunod nga BC. Taliwala niining mga gene, ang BRCA1 ug BRCA2 (dinhi gitawag nga BRCA1/2) nagpakita sa labing kusog nga korelasyon sa pag-uswag sa mga tumor sa suso.9-12 Sa tinuud, ang mga mutasyon sa germline BRCA1/2 hinungdanon nga nagdugang sa peligro sa tibuok kinabuhi sa BC ingon man uban pang mga malignancies, lakip ang ovarian, prostate, pancreatic, colorectal, ug melanoma. Gikan sa edad nga 13 hangtod 80 ka tuig, ang cumulative incidence sa BC kay 72% sa mga babaye nga adunay BRCA1 pathogenic variant (PV) ug 69% sa mga babaye nga adunay BRCA2. PV.14
Ilabi na, usa ka bag-o nga publikasyon nagsugyot nga ang risgo sa BC nagdepende sa klase sa PV. Sa tinuud, kon itandi sa mga pathogenic truncating variant, ang mga glaring missense variant, labi na sa BRCA1 gene, nalangkit sa pagkunhod sa risgo sa BC, labi na sa mga tigulang nga babaye.15
Ang presensya sa BRCA1 o BRCA2 PV nalangkit sa lain-laing biyolohikal ug klinikal nga mga bahin.16,17 Ang mga BC nga nalangkit sa BRCA1 lagmit nga agresibo sa klinika, dili maayo ang pagkalainlain, ug kusog nga modaghan. Kini nga mga tumor kasagaran triple negative ug adunay sayo nga edad sa pagsugod. Ang mga tumor nga mahitabo sa mga pasyente nga adunay mutasyon sa BRCA2 kasagaran nagpakita og kasarangan ngadto sa maayo ang pagkalainlain nga mga grado ug lainlain nga mga indeks sa proliferative. Kini nga mga tumor mas komon sa lumen B ug kasagaran mahitabo sa mga tigulang.16-18 Talalupangdon nga ang mga mutasyon sa BRCA1 ug BRCA2 nagdugang sa pagkasensitibo sa piho nga mga pagtambal, lakip ang platinum salts ug mga target nga tambal sama sa poly(ADP-ribose) polymerase inhibitors (PARPi).19,20
Sulod sa miaging pipila ka tuig, ang pagpatuman sa next-generation sequencing (NGS) sa klinikal nga praktis nakapahimo sa nagkadaghang gidaghanon sa mga pasyente sa BC nga moagi sa molecular testing para sa mga cancer susceptibility syndromes, lakip ang BRCA1/2.21 Sa samang higayon, ang mga depinisyon nga gibase sa tukma nga criteria bahin sa family history, demographic, ug clinicopathological nga mga kinaiya aron mas mailhan ang mga indibidwal nga takos sa BRCA1/2 testing.22,23 Niini nga konteksto, ang ebidensya nagtipun-og sa BRCA1/2 screening sa mga piho nga populasyon, nga nagpasiugda sa mga kalainan sa mga rehiyon sa heyograpiya.24–27 Bisan kung adunay mga taho sa BC cohort sa kasadpang Sicily, gamay ra nga datos ang magamit sa BRCA1/2 screening sa silangang populasyon sa Sicily.28,29
Among gihulagway dinhi ang mga resulta sa germline BRCA1/2 screening sa mga pasyente sa BC gikan sa sidlakang Sicily, nga dugang nga nagkonektar sa presensya sa mga mutasyon sa BRCA1 o BRCA2 sa mga nag-unang klinikal nga patolohiya niining mga tumor.
Usa ka retrospektibong pagtuon ang gihimo sa "Center for Experimental Oncology and Hematology" sa Policlinico Hospital. Rodolico – San Marco sa Catania. Gikan sa Enero 2017 hangtod Marso 2021, usa ka total nga 455 ka mga pasyente nga adunay kanser sa suso ug obaryo, melanoma, pancreatic o prostate ang gi-refer sa among molecular diagnostic laboratory alang sa BRCA/2 genetic testing. Kini nga pagtuon gihimo subay sa Deklarasyon sa Helsinki, ug ang tanan nga mga partisipante naghatag ug sinulat nga pagtugot sa wala pa ang molecular analysis.
Ang mga histolohikal ug biyolohikal nga kinaiya (ER, PgR, HER2 status, Ki-67, ug grado) sa BC gisusi gamit ang core biopsy o surgical samples, nga gikonsiderar lamang ang agresibo nga mga sangkap sa tumor. Base sa kini nga mga kinaiya, ang mga BC giklasipikar sama sa mosunod: luminal A (ER+ ug/o PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ ug/o PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER ug/o PgR+, HER2+), HER2+ (ER ug PgR-, HER2+) o triple negative (ER ug PgR-, HER2-).
Sa wala pa susihon ang kahimtang sa mutasyon sa BRCA1 ug BRCA2, usa ka multidisciplinary team nga naglakip sa usa ka oncologist, usa ka geneticist, ug usa ka psychologist nagpahigayon og konsultasyon sa tumor genetics para sa matag pasyente aron mahibal-an ang presensya sa BRCA1 ug/o BRCA1. o mga indibidwal nga adunay taas nga risgo sa PV sa gene nga BRCA2. Ang pagpili sa pasyente gihimo sumala sa mga giya sa Italian Society of Medical Oncology (AIOM) ug mga rekomendasyon sa lokal nga Sicilian.30,31 Kini nga mga criteria naglakip sa: (i) kasaysayan sa pamilya sa nailhan nga mga pathogenic variant sa mga susceptibility gene (pananglitan, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) mga lalaki nga adunay BC; (iii) kadtong adunay BC ug OC; (iv) mga babaye nga adunay BC <36 ka tuig, TNBC <60 ka tuig, o bilateral BC <50 ka tuig; (v) personal nga medikal nga kasaysayan sa BC <50 ka tuig ug labing menos usa ka first-degree nga paryente: (a) BC < 50 ka tuig; (b) dili mucinous ug dili borderline OC sa bisan unsang edad; (c) bilateral BC; (d) lalaki nga BC; (e) kanser sa pancreas; (f) kanser sa prostate; (vi) duha o labaw pa Personal nga kasaysayan sa BC nga > 50 ka tuig ug kasaysayan sa pamilya sa BC, OC, o kanser sa pancreas para sa mga paryente nga first-degree relatives sa usag usa (lakip ang mga paryente nga iyang first-degree relatives); (vii) Personal nga kasaysayan sa OC ug labing menos usa ka first-degree relative: (a) BC <50 ka tuig; (b) NOC; (c) bilateral BC; (d) lalaki nga BC; (vii) babaye nga adunay high-grade serous OC.
Usa ka 20 mL nga peripheral blood sample ang gikuha gikan sa matag pasyente ug gikolekta sa mga EDTA tube (BD Biosciences). Ang genomic DNA gi-isolate gikan sa 0.7 mL nga whole blood samples gamit ang QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italy) sumala sa instruksyon sa tiggama ug gipasa pinaagi sa Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Gihimo ang quantification. Ang pagpayaman sa target ug pag-andam sa librarya gihimo sa Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, andam na nga i-load sa Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit para sa automated library preparation sumala sa instruksyon sa tiggama. Ang kit gilangkoban sa duha ka multiplex PCR primer pools nga magamit sa pagtuon sa tanang BRCA1 (NM_007300.3) ug BRCA2 (NM_000059.3) genes. Sa mubo, 15 µL sa matag diluted sample DNA (10 ng) ang gidugang sa barcoded plates para sa pag-andam sa librarya ug ang tanang reagents ug consumables gi-load sa Ion Chef™ instrument. Ang automated library preparation ug barcoded sample library pooling gihimo dayon sa Ion Chef™ instrument. Ang gidaghanon sa giandam nga mga librarya gisusi dayon sa usa ka Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) sumala sa instruksyon sa tiggama. Sa katapusan, ang mga librarya gihiusa sa equimolar ratios sa Ion Chef™ library sample tubes (barcoded tubes). ug gikarga sa instrumento sa Ion Chef™. Ang pagkasunod-sunod gihimo gamit ang instrumento sa Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) gamit ang Ion 510 Chip (Thermo Fisher Scientific). Ang pag-analisar sa datos gihimo sa Amplicon Suite (SmartSeq srl) ug Ion Reporter Software.
Ang tanang variant nomenclature misunod sa kasamtangang mga giya sa Human Genome Variation Consortium, nga anaa online (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Ang klinikal nga kamahinungdanon sa mga variant sa BRCA1/2 gihubit gamit ang klasipikasyon sa International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) ug pagkonsulta sa lain-laing mga database sama sa ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, ug UMD. Ang klasipikasyon naglakip sa lima ka managlahing kategorya sa risgo: benign (kategorya I), lagmit benign (kategorya II), variant sa dili sigurado nga kamahinungdanon (VUS, kategorya III), lagmit pathogenic (kategorya IV), ug pathogenic (kategorya V). Gisusi usab sa VarSome ang epekto sa mga mutasyon sa istruktura ug gimbuhaton sa protina, usa ka impormatibo nga himan nga adunay access sa 30 ka mga database.32
Aron mahatagan og potensyal nga klinikal nga kamahinungdanon ang matag VUS, gigamit ang mosunod nga mga computational protein prediction algorithm: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) ug Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Ang mga variant nga giklasipikar nga class 1 ug 2 giisip nga wild type.
Gikumpirma sa Sanger sequencing ang presensya sa matag pathogenic variant. Sa laktod nga pagkasulti, usa ka pares sa espesipikong mga primer ang gidisenyo alang sa matag nakita nga variant gamit ang BRCA1 ug BRCA2 gene reference sequences (NG_005905.2, NM_007294.3 ug NG_012772.3, NM_000059.3, matag usa). Busa, gihimo ang targeted PCR gisundan sa Sanger sequencing.
Ang mga pasyente nga nagnegatibo sa resulta sa BRCA1/2 gene gisusi pinaagi sa multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) sumala sa instruksyon sa tiggama aron masusi ang presensya sa dagkong genomic rearrangements (LGR). Sa laktod nga pagkasulti, ang mga sample sa DNA gi-denatured ug hangtod sa 60 ka BRCA1 ug BRCA2 gene-specific probes ang gigamit, nga ang matag usa nakamatikod sa usa ka piho nga DNA sequence nga gibana-bana nga 60 ka nucleotides ang gitas-on. Ang mga produkto sa probe amplification, nga gilangkoban sa usa ka talagsaon nga hugpong sa PCR amplicons, gisusi dayon pinaagi sa capillary electrophoresis ug sa Cofalyser.Net software inubanan sa angay nga batch-specific Cofalyser tables (www.mrcholland.com).
Ang pinili nga mga clinicopathological variable (histological grade ug Ki-67% proliferation index) nalangkit sa presensya sa BRCA1/2 PV, nga gikalkulo gamit ang Prism software v. 8.4 gamit ang Fisher's exact test nga nag-assume nga ang p-value <0.05 kay significant.
Tali sa Enero 2017 ug Marso 2021, 455 ka mga pasyente ang gisusi alang sa germline BRCA1/2 mutations. Ang mutation testing gihimo sa Policlinico Hospital's Center for Experimental Oncology and Hematology. Sumala sa Sicilian guideline (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Enero 2020), ang Rodolico sa Catania – San Marco” sa kinatibuk-an, 389 ka mga pasyente. Adunay kanser sa suso, 37 kanser sa obaryo, 16 kanser sa pancreas, 8 kanser sa prostate ug 5 melanoma. Ang distribusyon sa mga pasyente sumala sa tipo sa kanser ug mga resulta sa pag-analisar gipakita sa Figure 1.
Ang Figure 1 nagpakita sa usa ka flow chart nga nagpakita sa kinatibuk-ang pagpasabut sa pagtuon. Ang mga pasyente nga adunay mga tumor sa suso, melanoma, pancreas, prostate, o obaryo gisulayan alang sa mga mutasyon sa mga gene nga BRCA1 ug BRCA2.
Mga minubo: PV, pathogenic variant; VUS, variant nga walay kasiguroan ang kamahinungdanon; WT, wild-type BRCA1/2 sequence.
Among gipili nga gipunting ang among mga pagtuon sa mga kohort sa kanser sa suso. Ang mga pasyente adunay median nga edad nga 49 ka tuig (range 23-89) ug kasagaran mga babaye (n=376, o 97%).
Sa kini nga mga subject, 64 (17%) adunay mga mutasyon sa BRCA1/2 ug tanan babaye. Traynta y singko (9%) ang adunay PV ug 29 (7.5%) ang adunay VUS. Napulog pito (48.6%) sa 35 ka pathogenic variants ang nahitabo sa BRCA1 ug 18 (51.4%) sa BRCA2, samtang 5 ka VUS ang nahitabo sa BRCA1 (17.2%) ug 24 (82.8%) sa BRCA2 (Mga Figure 1 ug 2). Walay LGR sa MLPA analysis.
Hulagway 2. Pagtuki sa mga mutasyon sa BRCA1 ug BRCA2 sa 389 ka mga pasyente sa kanser sa suso.(A) Distribusyon sa mga pathogenic variant (PV) (pula), mga variant nga dili sigurado ang kahulugan (VUS) (kahel), ug WT (asul) sa 389 ka mga pasyente sa kanser sa suso; (B) 389 ka mga pasyente sa kanser sa suso Traynta y singko (9%) ang adunay mga pathogenic variant (PV) sa BRCA1/2. Lakip niini, 17 (48.6%) ang mga BRCA1 PV carrier (itom nga pula) ug 18 (51.4%) ang mga BRCA2 carrier (light red); (C) 29 (7.5%) sa 389 ka mga subject ang nagdala og VUS, 5 (17.2%) nga mga BRCA1 gene (itom nga kahel) ug 24 (82.8%) nga mga BRCA2 gene (light orange).
Mga minubo: PV, pathogenic variant; VUS, variant nga walay kasiguroan ang kamahinungdanon; WT, wild-type BRCA1/2 sequence.
Sunod namong gisusi ang pagkaylap sa BC molecular subtypes sa mga pasyente nga adunay BRCA1/2 PV. Ang distribusyon naglakip sa 2 (5.7%) luminal A, 15 (42.9%) luminal B, 3 (8.6%) luminal B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ ug 13 (37.1%) nga mga pasyente sa TNBC. Taliwala sa mga pasyente nga positibo sa BRCA1, 5 (29.4%) adunay luminal B BC, 2 (11.8%) adunay sakit nga HER2+, ug 10 (58.8%) adunay TNBC. Ang mga tumor nga walay mutasyon sa BRCA1 mao ang luminal A o luminal B-HER2+ (Figure 3). Sa BRCA2-positive subgroup, 10 (55.6%) nga mga tumor ang luminal B, 3 (16.7%) ang luminal B-HER2+, 3 (16.7%) TNBC ug 2 (11.1%) ang luminal A (Figure 3). Walay mga tumor nga HER2+. anaa niini nga grupo. Busa, ang mga mutasyon sa BRCA1 kaylap sa mga pasyente sa TNBC, samtang ang mga pagbag-o sa BRCA2 kaylap sa mga indibidwal nga lumen B.
Hulagway 3 Pagkaylap sa mga subtype sa kanser sa suso sa mga pasyente nga adunay mga pathogenic variant sa BRCA1 ug BRCA2. Mga histogram nga nagpakita sa distribusyon sa BRCA1- (itom nga pula) ug BRCA2- (hayag nga pula) nga mga PV taliwala sa mga molekular nga subtype sa mga pasyente sa kanser sa suso. Ang mga numero nga gitaho sulod sa matag kahon nagrepresentar sa porsyento sa mga pasyente nga adunay BRCA1 ug BRCA2 PV alang sa matag subtype sa kanser sa suso.
Mga minubo: PV, pathogenic variant; HER2+, human epidermal growth factor receptor 2 positive; TNBC, triple-negative breast cancer.
Sunod niini, among gisusi ang tipo ug lokalisasyon sa gene sa BRCA1 ug BRCA2 PVs. Sa BRCA1 PV, among naobserbahan ang 7 ka single nucleotide variants (SNVs), 6 ka deletions, 3 ka duplications ug 1 ka insertion. Usa ra ka mutation (c.5522delG) ang nagrepresentar sa usa ka bag-ong nadiskobrehan. Ang labing komon nga BRCA1 PV nga nakita sa duha ka subject mao ang c.5035_5039delCTAAT. Kini nga pagbag-o naglambigit sa pagtangtang sa lima ka nucleotides (CTAAT) sa BRCA1 exon 15, nga miresulta sa pag-ilis sa amino acid leucine sa tyrosine sa codon 1679, ug tungod sa usa ka translation frameshift nga adunay gitagna nga alternatibong stop codon misangpot sa wala pa sa panahon nga pagputol sa protina. Ang tanan nga uban pang mga pagbag-o nakita sa usa ra ka kaso. Talalupangdon, usa sa gitaho nga mga PV nahimutang sa splice site consensus region (c.4357+1G>T) (Table 1).
Kabahin sa BRCA2 PV, nakamatikod kami og 6 ka pagtangtang, 6 ka SNV ug 2 ka duplication. Walay bag-o sa mga pagbag-o nga nakit-an. Tulo ka mutasyon ang mibalik sa among populasyon, c.428dup ug c.8487+1G>A nga naobserbahan sa 3 ka subject, gisundan sa c.5851_5854delAGTT nga nakuha sa duha ka kaso. Ang pagbag-o sa c.428dup naglakip sa pagsubli sa C sa exon 5 sa BRCA2, nga gitagna nga mag-encode sa usa ka truncated, non-functional nga protina. Ang c.8487+1G>A mutation mahitabo sa intronic region sa BRCA2 intron 19 (± 1,2) ug makaapekto sa splicing consensus sequence, nga miresulta sa giusab nga splicing nga miresulta sa abnormal o wala nga protina. Ang c.5851_5854delAGTT pathogenic variant tungod sa 4-nucleotide deletion gikan sa nucleotide positions 5851 ngadto sa 5854 sa coding exon 10 sa BRCA2 gene ug miresulta sa usa ka translational frameshift nga adunay gitagna nga alternatibong stop codon (p.S1951WfsTer). Ilabi na, sama sa gitaho kaniadto, ang duha ka pagbag-o nga c.631G>A ug c.7008-2A>T nakita sa parehas nga pasyente.34 Ang unang mutation naglambigit sa pag-ilis sa adenosine (A) sa BRCA2 exon 7 nga adunay guanine (G) nga adunay nucleotide nga miresulta sa pagbag-o sa valine ngadto sa isoleucine sa codon 211, isoleucine. Ang Amino acid usa ka amino acid nga adunay parehas nga mga kabtangan. Kini nga pagbag-o makaapekto sa normal nga mRNA splicing. Ang ikaduha nga variant nahimutang sa usa ka intronic nga rehiyon ug miresulta sa doble nga A ngadto sa thymine (T) nga pag-ilis sa wala pa ang exon 13 sa gene nga nag-encode sa BRCA2. Ang pagbag-o sa c.7008-2A>T mahimong makamugna og daghang mga transcript nga lainlain ang gitas-on. Dugang pa, sa grupo sa mga BRCA2 PV, 4 sa 18 nga mga pagbag-o (22.2%) ang intronic.
Among gimapa ang mga makadaot nga mutasyon sa BRCA1/2 sa mga functional domain ug mga rehiyon nga nagbugkos sa protina (Fig. 4). Sa gene nga BRCA1, 50% sa mga PV nahimutang sa rehiyon sa cluster sa kanser sa suso (BCCR), samtang 22% sa mga mutasyon nahimutang sa rehiyon sa cluster sa kanser sa ovarian (OCCR) (Fig. 4A). Sa BRCA2 PV, 35.7% sa mga variant nahimutang sa rehiyon sa BCCR ug 42.8% sa mga mutasyon nahimutang sa OCCR (Fig. 4B). Sunod, among gisusi ang lokasyon sa PV sulod sa mga domain sa protina sa BRCA1 ug BRCA2. Alang sa protina sa BRCA1, nakakita kami og tulo ka PV sa loop ug coiled coil domain, ug duha ka mutasyon sa BRCT domain (Fig. 4A). Alang sa protina sa BRCA2, 4 ka PV ang gimapa sa BRC repeat domain, samtang 3 ka intronic ug 3 ka exonic nga mga pagbag-o ang nakita sa oligo/oligosaccharide-binding (OB) ug tower (T) domain (Fig. 4B).
Hulagway 4 Eskematikong representasyon sa mga protina sa BRCA1 ug BRCA2 ug lokalisasyon sa mga pathogenic variant. Kini nga hulagway nagpakita sa distribusyon sa mga pathogenic variant sa BRCA1 (A) ug BRCA2 (B) sa mga pasyente sa kanser sa suso. Ang mga exonic mutations gipakita sa asul, samtang ang mga intronic variant gipakita sa orange. Ang gitas-on sa bar nagrepresentar sa gidaghanon sa mga kaso. Ang mga protina sa BRCA1 ug BRCA2 ug ang ilang mga functional domain gitaho.(A) Ang protina sa BRCA1 adunay loop domain (RING) ug nuclear localization sequence (NLS), usa ka coiled-coil domain, usa ka SQ/TQ cluster domain (SCD), ug usa ka BRCA1 C-terminal domain (BRCT).(B) Ang protina sa BRCA2 adunay walo ka BRC repeats, usa ka DNA-binding domain nga adunay helical domain (Helical), tulo ka oligonucleotide/oligosaccharide-binding (OB) folds, usa ka tower domain (T), ug An NLS sa C nga bahin. Ang mga lugar nga gitawag og Breast Cancer Cluster Region (BCCR) ug Ovarian Cancer Cluster Region (OCCR) gipakita sa ubos.*Nagrepresentar sa mga mutasyon nga nagtino sa paghunong mga codon.
Among gisusi dayon ang mga klinikal nga bahin sa BC nga mahimong may kalabutan sa presensya sa BRCA1/2 PV. Ang kompletong klinikal nga rekord anaa para sa 181 ka mga pasyente nga negatibo sa BRCA1/2 (dili mga tigdala) ug tanang mga tigdala (n = 35). Adunay korelasyon tali sa rate sa pagdaghan sa tumor ug grado.
Among gikalkulo ang distribusyon sa Ki-67 base sa median sa among cohort (25%, range <10-90%). Ang mga subject nga adunay Ki-67 < 25% gihubit nga "low Ki-67", samtang ang mga indibidwal nga adunay values ​​​​≥ 25% giisip nga "high Ki-67". Nakit-an ang dakong kalainan sa Ki-67 (p<0.01) tali sa mga non-carriers ug BRCA1 PV carriers (Fig. 5A).
Hulagway 5 Korelasyon sa Ki-67 sa grade distribution sa mga babaye nga adunay kanser sa suso nga adunay ug walay BRCA1 ug BRCA2 PVs.(A) Boxplot nga nagpakita sa median nga Ki-67 values ​​​​sa 181 ka non-carrier BC patients batok sa BRCA1 (18) o BRCA2 (17) PV patients. Ang mga P values ​​​​nga ubos sa 0.5 giisip nga statistically significant.(B) Histogram nga nagrepresentar sa pag-assign sa mga pasyente sa kanser sa BC ngadto sa histological grade groups (G2 ug G3) sumala sa BRCA1 ug BRCA2 mutation status (WT subjects, BRCA1 ug BRCA2 PVs carriers).
Ingon man usab, among gisusi kung ang tumor grade ba adunay kalabutan sa presensya sa BRCA1/2 PV. Tungod kay wala ang G1 BC sa among populasyon, among gibahin ang mga pasyente sa duha ka grupo (G2 o G3). Subay sa mga resulta sa Ki-67, ang pag-analisa nagpadayag ug istatistikal nga hinungdanon nga korelasyon tali sa tumor grade ug BRCA1 mutation, nga adunay mas taas nga proporsyon sa mga tumor sa G3 sa mga BRCA1 carriers kon itandi sa mga dili carriers (p<0.005) (Figure 5B).
Ang mga pag-uswag sa teknolohiya sa DNA sequencing nakapahimo sa wala pa sukad nga mga pag-uswag sa BRCA1/2 genetic testing, nga adunay hinungdanon nga mga implikasyon alang sa mga pasyente nga adunay kasaysayan sa kanser sa pamilya. Hangtod karon, gibana-bana nga 20,000 nga mga variant sa BRCA1/2 ang nailhan ug giklasipikar sumala sa American Society of Medical Genetics 35 ug sa sistema sa ENIGMA.35,36 Nahibal-an nga ang BRCA1/2 mutational spectrum managlahi sa lainlaing mga rehiyon sa heyograpiya.37 Sulod sa Italya, ang rate sa BRCA1/2 PV gikan sa 8% hangtod 37%, nga nagpakita sa halapad nga pagkalainlain sa sulod sa nasud.38,39 Uban sa populasyon nga hapit 5 milyon, ang Sicily mao ang ikalima nga pinakadako nga rehiyon sa Italya sa mga termino sa gidaghanon sa mga lumulupyo. Bisan kung adunay datos sa pag-apod-apod sa BRCA1/2 sa kasadpang Sicily, wala’y daghang ebidensya sa silangang bahin sa isla.
Ang among pagtuon usa sa mga unang report sa insidente sa BRCA1/2 PV sa mga pasyente sa BC sa silangang Sicily.28 Among gipunting ang among pag-analisar sa BC, tungod kay kini ang labing komon nga sakit sa among cohort.
Sa pagsulay sa 389 ka mga pasyente sa BC, 9% ang adunay BRCA1/2 PVs, nga parehas nga giapod-apod tali sa BRCA1 ug BRCA2. Kini nga mga resulta nahiuyon sa mga gitaho kaniadto sa populasyon sa Italyano.28 Makaiikag, 3% (13/389) sa among cohort mga lalaki. Kini nga rate mas taas kaysa gilauman alang sa kanser sa suso sa lalaki (1% sa tanan nga BCs),40 nga nagpakita sa among pagpili sa mga populasyon base sa risgo sa mutasyon sa BRCA1/2. Bisan pa, wala’y usa niini nga mga lalaki ang nakaugmad og BRCA1/2 PV, mao nga sila mga kandidato alang sa dugang nga pag-analisa sa molekula aron isalikway ang presensya sa dili kaayo komon nga mga mutasyon sama sa PALB2, RAD51C ug D, ug uban pa. Ang mga variant nga dili sigurado ang kahinungdanon nakuha sa 7% sa mga hilisgutan diin ang BRCA2 VUS klaro. Bisan kini nga resulta nahiuyon sa nauna nga ebidensya.28,41,42
Sa dihang among gisusi ang distribusyon sa BC molecular subtypes sa BRCA1/2 mutant nga mga babaye, among gikumpirma ang nahibal-an nga mga asosasyon tali sa TNBC ug BRCA1 PV (58.8%) ug tali sa luminal B BC ug BRCA2 PV (55.6%).16,43 Ang luminal A ug HER2+ nga mga tumor sa BRCA1 ug BRCA2 PV nga mga carrier nahiuyon sa kasamtangang datos sa literatura.16,43
Dayon among tutukan ang klase ug lokasyon sa BRCA1/2 PV. Sa among cohort, ang labing komon nga BRCA1 PV kay c.5035_5039delCTAAT. Bisan tuod si Incorvaia et al. wala maghulagway niini nga variant sa ilang Sicilian cohort, ang ubang mga awtor nagtaho niini isip usa ka germline BRCA1 PV.34 Daghang BRCA1 PVs ang nakit-an sa among cohort – pananglitan c.181T>G, c.514del, c.3253dupA ug c.5266dupC – nga naobserbahan sa Sicily.28 Niini, duha ka BRCA1 founder mutations (c.181T>G ug c.5266dupC) ang kasagarang makita sa mga Ashkenazi Jews sa Eastern ug Central Europe (Poland, Czech), Slovenian, Austrian, Hungarian, Belarusian ug German), 44,45 ug, sa Estados Unidos ug Argentina, bag-o lang gihubit isip usa ka "recurrent germline variant" sa mga pasyente sa Italyano nga adunay BC ug OC. Ang 34c.514del variant kaniadto nailhan sa 8 ka mga pasyente sa kanser sa suso gikan sa amihanang Sicily sa Palermo ug Messina. Makapainteres, bisan si Incorvaia et al. nakit-an ang c.3253dupA variant sa pipila ka pamilya sa Catania.28 Ang labing representante nga BRCA2 PVs mao ang c.428dup, c.5851_5854delAGTT ug ang intronic variant nga c.8487+1G>A, nga gitaho nga mas detalyado 28 sa usa ka pasyente sa Palermo nga adunay c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV naobserbahan sa mga panimalay sa amihanan-kasadpang Sicily, labi na sa mga rehiyon sa Trapani ug Palermo, samtang ang c.5851_5854delAGTT PV naobserbahan sa mga panimalay sa amihanan-kasadpang Sicily. Ang 8487+1G>A variant mas komon sa mga subject gikan sa Messina, Palermo, ug Caltanissetta.28 Rebbeck et al. gihulagway kaniadto ang c.5851_5854delAGTT nga pag-usab sa Colombia.37 Laing BRCA2 PV, c.631+1G>A, nakit-an sa mga pasyente sa BC ug OC gikan sa Sicily (Agrigento, Siracusa ug Ragusa).28 Talalupangdon, among naobserbahan ang pag-uban sa duha ka variant sa BRCA2 (BRCA2 c.631G>A ug c.7008-2A>T) sa parehas nga pasyente, nga among gituohan nga gilain sa cis mode, sama sa gitaho kaniadto.34,46 Kini nga mga mutasyon sa BRCA2 kanunay nga naobserbahan sa rehiyon sa Italya ug nakit-an nga nagpaila sa wala pa sa panahon nga mga stop codon, nga nakaapekto sa messenger RNA splicing ug hinungdan sa pagkapakyas sa protina sa BRCA2.47,48
Among gimapa usab ang mga BRCA1 ug BRCA2 PV sa gituohang mga rehiyon sa OCCR ug BCCR sa mga protein domain ug gene. Kini nga mga rehiyon gihulagway ni Rebbeck et al. isip mga lugar nga adunay risgo sa pagpalambo sa kanser sa obaryo ug suso, matag usa.49 Bisan pa, ang ebidensya bahin sa asosasyon tali sa lokasyon sa mga variant sa germline ug risgo sa kanser sa suso o obaryo nagpabilin nga kontrobersyal.28,50-52 Sa among populasyon, ang mga BRCA1 PV kasagaran nahimutang sa rehiyon sa BCCR, samtang ang mga BRCA2 PV kasagaran nahimutang sa rehiyon sa OCCR. Bisan pa, wala kami makakita og bisan unsang asosasyon tali sa gituohang mga rehiyon sa OCCR ug BCCR ug mga bahin sa BC. Mahimo kini tungod sa limitado nga gidaghanon sa mga pasyente nga adunay mga mutasyon sa BRCA1/2. Gikan sa perspektibo sa protein domain, ang mga BRCA1 PV giapod-apod sa tibuok protina, ug ang mga pagbag-o sa BRCA2 mas gusto nga makit-an sa BRC repeat domain.
Sa katapusan, among gi-correlate ang mga clinicopathological features sa BC sa BRCA1/2 PV. Tungod sa limitado nga gidaghanon sa mga pasyente nga gilakip, nakit-an lang namo ang usa ka hinungdanon nga correlation tali sa Ki-67 ug tumor grade. Bisan kung ang pagtimbang-timbang ug interpretasyon sa Ki-67 nagpabilin nga kontrobersyal, sigurado nga ang taas nga proliferative rates nalangkit sa dugang nga risgo sa pagbalik sa sakit ug pagkunhod sa survival rate. Hangtod karon, ang cutoff alang sa pag-ila tali sa "taas" ug "ubos" nga Ki-67 kay 20%. Bisan pa, kini nga threshold wala magamit sa among populasyon sa pasyente nga adunay BRCA1/2 mutation, nga adunay median nga kantidad sa Ki-67 nga 25%. Kini nga trend sa taas nga Ki-67 rates mahimong ipasabut sa prevalence sa among luminal B ug TNBC cohorts, diin pipila ra ang mga tumor sa luminal A. Bisan pa, ang pipila ka ebidensya daw nagsugyot nga ang mas taas nga Ki-67 cutoff (25-30%) mahimong mas maayo nga mag-stratify sa mga pasyente sumala sa ilang prognosis.53,54 Gikan sa mga resulta sa among pag-analisa, ang usa ka hinungdanon nga correlation dili ikatingala. Nahitabo tali sa taas nga Ki-67 ug mga grado ug ang presensya sa BRCA1 PV. Sa tinuod lang, ang mga tumor nga may kalabutan sa BRCA1 tipikal sa TNBC ug nagpakita og mas agresibo nga mga bahin.16,17
Sa konklusyon, kini nga pagtuon naghatag ug report bahin sa mutational status sa BRCA1/2 sa usa ka BC cohort gikan sa silangang Sicily. Sa kinatibuk-an, ang among mga nahibal-an nahiuyon sa nauna nang ebidensya, sa mga termino sa prevalence sa mutation ug clinicopathological features sa BC. Dugang nga mga pagtuon sa mas dagkong populasyon sa mga pasyente sa BRCA1/2-mutant BC, sama sa paggamit sa multigenome expanded mutational analysis, ang gikinahanglan aron masusi ang presensya sa mga PV nga lahi ug dili kaayo kanunay kaysa BRCA1/2. Kini magtugot sa pag-ila ug hustong pagdumala sa nagkadaghan nga mga subject nga adunay dugang nga risgo sa kanser tungod sa genetic mutations.
Among gikumpirma nga ang mga pasyente mipirma og informed consent aron ipagawas ang ilang mga sample sa tumor nga dili magpaila alang sa katuyoan sa panukiduki. Ang tanan nga mga pasyente mipirma og sinulat nga informed consent sumala sa Deklarasyon sa Helsinki. Sumala sa palisiya sa AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco”, kini nga pagtuon wala iapil sa ethical review tungod kay ang BRCA1/2 analysis gihimo sumala sa clinical practice ug ang tanan nga mga pasyente mihatag og sinulat nga informed consent. Ang mga pasyente miuyon usab sa paggamit sa ilang datos alang sa mga katuyoan sa panukiduki.
Nagpasalamat kami kang Prof. Paolo Vigneri sa iyang tabang sa pag-atiman sa mga pasyente sa kanser sa suso sumala sa gihangyo sa Ethics Committee.
Si Federica Martorana nagtaho sa mga honoraria gikan sa Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Ang ubang mga awtor wala magdeklarar nga walay mga panagbangi sa interes niini nga buhat.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Global Cancer Statistics 2020: Gibanabana sa GLOBOCAN ang insidente ug mortalidad sa 36 ka kanser sa 185 ka mga nasud sa tibuok kalibutan. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660