Javascript är för närvarande inaktiverat i din webbläsare. Vissa funktioner på den här webbplatsen fungerar inte när javascript är inaktiverat.
Registrera dig med dina specifika uppgifter och det specifika läkemedlet du är intresserad av så matchar vi informationen du anger med artiklar i vår omfattande databas och skickar dig omedelbart en PDF-kopia via e-post.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7. Catania, Catania, 95123, Italien;2 Centrum för experimentell onkologi och hematologi, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italien; 3 Medical Oncology, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italien; 4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italien; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italien; 6 Institutionen för biomedicinska och biotekniska vetenskaper, Catanias universitet, Medicinsk genetik, Catania, Italien, 95123; 7 Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italien Kommunikation: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, e-post [email protected]; [email protected] Syfte: Mutationer i könscellerna i BRCA1 och BRCA2 samt etablerad bröstcancer (BC), äggstockscancer (OC) och andra cancerformer som är förknippade med livstidsrisk för cancer. Testning av BRCA-genen är nyckeln till att bedöma individuell risk, samt för att hitta förebyggande metoder hos friska bärare och skräddarsy behandlingar hos cancerpatienter. Förekomsten av BRCA1- och BRCA2-förändringar varierar kraftigt mellan geografiska regioner, och även om det finns data om patogena BRCA-varianter i sicilianska familjer, saknas studier som specifikt riktar sig till populationer i östra Sicilien. Syftet med vår studie var att undersöka incidensen och distributionen av patogena BRCA-förändringar i könscellerna i en kohort av BC-patienter från östra Sicilien och att bedöma deras samband med specifika BC-egenskaper med hjälp av nästa generations sekvensering. Förekomsten av förändringar korrelerade med tumörgrad och proliferationsindex. RESULTAT: Totalt sett hade 35 patienter (9 %) en patogen BRCA-variant, 17 (49 %) i BRCA1 och 18 (51 %) i BRCA2. BRCA1-förändringar är vanligare hos trippelnegativa BC-patienter, medan BRCA2-mutationer är vanligare hos luminala BC-patienter. Jämfört med icke-bärare hade försökspersoner med BRCA1-varianter signifikant högre tumörgrad och proliferativt index. Slutsatser: Våra resultat ger en översikt över BRCA-mutationsstatus hos brystcancerpatienter från östra Sicilien och bekräftar rollen av NGS-analys för att identifiera patienter med ärftlig brystcancer. Sammantaget överensstämmer dessa data med tidigare bevis som stöder BRCA-screening för korrekt förebyggande och behandling av cancer hos mutationsbärare.
Bröstcancer (BC) är den vanligaste maligniteten i världen och den dödligaste cancerformen hos kvinnor.1 De biologiska egenskaper som avgör prognos och kliniskt beteende för BC har studerats ingående och delvis klargjorts över tid. Faktum är att flera surrogatmarkörer för närvarande används för att klassificera BC i olika molekylära subtyper. De är östrogen (ER) och/eller progesteronreceptor (PgR), human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) amplifiering, proliferationsindex Ki-67 och tumörgrad (G).2 Kombinationen av dessa variabler identifierade följande BC-kategorier: 1) Luminala tumörer, som uppvisade ER- och/eller PgR-uttryck, stod för 75 % av BC. Dessa tumörer delades vidare in i Luminal A, när Ki-67 var under 20 % och HER2-negativ, och Luminal B, när Ki-67 var lika med eller över 20 % och i närvaro av HER2-amplifiering, oavsett proliferationsindex; 2) HER2+ tumörer som är ER- och PgR-negativa men uppvisar HER2-amplifiering. Denna grupp står för 10 % av alla brösttumörer; 3) Trippelnegativ bröstcancer (TNBC), som inte uppvisar ER- och PgR-uttryck och HER2-amplifiering, står för cirka 15 % av bröstcancerfallen.2-4
Bland dessa BC-subtyper representerar tumörgrad och proliferationsindex tvärsnittsbiomarkörer som är direkt och oberoende associerade med tumöraggressivitet och prognos.5,6
Utöver de ovannämnda biologiska egenskaperna har rollen av ärftliga genetiska förändringar som leder till utvecklingen av bröstcancer blivit allt viktigare under de senaste åren.7 Ungefär 1 av 10 brösttumörer ärvs på grund av förändringar i specifika gener i könscellerna.8 Två stora epidemiologiska studier med mer än 180 000 kvinnor har nyligen identifierat en grupp av åtta gener (dvs. ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C och RAD51D) som huvudsakligen är ansvariga för ärftlig bröstcancer. Bland dessa gener visade BRCA1 och BRCA2 (nedan kallat BRCA1/2) den starkaste korrelationen med utvecklingen av brösttumörer.9-12 Faktum är att BRCA1/2-mutationer i könscellerna ökar livstidsrisken för bröstcancer såväl som andra maligniteter, inklusive äggstocks-, prostata-, pankreas-, kolorektal- och melanom. Från 13 till 80 års ålder är den kumulativa incidensen av bröstcancer 72 % hos kvinnor med en patogen BRCA1-variant (PV) och 69 % hos kvinnor med en BRCA2-variant. PV.14
Det är värt att notera att en nyligen publicerad publikation antyder att risken för bröstcancer beror på typen av PV. Faktum är att i jämförelse med patogena trunkerande varianter är tydliga missense-varianter, särskilt i BRCA1-genen, associerade med en minskad risk för bröstcancer, särskilt hos äldre kvinnor.15
Närvaron av BRCA1- eller BRCA2-PV associerades med olika biologiska och klinisk-patologiska egenskaper.16,17 BRCA1-associerade basalcellsceller tenderar att vara kliniskt aggressiva, dåligt differentierade och mycket proliferativa. Dessa tumörer är vanligtvis trippelnegativa och har en tidig debutålder. Tumörer som förekommer hos BRCA2-muterade patienter uppvisar vanligtvis måttliga till väldifferentierade grader och varierande proliferativa index. Dessa tumörer är vanligare i lumen B och förekommer vanligtvis hos äldre vuxna.16-18 Det är värt att notera att mutationer i BRCA1 och BRCA2 ökar känsligheten för specifika behandlingar, inklusive platinasalter och riktade läkemedel såsom poly(ADP-ribos)polymerashämmare (PARPi).19,20
Under de senaste åren har implementeringen av nästa generations sekvensering (NGS) i klinisk praxis möjliggjort för ett ökande antal bröstcancerpatienter att genomgå molekylär testning för cancerkänslighetssyndrom, inklusive BRCA1/2.21 Samtidigt används definitioner baserade på exakta kriterier gällande familjehistoria, demografiska och klinisk-patologiska egenskaper för att bättre identifiera individer som är värda BRCA1/2-testning.22,23 I detta sammanhang ackumuleras bevis för BRCA1/2-screening i specifika populationer, vilket belyser skillnader mellan geografiska regioner.24–27 Även om det finns rapporter om BC-kohorten på västra Sicilien, finns färre data tillgängliga om BRCA1/2-screening i befolkningen på östra Sicilien.28,29
Vi beskriver här resultaten av screening av BRCA1/2-bakteriellt ursprung hos patienter med bröstcancer från östra Sicilien, och korrelerar ytterligare förekomsten av BRCA1- eller BRCA2-mutationer med de viktigaste klinisk-patologiska egenskaperna hos dessa tumörer.
En retrospektiv studie genomfördes vid "Centrum för experimentell onkologi och hematologi" på Policlinico Hospital. Rodolico – San Marco i Catania. Från januari 2017 till mars 2021 remitterades totalt 455 patienter med bröst- och äggstockscancer, melanomcancer, pankreascancer eller prostatacancer till vårt molekylärdiagnostiska laboratorium för BRCA/2-gentestning. Denna studie genomfördes i enlighet med Helsingforsdeklarationen, och alla deltagare gav skriftligt informerat samtycke före molekylär analys.
Histologiska och biologiska egenskaper (ER, PgR, HER2-status, Ki-67 och grad) av bröstcancer bedömdes på kärnbiopsi eller kirurgiska prover, med endast beaktande av aggressiva tumörkomponenter. Baserat på dessa egenskaper klassificerades bröstcancer enligt följande: luminal A (ER+ och/eller PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ och/eller PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER och/eller PgR+, HER2+), HER2+ (ER och PgR-, HER2+) eller trippelnegativ (ER och PgR-, HER2-).
Innan bedömningen av BRCA1- och BRCA2-mutationsstatus genomförde ett tvärvetenskapligt team bestående av en onkolog, en genetiker och en psykolog en tumörgenetisk konsultation för varje patient för att fastställa förekomsten av BRCA1 och/eller BRCA1, eller individer med hög risk för PV i BRCA2-genen. Patienturval utfördes enligt riktlinjerna från italienska sällskapet för medicinsk onkologi (AIOM) och lokala sicilianska rekommendationer.30,31 Dessa kriterier inkluderar: (i) familjehistoria med kända patogena varianter i mottaglighetsgener (t.ex. BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) män med bröstcancer; (iii) de med bröstcancer och okulär beläggning (OC); (iv) kvinnor med bröstcancer <36 år, transmucinös bröstcancer <60 år eller bilateral bröstcancer <50 år; (v) personlig sjukdomshistoria med bröstcancer <50 år och minst en första gradens släkting: (a) bröstcancer < 50 år; (b) icke-mucinös och icke-borderline okulär beläggning i alla åldrar; (c) bilateral bröstcancer; (d) manlig bröstcancer; (e) bukspottkörtelcancer; (f) prostatacancer; (vi) två eller fler personliga anamneser på bröstcancer > 50 år och familjehistoria av bröstcancer, okulär beläggning (OC) eller bukspottkörtelcancer för släktingar som är första gradens släktingar till varandra (inklusive släktingar som hon är första gradens släkting med); (vii) personlig anamnes på okulär beläggning och minst en första gradens släkting: (a) bröstcancer <50 år; (b) icke-okulär beläggning (NOC); (c) bilateral bröstcancer; (d) manlig bröstcancer; (vii) kvinna med höggradig serös okulär beläggning.
Ett perifert blodprov på 20 ml togs från varje patient och samlades in i EDTA-rör (BD Biosciences). Genomiskt DNA isolerades från 0,7 ml helblodsprover med hjälp av QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italien) enligt tillverkarens instruktioner och fick passera genom en Qubit® 3.0 fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Kvantifiering genomfördes. Målanrikning och biblioteksberedning utförs av Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, redo att laddas i Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit för automatiserad biblioteksberedning enligt tillverkarens instruktioner. Kitet består av två multiplex PCR-primerpooler som kan användas för att studera alla BRCA1 (NM_007300.3) och BRCA2 (NM_000059.3) gener. Kortfattat tillsattes 15 µL av varje utspätt prov-DNA (10 ng) till streckkodade plattor för biblioteksberedning och alla reagenser och förbrukningsartiklar laddades på Ion Chef™-instrumentet. Automatiserad biblioteksberedning och streckkodad provbibliotekspoolning utfördes sedan på Ion Chef™-instrumentet. Antalet preparerade bibliotek bedömdes sedan med en Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) enligt tillverkarens instruktioner. Slutligen kombineras biblioteken i ekvimolära förhållanden i Ion Chef™-biblioteksprovrör (streckkodade rör) och laddades på Ion Chef™-instrumentet. Sekvensering utfördes med ett Ion Torrent S5-instrument (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) med ett Ion 510-chip (Thermo Fisher Scientific). Dataanalys utfördes med Amplicon Suite (SmartSeq srl) och Ion Reporter Software.
All variantnomenklatur följde de aktuella riktlinjerna från Human Genome Variation Consortium, tillgängliga online (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Den kliniska signifikansen av BRCA1/2-varianter definierades med hjälp av klassificeringen från International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) och genom att konsultera olika databaser som ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD och UMD. Klassificeringen inkluderar fem distinkta riskkategorier: benign (kategori I), sannolikt benign (kategori II), variant av osäker signifikans (VUS, kategori III), sannolikt patogen (kategori IV) och patogen (kategori V). VarSome analyserade också effekten av mutationer på proteinstruktur och funktion, ett informativt verktyg med tillgång till 30 databaser.32
För att tilldela potentiell klinisk signifikans till varje VUS användes följande beräkningsalgoritmer för proteinprediktion: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) och Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Varianter klassificerade som klass 1 och 2 ansågs vara vildtyp.
Sanger-sekvensering bekräftade närvaron av varje patogen variant. Kortfattat utformades ett par specifika primers för varje detekterad variant med hjälp av BRCA1- och BRCA2-genreferenssekvenserna (NG_005905.2, NM_007294.3 respektive NG_012772.3, NM_000059.3). Därför utfördes riktad PCR följt av Sanger-sekvensering.
Patienter som testade negativt för BRCA1/2-genen testades med multiplexligationsberoende probamplifiering (MLPA) enligt tillverkarens instruktioner för att bedöma förekomsten av stora genomiska omarrangemang (LGR). Kortfattat denatureras DNA-prover och upp till 60 BRCA1- och BRCA2-genspecifika prober används, där var och en detekterar en specifik DNA-sekvens som är cirka 60 nukleotider lång. Probamplifieringsprodukter, bestående av en unik uppsättning PCR-amplikoner, analyserades sedan med kapillärelektrofores och med Cofalyser.Net-programvara i samband med lämpliga batchspecifika Cofalyser-tabeller (www.mrcholland.com).
Utvalda klinisk-patologiska variabler (histologisk grad och Ki-67% proliferationsindex) associerades med förekomsten av BRCA1/2 PV, beräknat med hjälp av Prism-mjukvaran v. 8.4 med Fishers exakta test under antagandet att p-värdet <0,05 var signifikant.
Mellan januari 2017 och mars 2021 screenades 455 patienter för BRCA1/2-mutationer i könsceller. Mutationstestning utfördes vid Policlinico Hospitals centrum för experimentell onkologi och hematologi. Enligt den sicilianska riktlinjen (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020) hade Rodolico i Catania – San Marco totalt 389 patienter. Det fanns bröstcancer, 37 äggstockscancer, 16 bukspottkörtelcancer, 8 prostatacancer och 5 melanom. Fördelningen av patienter enligt cancertyp och analysresultat visas i figur 1.
Figur 1 visar ett flödesschema som visar en översikt över studien. Patienter med bröst-, melanom-, pankreastumör-, prostatatumör- eller äggstockstumörer testades för mutationer i BRCA1- och BRCA2-generna.
Förkortningar: PV, patogen variant; VUS, variant av osäker signifikans; WT, vildtyp BRCA1/2-sekvens.
Vi fokuserade selektivt våra studier på bröstcancerkohorter. Patienterna hade en medianålder på 49 år (intervall 23–89) och var övervägande kvinnor (n=376, eller 97 %).
Av dessa försökspersoner hade 64 (17 %) BRCA1/2-mutationer och alla var kvinnor. Trettiofem (9 %) hade PV och 29 (7,5 %) hade VUS. Sjutton (48,6 %) av de 35 patogena varianterna förekom i BRCA1 och 18 (51,4 %) i BRCA2, medan 5 VUS förekom i BRCA1 (17,2 %) och 24 (82,8 %) i BRCA2 (Figur 1 och 2). LGR fanns inte i MLPA-analysen.
Figur 2. Analys av BRCA1- och BRCA2-mutationer hos 389 bröstcancerpatienter. (A) Fördelning av patogena varianter (PV) (röd), varianter av osäker betydelse (VUS) (orange) och WT (blå) hos 389 bröstcancerpatienter; (B) 389 bröstcancerpatienter. Trettiofem (9 %) hade patogena varianter (PV) av BRCA1/2. Bland dem var 17 (48,6 %) bärare av BRCA1 PV (mörkröd) och 18 (51,4 %) BRCA2-bärare (ljusröd); (C) 29 (7,5 %) av 389 försökspersoner bar på VUS, 5 (17,2 %) BRCA1-gener (mörkorange) och 24 (82,8 %) BRCA2-gener (ljusorange).
Förkortningar: PV, patogen variant; VUS, variant av osäker signifikans; WT, vildtyp BRCA1/2-sekvens.
Vi undersökte sedan prevalensen av molekylära subtyper av BC hos patienter med BRCA1/2 PV. Fördelningen inkluderade 2 (5,7 %) luminal A, 15 (42,9 %) luminal B, 3 (8,6 %) luminal B-HER2+, 2 (5,7 %) HER2+ och 13 (37,1 %) TNBC-patienter. Bland BRCA1-positiva patienter hade 5 (29,4 %) luminal B BC, 2 (11,8 %) hade HER2+ sjukdom och 10 (58,8 %) hade TNBC. Tumörer utan BRCA1-mutationer var antingen luminal A eller luminal B-HER2+ (Figur 3). I den BRCA2-positiva subgruppen var 10 (55,6 %) tumörer luminal B, 3 (16,7 %) var luminal B-HER2+, 3 (16,7 %) TNBC och 2 (11,1 %) var luminal A (Figur 3). Inga HER2+ tumörer fanns i denna grupp. Således är BRCA1-mutationer vanliga hos TNBC-patienter, medan BRCA2-förändringar är dominerande hos individer med lumen B.
Figur 3 Förekomst av bröstcancersubtyper hos patienter med patogena varianter i BRCA1 och BRCA2. Histogram som visar fördelningen av BRCA1- (mörkröd) och BRCA2- (ljusröd) PV bland molekylära subtyper av bröstcancerpatienter. Siffror som rapporteras i varje ruta representerar andelen patienter med BRCA1- och BRCA2-PV för varje bröstcancersubtyp.
Förkortningar: PV, patogen variant; HER2+, human epidermal growth factor receptor 2 positiv; TNBC, trippelnegativ bröstcancer.
Därefter utvärderade vi typen och genlokaliseringen av BRCA1- och BRCA2-PV. I BRCA1-PV observerade vi 7 enstaka nukleotidvarianter (SNV), 6 deletioner, 3 duplikationer och 1 insertion. Endast en mutation (c.5522delG) representerar en ny upptäckt. Den vanligaste BRCA1-PV som detekterades hos båda försökspersonerna var c.5035_5039delCTAAT. Denna förändring involverar en deletion av fem nukleotider (CTAAT) i BRCA1 exon 15, vilket resulterar i substitution av aminosyran leucin med tyrosin vid kodon 1679, och på grund av en translationsramskiftning med ett förutsagt alternativt stoppkodon leder det till för tidig proteintrunkering. Alla andra förändringar detekteras endast i ett fall. Det är värt att notera att en av de rapporterade PV:erna var belägen i splitsningsställets konsensusregion (c.4357+1G>T) (tabell 1).
Beträffande BRCA2 PV observerade vi 6 deletioner, 6 SNV och 2 duplikationer. Inga av de funna förändringarna är nya. Tre mutationer återkom i vår population, c.428dup och c.8487+1G>A observerades hos 3 försökspersoner, följt av c.5851_5854delAGTT som hittades i två fall. c.428dup-förändringen involverar en upprepning av C i exon 5 av BRCA2, vilket förutspås koda för ett trunkerat, icke-funktionellt protein. c.8487+1G>A-mutationen inträffar i den introniska regionen av BRCA2 intron 19 (± 1,2) och påverkar splitsningskonsensussekvensen, vilket resulterar i förändrad splitsning som resulterar i onormalt eller frånvarande protein. Den patogena varianten c.5851_5854delAGTT beror på en 4-nukleotiddeletion från nukleotidpositionerna 5851 till 5854 i det kodande exon 10 av BRCA2-genen och resulterar i en translationell läsramsförskjutning med ett förutsagt alternativt stoppkodon (p.S1951WfsTer). Det är värt att notera, som tidigare rapporterats, att båda förändringarna c.631G>A och c.7008-2A>T detekterades hos samma patient.34 Den första mutationen involverar ersättningen av adenosin (A) i BRCA2 exon 7 med en guanin (G)-innehållande nukleotid, vilket resulterar i en förändring av valin till isoleucin vid kodon 211. Isoleucinaminosyra är en aminosyra med mycket liknande egenskaper. Denna förändring påverkar normal mRNA-splitsning. Den andra varianten är belägen i en intronisk region och resulterar i en dubbel A- till tymin (T)-substitution före exon 13 av genen som kodar för BRCA2. Förändringen c.7008-2A>T kan generera flera transkript av olika längder. Dessutom, i gruppen av BRCA2 PV, var 4 av 18 förändringar (22,2%) introniska.
Vi kartlade sedan skadliga BRCA1/2-mutationer i funktionella domäner och proteinbindande regioner (Fig. 4). I BRCA1-genen var 50 % av PV:erna belägna i bröstcancerklusterregionen (BCCR), medan 22 % av mutationerna var belägna i äggstockscancerklusterregionen (OCCR) (Fig. 4A). I ​​BRCA2 PV var 35,7 % av varianterna belägna i BCCR-regionen och 42,8 % av mutationerna var belägna i OCCR (Fig. 4B). Därefter bedömde vi lokaliseringen av PV inom BRCA1- och BRCA2-proteindomänerna. För BRCA1-proteinet fann vi tre PV i loop- och coiled coil-domänerna, och två mutationer i BRCT-domänen (Fig. 4A). För BRCA2-proteinet mappades 4 PV till BRC-repeatdomänen, medan 3 introniska och 3 exoniska förändringar detekterades i oligo/oligosackaridbindande (OB) och tower-domänerna (T) (Figur 4B).
Figur 4 Schematisk representation av BRCA1- och BRCA2-proteiner och lokalisering av patogena varianter. Denna figur visar fördelningen av patogena varianter av BRCA1 (A) och BRCA2 (B) hos bröstcancerpatienter. Exoniska mutationer visas i blått, medan introniska varianter visas i orange. Stapelhöjden representerar antalet fall. BRCA1- och BRCA2-proteinerna och deras funktionella domäner rapporteras. (A) BRCA1-proteinet innehåller en loopdomän (RING) och en nukleär lokaliseringssekvens (NLS), en coiled-coil-domän, en SQ/TQ-klusterdomän (SCD) och en BRCA1 C-terminal domän (BRCT). (B) BRCA2-proteinet innehåller åtta BRC-upprepningar, en DNA-bindande domän med en spiralformad domän (spiralformad), tre oligonukleotid-/oligosackaridbindande (OB) veck, en torndomän (T) och en NLS på C-sidan. Områden som kallas bröstcancerklusterregionen (BCCR) och äggstockscancerklusterregionen (OCCR) visas längst ner. *Representerar mutationer som bestämmer stopp kodoner.
Vi undersökte sedan klinisk-patologiska egenskaper hos BC som kan korrelera med förekomsten av BRCA1/2 PV. Fullständiga kliniska journaler fanns tillgängliga för 181 BRCA1/2-negativa patienter (icke-bärare) och alla bärare (n = 35). Det fanns en korrelation mellan tumörproliferationshastighet och grad.
Vi beräknade fördelningen av Ki-67 baserat på medianen för vår kohort (25 %, intervall <10–90 %). Försökspersoner med Ki-67 < 25 % definierades som "låg Ki-67", medan individer med värden ≥ 25 % ansågs vara "hög Ki-67". Signifikanta skillnader i Ki-67 (p <0,01) hittades mellan icke-bärare och BRCA1 PV-bärare (Fig. 5A).
Figur 5 Korrelation mellan Ki-67 och gradfördelning hos kvinnor med bröstcancer med och utan BRCA1- och BRCA2-PV. (A) Boxplot som visar median Ki-67-värden hos 181 icke-bärarpatienter med bröstcancer jämfört med patienter med BRCA1- (18) eller BRCA2- (17) PV. P-värden under 0,5 ansågs statistiskt signifikanta. (B) Histogram som representerar indelningen av patienter med bröstcancer i histologiska gradgrupper (G2 och G3) enligt BRCA1- och BRCA2-mutationsstatus (WT-patienter, bärare av BRCA1- och BRCA2-PV).
Likaså undersökte vi om tumörgraden korrelerade med förekomsten av BRCA1/2 PV. Eftersom G1 BC saknades i vår population delade vi in ​​patienterna i två grupper (G2 eller G3). I överensstämmelse med Ki-67-resultaten visade analysen en statistiskt signifikant korrelation mellan tumörgrad och BRCA1-mutation, med en högre andel G3-tumörer hos BRCA1-bärare jämfört med icke-bärare (p < 0,005) (Figur 5B).
Framsteg inom DNA-sekvenseringsteknik har möjliggjort exempellösa framsteg inom BRCA1/2-genetisk testning, med avgörande konsekvenser för patienter med cancer i familjen. Hittills har cirka 20 000 BRCA1/2-varianter identifierats och klassificerats enligt American Society of Medical Genetics 35 och ENIGMA-systemet. 35,36 Det är välkänt att BRCA1/2-mutationsspektrumet varierar kraftigt mellan geografiska regioner. 37 Inom Italien varierade andelen BRCA1/2-PV från 8 % till 37 %, vilket visar stor variation inom landet. 38,39 Med en befolkning på nästan 5 miljoner är Sicilien den femte största regionen i Italien sett till antalet invånare. Även om det finns data om distributionen av BRCA1/2 på västra Sicilien, finns det inga omfattande bevis i den östra delen av ön.
Vår studie är en av de första rapporterna om incidensen av BRCA1/2 PV hos patienter med bröstcancer i östra Sicilien.28 Vi fokuserade vår analys på bröstcancer, eftersom detta är den absolut vanligaste sjukdomen i vår kohort.
Vid testning av 389 bröstcancerpatienter bar 9 % på BRCA1/2-PV, jämnt fördelat mellan BRCA1 och BRCA2. Dessa resultat överensstämmer med de som tidigare rapporterats i den italienska befolkningen.28 Intressant nog var 3 % (13/389) av vår kohort män. Denna andel är högre än förväntat för manlig bröstcancer (1 % av alla bröstcancer),40 vilket återspeglar vårt urval av populationer baserat på BRCA1/2-mutationsrisk. Ingen av dessa män utvecklade dock en BRCA1/2-PV, så de var kandidater för ytterligare molekylär analys för att utesluta förekomsten av mindre vanliga mutationer såsom PALB2, RAD51C och D, bland andra. Varianter av osäker signifikans hittades hos 7 % av försökspersonerna där BRCA2 VUS var uppenbar. Även detta resultat överensstämmer med redan existerande bevis.28,41,42
När vi analyserade fördelningen av BC-molekylära subtyper hos kvinnor med BRCA1/2-mutation bekräftade vi kända samband mellan TNBC och BRCA1 PV (58,8 %) och mellan luminal B BC och BRCA2 PV (55,6 %).16,43 Luminal A- och HER2+-tumörerna hos BRCA1- och BRCA2 PV-bärare överensstämmer med befintliga litteraturdata.16,43
Vi fokuserar sedan på typen och lokaliseringen av BRCA1/2 PV. I vår kohort var den vanligaste BRCA1 PV c.5035_5039delCTAAT. Även om Incorvaia et al. inte beskrev denna variant i sin sicilianska kohort, har andra författare rapporterat den som en BRCA1 PV i könscellerna.34 Flera BRCA1 PV hittades i vår kohort – t.ex. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA och c.5266dupC – vilka har observerats på Sicilien.28 Av dessa är två BRCA1-grundmutationer (c.181T>G och c.5266dupC) vanliga hos ashkenaziska judar i Öst- och Centraleuropa (Polen, Tjeckien), Slovenien, Österrike, Ungern, Vitryska och Tyskland),44,45 och definierades i USA och Argentina nyligen som en "återkommande könscellsvariant" hos italienska patienter med bröstcancer och okulär beta-cellscancer.34c.514del-varianten identifierades tidigare hos 8 bröstcancerpatienter från norra Sicilien i Palermo och Messina.Intressant nog, även Incorvaia et al. fann c.3253dupA-varianten i vissa familjer i Catania.28 De mest representativa BRCA2-PV:erna är c.428dup, c.5851_5854delAGTT och den introniska varianten c.8487+1G>A, vilka har rapporterats mer detaljerat28 hos en patient i Palermo med c.428dup, c.5851_5854delAGTT. PV observerades i hushåll i nordvästra Sicilien, främst i regionerna Trapani och Palermo, medan c.5851_5854delAGTT observerades i hushåll i nordvästra Sicilien. Varianten 8487+1G>A var vanligare hos personer från Messina, Palermo och Caltanissetta.28 Rebbeck et al. tidigare beskrivit c.5851_5854delAGTT-förändringen i Colombia.37 En annan BRCA2 PV, c.631+1G>A, har hittats hos patienter med BC och OC från Sicilien (Agrigento, Siracusa och Ragusa).28 Det är värt att notera att vi observerade samexistensen av två BRCA2-varianter (BRCA2 c.631G>A och c.7008-2A>T) hos samma patient, vilka vi antog var segregerade i cis-läge, vilket tidigare rapporterats på det sättet.34,46 Dessa BRCA2-dubbelmutationer observeras faktiskt ofta i den italienska regionen och har visat sig introducera för tidiga stoppkodoner, vilket påverkar budbärar-RNA-splitsning och orsakar att BRCA2-proteinet slutar fungera.47,48
Vi kartlade även BRCA1- och BRCA2-PV i förmodade OCCR- och BCCR-regioner i proteindomäner och gener. Dessa regioner beskrevs av Rebbeck et al. som riskområden för att utveckla äggstockscancer respektive bröstcancer.49 Emellertid är bevisen gällande sambandet mellan lokaliseringen av groddvarianter och risken för bröst- eller äggstockscancer fortfarande kontroversiella.28,50-52 I vår population var BRCA1-PV huvudsakligen belägna i BCCR-regionen, medan BRCA2-PV huvudsakligen var belägna i OCCR-regionen. Vi kunde dock inte hitta något samband mellan förmodade OCCR- och BCCR-regioner och BC-funktioner. Detta kan bero på det begränsade antalet patienter med BRCA1/2-mutationer. Ur ett proteindomänperspektiv är BRCA1-PV fördelade längs hela proteinet, och BRCA2-förändringar finns företrädesvis i BRC-repetitionsdomänen.
Slutligen korrelerade vi klinisk-patologiska egenskaper hos BC med BRCA1/2 PV. På grund av det begränsade antalet inkluderade patienter fann vi endast en signifikant korrelation mellan Ki-67 och tumörgrad. Även om bedömningen och tolkningen av Ki-67 fortfarande är något kontroversiell, är det säkert att höga proliferationsfrekvenser är förknippade med ökad risk för återfall av sjukdomen och minskad överlevnad. Hittills är gränsvärdet för att skilja mellan "hög" och "låg" Ki-67 20 %. Detta tröskelvärde gäller dock inte för vår patientpopulation med BRCA1/2-mutationer, som har ett median-Ki-67-värde på 25 %. Denna trend i höga Ki-67-frekvenser kan förklaras av prevalensen i våra luminala B- och TNBC-kohorter, av vilka få luminala A-tumörer var närvarande. Vissa bevis tyder dock på att ett högre Ki-67-gränsvärde (25–30 %) bättre kan stratifiera patienter enligt deras prognos.53,54 Utifrån resultaten av vår analys är en signifikant korrelation inte förvånande. Förekommer mellan höga Ki-67-grader och förekomsten av BRCA1. PV. Faktum är att BRCA1-relaterade tumörer är typiska för TNBC och uppvisar mer aggressiva egenskaper.16,17
Sammanfattningsvis ger denna studie en rapport om mutationsstatusen för BRCA1/2 i en BC-kohort från östra Sicilien. Sammantaget överensstämmer våra resultat med redan existerande bevis, både vad gäller mutationsprevalens och klinisk-patologiska egenskaper vid BC. Fler studier i större populationer av BRCA1/2-muterade BC-patienter, såsom användning av multigenom-expanderad mutationsanalys, är motiverade för att bedöma förekomsten av PV som är distinkta och mindre frekventa än BRCA1/2. Detta kommer att möjliggöra identifiering och korrekt hantering av det ökande antalet individer med ökad risk för cancer på grund av genetiska mutationer.
Vi bekräftade att patienterna hade skrivit under ett informerat samtycke till att lämna ut sina tumörprover anonymt för forskningsändamål. Alla patienter skrev under ett skriftligt informerat samtycke i enlighet med Helsingforsdeklarationen. Enligt AOU Policlinicos policy "G.Rodolico – S.Marco" undantogs denna studie från etisk granskning eftersom BRCA1/2-analysen utfördes enligt klinisk praxis och alla patienter gav ett skriftligt informerat samtycke. Patienterna samtycker också till att deras data används för forskningsändamål.
Vi tackar professor Paolo Vigneri för hans hjälp med vården av bröstcancerpatienter enligt etikkommitténs begäran.
Federica Martorana rapporterar arvoden från Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis och Pfizer. De andra författarna deklarerar inga intressekonflikter i detta arbete.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Global Cancer Statistics 2020: GLOBOCAN uppskattar incidensen och dödligheten för 36 cancerfall i 185 länder runt om i världen. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249. doi: 10.3322/caac.21660