Javascript у цяперашні час адключаны ў вашым браўзеры. Некаторыя функцыі гэтага сайта не будуць працаваць, калі javascript адключаны.
Зарэгіструйцеся, указаўшы свае канкрэтныя дадзеныя і канкрэтны прэпарат, які вас цікавіць, і мы супаставім прадстаўленую вамі інфармацыю з артыкуламі ў нашай шырокай базе дадзеных і неадкладна дашлем вам копію ў фармаце PDF па электроннай пошце.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Стэфанія Стэла, 1,2 Сільвія Рыта Вітале, 1,2 Федэрыка Мартарана, 1,2 Мікеле Масіміна, 1,2 Джуліяна Павоне, 3 Каця Ланцафаме, 3 Себасцьяна Б'янка, 4 К'яра Бароне, 5 Крысціна Гаргоне, 6 Марка Фічэра, 6, 7 Лівія Манцэла1,21 Дэпартамент клінічнай і Эксперыментальная медыцына, Універсітэт Катаніі, Катанія, 95123, Італія; 2 Цэнтр эксперыментальнай анкалогіі і гематалогіі, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Катанія, 95123, Італія; 3 Medical Oncology, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Катанія, 95123, Італія; 4 Медыцынская генетыка, ARNAS Garibaldi, Катанія, 95123, Італія; 5 Medicine Genetics, ASP, Сіракузы, 96100, Італія; 6 Кафедра біямедыцынскіх і біятэхналагічных навук, Універсітэт Катаніі, медыцынская генетыка, Катанія, Італія, 95123; 7 Навукова-даследчы інстытут Oasi - IRCCS, Троіна, 94018, Італія Сувязь: Стэфанія Стэла, тэл. +39 095 378 1946, электронная пошта [email protected]; [email protected] Мэта: Мутацыі зародкавай лініі ў генах BRCA1 і BRCA2 і ўсталяваны рак малочнай залозы (РМЗ), яечнікаў (ЯЯ) і іншыя, звязаныя з пажыццёвай рызыкай раку. Тэставанне на ген BRCA мае ключавое значэнне для ацэнкі індывідуальнай рызыкі, а таксама для пошуку метадаў прафілактыкі ў здаровых носьбітаў і адаптацыі лячэння для анкалагічных пацыентаў. Распаўсюджанасць змяненняў BRCA1 і BRCA2 моцна адрозніваецца ў розных геаграфічных рэгіёнах, і, хоць існуюць дадзеныя аб патагенных варыянтах BRCA ў сіцылійскіх сем'ях, даследаванняў, спецыяльна накіраваных на папуляцыі ва ўсходняй Сіцыліі, не хапае. Мэтай нашага даследавання было вывучыць частату і распаўсюджванне патагенных змяненняў зародкавай лініі BRCA ў кагорце пацыентаў з РМЗ з усходняй Сіцыліі і ацаніць іх сувязь са спецыфічнымі прыкметамі РМЗ з выкарыстаннем секвенавання наступнага пакалення. Наяўнасць змяненняў карэлявала са ступенню пухліны і індэксам праліферацыі. ВЫНІКІ: У цэлым, 35 ​​пацыентаў (9%) мелі патагенны варыянт BRCA, 17 (49%) - BRCA1 і 18 (51%) - BRCA2. Змены BRCA1 распаўсюджаныя ў пацыентаў з трайным негатыўным РМЗ, тады як мутацыі BRCA2 часцей сустракаюцца ў пацыентаў з прасветным РМЗ. У параўнанні з У пацыентаў з варыянтамі BRCA1, якія не з'яўляюцца носьбітамі, назіралася значна вышэйшая ступень ступені пухліны і праліфератыўны індэкс. Высновы: Нашы вынікі даюць агляд мутацыйнага статусу BRCA ў пацыентаў з ракам малочнага кішачніка з усходняй Сіцыліі і пацвярджаюць ролю NGS-аналізу ў выяўленні пацыентаў з спадчынным ракам малочнага кішачніка. У цэлым, гэтыя дадзеныя адпавядаюць папярэднім доказам, якія пацвярджаюць правядзенне скрынінга BRCA для належнай прафілактыкі і лячэння раку ў носьбітаў мутацый.
Рак малочнай залозы (РМЗ) — найбольш распаўсюджанае злаякаснае захворванне ў свеце і найбольш смяротны від раку ў жанчын.1 Біялагічныя асаблівасці, якія вызначаюць прагноз і клінічную паводзіны РМЗ, былі шырока вывучаны і часткова высветлены з цягам часу. Фактычна, у цяперашні час выкарыстоўваецца некалькі сурагатных маркераў для класіфікацыі РМЗ на розныя малекулярныя падтыпы. Гэта рэцэптары эстрагену (РЭ) і/або прогестэрону (РГР), ампліфікацыя рэцэптара 2 эпідэрмальнага фактару росту чалавека (HER2), індэкс праліферацыі Ki-67 і ступень пухліны (G).2 Спалучэнне гэтых зменных вызначыла наступныя катэгорыі РМЗ: 1) Пухліны прасвету, якія паказваюць экспрэсію РЭ і/або PgR, складалі 75% РМЗ. Гэтыя пухліны былі далей падзелены на люмінальныя А, калі Ki-67 быў ніжэй за 20% і HER2-адмоўны, і люмінальныя В, калі Ki-67 быў роўны або вышэй за 20% і пры наяўнасці ампліфікацыі HER2, незалежна ад індэкса праліферацыі; 2) HER2+ пухліны, якія з'яўляюцца адмоўнымі па РЭ і PgR, але паказваюць ампліфікацыю HER2. Гэтая група складае 10% усіх пухлін малочнай залозы; 3) Трайны негатыўны рак малочнай залозы (TNBC), які не праяўляе экспрэсіі ER і PgR і ампліфікацыі HER2, складае каля 15% выпадкаў раку малочнай залозы.2-4
Сярод гэтых падтыпаў раку малочнай залозы ступень ступені пухліны і індэкс праліферацыі прадстаўляюць сабой папярочныя біямаркеры, якія непасрэдна і незалежна звязаны з агрэсіўнасцю і прагнозам пухліны.5,6
Акрамя вышэйзгаданых біялагічных асаблівасцей, роля спадчынных генетычных змен, якія прыводзяць да развіцця раку малочнай залозы, стала ўсё больш важнай за апошнія некалькі гадоў.7 Прыкладна 1 з 10 пухлін малочнай залозы перадаецца ў спадчыну з-за змен зародкавай лініі ў пэўных генах.8 Два буйныя эпідэміялагічныя даследаванні, якія ахапілі больш за 180 000 жанчын, нядаўна выявілі групу з васьмі генаў (г.зн. ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C і RAD51D), якія ў першую чаргу адказваюць за спадчынны рак малочнай залозы. Сярод гэтых генаў BRCA1 і BRCA2 (далей BRCA1/2) паказалі найбольш моцную карэляцыю з развіццём пухлін малочнай залозы.9-12 Фактычна, мутацыі зародкавай лініі BRCA1/2 значна павялічваюць рызыку раку малочнай залозы на працягу жыцця, а таксама іншых злаякасных новаўтварэнняў, у тым ліку яечнікаў, прастаты, падстраўнікавай залозы, каларэктальнай кішкі і меланомы. Ва ўзросце ад 13 да 80 гадоў сукупная частата раку малочнай залозы складае 72% у жанчын з патагенным варыянтам (ПВ) BRCA1 і 69% у жанчын з BRCA2. ПВ.14
Варта адзначыць, што нядаўняя публікацыя сведчыць аб тым, што рызыка развіцця РМЖ залежыць ад тыпу паралічу. Фактычна, у параўнанні з патагеннымі ўкаранёнымі варыянтамі, відавочныя міссэнс-варыянты, асабліва ў гене BRCA1, звязаны са зніжэннем рызыкі развіцця РМЖ, асабліва ў пажылых жанчын.15
Наяўнасць паралічаў BRCA1 або BRCA2 асацыявалася з рознымі біялагічнымі і клініка-паталагічнымі асаблівасцямі.16,17 РМЖ, звязаныя з BRCA1, як правіла, клінічна агрэсіўныя, нізкадыферэнцыяваныя і высокапраліфератыўныя. Гэтыя пухліны звычайна патройныя негатыўныя і маюць ранні ўзрост пачатку. Пухліны, якія ўзнікаюць у пацыентаў з мутацыяй BRCA2, звычайна маюць умераную або добра дыферэнцыяваную ступень і зменлівыя праліфератыўныя індэксы. Гэтыя пухліны часцей сустракаюцца ў прасвету B і звычайна сустракаюцца ў пажылых людзей.16-18 Варта адзначыць, што мутацыі ў BRCA1 і BRCA2 павышаюць адчувальнасць да спецыфічных метадаў лячэння, у тым ліку да соляў плаціны і мэтанакіраваных прэпаратаў, такіх як інгібітары полі(АДФ-рыбоза)-палімеразы (PARPi).19,20
За апошнія некалькі гадоў укараненне секвенавання наступнага пакалення (NGS) у клінічную практыку дазволіла ўсё большай колькасці пацыентаў з ракам малочнай залозы (РМЖ) прайсці малекулярнае тэсціраванне на наяўнасць сіндромаў схільнасці да раку, у тым ліку BRCA1/2.21 Адначасова, вызначэнні, заснаваныя на дакладных крытэрыях адносна сямейнага анамнезу, дэмаграфічных і клініка-паталагічнага характару, дазваляюць лепш вызначыць асоб, якія заслугоўваюць тэсціравання на BRCA1/2.22,23 У гэтым кантэксце назапашваюцца дадзеныя аб скрынінгу BRCA1/2 у пэўных папуляцыях, што падкрэслівае адрозненні паміж геаграфічнымі рэгіёнамі.24–27 Нягледзячы на ​​тое, што ёсць паведамленні аб кагорце РМЖ у заходняй Сіцыліі, менш дадзеных даступна аб скрынінгу BRCA1/2 у папуляцыі ўсходняй Сіцыліі.28,29
Тут мы апісваем вынікі скрынінга BRCA1/2 зародкавай лініі ў пацыентаў з ракам малочнага кішачніка з усходняй Сіцыліі, дадаткова карэлюючы наяўнасць мутацый BRCA1 або BRCA2 з асноўнымі клініка-паталагічнымі асаблівасцямі гэтых пухлін.
Рэтраспектыўнае даследаванне было праведзена ў «Цэнтры эксперыментальнай анкалогіі і гематалогіі» пры паліклінічнай бальніцы Радоліка — Сан-Марка ў Катаніі. З студзеня 2017 года па сакавік 2021 года ў нашу малекулярна-дыягнастычную лабараторыю для генетычнага тэставання BRCA/2 было накіравана ў агульнай складанасці 455 пацыентаў з ракам малочнай залозы і яечнікаў, меланомай, падстраўнікавай залозы або прастаты. Гэта даследаванне было праведзена ў адпаведнасці з Хельсінкскай дэкларацыяй, і ўсе ўдзельнікі далі пісьмовую інфармаваную згоду перад малекулярным аналізам.
Гісталагічныя і біялагічныя характарыстыкі (ER, PgR, статус HER2, Ki-67 і ступень) раку малочнай залозы (РМЗ) ацэньваліся на аснове біяпсіі ядраў або хірургічных узораў, улічваючы толькі агрэсіўныя кампаненты пухліны. На падставе гэтых характарыстык РМЗ былі класіфікаваны наступным чынам: люмінальны A (ER+ і/або PgR+, HER2-, Ki-67 <20%), люмінальны B (ER+ і/або PgR+, HER2-, Ki-67 ≥20%), люмінальны B-HER2+ (ER і/або PgR+, HER2+), HER2+ (ER і PgR-, HER2+) або трайны адмоўны (ER і PgR-, HER2-).
Перад ацэнкай статусу мутацый BRCA1 і BRCA2 шматпрофільная каманда, якая ўключала анкалага, генетыка і псіхолага, правяла кансультацыю па генетыцы пухлін для кожнага пацыента, каб вызначыць наяўнасць BRCA1 і/або BRCA1, або асоб з высокай рызыкай паралічу ў гене BRCA2. Адбор пацыентаў праводзіўся ў адпаведнасці з рэкамендацыямі Італьянскага таварыства медыцынскай анкалогіі (AIOM) і мясцовымі сіцылійскімі рэкамендацыямі.30,31 Гэтыя крытэрыі ўключаюць: (i) сямейны анамнез вядомых патагенных варыянтаў генаў успрымальнасці (напрыклад, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) мужчыны з ракам малочнай залозы (РМЗ); (iii) тыя, хто мае РМЗ і рак яйкаклеткі (РАЯ); (iv) жанчыны з РМЗ <36 гадоў, немутацыяй РМЗ <60 гадоў або двухбаковым РМЗ <50 гадоў; (v) асабісты анамнез РМЗ <50 гадоў і хаця б аднаго сваяка першай ступені сваяцтва: (a) РМЗ <50 гадоў; (b) немуцынозны і непамежны РЯ любога ўзросту; (c) двухбаковы РМЗ; (d) мужчынскі РМЗ; (e) рак падстраўнікавай залозы; (f) рак прастаты; (vi) два ці больш выпадкаў раку падстраўнікавай залозы ў асабістым анамнезе > 50 гадоў і сямейны анамнез раку падстраўнікавай залозы, рака яйкаклеткі або рака падстраўнікавай залозы ў сваякоў, якія з'яўляюцца сваякамі першай ступені роднасці адзін аднаму (у тым ліку сваякоў, з якімі яна з'яўляецца сваякамі першай ступені роднасці); (vii) Асабісты анамнез раку падстраўнікавай залозы і хаця б адзін сваяк першай ступені роднасці: (a) рак падстраўнікавай залозы <50 гадоў; (b) неаднародны рак; (c) двухбаковы рак падстраўнікавай залозы; (d) рак падстраўнікавай залозы ў мужчын; (vii) жанчына з серозным ракам падстраўнікавай залозы высокай ступені.
Ад кожнага пацыента быў атрыманы ўзор перыферычнай крыві аб'ёмам 20 мл і сабраны ў прабіркі з ЭДТА (BD Biosciences). Геномную ДНК вылучылі з 0,7 мл узораў цэльнай крыві з выкарыстаннем набору для ізаляцыі QIAsymphony DSP DNA Midi kit (QIAGEN, Хілдэн, Італія) у адпаведнасці з інструкцыямі вытворцы і прапусцілі праз флуарамометр Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Уолтэм, Масачусэтс, ЗША). Правялі колькасную ацэнку. Узбагачэнне мішэняў і падрыхтоўка бібліятэкі выконваюцца з дапамогай Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, гатовых да загрузкі ў набор Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 для аўтаматызаванай падрыхтоўкі бібліятэкі ў адпаведнасці з інструкцыямі вытворцы. Набор складаецца з двух пулаў праймераў для мультыплекснай ПЦР, якія можна выкарыстоўваць для вывучэння ўсіх генаў BRCA1 (NM_007300.3) і BRCA2 (NM_000059.3). Карацей кажучы, 15 мкл кожнага разведзенага ўзору ДНК (10 нг) было дададзена ў штрых-кодаваныя пласціны для падрыхтоўкі бібліятэкі, і ўсе рэагенты і расходныя матэрыялы былі загружаны ў прыбор Ion Chef™. Затым аўтаматызаваная падрыхтоўка бібліятэкі і аб'яднанне штрых-кодаваных узорных бібліятэк былі выкананы на прыборы Ion Chef™. Колькасць падрыхтаваных бібліятэк была ацэнена з дапамогай флуарометра Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Уолтэм, Масачусэтс, ЗША) у адпаведнасці з інструкцыямі вытворцы. Нарэшце, бібліятэкі аб'ядноўваюцца ў эквімалярных суадносінах у прабірках для ўзораў бібліятэкі Ion Chef™ (прабіркі са штрых-кодам) і загружаюцца на прыбор Ion Chef™. Секвенаванне праводзілася з выкарыстаннем прыбора Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) з выкарыстаннем чыпа Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Аналіз дадзеных праводзіўся з дапамогай праграмнага забеспячэння Amplicon Suite (SmartSeq srl) і Ion Reporter.
Усе варыянты наменклатуры адпавядалі дзеючым рэкамендацыям Кансорцыума па варыяцыях геному чалавека, даступным у Інтэрнэце (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Клінічнае значэнне варыянтаў BRCA1/2 было вызначана з выкарыстаннем класіфікацыі Міжнароднага кансорцыума ENIGMA (Сетка, заснаваная на доказах, для інтэрпрэтацыі алеляў мутантаў зародкавай лініі, https://enigmaconsortium.org/) і кансультацый з рознымі базамі дадзеных, такімі як ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD і UMD. Класіфікацыя ўключае пяць розных катэгорый рызыкі: дабраякасныя (катэгорыя I), верагодна дабраякасныя (катэгорыя II), варыянты нявызначанай значнасці (VUS, катэгорыя III), верагодна патагенныя (катэгорыя IV) і патагенныя (катэгорыя V). VarSome таксама прааналізаваў уплыў мутацый на структуру і функцыю бялку, інфарматыўны інструмент з доступам да 30 баз дадзеных.32
Для прысваення патэнцыйнай клінічнай значнасці кожнаму ВУС былі выкарыстаны наступныя вылічальныя алгарытмы прагназавання бялкоў: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) і Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Варыянты, класіфікаваныя як класы 1 і 2, лічыліся дзікім тыпам.
Секвенаванне па Сэнгеру пацвердзіла наяўнасць кожнага патагеннага варыянту. Карацей кажучы, для кожнага выяўленага варыянту была распрацавана пара спецыфічных праймераў з выкарыстаннем эталонных паслядоўнасцей генаў BRCA1 і BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 і NG_012772.3, NM_000059.3 адпаведна). Такім чынам, была праведзена мэтавая ПЦР з наступным секвенаваннем па Сэнгеру.
Пацыенты з адмоўным тэстам на ген BRCA1/2 былі пратэставаны з дапамогай мультыплекснай лігацыйна-залежнай ампліфікацыі зонда (MLPA) у адпаведнасці з інструкцыямі вытворцы для ацэнкі наяўнасці вялікіх геномных перабудоў (LGR). Карацей кажучы, узоры ДНК дэнатуруюцца, і выкарыстоўваецца да 60 спецыфічных для генаў BRCA1 і BRCA2 зондаў, кожны з якіх выяўляе спецыфічную паслядоўнасць ДНК даўжынёй прыблізна 60 нуклеатыдаў. Прадукты ампліфікацыі зонда, якія складаюцца з унікальнага набору ампліконаў ПЦР, затым аналізуюцца з дапамогай капілярнага электрафарэзу і праграмнага забеспячэння Cofalyser.Net у спалучэнні з адпаведнымі спецыфічнымі для партыі табліцамі Cofalyser (www.mrcholland.com).
Абраныя клініка-паталагічныя зменныя (гісталагічная ступень і індэкс праліферацыі Ki-67%) былі звязаны з наяўнасцю BRCA1/2 PV, разлічаных з выкарыстаннем праграмнага забеспячэння Prism версіі 8.4 з выкарыстаннем дакладнага крытэрыя Фішэра, пры ўмове значнасці p-значэння <0,05.
У перыяд з студзеня 2017 года па сакавік 2021 года 455 пацыентаў прайшлі абследаванне на наяўнасць мутацый BRCA1/2 палавай лініі. Тэставанне на мутацыі было праведзена ў Цэнтры эксперыментальнай анкалогіі і гематалогіі паліклінічнай бальніцы. Згодна з сіцылійскімі рэкамендацыямі (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Jannaio 2020), у радзільным шпіталі Катанія-Сан-Марка было апытана ў 389 пацыентаў. Сярод іх быў рак малочнай залозы, у 37 - рак яечнікаў, у 16 ​​- рак падстраўнікавай залозы, у 8 - рак прастаты і ў 5 - меланома. Размеркаванне пацыентаў у залежнасці ад тыпу раку і вынікаў аналізу паказана на малюнку 1.
На малюнку 1 паказана блок-схема, якая адлюстроўвае агляд даследавання. Пацыенткі з пухлінамі малочнай залозы, меланомы, падстраўнікавай залозы, прастаты або яечнікаў былі пратэставаны на мутацыі ў генах BRCA1 і BRCA2.
Скарачэнні: PV — патагенны варыянт; VUS — варыянт нявызначанай значнасці; WT — паслядоўнасць BRCA1/2 дзікага тыпу.
Мы выбарачна сканцэнтравалі нашы даследаванні на кагортах з ракам малочнай залозы. Сярэдні ўзрост пацыентаў склаў 49 гадоў (дыяпазон 23-89), і пераважна гэта былі жанчыны (n=376, або 97%).
З гэтых суб'ектаў 64 (17%) мелі мутацыі BRCA1/2 і ўсе былі жанчынамі. Трыццаць пяць (9%) мелі параліч паралічу, а 29 (7,5%) - мутацыю мутацыі ...
Малюнак 2. Аналіз мутацый BRCA1 і BRCA2 у 389 пацыентак з ракам малочнай залозы. (A) Размеркаванне патагенных варыянтаў (PV) (чырвоны), варыянтаў нявызначанай значнасці (VUS) (аранжавы) і WT (сіні) у 389 пацыентак з ракам малочнай залозы; (B) 389 пацыентак з ракам малочнай залозы Трыццаць пяць (9%) мелі патагенныя варыянты (PV) BRCA1/2. Сярод іх 17 (48,6%) былі носьбітамі PV BRCA1 (цёмна-чырвоны) і 18 (51,4%) былі носьбітамі BRCA2 (светла-чырвоны); (C) 29 (7,5%) з 389 суб'ектаў мелі VUS, 5 (17,2%) генаў BRCA1 (цёмна-аранжавы) і 24 (82,8%) гены BRCA2 (светла-аранжавы).
Скарачэнні: PV — патагенны варыянт; VUS — варыянт нявызначанай значнасці; WT — паслядоўнасць BRCA1/2 дзікага тыпу.
Далей мы даследавалі распаўсюджанасць малекулярных падтыпаў раку малочнай залозы (РМЖ) у пацыентаў з паралічам BRCA1/2. Размеркаванне ўключала 2 (5,7%) пацыентаў з люмінальным тыпам А, 15 (42,9%) з люмінальным тыпам В, 3 (8,6%) з люмінальным тыпам B-HER2+, 2 (5,7%) з HER2+ і 13 (37,1%) пацыентаў з нетрансгенным ракам РМЖ. Сярод пацыентаў з BRCA1-пазітыўнай групай у 5 (29,4%) быў РМЖ тыпу В, у 2 (11,8%) - з HER2+ захворваннем, а ў 10 (58,8%) - з TNBC. Пухліны без мутацый BRCA1 былі альбо люмінальным тыпам А, альбо люмінальным тыпам B-HER2+ (малюнак 3). У падгрупе з BRCA2-пазітыўнай групай 10 (55,6%) пухлін былі тыпу В, 3 (16,7%) - з люмінальным тыпам B-HER2+, 3 (16,7%) з TNBC і 2 (11,1%) - з люмінальным тыпам А (малюнак 3). Пухлін HER2+ не было выяўлена. былі прысутнічалі ў гэтай групе. Такім чынам, мутацыі BRCA1 распаўсюджаныя ў пацыентаў з TNBC, тады як змены BRCA2 пераважаюць у асоб з прасветам B.
Малюнак 3. Распаўсюджанасць падтыпаў раку малочнай залозы ў пацыентаў з патагеннымі варыянтамі BRCA1 і BRCA2. Гістаграмы, якія паказваюць размеркаванне BRCA1- (цёмна-чырвоны) і BRCA2- (светла-чырвоны) паразітаў сярод малекулярных падтыпаў пацыентаў з ракам малочнай залозы. Лічбы, пазначаныя ў кожнай клетцы, адлюстроўваюць працэнт пацыентаў з BRCA1 і BRCA2-паразітамі для кожнага падтыпу раку малочнай залозы.
Скарачэнні: PV — патагенны варыянт; HER2+ — рэцэптар 2 эпідэрмальнага фактару росту чалавека (ERF2) — станоўчы; TNBC — трайны негатыўны рак малочнай залозы.
Пасля гэтага мы ацанілі тып і лакалізацыю генаў PV BRCA1 і BRCA2. У PV BRCA1 мы назіралі 7 аднануклеатыдных варыянтаў (SNV), 6 дэлецый, 3 дуплікацыі і 1 інсерцыю. Толькі адна мутацыя (c.5522delG) прадстаўляе сабой новае адкрыццё. Найбольш распаўсюджаным PV BRCA1, выяўленым у абодвух суб'ектаў, быў c.5035_5039delCTAAT. Гэта змяненне ўключае дэлецыю пяці нуклеатыдаў (CTAAT) у экзоне 15 BRCA1, што прыводзіць да замяшчэння амінакіслаты лейцыну на тыразін у кадоне 1679, і з-за зруху рамкі зчытвання трансляцыі з прагназаваным альтэрнатыўным стоп-кадонам прыводзіць да заўчаснага ўкаранення бялку. Усе астатнія змены выяўлены толькі ў адным выпадку. Характэрна, што адзін з паведамленых PV быў размешчаны ў кансенсуснай вобласці сайта сплайсінгу (c.4357+1G>T) (табліца 1).
Што тычыцца BRCA2 PV, мы назіралі 6 дэлецый, 6 аднануклеатыдных варыяцый (SNV) і 2 дуплікацыі. Ніводная з выяўленых змен не з'яўляецца новай. У нашай папуляцыі паўтарыліся тры мутацыі: c.428dup і c.8487+1G>A назіраліся ў 3 суб'ектаў, а затым c.5851_5854delAGTT была выяўлена ў двух выпадках. Змена c.428dup уключае паўтарэнне C у экзоне 5 BRCA2, які, як мяркуецца, кадуе ўсечаны, нефункцыянальны бялок. Мутацыя c.8487+1G>A адбываецца ў інтронічнай вобласці інтрона 19 BRCA2 (± 1,2) і ўплывае на кансенсусную паслядоўнасць сплайсінгу, што прыводзіць да змены сплайсінгу, што выклікае анамальны або адсутны бялок. Патагенны варыянт c.5851_5854delAGTT абумоўлены 4-нуклеатыднай дэлецыяй з нуклеатыдных пазіцый 5851 па 5854 у кадуючым экзоне 10 гена BRCA2 і прыводзіць да трансляцыі. зрух рамкі зчытвання з прагназаваным альтэрнатыўным стоп-кадонам (p.S1951WfsTer). Варта адзначыць, што, як паведамлялася раней, абедзве змены c.631G>A і c.7008-2A>T былі выяўлены ў аднаго і таго ж пацыента.34 Першая мутацыя ўключае замену адэназіну (A) у экзоне 7 гена BRCA2 нуклеатыдам, які змяшчае гуанін (G), што прыводзіць да змены валіну на ізалейцын у кадоне 211. Амінакіслата ізалейцыну — гэта амінакіслата з вельмі падобнымі ўласцівасцямі. Гэта змяненне ўплывае на нармальны сплайсінг мРНК. Другі варыянт размешчаны ў інтронічнай вобласці і прыводзіць да падвойнай замены А на тымін (T) перад экзонам 13 гена, які кадуе BRCA2. Змена c.7008-2A>T можа генераваць некалькі транскрыптаў рознай даўжыні. Акрамя таго, у групе PV BRCA2 4 з 18 змен (22,2%) былі інтронічнымі.
Затым мы картаграфавалі шкодныя мутацыі BRCA1/2 у функцыянальных даменах і рэгіёнах, якія звязваюць бялок (мал. 4). У гене BRCA1 50% PV знаходзіліся ў кластарнай вобласці рака малочнай залозы (BCCR), у той час як 22% мутацый знаходзіліся ў кластарнай вобласці рака яечнікаў (OCCR) (мал. 4A). У PV BRCA2 35,7% варыянтаў знаходзіліся ў вобласці BCCR, а 42,8% мутацый - у OCCR (мал. 4B). Далей мы ацанілі размяшчэнне PV у даменах бялкоў BRCA1 і BRCA2. Для бялку BRCA1 мы выявілі тры PV у петлевых і спіральна-спіральных даменах і дзве мутацыі ў дамене BRCT (мал. 4A). Для бялку BRCA2 4 PV картаграфавалі ў паўтаральны дамен BRC, у той час як 3 інтронныя і 3 экзонныя змены былі выяўлены ў даменах, якія звязваюць аліга/алігацукрыд (OB) і вежавых (T) (мал. 4B).
Малюнак 4. Схематычнае адлюстраванне бялкоў BRCA1 і BRCA2 і лакалізацыя патагенных варыянтаў. На гэтым малюнку паказана размеркаванне патагенных варыянтаў BRCA1 (A) і BRCA2 (B) у пацыентаў з ракам малочнай залозы. Экзонныя мутацыі паказаны сінім колерам, а інтроннія варыянты — аранжавым. Вышыня слупка паказвае колькасць выпадкаў. Пазначаны бялкі BRCA1 і BRCA2 і іх функцыянальныя дамены. (A) Бялок BRCA1 змяшчае пятлевы дамен (RING) і паслядоўнасць ядзернай лакалізацыі (NLS), спіральна-клубочны дамен, кластарны дамен SQ/TQ (SCD) і C-канцавы дамен BRCA1 (BRCT). (B) Бялок BRCA2 змяшчае восем паўтораў BRC, ДНК-звязальны дамен са спіральным даменам (Helic), тры згінальныя алігануклеатыдныя/алігацукрыд-звязальныя (OB) складкі, вежавы дамен (T) і NLS на C-баку. Унізе паказаны вобласці, якія называюцца кластарнай вобласцю рака малочнай залозы (BCCR) і кластарнай вобласцю рака яечнікаў (OCCR).*Прадстаўляе мутацыі, якія вызначаюць прыпынак кодоны.
Затым мы даследавалі клініка-паталагічныя асаблівасці раку малочнай залозы (РМЖ), якія могуць карэляваць з наяўнасцю паразітаў BRCA1/2. Поўныя клінічныя запісы былі даступныя для 181 пацыента з адмоўным генам BRCA1/2 (без носьбітаў) і ўсіх носьбітаў (n = 35). Існавала карэляцыя паміж хуткасцю праліферацыі пухліны і яе ступенню.
Мы разлічылі размеркаванне Ki-67 на аснове медыяны нашай кагорты (25%, дыяпазон <10-90%). Суб'екты з Ki-67 < 25% былі вызначаны як «нізкія Ki-67», у той час як асобы са значэннямі ≥ 25% лічыліся «высокімі Ki-67». Значныя адрозненні Ki-67 (p <0,01) былі выяўлены паміж носьбітамі і неносьбітамі BRCA1 PV (мал. 5A).
Малюнак 5. Карэляцыя Ki-67 з размеркаваннем ступені ў жанчын з ракам малочнай залозы з мутацыямі BRCA1 і BRCA2 і без іх. (A) Блокавая дыяграма, якая паказвае сярэднія значэнні Ki-67 у 181 пацыенткі з ракам малочнай залозы без носьбіта ў параўнанні з пацыенткамі з мутацыямі BRCA1 (18) або BRCA2 (17). Значэнні P ніжэй за 0,5 лічыліся статыстычна значнымі. (B) Гістаграма, якая адлюстроўвае размеркаванне пацыентак з ракам малочнай залозы па гісталагічных групах ступені (G2 і G3) у адпаведнасці са статусам мутацый BRCA1 і BRCA2 (суб'екты WT, носьбіты мутацыяў BRCA1 і BRCA2).
Аналагічным чынам, мы вывучылі, ці карэлюе ступень ступені пухліны з наяўнасцю паравентрыкулярнай мутацыі BRCA1/2. Паколькі ў нашай папуляцыі адсутнічаў рак пухліны G1, мы падзялілі пацыентаў на дзве групы (G2 або G3). У адпаведнасці з вынікамі Ki-67, аналіз выявіў статыстычна значную карэляцыю паміж ступенню ступені пухліны і мутацыяй BRCA1, з большай доляй пухлін G3 у носьбітаў BRCA1 у параўнанні з неносьбітамі (p<0,005) (Малюнак 5B).
Дасягненні ў тэхналогіі секвенавання ДНК дазволілі дасягнуць беспрэцэдэнтнага прагрэсу ў генетычным тэсціраванні BRCA1/2, што мае вырашальныя наступствы для пацыентаў з сямейным анамнезам раку. На сённяшні дзень прыблізна 20 000 варыянтаў BRCA1/2 былі выяўлены і класіфікаваны ў адпаведнасці з Амерыканскім таварыствам медыцынскай генетыкі35 і сістэмай ENIGMA.35,36 Добра вядома, што спектр мутацый BRCA1/2 моцна адрозніваецца ў розных геаграфічных рэгіёнах.37 У Італіі ўзровень BRCA1/2 PV вагаўся ад 8% да 37%, што сведчыць аб шырокай зменлівасці ўнутры краіны.38,39 З насельніцтвам амаль 5 мільёнаў чалавек Сіцылія з'яўляецца пятым па велічыні рэгіёнам Італіі па колькасці жыхароў. Нягледзячы на ​​тое, што існуюць дадзеныя аб распаўсюджванні BRCA1/2 у заходняй Сіцыліі, няма шырокіх доказаў ва ўсходняй частцы вострава.
Наша даследаванне — адно з першых паведамленняў пра распаўсюджанасць паралічу BRCA1/2 у пацыентаў з ракам малочнай залозы (РМЖ) ва ўсходняй Сіцыліі.28 Мы засяродзіліся на аналізе РМЖ, паколькі гэта, безумоўна, найбольш распаўсюджанае захворванне ў нашай кагорце.
Пры тэставанні 389 пацыентаў з ракам малочнай залозы (РМЗ) 9% мелі парагенныя мутацыі BRCA1/2, раўнамерна размеркаваныя паміж BRCA1 і BRCA2. Гэтыя вынікі адпавядаюць вынікам, пра якія паведамлялася раней у італьянскай папуляцыі.28 Цікава, што 3% (13/389) нашай кагорты былі мужчынамі. Гэты паказчык вышэйшы за чаканы для мужчынскага рака малочнай залозы (1% усіх РМЗ),40 што адлюстроўвае наш адбор папуляцый на аснове рызыкі мутацый BRCA1/2. Аднак ні ў аднаго з гэтых мужчын не развіўся парагенны мутант BRCA1/2, таму яны былі кандыдатамі на далейшы малекулярны аналіз, каб выключыць наяўнасць менш распаўсюджаных мутацый, такіх як PALB2, RAD51C і D, сярод іншых. Варыянты нявызначанай значнасці былі выяўлены ў 7% пацыентаў, у якіх была відавочная мутацыя BRCA2. Нават гэты вынік адпавядае існуючым дадзеным.28,41,42
Калі мы прааналізавалі размеркаванне малекулярных падтыпаў BC у жанчын з мутацыяй BRCA1/2, мы пацвердзілі вядомыя сувязі паміж TNBC і BRCA1 PV (58,8%), а таксама паміж люмінальным B BC і BRCA2 PV (55,6%).16,43 Пухліны люмінального A і HER2+ у носьбітаў BRCA1 і BRCA2 PV адпавядаюць існуючым літаратурным дадзеным.16,43
Затым мы засяроджваемся на тыпе і лакалізацыі паражніны рота BRCA1/2. У нашай кагорце найбольш распаўсюджаным паражніной рота BRCA1 быў c.5035_5039delCTAAT. Нягледзячы на ​​тое, што Incorvaia і інш. не апісвалі гэты варыянт у сваёй сіцылійскай кагорце, іншыя аўтары паведамілі пра яго як пра зародкавы варыянт BRCA1 PV.34 У нашай кагорце было выяўлена некалькі BRCA1 PV, напрыклад, c.181T>G, c.514del, c.3253dupA і c.5266dupC, якія назіраліся на Сіцыліі.28 З іх дзве заснавальніцкія мутацыі BRCA1 (c.181T>G і c.5266dupC) звычайна сустракаюцца ў ашкеназійскіх яўрэяў Усходняй і Цэнтральнай Еўропы (Польшча, Чэхія), Славенія, Аўстрыя, Венгрыя, Беларусь і Германія),44,45 а ў Злучаных Штатах і Аргенціне нядаўна былі вызначаны як «рэцыдывавальны зародкавы варыянт» у італьянскіх пацыентаў з ракам малочнай залозы і ракам малочнай залозы. Варыянт 34c.514del быў раней выяўлены ў 8 пацыентак з ракам малочнай залозы з паўночнай Сіцыліі ў Палерма і Месіне. Цікава, што нават Інкорвая і інш. выявілі варыянт c.3253dupA ў некаторых сем'ях у Катаніі.28 Найбольш рэпрэзентатыўнымі BRCA2 PV з'яўляюцца c.428dup, c.5851_5854delAGTT і інтронічны варыянт c.8487+1G>A, якія былі больш падрабязна апісаны28 у пацыента ў Палерма з c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV назіраўся ў хатніх гаспадарках на паўночным захадзе Сіцыліі, галоўным чынам у рэгіёнах Трапані і Палерма, тады як c.5851_5854delAGTT PV назіраўся ў хатніх гаспадарках на паўночным захадзе Сіцыліі. Варыянт 8487+1G>A быў часцей сустракаемы ў суб'ектаў з Месіны, Палерма і Кальтанісеты.28 Рэбек і інш. раней апісалі змяненне c.5851_5854delAGTT у Калумбіі.37 Яшчэ адзін BRCA2 PV, c.631+1G>A, быў выяўлены ў пацыентаў з ракам малочнай залозы і ракам яйкаклеткі з Сіцыліі (Агрыджэнта, Сіракузы і Рагуза).28 Прыкметна, што мы назіралі суіснаванне двух варыянтаў BRCA2 (BRCA2 c.631G>A і c.7008-2A>T) у аднаго пацыента, якія, як мы меркавалі, былі падзеленыя ў цыс-рэжыме, як паведамлялася раней.34,46 Гэтыя небяспечныя мутацыі BRCA2 сапраўды часта назіраюцца ў італьянскім рэгіёне і, як было выяўлена, уводзяць заўчасныя стоп-кадоны, што ўплывае на сплайсінг інфармацыйнай РНК і прыводзіць да збою бялку BRCA2.47,48
Мы таксама картаграфавалі ПВ BRCA1 і BRCA2 у меркаваных рэгіёнах OCCR і BCCR бялковых даменаў і генаў. Гэтыя рэгіёны былі апісаны Рэбекам і інш. як зоны рызыкі развіцця рака яечнікаў і малочнай залозы адпаведна.49 Аднак доказы адносна сувязі паміж размяшчэннем варыянтаў зародкавай лініі і рызыкай рака малочнай залозы або яечнікаў застаюцца супярэчлівымі.28,50-52 У нашай папуляцыі ПВ BRCA1 пераважна размяшчаліся ў рэгіёне BCCR, тады як ПВ BRCA2 пераважна размяшчаліся ў рэгіёне OCCR. Аднак нам не ўдалося знайсці ніякай сувязі паміж меркаванымі рэгіёнамі OCCR і BCCR і асаблівасцямі BC. Гэта можа быць звязана з абмежаванай колькасцю пацыентаў з мутацыямі BRCA1/2. З пункту гледжання бялковага дамена, ПВ BRCA1 размеркаваны ўздоўж усяго бялку, а змены BRCA2 пераважна выяўляюцца ў паўторным дамене BRC.
Нарэшце, мы суаднеслі клініка-паталагічныя асаблівасці раку малочнай залозы (РМЖ) з BRCA1/2 ПВ. З-за абмежаванай колькасці ўключаных пацыентаў мы выявілі значную карэляцыю толькі паміж Ki-67 і ступенню пухліны. Нягледзячы на ​​тое, што ацэнка і інтэрпрэтацыя Ki-67 застаецца некалькі супярэчлівай, можна з упэўненасцю сказаць, што высокія паказчыкі праліферацыі звязаны з падвышанай рызыкай рэцыдыву захворвання і зніжэннем выжывальнасці. На сённяшні дзень парогавае значэнне для адрознення «высокага» і «нізкага» Ki-67 складае 20%. Аднак гэты парог не распаўсюджваецца на нашу папуляцыю пацыентаў з мутацыяй BRCA1/2, у якой медыяна значэння Ki-67 складае 25%. Гэтую тэндэнцыю да высокіх паказчыкаў Ki-67 можна растлумачыць распаўсюджанасцю ў нашых кагортах прасвету B і TNBC, у якіх прысутнічала мала пухлін прасвету A. Аднак некаторыя дадзеныя сведчаць аб тым, што больш высокі парог Ki-67 (25–30%) можа лепш стратыфікаваць пацыентаў у адпаведнасці з іх прагнозам.53,54 З вынікаў нашага аналізу значная карэляцыя не дзіўная. Узнікае паміж высокім Ki-67 і ступенямі, а таксама наяўнасцю BRCA1. ПВ. Фактычна, пухліны, звязаныя з BRCA1, тыповыя для TNBC і праяўляюць больш агрэсіўныя рысы.16,17
У заключэнне, гэта даследаванне прадстаўляе справаздачу аб мутацыйным статусе BRCA1/2 у кагорце пацыентаў з ракам малочнага гаймара (РМЖ) з усходняй Сіцыліі. У цэлым, нашы высновы адпавядаюць існуючым дадзеным, як з пункту гледжання распаўсюджанасці мутацый, так і клініка-паталагічных асаблівасцей РМЖ. Для ацэнкі наяўнасці паразітаў, якія адрозніваюцца і з'яўляюцца менш частымі, чым BRCA1/2, неабходныя дадатковыя даследаванні ў большай папуляцыі пацыентаў з РМЖ, напрыклад, з выкарыстаннем пашыранага мутацыйнага аналізу ў некалькіх геномах. Гэта дазволіць ідэнтыфікаваць і правільна лячыць усё большую колькасць пацыентаў з падвышанай рызыкай раку з-за генетычных мутацый.
Мы пацвердзілі, што пацыенты падпісалі інфармаваную згоду на ананімнае прадастаўленне ўзораў сваіх пухлін для даследчых мэт. Усе пацыенты падпісалі пісьмовую інфармаваную згоду ў адпаведнасці з Хельсінкскай дэкларацыяй. Згодна з палітыкай AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco”, гэта даследаванне было вызвалена ад этычнай ацэнкі, паколькі аналіз BRCA1/2 быў праведзены ў адпаведнасці з клінічнай практыкай, і ўсе пацыенты далі пісьмовую інфармаваную згоду. Пацыенты таксама згаджаюцца на выкарыстанне сваіх дадзеных у даследчых мэт.
Мы дзякуем прафесару Паола Віньеры за яго дапамогу ў лячэнні пацыентаў з ракам малочнай залозы па просьбе Камітэта па этыцы.
Федэрыка Мартарана паведамляе пра ганарары ад Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Іншыя аўтары заяўляюць аб адсутнасці канфлікту інтарэсаў у гэтай працы.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL і інш. Глабальная статыстыка раку 2020: GLOBOCAN ацэньвае захворванне і смяротнасць ад 36 відаў раку ў 185 краінах свету. CA Cancer J Clin. 2021; 71 (3): 209-249. doi: 10.3322 / caac.21660