Kasalukuyang hindi pinagana ang Javascript sa iyong browser. Ang ilang mga tampok ng website na ito ay hindi gagana kapag hindi pinagana ang javascript.
Magrehistro gamit ang iyong mga partikular na detalye at partikular na gamot na interesado ka at itutugma namin ang impormasyong ibibigay mo sa mga artikulo sa aming malawak na database at agad na magpapadala sa iyo ng kopya sa PDF sa pamamagitan ng email.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia ng Unibersidad ng Manzella, 7 Livia Catania, Catania, 95123, Italy;2 Center for Experimental Oncology and Hematology, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Italy; 3 Medical Oncology, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italy; 4 Medical Genetics, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italy; 5 Medicine Genetics, ASP, Syracuse, 96100, Italy; 6 Kagawaran ng Biomedikal at Bioteknolohiyang Agham, Unibersidad ng Catania, Medical Genetics, Catania, Italya, 95123; 7 Oasi Research Institute-IRCCS, Troina, 94018, Italya Komunikasyon: Stefania Stella, tel +39 095 378 1946, email [email protected]; [email protected] Layunin: Mga mutasyon ng germline sa BRCA1 at BRCA2 at itinatag na kanser sa suso (BC), obaryo (OC) at iba pang nauugnay sa panghabambuhay na panganib ng kanser. Ang pagsusuri para sa gene ng BRCA ay susi sa pagtatasa ng indibidwal na panganib, pati na rin para sa paghahanap ng mga pamamaraan ng pag-iwas sa mga malulusog na carrier at pagpapasadya ng mga paggamot sa mga pasyenteng may kanser. Ang paglaganap ng mga pagbabago sa BRCA1 at BRCA2 ay malawak na nag-iiba sa mga rehiyong heograpiko, at bagama't mayroong datos sa mga pathogenic variant ng BRCA sa mga pamilyang Sicilian, ang mga pag-aaral na partikular na nagta-target sa mga populasyon sa silangang Sicily ay kulang. Ang layunin ng aming pag-aaral ay upang siyasatin ang saklaw at distribusyon ng mga pathogenic germline alteration ng BRCA sa isang cohort ng mga pasyenteng BC mula sa silangang Sicily at upang masuri ang kanilang kaugnayan sa mga partikular na katangian ng BC gamit ang next-generation sequencing. Ang pagkakaroon ng mga pagbabago ay nauugnay sa tumor grade at proliferation index. MGA RESULTA: Sa pangkalahatan, 35 pasyente (9%) ang may pathogenic variant ng BRCA, 17 (49%) sa BRCA1 at 18 (51%) sa BRCA2. Ang mga pagbabago sa BRCA1 ay laganap sa mga triple-negative na pasyente ng BC, samantalang ang mga mutasyon ng BRCA2 ay mas karaniwan sa mga pasyenteng luminal BC. Kung ikukumpara sa sa mga hindi carrier, ang mga paksang may mga variant ng BRCA1 ay may mas mataas na antas ng tumor at proliferative index. Mga Konklusyon: Ang aming mga natuklasan ay nagbibigay ng pangkalahatang-ideya ng katayuan ng mutasyon ng BRCA sa mga pasyenteng may BC mula sa silangang Sicily at kinukumpirma ang papel ng pagsusuri ng NGS sa pagtukoy ng mga pasyenteng may namamanang BC. Sa pangkalahatan, ang mga datos na ito ay naaayon sa mga nakaraang ebidensya na sumusuporta sa screening ng BRCA para sa wastong pag-iwas at paggamot ng kanser sa mga carrier ng mutation.
Ang kanser sa suso (BC) ang pinakakaraniwang kanser sa buong mundo at ang pinakanakamamatay na kanser sa kababaihan.1 Ang mga biyolohikal na katangian na tumutukoy sa prognosis at klinikal na pag-uugali ng BC ay malawakang pinag-aralan at bahagyang nilinaw sa paglipas ng panahon. Sa katunayan, maraming surrogate marker ang kasalukuyang ginagamit upang uriin ang BC sa iba't ibang molecular subtypes. Ang mga ito ay ang estrogen (ER) at/o progesterone receptor (PgR), human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) amplification, proliferation index Ki-67 at tumor grade (G).2 Ang kombinasyon ng mga baryabol na ito ay nakilala ang mga sumusunod na kategorya ng BC: 1) Ang mga tumor sa luminal, na nagpapakita ng ekspresyon ng ER at/o PgR, ay bumubuo sa 75% ng mga BC. Ang mga tumor na ito ay hinati pa sa Luminal A, kapag ang Ki-67 ay mas mababa sa 20% at negatibo ang HER2, at Luminal B, kapag ang Ki-67 ay katumbas o higit sa 20% at sa presensya ng HER2 amplification, anuman ang proliferation index; 2) Mga tumor na HER2+ na negatibo ang ER at PgR ngunit nagpapakita ng HER2 amplification. Ang grupong ito ay bumubuo sa 10% ng lahat ng mga tumor sa suso; 3) Ang triple-negative breast cancer (TNBC), na hindi nagpapakita ng ER at PgR expression at HER2 amplification, ay bumubuo sa humigit-kumulang 15% ng mga kanser sa suso.2-4
Sa mga subtype na BC na ito, ang tumor grade at proliferation index ay kumakatawan sa mga cross-sectional biomarker na direkta at malayang nauugnay sa pagiging agresibo at prognosis ng tumor.5,6
Bukod sa mga nabanggit na katangiang biyolohikal, ang papel ng mga minanang pagbabago sa henetiko na humahantong sa pag-unlad ng BC ay lalong naging mahalaga sa mga nakaraang taon.7 Humigit-kumulang 1 sa 10 tumor sa suso ang namamana dahil sa mga pagbabago sa germline sa mga partikular na gene.8 Dalawang malalaking pag-aaral sa epidemiolohiya na kinasasangkutan ng mahigit 180,000 kababaihan ang kamakailang nakatukoy sa isang grupo ng walong gene (ibig sabihin, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, at RAD51D) na pangunahing responsable para sa namamanang BC. Sa mga gene na ito, ang BRCA1 at BRCA2 (mula rito ay tatawaging BRCA1/2) ay nagpakita ng pinakamalakas na ugnayan sa pag-unlad ng mga tumor sa suso.9-12 Sa katunayan, ang mga mutasyon ng germline BRCA1/2 ay makabuluhang nagpapataas ng panganib sa buhay ng BC pati na rin ang iba pang mga malignant na sakit, kabilang ang ovarian, prostate, pancreatic, colorectal, at melanoma. Mula sa edad na 13 hanggang 80 taon, ang pinagsama-samang insidente ng BC ay 72% sa mga kababaihan na may BRCA1 pathogenic variant (PV) at 69% sa mga kababaihan na may BRCA2. PV.14
Kapansin-pansin, iminumungkahi ng isang kamakailang publikasyon na ang panganib ng BC ay nakadepende sa uri ng PV. Sa katunayan, kumpara sa mga pathogenic truncating variant, ang mga glaring missense variant, lalo na sa BRCA1 gene, ay nauugnay sa isang nabawasang panganib ng BC, lalo na sa mga matatandang kababaihan.15
Ang pagkakaroon ng BRCA1 o BRCA2 PV ay iniuugnay sa iba't ibang biyolohikal at klinikal na katangian.16,17 Ang mga BC na nauugnay sa BRCA1 ay may posibilidad na klinikal na agresibo, hindi gaanong nakikilala, at lubos na dumarami. Ang mga tumor na ito ay karaniwang triple negative at may maagang edad ng pagsisimula. Ang mga tumor na nangyayari sa mga pasyenteng may mutasyon ng BRCA2 ay karaniwang nagpapakita ng katamtaman hanggang mahusay na nakikilalang mga grado at pabagu-bagong mga indeks ng proliferasyon. Ang mga tumor na ito ay mas karaniwan sa lumen B at karaniwang nangyayari sa mga matatanda.16-18 Kapansin-pansin, ang mga mutasyon sa BRCA1 at BRCA2 ay nagpapataas ng sensitivity sa mga partikular na paggamot, kabilang ang mga platinum salt at mga naka-target na gamot tulad ng poly(ADP-ribose) polymerase inhibitors (PARPi).19,20
Sa nakalipas na ilang taon, ang pagpapatupad ng next-generation sequencing (NGS) sa klinikal na kasanayan ay nagbigay-daan sa pagtaas ng bilang ng mga pasyenteng may BC na sumailalim sa molecular testing para sa mga cancer susceptibility syndrome, kabilang ang BRCA1/2.21 Kasabay nito, ang mga kahulugan batay sa tumpak na pamantayan tungkol sa family history, demographic, at clinicopathological na mga katangian ay upang mas matukoy ang mga indibidwal na karapat-dapat sa pagsusuri ng BRCA1/2.22,23 Sa kontekstong ito, naiipon ang ebidensya sa screening ng BRCA1/2 sa mga partikular na populasyon, na nagpapakita ng mga pagkakaiba sa mga heograpikong rehiyon.24–27 Bagama't may mga ulat sa BC cohort sa kanlurang Sicily, mas kaunting datos ang magagamit sa screening ng BRCA1/2 sa populasyon ng silangang Sicily.28,29
Inilalarawan namin dito ang mga resulta ng germline BRCA1/2 screening sa mga pasyenteng may BC mula sa silangang Sicily, na lalong nag-uugnay sa pagkakaroon ng mga mutasyon ng BRCA1 o BRCA2 sa mga pangunahing klinikal na katangian ng mga tumor na ito.
Isang retrospektibong pag-aaral ang isinagawa sa "Center for Experimental Oncology and Hematology" sa Policlinico Hospital. Rodolico – San Marco sa Catania. Mula Enero 2017 hanggang Marso 2021, isang kabuuang 455 pasyente na may kanser sa suso at obaryo, melanoma, pancreatic o prostate ang ipinadala sa aming molecular diagnostic laboratory para sa BRCA/2 genetic testing. Ang pag-aaral na ito ay isinagawa alinsunod sa Deklarasyon ng Helsinki, at lahat ng kalahok ay nagbigay ng nakasulat na pahintulot bago ang molecular analysis.
Ang mga histolohikal at biyolohikal na katangian (ER, PgR, katayuan ng HER2, Ki-67, at grado) ng BC ay tinasa gamit ang core biopsy o mga sample sa operasyon, isinasaalang-alang lamang ang mga agresibong bahagi ng tumor. Batay sa mga katangiang ito, ang mga BC ay inuri bilang mga sumusunod: luminal A (ER+ at/o PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ at/o PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER at/o PgR+, HER2+), HER2+ (ER at PgR-, HER2+) o triple negative (ER at PgR-, HER2-).
Bago suriin ang katayuan ng mutasyon ng BRCA1 at BRCA2, isang multidisciplinary team na kinabibilangan ng isang oncologist, isang geneticist, at isang psychologist ang nagsagawa ng konsultasyon sa tumor genetics para sa bawat pasyente upang matukoy ang presensya ng BRCA1 at/o BRCA1, o mga indibidwal na may mataas na panganib ng PV sa gene na BRCA2. Ang pagpili ng pasyente ay isinagawa ayon sa mga alituntunin ng Italian Society of Medical Oncology (AIOM) at mga lokal na rekomendasyon ng Sicilian.30,31 Kabilang sa mga pamantayang ito ang: (i) kasaysayan ng pamilya ng mga kilalang pathogenic variant sa mga susceptibility gene (hal., BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) mga lalaking may BC; (iii) mga may BC at OC; (iv) mga babaeng may BC <36 taong gulang, TNBC <60 taong gulang, o bilateral BC <50 taong gulang; (v) personal na medikal na kasaysayan ng BC <50 taong gulang at hindi bababa sa isang first-degree na kamag-anak: (a) BC < 50 taong gulang; (b) hindi mucinous at hindi borderline OC ng anumang edad; (c) bilateral BC; (d) lalaking BC; (e) kanser sa pancreas; (f) kanser sa prostate; (vi) dalawa o higit pang Personal na kasaysayan ng BC na higit sa 50 taon at kasaysayan ng pamilya ng BC, OC, o kanser sa pancreas para sa mga kamag-anak na first-degree relatives sa isa't isa (kabilang ang mga kamag-anak na kasama niya sa first-degree relatives); (vii) Personal na kasaysayan ng OC at kahit isang first-degree relative: (a) BC na <50 taon; (b) NOC; (c) bilateral BC; (d) lalaking BC; (vii) babaeng may high-grade serous OC.
Isang 20 mL peripheral blood sample ang kinuha mula sa bawat pasyente at inilagay sa mga EDTA tube (BD Biosciences). Ang genomic DNA ay inihiwalay mula sa 0.7 mL whole blood samples gamit ang QIAsymphony DSP DNA Midi kit Isolation Kit (QIAGEN, Hilden, Italy) ayon sa mga tagubilin ng gumawa at pinadaan sa isang Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA). Nagsagawa ng quantification. Ang pagpapayaman ng target at paghahanda ng library ay isinasagawa ng Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, handa nang i-load sa Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit para sa awtomatikong paghahanda ng library ayon sa mga tagubilin ng tagagawa. Ang kit ay binubuo ng dalawang multiplex PCR primer pool na maaaring gamitin upang pag-aralan ang lahat ng BRCA1 (NM_007300.3) at BRCA2 (NM_000059.3) genes. Sa madaling salita, 15 µL ng bawat diluted sample DNA (10 ng) ang idinagdag sa mga barcoded plate para sa paghahanda ng library at lahat ng reagents at consumables ay ni-load sa Ion Chef™ instrument. Ang awtomatikong paghahanda ng library at barcoded sample library pooling ay isinagawa sa Ion Chef™ instrument. Ang bilang ng mga inihandang library ay tinasa gamit ang isang Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) ayon sa mga tagubilin ng tagagawa. Panghuli, ang mga library ay pinagsama sa equimolar ratios sa mga sample tube ng Ion Chef™ library (mga barcoded tube). at ikinarga sa instrumentong Ion Chef™. Isinagawa ang sequencing gamit ang instrumentong Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) gamit ang Ion 510 Chip (Thermo Fisher Scientific). Isinagawa ang pagsusuri ng datos gamit ang Amplicon Suite (SmartSeq srl) at Ion Reporter Software.
Ang lahat ng nomenklatura ng variant ay sumunod sa kasalukuyang mga alituntunin ng Human Genome Variation Consortium, na makukuha online (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Ang klinikal na kahalagahan ng mga variant ng BRCA1/2 ay tinukoy gamit ang klasipikasyon ng International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) at pagkonsulta sa iba't ibang database tulad ng ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, at UMD. Kasama sa klasipikasyon ang limang natatanging kategorya ng panganib: benign (kategorya I), likely benign (kategorya II), variant of uncertain significance (VUS, kategorya III), likely pathogenic (kategorya IV), at pathogenic (kategorya V). Sinuri rin ng VarSome ang epekto ng mga mutasyon sa istruktura at tungkulin ng protina, isang kagamitang nagbibigay-kaalaman na may access sa 30 database.32
Upang magtalaga ng potensyal na klinikal na kahalagahan sa bawat VUS, ginamit ang mga sumusunod na computational protein prediction algorithm: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:///genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) at Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Ang mga variant na inuri bilang class 1 at 2 ay itinuring na wild type.
Kinumpirma ng Sanger sequencing ang presensya ng bawat pathogenic variant. Sa madaling salita, isang pares ng mga partikular na primer ang dinisenyo para sa bawat natukoy na variant gamit ang mga BRCA1 at BRCA2 gene reference sequences (NG_005905.2, NM_007294.3 at NG_012772.3, NM_000059.3, ayon sa pagkakabanggit). Samakatuwid, isinagawa ang targeted PCR na sinundan ng Sanger sequencing.
Ang mga pasyenteng nagnegatibo sa resulta ng pagsusuri para sa BRCA1/2 gene ay sinuri sa pamamagitan ng multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) ayon sa mga tagubilin ng tagagawa upang masuri ang pagkakaroon ng malalaking genomic rearrangements (LGR). Sa madaling salita, ang mga sample ng DNA ay inaalisan ng katangian at hanggang 60 BRCA1 at BRCA2 gene-specific probes ang ginagamit, kung saan ang bawat isa ay nakakatukoy ng isang partikular na DNA sequence na humigit-kumulang 60 nucleotides ang haba. Ang mga produkto ng probe amplification, na binubuo ng isang natatanging hanay ng mga PCR amplicon, ay sinuri sa pamamagitan ng capillary electrophoresis at ng Cofalyser.Net software kasabay ng naaangkop na batch-specific Cofalyser tables (www.mrcholland.com).
Ang mga piling baryabol na klinikopatolohikal (histological grade at Ki-67% proliferation index) ay iniugnay sa presensya ng BRCA1/2 PV, na kinalkula gamit ang Prism software v. 8.4 gamit ang eksaktong pagsubok ni Fisher sa pag-aakalang ang p-value <0.05 ay makabuluhan.
Sa pagitan ng Enero 2017 at Marso 2021, 455 na pasyente ang sinuri para sa mga mutasyon ng germline na BRCA1/2. Isinagawa ang pagsusuri sa mutasyon sa Center for Experimental Oncology and Hematology ng Policlinico Hospital. Ayon sa alituntunin ng Sicilian (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Enero 2020), ang Rodolico ng Catania – San Marco” sa pangkalahatan, ay may 389 na pasyente. Mayroong kanser sa suso, 37 kanser sa obaryo, 16 kanser sa pancreas, 8 kanser sa prostate at 5 melanoma. Ang distribusyon ng mga pasyente ayon sa uri ng kanser at mga resulta ng pagsusuri ay ipinapakita sa Figure 1.
Ipinapakita ng Figure 1 ang isang flow chart na nagpapakita ng pangkalahatang-ideya ng pag-aaral. Ang mga pasyenteng may mga tumor sa suso, melanoma, pancreas, prostate, o obaryo ay sinuri para sa mga mutasyon sa mga gene na BRCA1 at BRCA2.
Mga Daglat: PV, pathogenic variant; VUS, variant na may hindi tiyak na kahalagahan; WT, wild-type BRCA1/2 sequence.
Pinili naming itinuon ang aming mga pag-aaral sa mga pangkat ng kanser sa suso. Ang mga pasyente ay may median na edad na 49 taon (saklaw 23-89) at karamihan ay mga babae (n=376, o 97%).
Sa mga kalahok na ito, 64 (17%) ang may mga mutasyon ng BRCA1/2 at pawang mga babae. Tatlumpu't lima (9%) ang may PV at 29 (7.5%) ang may VUS. Labing-pito (48.6%) sa 35 pathogenic variants ang nangyari sa BRCA1 at 18 (51.4%) sa BRCA2, habang 5 VUS ang nangyari sa BRCA1 (17.2%) at 24 (82.8%) sa BRCA2 (Mga Larawan 1 at 2). Walang LGR sa pagsusuri ng MLPA.
Pigura 2. Pagsusuri ng mga mutasyon ng BRCA1 at BRCA2 sa 389 na pasyente ng kanser sa suso.(A) Distribusyon ng mga pathogenic variant (PV) (pula), mga variant na walang katiyakan ang kahalagahan (VUS) (kahel), at WT (asul) sa 389 na pasyente ng kanser sa suso; (B) 389 na pasyente ng kanser sa suso Tatlumpu't lima (9%) ang may mga pathogenic variant (PV) ng BRCA1/2. Sa mga ito, 17 (48.6%) ang mga carrier ng BRCA1 PV (madilim na pula) at 18 (51.4%) ang mga carrier ng BRCA2 (mapusyaw na pula); (C) 29 (7.5%) ng 389 na paksa ang may dalang VUS, 5 (17.2%) ang mga gene ng BRCA1 (madilim na kahel) at 24 (82.8%) ang mga gene ng BRCA2 (mapusyaw na kahel).
Mga Daglat: PV, pathogenic variant; VUS, variant na may hindi tiyak na kahalagahan; WT, wild-type BRCA1/2 sequence.
Sumunod naming sinuri ang paglaganap ng mga BC molecular subtype sa mga pasyenteng may BRCA1/2 PV. Kasama sa distribusyon ang 2 (5.7%) luminal A, 15 (42.9%) luminal B, 3 (8.6%) luminal B-HER2+, 2 (5.7%) HER2+ at 13 (37.1%) pasyenteng may TNBC. Sa mga pasyenteng may BRCA1-positive, 5 (29.4%) ang may luminal B BC, 2 (11.8%) ang may sakit na HER2+, at 10 (58.8%) ang may TNBC. Ang mga tumor na walang mutasyon ng BRCA1 ay alinman sa luminal A o luminal B-HER2+ (Larawan 3). Sa subgroup na may BRCA2-positive, 10 (55.6%) na tumor ang luminal B, 3 (16.7%) ang luminal B-HER2+, 3 (16.7%) TNBC at 2 (11.1%) ang luminal A (Larawan 3). Walang tumor na HER2+. ay naroroon sa grupong ito. Kaya, ang mga mutasyon ng BRCA1 ay laganap sa mga pasyenteng may TNBC, samantalang ang mga pagbabago sa BRCA2 ay nangingibabaw sa mga indibidwal na may lumen B.
Pigura 3 Paglaganap ng mga subtype ng kanser sa suso sa mga pasyenteng may mga pathogenic variant sa BRCA1 at BRCA2. Mga histogram na nagpapakita ng distribusyon ng BRCA1- (madilim na pula) at BRCA2- (mapusyaw na pula) na mga PV sa mga molekular na subtype ng mga pasyente ng kanser sa suso. Ang mga bilang na iniulat sa loob ng bawat kahon ay kumakatawan sa porsyento ng mga pasyenteng may BRCA1 at BRCA2 PV para sa bawat subtype ng kanser sa suso.
Mga Daglat: PV, pathogenic variant; HER2+, human epidermal growth factor receptor 2 positive; TNBC, triple-negative breast cancer.
Kasunod nito, sinuri namin ang uri at lokalisasyon ng gene ng mga BRCA1 at BRCA2 PV. Sa BRCA1 PV, naobserbahan namin ang 7 single nucleotide variants (SNVs), 6 na deletion, 3 duplication at 1 insertion. Isang mutation lamang (c.5522delG) ang kumakatawan sa isang bagong tuklas. Ang pinakakaraniwang BRCA1 PV na natukoy sa parehong paksa ay c.5035_5039delCTAAT. Ang pagbabagong ito ay kinabibilangan ng deletion ng limang nucleotides (CTAAT) sa BRCA1 exon 15, na nagresulta sa pagpapalit ng amino acid leucine ng tyrosine sa codon 1679, at dahil sa isang translation frameshift na may hinulaang alternatibong stop codon ay humantong sa napaaga na protein truncation. Ang lahat ng iba pang mga pagbabago ay natukoy lamang sa isang kaso. Kapansin-pansin, ang isa sa mga naiulat na PV ay matatagpuan sa splice site consensus region (c.4357+1G>T) (Talahanayan 1).
Tungkol sa BRCA2 PV, naobserbahan namin ang 6 na deletion, 6 na SNV at 2 duplication. Wala sa mga pagbabagong natagpuan ang bago. Tatlong mutasyon ang naulit sa aming populasyon, c.428dup at c.8487+1G>A na naobserbahan sa 3 paksa, na sinundan ng c.5851_5854delAGTT na nakuha sa dalawang kaso. Ang c.428dup alteration ay kinabibilangan ng pag-uulit ng C sa exon 5 ng BRCA2, na hinulaang mag-e-encode ng isang truncated, non-functional protein. Ang c.8487+1G>A mutation ay nangyayari sa intronic region ng BRCA2 intron 19 (± 1,2) at nakakaapekto sa splicing consensus sequence, na nagreresulta sa binagong splicing na nagreresulta sa abnormal o absent na protina. Ang c.5851_5854delAGTT pathogenic variant ay dahil sa isang 4-nucleotide deletion mula sa mga posisyon ng nucleotide 5851 hanggang 5854 sa coding exon 10 ng BRCA2 gene at nagreresulta sa isang translational frameshift na may hinulaang alternatibong stop codon (p.S1951WfsTer). Kapansin-pansin, gaya ng naunang naiulat, ang parehong mga pagbabago sa c.631G>A at c.7008-2A>T ay natukoy sa iisang pasyente.34 Ang unang mutasyon ay kinabibilangan ng pagpapalit ng adenosine (A) sa BRCA2 exon 7 ng isang nucleotide na naglalaman ng guanine (G) na nagreresulta sa pagbabago ng valine sa isoleucine sa codon 211, isoleucine. Ang amino acid ay isang amino acid na may halos magkatulad na mga katangian. Ang pagbabagong ito ay nakakaapekto sa normal na mRNA splicing. Ang pangalawang variant ay matatagpuan sa isang intronic na rehiyon at nagreresulta sa isang dobleng A sa thymine (T) na pagpapalit bago ang exon 13 ng gene na nagko-code ng BRCA2. Ang pagbabago sa c.7008-2A>T ay maaaring makabuo ng maraming transcript na may iba't ibang haba. Bukod dito, sa grupo ng mga BRCA2 PV, 4 sa 18 na pagbabago (22.2%) ay intronic.
Pagkatapos ay iminapa namin ang mga nakapipinsalang mutasyon ng BRCA1/2 sa mga functional domain at mga rehiyon na nagbubuklod ng protina (Larawan 4). Sa gene na BRCA1, 50% ng mga PV ay matatagpuan sa rehiyon ng kumpol ng kanser sa suso (BCCR), habang 22% ng mga mutasyon ay matatagpuan sa rehiyon ng kumpol ng kanser sa obaryo (OCCR) (Larawan 4A). Sa BRCA2 PV, 35.7% ng mga variant ay matatagpuan sa rehiyon ng BCCR at 42.8% ng mga mutasyon ay matatagpuan sa OCCR (Larawan 4B). Susunod, tinasa namin ang lokasyon ng PV sa loob ng mga domain ng protina ng BRCA1 at BRCA2. Para sa protina ng BRCA1, nakakita kami ng tatlong PV sa loop at coiled coil domain, at dalawang mutasyon sa BRCT domain (Larawan 4A). Para sa protina ng BRCA2, 4 na PV ang nakamapa sa BRC repeat domain, habang 3 intronic at 3 exonic na pagbabago ang nakita sa mga domain ng oligo/oligosaccharide-binding (OB) at tower (T) (Larawan 4B).
Figure 4 Eskematikong representasyon ng mga protina ng BRCA1 at BRCA2 at lokalisasyon ng mga pathogenic variant. Ipinapakita ng figure na ito ang distribusyon ng mga pathogenic variant ng BRCA1 (A) at BRCA2 (B) sa mga pasyenteng may kanser sa suso. Ang mga exonic mutations ay ipinapakita sa asul, habang ang mga intronic variant ay ipinapakita sa orange. Ang taas ng bar ay kumakatawan sa bilang ng mga kaso. Ang mga protina ng BRCA1 at BRCA2 at ang kanilang mga functional domain ay iniulat.(A) Ang protina ng BRCA1 ay naglalaman ng isang loop domain (RING) at isang nuclear localization sequence (NLS), isang coiled-coil domain, isang SQ/TQ cluster domain (SCD), at isang BRCA1 C-terminal domain (BRCT).(B) Ang protina ng BRCA2 ay naglalaman ng walong BRC repeats, isang DNA-binding domain na may helical domain (Helical), tatlong oligonucleotide/oligosaccharide-binding (OB) folds, isang tower domain (T), at isang An NLS sa C side. Ang mga lugar na tinatawag na Breast Cancer Cluster Region (BCCR) at Ovarian Cancer Cluster Region (OCCR) ay ipinapakita sa ibaba.*Kumakatawan sa mga mutasyon na tumutukoy sa paghinto mga codon
Pagkatapos ay sinuri namin ang mga klinikal na katangiang patolohikal ng BC na maaaring may kaugnayan sa pagkakaroon ng BRCA1/2 PV. May mga kumpletong klinikal na rekord na magagamit para sa 181 pasyenteng negatibo sa BRCA1/2 (mga hindi carrier) at lahat ng carrier (n = 35). Mayroong ugnayan sa pagitan ng rate ng paglaganap ng tumor at antas nito.
Kinalkula namin ang distribusyon ng Ki-67 batay sa median ng aming cohort (25%, saklaw na <10-90%). Ang mga paksang may Ki-67 na < 25% ay tinukoy bilang "mababang Ki-67", habang ang mga indibidwal na may mga halagang ≥ 25% ay itinuturing na "mataas na Ki-67". Natagpuan ang mga makabuluhang pagkakaiba sa Ki-67 (p<0.01) sa pagitan ng mga hindi carrier at mga carrier ng BRCA1 PV (Fig. 5A).
Pigura 5 Korelasyon ng Ki-67 sa distribusyon ng grado sa mga babaeng may kanser sa suso na mayroon at walang BRCA1 at BRCA2 PVs.(A) Boxplot na nagpapakita ng median na mga halaga ng Ki-67 sa 181 na mga pasyenteng may BC na walang carrier kumpara sa mga pasyenteng may BRCA1 (18) o BRCA2 (17) PV. Ang mga halaga ng P na mas mababa sa 0.5 ay itinuturing na makabuluhan sa istatistika.(B) Histogram na kumakatawan sa pagtatalaga ng mga pasyenteng may kanser sa BC sa mga histological grade group (G2 at G3) ayon sa katayuan ng mutasyon ng BRCA1 at BRCA2 (mga paksang WT, mga carrier ng BRCA1 at BRCA2 PVs).
Gayundin, sinuri namin kung ang antas ng tumor ay may kaugnayan sa presensya ng BRCA1/2 PV. Dahil wala ang G1 BC sa aming populasyon, hinati namin ang mga pasyente sa dalawang grupo (G2 o G3). Alinsunod sa mga resulta ng Ki-67, ang pagsusuri ay nagpakita ng isang makabuluhang ugnayan sa pagitan ng antas ng tumor at mutasyon ng BRCA1, na may mas mataas na proporsyon ng mga tumor na G3 sa mga carrier ng BRCA1 kumpara sa mga non-carrier (p<0.005) (Larawan 5B).
Ang mga pagsulong sa teknolohiya ng DNA sequencing ay nagbigay-daan sa mga walang kapantay na pagsulong sa genetic testing ng BRCA1/2, na may mahahalagang implikasyon para sa mga pasyenteng may family history ng kanser. Sa ngayon, humigit-kumulang 20,000 variant ng BRCA1/2 ang natukoy at nauri ayon sa American Society of Medical Genetics 35 at sa ENIGMA system.35,36 Kilalang-kilala na ang BRCA1/2 mutational spectrum ay malawak na nag-iiba sa mga rehiyong heograpiko.37 Sa loob ng Italya, ang rate ng BRCA1/2 PV ay mula 8% hanggang 37%, na nagpapakita ng malawak na pagkakaiba-iba sa loob ng bansa.38,39 Sa populasyon na halos 5 milyon, ang Sicily ang panglimang pinakamalaking rehiyon sa Italya sa mga tuntunin ng bilang ng mga naninirahan. Bagama't may datos sa distribusyon ng BRCA1/2 sa kanlurang Sicily, walang malawak na ebidensya sa silangang bahagi ng isla.
Ang aming pag-aaral ay isa sa mga unang ulat sa insidente ng BRCA1/2 PV sa mga pasyenteng may BC sa silangang Sicily.28 Itinuon namin ang aming pagsusuri sa BC, dahil ito ang pinakakaraniwang sakit sa aming cohort.
Nang subukan ang 389 na pasyenteng may BC, 9% ang may dalang BRCA1/2 PV, na pantay na ipinamahagi sa pagitan ng BRCA1 at BRCA2. Ang mga resultang ito ay naaayon sa mga naunang naiulat sa populasyon ng Italyano.28 Kapansin-pansin, 3% (13/389) ng aming cohort ay lalaki. Ang rate na ito ay mas mataas kaysa sa inaasahan para sa kanser sa suso ng mga lalaki (1% ng lahat ng BC),40 na sumasalamin sa aming pagpili ng mga populasyon batay sa panganib ng mutasyon ng BRCA1/2. Gayunpaman, wala sa mga lalaking ito ang nagkaroon ng BRCA1/2 PV, kaya sila ay mga kandidato para sa karagdagang pagsusuri sa molekula upang maalis ang pagkakaroon ng mga hindi gaanong karaniwang mutasyon tulad ng PALB2, RAD51C at D, bukod sa iba pa. Ang mga variant na may hindi tiyak na kahalagahan ay nakuha sa 7% ng mga paksa kung saan maliwanag ang BRCA2 VUS. Kahit na ang resultang ito ay naaayon sa mga dati nang ebidensya.28,41,42
Nang sinuri namin ang distribusyon ng mga BC molecular subtype sa mga babaeng may BRCA1/2 mutant, nakumpirma namin ang mga kilalang kaugnayan sa pagitan ng TNBC at BRCA1 PV (58.8%) at sa pagitan ng luminal B BC at BRCA2 PV (55.6%).16,43 Ang mga luminal A at HER2+ na tumor sa mga carrier ng BRCA1 at BRCA2 PV ay naaayon sa umiiral na datos ng literatura.16,43
Pagkatapos ay tututuon kami sa uri at lokasyon ng BRCA1/2 PV. Sa aming cohort, ang pinakakaraniwang BRCA1 PV ay c.5035_5039delCTAAT. Bagama't sina Incorvaia et al. hindi inilarawan ang variant na ito sa kanilang Sicilian cohort, iniulat ito ng ibang mga may-akda bilang isang germline BRCA1 PV.34 Ilang BRCA1 PV ang natagpuan sa aming cohort – hal. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA at c.5266dupC – na naobserbahan sa Sicily.28 Sa mga ito, dalawang BRCA1 founder mutations (c.181T>G at c.5266dupC) ang karaniwang matatagpuan sa mga Ashkenazi Jew ng Eastern at Central Europe (Poland, Czech), Slovenian, Austrian, Hungarian, Belarusian at German), 44,45 at, sa Estados Unidos at Argentina, ay kamakailan lamang tinukoy bilang isang "recurrent germline variant" sa mga pasyenteng Italyano na may BC at OC. Ang 34c.514del variant ay dating natukoy sa 8 pasyente ng kanser sa suso mula sa hilagang Sicily sa Palermo at Messina. Kapansin-pansin, maging si Incorvaia et al. natagpuan ang c.3253dupA variant sa ilang pamilya sa Catania.28 Ang pinakarepresentatibong BRCA2 PV ay c.428dup, c.5851_5854delAGTT at ang intronic variant na c.8487+1G>A, na naiulat nang mas detalyado 28 sa isang pasyente sa Palermo na may c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV ay naobserbahan sa mga kabahayan sa hilagang-kanlurang Sicily, pangunahin sa mga rehiyon ng Trapani at Palermo, samantalang ang c.5851_5854delAGTT PV ay naobserbahan sa mga kabahayan sa hilagang-kanlurang Sicily. Ang 8487+1G>A variant ay mas karaniwan sa mga paksa mula sa Messina, Palermo, at Caltanissetta.28 Rebbeck et al. dati nang inilarawan ang c.5851_5854delAGTT alteration sa Colombia.37 Isa pang BRCA2 PV, c.631+1G>A, ang natagpuan sa mga pasyenteng BC at OC mula sa Sicily (Agrigento, Siracusa at Ragusa).28 Kapansin-pansin, naobserbahan namin ang magkakasamang pagkakasama ng dalawang variant ng BRCA2 (BRCA2 c.631G>A at c.7008-2A>T) sa parehong pasyente, na ipinapalagay naming nakahiwalay sa cis mode, gaya ng naiulat noon.34,46 Ang mga mutasyong BRCA2 na ito ay madalas na naoobserbahan sa rehiyon ng Italya at natuklasang nagpapakilala ng mga premature stop codon, na nakakaapekto sa messenger RNA splicing at nagiging sanhi ng pagkabigo ng protina ng BRCA2.47,48
Inimapa rin namin ang mga BRCA1 at BRCA2 PV sa mga posibleng rehiyon ng OCCR at BCCR ng mga protein domain at gene. Ang mga rehiyong ito ay inilarawan nina Rebbeck et al. bilang mga lugar na may panganib para sa pagkakaroon ng kanser sa obaryo at suso, ayon sa pagkakabanggit.49 Gayunpaman, ang ebidensya tungkol sa kaugnayan sa pagitan ng lokasyon ng mga variant ng germline at panganib ng kanser sa suso o obaryo ay nananatiling kontrobersyal.28,50-52 Sa aming populasyon, ang mga BRCA1 PV ay pangunahing matatagpuan sa rehiyon ng BCCR, samantalang ang mga BRCA2 PV ay pangunahing matatagpuan sa rehiyon ng OCCR. Gayunpaman, hindi kami nakahanap ng anumang kaugnayan sa pagitan ng mga posibleng rehiyon ng OCCR at BCCR at mga katangian ng BC. Maaaring ito ay dahil sa limitadong bilang ng mga pasyente na may mga mutasyon ng BRCA1/2. Mula sa perspektibo ng protein domain, ang mga BRCA1 PV ay ipinamamahagi sa buong protina, at ang mga pagbabago sa BRCA2 ay mas malamang na matatagpuan sa BRC repeat domain.
Panghuli, iniugnay namin ang mga klinikal na katangian ng BC sa BRCA1/2 PV. Dahil sa limitadong bilang ng mga pasyenteng kasama, nakakita lamang kami ng isang makabuluhang ugnayan sa pagitan ng Ki-67 at grado ng tumor. Bagama't ang pagtatasa at interpretasyon ng Ki-67 ay nananatiling medyo kontrobersyal, tiyak na ang mataas na proliferative rates ay nauugnay sa mas mataas na panganib ng pag-ulit ng sakit at pagbaba ng survival rate. Sa ngayon, ang cutoff para sa pagkakaiba sa pagitan ng "mataas" at "mababa" na Ki-67 ay 20%. Gayunpaman, ang threshold na ito ay hindi nalalapat sa aming populasyon ng pasyente na may mutasyon ng BRCA1/2, na may median na halaga ng Ki-67 na 25%. Ang trend na ito sa mataas na rate ng Ki-67 ay maaaring ipaliwanag sa pamamagitan ng prevalence sa aming mga luminal B at TNBC cohorts, kung saan kakaunti ang mga luminal A tumor. Gayunpaman, tila nagmumungkahi ang ilang ebidensya na ang isang mas mataas na cutoff ng Ki-67 (25-30%) ay maaaring mas mahusay na i-stratify ang mga pasyente ayon sa kanilang prognosis.53,54 Mula sa mga resulta ng aming pagsusuri, ang isang makabuluhang ugnayan ay hindi nakakagulat. Nangyayari sa pagitan ng mataas na Ki-67 at mga grado at ang pagkakaroon ng BRCA1 PV. Sa katunayan, ang mga tumor na nauugnay sa BRCA1 ay tipikal sa TNBC at nagpapakita ng mas agresibong mga katangian.16,17
Bilang konklusyon, ang pag-aaral na ito ay nagbibigay ng isang ulat tungkol sa mutational status ng BRCA1/2 sa isang BC cohort mula sa silangang Sicily. Sa pangkalahatan, ang aming mga natuklasan ay naaayon sa mga dati nang ebidensya, kapwa sa mga tuntunin ng paglaganap ng mutasyon at mga klinikal na katangian sa BC. Mas maraming pag-aaral sa mas malaking populasyon ng mga pasyenteng may BRCA1/2-mutant BC, tulad ng paggamit ng multigenome expanded mutational analysis, ang kinakailangan upang masuri ang pagkakaroon ng mga PV na natatangi at hindi gaanong madalas kaysa sa BRCA1/2. Ito ay magbibigay-daan sa pagtukoy at wastong pamamahala ng lumalaking bilang ng mga paksa na may mas mataas na panganib ng kanser dahil sa mga genetic mutation.
Kinumpirma namin na ang mga pasyente ay pumirma ng informed consent upang ilabas ang kanilang mga sample ng tumor nang hindi nagpapakilala para sa mga layunin ng pananaliksik. Lahat ng mga pasyente ay pumirma ng nakasulat na informed consent ayon sa Deklarasyon ng Helsinki. Ayon sa patakaran ng AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco”, ang pag-aaral na ito ay hindi isinailalim sa etikal na pagsusuri dahil ang pagsusuri ng BRCA1/2 ay isinagawa ayon sa klinikal na kasanayan at lahat ng mga pasyente ay nagbigay ng nakasulat na informed consent. Pumapayag din ang mga pasyente sa paggamit ng kanilang datos para sa mga layunin ng pananaliksik.
Nagpapasalamat kami kay Prof. Paolo Vigneri para sa kanyang tulong sa pangangalaga ng mga pasyenteng may kanser sa suso gaya ng hiniling ng Komite sa Etika.
Iniulat ni Federica Martorana ang mga honoraria mula sa Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, at Pfizer. Ang ibang mga may-akda ay walang idineklara na anumang tunggalian ng interes sa akdang ito.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. Pandaigdigang Istatistika ng Kanser 2020: Tinatantya ng GLOBOCAN ang saklaw at dami ng namamatay sa 36 na kanser sa 185 na bansa sa buong mundo. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660