Javascript моментално е оневозможен во вашиот прелистувач. Некои функции на оваа веб-страница нема да работат кога Javascript е оневозможен.
Регистрирајте се со вашите специфични податоци и специфичен лек што ве интересира, а ние ќе ги споиме информациите што ги давате со статиите во нашата обемна база на податоци и веднаш ќе ви испратиме PDF копија по е-пошта.
作者 Стела С, Витале СР, Марторана Ф, Масимино М, Павоне Г, Ланзафаме К, Бјанка С, Барон Ц, Горгоне Ц, Фичера М, Манцела Л
Стефанија Стела, 1,2 Силвија Рита Витале, 1,2 Федерика Марторана, 1,2 Микеле Масимино, 1,2 Џулијана Павоне, 3 Катја Ланзафаме, 3 Себастиано Бјанка, 4 Кјара Бароне, 5 Кристина Горгоне, 6 Марко Фичеразеин од Одделот 12, 6, Експериментална медицина, Универзитет во Катанија, Катанија, 95123, Италија; 2 Центар за експериментална онкологија и хематологија, AOU Policlinico „G.Rodolico – San Marco“, Катанија, 95123, Италија; 3 Медицинска онкологија, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Катанија, 95123, Италија; 4 Медицинска генетика, АРНАС Гарибалди, Катанија, 95123, Италија; 5 Медицинска генетика, ASP, Сиракуза, 96100, Италија; 6 Оддел за биомедицински и биотехнолошки науки, Универзитет во Катанија, Медицинска генетика, Катанија, Италија, 95123; 7 Истражувачки институт Оаси-IRCCS, Троина, 94018, Италија Комуникации: Стефанија Стела, тел. +39 095 378 1946, е-пошта [email protected]; [email protected] Цел: Мутации на герминативната линија кај BRCA1 и BRCA2 и утврден рак на дојка (BC), јајници (OC) и други поврзани со доживотен ризик од рак. Тестирањето за генот BRCA е клучно за проценка на индивидуалниот ризик, како и за пронаоѓање методи за превенција кај здрави носители и прилагодување на третманите кај пациенти со рак. Преваленцата на промените на BRCA1 и BRCA2 варира значително низ географските региони и иако постојат податоци за патогените варијанти на BRCA во сицилијанските семејства, недостасуваат студии насочени конкретно кон популациите во источна Сицилија. Целта на нашата студија беше да се испита инциденцата и дистрибуцијата на патогените промени на герминативната линија на BRCA кај кохорта на пациенти со BC од источна Сицилија и да се процени нивната поврзаност со специфични особини на BC користејќи секвенционирање од следната генерација. Присуството на промени корелира со степенот на тумор и индексот на пролиферација. РЕЗУЛТАТИ: Вкупно, 35 пациенти (9%) имале патогена варијанта на BRCA, 17 (49%) кај BRCA1 и 18 (51%) кај BRCA2. Промените на BRCA1 се распространети кај тројно негативни пациенти со BC, додека мутациите на BRCA2 се почести кај луминалниот BC. пациенти. Во споредба со оние кои не се носители, испитаниците со BRCA1 варијанти имале значително повисок степен на тумор и пролиферативен индекс. Заклучоци: Нашите наоди даваат преглед на мутацискиот статус на BRCA кај пациенти со рак на дојка од источна Сицилија и ја потврдуваат улогата на NGS анализата во идентификувањето на пациенти со наследен рак на дојка. Генерално, овие податоци се во согласност со претходните докази што го поддржуваат скринингот на BRCA за соодветна превенција и третман на рак кај носители на мутации.
Ракот на дојка (РД) е најчестата малигна болест во светот и најсмртоносниот рак кај жените.1 Биолошките карактеристики што ја одредуваат прогнозата на ДД и клиничкото однесување се опширно проучени и делумно разјаснети со текот на времето. Всушност, во моментов се користат неколку сурогат маркери за класификација на ДД во различни молекуларни подтипови. Тие се естроген (ER) и/или прогестеронски рецептор (PgR), амплификација на човечкиот епидермален фактор на раст рецептор 2 (HER2), индекс на пролиферација Ki-67 и степен на тумор (G).2 Комбинацијата на овие варијабли ги идентификуваше следните категории на ДД: 1) Луминалните тумори, кои покажуваат експресија на ER и/или PgR, сочинуваа 75% од ДД. Овие тумори беа понатаму поделени на Луминален А, кога Ki-67 беше под 20% и HER2 негативен, и Луминален Б, кога Ki-67 беше еднаков или над 20% и во присуство на HER2 амплификација, без оглед на индексот на пролиферација; 2) HER2+ тумори кои се ER и PgR негативни, но покажуваат HER2 амплификација. Оваа група сочинува 10% од сите тумори на дојка; 3) Тројно-негативен рак на дојка (TNBC), кој не покажува експресија на ER и PgR и HER2 амплификација, сочинува околу 15% од карциномите на дојка.2-4
Меѓу овие подтипови на BC, градацијата на туморот и индексот на пролиферација претставуваат напречни биомаркери кои се директно и независно поврзани со агресивноста и прогнозата на туморот.5,6
Покрај горенаведените биолошки карактеристики, улогата на наследените генетски промени што доведуваат до развој на рак на дојка станува сè поважна во последните неколку години.7 Околу 1 од 10 тумори на дојка се наследуваат поради промени во герминативната линија на специфични гени.8 Две големи епидемиолошки студии во кои учествуваа повеќе од 180.000 жени неодамна идентификуваа група од осум гени (т.е. ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C и RAD51D) кои се првенствено одговорни за наследната рак на дојка. Меѓу овие гени, BRCA1 и BRCA2 (во понатамошниот текст BRCA1/2) покажаа најсилна корелација со развојот на тумори на дојка.9-12 Всушност, мутациите на герминативната линија на BRCA1/2 значително го зголемуваат ризикот од рак на дојка, како и други малигни заболувања, вклучувајќи рак на јајниците, простатата, панкреасот, колоректалниот и меланомот. Од 13 до 80 години, кумулативната инциденца на рак на дојка е 72% кај жени со патогена варијанта (PV) на BRCA1 и 69% кај жени со BRCA2. ПВ.14
Имено, неодамнешна публикација сугерира дека ризикот од рак на дојка зависи од видот на PV. Всушност, во споредба со патогените скратувачки варијанти, очигледните мисенс варијанти, особено во генот BRCA1, се поврзани со намален ризик од рак на дојка, особено кај постари жени.15
Присуството на BRCA1 или BRCA2 PV беше поврзано со различни биолошки и клиничко-патолошки карактеристики.16,17 BRCA1-асоцираните BC имаат тенденција да бидат клинички агресивни, слабо диференцирани и високо пролиферативни. Овие тумори се обично тројно негативни и имаат рана возраст на појава. Туморите што се јавуваат кај пациенти со мутација на BRCA2 обично покажуваат умерени до добро диференцирани степени и варијабилни пролиферативни индекси. Овие тумори се почести во луменот Б и обично се јавуваат кај постари возрасни лица.16-18 Имено, мутациите во BRCA1 и BRCA2 ја зголемуваат чувствителноста на специфични третмани, вклучувајќи платински соли и целни лекови како што се инхибитори на поли(ADP-рибоза) полимераза (PARPi).19,20
Во текот на изминатите неколку години, имплементацијата на секвенционирање од следната генерација (NGS) во клиничката пракса им овозможи на зголемениот број пациенти со рак на дојка да се подложат на молекуларно тестирање за синдроми на подложност на рак, вклучувајќи ги и BRCA1/2.21 Истовремено, дефинициите се базираат на прецизни критериуми во врска со семејната историја, демографските и клиничко-патолошките карактеристики за подобро идентификување на лица достојни за тестирање на BRCA1/2.22,23 Во овој контекст, се акумулираат докази за скрининг на BRCA1/2 кај специфични популации, истакнувајќи ги разликите меѓу географските региони.24–27 Иако постојат извештаи за кохортата на рак на дојка во западна Сицилија, помалку податоци се достапни за скрининг на BRCA1/2 кај населението на источна Сицилија.28,29
Овде ги опишуваме резултатите од скринингот на герминативната линија BRCA1/2 кај пациенти со рак на дојка од источна Сицилија, дополнително поврзувајќи го присуството на мутации BRCA1 или BRCA2 со главните клиничко-патолошки карактеристики на овие тумори.
Ретроспективна студија беше спроведена во „Центарот за експериментална онкологија и хематологија“ во болницата Поликлинико, Родолико - Сан Марко во Катанија. Од јануари 2017 до март 2021 година, вкупно 455 пациенти со рак на дојка и јајници, меланом, панкреас или простата беа упатени во нашата молекуларно дијагностичка лабораторија за генетско тестирање на BRCA/2. Оваа студија беше спроведена во согласност со Хелсиншката декларација, а сите учесници дадоа писмена информирана согласност пред молекуларната анализа.
Хистолошките и биолошките карактеристики (ER, PgR, статус на HER2, Ki-67 и степен) на карцином на рак на дојка беа оценети на примероци од основна биопсија или хируршки методи, земајќи ги предвид само агресивните компоненти на туморот. Врз основа на овие карактеристики, карциномите на дојка беа класифицирани на следниов начин: луминална A (ER+ и/или PgR+, HER2-, Ki-67<20%), луминална B (ER+ и/или PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), луминална B-HER2+ (ER и/или PgR+, HER2+), HER2+ (ER и PgR-, HER2+) или тројно негативни (ER и PgR-, HER2-).
Пред да се процени статусот на мутациите на BRCA1 и BRCA2, мултидисциплинарен тим, вклучувајќи онколог, генетичар и психолог, спроведе консултација за генетска туморска генетика за секој пациент за да се утврди присуството на BRCA1 и/или BRCA1 или лица со висок ризик од PV во генот BRCA2. Селекцијата на пациенти беше извршена според упатствата на Италијанското друштво за медицинска онкологија (AIOM) и локалните сицилијански препораки.30,31 Овие критериуми вклучуваат: (i) семејна историја на познати патогени варијанти во гените за подложност (на пр., BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) мажи со рак на дојка; (iii) оние со рак на дојка и OC; (iv) жени со рак на дојка <36 години, TNBC <60 години или билатерален рак на дојка <50 години; (v) лична медицинска историја на рак на дојка <50 години и најмалку еден роднина од прв степен: (a) рак на дојка < 50 години; (b) немуцинозен и неграничен рак на дојка од која било возраст; (c) билатерален рак на дојка; (d) машки рак на дојка; (e) рак на панкреас; (f) рак на простата; (vi) два или повеќе лица со лична историја на рак на дојка > 50 години и семејна историја на рак на дојка, рак на простата или рак на панкреас за роднини кои се роднини од прв степен еден со друг (вклучувајќи роднини со кои таа е во роднини од прв степен); (vii) Лична историја на рак на дојка и најмалку еден роднина од прв степен: (a) рак на дојка <50 години; (b) NOC; (c) билатерален рак на дојка; (d) рак на дојка кај маж; (vii) жена со серозен рак на дојка од висок степен.
Од секој пациент беше земен примерок од периферна крв од 20 mL и собран во EDTA епрувети (BD Biosciences). Геномската ДНК беше изолирана од примероци од цела крв од 0,7 mL со помош на комплетот за изолација QIAsymphony DSP DNA Midi (QIAGEN, Hilden, Италија) според упатствата на производителот и беше пропуштена низ флуорометр Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, САД). Извршете квантификација. Збогатувањето на целта и подготовката на библиотеката се вршат од Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, подготвен за вчитување во комплетот Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 за автоматска подготовка на библиотеката според упатствата на производителот. Комплетот се состои од два мултиплекс PCR прајмери ​​кои можат да се користат за проучување на сите гени BRCA1 (NM_007300.3) и BRCA2 (NM_000059.3). Накратко, 15 µL од секоја разредена ДНК примерок (10 ng) беше додадена на баркодирани плочи за подготовка на библиотеката и сите реагенси и потрошни материјали беа вчитани на инструментот Ion Chef™. Потоа беше извршена автоматска подготовка на библиотеката и здружување на баркодираните библиотеки со примероци на инструментот Ion Chef™. Бројот на подготвени библиотеки потоа беше оценет со Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, САД) според упатствата на производителот. Конечно, библиотеките се комбинираат во еквимоларни соодноси во епрувети за примероци од библиотеката Ion Chef™ (епрувети со баркод) и се вчитуваат. на инструментот Ion Chef™. Секвенционирањето беше извршено со помош на инструмент Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) со помош на чип Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Анализата на податоците беше извршена со помош на Amplicon Suite (SmartSeq srl) и софтверот Ion Reporter.
Целата номенклатура на варијантите ги следеше тековните упатства на Конзорциумот за варијации на човечкиот геном, достапни онлајн (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Клиничкото значење на варијантите BRCA1/2 беше дефинирано со користење на класификацијата на Меѓународниот конзорциум ENIGMA (Мрежа базирана на докази за толкување на мутантни алели од герминативната линија, https://enigmaconsortium.org/) и консултирање на различни бази на податоци како што се ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD и UMD. Класификацијата вклучува пет различни категории на ризик: бенигна (категорија I), веројатно бенигна (категорија II), варијанта со неизвесно значење (VUS, категорија III), веројатно патогена (категорија IV) и патогена (категорија V). VarSome, исто така, го анализираше ефектот на мутациите врз структурата и функцијата на протеините, информативна алатка со пристап до 30 бази на податоци.32
За да се додели потенцијално клиничко значење на секој VUS, беа користени следните компјутерски алгоритми за предвидување на протеини: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) и Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Варијантите класифицирани како класа 1 и 2 се сметаа за див тип.
Секвенционирањето на Сангер го потврди присуството на секоја патогена варијанта. Накратко, за секоја откриена варијанта беше дизајниран пар специфични прајмери ​​со користење на референтните секвенци на гените BRCA1 и BRCA2 (NG_005905.2, NM_007294.3 и NG_012772.3, NM_000059.3, соодветно). Затоа, беше извршена целна PCR, проследена со секвенционирање на Сангер.
Пациентите кои беа негативни на генот BRCA1/2 беа тестирани со мултиплекс лигациско-зависна амплификација на сонда (MLPA) според упатствата на производителот за да се процени присуството на големи геномски преуредувања (LGR). Накратко, примероците од ДНК се денатурирани и се користат до 60 специфични сонди за гените BRCA1 и BRCA2, при што секоја детектира специфична ДНК секвенца со должина од приближно 60 нуклеотиди. Производите за амплификација на сонда, кои се состојат од уникатен сет на PCR ампликони, потоа беа анализирани со капиларна електрофореза и со софтверот Cofalyser.Net во комбинација со соодветните специфични за серијата табели Cofalyser (www.mrcholland.com).
Избрани клиничко-патолошки варијабли (хистолошки степен и индекс на пролиферација Ki-67%) беа поврзани со присуството на BRCA1/2 PV, пресметани со помош на софтверот Prism верзија 8.4 користејќи го Fisher-овиот егзакт тест, претпоставувајќи дека p-вредноста <0,05 е значајна.
Помеѓу јануари 2017 и март 2021 година, 455 пациенти биле скринирани за герминативни мутации на BRCA1/2. Тестирањето за мутации било извршено во Центарот за експериментална онкологија и хематологија при болницата Поликлинико. Според сицилијанските упатства (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Gennaio 2020), „Родолико Катанија - Сан Марко“ вкупно 389 пациенти имале рак на дојка, 37 рак на јајници, 16 рак на панкреас, 8 рак на простата и 5 меланом. Распределбата на пациентите според видот на рак и резултатите од анализата е прикажана на Слика 1.
Слика 1 прикажува дијаграм на тек што прикажува преглед на студијата. Пациентите со тумори на дојка, меланом, панкреас, простата или јајници беа тестирани за мутации во гените BRCA1 и BRCA2.
Кратенки: PVs, патогена варијанта; VUS, варијанта со неизвесно значење; WT, секвенца BRCA1/2 од див тип.
Селективно ги фокусиравме нашите студии на кохорти со рак на дојка. Пациентите имаа средна возраст од 49 години (опсег 23-89) и беа претежно жени (n = 376 или 97%).
Од овие испитаници, 64 (17%) имале мутации на BRCA1/2 и сите биле жени. Триесет и пет (9%) имале PV, а 29 (7,5%) имале VUS. Седумнаесет (48,6%) од 35-те патогени варијанти се појавиле кај BRCA1 и 18 (51,4%) кај BRCA2, додека 5 VUS се појавиле кај BRCA1 (17,2%) и 24 (82,8%) кај BRCA2 (Слики 1 и 2). LGR не бил присутен во MLPA анализата.
Слика 2. Анализа на мутациите BRCA1 и BRCA2 кај 389 пациенти со рак на дојка. (A) Распределба на патогени варијанти (PV) (црвена), варијанти со неизвесно значење (VUS) (портокалова) и WT (сина) кај 389 пациенти со рак на дојка; (B) 389 пациенти со рак на дојка Триесет и пет (9%) имале патогени варијанти (PV) на BRCA1/2. Меѓу нив, 17 (48,6%) биле носители на BRCA1 PV (темно црвена) и 18 (51,4%) биле носители на BRCA2 (светло црвена); (C) 29 (7,5%) од 389 испитаници носеле VUS, 5 (17,2%) гени BRCA1 (темно портокалова) и 24 (82,8%) гени BRCA2 (светло портокалова).
Кратенки: PVs, патогена варијанта; VUS, варијанта со неизвесно значење; WT, секвенца BRCA1/2 од див тип.
Потоа ја испитавме преваленцата на молекуларните подтипови на BC кај пациенти со BRCA1/2 PV. Дистрибуцијата вклучуваше 2 (5,7%) луминални А, 15 (42,9%) луминални Б, 3 (8,6%) луминални Б-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ и 13 (37,1%) пациенти со TNBC. Меѓу BRCA1-позитивните пациенти, 5 (29,4%) имале луминални Б BC, 2 (11,8%) имале HER2+ болест и 10 (58,8%) имале TNBC. Туморите без BRCA1 мутации биле или луминални А или луминални Б-HER2+ (Слика 3). Во подгрупата BRCA2-позитивни, 10 (55,6%) тумори биле луминални Б, 3 (16,7%) биле луминални Б-HER2+, 3 (16,7%) TNBC и 2 (11,1%) биле луминални А (Слика 3). Во оваа група не беа присутни HER2+ тумори. Според тоа, мутациите на BRCA1 се распространети кај пациенти со TNBC, додека промените на BRCA2 се доминантни кај лица со лумен Б.
Слика 3 Преваленца на подтипови на рак на дојка кај пациенти со патогени варијанти во BRCA1 и BRCA2. Хистограми што ја прикажуваат дистрибуцијата на BRCA1- (темно црвена) и BRCA2- (светло црвена) PV меѓу молекуларните подтипови на пациенти со рак на дојка. Броевите наведени во секое поле го претставуваат процентот на пациенти со BRCA1 и BRCA2 PV за секој подтип на рак на дојка.
Кратенки: PVs, патогена варијанта; HER2+, рецептор 2 позитивен за човечки епидермален фактор на раст; TNBC, тројно негативен рак на дојка.
Последователно, го проценивме типот и локализацијата на гените на BRCA1 и BRCA2 PV. Кај BRCA1 PV, забележавме 7 варијанти со единечни нуклеотиди (SNV), 6 делеции, 3 дупликации и 1 вметнување. Само една мутација (c.5522delG) претставува ново откритие. Најчестиот BRCA1 PV откриен кај двата испитаници беше c.5035_5039delCTAAT. Оваа промена вклучува делеција на пет нуклеотиди (CTAAT) во BRCA1 егзонот 15, што резултира со замена на аминокиселината леуцин со тирозин на кодонот 1679, а поради поместување на рамката на транслацијата со предвиден алтернативен стоп кодон, доведе до предвремено скратување на протеините. Сите други промени се откриени само во еден случај. Имено, еден од пријавените PV беше лоциран во консензуалниот регион на местото на спојување (c.4357+1G>T) (Табела 1).
Во врска со BRCA2 PV, забележавме 6 делеции, 6 SNV и 2 дупликации. Ниту една од пронајдените промени не е нова. Три мутации се повторија во нашата популација, c.428dup и c.8487+1G>A забележани кај 3 испитаници, проследени со c.5851_5854delAGTT пронајден во два случаи. Промената c.428dup вклучува повторување на C во егзон 5 на BRCA2, за кој се предвидува дека кодира скратен, нефункционален протеин. Мутацијата c.8487+1G>A се јавува во интронскиот регион на BRCA2 интрон 19 (± 1,2) и влијае на консензуалната секвенца на сплајсинг, што резултира со изменето сплајсинг што резултира со абнормален или отсутен протеин. Патогената варијанта c.5851_5854delAGTT се должи на делеција од 4 нуклеотиди од нуклеотидните позиции 5851 до 5854 во кодирачкиот егзон 10 на генот BRCA2 и резултира со транслациско поместување на рамката со предвиден алтернативен стоп кодон (p.S1951WfsTer). Имено, како што беше претходно објавено, обете промени c.631G>A и c.7008-2A>T беа откриени кај истиот пациент.34 Првата мутација вклучува замена на аденозин (A) во BRCA2 егзон 7 со нуклеотид што содржи гванин (G), што резултира со промена на валин во изолеуцин на кодонот 211, изолеуцин. Аминокиселината е аминокиселина со многу слични својства. Оваа промена влијае на нормалното спојување на mRNA. Втората варијанта се наоѓа во интронски регион и резултира со двојна замена од А во тимин (T) пред егзон 13 на генот што го кодира BRCA2. Промената c.7008-2A>T може да генерира повеќе транскрипти со различни должини. Понатаму, во групата на BRCA2 PV, 4 од 18 промени (22,2%) беа интронски.
Потоа ги мапиравме штетните мутации на BRCA1/2 во функционалните домени и регионите за врзување на протеини (Сл. 4). Во генот BRCA1, 50% од PV беа лоцирани во кластерскиот регион на рак на дојка (BCCR), додека 22% од мутациите беа лоцирани во кластерскиот регион на рак на јајници (OCCR) (Сл. 4A). Во BRCA2 PV, 35,7% од варијантите беа лоцирани во BCCR регионот, а 42,8% од мутациите беа лоцирани во OCCR (Сл. 4B). Потоа, ја проценивме локацијата на PV во рамките на домените на протеините BRCA1 и BRCA2. За протеинот BRCA1, пронајдовме три PV во домените на јамката и намотката, и две мутации во доменот BRCT (Сл. 4A). За протеинот BRCA2, 4 PV беа мапирани во доменот на повторување BRC, додека 3 интронски и 3 егзонски промени беа откриени во домените за врзување на олиго/олигосахариди (OB) и кула (T) (Слика 4B).
Слика 4 Шематски приказ на протеините BRCA1 и BRCA2 и локализација на патогени варијанти. Оваа слика ја покажува дистрибуцијата на патогените варијанти BRCA1 (A) и BRCA2 (B) кај пациенти со рак на дојка. Егзонските мутации се прикажани во сина боја, додека интронските варијанти се прикажани во портокалова боја. Висината на шипката го претставува бројот на случаи. Прикажани се протеините BRCA1 и BRCA2 и нивните функционални домени. (A) Протеинот BRCA1 содржи домен на јамка (RING) и секвенца за нуклеарна локализација (NLS), домен со намотана намотка, домен на кластер SQ/TQ (SCD) и домен BRCA1 C-терминал (BRCT). (B) Протеинот BRCA2 содржи осум BRC повторувања, домен за врзување на ДНК со спирален домен (Helical), три набори за врзување на олигонуклеотиди/олигосахариди (OB), куласт домен (T) и NLS на C страната. Областите наречени регион на кластер на рак на дојка (BCCR) и регион на кластер на рак на јајници (OCCR) се прикажани на дното. *Претставува мутации што одредуваат стоп кодони.
Потоа ги испитавме клиничко-патолошките карактеристики на BC кои би можеле да корелираат со присуството на BRCA1/2 PV. Комплетни клинички записи беа достапни за 181 BRCA1/2-негативни пациенти (не-носители) и сите носители (n = 35). Постоеше корелација помеѓу стапката на пролиферација на туморот и степенот.
Ја пресметавме дистрибуцијата на Ki-67 врз основа на медијаната на нашата кохорта (25%, опсег <10-90%). Субјектите со Ki-67 < 25% беа дефинирани како „низок Ki-67“, додека лицата со вредности ≥ 25% беа сметани за „висок Ki-67“. Значајни разлики во Ki-67 (p <0,01) беа пронајдени помеѓу оние кои не се носители и оние кои се носители на BRCA1 PV (Сл. 5А).
Слика 5 Корелација на Ki-67 со дистрибуција на степен кај жени со рак на дојка со и без BRCA1 и BRCA2 PV. (A) Кутија-дијаграм што ги прикажува средните вредности на Ki-67 кај 181 пациентки со рак на дојка кои не се носители на рак на дојка наспроти пациенти со BRCA1 (18) или BRCA2 (17) PV. P вредностите под 0,5 се сметаа за статистички значајни. (B) Хистограм што ја претставува распределбата на пациентки со рак на дојка во групи со хистолошки степен (G2 и G3) според статусот на мутациите на BRCA1 и BRCA2 (WT испитаници, носители на BRCA1 и BRCA2 PV).
Исто така, испитавме дали степенот на туморот е во корелација со присуството на BRCA1/2 PV. Бидејќи G1 BC беше отсутен во нашата популација, ги поделивме пациентите во две групи (G2 или G3). Во согласност со резултатите од Ki-67, анализата откри статистички значајна корелација помеѓу степенот на тумор и мутацијата BRCA1, со поголем процент на G3 тумори кај носители на BRCA1 во споредба со оние кои не се носители (p <0,005) (Слика 5Б).
Напредокот во технологијата за секвенционирање на ДНК овозможи невиден напредок во генетското тестирање на BRCA1/2, со клучни импликации за пациенти со семејна историја на рак. До денес, приближно 20.000 варијанти на BRCA1/2 се идентификувани и класифицирани според Американското друштво за медицинска генетика 35 и системот ENIGMA.35,36 Добро е познато дека мутацискиот спектар на BRCA1/2 варира значително низ географските региони.37 Во Италија, стапката на BRCA1/2 PV се движеше од 8% до 37%, покажувајќи широка варијабилност во рамките на земјата.38,39 Со население од речиси 5 милиони, Сицилија е петтиот најголем регион во Италија во однос на бројот на жители. Иако постојат податоци за дистрибуцијата на BRCA1/2 во западна Сицилија, нема обемни докази во источниот дел на островот.
Нашата студија е еден од првите извештаи за инциденцата на BRCA1/2 PV кај пациенти со BC во источна Сицилија.28 Ја фокусиравме нашата анализа на BC, бидејќи ова е убедливо најчестата болест во нашата кохорта.
При тестирање на 389 пациенти со рак на дојка кај мажи, 9% носеле BRCA1/2 PV, рамномерно распределени помеѓу BRCA1 и BRCA2. Овие резултати се во согласност со оние претходно објавени кај италијанската популација.28 Интересно е што 3% (13/389) од нашата кохорта биле мажи. Оваа стапка е повисока од очекуваната за машки рак на дојка (1% од сите рак на дојка),40 што го одразува нашиот избор на популации врз основа на ризикот од мутација на BRCA1/2. Сепак, ниту еден од овие мажи не развил BRCA1/2 PV, па затоа биле кандидати за понатамошна молекуларна анализа за да се исклучи присуството на помалку чести мутации како што се PALB2, RAD51C и D, меѓу другите. Варијанти со неизвесно значење биле пронајдени кај 7% од испитаниците кај кои BRCA2 VUS бил евидентен. Дури и овој резултат е во согласност со претходно постоечките докази.28,41,42
Кога ја анализиравме дистрибуцијата на молекуларните подтипови на BC кај жени со мутација на BRCA1/2, потврдивме познати асоцијации помеѓу TNBC и BRCA1 PV (58,8%) и помеѓу луминалниот B BC и BRCA2 PV (55,6%).16,43 Луминалните A и HER2+ тумори кај носители на BRCA1 и BRCA2 PV се во согласност со постојните податоци од литературата.16,43
Потоа се фокусираме на видот и локацијата на BRCA1/2 PV. Во нашата кохорта, најчестата BRCA1 PV беше c.5035_5039delCTAAT. Иако Инкорваја и др. не ја опишаа оваа варијанта во нивната сицилијанска кохорта, други автори ја пријавија како герминативна BRCA1 PV.34 Неколку BRCA1 PV беа пронајдени во нашата кохорта - на пр. c.181T>G, c.514del, c.3253dupA и c.5266dupC - кои се забележани на Сицилија.28 Од нив, две основачки мутации на BRCA1 (c.181T>G и c.5266dupC) најчесто се наоѓаат кај ашкеназиските Евреи од Источна и Централна Европа (Полска, Чешка), Словенечки, Австриски, Унгарски, Белоруски и Германски), 44,45 и, во Соединетите Американски Држави и Аргентина, неодамна беше дефинирана како „рекурентна герминативна варијанта“ кај италијански пациенти со рак на дојка и OC. Варијантата 34c.514del претходно беше идентификувана кај 8 пациенти со рак на дојка од северна Сицилија во Палермо и Месина. Интересно е што дури и Инкорваја и сор. ја пронашле варијантата c.3253dupA кај некои семејства во Катанија.28 Најрепрезентативните BRCA2 PV се c.428dup, c.5851_5854delAGTT и интронската варијанта c.8487+1G>A, кои се подетално објавени 28 кај пациент во Палермо со c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV бил забележан во домаќинствата во северозападна Сицилија, главно во регионите Трапани и Палермо, додека c.5851_5854delAGTT PV бил забележан во домаќинствата во северозападна Сицилија. Варијантата 8487+1G>A била почеста кај испитаници од Месина, Палермо и Калтанисета.28 Ребек и др. претходно е опишана промената c.5851_5854delAGTT во Колумбија.37 Друг BRCA2 PV, c.631+1G>A, е пронајден кај пациенти со BC и OC од Сицилија (Агриџенто, Сиракуза и Рагуза).28 Имено, забележавме коегзистенција на две BRCA2 варијанти (BRCA2 c.631G>A и c.7008-2A>T) кај истиот пациент, за кои претпоставивме дека се одвоени во cis режим, како што претходно беше објавено.34,46 Овие BRCA2 мутации навистина често се забележуваат во италијанскиот регион и е откриено дека воведуваат предвремени стоп кодони, влијаејќи на спојувањето на информаторската РНК и предизвикувајќи неуспех на протеинот BRCA2.47,48
Исто така, ги мапиравме BRCA1 и BRCA2 PV во претпоставените OCCR и BCCR региони на протеински домени и гени. Овие региони беа опишани од Ребек и сор. како ризични области за развој на рак на јајници и дојка, соодветно.49 Сепак, доказите во врска со поврзаноста помеѓу локацијата на варијантите на герминативната линија и ризикот од рак на дојка или јајници остануваат контроверзни.28,50-52 Во нашата популација, BRCA1 PV беа претежно лоцирани во регионот BCCR, додека BRCA2 PV беа претежно лоцирани во регионот OCCR. Сепак, не можевме да најдеме никаква поврзаност помеѓу претпоставените OCCR и BCCR региони и карактеристиките на BC. Ова може да се должи на ограничениот број на пациенти со мутации на BRCA1/2. Од перспектива на протеинскиот домен, BRCA1 PV се дистрибуирани по целиот протеин, а промените на BRCA2 се преференцијално наоѓаат во доменот на повторување на BRC.
Конечно, ги корелиравме клиничко-патолошките карактеристики на BC со BRCA1/2 PV. Поради ограничениот број на вклучени пациенти, пронајдовме само значајна корелација помеѓу Ki-67 и степенот на туморот. Иако проценката и толкувањето на Ki-67 остануваат донекаде контроверзни, сигурно е дека високите стапки на пролиферација се поврзани со зголемен ризик од повторна појава на болеста и намалено преживување. До денес, границата за разликување помеѓу „висок“ и „низок“ Ki-67 е 20%. Сепак, овој праг не важи за нашата популација на пациенти со BRCA1/2 мутација, која има средна вредност на Ki-67 од 25%. Овој тренд на високи стапки на Ki-67 може да се објасни со преваленцата во нашите луминални Б и TNBC кохорти, од кои беа присутни малку луминални А тумори. Сепак, некои докази сугерираат дека повисокиот граничник на Ki-67 (25-30%) може подобро да ги стратификува пациентите според нивната прогноза.53,54 Од резултатите од нашата анализа, значајната корелација не е изненадувачка. Се јавува помеѓу високиот Ki-67 и степените и присуството на BRCA1 PV. Всушност, туморите поврзани со BRCA1 се типични за TNBC и покажуваат поагресивни карактеристики.16,17
Како заклучок, оваа студија дава извештај за мутацискиот статус на BRCA1/2 кај кохорта на рак на дојка од источна Сицилија. Генерално, нашите наоди се во согласност со претходно постоечките докази, како во однос на преваленцата на мутации, така и во однос на клиничко-патолошките карактеристики на ракот на дојка. Потребни се повеќе студии кај поголеми популации на пациенти со рак на дојка со мутација на BRCA1/2, како што е користењето на мултигеномска проширена мутациска анализа, за да се процени присуството на PV кои се различни и поретки од BRCA1/2. Ова ќе овозможи идентификација и правилно управување со зголемениот број на испитаници со зголемен ризик од рак поради генетски мутации.
Потврдивме дека пациентите потпишаа информирана согласност за анонимно објавување на нивните примероци од тумор за истражувачки цели. Сите пациенти потпишаа писмена информирана согласност во согласност со Хелсиншката декларација. Според политиката на AOU Policlinico „G.Rodolico – S.Marco“, оваа студија беше ослободена од етички преглед бидејќи анализата BRCA1/2 беше извршена во согласност со клиничката пракса и сите пациенти дадоа писмена информирана согласност. Пациентите, исто така, се согласуваат со користењето на нивните податоци за истражувачки цели.
Му се заблагодаруваме на проф. Паоло Вињери за неговата помош во грижата за пациенти со рак на дојка, како што побара Етичкиот комитет.
Федерика Марторана известува за хонорари од Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Другите автори изјавуваат дека немаат судир на интереси во ова дело.
1. Сунг Х, Ферлеј Ј, Сигел РЛ, и др. Глобална статистика за ракот 2020: GLOBOCAN ја проценува инциденцата и смртноста на 36 видови на рак во 185 земји низ целиот свет. CA Cancer J Clin.2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660