আপনার ব্রাউজারে বর্তমানে জাভাস্ক্রিপ্ট নিষ্ক্রিয় করা আছে। জাভাস্ক্রিপ্ট নিষ্ক্রিয় থাকলে এই ওয়েবসাইটের কিছু বৈশিষ্ট্য কাজ করবে না।
আপনার নির্দিষ্ট বিবরণ এবং পছন্দের ঔষধের তথ্য দিয়ে নিবন্ধন করুন। আমরা আপনার দেওয়া তথ্য আমাদের সুবিশাল ডেটাবেসের নিবন্ধগুলোর সাথে মিলিয়ে দেখব এবং দ্রুত আপনাকে একটি পিডিএফ কপি ইমেল করে দেব।
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
স্টেফানিয়া স্টেলা, 1,2 সিলভিয়া রিটা ভিটালে, 1,2 ফেদেরিকা মার্টোরানা, 1,2 মিশেল ম্যাসিমিনো, 1,2 গিউলিয়ানা পাভোনে, 3 কাতিয়া ল্যানজাফেম, 3 সেবাস্তিয়ানো বিয়াঙ্কা, 4 চিয়ারা ব্যারোন, 5 ক্রিস্টিনা গর্গোন, 6 মার্কো ফিচেরা, 6 জন সিলভিয়া ম্যানজেলা, 7 ডিপার্টমেন্টের সিলভিয়া 1, 2 জন। মেডিসিন, ইউনিভার্সিটি অফ ক্যাটানিয়া, ক্যাটানিয়া, 95123, ইতালি;2 সেন্টার ফর এক্সপেরিমেন্টাল অনকোলজি অ্যান্ড হেমাটোলজি, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania , 95123, Italy; 3 মেডিকেল অনকোলজি, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italy; 4 মেডিকেল জেনেটিক্স, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italy; ৫ মেডিসিন জেনেটিক্স, এএসপি, সিরাকিউস, ৯৬১০০, ইতালি; ৬ বায়োমেডিকেল অ্যান্ড বায়োটেকনোলজি সায়েন্সেস বিভাগ, ইউনিভার্সিটি অফ কাতানিয়া, মেডিকেল জেনেটিক্স, কাতানিয়া, ইতালি, ৯৫১২৩; ৭ ওয়াসি রিসার্চ ইনস্টিটিউট-আইআরসিসিএস, ত্রোইনা, ৯৪০১৮, ইতালি। যোগাযোগ: স্টেফানিয়া স্টেলা, টেলিফোন +৩৯ ০৯৫ ৩৭৮ ১৯৪৬, ইমেইল [email protected]; উদ্দেশ্য: BRCA1 এবং BRCA2 জিনের জার্মলাইন মিউটেশন এবং প্রতিষ্ঠিত স্তন ক্যান্সার (BC), ডিম্বাশয় ক্যান্সার (OC) ও অন্যান্য ক্যান্সার আজীবন ক্যান্সারের ঝুঁকির সাথে সম্পর্কিত। ব্যক্তিগত ঝুঁকি নির্ণয়ের জন্য, সেইসাথে সুস্থ বাহকদের মধ্যে প্রতিরোধের পদ্ধতি খুঁজে বের করতে এবং ক্যান্সার রোগীদের জন্য চিকিৎসা পদ্ধতি নির্ধারণ করতে BRCA জিনের পরীক্ষা করা অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। ভৌগোলিক অঞ্চলভেদে BRCA1 এবং BRCA2 জিনের পরিবর্তনের ব্যাপকতা ব্যাপকভাবে পরিবর্তিত হয়, এবং যদিও সিসিলিয়ান পরিবারগুলিতে BRCA প্যাথোজেনিক ভ্যারিয়েন্টের উপর তথ্য বিদ্যমান, পূর্ব সিসিলির জনগোষ্ঠীকে বিশেষভাবে লক্ষ্য করে করা গবেষণার অভাব রয়েছে। আমাদের গবেষণার লক্ষ্য ছিল পূর্ব সিসিলির স্তন ক্যান্সারের রোগীদের একটি দলে BRCA প্যাথোজেনিক জার্মলাইন পরিবর্তনের ঘটনা ও বণ্টন অনুসন্ধান করা এবং নেক্সট-জেনারেশন সিকোয়েন্সিং ব্যবহার করে স্তন ক্যান্সারের নির্দিষ্ট বৈশিষ্ট্যগুলির সাথে তাদের সম্পর্ক মূল্যায়ন করা। এই পরিবর্তনগুলির উপস্থিতি টিউমারের গ্রেড এবং প্রলিফারেশন ইনডেক্সের সাথে সম্পর্কিত ছিল। ফলাফল: সামগ্রিকভাবে, ৩৫ জন রোগীর (৯%) মধ্যে একটি BRCA প্যাথোজেনিক ভ্যারিয়েন্ট ছিল, যার মধ্যে ১৭ জনের (৪৯%) BRCA1 জিনে এবং ১৮ জনের (৫১%) BRCA2 জিনে ছিল। ট্রিপল-নেগেটিভ স্তন ক্যান্সারের রোগীদের মধ্যে BRCA1 জিনের পরিবর্তন বেশি দেখা যায়, যেখানে লুমিনাল বিসি রোগীদের মধ্যে BRCA2 মিউটেশন বেশি দেখা যায়। মিউটেশন বহনকারী নয় এমন ব্যক্তিদের তুলনায়, BRCA1 ভ্যারিয়েন্টযুক্ত ব্যক্তিদের টিউমারের গ্রেড এবং প্রলিফারেটিভ ইনডেক্স উল্লেখযোগ্যভাবে বেশি ছিল। উপসংহার: আমাদের এই গবেষণা পূর্ব সিসিলির বিসি রোগীদের BRCA মিউটেশনাল স্ট্যাটাসের একটি সার্বিক চিত্র প্রদান করে এবং বংশগত বিসি রোগী শনাক্তকরণে এনজিএস বিশ্লেষণের ভূমিকা নিশ্চিত করে। সার্বিকভাবে, এই তথ্যগুলো মিউটেশন বহনকারীদের মধ্যে ক্যান্সারের সঠিক প্রতিরোধ ও চিকিৎসার জন্য BRCA স্ক্রিনিংকে সমর্থনকারী পূর্ববর্তী প্রমাণের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ।
স্তন ক্যান্সার (বিসি) বিশ্বব্যাপী সবচেয়ে সাধারণ ম্যালিগন্যান্সি এবং মহিলাদের মধ্যে সবচেয়ে মারাত্মক ক্যান্সার।¹ বিসি-র পূর্বাভাস এবং ক্লিনিকাল আচরণ নির্ধারণকারী জৈবিক বৈশিষ্ট্যগুলি সময়ের সাথে সাথে ব্যাপকভাবে অধ্যয়ন করা হয়েছে এবং আংশিকভাবে ব্যাখ্যা করা হয়েছে। প্রকৃতপক্ষে, বিসি-কে বিভিন্ন আণবিক উপপ্রকারে শ্রেণীবদ্ধ করার জন্য বর্তমানে বেশ কয়েকটি সারোগেট মার্কার ব্যবহার করা হয়। সেগুলি হল ইস্ট্রোজেন (ER) এবং/অথবা প্রোজেস্টেরন রিসেপ্টর (PgR), হিউম্যান এপিডার্মাল গ্রোথ ফ্যাক্টর রিসেপ্টর 2 (HER2) অ্যামপ্লিফিকেশন, প্রলিফারেশন ইনডেক্স Ki-67 এবং টিউমার গ্রেড (G)।² এই ভেরিয়েবলগুলির সংমিশ্রণ নিম্নলিখিত বিসি বিভাগগুলি চিহ্নিত করেছে: ১) লুমিনাল টিউমার, যা ER এবং/অথবা PgR এক্সপ্রেশন দেখায়, যা ৭৫% বিসি-র জন্য দায়ী। এই টিউমারগুলিকে আরও দুটি ভাগে ভাগ করা হয়েছিল: লুমিনাল এ, যখন Ki-67 ২০% এর নিচে এবং HER2 নেগেটিভ, এবং লুমিনাল বি, যখন Ki-67 ২০% এর সমান বা তার বেশি এবং প্রলিফারেশন ইনডেক্স নির্বিশেষে HER2 অ্যামপ্লিফিকেশনের উপস্থিতি থাকে; ২) HER2+ টিউমার যা ER এবং PgR নেগেটিভ কিন্তু HER2 অ্যামপ্লিফিকেশন দেখায়। এই গ্রুপটি সমস্ত স্তন টিউমারের ১০% এর জন্য দায়ী; ৩) ট্রিপল-নেগেটিভ ব্রেস্ট ক্যান্সার (TNBC), যা ER এবং PgR এক্সপ্রেশন এবং HER2 অ্যামপ্লিফিকেশন দেখায় না, এটি স্তন ক্যান্সারের প্রায় ১৫% এর জন্য দায়ী।২-৪
এই BC উপপ্রকারগুলির মধ্যে, টিউমার গ্রেড এবং প্রলিফারেশন ইনডেক্স হল ক্রস-সেকশনাল বায়োমার্কার যা টিউমারের আগ্রাসন এবং পূর্বাভাসের সাথে সরাসরি এবং স্বাধীনভাবে সম্পর্কিত।5,6
উপরে উল্লিখিত জৈবিক বৈশিষ্ট্যগুলো ছাড়াও, গত কয়েক বছরে স্তন ক্যান্সারের (BC) বিকাশে বংশগত জিনগত পরিবর্তনের ভূমিকা ক্রমশ গুরুত্বপূর্ণ হয়ে উঠেছে।৭ প্রায় প্রতি ১০টি স্তন টিউমারের মধ্যে ১টি নির্দিষ্ট জিনের জার্মলাইন পরিবর্তনের কারণে বংশগতভাবে আসে।৮ সম্প্রতি ১,৮০,০০০-এরও বেশি নারীকে নিয়ে করা দুটি বৃহৎ এপিডেমিওলজিক্যাল গবেষণায় আটটি জিনের একটি দলকে (যেমন, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, এবং RAD51D) চিহ্নিত করা হয়েছে, যা মূলত বংশগত স্তন ক্যান্সারের জন্য দায়ী।এই জিনগুলোর মধ্যে, BRCA1 এবং BRCA2 (এরপরে BRCA1/2 হিসাবে উল্লেখিত) স্তন টিউমারের বিকাশের সাথে সবচেয়ে শক্তিশালী সম্পর্ক দেখিয়েছে।৯-১২ প্রকৃতপক্ষে, জার্মলাইন BRCA1/2 মিউটেশন স্তন ক্যান্সারের পাশাপাশি ডিম্বাশয়, প্রোস্টেট, অগ্ন্যাশয়, কোলোরেক্টাল এবং মেলানোমাসহ অন্যান্য ম্যালিগন্যান্সির আজীবন ঝুঁকি উল্লেখযোগ্যভাবে বাড়িয়ে দেয়।১৩ থেকে ৮০ বছর বয়সের মধ্যে, BRCA1 প্যাথোজেনিক ভ্যারিয়েন্টযুক্ত নারীদের মধ্যে স্তন ক্যান্সারের ক্রমবর্ধমান ঘটনা ৭২%। (পিভি) এবং BRCA2 পিভি থাকা মহিলাদের ক্ষেত্রে ৬৯%।১৪
উল্লেখযোগ্যভাবে, সাম্প্রতিক একটি প্রকাশনা থেকে জানা যায় যে স্তন ক্যান্সারের ঝুঁকি পলিসাইথেমিয়া ভেরার (PV) ধরনের উপর নির্ভর করে। প্রকৃতপক্ষে, রোগ সৃষ্টিকারী ট্রাঙ্কেটিং ভ্যারিয়েন্টের তুলনায়, সুস্পষ্ট মিসসেন্স ভ্যারিয়েন্ট, বিশেষ করে BRCA1 জিনে, স্তন ক্যান্সারের ঝুঁকি হ্রাসের সাথে সম্পর্কিত, বিশেষত বয়স্ক মহিলাদের ক্ষেত্রে।¹⁵
BRCA1 বা BRCA2 PV-এর উপস্থিতি বিভিন্ন জৈবিক এবং ক্লিনিকোপ্যাথলজিক্যাল বৈশিষ্ট্যের সাথে সম্পর্কিত ছিল।¹⁶,¹⁷ BRCA1-সম্পর্কিত স্তন ক্যান্সারগুলো ক্লিনিক্যালি আক্রমণাত্মক, দুর্বলভাবে বিভেদিত এবং অত্যন্ত দ্রুত বর্ধনশীল হয়ে থাকে। এই টিউমারগুলো সাধারণত ট্রিপল নেগেটিভ হয় এবং অল্প বয়সে শুরু হয়। BRCA2-মিউটেটেড রোগীদের ক্ষেত্রে যে টিউমারগুলো দেখা যায়, সেগুলো সাধারণত মাঝারি থেকে ভালোভাবে বিভেদিত গ্রেড এবং পরিবর্তনশীল প্রলিফারেটিভ ইনডেক্স প্রদর্শন করে। এই টিউমারগুলো লুমেন B-তে বেশি দেখা যায় এবং সাধারণত বয়স্কদের মধ্যে ঘটে।¹⁶-¹⁸ উল্লেখযোগ্যভাবে, BRCA1 এবং BRCA2-এর মিউটেশনগুলো প্ল্যাটিনাম সল্ট এবং পলি(ADP-রাইবোজ) পলিমারেজ ইনহিবিটর (PARPi)-এর মতো টার্গেটেড ড্রাগসহ নির্দিষ্ট চিকিৎসার প্রতি সংবেদনশীলতা বাড়িয়ে দেয়।¹⁹,²⁰
গত কয়েক বছরে, ক্লিনিকাল অনুশীলনে নেক্সট-জেনারেশন সিকোয়েন্সিং (NGS) এর বাস্তবায়ন ক্রমবর্ধমান সংখ্যক স্তন ক্যান্সার (BC) রোগীদের BRCA1/2 সহ ক্যান্সার সংবেদনশীলতা সিন্ড্রোমের জন্য আণবিক পরীক্ষা করার সুযোগ করে দিয়েছে।২১ একই সাথে, BRCA1/2 পরীক্ষার জন্য উপযুক্ত ব্যক্তিদের আরও ভালোভাবে শনাক্ত করার জন্য পারিবারিক ইতিহাস, জনসংখ্যাতাত্ত্বিক এবং ক্লিনিকোপ্যাথলজিক্যাল বৈশিষ্ট্য সম্পর্কিত সুনির্দিষ্ট মানদণ্ডের উপর ভিত্তি করে সংজ্ঞা তৈরি করা হয়েছে।২২,২৩ এই প্রেক্ষাপটে, নির্দিষ্ট জনগোষ্ঠীর মধ্যে BRCA1/2 স্ক্রিনিং সম্পর্কিত প্রমাণ জমা হচ্ছে, যা ভৌগোলিক অঞ্চল জুড়ে পার্থক্য তুলে ধরে।২৪–২৭ যদিও পশ্চিম সিসিলির স্তন ক্যান্সার রোগীদের উপর প্রতিবেদন রয়েছে, পূর্ব সিসিলির জনগোষ্ঠীর মধ্যে BRCA1/2 স্ক্রিনিং সম্পর্কিত তথ্য তুলনামূলকভাবে কম পাওয়া যায়।২৮,২৯
আমরা এখানে পূর্ব সিসিলির স্তন ক্যান্সার রোগীদের জার্মলাইন BRCA1/2 স্ক্রিনিং-এর ফলাফল বর্ণনা করছি এবং এই টিউমারগুলির প্রধান ক্লিনিকোপ্যাথলজিক্যাল বৈশিষ্ট্যগুলির সাথে BRCA1 বা BRCA2 মিউটেশনের উপস্থিতির সম্পর্ক স্থাপন করছি।
কাতানিয়ার রোডোলিকো – সান মার্কো পলিক্লিনিকো হাসপাতালের “সেন্টার ফর এক্সপেরিমেন্টাল অনকোলজি অ্যান্ড হেমাটোলজি”-তে একটি পূর্ববর্তীকালীন গবেষণা পরিচালিত হয়েছিল। ২০১৭ সালের জানুয়ারি থেকে ২০২১ সালের মার্চ পর্যন্ত, স্তন ও ডিম্বাশয়, মেলানোমা, অগ্ন্যাশয় বা প্রোস্টেট ক্যান্সারে আক্রান্ত মোট ৪৫৫ জন রোগীকে BRCA/2 জিনগত পরীক্ষার জন্য আমাদের আণবিক রোগনির্ণয় পরীক্ষাগারে পাঠানো হয়েছিল। এই গবেষণাটি হেলসিঙ্কি ঘোষণাপত্র অনুসারে পরিচালিত হয়েছিল এবং আণবিক বিশ্লেষণের পূর্বে সকল অংশগ্রহণকারী লিখিতভাবে অবহিত সম্মতি প্রদান করেছিলেন।
কোর বায়োপসি বা সার্জিক্যাল নমুনার উপর ভিত্তি করে, শুধুমাত্র আগ্রাসী টিউমার উপাদানগুলো বিবেচনা করে বিসি-এর হিস্টোলজিক্যাল এবং বায়োলজিক্যাল বৈশিষ্ট্য (ইআর, পিজিআর, এইচইআর২ স্ট্যাটাস, কি-৬৭, এবং গ্রেড) মূল্যায়ন করা হয়েছিল। এই বৈশিষ্ট্যগুলোর উপর ভিত্তি করে, বিসি-গুলোকে নিম্নোক্তভাবে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছিল: লুমিনাল এ (ইআর+ এবং/অথবা পিজিআর+, এইচইআর২-, কি-৬৭<২০%), লুমিনাল বি (ইআর+ এবং/অথবা পিজিআর+, এইচইআর২-, কি-৬৭≥২০%), লুমিনাল বি-এইচইআর২+ (ইআর এবং/অথবা পিজিআর+, এইচইআর২+), এইচইআর২+ (ইআর এবং পিজিআর-, এইচইআর২+) অথবা ট্রিপল নেগেটিভ (ইআর এবং পিজিআর-, এইচইআর২-)।
BRCA1 এবং BRCA2 মিউটেশন স্ট্যাটাস মূল্যায়ন করার আগে, একজন অনকোলজিস্ট, একজন জেনেটিকিস্ট এবং একজন সাইকোলজিস্ট সহ একটি বহু-বিভাগীয় দল প্রতিটি রোগীর জন্য টিউমার জেনেটিক্স পরামর্শ পরিচালনা করে BRCA1 এবং/অথবা BRCA2 জিনে PV-এর উচ্চ ঝুঁকিযুক্ত ব্যক্তিদের উপস্থিতি নির্ধারণ করে। রোগী নির্বাচন ইতালীয় সোসাইটি অফ মেডিকেল অনকোলজি (AIOM) নির্দেশিকা এবং স্থানীয় সিসিলিয়ান সুপারিশ অনুসারে করা হয়েছিল।৩০,৩১ এই মানদণ্ডগুলির মধ্যে রয়েছে: (i) সংবেদনশীল জিনগুলিতে (যেমন, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN) পরিচিত প্যাথোজেনিক ভ্যারিয়েন্টের পারিবারিক ইতিহাস; (ii) BC আক্রান্ত পুরুষ; (iii) BC এবং OC আক্রান্ত ব্যক্তি; (iv) ৩৬ বছরের কম বয়সে BC, ৬০ বছরের কম বয়সে TNBC, বা ৫০ বছরের কম বয়সে দ্বিপাক্ষিক BC আক্রান্ত মহিলা; (v) ৫০ বছরের কম বয়সে BC-এর ব্যক্তিগত চিকিৎসার ইতিহাস এবং কমপক্ষে একজন প্রথম-ডিগ্রি আত্মীয়ের: (ক) ৫০ বছরের কম বয়সে BC; (খ) যেকোনো বয়সের নন-মিউসিনাস এবং নন-বর্ডারলাইন OC; (গ) দ্বিপাক্ষিক BC; (ঘ) পুরুষ BC; (ঙ) অগ্ন্যাশয়ের ক্যান্সার; (চ) প্রোস্টেট ক্যান্সার; (৬) ৫০ বছরের বেশি বয়সে স্তন ক্যান্সারের দুই বা ততোধিক ব্যক্তিগত ইতিহাস এবং পরস্পরের প্রথম-ডিগ্রি আত্মীয়দের (তার নিজের প্রথম-ডিগ্রি আত্মীয় সহ) ক্ষেত্রে স্তন ক্যান্সার, ডিম্বাশয়ের ক্যান্সার বা অগ্ন্যাশয়ের ক্যান্সারের পারিবারিক ইতিহাস; (৭) ডিম্বাশয়ের ক্যান্সারের ব্যক্তিগত ইতিহাস এবং কমপক্ষে একজন প্রথম-ডিগ্রি আত্মীয়: (ক) ৫০ বছরের কম বয়সে স্তন ক্যান্সার; (খ) ডিম্বাশয়ের ক্যান্সার নেই; (গ) উভয় স্তনে স্তন ক্যান্সার; (ঘ) পুরুষের স্তন ক্যান্সার; (৭) উচ্চ-গ্রেডের সেরাস ডিম্বাশয়ের ক্যান্সারযুক্ত মহিলা।
প্রতিটি রোগীর কাছ থেকে ২০ মিলি পেরিফেরাল রক্তের নমুনা সংগ্রহ করে ইডিটিএ টিউবে (বিডি বায়োসায়েন্সেস) রাখা হয়েছিল। প্রস্তুতকারকের নির্দেশাবলী অনুসারে কিউআইএসিম্ফোনি ডিএসপি ডিএনএ মিডি কিট আইসোলেশন কিট (কিয়াজেন, হিল্ডেন, ইতালি) ব্যবহার করে ০.৭ মিলি সম্পূর্ণ রক্তের নমুনা থেকে জিনোমিক ডিএনএ পৃথক করা হয়েছিল এবং পরিমাণ নির্ণয়ের জন্য এটিকে একটি কিউবিট® ৩.০ ফ্লুরোমিটারের (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) মধ্য দিয়ে চালনা করা হয়েছিল। প্রস্তুতকারকের নির্দেশাবলী অনুসারে স্বয়ংক্রিয় লাইব্রেরি প্রস্তুতির জন্য, Oncomine™ BRCA Research Assay Chef-এর মাধ্যমে টার্গেট এনরিচমেন্ট এবং লাইব্রেরি প্রস্তুতি সম্পন্ন করা হয়, যা Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit-এ লোড করার জন্য প্রস্তুত থাকে। কিটটিতে দুটি মাল্টিপ্লেক্স পিসিআর প্রাইমার পুল রয়েছে যা সমস্ত BRCA1 (NM_007300.3) এবং BRCA2 (NM_000059.3) জিন অধ্যয়নের জন্য ব্যবহার করা যেতে পারে। সংক্ষেপে, লাইব্রেরি প্রস্তুতির জন্য বারকোডযুক্ত প্লেটে প্রতিটি লঘুকৃত নমুনা ডিএনএ (১০ ন্যানোগ্রাম)-এর ১৫ মাইক্রোলিটার যোগ করা হয়েছিল এবং সমস্ত রিএজেন্ট ও ব্যবহার্য সামগ্রী Ion Chef™ যন্ত্রে লোড করা হয়েছিল। এরপর Ion Chef™ যন্ত্রে স্বয়ংক্রিয় লাইব্রেরি প্রস্তুতি এবং বারকোডযুক্ত নমুনা লাইব্রেরি পুলিং সম্পন্ন করা হয়েছিল। প্রস্তুতকারকের নির্দেশাবলী অনুসারে, একটি Qubit® 3.0 ফ্লুরোমিটার (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA) দ্বারা প্রস্তুতকৃত লাইব্রেরির সংখ্যা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। অবশেষে, লাইব্রেরিগুলোকে সমমোলার অনুপাতে একত্রিত করা হয়। আয়ন শেফ™ লাইব্রেরি স্যাম্পল টিউবে (বারকোডযুক্ত টিউব) অনুপাতগুলো নিয়ে আয়ন শেফ™ যন্ত্রে লোড করা হয়েছিল। আয়ন ৫১০ চিপ (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) ব্যবহার করে আয়ন টরেন্ট এস৫ (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) যন্ত্রের সাহায্যে সিকোয়েন্সিং করা হয়েছিল। অ্যাম্পলিকন স্যুট (স্মার্টসিক এসআরএল) এবং আয়ন রিপোর্টার সফটওয়্যার দ্বারা ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।
সমস্ত ভ্যারিয়েন্টের নামকরণ হিউম্যান জিনোম ভ্যারিয়েশন কনসোর্টিয়ামের (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen) বর্তমান নির্দেশিকা অনুসরণ করে করা হয়েছে, যা অনলাইনে উপলব্ধ। BRCA1/2 ভ্যারিয়েন্টগুলির ক্লিনিকাল তাৎপর্য আন্তর্জাতিক কনসোর্টিয়াম ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) এর শ্রেণিবিন্যাস ব্যবহার করে এবং ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, এবং UMD এর মতো বিভিন্ন ডেটাবেসের সাথে পরামর্শ করে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছিল। এই শ্রেণিবিন্যাসে পাঁচটি স্বতন্ত্র ঝুঁকির বিভাগ অন্তর্ভুক্ত রয়েছে: সৌম্য (বিভাগ I), সম্ভবত সৌম্য (বিভাগ II), অনিশ্চিত তাৎপর্যের ভ্যারিয়েন্ট (VUS, বিভাগ III), সম্ভবত রোগ সৃষ্টিকারী (বিভাগ IV), এবং রোগ সৃষ্টিকারী (বিভাগ V)। VarSome প্রোটিনের গঠন এবং কার্যকারিতার উপর মিউটেশনের প্রভাবও বিশ্লেষণ করেছে, যা ৩০টি ডেটাবেসে অ্যাক্সেস সহ একটি তথ্যপূর্ণ টুল।৩২
প্রতিটি VUS-এর সম্ভাব্য ক্লিনিক্যাল তাৎপর্য নির্ধারণের জন্য, নিম্নলিখিত কম্পিউটেশনাল প্রোটিন প্রেডিকশন অ্যালগরিদমগুলো ব্যবহার করা হয়েছিল: MUTATION TASTER, PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http://genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) এবং Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php)। ক্লাস ১ এবং ২ হিসাবে শ্রেণীবদ্ধ ভ্যারিয়েন্টগুলোকে ওয়াইল্ড টাইপ হিসাবে বিবেচনা করা হয়েছিল।
স্যাঙ্গার সিকোয়েন্সিং প্রতিটি প্যাথোজেনিক ভ্যারিয়েন্টের উপস্থিতি নিশ্চিত করেছে। সংক্ষেপে, BRCA1 এবং BRCA2 জিনের রেফারেন্স সিকোয়েন্স (যথাক্রমে NG_005905.2, NM_007294.3 এবং NG_012772.3, NM_000059.3) ব্যবহার করে প্রতিটি শনাক্তকৃত ভ্যারিয়েন্টের জন্য একজোড়া নির্দিষ্ট প্রাইমার ডিজাইন করা হয়েছিল। অতঃপর, টার্গেটেড পিসিআর করা হয় এবং তারপরে স্যাঙ্গার সিকোয়েন্সিং করা হয়।
যেসব রোগীর BRCA1/2 জিনের পরীক্ষা নেগেটিভ এসেছিল, তাদের মধ্যে লার্জ জিনোমিক রিঅ্যারেঞ্জমেন্ট (LGR)-এর উপস্থিতি নির্ণয়ের জন্য প্রস্তুতকারকের নির্দেশাবলী অনুসারে মাল্টিপ্লেক্স লাইগেশন-ডিপেন্ডেন্ট প্রোব অ্যামপ্লিফিকেশন (MLPA) পরীক্ষা করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, ডিএনএ নমুনাগুলোকে ডিন্যাচার করা হয় এবং ৬০টি পর্যন্ত BRCA1 ও BRCA2 জিন-নির্দিষ্ট প্রোব ব্যবহার করা হয়, যার প্রতিটি প্রায় ৬০ নিউক্লিওটাইড দৈর্ঘ্যের একটি নির্দিষ্ট ডিএনএ সিকোয়েন্স শনাক্ত করে। এরপর, পিসিআর অ্যামপ্লিকনের একটি অনন্য সেট নিয়ে গঠিত প্রোব অ্যামপ্লিফিকেশন প্রোডাক্টগুলোকে ক্যাপিলারি ইলেক্ট্রোফোরেসিস এবং Cofalyser.Net সফটওয়্যারের মাধ্যমে উপযুক্ত ব্যাচ-নির্দিষ্ট Cofalyser টেবিলের (www.mrcholland.com) সাথে একত্রে বিশ্লেষণ করা হয়।
প্রিজম সফটওয়্যার ভি. ৮.৪ ব্যবহার করে ফিশারের এক্সাক্ট টেস্টের মাধ্যমে গণনাকৃত নির্বাচিত ক্লিনিকোপ্যাথোলজিক্যাল ভ্যারিয়েবলসমূহ (হিস্টোলজিক্যাল গ্রেড এবং Ki-67% প্রলিফারেশন ইনডেক্স) BRCA1/2 PV-এর উপস্থিতির সাথে সম্পর্কিত ছিল, যেখানে p-value <0.05-কে তাৎপর্যপূর্ণ বলে ধরে নেওয়া হয়েছে।
২০১৭ সালের জানুয়ারি থেকে ২০২১ সালের মার্চ মাসের মধ্যে, ৪৫৫ জন রোগীর জার্মলাইন BRCA1/2 মিউটেশনের জন্য স্ক্রিনিং করা হয়েছিল। পলিক্লিনিকো হাসপাতালের সেন্টার ফর এক্সপেরিমেন্টাল অনকোলজি অ্যান্ড হেমাটোলজিতে এই মিউটেশন পরীক্ষাটি করা হয়েছিল। সিসিলিয়ান নির্দেশিকা (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, নং ০২-শুক্রবার ১০ জানুয়ারি ২০২০) অনুসারে, সামগ্রিকভাবে ৩৮৯ জন রোগীর স্তন ক্যান্সার, ৩৭ জনের ডিম্বাশয়ের ক্যান্সার, ১৬ জনের অগ্ন্যাশয়ের ক্যান্সার, ৮ জনের প্রোস্টেট ক্যান্সার এবং ৫ জনের মেলানোমা ছিল। ক্যান্সারের ধরন অনুযায়ী রোগীদের বিন্যাস এবং বিশ্লেষণের ফলাফল চিত্র ১-এ দেখানো হয়েছে।
চিত্র ১-এ গবেষণাটির একটি সার্বিক চিত্রসহ একটি ফ্লো চার্ট দেখানো হয়েছে। স্তন, মেলানোমা, অগ্ন্যাশয়, প্রোস্টেট বা ডিম্বাশয়ের টিউমারে আক্রান্ত রোগীদের BRCA1 এবং BRCA2 জিনের মিউটেশন পরীক্ষা করা হয়েছিল।
সংক্ষিপ্ত রূপ: PVs, রোগ সৃষ্টিকারী ভ্যারিয়েন্ট; VUS, অনিশ্চিত তাৎপর্যের ভ্যারিয়েন্ট; WT, ওয়াইল্ড-টাইপ BRCA1/2 সিকোয়েন্স।
আমরা বিশেষভাবে স্তন ক্যান্সারে আক্রান্ত রোগীদের ওপর আমাদের গবেষণা পরিচালনা করেছি। রোগীদের গড় বয়স ছিল ৪৯ বছর (২৩-৮৯ বছর) এবং তাঁদের অধিকাংশই ছিলেন মহিলা (সংখ্যা ৩৭৬, বা ৯৭%)।
এই বিষয়গুলির মধ্যে, ৬৪ জনের (১৭%) BRCA1/2 মিউটেশন ছিল এবং তারা সকলেই মহিলা ছিলেন। পঁয়ত্রিশ জনের (৯%) PV এবং ২৯ জনের (৭.৫%) VUS ছিল। ৩৫টি প্যাথোজেনিক ভ্যারিয়েন্টের মধ্যে সতেরোটি (৪৮.৬%) BRCA1-এ এবং আঠারোটি (৫১.৪%) BRCA2-এ পাওয়া গেছে, যেখানে ৫টি VUS BRCA1-এ (১৭.২%) এবং ২৪টি (৮২.৮%) BRCA2-এ পাওয়া গেছে (চিত্র ১ এবং ২)। MLPA বিশ্লেষণে LGR উপস্থিত ছিল না।
চিত্র ২. ৩৮৯ জন স্তন ক্যান্সার রোগীর মধ্যে BRCA1 এবং BRCA2 মিউটেশনের বিশ্লেষণ। (A) ৩৮৯ জন স্তন ক্যান্সার রোগীর মধ্যে প্যাথোজেনিক ভ্যারিয়েন্ট (PV) (লাল), অনিশ্চিত তাৎপর্যের ভ্যারিয়েন্ট (VUS) (কমলা), এবং WT (নীল)-এর বন্টন; (B) ৩৮৯ জন স্তন ক্যান্সার রোগীর মধ্যে পঁয়ত্রিশ জনের (৯%) BRCA1/2 প্যাথোজেনিক ভ্যারিয়েন্ট (PV) ছিল। তাদের মধ্যে, ১৭ জন (৪৮.৬%) ছিলেন BRCA1 PV বাহক (গাঢ় লাল) এবং ১৮ জন (৫১.৪%) ছিলেন BRCA2 বাহক (হালকা লাল); (C) ৩৮৯ জনের মধ্যে ২৯ জন (৭.৫%) VUS বহন করছিলেন, ৫ জন (১৭.২%) BRCA1 জিন (গাঢ় কমলা) এবং ২৪ জন (৮২.৮%) BRCA2 জিন (হালকা কমলা)।
সংক্ষিপ্ত রূপ: PVs, রোগ সৃষ্টিকারী ভ্যারিয়েন্ট; VUS, অনিশ্চিত তাৎপর্যের ভ্যারিয়েন্ট; WT, ওয়াইল্ড-টাইপ BRCA1/2 সিকোয়েন্স।
এরপর আমরা BRCA1/2 PV আক্রান্ত রোগীদের মধ্যে স্তন ক্যান্সারের আণবিক উপপ্রকারগুলির ব্যাপকতা অনুসন্ধান করেছি। এর মধ্যে অন্তর্ভুক্ত ছিল ২ জন (৫.৭%) লুমিনাল এ, ১৫ জন (৪২.৯%) লুমিনাল বি, ৩ জন (৮.৬%) লুমিনাল বি-HER2+, ২ জন (৫.৭%) HER2+ এবং ১৩ জন (৩৭.১%) TNBC রোগী। BRCA1-পজিটিভ রোগীদের মধ্যে, ৫ জনের (২৯.৪%) ছিল লুমিনাল বি স্তন ক্যান্সার, ২ জনের (১১.৮%) ছিল HER2+ রোগ এবং ১০ জনের (৫৮.৮%) ছিল TNBC। BRCA1 মিউটেশনবিহীন টিউমারগুলো ছিল হয় লুমিনাল এ অথবা লুমিনাল বি-HER2+ (চিত্র ৩)। BRCA2-পজিটিভ উপগোষ্ঠীতে, ১০টি (৫৫.৬%) টিউমার ছিল লুমিনাল বি, ৩টি (১৬.৭%) ছিল লুমিনাল বি-HER2+, ৩টি (১৬.৭%) ছিল TNBC এবং ২টি (১১.১%) ছিল লুমিনাল এ (চিত্র ৩)। এই গ্রুপে কোনো HER2+ টিউমার উপস্থিত ছিল না। সুতরাং, TNBC রোগীদের মধ্যে BRCA1 মিউটেশন প্রচলিত, অপরদিকে লুমেন B ব্যক্তিদের মধ্যে BRCA2 পরিবর্তনগুলি প্রধান।
চিত্র ৩: BRCA1 এবং BRCA2-এর প্যাথোজেনিক ভ্যারিয়েন্টযুক্ত রোগীদের মধ্যে স্তন ক্যান্সারের উপপ্রকারগুলির প্রাদুর্ভাব। হিস্টোগ্রামগুলি স্তন ক্যান্সার রোগীদের আণবিক উপপ্রকারগুলির মধ্যে BRCA1- (গাঢ় লাল) এবং BRCA2- (হালকা লাল) PV-এর বন্টন দেখাচ্ছে। প্রতিটি বাক্সের মধ্যে উল্লিখিত সংখ্যাগুলি প্রতিটি স্তন ক্যান্সারের উপপ্রকারের জন্য BRCA1 এবং BRCA2 PV-যুক্ত রোগীদের শতাংশকে প্রতিনিধিত্ব করে।
সংক্ষিপ্ত রূপ: PVs, রোগ সৃষ্টিকারী ভ্যারিয়েন্ট; HER2+, হিউম্যান এপিডার্মাল গ্রোথ ফ্যাক্টর রিসেপ্টর ২ পজিটিভ; TNBC, ট্রিপল-নেগেটিভ ব্রেস্ট ক্যান্সার।
পরবর্তীতে, আমরা BRCA1 এবং BRCA2 PV-গুলোর ধরণ এবং জিনের অবস্থান মূল্যায়ন করেছি। BRCA1 PV-তে, আমরা ৭টি একক নিউক্লিওটাইড ভ্যারিয়েন্ট (SNV), ৬টি ডিলিশন, ৩টি ডুপ্লিকেশন এবং ১টি ইনসারশন পর্যবেক্ষণ করেছি। শুধুমাত্র একটি মিউটেশন (c.5522delG) একটি নতুন আবিষ্কার। উভয় ব্যক্তির মধ্যে সনাক্ত করা সবচেয়ে সাধারণ BRCA1 PV ছিল c.5035_5039delCTAAT। এই পরিবর্তনে BRCA1 এক্সন ১৫-এ পাঁচটি নিউক্লিওটাইডের (CTAAT) ডিলিশন ঘটে, যার ফলে কোডন ১৬৭৯-এ অ্যামিনো অ্যাসিড লিউসিনের পরিবর্তে টাইরোসিন প্রতিস্থাপিত হয় এবং একটি পূর্বাভাসিত বিকল্প স্টপ কোডনসহ ট্রান্সলেশন ফ্রেমশিফটের কারণে প্রোটিনের অকাল খণ্ডন ঘটে। অন্য সব পরিবর্তন শুধুমাত্র একটি ক্ষেত্রে সনাক্ত করা হয়েছে। উল্লেখযোগ্যভাবে, রিপোর্ট করা PV-গুলোর মধ্যে একটি স্প্লাইস সাইট কনসেনসাস অঞ্চলে অবস্থিত ছিল (c.4357+1G>T) (সারণি ১)।
BRCA2 PV-এর ক্ষেত্রে, আমরা ৬টি ডিলিশন, ৬টি SNV এবং ২টি ডুপ্লিকেশন পর্যবেক্ষণ করেছি। প্রাপ্ত পরিবর্তনগুলোর কোনোটিই নতুন নয়। আমাদের জনগোষ্ঠীর মধ্যে তিনটি মিউটেশন পুনরাবৃত্ত হয়েছে, যার মধ্যে c.428dup এবং c.8487+1G>A ৩ জন ব্যক্তির মধ্যে দেখা গেছে, এবং এর পরে c.5851_5854delAGTT দুটি ক্ষেত্রে পাওয়া গেছে। c.428dup পরিবর্তনটি BRCA2-এর এক্সন ৫-এ C-এর একটি পুনরাবৃত্তির সাথে জড়িত, যা একটি খণ্ডিত, অকার্যকর প্রোটিন এনকোড করবে বলে অনুমান করা হয়। c.8487+1G>A মিউটেশনটি BRCA2 ইন্ট্রন ১৯ (± ১,২)-এর ইন্ট্রনিক অঞ্চলে ঘটে এবং স্প্লাইসিং কনসেনসাস সিকোয়েন্সকে প্রভাবিত করে, যার ফলে পরিবর্তিত স্প্লাইসিং ঘটে এবং অস্বাভাবিক বা অনুপস্থিত প্রোটিন তৈরি হয়। c.5851_5854delAGTT প্যাথোজেনিক ভ্যারিয়েন্টটি BRCA2 জিনের কোডিং এক্সন ১০-এর নিউক্লিওটাইড পজিশন ৫৮৫১ থেকে ৫৮৫৪ পর্যন্ত একটি ৪-নিউক্লিওটাইড ডিলিশনের কারণে ঘটে। এর ফলে একটি ট্রান্সলেশনাল ফ্রেমশিফ্ট হয় এবং একটি পূর্বাভাসিত বিকল্প স্টপ কোডন (p.S1951WfsTer) তৈরি হয়। উল্লেখযোগ্যভাবে, পূর্বে যেমন রিপোর্ট করা হয়েছিল, c.631G>A এবং c.7008-2A>T উভয় পরিবর্তন একই রোগীর মধ্যে সনাক্ত করা হয়েছিল।৩৪ প্রথম মিউটেশনটিতে BRCA2 এক্সন ৭-এ অ্যাডেনোসিন (A)-এর পরিবর্তে একটি গুয়ানিন (G) যুক্ত নিউক্লিওটাইড প্রতিস্থাপিত হয়, যার ফলে কোডন ২১১-এ ভ্যালিন আইসোলিউসিনে পরিবর্তিত হয়। আইসোলিউসিন অ্যামিনো অ্যাসিড হলো এমন একটি অ্যামিনো অ্যাসিড যার বৈশিষ্ট্য অত্যন্ত সাদৃশ্যপূর্ণ। এই পরিবর্তনটি স্বাভাবিক mRNA স্প্লাইসিংকে প্রভাবিত করে। দ্বিতীয় ভ্যারিয়েন্টটি একটি ইন্ট্রোনিক অঞ্চলে অবস্থিত এবং এর ফলে BRCA2 এনকোডিং জিনের এক্সন ১৩-এর আগে দুটি অ্যাডেনোসিন (A) থেকে থাইমিন (T)-এ দ্বৈত প্রতিস্থাপন ঘটে। c.7008-2A>T পরিবর্তনটি বিভিন্ন দৈর্ঘ্যের একাধিক ট্রান্সক্রিপ্ট তৈরি করতে পারে। অধিকন্তু, BRCA2 PV-এর গ্রুপে, ১৮টি পরিবর্তনের মধ্যে ৪টি (২২.২%) ছিল ইন্ট্রোনিক।
এরপর আমরা কার্যকরী ডোমেইন এবং প্রোটিন-বাইন্ডিং অঞ্চলে BRCA1/2-এর ক্ষতিকর মিউটেশনগুলো চিহ্নিত করি (চিত্র ৪)। BRCA1 জিনে, ৫০% PV ব্রেস্ট ক্যান্সার ক্লাস্টার অঞ্চলে (BCCR) অবস্থিত ছিল, যেখানে ২২% মিউটেশন ওভারিয়ান ক্যান্সার ক্লাস্টার অঞ্চলে (OCCR) অবস্থিত ছিল (চিত্র ৪ক)। BRCA2 PV-তে, ৩৫.৭% ভ্যারিয়েন্ট BCCR অঞ্চলে এবং ৪২.৮% মিউটেশন OCCR-এ অবস্থিত ছিল (চিত্র ৪খ)। এরপর, আমরা BRCA1 এবং BRCA2 প্রোটিন ডোমেইনের মধ্যে PV-এর অবস্থান মূল্যায়ন করি। BRCA1 প্রোটিনের ক্ষেত্রে, আমরা লুপ এবং কয়েলড কয়েল ডোমেইনে তিনটি PV এবং BRCT ডোমেইনে দুটি মিউটেশন খুঁজে পাই (চিত্র ৪ক)। BRCA2 প্রোটিনের ক্ষেত্রে, ৪টি PV BRC রিপিট ডোমেইনে চিহ্নিত হয়, যেখানে অলিগো/অলিগোস্যাকারাইড-বাইন্ডিং (OB) এবং টাওয়ার (T) ডোমেইনে ৩টি ইন্ট্রোনিক এবং ৩টি এক্সোনিক পরিবর্তন শনাক্ত করা হয়। চিত্র ৪বি)।
চিত্র ৪ BRCA1 এবং BRCA2 প্রোটিনের পরিকল্পিত চিত্র এবং রোগ সৃষ্টিকারী ভ্যারিয়েন্টের অবস্থান। এই চিত্রে স্তন ক্যান্সার রোগীদের মধ্যে BRCA1 (A) এবং BRCA2 (B) রোগ সৃষ্টিকারী ভ্যারিয়েন্টের বণ্টন দেখানো হয়েছে। এক্সোনিক মিউটেশনগুলো নীল রঙে এবং ইনট্রোনিক ভ্যারিয়েন্টগুলো কমলা রঙে দেখানো হয়েছে। দণ্ডের উচ্চতা রোগীর সংখ্যা নির্দেশ করে। BRCA1 এবং BRCA2 প্রোটিন এবং তাদের কার্যকরী ডোমেইনগুলো উল্লেখ করা হয়েছে। (A) BRCA1 প্রোটিনে একটি লুপ ডোমেইন (RING) এবং একটি নিউক্লিয়ার লোকালাইজেশন সিকোয়েন্স (NLS), একটি কয়েলড-কয়েল ডোমেইন, একটি SQ/TQ ক্লাস্টার ডোমেইন (SCD), এবং একটি BRCA1 C-টার্মিনাল ডোমেইন (BRCT) রয়েছে। (B) BRCA2 প্রোটিনে আটটি BRC রিপিট, একটি হেলিকাল ডোমেইনসহ ডিএনএ-বাইন্ডিং ডোমেইন (Helical), তিনটি অলিগোনিউক্লিওটাইড/অলিগোস্যাকারাইড-বাইন্ডিং (OB) ফোল্ড, একটি টাওয়ার ডোমেইন (T), এবং C-পার্শ্বে একটি NLS রয়েছে। ব্রেস্ট ক্যান্সার ক্লাস্টার রিজিয়ন (BCCR) এবং ওভারিয়ান ক্যান্সার ক্লাস্টার রিজিয়ন (OCCR) নামক অঞ্চলগুলো দেখানো হয়েছে। নিচের অংশ। *যেসব মিউটেশন স্টপ কোডন নির্ধারণ করে, তা নির্দেশ করে।
এরপর আমরা স্তন ক্যান্সারের সেইসব ক্লিনিকোপ্যাথলজিক্যাল বৈশিষ্ট্যগুলো অনুসন্ধান করি যেগুলো BRCA1/2 PV-এর উপস্থিতির সাথে সম্পর্কিত হতে পারে। ১৮১ জন BRCA1/2-নেগেটিভ রোগী (নন-ক্যারিয়ার) এবং সকল ক্যারিয়ারের (n = ৩৫) সম্পূর্ণ ক্লিনিক্যাল রেকর্ড পাওয়া গিয়েছিল। টিউমারের বিস্তারের হার এবং গ্রেডের মধ্যে একটি সম্পর্ক ছিল।
আমরা আমাদের কোহর্টের মধ্যকের (২৫%, পরিসর <১০-৯০%) উপর ভিত্তি করে Ki-67-এর বন্টন গণনা করেছি। যাদের Ki-67 < ২৫% ছিল, তাদের “নিম্ন Ki-67” হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছিল, অন্যদিকে যাদের মান ≥ ২৫% ছিল, তাদের “উচ্চ Ki-67” হিসাবে বিবেচনা করা হয়েছিল। নন-ক্যারিয়ার এবং BRCA1 PV ক্যারিয়ারদের মধ্যে Ki-67-এর উল্লেখযোগ্য পার্থক্য (p<0.01) পাওয়া গেছে (চিত্র ৫ক)।
চিত্র ৫ BRCA1 এবং BRCA2 PV আছে এবং নেই এমন স্তন ক্যান্সার রোগীদের গ্রেড বণ্টনের সাথে Ki-67 এর সম্পর্ক। (A) 181 জন নন-ক্যারিয়ার BC রোগীর বনাম BRCA1 (18) বা BRCA2 (17) PV রোগীদের মধ্যে মধ্যম Ki-67 মান দেখানো বক্সপ্লট। 0.5 এর নীচের P মান পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল। (B) BRCA1 এবং BRCA2 মিউটেশন স্ট্যাটাস (WT সাবজেক্ট, BRCA1 এবং BRCA2 PV ক্যারিয়ার) অনুসারে BC ক্যান্সার রোগীদের হিস্টোলজিক্যাল গ্রেড গ্রুপে (G2 এবং G3) বিভাজন উপস্থাপনকারী হিস্টোগ্রাম।
একইভাবে, আমরা পরীক্ষা করে দেখেছি যে টিউমার গ্রেডের সাথে BRCA1/2 PV-এর উপস্থিতির কোনো সম্পর্ক আছে কিনা। যেহেতু আমাদের জনগোষ্ঠীর মধ্যে G1 BC অনুপস্থিত ছিল, তাই আমরা রোগীদের দুটি দলে (G2 বা G3) ভাগ করেছি। Ki-67 ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্য রেখে, বিশ্লেষণে টিউমার গ্রেড এবং BRCA1 মিউটেশনের মধ্যে একটি পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ সম্পর্ক প্রকাশ পেয়েছে, যেখানে BRCA1 বাহকদের মধ্যে G3 টিউমারের অনুপাত অ-বাহকদের তুলনায় বেশি (p<0.005) (চিত্র 5B)।
ডিএনএ সিকোয়েন্সিং প্রযুক্তির অগ্রগতি BRCA1/2 জিনগত পরীক্ষায় অভূতপূর্ব উন্নতি এনেছে, যা ক্যান্সারের পারিবারিক ইতিহাস রয়েছে এমন রোগীদের জন্য অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। আজ পর্যন্ত, আমেরিকান সোসাইটি অফ মেডিকেল জেনেটিক্স 35 এবং ENIGMA সিস্টেম 35,36 অনুসারে প্রায় 20,000 BRCA1/2 ভ্যারিয়েন্ট শনাক্ত ও শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছে। এটি সুবিদিত যে BRCA1/2 মিউটেশনাল স্পেকট্রাম ভৌগোলিক অঞ্চলভেদে ব্যাপকভাবে পরিবর্তিত হয়।37 ইতালির মধ্যে, BRCA1/2 PV-এর হার 8% থেকে 37% পর্যন্ত ছিল, যা দেশের অভ্যন্তরে ব্যাপক পরিবর্তনশীলতা দেখায়।38,39 প্রায় 5 মিলিয়ন জনসংখ্যা নিয়ে, সিসিলি জনসংখ্যার দিক থেকে ইতালির পঞ্চম বৃহত্তম অঞ্চল। যদিও পশ্চিম সিসিলিতে BRCA1/2-এর বন্টন সম্পর্কে তথ্য রয়েছে, দ্বীপটির পূর্বাঞ্চলে এর কোনো ব্যাপক প্রমাণ নেই।
পূর্ব সিসিলিতে স্তন ক্যান্সার রোগীদের মধ্যে BRCA1/2 PV-এর প্রাদুর্ভাবের উপর আমাদের গবেষণাটি প্রথম প্রতিবেদনগুলির মধ্যে একটি।28 আমরা আমাদের বিশ্লেষণে স্তন ক্যান্সারের উপর মনোযোগ দিয়েছি, কারণ আমাদের এই দলে এটিই এখন পর্যন্ত সবচেয়ে সাধারণ রোগ।
৩৮৯ জন স্তন ক্যান্সার রোগীর উপর পরীক্ষা করে দেখা গেছে, তাদের মধ্যে ৯% রোগীর BRCA1/2 PV ছিল, যা BRCA1 এবং BRCA2 এর মধ্যে সমানভাবে বণ্টিত ছিল। এই ফলাফলগুলো ইতালীয় জনগোষ্ঠীর উপর পূর্বে প্রকাশিত ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ।২৮ মজার বিষয় হলো, আমাদের এই দলের ৩% (১৩/৩৮৯) ছিলেন পুরুষ। পুরুষদের স্তন ক্যান্সারের জন্য এই হার প্রত্যাশিত হারের চেয়ে বেশি (সমস্ত স্তন ক্যান্সারের ১%),৪০ যা BRCA1/2 মিউটেশন ঝুঁকির উপর ভিত্তি করে আমাদের জনগোষ্ঠী নির্বাচনের প্রতিফলন। তবে, এই পুরুষদের কারোরই BRCA1/2 PV বিকশিত হয়নি, তাই PALB2, RAD51C এবং D-এর মতো কম প্রচলিত মিউটেশনের উপস্থিতি বাতিল করার জন্য তারা আরও আণবিক বিশ্লেষণের জন্য উপযুক্ত ছিলেন। যেসব ব্যক্তির মধ্যে BRCA2 VUS স্পষ্ট ছিল, তাদের ৭% এর মধ্যে অনিশ্চিত তাৎপর্যের ভ্যারিয়েন্ট পাওয়া গেছে। এমনকি এই ফলাফলও পূর্ব-বিদ্যমান প্রমাণের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ।২৮,৪১,৪২
যখন আমরা BRCA1/2 মিউট্যান্ট মহিলাদের মধ্যে স্তন ক্যান্সারের আণবিক উপপ্রকারগুলির বন্টন বিশ্লেষণ করেছি, তখন আমরা ট্রিপল নেগেটিভ স্তন ক্যান্সার (TNBC) এবং BRCA1 পলিসাইথেমিয়া ভেরা (PV) (৫৮.৮%) এর মধ্যে এবং লুমিনাল বি স্তন ক্যান্সার এবং BRCA2 পলিসাইথেমিয়া ভেরা (PV) (৫৫.৬%) এর মধ্যে পরিচিত সম্পর্ক নিশ্চিত করেছি।¹⁶,⁴³ BRCA1 এবং BRCA2 পলিসাইথেমিয়া ভেরা (PV) বাহকদের মধ্যে লুমিনাল এ এবং HER2+ টিউমারগুলি বিদ্যমান সাহিত্য তথ্যের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ।¹⁶,⁴³
এরপর আমরা BRCA1/2 PV-এর ধরন এবং অবস্থানের উপর মনোযোগ দিই। আমাদের কোহর্টে, সবচেয়ে সাধারণ BRCA1 PV ছিল c.5035_5039delCTAAT। যদিও Incorvaia et al. তাদের সিসিলিয়ান কোহর্টে এই ভ্যারিয়েন্টটির বর্ণনা না দিলেও, অন্যান্য লেখকগণ এটিকে একটি জার্মলাইন BRCA1 PV হিসেবে রিপোর্ট করেছেন।৩৪ আমাদের কোহর্টে বেশ কয়েকটি BRCA1 PV পাওয়া গেছে – যেমন c.181T>G, c.514del, c.3253dupA এবং c.5266dupC – যা সিসিলিতেও পরিলক্ষিত হয়েছে।২৮ এদের মধ্যে, দুটি BRCA1 ফাউন্ডার মিউটেশন (c.181T>G এবং c.5266dupC) সাধারণত পূর্ব ও মধ্য ইউরোপের (পোল্যান্ড, চেক) আশকেনাজি ইহুদি, স্লোভেনিয়ান, অস্ট্রিয়ান, হাঙ্গেরিয়ান, বেলারুশিয়ান এবং জার্মানদের মধ্যে পাওয়া যায়,৪৪,৪৫ এবং মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র ও আর্জেন্টিনায়, সম্প্রতি এটিকে BC এবং OC আক্রান্ত ইতালীয় রোগীদের মধ্যে একটি “পুনরাবৃত্ত জার্মলাইন ভ্যারিয়েন্ট” হিসেবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছে।৩৪c.514del ভ্যারিয়েন্টটি পূর্বে উত্তর সিসিলির পালেরমো এবং মেসিনার ৮ জন স্তন ক্যান্সার রোগীর মধ্যে শনাক্ত করা হয়েছিল। মজার বিষয় হলো, এমনকি ইনকরভাইয়া এট আল. ক্যাটানিয়ার কিছু পরিবারে c.3253dupA ভ্যারিয়েন্টটি পাওয়া গেছে।28 সবচেয়ে প্রতিনিধিত্বমূলক BRCA2 PV গুলি হল c.428dup, c.5851_5854delAGTT এবং ইন্ট্রনিক ভ্যারিয়েন্ট c.8487+1G>A, যেগুলি পালেরমোর একজন রোগীর মধ্যে আরও বিস্তারিতভাবে রিপোর্ট করা হয়েছে।28 c.428dup, c.5851_5854delAGTT PV উত্তর-পশ্চিম সিসিলির পরিবারগুলিতে, প্রধানত ট্রাপানি এবং পালেরমো অঞ্চলে দেখা গেছে, যেখানে c.5851_5854delAGTT PV উত্তর-পশ্চিম সিসিলির পরিবারগুলিতে দেখা গেছে। 8487+1G>A ভ্যারিয়েন্টটি মেসিনা, পালেরমো এবং কালতানিসেত্তার ব্যক্তিদের মধ্যে বেশি সাধারণ ছিল।28 রেবেক এট আল। পূর্বে কলম্বিয়াতে c.5851_5854delAGTT পরিবর্তনটি বর্ণনা করা হয়েছিল।37 আরেকটি BRCA2 PV, c.631+1G>A, সিসিলির (আগ্রিজেন্তো, সিরাকুসা এবং রাগুসা) BC এবং OC রোগীদের মধ্যে পাওয়া গেছে।28 উল্লেখযোগ্যভাবে, আমরা একই রোগীর মধ্যে দুটি BRCA2 ভ্যারিয়েন্টের (BRCA2 c.631G>A এবং c.7008-2A>T) সহাবস্থান লক্ষ্য করেছি, যা আমরা সিস মোডে পৃথকীকৃত বলে ধরে নিয়েছি, যেমনটি পূর্বে রিপোর্ট করা হয়েছে।34,46 এই BRCA2 দ্বৈত মিউটেশনগুলি প্রকৃতপক্ষে ইতালীয় অঞ্চলে প্রায়শই দেখা যায় এবং অকাল স্টপ কোডন তৈরি করতে দেখা গেছে, যা মেসেঞ্জার RNA স্প্লাইসিংকে প্রভাবিত করে এবং BRCA2 প্রোটিনকে ব্যর্থ করে তোলে।47,48
আমরা প্রোটিন ডোমেইন এবং জিনের সম্ভাব্য OCCR এবং BCCR অঞ্চলে BRCA1 এবং BRCA2 PV-গুলোও ম্যাপ করেছি। এই অঞ্চলগুলোকে রেবেক এট আল. যথাক্রমে ডিম্বাশয় এবং স্তন ক্যান্সার হওয়ার ঝুঁকিপূর্ণ এলাকা হিসেবে বর্ণনা করেছেন।⁴⁹ তবে, জার্মলাইন ভ্যারিয়েন্টের অবস্থান এবং স্তন বা ডিম্বাশয়ের ক্যান্সারের ঝুঁকির মধ্যে সম্পর্ক নিয়ে প্রমাণ এখনও বিতর্কিত।²⁸,⁵⁻⁵² আমাদের জনগোষ্ঠীর মধ্যে, BRCA1 PV-গুলো প্রধানত BCCR অঞ্চলে অবস্থিত ছিল, যেখানে BRCA2 PV-গুলো প্রধানত OCCR অঞ্চলে অবস্থিত ছিল। তবে, আমরা সম্ভাব্য OCCR এবং BCCR অঞ্চলের সাথে স্তন ক্যান্সারের বৈশিষ্ট্যের কোনো সম্পর্ক খুঁজে পাইনি। এর কারণ হতে পারে BRCA1/2 মিউটেশনযুক্ত রোগীর সংখ্যা সীমিত থাকা। প্রোটিন ডোমেইনের দৃষ্টিকোণ থেকে, BRCA1 PV-গুলো সম্পূর্ণ প্রোটিন জুড়ে বিস্তৃত থাকে, এবং BRCA2 পরিবর্তনগুলো প্রধানত BRC রিপিট ডোমেইনে পাওয়া যায়।
অবশেষে, আমরা স্তন ক্যান্সারের ক্লিনিকোপ্যাথলজিক্যাল বৈশিষ্ট্যগুলির সাথে BRCA1/2 PV-এর সম্পর্ক স্থাপন করেছি। অন্তর্ভুক্ত রোগীর সংখ্যা সীমিত হওয়ায়, আমরা শুধুমাত্র Ki-67 এবং টিউমার গ্রেডের মধ্যে একটি উল্লেখযোগ্য সম্পর্ক খুঁজে পেয়েছি। যদিও Ki-67-এর মূল্যায়ন এবং ব্যাখ্যা কিছুটা বিতর্কিত, এটা নিশ্চিত যে উচ্চ প্রলিফারেটিভ হার রোগের পুনরাবৃত্তির ঝুঁকি বৃদ্ধি এবং বেঁচে থাকার হার হ্রাসের সাথে সম্পর্কিত। আজ পর্যন্ত, "উচ্চ" এবং "নিম্ন" Ki-67-এর মধ্যে পার্থক্য করার জন্য কাটঅফ হল ২০%। যাইহোক, এই থ্রেশহোল্ডটি আমাদের BRCA1/2 মিউটেশন রোগীর জনসংখ্যার ক্ষেত্রে প্রযোজ্য নয়, যাদের মধ্যক Ki-67 মান ২৫%। উচ্চ Ki-67 হারের এই প্রবণতা আমাদের লুমিনাল B এবং TNBC কোহর্টের প্রাদুর্ভাব দ্বারা ব্যাখ্যা করা যেতে পারে, যেখানে খুব কম লুমিনাল A টিউমার উপস্থিত ছিল। যাইহোক, কিছু প্রমাণ ইঙ্গিত দেয় যে একটি উচ্চতর Ki-67 কাটঅফ (২৫-৩০%) রোগীদের তাদের প্রগনোসিস অনুযায়ী আরও ভালভাবে শ্রেণীবদ্ধ করতে পারে।৫৩,৫৪ আমাদের বিশ্লেষণের ফলাফল থেকে, একটি উল্লেখযোগ্য সম্পর্ক আশ্চর্যজনক নয়। উচ্চ Ki-67 এবং গ্রেডের মধ্যে ঘটে। এবং BRCA1 PV-এর উপস্থিতি। প্রকৃতপক্ষে, BRCA1-সম্পর্কিত টিউমারগুলি TNBC-এর সাধারণ বৈশিষ্ট্য বহন করে এবং আরও আক্রমণাত্মক বৈশিষ্ট্য প্রদর্শন করে।16,17
উপসংহারে, এই গবেষণাটি পূর্ব সিসিলির একটি স্তন ক্যান্সার (বিসি) কোহর্টে BRCA1/2-এর মিউটেশনাল অবস্থার উপর একটি প্রতিবেদন প্রদান করে। সামগ্রিকভাবে, আমাদের ফলাফলগুলি বিসি-তে মিউটেশনের ব্যাপকতা এবং ক্লিনিকোপ্যাথলজিক্যাল বৈশিষ্ট্য উভয় ক্ষেত্রেই পূর্ব-বিদ্যমান প্রমাণের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। BRCA1/2-মিউট্যান্ট বিসি রোগীদের বৃহত্তর জনগোষ্ঠীর উপর আরও গবেষণা, যেমন মাল্টিজিনোম এক্সপান্ডেড মিউটেশনাল অ্যানালাইসিস ব্যবহার করে, BRCA1/2-এর চেয়ে স্বতন্ত্র এবং কম ঘন ঘন দেখা যায় এমন পার্শ্বপ্রতিক্রিয়াগুলির (PVs) উপস্থিতি মূল্যায়ন করার জন্য প্রয়োজন। এটি জেনেটিক মিউটেশনের কারণে ক্যান্সারের বর্ধিত ঝুঁকিতে থাকা ক্রমবর্ধমান সংখ্যক ব্যক্তিদের সনাক্তকরণ এবং যথাযথ ব্যবস্থাপনার সুযোগ করে দেবে।
আমরা নিশ্চিত করেছি যে রোগীরা গবেষণার উদ্দেশ্যে বেনামে তাদের টিউমারের নমুনা প্রকাশের জন্য অবহিত সম্মতিপত্রে স্বাক্ষর করেছেন। হেলসিঙ্কি ঘোষণা অনুযায়ী সকল রোগী লিখিত অবহিত সম্মতিপত্রে স্বাক্ষর করেছেন। এওইউ পলিক্লিনিকো “জি. রোডোলিকো – এস. মার্কো”-এর নীতি অনুসারে, এই গবেষণাটি নৈতিক পর্যালোচনা থেকে অব্যাহতিপ্রাপ্ত ছিল, কারণ বিআরসিএ১/২ বিশ্লেষণটি ক্লিনিকাল অনুশীলন অনুযায়ী করা হয়েছিল এবং সকল রোগী লিখিত অবহিত সম্মতি দিয়েছিলেন। রোগীরা গবেষণার উদ্দেশ্যে তাদের ডেটা ব্যবহারের জন্যও সম্মতি দিয়েছেন।
নীতিশাস্ত্র কমিটির অনুরোধ অনুযায়ী স্তন ক্যান্সার রোগীদের পরিচর্যায় সহায়তার জন্য আমরা অধ্যাপক পাওলো ভিগনেরিকে ধন্যবাদ জানাই।
ফেদেরিকা মার্তোরানা ইস্তিতুতো জেন্তিলি, এলি লিলি, নোভাটিস এবং ফাইজার থেকে সম্মানী গ্রহণের কথা জানিয়েছেন। অন্যান্য লেখকগণ এই কাজে কোনো স্বার্থের সংঘাত নেই বলে ঘোষণা করেছেন।
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, et al. গ্লোবাল ক্যান্সার স্ট্যাটিস্টিকস 2020: GLOBOCAN বিশ্বের 185টি দেশে 36টি ক্যান্সারের ঘটনা এবং মৃত্যুহার অনুমান করে। CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249. doi: 10.3322/caac.21660