Javascript saat ini dinonaktifkan di browser Anda. Beberapa fitur situs web ini tidak akan berfungsi saat javascript dinonaktifkan.
Daftarkan diri Anda dengan rincian spesifik dan obat spesifik yang Anda minati, dan kami akan mencocokkan informasi yang Anda berikan dengan artikel dalam basis data kami yang luas, lalu segera mengirimkan salinan PDF melalui email kepada Anda.
作者 Stella S, Vitale SR, Martorana F, Massimino M, Pavone G, Lanzafame K, Bianca S, Barone C, Gorgone C, Fichera M, Manzella L
Stefania Stella, 1,2 Silvia Rita Vitale, 1,2 Federica Martorana, 1,2 Michele Massimino, 1,2 Giuliana Pavone, 3 Katia Lanzafame, 3 Sebastiano Bianca, 4 Chiara Barone, 5 Cristina Gorgone, 6 Marco Fichera, 6, 7 Livia Manzella1,21 Departemen Kedokteran Klinis dan Eksperimental, Universitas Catania, Catania, 95123, Italia;2 Pusat Onkologi dan Hematologi Eksperimental, AOU Policlinico “G.Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italia; 3 Onkologi Medis, AOU Policlinico “G. Rodolico – San Marco”, Catania, 95123, Italia; 4 Genetika Medis, ARNAS Garibaldi, Catania, 95123, Italia; Bahasa Indonesia: 5 Genetika Kedokteran, ASP, Syracuse, 96100, Italia; 6 Departemen Ilmu Biomedis dan Bioteknologi, Universitas Catania, Genetika Medis, Catania, Italia, 95123; 7Institut Penelitian Oasi-IRCCS, Troina, 94018, Italia Komunikasi: Stefania Stella, telp +39 095 378 1946, email [email protected]; Tujuan: Mutasi germline pada BRCA1 dan BRCA2 dan kanker payudara (BC), ovarium (OC) yang sudah ada dan lainnya terkait dengan risiko kanker seumur hidup. Pengujian untuk gen BRCA adalah kunci untuk menilai risiko individu, serta untuk menemukan metode pencegahan pada pembawa yang sehat dan menyesuaikan perawatan pada pasien kanker. Prevalensi perubahan BRCA1 dan BRCA2 sangat bervariasi di seluruh wilayah geografis, dan meskipun ada data tentang varian patogen BRCA dalam keluarga Sisilia, studi yang secara khusus menargetkan populasi di Sisilia timur tidak ada. Tujuan dari penelitian kami adalah untuk menyelidiki insidensi dan distribusi perubahan germline patogen BRCA dalam kelompok pasien BC dari Sisilia timur dan untuk menilai hubungannya dengan sifat BC tertentu menggunakan sekuensing generasi berikutnya. Kehadiran perubahan berkorelasi dengan tingkat tumor dan indeks proliferasi. HASIL: Secara keseluruhan, 35 pasien (9%) memiliki varian patogen BRCA, 17 (49%) pada BRCA1 dan 18 (51%) pada BRCA2. Perubahan BRCA1 lazim terjadi pada pasien BC triple-negatif, sedangkan mutasi BRCA2 lebih umum terjadi pada pasien BC luminal. Dibandingkan dengan yang bukan pembawa, subjek dengan varian BRCA1 memiliki tingkat tumor dan indeks proliferatif yang jauh lebih tinggi. Kesimpulan: Temuan kami memberikan gambaran umum status mutasi BRCA pada pasien BC dari Sisilia timur dan mengonfirmasi peran analisis NGS dalam mengidentifikasi pasien dengan BC herediter. Secara keseluruhan, data ini konsisten dengan bukti sebelumnya yang mendukung skrining BRCA untuk pencegahan dan pengobatan kanker yang tepat pada pembawa mutasi.
Kanker payudara (KP) adalah keganasan paling umum di seluruh dunia dan kanker paling mematikan pada wanita.1 Fitur biologis yang menentukan prognosis dan perilaku klinis KP telah dipelajari secara ekstensif dan sebagian dijelaskan dari waktu ke waktu. Faktanya, beberapa penanda pengganti saat ini digunakan untuk mengklasifikasikan KP ke dalam beberapa subtipe molekuler. Penanda tersebut adalah reseptor estrogen (ER) dan/atau progesteron (PgR), amplifikasi reseptor faktor pertumbuhan epidermal manusia 2 (HER2), indeks proliferasi Ki-67, dan tingkat tumor (G).2 Kombinasi variabel-variabel ini mengidentifikasi kategori KP berikut: 1) Tumor luminal, yang menunjukkan ekspresi ER dan/atau PgR, mencakup 75% KP. Tumor ini selanjutnya dibagi menjadi Luminal A, ketika Ki-67 di bawah 20% dan HER2 negatif, dan Luminal B, ketika Ki-67 sama dengan atau di atas 20% dan dengan adanya amplifikasi HER2, terlepas dari indeks proliferasi; 2) Tumor HER2+ yang negatif ER dan PgR tetapi menunjukkan amplifikasi HER2. Kelompok ini mencakup 10% dari semua tumor payudara; 3) Kanker payudara triple-negatif (TNBC), yang tidak menunjukkan ekspresi ER dan PgR serta amplifikasi HER2, mencakup sekitar 15% dari kanker payudara.2-4
Di antara subtipe BC ini, tingkat tumor dan indeks proliferasi merupakan biomarker lintas bagian yang secara langsung dan independen berhubungan dengan agresivitas dan prognosis tumor.5,6
Selain ciri-ciri biologis yang disebutkan di atas, peran perubahan genetik bawaan yang mengarah pada perkembangan BC telah menjadi semakin penting selama beberapa tahun terakhir.7 Sekitar 1 dari 10 tumor payudara diwariskan karena perubahan germline pada gen tertentu.8 Dua studi epidemiologi besar yang melibatkan lebih dari 180.000 wanita baru-baru ini mengidentifikasi sekelompok delapan gen (yaitu, ATM, BARD1, BRCA1, BRCA2, CHK2, PALB2, RAD51C, dan RAD51D) yang terutama bertanggung jawab atas BC herediter. Di antara gen-gen ini, BRCA1 dan BRCA2 (selanjutnya disebut BRCA1/2) menunjukkan korelasi terkuat dengan perkembangan tumor payudara.9-12 Faktanya, mutasi germline BRCA1/2 secara signifikan meningkatkan risiko seumur hidup BC serta keganasan lainnya, termasuk ovarium, prostat, pankreas, kolorektal, dan melanoma. Dari usia 13 hingga 80 tahun, insiden kumulatif BC adalah 72% pada wanita dengan kanker payudara. Varian patogen BRCA1 (PV) dan 69% pada wanita dengan PV BRCA2.14
Perlu dicatat, sebuah publikasi baru-baru ini menunjukkan bahwa risiko BC bergantung pada jenis PV. Faktanya, dibandingkan dengan varian pemotongan patogenik, varian salah arti yang mencolok, terutama pada gen BRCA1, dikaitkan dengan risiko BC yang lebih rendah, terutama pada wanita yang lebih tua.15
Kehadiran PV BRCA1 atau BRCA2 dikaitkan dengan berbagai fitur biologis dan klinikopatologis.16,17 BC yang terkait dengan BRCA1 cenderung agresif secara klinis, berdiferensiasi buruk, dan sangat proliferatif. Tumor ini biasanya triple negatif dan memiliki onset pada usia dini. Tumor yang terjadi pada pasien dengan mutasi BRCA2 biasanya menunjukkan tingkat diferensiasi sedang hingga baik dan indeks proliferatif yang bervariasi. Tumor ini lebih umum di lumen B dan biasanya terjadi pada orang dewasa yang lebih tua.16-18 Khususnya, mutasi pada BRCA1 dan BRCA2 meningkatkan sensitivitas terhadap perawatan tertentu, termasuk garam platinum dan obat-obatan yang ditargetkan seperti inhibitor poli(ADP-ribosa) polimerase (PARPi).19,20
Selama beberapa tahun terakhir, penerapan sequencing generasi berikutnya (NGS) dalam praktik klinis telah memungkinkan semakin banyak pasien BC untuk menjalani pengujian molekuler untuk sindrom kerentanan kanker, termasuk BRCA1/2.21 Bersamaan dengan itu, definisi berdasarkan kriteria yang tepat mengenai riwayat keluarga, demografi, dan karakteristik klinikopatologis untuk mengidentifikasi individu yang layak menjalani pengujian BRCA1/2 dengan lebih baik.22,23 Dalam konteks ini, bukti terakumulasi pada skrining BRCA1/2 pada populasi tertentu, yang menyoroti perbedaan di seluruh wilayah geografis.24–27 Meskipun ada laporan tentang kohort BC di Sisilia barat, lebih sedikit data yang tersedia tentang skrining BRCA1/2 pada populasi Sisilia timur.28,29
Di sini kami menguraikan hasil penyaringan germline BRCA1/2 pada pasien BC dari Sisilia timur, yang selanjutnya mengkorelasikan keberadaan mutasi BRCA1 atau BRCA2 dengan fitur klinikopatologis utama tumor ini.
Sebuah studi retrospektif dilakukan di “Pusat Onkologi dan Hematologi Eksperimental” di Rumah Sakit Policlinico. Rodolico – San Marco di Catania. Dari Januari 2017 hingga Maret 2021, total 455 pasien dengan kanker payudara dan ovarium, melanoma, pankreas atau prostat dirujuk ke laboratorium diagnostik molekuler kami untuk pengujian genetik BRCA/2. Studi ini dilakukan sesuai dengan Deklarasi Helsinki, dan semua partisipan memberikan persetujuan tertulis sebelum analisis molekuler.
Karakteristik histologis dan biologis (ER, PgR, status HER2, Ki-67, dan tingkatan) BC dinilai pada biopsi inti atau sampel bedah, dengan hanya mempertimbangkan komponen tumor agresif. Berdasarkan karakteristik ini, BC diklasifikasikan sebagai berikut: luminal A (ER+ dan/atau PgR+, HER2-, Ki-67<20%), luminal B (ER+ dan/atau PgR+, HER2-, Ki-67≥20%), luminal B-HER2+ (ER dan/atau PgR+, HER2+), HER2+ (ER dan PgR-, HER2+) atau triple negatif (ER dan PgR-, HER2-).
Sebelum menilai status mutasi BRCA1 dan BRCA2, tim multidisiplin yang meliputi onkolog, genetikolog, dan psikolog melakukan konsultasi genetika tumor untuk setiap pasien guna menentukan keberadaan BRCA1 dan/atau BRCA1 atau individu dengan risiko tinggi PV pada gen BRCA2. Pemilihan pasien dilakukan menurut pedoman Masyarakat Onkologi Medis Italia (AIOM) dan rekomendasi Sisilia setempat.30,31 Kriteria ini meliputi: (i) riwayat keluarga varian patogenik yang diketahui pada gen kerentanan (misalnya, BRCA1, BRCA2, TP53, PTEN); (ii) laki-laki dengan BC; (iii) mereka yang memiliki BC dan OC; (iv) wanita dengan BC <36 tahun, TNBC <60 tahun, atau BC bilateral <50 tahun; (v) riwayat medis pribadi BC <50 tahun dan setidaknya satu kerabat tingkat pertama: (a) BC < 50 tahun; (b) OC non-musinosa dan non-borderline dari segala usia; (c) kanker payudara bilateral; (d) kanker payudara pria; (e) kanker pankreas; (f) kanker prostat; (vi) dua atau lebih Riwayat pribadi kanker payudara > 50 tahun dan riwayat keluarga kanker payudara, OC, atau kanker pankreas untuk kerabat yang merupakan kerabat tingkat pertama satu sama lain (termasuk kerabat yang merupakan kerabat tingkat pertama dengannya); (vii) Riwayat pribadi kanker payudara dan setidaknya satu kerabat tingkat pertama: (a) kanker payudara <50 tahun; (b) NOC; (c) kanker payudara bilateral; (d) kanker payudara pria; (vii) wanita dengan OC serosa tingkat tinggi.
Sampel darah tepi sebanyak 20 mL diambil dari setiap pasien dan ditampung dalam tabung EDTA (BD Biosciences). DNA genom diisolasi dari sampel darah utuh sebanyak 0,7 mL menggunakan Kit Isolasi DNA Midi QIAsymphony DSP (QIAGEN, Hilden, Italia) sesuai dengan petunjuk pabrik dan dilewatkan melalui Fluorometer Qubit® 3.0 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AS). Lakukan kuantifikasi. Pengayaan target dan persiapan pustaka dilakukan oleh Oncomine™ BRCA Research Assay Chef, siap untuk dimuat ke dalam Ion AmpliSeq™ Chef Reagents DL8 Kit untuk persiapan pustaka otomatis sesuai dengan petunjuk pabrik. Kit ini terdiri dari dua kumpulan primer PCR multipleks yang dapat digunakan untuk mempelajari semua gen BRCA1 (NM_007300.3) dan BRCA2 (NM_000059.3). Secara singkat, 15 µL dari setiap sampel DNA yang diencerkan (10 ng) ditambahkan ke pelat berkode batang untuk persiapan pustaka dan semua reagen dan bahan habis pakai dimuat pada instrumen Ion Chef™. Persiapan pustaka otomatis dan pengumpulan pustaka sampel berkode batang kemudian dilakukan pada instrumen Ion Chef™. Jumlah pustaka yang disiapkan kemudian dinilai oleh Qubit® 3.0 Fluorometer (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, AS) sesuai dengan petunjuk pabrik. Akhirnya, pustaka digabungkan dalam rasio ekuimolar dalam tabung sampel perpustakaan Ion Chef™ (tabung berkode batang) dan dimuat ke instrumen Ion Chef™. Pengurutan dilakukan menggunakan instrumen Ion Torrent S5 (Thermo Fisher Scientific) (Thermo Fisher Scientific) dengan menggunakan Chip Ion 510 (Thermo Fisher Scientific). Analisis data dilakukan oleh Amplicon Suite (SmartSeq srl) dan Perangkat Lunak Ion Reporter.
Semua nomenklatur varian mengikuti pedoman terkini dari Human Genome Variation Consortium, yang tersedia daring (HGVS, http://www.hgvs.org/mutnomen). Signifikansi klinis varian BRCA1/2 ditetapkan menggunakan klasifikasi dari International Consortium ENIGMA (Evidence-Based Network for Interpreting Germline Mutant Alleles, https://enigmaconsortium.org/) dan merujuk pada berbagai basis data seperti ARUP, BRCAEXCHANGE, ClinVar, IARC_LOVD, dan UMD. Klasifikasi tersebut mencakup lima kategori risiko yang berbeda: jinak (kategori I), kemungkinan jinak (kategori II), varian dengan signifikansi tidak pasti (VUS, kategori III), kemungkinan patogen (kategori IV), dan patogen (kategori V). VarSome juga menganalisis efek mutasi pada struktur dan fungsi protein, sebuah alat informatif dengan akses ke 30 basis data.32
Untuk menetapkan potensi signifikansi klinis pada setiap VUS, algoritma prediksi protein komputasional berikut digunakan: MUTATION TASTER, 33 PROVEAN-SIFT (http://provean.jcvi.org/index.php), POLYPHEN-2 (http:// /genetics.bwh.harvard.edu/pph2/) dan Align-GVGD (http://agvgd.hci.utah.edu/agvgd_input.php). Varian yang diklasifikasikan sebagai kelas 1 dan 2 dianggap tipe liar.
Pengurutan Sanger mengonfirmasi keberadaan masing-masing varian patogen. Secara singkat, sepasang primer spesifik dirancang untuk setiap varian yang terdeteksi dengan menggunakan urutan referensi gen BRCA1 dan BRCA2 (masing-masing NG_005905.2, NM_007294.3 dan NG_012772.3, NM_000059.3). Oleh karena itu, PCR bertarget dilakukan diikuti dengan pengurutan Sanger.
Pasien yang hasil tesnya negatif untuk gen BRCA1/2 diuji dengan amplifikasi probe yang bergantung pada ligasi multipleks (MLPA) sesuai dengan petunjuk pabrik pembuatnya untuk menilai keberadaan penataan ulang genom besar (LGR). Secara singkat, sampel DNA didenaturasi dan digunakan hingga 60 probe spesifik gen BRCA1 dan BRCA2, yang masing-masing mendeteksi urutan DNA spesifik yang panjangnya sekitar 60 nukleotida. Produk amplifikasi probe, yang terdiri dari serangkaian amplikon PCR yang unik, kemudian dianalisis dengan elektroforesis kapiler dan dengan perangkat lunak Cofalyser.Net bersama dengan tabel Cofalyser spesifik-batch yang sesuai (www.mrcholland.com).
Variabel klinikopatologis terpilih (tingkat histologis dan indeks proliferasi Ki-67%) dikaitkan dengan keberadaan PV BRCA1/2, dihitung menggunakan perangkat lunak Prism v. 8.4 menggunakan uji pasti Fisher dengan asumsi nilai-p <0,05 menjadi signifikan.
Antara Januari 2017 dan Maret 2021, 455 pasien disaring untuk mutasi germline BRCA1/2. Pengujian mutasi dilakukan di Pusat Onkologi Eksperimental dan Hematologi Rumah Sakit Policlinico. Menurut pedoman Sisilia (http://www.gurs.regione.sicilia.it/Indicep1.htm, N. 02-Venerdì 10 Januari 2020), Rodolico Catania – San Marco” secara keseluruhan, 389 pasien menderita kanker payudara, 37 kanker ovarium, 16 kanker pankreas, 8 kanker prostat, dan 5 melanoma. Distribusi pasien menurut jenis kanker dan hasil analisis ditunjukkan pada Gambar 1.
Gambar 1 menunjukkan diagram alir yang menunjukkan ikhtisar penelitian. Pasien dengan tumor payudara, melanoma, pankreas, prostat, atau ovarium diuji untuk mengetahui adanya mutasi pada gen BRCA1 dan BRCA2.
Singkatan: PV, varian patogenik; VUS, varian dengan signifikansi tidak pasti; WT, sekuens BRCA1/2 tipe liar.
Kami secara selektif memfokuskan penelitian kami pada kelompok kanker payudara. Pasien memiliki usia rata-rata 49 tahun (kisaran 23-89) dan sebagian besar perempuan (n=376, atau 97%).
Dari subjek-subjek ini, 64 (17%) memiliki mutasi BRCA1/2 dan semuanya perempuan. Tiga puluh lima (9%) memiliki PV dan 29 (7,5%) memiliki VUS. Tujuh belas (48,6%) dari 35 varian patogenik terjadi pada BRCA1 dan 18 (51,4%) pada BRCA2, sementara 5 VUS terjadi pada BRCA1 (17,2%) dan 24 (82,8%) pada BRCA2 (Gambar 1 dan 2). LGR tidak hadir dalam analisis MLPA.
Gambar 2. Analisis mutasi BRCA1 dan BRCA2 pada 389 pasien kanker payudara. (A) Distribusi varian patogenik (PV) (merah), varian dengan signifikansi tidak pasti (VUS) (oranye), dan WT (biru) pada 389 pasien kanker payudara; (B) Dari 389 pasien kanker payudara, tiga puluh lima (9%) memiliki varian patogenik BRCA1/2 (PV). Di antara mereka, 17 (48,6%) merupakan pembawa PV BRCA1 (merah tua) dan 18 (51,4%) merupakan pembawa BRCA2 (merah muda); (C) 29 (7,5%) dari 389 subjek membawa VUS, 5 (17,2%) gen BRCA1 (oranye tua) dan 24 (82,8%) gen BRCA2 (oranye muda).
Singkatan: PV, varian patogenik; VUS, varian dengan signifikansi tidak pasti; WT, sekuens BRCA1/2 tipe liar.
Selanjutnya kami menyelidiki prevalensi subtipe molekuler BC pada pasien dengan BRCA1/2 PV. Distribusinya meliputi 2 (5,7%) luminal A, 15 (42,9%) luminal B, 3 (8,6%) luminal B-HER2+, 2 (5,7%) HER2+ dan 13 (37,1%) pasien TNBC. Di antara pasien BRCA1-positif, 5 (29,4%) memiliki BC luminal B, 2 (11,8%) memiliki penyakit HER2+, dan 10 (58,8%) memiliki TNBC. Tumor tanpa mutasi BRCA1 adalah luminal A atau luminal B-HER2+ (Gambar 3). Pada subkelompok BRCA2-positif, 10 (55,6%) tumor adalah luminal B, 3 (16,7%) adalah luminal B-HER2+, 3 (16,7%) TNBC dan 2 (11,1%) adalah luminal A (Gambar 3). 3).Tidak ada tumor HER2+ yang hadir dalam kelompok ini. Dengan demikian, mutasi BRCA1 lazim terjadi pada pasien TNBC, sedangkan perubahan BRCA2 dominan pada individu lumen B.
Gambar 3 Prevalensi subtipe kanker payudara pada pasien dengan varian patogenik pada BRCA1 dan BRCA2. Histogram yang menunjukkan distribusi PV BRCA1 (merah tua) dan BRCA2 (merah muda) di antara subtipe molekuler pasien kanker payudara. Angka yang dilaporkan dalam setiap kotak menunjukkan persentase pasien dengan PV BRCA1 dan BRCA2 untuk setiap subtipe kanker payudara.
Singkatan: PV, varian patogen; HER2+, reseptor faktor pertumbuhan epidermal manusia 2 positif; TNBC, kanker payudara triple-negatif.
Selanjutnya, kami menilai tipe dan lokalisasi gen dari PV BRCA1 dan BRCA2. Pada PV BRCA1, kami mengamati 7 varian nukleotida tunggal (SNV), 6 delesi, 3 duplikasi, dan 1 insersi. Hanya satu mutasi (c.5522delG) yang merupakan penemuan baru. PV BRCA1 yang paling umum dideteksi pada kedua subjek adalah c.5035_5039delCTAAT. Perubahan ini melibatkan delesi lima nukleotida (CTAAT) pada ekson 15 BRCA1, yang mengakibatkan substitusi asam amino leusin oleh tirosin pada kodon 1679, dan akibat pergeseran kerangka translasi dengan kodon stop alternatif yang diprediksi menyebabkan pemotongan protein prematur. Semua perubahan lainnya dideteksi hanya dalam satu kasus. Khususnya, salah satu PV yang dilaporkan terletak di wilayah konsensus situs sambatan (c.4357+1G>T) (Tabel 1).
Mengenai BRCA2 PV, kami mengamati 6 delesi, 6 SNV, dan 2 duplikasi. Tidak ada perubahan yang ditemukan yang baru. Tiga mutasi berulang dalam populasi kami, c.428dup dan c.8487+1G>A diamati pada 3 subjek, diikuti oleh c.5851_5854delAGTT yang diambil dalam dua kasus. Perubahan c.428dup melibatkan pengulangan C dalam ekson 5 BRCA2, yang diperkirakan mengkode protein yang terpotong dan tidak berfungsi. Mutasi c.8487+1G>A terjadi di wilayah intronik intron 19 BRCA2 (± 1,2) dan memengaruhi urutan konsensus penyambungan, yang mengakibatkan penyambungan yang berubah sehingga menghasilkan protein yang abnormal atau tidak ada. Varian patogenik c.5851_5854delAGTT disebabkan oleh delesi 4 nukleotida dari posisi nukleotida 5851 hingga 5854 dalam ekson pengkode 10 gen BRCA2 dan menghasilkan pergeseran kerangka translasi dengan kodon stop alternatif yang diprediksi (p.S1951WfsTer). Khususnya, seperti yang dilaporkan sebelumnya, kedua perubahan c.631G>A dan c.7008-2A>T terdeteksi pada pasien yang sama.34 Mutasi pertama melibatkan penggantian adenosin (A) pada ekson 7 BRCA2 dengan nukleotida yang mengandung guanin (G) yang mengakibatkan perubahan valin menjadi isoleusin pada kodon 211, asam amino isoleusin adalah asam amino dengan sifat yang sangat mirip. Perubahan ini memengaruhi penyambungan mRNA normal. Varian kedua terletak di wilayah intronik dan menghasilkan substitusi ganda A menjadi timin (T) sebelum ekson 13 dari gen yang mengkode BRCA2. Perubahan c.7008-2A>T dapat menghasilkan beberapa transkrip dengan panjang yang berbeda. Lebih jauh lagi, dalam kelompok BRCA2 PV, 4 dari 18 perubahan (22,2%) bersifat intronik.
Kami kemudian memetakan mutasi BRCA1/2 yang merusak pada domain fungsional dan daerah pengikatan protein (Gbr. 4). Pada gen BRCA1, 50% PV terletak pada daerah klaster kanker payudara (BCCR), sementara 22% mutasi terletak pada daerah klaster kanker ovarium (OCCR) (Gbr. 4A). Pada PV BRCA2, 35,7% varian terletak pada daerah BCCR dan 42,8% mutasi terletak pada OCCR (Gbr. 4B). Selanjutnya, kami menilai lokasi PV dalam domain protein BRCA1 dan BRCA2. Untuk protein BRCA1, kami menemukan tiga PV pada domain loop dan coiled coil, dan dua mutasi pada domain BRCT (Gbr. 4A). Untuk protein BRCA2, 4 PV dipetakan ke domain pengulangan BRC, sementara 3 perubahan intronik dan 3 perubahan ekson terdeteksi pada domain pengikat oligo/oligosakarida (OB) dan menara (T) ( Gambar 4B).
Gambar 4 Representasi skematis protein BRCA1 dan BRCA2 serta lokalisasi varian patogenik. Gambar ini menunjukkan distribusi varian patogenik BRCA1 (A) dan BRCA2 (B) pada pasien kanker payudara. Mutasi ekson ditunjukkan dengan warna biru, sedangkan varian intron ditunjukkan dengan warna oranye. Tinggi batang menunjukkan jumlah kasus. Protein BRCA1 dan BRCA2 serta domain fungsionalnya dilaporkan. (A) Protein BRCA1 mengandung domain loop (RING) dan urutan lokalisasi nuklir (NLS), domain kumparan melingkar, domain kluster SQ/TQ (SCD), dan domain C-terminal BRCA1 (BRCT). (B) Protein BRCA2 mengandung delapan pengulangan BRC, domain pengikat DNA dengan domain heliks (Heliks), tiga lipatan pengikat oligonukleotida/oligosakarida (OB), domain menara (T), dan NLS di sisi C. Area yang disebut Wilayah Kluster Kanker Payudara (BCCR) dan Wilayah Gugus Kanker Ovarium (OCCR) ditunjukkan di bagian bawah.*Mewakili mutasi yang menentukan kodon stop.
Kami kemudian menyelidiki fitur klinikopatologi BC yang mungkin berkorelasi dengan keberadaan BRCA1/2 PV. Catatan klinis lengkap tersedia untuk 181 pasien BRCA1/2-negatif (bukan pembawa) dan semua pembawa (n = 35). Ada korelasi antara laju proliferasi tumor dan tingkatannya.
Kami menghitung distribusi Ki-67 berdasarkan median kohort kami (25%, kisaran <10-90%). Subjek dengan Ki-67 < 25% didefinisikan sebagai “Ki-67 rendah”, sementara individu dengan nilai ≥ 25% dianggap sebagai “Ki-67 tinggi”. Perbedaan Ki-67 yang signifikan (p<0,01) ditemukan antara non-pembawa dan pembawa BRCA1 PV (Gbr. 5A).
Gambar 5 Korelasi Ki-67 dengan distribusi derajat pada wanita penderita kanker payudara dengan dan tanpa PV BRCA1 dan BRCA2. (A) Boxplot yang menunjukkan nilai median Ki-67 pada 181 pasien kanker payudara non-pembawa versus pasien PV BRCA1 (18) atau BRCA2 (17). Nilai P di bawah 0,5 dianggap signifikan secara statistik. (B) Histogram yang menggambarkan penugasan pasien kanker payudara ke dalam kelompok derajat histologis (G2 dan G3) menurut status mutasi BRCA1 dan BRCA2 (subjek WT, pembawa PV BRCA1 dan BRCA2).
Demikian pula, kami memeriksa apakah tingkat tumor berkorelasi dengan keberadaan PV BRCA1/2. Karena BC G1 tidak ada dalam populasi kami, kami membagi pasien menjadi dua kelompok (G2 atau G3). Konsisten dengan hasil Ki-67, analisis mengungkapkan korelasi yang signifikan secara statistik antara tingkat tumor dan mutasi BRCA1, dengan proporsi tumor G3 yang lebih tinggi pada pembawa BRCA1 dibandingkan dengan bukan pembawa (p<0,005) (Gambar 5B).
Kemajuan dalam teknologi sekuensing DNA telah memungkinkan kemajuan yang belum pernah terjadi sebelumnya dalam pengujian genetik BRCA1/2, dengan implikasi penting bagi pasien dengan riwayat kanker keluarga. Hingga saat ini, sekitar 20.000 varian BRCA1/2 telah diidentifikasi dan diklasifikasikan menurut American Society of Medical Genetics 35 dan sistem ENIGMA.35,36 Sudah diketahui secara umum bahwa spektrum mutasi BRCA1/2 sangat bervariasi di berbagai wilayah geografis.37 Di Italia, tingkat PV BRCA1/2 berkisar antara 8% hingga 37%, yang menunjukkan variabilitas intra-negara yang luas.38,39 Dengan populasi hampir 5 juta, Sisilia adalah wilayah terbesar kelima di Italia dalam hal jumlah penduduk. Meskipun ada data tentang distribusi BRCA1/2 di Sisilia barat, tidak ada bukti yang luas di bagian timur pulau tersebut.
Studi kami adalah salah satu laporan pertama tentang kejadian BRCA1/2 PV pada pasien BC di Sisilia timur.28 Kami memfokuskan analisis kami pada BC, karena ini adalah penyakit paling umum sejauh ini dalam kelompok kami.
Ketika menguji 389 pasien kanker payudara, 9% membawa PV BRCA1/2, yang terdistribusi merata antara BRCA1 dan BRCA2. Hasil ini konsisten dengan yang sebelumnya dilaporkan pada populasi Italia.28 Menariknya, 3% (13/389) dari kelompok kami adalah laki-laki. Angka ini lebih tinggi dari yang diharapkan untuk kanker payudara laki-laki (1% dari semua kanker payudara),40 yang mencerminkan pemilihan populasi kami berdasarkan risiko mutasi BRCA1/2. Akan tetapi, tidak satu pun dari laki-laki ini mengembangkan PV BRCA1/2, sehingga mereka menjadi kandidat untuk analisis molekuler lebih lanjut guna menyingkirkan keberadaan mutasi yang kurang umum seperti PALB2, RAD51C, dan D, antara lain. Varian dengan signifikansi yang tidak pasti ditemukan pada 7% subjek yang memiliki BRCA2 VUS. Bahkan hasil ini konsisten dengan bukti yang sudah ada sebelumnya.28,41,42
Ketika kami menganalisis distribusi subtipe molekuler BC pada wanita mutan BRCA1/2, kami mengonfirmasi adanya hubungan yang diketahui antara TNBC dan PV BRCA1 (58,8%) dan antara BC luminal B dan PV BRCA2 (55,6%).16,43 Tumor luminal A dan HER2+ pada pembawa PV BRCA1 dan BRCA2 konsisten dengan data literatur yang ada.16,43
Kami kemudian fokus pada jenis dan lokasi PV BRCA1/2. Dalam kelompok kami, PV BRCA1 yang paling umum adalah c.5035_5039delCTAAT.Meskipun Incorvaia et al. Bahasa Indonesia: tidak mendeskripsikan varian ini dalam kohor Sisilia mereka, penulis lain telah melaporkannya sebagai PV germline BRCA1.34 Beberapa PV BRCA1 ditemukan dalam kohor kami – misalnya c.181T>G, c.514del, c.3253dupA dan c.5266dupC – yang telah diamati di Sisilia.28 Dari jumlah tersebut, dua mutasi pendiri BRCA1 (c.181T>G dan c.5266dupC) umumnya ditemukan pada orang Yahudi Ashkenazi di Eropa Timur dan Tengah (Polandia, Ceko), Slovenia, Austria, Hongaria, Belarusia dan Jerman),44,45 dan, di Amerika Serikat dan Argentina, baru-baru ini ditetapkan sebagai "varian germline rekuren" pada pasien Italia dengan BC dan OC. Varian 34c.514del sebelumnya diidentifikasi pada 8 pasien kanker payudara dari Sisilia utara di Palermo dan Messina. Menariknya, bahkan Incorvaia et al. menemukan varian c.3253dupA pada beberapa keluarga di Catania.28 PV BRCA2 yang paling representatif adalah c.428dup, c.5851_5854delAGTT, dan varian intronik c.8487+1G>A, yang telah dilaporkan secara lebih rinci28 pada seorang pasien di Palermo dengan c.428dup, PV c.5851_5854delAGTT diamati di rumah tangga di Sisilia barat laut, terutama di wilayah Trapani dan Palermo, sedangkan PV c.5851_5854delAGTT diamati di rumah tangga di Sisilia barat laut. Varian 8487+1G>A lebih umum pada subjek dari Messina, Palermo, dan Caltanissetta.28 Rebbeck dkk. sebelumnya menggambarkan perubahan c.5851_5854delAGTT di Kolombia.37 PV BRCA2 lainnya, c.631+1G>A, telah ditemukan pada pasien BC dan OC dari Sisilia (Agrigento, Siracusa, dan Ragusa).28 Khususnya, kami mengamati koeksistensi dua varian BRCA2 (BRCA2 c.631G>A dan c.7008-2A>T) pada pasien yang sama, yang kami asumsikan dipisahkan dalam mode cis, seperti yang dilaporkan sebelumnya seperti itu.34,46 Mutasi ganda BRCA2 ini memang sering diamati di wilayah Italia dan telah ditemukan memperkenalkan kodon stop prematur, yang memengaruhi penyambungan RNA pembawa dan menyebabkan protein BRCA2 gagal.47,48
Kami juga memetakan PV BRCA1 dan BRCA2 di wilayah putatif OCCR dan BCCR dari domain protein dan gen. Wilayah-wilayah ini digambarkan oleh Rebbeck et al. sebagai area risiko untuk mengembangkan kanker ovarium dan payudara, masing-masing.49 Namun, bukti mengenai hubungan antara lokasi varian germline dan risiko kanker payudara atau ovarium masih kontroversial.28,50-52 Dalam populasi kami, PV BRCA1 sebagian besar terletak di wilayah BCCR, sedangkan PV BRCA2 sebagian besar terletak di wilayah OCCR. Namun, kami tidak dapat menemukan hubungan apa pun antara wilayah putatif OCCR dan BCCR dengan fitur BC. Hal ini mungkin disebabkan oleh terbatasnya jumlah pasien dengan mutasi BRCA1/2. Dari perspektif domain protein, PV BRCA1 didistribusikan sepanjang seluruh protein, dan alterasi BRCA2 lebih disukai ditemukan di domain pengulangan BRC.
Akhirnya, kami mengkorelasikan ciri-ciri klinikopatologis BC dengan BRCA1/2 PV. Karena jumlah pasien yang disertakan terbatas, kami hanya menemukan korelasi signifikan antara Ki-67 dan tingkat tumor. Meskipun penilaian dan interpretasi Ki-67 masih agak kontroversial, dapat dipastikan bahwa tingkat proliferasi yang tinggi dikaitkan dengan peningkatan risiko kekambuhan penyakit dan penurunan kelangsungan hidup. Sampai saat ini, batas untuk membedakan antara Ki-67 "tinggi" dan "rendah" adalah 20%. Namun, ambang batas ini tidak berlaku untuk populasi pasien mutasi BRCA1/2 kami, yang memiliki nilai median Ki-67 sebesar 25%. Tren tingkat Ki-67 yang tinggi ini dapat dijelaskan oleh prevalensi pada kohort luminal B dan TNBC kami, yang hanya memiliki sedikit tumor luminal A. Namun, beberapa bukti tampaknya menunjukkan bahwa batas Ki-67 yang lebih tinggi (25–30%) dapat lebih baik mengelompokkan pasien menurut prognosis mereka. 53,54 Dari hasil analisis kami, korelasi yang signifikan tidaklah mengejutkan. Terjadi antara Ki-67 tinggi dan Ki-67 rendah. Ki-67 dan nilai serta keberadaan PV BRCA1. Faktanya, tumor terkait BRCA1 merupakan ciri khas TNBC dan menunjukkan fitur yang lebih agresif.16,17
Kesimpulannya, studi ini memberikan laporan tentang status mutasi BRCA1/2 dalam kelompok pasien BC dari Sisilia timur. Secara keseluruhan, temuan kami konsisten dengan bukti yang sudah ada sebelumnya, baik dalam hal prevalensi mutasi maupun fitur klinikopatologis pada BC. Lebih banyak studi pada populasi pasien BC dengan mutasi BRCA1/2 yang lebih besar, seperti menggunakan analisis mutasi yang diperluas multigenom, diperlukan untuk menilai keberadaan PV yang unik dan lebih jarang daripada BRCA1/2. Hal ini akan memungkinkan identifikasi dan pengelolaan yang tepat terhadap semakin banyaknya subjek yang berisiko tinggi terkena kanker akibat mutasi genetik.
Kami mengonfirmasi bahwa pasien menandatangani persetujuan tertulis untuk merilis sampel tumor mereka secara anonim untuk keperluan penelitian. Semua pasien menandatangani persetujuan tertulis sesuai dengan Deklarasi Helsinki. Menurut kebijakan AOU Policlinico “G.Rodolico – S.Marco”, penelitian ini dikecualikan dari tinjauan etik karena analisis BRCA1/2 dilakukan sesuai dengan praktik klinis dan semua pasien memberikan persetujuan tertulis. Pasien juga menyetujui penggunaan data mereka untuk keperluan penelitian.
Kami berterima kasih kepada Prof. Paolo Vigneri atas bantuannya dalam perawatan pasien kanker payudara seperti yang diminta oleh Komite Etik.
Federica Martorana melaporkan honorarium dari Istituto Gentili, Eli Lilly, Novartis, Pfizer. Penulis lain menyatakan tidak ada konflik kepentingan dalam karya ini.
1. Sung H, Ferlay J, Siegel RL, dkk. Statistik Kanker Global 2020: GLOBOCAN memperkirakan kejadian dan kematian 36 kanker di 185 negara di seluruh dunia. CA Cancer J Clin. 2021;71(3):209-249.doi: 10.3322/caac.21660