Nature.com 'ਤੇ ਜਾਣ ਲਈ ਤੁਹਾਡਾ ਧੰਨਵਾਦ।ਤੁਹਾਡੇ ਦੁਆਰਾ ਵਰਤੇ ਜਾ ਰਹੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਸੰਸਕਰਣ ਸੀਮਿਤ CSS ਸਮਰਥਨ ਹੈ।ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਅਨੁਭਵ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਿਫ਼ਾਰਿਸ਼ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਕਿ ਤੁਸੀਂ ਇੱਕ ਅੱਪਡੇਟ ਕੀਤੇ ਬ੍ਰਾਊਜ਼ਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ (ਜਾਂ ਇੰਟਰਨੈੱਟ ਐਕਸਪਲੋਰਰ ਵਿੱਚ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਮੋਡ ਨੂੰ ਅਯੋਗ ਕਰੋ)।ਇਸ ਦੌਰਾਨ, ਨਿਰੰਤਰ ਸਮਰਥਨ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਣ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਸਟਾਈਲ ਅਤੇ ਜਾਵਾ ਸਕ੍ਰਿਪਟ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ ਸਾਈਟ ਨੂੰ ਰੈਂਡਰ ਕਰਾਂਗੇ।
AFEX ਦੇ ਨਾਲ ਪ੍ਰੀ-ਟਰੀਟਿਡ ਮੱਕੀ ਦੇ ਸਟੋਰ ਵਿੱਚ ਸਥਾਈ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਸ ਦੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਨਵੇਂ ਇਮਯੂਨੋਲੋਜੀਕਲ ਅਤੇ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟ੍ਰਿਕ ਢੰਗ।ਲਿਗਨੋਸੈਲੂਲੋਸਿਕ ਬਾਇਓਮਾਸ ਜੈਵਿਕ ਇੰਧਨ ਦਾ ਇੱਕ ਟਿਕਾਊ ਵਿਕਲਪ ਹੈ ਅਤੇ ਭੋਜਨ, ਫੀਡ, ਈਂਧਨ ਅਤੇ ਰਸਾਇਣਾਂ ਵਰਗੇ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਲਈ ਬਾਇਓਟੈਕਨਾਲੌਜੀ ਵਿਕਸਿਤ ਕਰਨ ਲਈ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਹਨਾਂ ਤਕਨਾਲੋਜੀਆਂ ਦੀ ਕੁੰਜੀ ਪੌਦੇ ਦੀਆਂ ਸੈੱਲ ਦੀਆਂ ਕੰਧਾਂ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟਾਂ ਨੂੰ ਸਧਾਰਨ ਸ਼ੱਕਰ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਗਲੂਕੋਜ਼, ਜ਼ਾਈਲੋਜ਼ ਅਤੇ ਅਰਬੀਨੋਜ਼ ਵਿੱਚ ਬਦਲਣ ਲਈ ਲਾਗਤ-ਪ੍ਰਤੀਯੋਗੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਦਾ ਵਿਕਾਸ ਹੈ।ਕਿਉਂਕਿ ਲਿਗਨੋਸੈਲੂਲੋਸਿਕ ਬਾਇਓਮਾਸ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿੱਦੀ ਹੈ, ਇਸ ਨੂੰ ਉਤਪਾਦ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਥਰਮੋ ਕੈਮੀਕਲ ਇਲਾਜਾਂ (ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਅਮੋਨੀਆ ਫਾਈਬਰ ਐਕਸਫੋਲੀਏਸ਼ਨ (AFEX), ਪਤਲਾ ਐਸਿਡ (DA), ਆਇਓਨਿਕ ਤਰਲ (IL)) ਅਤੇ ਜੀਵ-ਵਿਗਿਆਨਕ ਇਲਾਜਾਂ (ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਐਂਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਅਤੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਬਾਇਲ ਫਰਮੈਂਟੇਸ਼ਨ) ਦੇ ਅਧੀਨ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ।.ਹਾਲਾਂਕਿ, ਜਦੋਂ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਵਪਾਰਕ ਫੰਗਲ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ, ਤਾਂ ਸਿਰਫ 75-85% ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਸ਼ੱਕਰ ਮੋਨੋਸੈਕਰਾਈਡ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਬਾਕੀ 15-25% ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ, ਅਟੁੱਟ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਜੋ ਹਮੇਸ਼ਾ ਸੂਖਮ ਜੀਵਾਂ ਲਈ ਉਪਲਬਧ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਪਹਿਲਾਂ, ਅਸੀਂ ਕਾਰਬਨ ਅਤੇ ਡਾਈਟੋਮੇਸੀਅਸ ਧਰਤੀ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਅਤੇ ਆਕਾਰ ਦੀ ਬੇਦਖਲੀ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਜ਼ਿੱਦੀ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਸਫਲਤਾਪੂਰਵਕ ਅਲੱਗ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਇਨ੍ਹੀਬੀਟਰੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਵੀ ਕੀਤੀ ਹੈ।ਅਸੀਂ ਪਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਘੱਟ ਡੀਪੀ ਅਤੇ ਨਿਰਪੱਖ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਨਾਲੋਂ ਉੱਚ ਪੱਧਰੀ ਪੌਲੀਮੇਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ (ਡੀਪੀ) ਮੈਥਾਈਲੇਟਿਡ ਯੂਰੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਬਦਲਵਾਂ ਵਾਲੇ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਵਪਾਰਕ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਨਾਲ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਕਰਨਾ ਵਧੇਰੇ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ।ਇੱਥੇ ਅਸੀਂ ਕਈ ਵਾਧੂ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕਰਦੇ ਹਾਂ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਪੌਦੇ ਦੇ ਸੈੱਲ ਦੀਆਂ ਕੰਧਾਂ ਅਤੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਸੇਟਸ, ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ-ਸਹਾਇਕ ਲੇਜ਼ਰ ਡੀਸੋਰਪਸ਼ਨ ਆਇਓਨਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ, ਟਾਈਮ-ਆਫ-ਫਲਾਈਟ ਮਾਸ-ਸਪੈਕਟਰੋਮੈਟਰੀ ਵਿੱਚ ਗਲਾਈਕਨ ਬਾਂਡਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਲਈ ਪੌਦੇ ਦੇ ਬਾਇਓਮਾਸ ਗਲਾਈਕਨਾਂ ਲਈ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਮੋਨੋਕਲੋਨਲ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ (mAbs) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਗਲਾਈਕਨ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲਿੰਗ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।.MALDI-TOF-MS) ਨੈਗੇਟਿਵ ਆਇਨਾਂ, ਗੈਸ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ ਅਤੇ ਮਾਸ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ (GC-MS) ਦੇ ਸੈਕੰਡਰੀ ਸੜਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਸਕੋਪੀ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਢਾਂਚੇ-ਜਾਣਕਾਰੀ ਵਾਲੇ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਪੀਕ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਡੈਰੀਵੇਟਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦੇ ਨਾਲ ਅਤੇ ਬਿਨਾਂ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਬਾਂਡਾਂ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕੇ।oligosaccharides (DP 4-20) ਦੇ ਛੋਟੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਇਹਨਾਂ ਅਣੂਆਂ ਨੂੰ mAb ਬਾਈਡਿੰਗ ਅਤੇ ਚਰਿੱਤਰੀਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤਣਾ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੈ।ਇਸ ਸਮੱਸਿਆ ਨੂੰ ਦੂਰ ਕਰਨ ਲਈ, ਅਸੀਂ ਇੱਕ ਨਵੀਂ ਬਾਇਓਟਿਨ ਸੰਜੋਗ-ਅਧਾਰਤ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਇਮੋਬਿਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਵਿਧੀ ਨੂੰ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਜਿਸ ਨੇ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਸਤਹ 'ਤੇ ਘੱਟ ਡੀਪੀ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਜ਼ ਦੀ ਬਹੁਗਿਣਤੀ ਨੂੰ ਸਫਲਤਾਪੂਰਵਕ ਲੇਬਲ ਕੀਤਾ, ਜੋ ਕਿ ਖਾਸ ਲਿਗੇਸ਼ਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਉੱਚ ਥ੍ਰਰੂਪੁਟ ਐਮਏਬੀ ਸਿਸਟਮ ਵਿੱਚ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਹ ਨਵੀਂ ਵਿਧੀ ਭਵਿੱਖ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਉੱਨਤ ਉੱਚ ਥ੍ਰਰੂਪੁਟ ਗਲਾਈਕੋਮ ਅਸੈਸ ਦੇ ਵਿਕਾਸ ਦੀ ਸਹੂਲਤ ਦੇਵੇਗੀ ਜੋ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਉਦੇਸ਼ਾਂ ਲਈ ਬਾਇਓਮਾਰਕਰਾਂ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਕਰਨ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਕਰਨ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।
ਲਿਗਨੋਸੈਲੂਲੋਸਿਕ ਬਾਇਓਮਾਸ, ਖੇਤੀਬਾੜੀ, ਜੰਗਲਾਤ, ਘਾਹ ਅਤੇ ਲੱਕੜ ਦੀਆਂ ਸਮੱਗਰੀਆਂ ਤੋਂ ਬਣਿਆ, ਉੱਚ ਮੁੱਲ ਵਾਲੇ ਉਤਪਾਦ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਭੋਜਨ, ਫੀਡ, ਬਾਲਣ ਅਤੇ ਰਸਾਇਣਕ ਪੂਰਵਜ ਸਮੇਤ ਬਾਇਓ-ਆਧਾਰਿਤ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸੰਭਾਵੀ ਫੀਡਸਟੌਕ ਹੈ।ਪੌਦਿਆਂ ਦੀਆਂ ਸੈੱਲ ਦੀਆਂ ਕੰਧਾਂ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸੈਲੂਲੋਜ਼ ਅਤੇ ਹੇਮੀਸੈਲੂਲੋਜ਼) ਰਸਾਇਣਕ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਅਤੇ ਬਾਇਓਟ੍ਰਾਂਸਫਾਰਮੇਸ਼ਨ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਅਤੇ ਮਾਈਕਰੋਬਾਇਲ ਫਰਮੈਂਟੇਸ਼ਨ) ਦੁਆਰਾ ਮੋਨੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਵਿੱਚ ਡੀਪੋਲੀਮਰਾਈਜ਼ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਆਮ ਪੂਰਵ-ਇਲਾਜਾਂ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ ਅਮੋਨੀਆ ਫਾਈਬਰ ਐਕਸਪੈਂਸ਼ਨ (AFEX), ਪਤਲਾ ਐਸਿਡ (DA), ਆਇਓਨਿਕ ਤਰਲ (IL), ਅਤੇ ਭਾਫ਼ ਵਿਸਫੋਟ (SE), ਜੋ ਕਿ ਪੌਦਿਆਂ ਦੀਆਂ ਸੈੱਲ ਦੀਆਂ ਕੰਧਾਂ 3,4 ਖੋਲ੍ਹ ਕੇ ਲਿਗਨੋਸੈਲੂਲੋਜ਼ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਲਈ ਰਸਾਇਣਾਂ ਅਤੇ ਗਰਮੀ ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਨ।ਪਦਾਰਥ ਦੀ ਜ਼ਿੱਦ, 5. ਬਾਇਓ-ਆਧਾਰਿਤ ਈਂਧਨ ਅਤੇ ਰਸਾਇਣਾਂ ਨੂੰ ਪੈਦਾ ਕਰਨ ਲਈ ਟਰਾਂਸਜੇਨਿਕ ਖਮੀਰ ਜਾਂ ਬੈਕਟੀਰੀਆ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਵਪਾਰਕ ਸਰਗਰਮ ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ-ਰੱਖਣ ਵਾਲੇ ਪਾਚਕ (CAZymes) ਅਤੇ ਮਾਈਕਰੋਬਾਇਲ ਫਰਮੈਂਟੇਸ਼ਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਇੱਕ ਉੱਚ ਠੋਸ ਲੋਡ 'ਤੇ ਐਂਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਵਪਾਰਕ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਵਿੱਚ CAZymes ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੇ ਇੱਕ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨਾਲ ਬਣੇ ਹੁੰਦੇ ਹਨ ਜੋ ਮੋਨੋਸੈਕਰਾਈਡਜ਼ 2,7 ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ-ਸ਼ੂਗਰ ਬਾਂਡਾਂ ਨੂੰ ਸਹਿਯੋਗੀ ਤੌਰ 'ਤੇ ਤੋੜ ਦਿੰਦੇ ਹਨ।ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਅਸੀਂ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਹੈ, ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ ਦੇ ਨਾਲ ਲਿਗਨਿਨ ਦੇ ਸੁਗੰਧਿਤ ਪੌਲੀਮਰਾਂ ਦਾ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਨੈਟਵਰਕ ਉਹਨਾਂ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਅਧੂਰੇ ਸ਼ੂਗਰ ਦੇ ਪਰਿਵਰਤਨ ਵੱਲ ਅਗਵਾਈ ਕਰਦਾ ਹੈ, 15-25% ਸੈਕਸ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਇਕੱਠਾ ਕਰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਪ੍ਰੀਟਰੀਟਿਡ ਬਾਇਓਮਾਸ ਦੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਦੌਰਾਨ ਪੈਦਾ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਇਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬਾਇਓਮਾਸ ਪ੍ਰੀਟਰੀਟਮੈਂਟ ਤਰੀਕਿਆਂ ਨਾਲ ਇੱਕ ਆਮ ਸਮੱਸਿਆ ਹੈ।ਇਸ ਰੁਕਾਵਟ ਦੇ ਕੁਝ ਕਾਰਨਾਂ ਵਿੱਚ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਿਸਿਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਰੋਕਥਾਮ, ਜਾਂ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਬਾਇਓਮਾਸ ਵਿੱਚ ਸ਼ੂਗਰ ਬੰਧਨ ਨੂੰ ਤੋੜਨ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦੇ ਜ਼ਰੂਰੀ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਗੈਰਹਾਜ਼ਰੀ ਜਾਂ ਘੱਟ ਪੱਧਰ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਸ਼ੱਕਰ ਦੀ ਬਣਤਰ ਅਤੇ ਢਾਂਚਾਗਤ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ oligosaccharides ਵਿੱਚ ਸ਼ੂਗਰ ਬਾਂਡ, ਸਾਨੂੰ ਹਾਈਡ੍ਰੌਲਿਸਿਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਖੰਡ ਦੇ ਪਰਿਵਰਤਨ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰੇਗਾ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਬਾਇਓਟੈਕਨਾਲੌਜੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਪੈਟਰੋਲੀਅਮ-ਉਤਪੰਨ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੇ ਨਾਲ ਲਾਗਤ-ਮੁਕਾਬਲਾ ਬਣਾਇਆ ਜਾਵੇਗਾ।
ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ ਦੀ ਬਣਤਰ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣਾ ਚੁਣੌਤੀਪੂਰਨ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸ ਲਈ ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ (LC) 11,12, ਨਿਊਕਲੀਅਰ ਮੈਗਨੈਟਿਕ ਰੈਜ਼ੋਨੈਂਸ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਸਕੋਪੀ (NMR) 13, ਕੇਸ਼ੀਲੀ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰੇਸਿਸ (CE) 14,15,16 ਅਤੇ ਮਾਸ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ (MS)17 ਵਰਗੇ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।, ਅਠਾਰਾਂ.MS ਵਿਧੀਆਂ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਲੇਜ਼ਰ ਡੀਸੋਰਪਸ਼ਨ ਦੇ ਨਾਲ ਟਾਈਮ-ਆਫ-ਫਲਾਈਟ ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ ਅਤੇ ਮੈਟ੍ਰਿਕਸ (ਮਾਲਡੀ-ਟੌਫ-ਐਮਐਸ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਆਇਓਨਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ ਬਣਤਰਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਬਹੁਮੁਖੀ ਢੰਗ ਹੈ।ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ, ਸੋਡੀਅਮ ਆਇਨ ਐਡਕਟਸ ਦੇ ਕੋਲੀਜ਼ਨ-ਇੰਡਿਊਸਡ ਡਿਸਸੋਸੀਏਸ਼ਨ (ਸੀਆਈਡੀ) ਟੈਂਡਮ ਐਮਐਸ ਨੂੰ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਅਟੈਚਮੈਂਟ ਪੋਜੀਸ਼ਨਾਂ, ਅਨੋਮੇਰਿਕ ਕੌਂਫਿਗਰੇਸ਼ਨਾਂ, ਕ੍ਰਮਾਂ, ਅਤੇ ਬ੍ਰਾਂਚਿੰਗ ਪੋਜੀਸ਼ਨਾਂ 20, 21 ਦੇ ਅਨੁਸਾਰੀ ਫਿੰਗਰਪ੍ਰਿੰਟਸ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਹੈ।
ਗਲਾਈਕਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ ਬਾਂਡ 22 ਦੀ ਡੂੰਘਾਈ ਨਾਲ ਪਛਾਣ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਵਧੀਆ ਸਾਧਨ ਹੈ।ਇਹ ਵਿਧੀ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ ਲਿੰਕੇਜ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਲਈ ਪ੍ਰੋਬ ਦੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸੈੱਲ ਕੰਧ ਗਲਾਈਕਨ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਨਿਰਦੇਸ਼ਿਤ ਮੋਨੋਕਲੋਨਲ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ (mAbs) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੀ ਹੈ।250 ਤੋਂ ਵੱਧ mAbs ਦੁਨੀਆ ਭਰ ਵਿੱਚ ਉਪਲਬਧ ਹਨ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਸੈਕਰਾਈਡਸ24 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਰੇਖਿਕ ਅਤੇ ਸ਼ਾਖਾਵਾਂ ਵਾਲੇ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ।ਪੌਦੇ ਦੇ ਸੈੱਲ ਦੀਵਾਰ ਦੀ ਬਣਤਰ, ਰਚਨਾ, ਅਤੇ ਸੋਧਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਲਈ ਕਈ mAbs ਦੀ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਪੌਦੇ ਦੇ ਸੈੱਲ ਦੀ ਕਿਸਮ, ਅੰਗ, ਉਮਰ, ਵਿਕਾਸ ਦੇ ਪੜਾਅ, ਅਤੇ ਵਿਕਾਸ ਦੇ ਵਾਤਾਵਰਣ 25,26 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਅੰਤਰ ਹਨ।ਹਾਲ ਹੀ ਵਿੱਚ, ਇਸ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਪੌਦਿਆਂ ਅਤੇ ਜਾਨਵਰਾਂ ਦੀਆਂ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਵਿੱਚ ਵੇਸੀਕਲ ਆਬਾਦੀ ਅਤੇ ਗਲਾਈਕਨ ਟ੍ਰਾਂਸਪੋਰਟ ਵਿੱਚ ਉਹਨਾਂ ਦੀਆਂ ਸਬੰਧਤ ਭੂਮਿਕਾਵਾਂ ਨੂੰ ਸਮਝਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਸਬਸੈਲੂਲਰ ਮਾਰਕਰਾਂ, ਵਿਕਾਸ ਦੇ ਪੜਾਵਾਂ, ਜਾਂ ਵਾਤਾਵਰਣਕ ਉਤੇਜਨਾ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਅਤੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ।ਗਲਾਈਕਾਨਾਂ ਅਤੇ ਜ਼ਾਇਲਾਂ ਦੀਆਂ ਕੁਝ ਵੱਖਰੀਆਂ ਬਣਤਰਾਂ ਜਿਨ੍ਹਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ ਪੈਕਟਿਨ (ਪੀ), ਜ਼ਾਇਲਾਨ (ਐਕਸ), ਮੰਨਨ (ਐਮ), ਜ਼ਾਇਲੋਗਲੂਕਨਜ਼ (ਐਕਸਐਲਜੀ), ਮਿਸ਼ਰਤ ਬਾਂਡ ਗਲੂਕਨਜ਼ (ਐਮਐਲਜੀ), ਅਰਾਬਿਨੋਕਸਾਇਲਨ (ਆਰਬੀਐਕਸ), ਗਲੈਕਟੋਮੈਨਨ (ਗੈਲਜੀ), ਗਲੂਕੁਰੋਨਿਕ ਐਸਿਡ-ਏਰਾਬੀਨੋਕਸੈਲਾਨ (ਏਰਾਬੀਨੋਕਸੈਲਾਨ) ਅਤੇ ਜੀਏਆਰਬੀਨੋਕਸੀਨ (ਏਆਰਬੀਨੋਕਸੀਨ)।
ਹਾਲਾਂਕਿ, ਇਹਨਾਂ ਸਾਰੇ ਖੋਜ ਯਤਨਾਂ ਦੇ ਬਾਵਜੂਦ, ਸਿਰਫ ਕੁਝ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨੇ ਹਾਈ ਸੋਲਿਡਸ ਲੋਡ (HSL) ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਇਕੱਠੇ ਹੋਣ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਤੀ 'ਤੇ ਕੇਂਦ੍ਰਤ ਕੀਤਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਰੀਲੀਜ਼, ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਦੌਰਾਨ ਓਲੀਗੋਮੇਰਿਕ ਚੇਨ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਵਿੱਚ ਬਦਲਾਅ, ਵੱਖ-ਵੱਖ ਘੱਟ ਡੀਪੀ ਪੋਲੀਮਰ, ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਕਰਵ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਵੰਡ 30,31,32।ਇਸ ਦੌਰਾਨ, ਹਾਲਾਂਕਿ ਗਲਾਈਕਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਗਲਾਈਕਨ ਢਾਂਚੇ ਦੇ ਵਿਆਪਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਇੱਕ ਉਪਯੋਗੀ ਸਾਧਨ ਸਾਬਤ ਹੋਇਆ ਹੈ, ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਘੱਟ ਡੀਪੀ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਦਾ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨਾ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੈ।5-10 kDa ਤੋਂ ਘੱਟ ਦੇ ਅਣੂ ਭਾਰ ਵਾਲੇ ਛੋਟੇ ਡੀਪੀ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਜ਼ ਐਲੀਸਾ ਪਲੇਟਾਂ 33, 34 ਨਾਲ ਨਹੀਂ ਬੰਨ੍ਹਦੇ ਅਤੇ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਧੋ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।
ਇੱਥੇ, ਪਹਿਲੀ ਵਾਰ, ਅਸੀਂ ਮੋਨੋਕਲੋਨਲ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਐਵਿਡਿਨ-ਕੋਟੇਡ ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਇੱਕ ਏਲੀਸਾ ਪਰਖ ਦਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਕਰਦੇ ਹਾਂ, ਗਲਾਈਕੋਮ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੇ ਨਾਲ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਰਿਫ੍ਰੈਕਟਰੀ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਸ ਲਈ ਇੱਕ-ਕਦਮ ਦੀ ਬਾਇਓਟਿਨਿਲੇਸ਼ਨ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਜੋੜਦੇ ਹੋਏ।ਗਲਾਈਕੌਮ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਸਾਡੀ ਪਹੁੰਚ ਨੂੰ MALDI-TOF-MS ਅਤੇ GC-MS ਦੁਆਰਾ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਜ਼ਡ ਸ਼ੂਗਰ ਰਚਨਾਵਾਂ ਦੇ ਟ੍ਰਾਈਮੇਥਾਈਲਸਿਲਿਲ (TMS) ਡੈਰੀਵੇਟਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਪੂਰਕ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਲਿੰਕੇਜ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਮਾਣਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਸ ਨਵੀਨਤਾਕਾਰੀ ਪਹੁੰਚ ਨੂੰ ਭਵਿੱਖ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਉੱਚ-ਥਰੂਪੁੱਟ ਵਿਧੀ ਵਜੋਂ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਬਾਇਓਮੈਡੀਕਲ ਖੋਜ ਵਿੱਚ ਵਿਆਪਕ ਉਪਯੋਗ ਲੱਭਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ35।
ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਅਤੇ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੇ ਅਨੁਵਾਦ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਦੀਆਂ ਸੋਧਾਂ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਗਲਾਈਕੋਸੀਲੇਸ਼ਨ, 36 ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਜੈਵਿਕ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ।ਉਦਾਹਰਨ ਲਈ, ਸੀਰਮ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੇ ਗਲਾਈਕੋਸੀਲੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਸੋਜਸ਼ ਵਾਲੇ ਗਠੀਏ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਭੂਮਿਕਾ ਨਿਭਾਉਂਦੀਆਂ ਹਨ, ਅਤੇ ਗਲਾਈਕੋਸੀਲੇਸ਼ਨ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲੀਆਂ ਨੂੰ ਡਾਇਗਨੌਸਟਿਕ ਮਾਰਕਰ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ37।ਸਾਹਿਤ ਵਿੱਚ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਲਾਈਕਨਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਬਿਮਾਰੀਆਂ ਵਿੱਚ ਆਸਾਨੀ ਨਾਲ ਪ੍ਰਗਟ ਹੋਣ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕੀਤੀ ਗਈ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਗੈਸਟਰੋਇੰਟੇਸਟਾਈਨਲ ਟ੍ਰੈਕਟ ਅਤੇ ਜਿਗਰ ਦੀਆਂ ਪੁਰਾਣੀਆਂ ਸੋਜਸ਼ ਦੀਆਂ ਬਿਮਾਰੀਆਂ, ਵਾਇਰਲ ਲਾਗ, ਅੰਡਕੋਸ਼, ਛਾਤੀ, ਅਤੇ ਪ੍ਰੋਸਟੇਟ ਕੈਂਸਰ 38,39,40 ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਐਂਟੀਬਾਡੀ-ਆਧਾਰਿਤ ਗਲਾਈਕਨ ਏਲੀਸਾ ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਗਲਾਈਕਨ ਦੀ ਬਣਤਰ ਨੂੰ ਸਮਝਣਾ ਗੁੰਝਲਦਾਰ MS ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੇ ਬਿਨਾਂ ਬਿਮਾਰੀ ਦੇ ਨਿਦਾਨ ਵਿੱਚ ਵਾਧੂ ਵਿਸ਼ਵਾਸ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰੇਗਾ।
ਸਾਡੇ ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਹੈ ਕਿ ਜ਼ਿੱਦੀ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਪ੍ਰੀਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ ਅਤੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਹਾਈਡੋਲਾਈਸਿਸ (ਚਿੱਤਰ 1) ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਗੈਰ-ਹਾਈਡਰੋਲਾਈਜ਼ਡ ਰਹੇ।ਸਾਡੇ ਪਹਿਲਾਂ ਪ੍ਰਕਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਕੰਮ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ AFEX-pretreated corn stover hydrolyzate (ACSH)8 ਤੋਂ oligosaccharides ਨੂੰ ਅਲੱਗ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਸਰਗਰਮ ਚਾਰਕੋਲ ਠੋਸ-ਪੜਾਅ ਕੱਢਣ ਦਾ ਤਰੀਕਾ ਵਿਕਸਿਤ ਕੀਤਾ ਹੈ।ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਕੱਢਣ ਅਤੇ ਵੱਖ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, oligosaccharides ਅੱਗੇ ਆਕਾਰ ਐਕਸਕਲੂਜ਼ਨ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ (SEC) ਦੁਆਰਾ ਵੰਡੇ ਗਏ ਸਨ ਅਤੇ ਅਣੂ ਭਾਰ ਦੇ ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਇਕੱਠੇ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਸ਼ੂਗਰ ਮੋਨੋਮਰਸ ਅਤੇ ਓਲੀਗੋਮਰਸ ਨੂੰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰੀਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟਾਂ ਤੋਂ ਜਾਰੀ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਜੋ ਕਿ ਸ਼ੂਗਰ ਰਚਨਾ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੁਆਰਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ.ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰੀ-ਟਰੀਟਮੈਂਟ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸ਼ੂਗਰ ਓਲੀਗੋਮਰਾਂ ਦੀ ਸਮੱਗਰੀ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਜ਼ਿੱਦੀ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਜ਼ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਬਾਇਓਮਾਸ ਨੂੰ ਮੋਨੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਵਿੱਚ ਬਦਲਣ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਆਮ ਸਮੱਸਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਘੱਟੋ ਘੱਟ 10-15% ਅਤੇ ਇੱਥੋਂ ਤੱਕ ਕਿ 18% ਤੱਕ ਖੰਡ ਦੀ ਪੈਦਾਵਾਰ ਵਿੱਚ ਕਮੀ ਲਿਆ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਸਾਨੂੰ.ਇਹ ਵਿਧੀ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਫਰੈਕਸ਼ਨਾਂ ਦੇ ਹੋਰ ਵੱਡੇ ਪੱਧਰ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਲਈ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ।ਇਸ ਕੰਮ ਵਿੱਚ oligosaccharides ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਲਈ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਅਣੂ ਵਜ਼ਨਾਂ ਵਾਲੇ ACH ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਬਾਅਦ ਦੇ ਅੰਸ਼ਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਪ੍ਰੀਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟ ਅਤੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਹਾਈਡੋਲਾਈਸਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸਥਾਈ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਅਣਹਾਈਡਰੋਲਾਈਜ਼ਡ ਰਹੇ।ਇੱਥੇ (ਏ) ਇੱਕ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਵੱਖ ਕਰਨ ਦਾ ਤਰੀਕਾ ਹੈ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਐਕਟੀਵੇਟਿਡ ਕਾਰਬਨ ਅਤੇ ਡਾਇਟੋਮੇਸੀਅਸ ਧਰਤੀ ਦੇ ਇੱਕ ਪੈਕ ਕੀਤੇ ਬੈੱਡ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ AFEX-ਪ੍ਰੀਟ੍ਰੀਟਿਡ ਕੌਰਨ ਸਟੋਰ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲੀਜ਼ੇਟ (ACSH) ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ;(ਬੀ) ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਵੱਖ ਕਰਨ ਦਾ ਤਰੀਕਾ।oligosaccharides ਅੱਗੇ ਆਕਾਰ ਬੇਦਖਲੀ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ (SEC) ਦੁਆਰਾ ਵੱਖ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ;(C) ਸੈਕਰਾਈਡ ਮੋਨੋਮਰਸ ਅਤੇ ਓਲੀਗੋਮਰ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਪ੍ਰੀਟ੍ਰੀਟਮੈਂਟਾਂ (ਪਤਲੇ ਐਸਿਡ: DA, ਆਇਓਨਿਕ ਤਰਲ: IL ਅਤੇ AFEX) ਤੋਂ ਜਾਰੀ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ।ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ: 25% (ਡਬਲਯੂ/ਡਬਲਯੂ) (ਲਗਭਗ 8% ਗਲੂਕਨ ਲੋਡਿੰਗ), 96 ਘੰਟੇ ਦੀ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ, 20 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ / ਜੀ ਕਮਰਸ਼ੀਅਲ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਲੋਡਿੰਗ (Ctec2:Htec2:MP-2:1:1 ਅਨੁਪਾਤ) ਅਤੇ (ਡੀ) ਅਤੇ (ਡੀ) ਖੰਡ ਅਤੇ ਖੰਡ ਦੇ x/w/w) ਦੀ ਲੋਡਿੰਗ, ਜੀਓਮੋਨਲੋਸੀਓਲੋਮਰੋਸੀਓਲੋਸੀਓਮਰੋਜ਼ੈਫ ਤੋਂ ਜਾਰੀ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸ਼ੂਗਰ. EX ਪ੍ਰੀ-ਟ੍ਰੀਟਿਡ ਕੌਰਨ ਸਟੋਰ (ACS)।
ਗਲਾਈਕਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਠੋਸ ਬਾਇਓਮਾਸ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਤੋਂ ਅਲੱਗ ਕੀਤੇ ਐਬਸਟਰੈਕਟਾਂ ਵਿੱਚ ਗਲਾਈਕਨ ਦੇ ਵਿਆਪਕ ਢਾਂਚੇ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਇੱਕ ਉਪਯੋਗੀ ਸਾਧਨ ਸਾਬਤ ਹੋਇਆ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਸੈਕਰਾਈਡਜ਼ ਨੂੰ ਇਸ ਪਰੰਪਰਾਗਤ ਢੰਗ41 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਘੱਟ ਦਰਸਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ ਕਿਉਂਕਿ ਘੱਟ ਅਣੂ ਭਾਰ ਵਾਲੇ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਜ਼ ਨੂੰ ਏਲੀਸਾ ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਸਥਿਰ ਕਰਨਾ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਜੋੜਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਧੋਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਇਸਲਈ, ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਅਤੇ ਚਰਿੱਤਰੀਕਰਨ ਲਈ, ਏਵੀਡਿਨ-ਕੋਟੇਡ ELISA ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ, ਗੈਰ-ਅਨੁਕੂਲ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਸ ਨੂੰ ਕੋਟ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ-ਕਦਮ ਦੇ ਬਾਇਓਟਿਨਿਲੇਸ਼ਨ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਇਸ ਵਿਧੀ ਨੂੰ ਸਾਡੇ ਪਹਿਲਾਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ACSH ਅਤੇ ਇਸਦੇ ਅਣੂ ਭਾਰ (ਜਾਂ ਪੌਲੀਮਰਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦੀ ਡਿਗਰੀ, DP) ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ ਇੱਕ ਅੰਸ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਟੈਸਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ (ਚਿੱਤਰ 2) ਦੇ ਘਟਾਉਣ ਵਾਲੇ ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਬਾਇਓਟਿਨ-ਐਲਸੀ-ਹਾਈਡ੍ਰਾਜ਼ਾਈਡ ਨੂੰ ਜੋੜ ਕੇ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਬਾਈਡਿੰਗ ਐਫੀਨਿਟੀ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ-ਪੜਾਅ ਦੇ ਬਾਇਓਟਿਨਿਲੇਸ਼ਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਘੋਲ ਵਿੱਚ, ਰੀਡਿਊਸਿੰਗ ਐਂਡ 'ਤੇ ਹੈਮੀਏਸੀਟਲ ਗਰੁੱਪ ਹਾਈਡ੍ਰਾਜ਼ੋਨ ਬਾਂਡ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਬਾਇਓਟਿਨ-ਐਲਸੀ-ਹਾਈਡ੍ਰਾਜ਼ਾਈਡ ਦੇ ਹਾਈਡ੍ਰਾਜ਼ਾਈਡ ਗਰੁੱਪ ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਘਟਾਉਣ ਵਾਲੇ ਏਜੰਟ NaCNBH3 ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ ਵਿੱਚ, ਹਾਈਡ੍ਰਾਜ਼ੋਨ ਬਾਂਡ ਨੂੰ ਇੱਕ ਸਥਿਰ ਬਾਇਓਟਿਨੀਲੇਟਿਡ ਅੰਤ ਉਤਪਾਦ ਵਿੱਚ ਘਟਾ ਦਿੱਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਖੰਡ ਘਟਾਉਣ ਵਾਲੇ ਅੰਤ ਦੇ ਸੰਸ਼ੋਧਨ ਦੇ ਨਾਲ, ਘੱਟ ਡੀਪੀ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਜ਼ ਨੂੰ ਏਲੀਸਾ ਪਲੇਟਾਂ ਨਾਲ ਜੋੜਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਗਿਆ, ਅਤੇ ਸਾਡੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਇਹ ਗਲਾਈਕਨ-ਟਾਰਗੇਟਡ ਐਮਏਬੀਐਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਐਵਿਡਿਨ-ਕੋਟੇਡ ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਬਾਇਓਟਿਨੀਲੇਟਿਡ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਜ਼ ਲਈ ਏਲੀਸਾ 'ਤੇ ਆਧਾਰਿਤ ਮੋਨੋਕਲੋਨਲ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੀ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ।ਇੱਥੇ (ਏ) ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਸ ਦਾ ਸੰਯੁਕਤ ਬਾਇਓਟੀਨਾਈਲੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਨਿਊਟ੍ਰਾਵਿਡਿਨ ਕੋਟੇਡ ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਗਲਾਈਕਨ-ਟਾਰਗੇਟਡ mAbs ਦੇ ਨਾਲ ਬਾਅਦ ਦੀ ELISA ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਅਤੇ (B) ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੇ ਬਾਇਓਟਿਨਿਲੇਸ਼ਨ ਲਈ ਇੱਕ-ਕਦਮ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ।
ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ-ਕਨਜੁਗੇਟਿਡ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੇ ਨਾਲ ਐਵਿਡਿਨ-ਕੋਟੇਡ ਪਲੇਟਾਂ ਨੂੰ ਫਿਰ ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਅਤੇ ਸੈਕੰਡਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਵਿੱਚ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਇੱਕ ਹਲਕੇ- ਅਤੇ ਸਮਾਂ-ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲ ਮਾਧਿਅਮ ਵਿੱਚ ਧੋਤਾ ਗਿਆ।ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਪੂਰੀ ਹੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਪਲੇਟ ਨੂੰ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰਨ ਲਈ TMB ਸਬਸਟਰੇਟ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਅੰਤ ਵਿੱਚ ਸਲਫਿਊਰਿਕ ਐਸਿਡ ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਨੂੰ ਰੋਕ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਸੀ.ਐਂਟੀਬਾਡੀ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਕਰਾਸ-ਲਿੰਕਿੰਗ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਹਰੇਕ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਦੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਤਾਕਤ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਇੱਕ ਏਲੀਸਾ ਰੀਡਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਪਲੇਟਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੇ ਵੇਰਵਿਆਂ ਅਤੇ ਮਾਪਦੰਡਾਂ ਲਈ, ਅਨੁਸਾਰੀ ਭਾਗ "ਸਮੱਗਰੀ ਅਤੇ ਢੰਗ" ਵੇਖੋ।
ਅਸੀਂ ACSH ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਦੇ ਨਾਲ-ਨਾਲ ਲਿਗਨੋਸੈਲੂਲੋਸਿਕ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਸੇਟਸ ਤੋਂ ਵੱਖ ਕੀਤੇ ਕੱਚੇ ਅਤੇ ਸ਼ੁੱਧ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਫਰੈਕਸ਼ਨਾਂ ਵਿੱਚ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਕਾਰਜਾਂ ਲਈ ਇਸ ਨਵੀਂ ਵਿਕਸਤ ਵਿਧੀ ਦੀ ਉਪਯੋਗਤਾ ਦਾ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਕਰਦੇ ਹਾਂ।ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਚਿੱਤਰ 3 ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਬਾਇਓਐਸੀਲੇਟਿਡ ਗਲਾਈਕੋਮ ਪਰਖ ਵਿਧੀਆਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ACSH ਵਿੱਚ ਪਛਾਣੇ ਗਏ ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਐਪੀਟੋਪ-ਸਥਾਪਿਤ ਜ਼ਾਇਲਾਨ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਯੂਰੋਨਿਕ (U) ਜਾਂ ਮੈਥਾਈਲੂਰੋਨਿਕ (MeU) ਅਤੇ ਪੈਕਟਿਕ ਅਰਾਬੀਨੋਗਲੈਕਟਨ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਉਨ੍ਹਾਂ ਵਿੱਚੋਂ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਗੈਰ-ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਜ਼ਡ ਸੋਲਿਡਸ (UHS)43 ਦੇ ਗਲਾਈਕੈਨ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ 'ਤੇ ਸਾਡੇ ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਵੀ ਪਾਏ ਗਏ ਸਨ।
ਸੈੱਲ ਕੰਧ ਗਲਾਈਕਨ ਨੂੰ ਨਿਰਦੇਸ਼ਿਤ ਮੋਨੋਕਲੋਨਲ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਰੀਕਲਸੀਟਰੈਂਟ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਐਪੀਟੋਪਸ ਦੀ ਖੋਜ।“ਨਿਰਪੱਖ” ਭਿੰਨਾ ACN ਭਿੰਨਾ ਹੈ ਅਤੇ “ਤੇਜ਼ਾਬੀ” ਭਿੰਨਾ FA ਅੰਸ਼ ਹੈ।ਹੀਟਮੈਪ 'ਤੇ ਚਮਕਦਾਰ ਲਾਲ ਉੱਚ ਐਪੀਟੋਪ ਸਮੱਗਰੀ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਚਮਕਦਾਰ ਬਲੂਜ਼ ਇੱਕ ਖਾਲੀ ਪਿਛੋਕੜ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਪੈਮਾਨੇ 'ਤੇ ਰੰਗ ਦੇ ਮੁੱਲ ਫਾਰਮੂਲੇ N=2 ਲਈ ਕੱਚੇ OD ਮੁੱਲਾਂ 'ਤੇ ਆਧਾਰਿਤ ਹਨ।ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੁਆਰਾ ਮਾਨਤਾ ਪ੍ਰਾਪਤ ਮੁੱਖ ਐਪੀਟੋਪ ਸੱਜੇ ਪਾਸੇ ਦਿਖਾਏ ਗਏ ਹਨ.
ਇਹ ਗੈਰ-ਸੈਲੂਲੋਜ਼ ਬਣਤਰਾਂ ਨੂੰ ਟੈਸਟ ਕੀਤੇ ਵਪਾਰਕ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਆਮ ਸੈਲੂਲੇਸ ਅਤੇ ਹੇਮੀਸੈਲੂਲੇਸ ਦੁਆਰਾ ਕਲੀਵ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਵਪਾਰਕ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।ਇਸ ਲਈ, ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਲਈ ਨਵੇਂ ਸਹਾਇਕ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਲੋੜੀਂਦੇ ਗੈਰ-ਸੈਲੂਲੋਜ਼ ਐਕਸੈਸਰੀ ਐਂਜ਼ਾਈਮਾਂ ਤੋਂ ਬਿਨਾਂ, ਇਹ ਗੈਰ-ਸੈਲੂਲੋਜ਼ ਬਾਂਡ ਮੋਨੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਵਿੱਚ ਪੂਰਨ ਰੂਪਾਂਤਰਣ ਨੂੰ ਰੋਕਦੇ ਹਨ, ਭਾਵੇਂ ਕਿ ਉਹਨਾਂ ਦੇ ਮੂਲ ਸ਼ੂਗਰ ਪੋਲੀਮਰ ਛੋਟੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਵਿੱਚ ਵੱਡੇ ਪੱਧਰ 'ਤੇ ਹਾਈਡੋਲਾਈਜ਼ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹੋਣ ਅਤੇ ਵਪਾਰਕ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਮਿਸ਼ਰਣਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਭੰਗ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹੋਣ।
ਸਿਗਨਲ ਡਿਸਟ੍ਰੀਬਿਊਸ਼ਨ ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਬਾਈਡਿੰਗ ਤਾਕਤ ਦੇ ਹੋਰ ਅਧਿਐਨ ਨੇ ਦਿਖਾਇਆ ਕਿ ਬਾਈਡਿੰਗ ਐਪੀਟੋਪਸ ਉੱਚ ਡੀਪੀ ਸ਼ੂਗਰ ਫਰੈਕਸ਼ਨਾਂ (ਏ, ਬੀ, ਸੀ, ਡੀਪੀ 20+ ਤੱਕ) ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਡੀਪੀ ਫਰੈਕਸ਼ਨਾਂ (ਡੀ, ਈ, ਐਫ, ਡੀਪੀ) ਡਾਇਮਰਾਂ ਵਿੱਚ ਘੱਟ ਸਨ) (ਚਿੱਤਰ 1)।ਐਸਿਡ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਨਿਰਪੱਖ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨਾਲੋਂ ਗੈਰ-ਸੈਲੂਲੋਜ਼ ਐਪੀਟੋਪਸ ਵਿੱਚ ਵਧੇਰੇ ਆਮ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।ਇਹ ਵਰਤਾਰੇ ਸਾਡੇ ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ ਦੇਖੇ ਗਏ ਪੈਟਰਨ ਨਾਲ ਇਕਸਾਰ ਹਨ, ਜਿੱਥੇ ਉੱਚ ਡੀਪੀ ਅਤੇ ਐਸਿਡ ਮੋਇਟੀਜ਼ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਰੋਧਕ ਸਨ।ਇਸ ਲਈ, ਗੈਰ-ਸੈਲੂਲੋਜ਼ ਗਲਾਈਕਨ ਐਪੀਟੋਪਸ ਅਤੇ U ਅਤੇ MeU ਬਦਲਾਂ ਦੀ ਮੌਜੂਦਗੀ oligosaccharides ਦੀ ਸਥਿਰਤਾ ਵਿੱਚ ਬਹੁਤ ਯੋਗਦਾਨ ਪਾ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਇਹ ਨੋਟ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ ਘੱਟ ਡੀਪੀ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਲਈ ਬਾਈਡਿੰਗ ਅਤੇ ਖੋਜ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਜੇ ਐਪੀਟੋਪ ਇੱਕ ਡਾਇਮੇਰਿਕ ਜਾਂ ਟ੍ਰਾਈਮੇਰਿਕ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਹੈ।ਇਸਦੀ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਲੰਬਾਈ ਦੇ ਵਪਾਰਕ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਜਾਂਚ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ, ਹਰ ਇੱਕ ਵਿੱਚ ਸਿਰਫ਼ ਇੱਕ ਐਪੀਟੋਪ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਜੋ ਇੱਕ ਖਾਸ mAb ਨਾਲ ਜੁੜਦਾ ਹੈ।
ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਬਣਤਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨੇ ਕੁਝ ਕਿਸਮਾਂ ਦੇ ਰਿਕਲਸੀਟਰੈਂਟ ਬਾਂਡਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਗਟ ਕੀਤਾ।ਵਰਤੇ ਗਏ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਦੀ ਕਿਸਮ, ਉਚਿਤ ਬੰਧਨ ਪੈਟਰਨ, ਅਤੇ ਇਸ ਦੁਆਰਾ ਪੈਦਾ ਕੀਤੇ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਸਿਗਨਲ ਦੀ ਤਾਕਤ (ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਅਤੇ ਘੱਟ ਤੋਂ ਘੱਟ) 'ਤੇ ਨਿਰਭਰ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਨਵੇਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਵਧੇਰੇ ਸੰਪੂਰਨ ਗਲਾਈਕੋਕਨਵਰਜ਼ਨ ਲਈ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਿੱਚ ਅਰਧ-ਗਿਣਤੀਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ ਜਾ ਸਕਦੇ ਹਨ।ACSH oligosaccharides ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਇੱਕ ਉਦਾਹਰਨ ਵਜੋਂ ਲੈਂਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ ਹਰੇਕ ਬਾਇਓਮਾਸ ਸਮੱਗਰੀ ਲਈ ਗਲਾਈਕਨ ਬਾਂਡ ਦਾ ਇੱਕ ਡੇਟਾਬੇਸ ਬਣਾ ਸਕਦੇ ਹਾਂ।ਇੱਥੇ ਇਹ ਨੋਟ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੇ ਵੱਖੋ-ਵੱਖਰੇ ਸਬੰਧਾਂ ਨੂੰ ਧਿਆਨ ਵਿੱਚ ਰੱਖਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਜੇਕਰ ਉਹਨਾਂ ਦਾ ਸਬੰਧ ਅਣਜਾਣ ਹੈ, ਤਾਂ ਇਹ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੇ ਸੰਕੇਤਾਂ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਕਰਨ ਵੇਲੇ ਕੁਝ ਮੁਸ਼ਕਲਾਂ ਪੈਦਾ ਕਰੇਗਾ।ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਗਲਾਈਕਨ ਬਾਂਡ ਦੀ ਤੁਲਨਾ ਇੱਕੋ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਲਈ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿਚਕਾਰ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਕੰਮ ਕਰ ਸਕਦੀ ਹੈ।ਇਹ ਜ਼ਿੱਦੀ ਬਾਂਡਾਂ ਨੂੰ ਫਿਰ CAZyme ਡੇਟਾਬੇਸ ਨਾਲ ਜੋੜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਤੋਂ ਅਸੀਂ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਪਛਾਣ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ, ਉਮੀਦਵਾਰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਚੁਣ ਸਕਦੇ ਹਾਂ ਅਤੇ ਬੰਧਨ ਤੋੜਨ ਵਾਲੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਲਈ ਟੈਸਟ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ, ਜਾਂ ਬਾਇਓਰੀਫਾਈਨਰੀਜ਼44 ਵਿੱਚ ਵਰਤੋਂ ਲਈ ਇਹਨਾਂ ਐਨਜ਼ਾਈਮਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਗਟ ਕਰਨ ਲਈ ਮਾਈਕਰੋਬਾਇਲ ਸਿਸਟਮ ਵਿਕਸਿਤ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ।
ਇਹ ਮੁਲਾਂਕਣ ਕਰਨ ਲਈ ਕਿ ਕਿਵੇਂ ਇਮਯੂਨੋਲੋਜੀਕਲ ਵਿਧੀਆਂ ਲਿਗਨੋਸੈਲੂਲੋਸਿਕ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਸੇਟਸ ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਘੱਟ ਅਣੂ ਭਾਰ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਣ ਲਈ ਵਿਕਲਪਿਕ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੀ ਪੂਰਤੀ ਕਰਦੀਆਂ ਹਨ, ਅਸੀਂ MALDI (Fig. 4, S1-S8) ਅਤੇ ਉਸੇ ਪੈਨਲ 'ਤੇ GC-MS 'ਤੇ ਆਧਾਰਿਤ TMS-ਉਤਪੰਨ ਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ।MALDI ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਇਹ ਤੁਲਨਾ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਕਿ ਕੀ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਅਣੂਆਂ ਦੀ ਪੁੰਜ ਵੰਡ ਨਿਯਤ ਬਣਤਰ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦੀ ਹੈ।ਅੰਜੀਰ 'ਤੇ.4 ਨਿਰਪੱਖ ਹਿੱਸਿਆਂ ACN-A ਅਤੇ ACN-B ਦੇ MC ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ।ACN-A ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ DP 4–8 (Fig. 4) ਤੋਂ DP 22 (Fig. S1) ਤੱਕ ਦੇ ਪੈਂਟੋਜ਼ ਸ਼ੱਕਰ ਦੀ ਇੱਕ ਰੇਂਜ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ, ਜਿਸਦਾ ਵਜ਼ਨ MeU-xylan oligosaccharides ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦਾ ਹੈ।ACN-B ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ DP 8-15 ਦੇ ਨਾਲ ਪੈਂਟੋਜ਼ ਅਤੇ ਗਲੂਕੋਕਸੀਲਾਨ ਲੜੀ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ।ਪੂਰਕ ਸਮੱਗਰੀ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਚਿੱਤਰ S3 ਵਿੱਚ, FA-C ਤੇਜ਼ਾਬੀ ਮੋਏਟੀ ਪੁੰਜ ਵੰਡ ਨਕਸ਼ੇ 8-15 ਦੇ DP ਦੇ ਨਾਲ (Me)U ਬਦਲੀ ਗਈ ਪੈਂਟੋਜ਼ ਸ਼ੱਕਰ ਦੀ ਇੱਕ ਰੇਂਜ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ ਜੋ ਕਿ ELISA-ਅਧਾਰਿਤ mAb ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਵਿੱਚ ਪਾਏ ਜਾਣ ਵਾਲੇ ਬਦਲਵੇਂ ਜ਼ਾਇਲਾਂ ਨਾਲ ਮੇਲ ਖਾਂਦੇ ਹਨ।ਐਪੀਟੋਪਸ ਇਕਸਾਰ ਹਨ.
ACS ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਗੈਰ-ਅਨੁਕੂਲ oligosaccharides ਦਾ MALDI-MS ਸਪੈਕਟ੍ਰਮ।ਇੱਥੇ, (A) ACN-A ਘੱਟ ਵਜ਼ਨ ਰੇਂਜ ਦੇ ਭਿੰਨਾਂ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਮੈਥਾਈਲੇਟਿਡ ਯੂਰੋਨਿਕ ਐਸਿਡ (DP 4-8) ਬਦਲਿਆ ਗਿਆ ਗਲੂਕੁਰੋਕਸਾਇਲਨ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਸ ਅਤੇ (B) ACN-B ਜ਼ਾਇਲਾਨ ਅਤੇ ਮੈਥਾਈਲੇਟਿਡ ਯੂਰੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਸ ਗਲੂਕੋਰੋਕਸਾਇਲਨ (DP 8-15) ਨਾਲ ਬਦਲਿਆ ਗਿਆ।
ਰਿਫ੍ਰੈਕਟਰੀ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਜ਼ ਦੇ ਗਲਾਈਕਨ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਦੀ ਰਚਨਾ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ।ਇੱਥੇ (A) GC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਫਰੈਕਸ਼ਨਾਂ ਦੀ TMS ਸੈਕਰਾਈਡ ਰਚਨਾ।(ਬੀ) oligosaccharides ਵਿੱਚ ਮੌਜੂਦ ਵੱਖ-ਵੱਖ TMS-ਉਤਪੰਨ ਸ਼ੱਕਰ ਦੇ ਬਣਤਰ.ACN - ਨਿਰਪੱਖ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਸ ਵਾਲਾ ਐਸੀਟੋਨਾਈਟ੍ਰਾਈਲ ਫਰੈਕਸ਼ਨ ਅਤੇ FA - ਫੇਰੂਲਿਕ ਐਸਿਡ ਫਰੈਕਸ਼ਨ ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਐਸਿਡ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਹੁੰਦੇ ਹਨ।
ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਫਰੈਕਸ਼ਨ ਦੇ LC-MS ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਤੋਂ ਇੱਕ ਹੋਰ ਦਿਲਚਸਪ ਸਿੱਟਾ ਕੱਢਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਚਿੱਤਰ S9 ਵਿੱਚ ਦਿਖਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ (ਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਇਲੈਕਟ੍ਰਾਨਿਕ ਪੂਰਕ ਸਮੱਗਰੀ ਵਿੱਚ ਦੇਖਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ)।ACN-B ਫਰੈਕਸ਼ਨ ਦੇ ਬੰਧਨ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਹੈਕਸੋਜ਼ ਅਤੇ -OAc ਸਮੂਹਾਂ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਵਾਰ-ਵਾਰ ਦੇਖੇ ਗਏ ਸਨ।ਇਹ ਖੋਜ ਨਾ ਸਿਰਫ ਗਲਾਈਕੌਮ ਅਤੇ ਮਾਲਡੀ-ਟੌਫ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿੱਚ ਦੇਖੇ ਗਏ ਵਿਖੰਡਨ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦੀ ਹੈ, ਸਗੋਂ ਪ੍ਰੀਟਰੀਟਿਡ ਲਿਗਨੋਸੈਲੂਲੋਸਿਕ ਬਾਇਓਮਾਸ ਵਿੱਚ ਸੰਭਾਵੀ ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ ਡੈਰੀਵੇਟਿਵਜ਼ ਬਾਰੇ ਨਵੀਂ ਜਾਣਕਾਰੀ ਵੀ ਪ੍ਰਦਾਨ ਕਰਦੀ ਹੈ।
ਅਸੀਂ ਟੀਐਮਐਸ ਸ਼ੂਗਰ ਡੈਰੀਵੇਟਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਫਰੈਕਸ਼ਨ ਦੀ ਸ਼ੂਗਰ ਰਚਨਾ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵੀ ਕੀਤਾ।GC-MS ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ, ਅਸੀਂ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਫਰੈਕਸ਼ਨ (ਚਿੱਤਰ 5) ਵਿੱਚ ਨਿਊਰਲ (ਗੈਰ-ਡੈਰੀਵੇਟਿਵ) ਅਤੇ ਤੇਜ਼ਾਬ ਸ਼ੱਕਰ (GluA ਅਤੇ GalA) ਦੀ ਰਚਨਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ।ਗਲੂਕੁਰੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਤੇਜ਼ਾਬੀ ਭਾਗਾਂ C ਅਤੇ D ਵਿੱਚ ਪਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਗੈਲੇਕਟੂਰੋਨਿਕ ਐਸਿਡ ਤੇਜ਼ਾਬੀ ਭਾਗਾਂ A ਅਤੇ B ਵਿੱਚ ਪਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਜੋ ਕਿ ਦੋਵੇਂ ਹੀ ਤੇਜ਼ਾਬੀ ਸ਼ੱਕਰ ਦੇ ਉੱਚ DP ਹਿੱਸੇ ਹਨ।ਇਹ ਨਤੀਜੇ ਨਾ ਸਿਰਫ਼ ਸਾਡੇ ELISA ਅਤੇ MALDI ਡੇਟਾ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਸਗੋਂ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਇਕੱਤਰ ਕਰਨ ਦੇ ਸਾਡੇ ਪਿਛਲੇ ਅਧਿਐਨਾਂ ਨਾਲ ਵੀ ਇਕਸਾਰ ਹਨ।ਇਸ ਲਈ, ਸਾਡਾ ਮੰਨਣਾ ਹੈ ਕਿ oligosaccharides ਦੇ ਬਾਇਓਟੀਨਾਈਲੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਬਾਅਦ ਵਿੱਚ ELISA ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਆਧੁਨਿਕ ਇਮਯੂਨੋਲੋਜੀਕਲ ਤਰੀਕੇ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਜੈਵਿਕ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਰੀਕਲਸੀਟਰੈਂਟ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਸ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਕਾਫੀ ਹਨ।
ਕਿਉਂਕਿ ELISA- ਅਧਾਰਿਤ mAb ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਵਿਧੀਆਂ ਨੂੰ ਕਈ ਵੱਖ-ਵੱਖ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੁਆਰਾ ਪ੍ਰਮਾਣਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਅਸੀਂ ਇਸ ਨਵੀਂ ਮਾਤਰਾਤਮਕ ਵਿਧੀ ਦੀ ਸੰਭਾਵਨਾ ਨੂੰ ਹੋਰ ਖੋਜਣਾ ਚਾਹੁੰਦੇ ਸੀ।ਦੋ ਵਪਾਰਕ oligosaccharides, xylohexasaccharide oligosaccharide (XHE) ਅਤੇ 23-α-L-arabinofuranosyl-xylotriose (A2XX), ਸੈੱਲ ਕੰਧ ਗਲਾਈਕਨ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ ਵਾਲੀ ਇੱਕ ਨਵੀਂ mAb ਪਹੁੰਚ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਖਰੀਦੇ ਅਤੇ ਟੈਸਟ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਚਿੱਤਰ 6 ਬਾਇਓਟਿਨੀਲੇਟਡ ਬਾਈਡਿੰਗ ਸਿਗਨਲ ਅਤੇ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਲਾਗ ਸੰਘਣਤਾ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਇੱਕ ਰੇਖਿਕ ਸਬੰਧ ਦਿਖਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਇੱਕ ਸੰਭਾਵਿਤ ਲੈਂਗਮੂਇਰ ਸੋਜ਼ਸ਼ ਮਾਡਲ ਦਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੰਦਾ ਹੈ।mAbs ਵਿੱਚ, CCRC-M137, CCRC-M138, CCRC-M147, CCRC-M148, ਅਤੇ CCRC-M151 XHE ਨਾਲ ਸਬੰਧਿਤ ਹਨ, ਅਤੇ CCRC-M108, CCRC-M109, ਅਤੇ LM11 1 ਤੋਂ 100 ਮੀਟਰ ਦੀ ਰੇਂਜ ਵਿੱਚ A2XX ਨਾਲ ਸਬੰਧਿਤ ਹਨ।ਪ੍ਰਯੋਗ ਦੇ ਦੌਰਾਨ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੀ ਸੀਮਤ ਉਪਲਬਧਤਾ ਦੇ ਕਾਰਨ, ਹਰੇਕ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਨਾਲ ਸੀਮਤ ਪ੍ਰਯੋਗ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਇੱਥੇ ਇਹ ਨੋਟ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਕਿ ਕੁਝ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਇੱਕ ਸਬਸਟਰੇਟ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਇੱਕੋ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਪ੍ਰਤੀ ਬਹੁਤ ਵੱਖਰੇ ਢੰਗ ਨਾਲ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਕਰਦੇ ਹਨ, ਸੰਭਵ ਤੌਰ 'ਤੇ ਕਿਉਂਕਿ ਉਹ ਥੋੜ੍ਹੇ ਵੱਖਰੇ ਐਪੀਟੋਪਾਂ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਬਹੁਤ ਵੱਖਰੀਆਂ ਬੰਧਨ ਵਾਲੀਆਂ ਸਾਂਝਾਂ ਹੋ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ।ਜਦੋਂ ਅਸਲ ਨਮੂਨਿਆਂ 'ਤੇ ਨਵੀਂ ਐਮਏਬੀ ਪਹੁੰਚ ਲਾਗੂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ ਤਾਂ ਸਹੀ ਐਪੀਟੋਪ ਪਛਾਣ ਦੀ ਵਿਧੀ ਅਤੇ ਪ੍ਰਭਾਵ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਹੋਣਗੇ।
ਵੱਖ-ਵੱਖ ਗਲਾਈਕਨ-ਟਾਰਗੇਟਿੰਗ mAbs ਦੀ ਖੋਜ ਰੇਂਜ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਦੋ ਵਪਾਰਕ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਇੱਥੇ, ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਲਾਗ ਇਕਾਗਰਤਾ ਦੇ ਨਾਲ ਰੇਖਿਕ ਸਬੰਧ (A) mAb ਦੇ ਨਾਲ XHE ਅਤੇ mAb ਦੇ ਨਾਲ (B) A2XX ਲਈ ਲੈਂਗਮੁਇਰ ਸੋਸ਼ਣ ਪੈਟਰਨ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।ਅਨੁਸਾਰੀ ਐਪੀਟੋਪਸ ਪਰਖ ਵਿੱਚ ਸਬਸਟਰੇਟ ਵਜੋਂ ਵਰਤੇ ਜਾਂਦੇ ਵਪਾਰਕ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਦੀਆਂ ਬਣਤਰਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ।
ਗਲਾਈਕਨ-ਟਾਰਗੇਟਡ ਮੋਨੋਕਲੋਨਲ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ (ਗਲਾਈਕੋਮਿਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਜਾਂ ਏਲੀਸਾ-ਅਧਾਰਤ ਐਮਏਬੀ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਪੌਦੇ ਦੇ ਬਾਇਓਮਾਸ ਨੂੰ ਬਣਾਉਣ ਵਾਲੇ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਮੁੱਖ ਸੈੱਲ ਕੰਧ ਗਲਾਈਕਨਾਂ ਦੀ ਡੂੰਘਾਈ ਨਾਲ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਲਈ ਇੱਕ ਸ਼ਕਤੀਸ਼ਾਲੀ ਸਾਧਨ ਹੈ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਕਲਾਸੀਕਲ ਗਲਾਈਕਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਸਿਰਫ ਵੱਡੇ ਸੈੱਲ ਦੀਵਾਰ ਗਲਾਈਕਨਾਂ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਕਿਉਂਕਿ ਜ਼ਿਆਦਾਤਰ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ELISA ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨਾਲ ਸਥਿਰ ਨਹੀਂ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਇਸ ਅਧਿਐਨ ਵਿੱਚ, AFEX-ਪ੍ਰੀਟ੍ਰੀਟਿਡ ਮੱਕੀ ਦੇ ਸਟਵਰ ਨੂੰ ਉੱਚ ਠੋਸ ਸਮੱਗਰੀ 'ਤੇ ਪਾਚਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਹਾਈਡੋਲਾਈਜ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਖੰਡ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਜ਼ੇਟ ਵਿੱਚ ਰੀਕਲਸੀਟਰੈਂਟ ਸੈੱਲ ਕੰਧ ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ ਦੀ ਰਚਨਾ ਨੂੰ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਹਾਲਾਂਕਿ, ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਸੇਟਸ ਵਿੱਚ ਛੋਟੇ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਦੇ ਐਮਏਬੀ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੂੰ ਘੱਟ ਅੰਦਾਜ਼ਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਹੈ, ਅਤੇ ਐਲੀਸਾ ਪਲੇਟਾਂ ਉੱਤੇ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਢੰਗ ਨਾਲ ਸਥਿਰ ਕਰਨ ਲਈ ਵਾਧੂ ਸਾਧਨਾਂ ਦੀ ਲੋੜ ਹੈ।
ਅਸੀਂ ਇੱਥੇ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਬਾਇਓਟੀਨਾਈਲੇਸ਼ਨ ਨੂੰ ਜੋੜ ਕੇ ਐਮਏਬੀ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਲਈ ਇੱਕ ਨਾਵਲ ਅਤੇ ਕੁਸ਼ਲ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਇਮੋਬਿਲਾਈਜ਼ੇਸ਼ਨ ਵਿਧੀ ਦੀ ਰਿਪੋਰਟ ਕਰਦੇ ਹਾਂ ਜਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਨਿਊਟ੍ਰਏਵਿਡਿਨ™ ਕੋਟੇਡ ਪਲੇਟਾਂ 'ਤੇ ELISA ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਸਥਿਰ ਬਾਇਓਟੀਨਾਈਲੇਟਿਡ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਸ ਨੇ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਲਈ ਕਾਫ਼ੀ ਸਾਂਝ ਦਿਖਾਈ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਰੀਕਲਸੀਟਰੈਂਟ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਜ਼ ਦੀ ਤੇਜ਼ ਅਤੇ ਕੁਸ਼ਲ ਖੋਜ ਨੂੰ ਸਮਰੱਥ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ।ਪੁੰਜ ਸਪੈਕਟ੍ਰੋਮੈਟਰੀ ਦੇ ਅਧਾਰ ਤੇ ਇਹਨਾਂ ਜ਼ਿੱਦੀ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਦੀ ਰਚਨਾ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਨੇ ਇਮਯੂਨੋਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਲਈ ਇਸ ਨਵੀਂ ਪਹੁੰਚ ਦੇ ਨਤੀਜਿਆਂ ਦੀ ਪੁਸ਼ਟੀ ਕੀਤੀ।ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ, ਇਹ ਅਧਿਐਨ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹਨ ਕਿ ਗਲਾਈਕਨ-ਨਿਸ਼ਾਨਾਬੱਧ ਮੋਨੋਕਲੋਨਲ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਦੇ ਨਾਲ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਬਾਇਓਟਿਨਿਲੇਸ਼ਨ ਅਤੇ ਏਲੀਸਾ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਦੇ ਸੁਮੇਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਵਿੱਚ ਕਰਾਸਲਿੰਕਸ ਦਾ ਪਤਾ ਲਗਾਉਣ ਲਈ ਕੀਤੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਸ ਦੀ ਬਣਤਰ ਨੂੰ ਦਰਸਾਉਂਦੇ ਹੋਰ ਬਾਇਓਕੈਮੀਕਲ ਅਧਿਐਨਾਂ ਵਿੱਚ ਵਿਆਪਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਲਾਗੂ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ।
ਇਹ ਬਾਇਓਟਿਨ-ਅਧਾਰਿਤ ਗਲਾਈਕਨ ਪ੍ਰੋਫਾਈਲਿੰਗ ਵਿਧੀ ਪਹਿਲੀ ਰਿਪੋਰਟ ਹੈ ਜੋ ਪੌਦੇ ਦੇ ਬਾਇਓਮਾਸ ਵਿੱਚ ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਦੇ ਰੀਕਲਸੀਟਰੈਂਟ ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ ਬਾਂਡਾਂ ਦੀ ਜਾਂਚ ਕਰਨ ਦੇ ਸਮਰੱਥ ਹੈ।ਇਹ ਸਮਝਣ ਵਿੱਚ ਮਦਦ ਕਰਦਾ ਹੈ ਕਿ ਬਾਇਓਮਾਸ ਦੇ ਕੁਝ ਹਿੱਸੇ ਇੰਨੇ ਜ਼ਿੱਦੀ ਕਿਉਂ ਹਨ ਜਦੋਂ ਇਹ ਬਾਇਓਫਿਊਲ ਉਤਪਾਦਨ ਦੀ ਗੱਲ ਆਉਂਦੀ ਹੈ।ਇਹ ਵਿਧੀ ਗਲਾਈਕੌਮ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਿਧੀਆਂ ਵਿੱਚ ਇੱਕ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਪਾੜੇ ਨੂੰ ਭਰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਪੌਦੇ ਦੇ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਤੋਂ ਪਰੇ ਸਬਸਟਰੇਟਾਂ ਦੀ ਇੱਕ ਵਿਸ਼ਾਲ ਸ਼੍ਰੇਣੀ ਤੱਕ ਇਸਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਂਦੀ ਹੈ।ਭਵਿੱਖ ਵਿੱਚ, ਅਸੀਂ ਬਾਇਓਟੀਨਾਈਲੇਸ਼ਨ ਲਈ ਰੋਬੋਟਿਕਸ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ ਅਤੇ ELISA ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੇ ਉੱਚ-ਥਰੂਪੁਟ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਸਾਡੇ ਦੁਆਰਾ ਵਿਕਸਤ ਕੀਤੀ ਗਈ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰ ਸਕਦੇ ਹਾਂ।
ਪਾਇਨੀਅਰ 33A14 ਹਾਈਬ੍ਰਿਡ ਬੀਜਾਂ ਤੋਂ ਪੈਦਾ ਹੋਈ ਮੱਕੀ ਦੀ ਤੂੜੀ (CS) ਦੀ ਕਟਾਈ 2010 ਵਿੱਚ ਰੇ, ਕੋਲੋਰਾਡੋ ਵਿੱਚ ਕ੍ਰੈਮਰ ਫਾਰਮਾਂ ਤੋਂ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਜ਼ਮੀਨ ਦੇ ਮਾਲਕ ਦੀ ਇਜਾਜ਼ਤ ਨਾਲ, ਇਸ ਬਾਇਓਮਾਸ ਨੂੰ ਖੋਜ ਲਈ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ। ਨਮੂਨੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਵਿੱਚ ਜ਼ਿਪ-ਲਾਕ ਬੈਗਾਂ ਵਿੱਚ ਸੁੱਕੇ <6% ਨਮੀ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਨਮੂਨੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਵਿੱਚ ਜ਼ਿਪ-ਲਾਕ ਬੈਗਾਂ ਵਿੱਚ ਸੁੱਕੇ <6% ਨਮੀ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। Образцы хранились сухими при влажности < 6% в пакетах с застежкой-молнией при комнатной температуре. ਨਮੂਨੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਜ਼ਿੱਪਰਡ ਬੈਗਾਂ ਵਿੱਚ <6% ਨਮੀ 'ਤੇ ਸੁੱਕੇ ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।样品在室温下以干燥< 6% 的水分储存在自封袋中.样品在室温下以干燥<6% Образцы хранят в пакетах с застежкой-молнией при комнатной температуре с влажностью < 6%। ਨਮੂਨੇ ਨਮੀ <6% ਦੇ ਨਾਲ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਜ਼ਿੱਪਰ ਬੈਗਾਂ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ।ਅਧਿਐਨ ਸਥਾਨਕ ਅਤੇ ਰਾਸ਼ਟਰੀ ਦਿਸ਼ਾ ਨਿਰਦੇਸ਼ਾਂ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰਦਾ ਹੈ।ਰਚਨਾਤਮਕ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ NREL ਪ੍ਰੋਟੋਕੋਲ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇਸ ਰਚਨਾ ਵਿੱਚ 31.4% ਗਲੂਕਨ, 18.7% ਜ਼ਾਇਲਾਨ, 3.3% ਅਰਾਬਿਨਨ, 1.2% ਗਲੈਕਟਨ, 2.2% ਐਸੀਟਿਲ, 14.3% ਲਿਗਨਿਨ, 1.7% ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਤੇ 13. 4% ਐਸ਼ ਪਾਇਆ ਗਿਆ।
Cellic® CTec2 (138 mg ਪ੍ਰੋਟੀਨ/ml, ਬਹੁਤ VCNI 0001) ਨੋਵੋਜ਼ਾਈਮਜ਼ (ਫ੍ਰੈਂਕਲਿਨਟਨ, NC, USA) ਤੋਂ ਸੈਲੂਲੇਸ, β-ਗਲੂਕੋਸੀਡੇਸ ਅਤੇ Cellic® HTec2 (157 mg ਪ੍ਰੋਟੀਨ/ml, lot VHN00001) ਦਾ ਇੱਕ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਮਿਸ਼ਰਣ ਹੈ।ਮਲਟੀਫੈਕਟ ਪੈਕਟਿਨੇਸ® (72 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਪ੍ਰੋਟੀਨ/mL), ਪੈਕਟਿਨ ਡੀਗਰੇਡਿੰਗ ਐਨਜ਼ਾਈਮਜ਼ ਦਾ ਇੱਕ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਮਿਸ਼ਰਣ, ਡੂਪੋਂਟ ਇੰਡਸਟਰੀਅਲ ਬਾਇਓਸਾਇੰਸਜ਼ (ਪਾਲੋ ਆਲਟੋ, CA, ਯੂਐਸਏ) ਦੁਆਰਾ ਦਾਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਕੇਜੇਲਡਾਹਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ (ਏਓਏਸੀ ਵਿਧੀ 2001.11, ਡੇਅਰੀ ਵਨ ਕੋਆਪਰੇਟਿਵ ਇੰਕ., ਇਥਾਕਾ, ਐਨਵਾਈ, ਯੂਐਸਏ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸਮੱਗਰੀ (ਅਤੇ ਗੈਰ-ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਦੇ ਯੋਗਦਾਨ ਨੂੰ ਘਟਾ ਕੇ) ਦਾ ਅਨੁਮਾਨ ਲਗਾ ਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।Diatomaceous Earth 545 EMD ਮਿਲੀਪੋਰ (ਬਿਲੇਰਿਕਾ, MA) ਤੋਂ ਖਰੀਦਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਐਕਟੀਵੇਟਿਡ ਕਾਰਬਨ (DARCO, 100 ਮੈਸ਼ ਗ੍ਰੈਨਿਊਲ), Avicel (PH-101), ਬੀਚ ਜ਼ਾਇਲਨ, ਅਤੇ ਹੋਰ ਸਾਰੇ ਰਸਾਇਣ ਸਿਗਮਾ-ਐਲਡਰਿਕ (ਸੇਂਟ ਲੁਈਸ, MO) ਤੋਂ ਖਰੀਦੇ ਗਏ ਸਨ।
AFEX ਪ੍ਰੀ-ਟਰੀਟਮੈਂਟ GLBRC (ਬਾਇਓਮਾਸ ਕਨਵਰਜ਼ਨ ਰਿਸਰਚ ਲੈਬਾਰਟਰੀ, MSU, Lansing, MI, USA) ਵਿਖੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ।ਪ੍ਰੀ-ਇਲਾਜ 15 ਮਿੰਟ ਲਈ 140 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਇੱਕ ਸਟੇਨਲੈਸ ਸਟੀਲ ਬੈਂਚਟੌਪ ਬੈਚ ਰਿਐਕਟਰ (ਪਾਰਰ ਇੰਸਟਰੂਮੈਂਟਸ ਕੰਪਨੀ) ਵਿੱਚ 60% (ਡਬਲਯੂ/ਡਬਲਯੂ) ਲੋਡਿੰਗ ਵਿੱਚ ਐਨਹਾਈਡ੍ਰਸ ਅਮੋਨੀਆ ਅਤੇ ਬਾਇਓਮਾਸ ਦੇ 1:1 ਅਨੁਪਾਤ 'ਤੇ ਰਿਹਾਇਸ਼ ਦਾ ਸਮਾਂ।ਇਸ ਵਿੱਚ 30 ਮਿੰਟ ਲੱਗ ਗਏ।ਰਿਐਕਟਰ ਨੂੰ 140°C 'ਤੇ ਲਿਆਂਦਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਅਮੋਨੀਆ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਛੱਡ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਬਾਇਓਮਾਸ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਤੇਜ਼ੀ ਨਾਲ ਵਾਪਸ ਆ ਸਕਦਾ ਹੈ।AFEX ਪ੍ਰੀ-ਟਰੀਟਿਡ ਮੱਕੀ ਦੇ ਸਟਵਰ (ACS) ਦੀ ਰਚਨਾ ਅਨਟਰੀਟਿਡ ਕੌਰਨ ਸਟੋਰ (UT-CS) ਦੇ ਸਮਾਨ ਸੀ।
ਉੱਚ ਠੋਸ ACSH 25% (w/w) (ਲਗਭਗ 8% dextran ਲੋਡਿੰਗ) ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਜ਼ ਦੇ ਵੱਡੇ ਪੱਧਰ 'ਤੇ ਉਤਪਾਦਨ ਲਈ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਮੱਗਰੀ ਵਜੋਂ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ACS ਦਾ ਐਨਜ਼ਾਈਮਿਕ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਇੱਕ ਵਪਾਰਕ ਐਂਜ਼ਾਈਮ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਜਿਸ ਵਿੱਚ Cellic® Ctec2 10 mg ਪ੍ਰੋਟੀਨ/g glucan (pretreated biomass ਵਿੱਚ), Htec2 (Novozymes, Franklinton, NC), 5 mg ਪ੍ਰੋਟੀਨ/g glucan, ਅਤੇ Multifect Pectinase (Gencor Inc, USA) ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ।).), 5 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ ਪ੍ਰੋਟੀਨ/ਜੀ ਡੈਕਸਟ੍ਰਾਨ।3 ਲੀਟਰ, pH 4.8, 50°C ਅਤੇ 250 rpm ਦੇ ਕਾਰਜਸ਼ੀਲ ਵਾਲੀਅਮ ਦੇ ਨਾਲ ਇੱਕ 5-ਲੀਟਰ ਬਾਇਓਰੀਐਕਟਰ ਵਿੱਚ ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।96 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਹਾਈਡੋਲਾਈਸਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਹਾਈਡ੍ਰੌਲਾਈਜ਼ੇਟ ਨੂੰ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ 6000 rpm 'ਤੇ ਸੈਂਟਰਿਫਿਊਗੇਸ਼ਨ ਦੁਆਰਾ ਅਤੇ ਫਿਰ 14000 rpm 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਗੈਰ-ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਜ਼ਡ ਠੋਸ ਪਦਾਰਥਾਂ ਨੂੰ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਇਕੱਠਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਜ਼ੇਟ ਨੂੰ ਫਿਰ 0.22 ਮਿਲੀਮੀਟਰ ਫਿਲਟਰ ਬੀਕਰ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਜੀਵ ਫਿਲਟਰੇਸ਼ਨ ਦੇ ਅਧੀਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਫਿਲਟਰ ਕੀਤੇ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਜ਼ੇਟ ਨੂੰ 4° C. 'ਤੇ ਨਿਰਜੀਵ ਬੋਤਲਾਂ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਫਿਰ ਕਾਰਬਨ 'ਤੇ ਖੰਡਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
NREL ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਐਬਸਟਰੈਕਟ-ਅਧਾਰਤ ਬਾਇਓਮਾਸ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਰਚਨਾ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ: ਰਚਨਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਤਿਆਰੀ (NREL/TP-510-42620) ਅਤੇ ਬਾਇਓਮਾਸ ਵਿੱਚ ਢਾਂਚਾਗਤ ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ ਅਤੇ ਲਿਗਨਿਨ ਦਾ ਨਿਰਧਾਰਨ (NREL/TP-510) - 4718।
ਆਟੋਕਲੇਵ-ਅਧਾਰਿਤ ਐਸਿਡ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਵਿਧੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਹਾਈਡੋਲਾਈਜ਼ੇਟ ਸਟ੍ਰੀਮ ਦਾ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ 2 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਸਕੇਲ 'ਤੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਜ਼ੇਟ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ 69.7 µl 72% ਸਲਫਿਊਰਿਕ ਐਸਿਡ ਨਾਲ 10 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਸਕ੍ਰੂ ਕੈਪ ਕਲਚਰ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਮਿਲਾਓ ਅਤੇ 121 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਬੈਂਚਟੌਪ 'ਤੇ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕਰੋ, ਬਰਫ਼ 'ਤੇ ਠੰਡਾ ਕਰੋ ਅਤੇ ਉੱਚ ਪ੍ਰਦਰਸ਼ਨ ਵਾਲੇ ਤਰਲ ਕ੍ਰੋਮੈਟੋਗ੍ਰਾਫੀ (HPLC) ਸ਼ੀਸ਼ੀ ਵਿੱਚ ਫਿਲਟਰ ਕਰੋ।ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਜ਼ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਐਸਿਡ-ਹਾਈਡਰੋਲਾਈਜ਼ਡ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਕੁੱਲ ਖੰਡ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਤੋਂ ਗੈਰ-ਹਾਈਡਰੋਲਾਈਜ਼ਡ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਮੋਨੋਸੈਕਰਾਈਡਾਂ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਘਟਾ ਕੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।
ਐਸਿਡ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲਾਈਜ਼ਡ ਬਾਇਓਮਾਸ ਵਿੱਚ ਗਲੂਕੋਜ਼, ਜ਼ਾਈਲੋਜ਼, ਅਤੇ ਅਰਬੀਨੋਜ਼ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ ਇੱਕ ਬਾਇਓ-ਰੈਡ ਐਮੀਨੈਕਸ HPX-87H ਕਾਲਮ 'ਤੇ ਇੱਕ ਆਟੋਸੈਂਪਲਰ, ਕਾਲਮ ਹੀਟਰ, ਆਈਸੋਕ੍ਰੇਟਿਕ ਪੰਪ, ਅਤੇ ਰਿਫ੍ਰੈਕਟਿਵ ਇੰਡੈਕਸ ਡਿਟੈਕਟਰ ਨਾਲ ਲੈਸ ਇੱਕ ਸ਼ਿਮਾਦਜ਼ੂ ਐਚਪੀਐਲਸੀ ਸਿਸਟਮ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਕਾਲਮ ਨੂੰ 50°C 'ਤੇ ਬਣਾਈ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ ਅਤੇ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ 0.6 ml/min 5 mM H2SO4 ਨਾਲ ਅਲੋਪ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਵਹਾਅ
ਮੋਨੋਮਰ ਅਤੇ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਸਮੱਗਰੀ ਲਈ ਹਾਈਡ੍ਰੋਲੀਜ਼ੇਟ ਸੁਪਰਨੇਟੈਂਟ ਨੂੰ ਪਤਲਾ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਅਤੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।ਐਨਜ਼ਾਈਮੈਟਿਕ ਹਾਈਡੋਲਿਸਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪ੍ਰਾਪਤ ਮੋਨੋਮੇਰਿਕ ਸ਼ੱਕਰ ਦਾ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਐਚਪੀਐਲਸੀ ਦੁਆਰਾ ਇੱਕ ਬਾਇਓ-ਰੈਡ (ਹਰਕੂਲੀਸ, CA) ਐਮੀਨੈਕਸ ਐਚਪੀਐਕਸ-87ਪੀ ਕਾਲਮ ਅਤੇ ਇੱਕ ਐਸ਼ ਗਾਰਡ ਕਾਲਮ ਨਾਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਕਾਲਮ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ 80°C 'ਤੇ ਬਰਕਰਾਰ ਰੱਖਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਪਾਣੀ ਨੂੰ 0.6 ml/min ਦੀ ਵਹਾਅ ਦਰ ਨਾਲ ਮੋਬਾਈਲ ਪੜਾਅ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਸ ਨੂੰ ਰੈਫਸ ਵਿੱਚ ਵਰਣਿਤ ਤਰੀਕਿਆਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ 121°C 'ਤੇ ਪਤਲੇ ਐਸਿਡ ਵਿੱਚ ਹਾਈਡ੍ਰੌਲਿਸਿਸ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।41, 48, 49.
ਸੈਕਰਾਈਡ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਕੱਚੇ, AFEX ਪੂਰਵ-ਇਲਾਜ ਕੀਤੇ ਗਏ ਅਤੇ ਸਾਰੇ ਗੈਰ-ਹਾਈਡਰੋਲਾਈਜ਼ਡ ਬਾਇਓਮਾਸ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ (ਸੀਰੀਅਲ ਸੈੱਲ ਕੰਧ ਦੇ ਐਬਸਟਰੈਕਟ ਦੇ ਉਤਪਾਦਨ ਅਤੇ ਉਹਨਾਂ ਦੀ ਐਮਏਬੀ ਸਕ੍ਰੀਨਿੰਗ ਸਮੇਤ) 'ਤੇ ਪਹਿਲਾਂ ਵਰਣਿਤ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆਵਾਂ 27, 43, 50, 51 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਗਲਾਈਕੌਮ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਲਈ, ਬਾਇਓਮਾਸ ਦੀ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਤੋਂ ਪੌਦਿਆਂ ਦੇ ਸੈੱਲ ਦੀਵਾਰ ਸਮੱਗਰੀ ਦੇ ਅਲਕੋਹਲ-ਅਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਨੂੰ ਤਿਆਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਅਮੋਨੀਅਮ ਆਕਸਲੇਟ (50 ਐਮਐਮ), ਸੋਡੀਅਮ ਕਾਰਬੋਨੇਟ (50 ਐਮਐਮ ਅਤੇ 0.5% ਡਬਲਯੂ/ਵੀ), CON ਵਰਗੇ ਵੱਧ ਰਹੇ ਹਮਲਾਵਰ ਰੀਏਜੈਂਟਾਂ ਨਾਲ ਲੜੀਵਾਰ ਕੱਢਣ ਦੇ ਅਧੀਨ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।(1M ਅਤੇ 4M, ਦੋਵੇਂ 1% w/v ਸੋਡੀਅਮ ਬੋਰੋਹਾਈਡਰਾਈਡ ਦੇ ਨਾਲ) ਅਤੇ ਐਸਿਡ ਕਲੋਰਾਈਟ ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪਹਿਲਾਂ ਦੱਸਿਆ ਗਿਆ ਹੈ 52,53।ਐਕਸਟਰੈਕਟਾਂ ਨੂੰ ਫਿਰ ਸੈੱਲ ਦੀਵਾਰ ਗਲਾਈਕਨ ਵੱਲ ਨਿਰਦੇਸ਼ਿਤ mAb50s ਦੇ ਇੱਕ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਪੈਨਲ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ELISA ਦੇ ਅਧੀਨ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ mAb ਬਾਈਡਿੰਗ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆਵਾਂ ਨੂੰ ਗਰਮੀ ਦੇ ਨਕਸ਼ੇ ਵਜੋਂ ਪੇਸ਼ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਪਲਾਂਟ ਸੈੱਲ ਵਾਲ ਗਲਾਈਕਨ ਨੂੰ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਬਣਾਉਣ ਵਾਲੇ mAbs ਪ੍ਰਯੋਗਸ਼ਾਲਾ ਸਟਾਕਾਂ (CCRC, JIM ਅਤੇ MAC ਸੀਰੀਜ਼) ਤੋਂ ਖਰੀਦੇ ਗਏ ਸਨ।
ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਸ ਦਾ ਇੱਕ-ਕਦਮ ਦਾ ਬਾਇਓਟਿਨਿਲੇਸ਼ਨ।ਬਾਇਓਟਿਨ-ਐਲਸੀ-ਹਾਈਡ੍ਰਾਜ਼ਾਈਡ ਨਾਲ ਕਾਰਬੋਹਾਈਡਰੇਟ ਦਾ ਸੰਯੋਜਨ ਨਿਮਨਲਿਖਤ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਬਾਇਓਟਿਨ-ਐਲਸੀ-ਹਾਈਡ੍ਰਾਜ਼ਾਈਡ (4.6 mg/12 μmol) ਨੂੰ 1 ਮਿੰਟ ਲਈ 65° C. 'ਤੇ ਜ਼ੋਰਦਾਰ ਹਿਲਾ ਕੇ ਅਤੇ ਗਰਮ ਕਰਕੇ ਡਾਈਮੇਥਾਈਲ ਸਲਫੌਕਸਾਈਡ (DMSO, 70 μl) ਵਿੱਚ ਭੰਗ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਗਲੇਸ਼ੀਅਲ ਐਸੀਟਿਕ ਐਸਿਡ (30 µl) ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਮਿਸ਼ਰਣ ਨੂੰ ਸੋਡੀਅਮ ਸਾਈਨੋਬੋਰੋਹਾਈਡਰਾਈਡ (6.4 mg/100 µmol) ਉੱਤੇ ਡੋਲ੍ਹਿਆ ਗਿਆ ਅਤੇ ਲਗਭਗ 1 ਮਿੰਟ ਲਈ 65° C. 'ਤੇ ਗਰਮ ਕਰਨ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘੁਲ ਗਿਆ।ਫਿਰ, ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਮਿਸ਼ਰਣ ਦੇ 5 ਤੋਂ 8 μl ਤੱਕ ਸੁੱਕੇ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ (1-100 nmol) ਵਿੱਚ ਲੇਬਲ ਨੂੰ ਘਟਾਉਣ ਵਾਲੇ ਸਿਰੇ 'ਤੇ 10 ਗੁਣਾ ਜਾਂ ਵੱਧ ਮੋਲਰ ਵਾਧੂ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ 2 ਘੰਟੇ ਲਈ 65 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਕੀਤੀ ਗਈ ਸੀ, ਜਿਸ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਤੁਰੰਤ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਬਿਨਾਂ ਕਟੌਤੀ ਦੇ ਲੇਬਲਿੰਗ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਵਿੱਚ ਕੋਈ ਵੀ ਸੋਡੀਅਮ ਸਾਈਨੋਬੋਰੋਹਾਈਡਰਾਈਡ ਨਹੀਂ ਵਰਤਿਆ ਗਿਆ ਸੀ, ਅਤੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ 2.5 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ 65° C 'ਤੇ ਪ੍ਰਤੀਕਿਰਿਆ ਦਿੱਤੀ ਗਈ ਸੀ।
ਬਾਇਓਟਿਨੀਲੇਟਿਡ ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡਜ਼ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਦੀ ਐਲੀਸਾ ਕੋਟਿੰਗ ਅਤੇ ਧੋਣ।ਐਵਿਡਿਨ-ਕੋਟੇਡ ਪਲੇਟ ਦੇ ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 25 μl ਬਾਇਓਟਿਨੀਲੇਟਡ ਨਮੂਨੇ (0.1 ਐਮ ਟ੍ਰਿਸ ਬਫਰ ਘੋਲ (ਟੀਬੀਐਸ) ਦੇ 5 ਮਿ.ਲੀ. ਵਿੱਚ ਪਤਲੇ ਹੋਏ ਹਰੇਕ ਕੇਂਦਰਿਤ ਨਮੂਨੇ ਦੇ 100 μl) ਨੂੰ ਜੋੜਿਆ ਗਿਆ ਸੀ।ਕੰਟਰੋਲ ਖੂਹਾਂ ਨੂੰ 0.1 M TBS ਵਿੱਚ 10 μg/ml ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ 'ਤੇ 50 μl ਬਾਇਓਟਿਨ ਨਾਲ ਕੋਟ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਨੂੰ ਖਾਲੀ ਮਾਪਾਂ ਲਈ ਇੱਕ ਪਰਤ ਵਜੋਂ ਵਰਤਿਆ ਜਾਂਦਾ ਸੀ।ਗੋਲੀ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ 2 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ ਨੰਬਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਪਲੇਟ ਨੂੰ 0.1% ਸਕਿਮਡ ਦੁੱਧ ਨਾਲ 0.1 M TBS ਵਿੱਚ 3 ਵਾਰ ਧੋਵੋ।ਗ੍ਰੇਨੀਅਰ ਫਲੈਟ 3A ਲਈ 11.
ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀਜ਼ ਨੂੰ ਜੋੜਨਾ ਅਤੇ ਧੋਣਾ।ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 40 µl ਪ੍ਰਾਇਮਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਨੂੰ ਉਬਾਲੋ।ਪਲੇਟਾਂ ਨੂੰ ਫਿਰ ਗ੍ਰੇਨੀਅਰ ਫਲੈਟ 3A ਲਈ ਵਾਸ਼ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ #11 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ 0.1M TBS ਵਿੱਚ 0.1% ਦੁੱਧ ਨਾਲ 3 ਵਾਰ ਧੋਤਾ ਗਿਆ।
ਸੈਕੰਡਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਧੋਵੋ।ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 50 µl ਮਾਊਸ/ਚੂਹਾ ਸੈਕੰਡਰੀ ਐਂਟੀਬਾਡੀ (0.1% ਦੁੱਧ ਵਿੱਚ 0.1 M TBS ਵਿੱਚ 1:5000 ਪਤਲਾ) ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 1 ਘੰਟੇ ਲਈ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਨੂੰ ਉਬਾਲੋ।ਗਰੇਨੀਅਰ ਫਲੈਟ 5A ਪਲੇਟ ਵਾਸ਼ ਪ੍ਰੋਗਰਾਮ #12 ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹੋਏ ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟਾਂ ਨੂੰ ਫਿਰ 0.1 M TBS ਵਿੱਚ 0.1% ਦੁੱਧ ਨਾਲ 5 ਵਾਰ ਧੋਤਾ ਗਿਆ।
ਇੱਕ ਘਟਾਓਣਾ ਜੋੜਨਾ.ਬੇਸ ਸਬਸਟਰੇਟ ਵਿੱਚ 3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine (TMB) ਦਾ 50 µl ਪਾਓ (ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਦੇ 15 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਵਿੱਚ ਬਫਰ ਦੀਆਂ 2 ਬੂੰਦਾਂ, TMB ਦੀਆਂ 3 ਬੂੰਦਾਂ, ਹਾਈਡ੍ਰੋਜਨ ਪਰਆਕਸਾਈਡ ਦੀਆਂ 2 ਬੂੰਦਾਂ ਜੋੜ ਕੇ)।TMB ਸਬਸਟਰੇਟ ਤਿਆਰ ਕਰੋ।ਅਤੇ ਵਰਤਣ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ vortex).ਮਾਈਕ੍ਰੋਪਲੇਟ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਉਬਾਲੋ।ਹਨੇਰੇ ਵਿੱਚ.
ਕਦਮ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰੋ ਅਤੇ ਟੈਬਲੇਟ ਪੜ੍ਹੋ।ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਵਿੱਚ 50 µl 1 N ਸਲਫਿਊਰਿਕ ਐਸਿਡ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਇੱਕ ELISA ਰੀਡਰ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ 450 ਤੋਂ 655 nm ਤੱਕ ਸੋਖਣ ਨੂੰ ਰਿਕਾਰਡ ਕਰੋ।
ਡੀਓਨਾਈਜ਼ਡ ਪਾਣੀ ਵਿੱਚ ਇਹਨਾਂ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਕਾਂ ਦੇ 1 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ/ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਹੱਲ ਤਿਆਰ ਕਰੋ: ਅਰਾਬਿਨੋਜ਼, ਰਾਮਨੋਜ਼, ਫਿਊਕੋਜ਼, ਜ਼ਾਈਲੋਜ਼, ਗਲੈਕਟਰੋਨਿਕ ਐਸਿਡ (ਗਾਲਾ), ਗਲੂਕੁਰੋਨਿਕ ਐਸਿਡ (ਗਲਸੀਏ), ਮੈਨਨੋਜ਼, ਗਲੂਕੋਜ਼, ਗਲੈਕਟੋਜ਼, ਲੈਕਟੋਜ਼, ਐਨ-ਐਸੀਟਿਲਮੈਨੋਸਾਮਾਈਨ (ਮੈਨਟੀਐਨਏਐਲਸੀ-ਨੈਗਲੂਕੋਜ਼),।(glcNAc), N-acetylgalactosamine (galNAc), inositol (ਅੰਦਰੂਨੀ ਮਿਆਰ)।ਸਾਰਣੀ 1 ਵਿੱਚ ਦਰਸਾਏ ਗਏ 1 mg/mL ਖੰਡ ਦੇ ਘੋਲ ਨੂੰ ਜੋੜ ਕੇ ਦੋ ਮਿਆਰ ਤਿਆਰ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ। ਨਮੂਨੇ -80° C. 'ਤੇ ਫ੍ਰੀਜ਼ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਅਤੇ ਲਾਈਓਫਿਲਾਈਜ਼ ਕੀਤੇ ਜਾਂਦੇ ਹਨ ਜਦੋਂ ਤੱਕ ਸਾਰਾ ਪਾਣੀ ਨਹੀਂ ਕੱਢਿਆ ਜਾਂਦਾ (ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਲਗਭਗ 12-18 ਘੰਟੇ)।
ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣਾਤਮਕ ਸੰਤੁਲਨ 'ਤੇ ਕੈਪ ਟਿਊਬਾਂ ਨੂੰ ਪੇਚ ਕਰਨ ਲਈ 100-500 µg ਨਮੂਨਾ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਜੋੜੀ ਗਈ ਰਕਮ ਨੂੰ ਰਿਕਾਰਡ ਕਰੋ।ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਘੋਲਨ ਵਾਲੇ ਦੀ ਇੱਕ ਖਾਸ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਿੱਚ ਭੰਗ ਕਰਨਾ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਤਰਲ ਅਲੀਕੋਟ ਦੇ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਜੋੜਨਾ ਸਭ ਤੋਂ ਵਧੀਆ ਹੈ।ਹਰੇਕ ਨਮੂਨਾ ਟਿਊਬ ਲਈ ਅੰਦਰੂਨੀ ਮਿਆਰ ਵਜੋਂ 20 µl 1 mg/ml inositol ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ ਗਏ ਅੰਦਰੂਨੀ ਮਿਆਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਮਿਆਰੀ ਟਿਊਬ ਵਿੱਚ ਜੋੜੀ ਗਈ ਅੰਦਰੂਨੀ ਮਿਆਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਦੇ ਬਰਾਬਰ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ।
ਇੱਕ ਪੇਚ ਕੈਪ ਵਾਲੀ ਸ਼ੀਸ਼ੀ ਵਿੱਚ 8 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਐਨਹਾਈਡ੍ਰਸ ਮੀਥੇਨੌਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਫਿਰ 4 ਮਿ.ਲੀ. 3 ਐਨ. ਮਿਥੇਨੋਲਿਕ ਐਚਸੀਐਲ ਘੋਲ, ਕੈਪਡ ਅਤੇ ਹਿਲਾਓ।ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਵਿੱਚ ਪਾਣੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੀ।
ਓਲੀਗੋਸੈਕਰਾਈਡ ਦੇ ਨਮੂਨਿਆਂ ਅਤੇ ਸਟੈਂਡਰਡ TMS ਟਿਊਬਾਂ ਵਿੱਚ 500 µl 1 M HCl ਮਿਥੇਨੋਲ ਘੋਲ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ।ਨਮੂਨੇ ਇੱਕ ਥਰਮਲ ਬਲਾਕ ਵਿੱਚ 80° C ਉੱਤੇ ਰਾਤੋ ਰਾਤ (168 ਘੰਟੇ) ਪਕਾਏ ਗਏ ਸਨ।ਮੈਥੇਨੋਲਾਈਸਿਸ ਉਤਪਾਦ ਨੂੰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਸੁਕਾਉਣ ਵਾਲੇ ਮੈਨੀਫੋਲਡ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਸੁਕਾਓ।200 μl MeOH ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਦੁਬਾਰਾ ਸੁਕਾਓ।ਇਸ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਨੂੰ ਦੋ ਵਾਰ ਦੁਹਰਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ.ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ 200 µl ਮਿਥੇਨੌਲ, 100 µl ਪਾਈਰੀਡੀਨ ਅਤੇ 100 µl ਐਸੀਟਿਕ ਐਨਹਾਈਡਰਾਈਡ ਸ਼ਾਮਲ ਕਰੋ ਅਤੇ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਮਿਲਾਓ।ਨਮੂਨੇ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ 30 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਪ੍ਰਫੁੱਲਤ ਕੀਤੇ ਗਏ ਸਨ।ਅਤੇ ਸੁੱਕ.200 µl ਮਿਥੇਨੌਲ ਪਾਓ ਅਤੇ ਦੁਬਾਰਾ ਸੁਕਾਓ।
200 µl ਟ੍ਰਾਈ-ਸਿਲ ਪਾਓ ਅਤੇ 20 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਕੈਪਡ ਟਿਊਬ ਨੂੰ ਗਰਮ ਕਰੋ।80 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ, ਫਿਰ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਠੰਡਾ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਲਗਭਗ 50 μl ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਤੱਕ ਸੁਕਾਉਣ ਲਈ ਇੱਕ ਸੁਕਾਉਣ ਵਾਲੇ ਮੈਨੀਫੋਲਡ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ।ਇਹ ਨੋਟ ਕਰਨਾ ਮਹੱਤਵਪੂਰਨ ਹੈ ਕਿ ਅਸੀਂ ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਸੁੱਕਣ ਨਹੀਂ ਦਿੱਤਾ.
2 ਮਿਲੀਲੀਟਰ ਹੈਕਸੇਨ ਪਾਓ ਅਤੇ ਵੋਰਟੈਕਸਿੰਗ ਦੁਆਰਾ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਰਲਾਓ।5-3/4 ਇੰਚ ਵਿਆਸ ਵਾਲੇ ਪਾਈਪੇਟ ਦੇ ਉੱਪਰ ਕੱਚ ਦੀ ਉੱਨ ਪਾ ਕੇ ਪਾਸਚਰ ਪਾਈਪੇਟਸ (5-8 ਮਿਲੀਮੀਟਰ) ਦੇ ਟਿਪਸ ਨੂੰ ਕੱਚ ਦੇ ਉੱਨ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਨਾਲ ਭਰੋ।ਨਮੂਨਿਆਂ ਨੂੰ 2 ਮਿੰਟ ਲਈ 3000 ਗ੍ਰਾਮ 'ਤੇ ਕੇਂਦਰਿਤ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਸੀ।ਕੋਈ ਵੀ ਅਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਰਹਿੰਦ-ਖੂੰਹਦ ਨੂੰ ਉਭਾਰਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ 100-150 μl ਤੱਕ ਸੁਕਾਓ।ਲਗਭਗ 1 μl ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ 80 ° C ਦੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਤਾਪਮਾਨ ਅਤੇ 2.0 ਮਿੰਟ (ਸਾਰਣੀ 2) ਦੇ ਸ਼ੁਰੂਆਤੀ ਸਮੇਂ 'ਤੇ GC-MS ਵਿੱਚ ਟੀਕਾ ਲਗਾਇਆ ਗਿਆ ਸੀ।