សូមអរគុណសម្រាប់ការទស្សនា Nature.com ។កំណែកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលអ្នកកំពុងប្រើមានកម្រិតគាំទ្រ CSS ។សម្រាប់បទពិសោធន៍ដ៏ល្អបំផុត យើងសូមណែនាំឱ្យអ្នកប្រើកម្មវិធីរុករកតាមអ៊ីនធឺណិតដែលបានអាប់ដេត (ឬបិទមុខងារភាពឆបគ្នានៅក្នុង Internet Explorer)។ក្នុងពេលនេះ ដើម្បីធានាបាននូវការគាំទ្របន្ត យើងនឹងបង្ហាញគេហទំព័រដោយគ្មានរចនាប័ទ្ម និង JavaScript។
មានតម្រូវការសម្រាប់ប្រព័ន្ធ vitro ដែលអាចទុកចិត្តបានដែលអាចបង្កើតឡើងវិញនូវបរិយាកាសសរីរវិទ្យានៃបេះដូងសម្រាប់ការធ្វើតេស្តថ្នាំ។ភាពអាចរកបាននៅកម្រិតនៃប្រព័ន្ធវប្បធម៌ជាលិកាបេះដូងរបស់មនុស្សបាននាំឱ្យមានការបកស្រាយមិនត្រឹមត្រូវនៃឥទ្ធិពលថ្នាំបេះដូង។នៅទីនេះ យើងបានបង្កើតគំរូវប្បធម៌ជាលិកាបេះដូង (CTCM) ដែលរំញោចផ្នែកបេះដូងដោយអេឡិចត្រូមេកានិច និងឆ្លងកាត់ការលាតសន្ធឹងផ្នែកសរីរវិទ្យាក្នុងដំណាក់កាលស៊ីស្តូលិក និងឌីស្តូលីកនៃវដ្តបេះដូង។បន្ទាប់ពីរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៃវប្បធម៌ វិធីសាស្រ្តនេះបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងមួយផ្នែកនូវលទ្ធភាពជោគជ័យនៃផ្នែកបេះដូង ប៉ុន្តែមិនបានរក្សាបានពេញលេញនូវភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធរបស់ពួកគេ។ដូច្នេះបន្ទាប់ពីការពិនិត្យម៉ូលេគុលតូច យើងបានរកឃើញថាការបន្ថែម 100 nM triiodothyronine (T3) និង 1 μM dexamethasone (Dex) ទៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុករបស់យើងបានរក្សារចនាសម្ព័ន្ធមីក្រូនៃផ្នែករយៈពេល 12 ថ្ងៃ។រួមផ្សំជាមួយនឹងការព្យាបាល T3/Dex ប្រព័ន្ធ CTCM បានរក្សាទម្រង់ប្រតិចារិក លទ្ធភាពជោគជ័យ សកម្មភាពមេតាបូលីស និងភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធក្នុងកម្រិតដូចគ្នាជាមួយនឹងជាលិកាបេះដូងស្រស់សម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃ។លើសពីនេះទៀត ការលាតសន្ធឹងលើសលប់នៃជាលិកាបេះដូងនៅក្នុងវប្បធម៌ធ្វើឱ្យមានសញ្ញានៃបេះដូង hypertrophic ដែលផ្តល់ភស្តុតាងសម្រាប់សមត្ថភាពរបស់ CTCM ដើម្បីធ្វើត្រាប់តាមលក្ខខណ្ឌ hypertrophic ដែលបណ្តាលមកពីការលាតសន្ធឹងនៃបេះដូង។សរុបសេចក្តីមក CTCM អាចយកគំរូតាមសរីរវិទ្យា និងរោគសរីរវិទ្យានៃបេះដូងក្នុងវប្បធម៌ក្នុងរយៈពេលយូរ ដែលអនុញ្ញាតឱ្យមានការពិនិត្យថ្នាំដែលអាចទុកចិត្តបាន។
មុននឹងធ្វើការស្រាវជ្រាវផ្នែកព្យាបាល ប្រព័ន្ធ vitro ដែលអាចជឿទុកចិត្តបានគឺត្រូវការជាចាំបាច់ ដែលអាចបង្កើតឡើងវិញនូវបរិយាកាសសរីរវិទ្យានៃបេះដូងមនុស្សបានត្រឹមត្រូវ។ប្រព័ន្ធបែបនេះគួរតែធ្វើត្រាប់តាមការផ្លាស់ប្តូរផ្នែកមេកានិច ចង្វាក់បេះដូង និងលក្ខណៈសម្បត្តិ electrophysiological ។គំរូសត្វត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅជាវេទិកាពិនិត្យសម្រាប់សរីរវិទ្យាបេះដូង ជាមួយនឹងភាពជឿជាក់មានកម្រិតក្នុងការឆ្លុះបញ្ចាំងពីឥទ្ធិពលនៃថ្នាំក្នុងបេះដូងមនុស្ស1,2។ទីបំផុត គំរូពិសោធន៍វប្បធម៌ជាលិកាបេះដូងល្អបំផុត (CTCM) គឺជាគំរូដែលមានលក្ខណៈរសើបខ្លាំង និងជាក់លាក់សម្រាប់អន្តរាគមន៍ព្យាបាល និងឱសថសាស្ត្រផ្សេងៗ ដោយបង្កើតឡើងវិញនូវសរីរវិទ្យា និងរោគសរីរវិទ្យានៃបេះដូងមនុស្សយ៉ាងត្រឹមត្រូវ 3.អវត្ដមាននៃប្រព័ន្ធបែបនេះកំណត់ការរកឃើញនៃការព្យាបាលថ្មីសម្រាប់ជំងឺខ្សោយបេះដូង 4,5 និងបាននាំឱ្យមានការពុលថ្នាំ cardiotoxic ជាហេតុផលចម្បងសម្រាប់ការចាកចេញពីទីផ្សារ6 ។
ក្នុងរយៈពេលមួយទសវត្សរ៍កន្លងមកនេះ ថ្នាំដែលមិនមែនជាសរសៃឈាមបេះដូងចំនួនប្រាំបីត្រូវបានដកចេញពីការប្រើប្រាស់គ្លីនិក ព្រោះវាបណ្តាលឱ្យមានការអូសបន្លាយចន្លោះ QT ដែលនាំឱ្យស្ទះសរសៃឈាមបេះដូង និងការស្លាប់ភ្លាមៗ7.ដូច្នេះហើយ វាមានតម្រូវការកើនឡើងសម្រាប់យុទ្ធសាស្រ្តពិនិត្យព្យាបាលមុនដែលអាចជឿទុកចិត្តបាន ដើម្បីវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាព និងជាតិពុលនៃសរសៃឈាមបេះដូង។ការប្រើប្រាស់ថ្មីៗនេះនៃកោសិកាដើម pluripotent ដែលបង្កឡើងដោយកោសិកា cardiomyocytes (hiPS-CM) ក្នុងការពិនិត្យថ្នាំ និងការធ្វើតេស្តជាតិពុលផ្តល់នូវដំណោះស្រាយមួយផ្នែកចំពោះបញ្ហានេះ។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយ ធម្មជាតិមិនទាន់ពេញវ័យនៃ hiPS-CMs និងកង្វះនៃភាពស្មុគស្មាញពហុកោសិកានៃជាលិកាបេះដូងគឺជាដែនកំណត់សំខាន់នៃវិធីសាស្ត្រនេះ។ការសិក្សាថ្មីៗបានបង្ហាញថាដែនកំណត់នេះអាចត្រូវបានយកឈ្នះដោយផ្នែកដោយប្រើ hiPS-CM ដំបូងដើម្បីបង្កើតអ៊ីដ្រូហ្សែលជាលិកាបេះដូងភ្លាមៗបន្ទាប់ពីការចាប់ផ្តើមនៃការកន្ត្រាក់ដោយឯកឯងនិងបង្កើនការរំញោចអគ្គិសនីបន្តិចម្តង ៗ តាមពេលវេលា។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ microtissues hiPS-CM ទាំងនេះខ្វះលក្ខណៈសម្បត្តិ electrophysiological និង contractile នៃ myocardium មនុស្សពេញវ័យ។លើសពីនេះ ជាលិកាបេះដូងរបស់មនុស្សមានរចនាសម្ព័ន្ធស្មុគ្រស្មាញជាងមុន ដោយមានល្បាយចម្រុះនៃប្រភេទកោសិកាផ្សេងៗគ្នា រួមទាំងកោសិកា endothelial ណឺរ៉ូន និង stromal fibroblasts ដែលភ្ជាប់គ្នាទៅវិញទៅមកដោយសំណុំជាក់លាក់នៃប្រូតេអ៊ីនម៉ាទ្រីស extracellular ។ភាពខុសប្លែកគ្នានៃចំនួនប្រជាជនមិនមែន cardiomyocyte 11,12,13 នៅក្នុងបេះដូងថនិកសត្វពេញវ័យគឺជាឧបសគ្គចម្បងក្នុងការធ្វើគំរូជាលិកាបេះដូងដោយប្រើប្រភេទកោសិកានីមួយៗ។ដែនកំណត់សំខាន់ៗទាំងនេះសង្កត់ធ្ងន់លើសារៈសំខាន់នៃការបង្កើតវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការដាំដុះជាលិកា myocardial ដដែលក្រោមលក្ខខណ្ឌសរីរវិទ្យានិងរោគសាស្ត្រ។
ផ្នែកស្តើង (300 μm) នៃបេះដូងមនុស្សបានបង្ហាញឱ្យឃើញថាជាគំរូដ៏ជោគជ័យនៃ myocardium របស់មនុស្សនៅដដែល។វិធីសាស្រ្តនេះផ្តល់នូវការចូលទៅកាន់ប្រព័ន្ធពហុកោសិកា 3D ពេញលេញស្រដៀងទៅនឹងជាលិកាបេះដូងរបស់មនុស្ស។ទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយ រហូតដល់ឆ្នាំ 2019 ការប្រើប្រាស់ផ្នែកបេះដូងដែលមានវប្បធម៌ត្រូវបានកំណត់ដោយការរស់រានមានជីវិតនៃវប្បធម៌រយៈពេលខ្លី (24 ម៉ោង)។នេះគឺដោយសារតែកត្តាមួយចំនួន រួមទាំងការខ្វះខាតផ្នែករាងកាយ-មេកានិច ចំណុចប្រទាក់រាវនៃខ្យល់ និងការប្រើប្រាស់ប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយសាមញ្ញដែលមិនគាំទ្រតម្រូវការនៃជាលិកាបេះដូង។ក្នុងឆ្នាំ 2019 ក្រុមស្រាវជ្រាវជាច្រើនបានបង្ហាញថាការបញ្ចូលកត្តាមេកានិចទៅក្នុងប្រព័ន្ធវប្បធម៌ជាលិកាបេះដូងអាចពន្យារអាយុជីវិត ធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវការបញ្ចេញមតិបេះដូង និងធ្វើត្រាប់តាមរោគសាស្ត្របេះដូង។ការសិក្សាឆើតឆាយពីរ 17 និង 18 បង្ហាញថាការផ្ទុកមេកានិច uniaxial មានឥទ្ធិពលវិជ្ជមានទៅលើ phenotype បេះដូងអំឡុងពេលវប្បធម៌។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការសិក្សាទាំងនេះមិនបានប្រើការផ្ទុករូបវិទ្យា-មេកានិចបីវិមាត្រថាមវន្តនៃវដ្តបេះដូងនោះទេ ដោយសារផ្នែកបេះដូងត្រូវបានផ្ទុកដោយកម្លាំង tensile isometric 17 ឬ linear auxotonic loading 18 ។វិធីសាស្រ្តនៃការលាតសន្ធឹងជាលិកាទាំងនេះបានបណ្តាលឱ្យមានការគៀបសង្កត់នៃហ្សែនបេះដូងជាច្រើន ឬការកើនឡើងនៃហ្សែនដែលត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ជាមួយនឹងការឆ្លើយតបនឹងការលាតសន្ធឹងមិនធម្មតា។គួរកត់សម្គាល់ថា Pitoulis et al ។19 បានបង្កើតការងូតទឹកវប្បធម៌ស្លាយបេះដូងថាមវន្តសម្រាប់ការកសាងវដ្តបេះដូងឡើងវិញដោយប្រើមតិត្រឡប់របស់ឧបករណ៍បំប្លែងកម្លាំង និងជំរុញភាពតានតឹង។ទោះបីជាប្រព័ន្ធនេះអនុញ្ញាតឱ្យមានភាពត្រឹមត្រូវជាងមុននៅក្នុងគំរូនៃវដ្តបេះដូងនៅក្នុង vitro ក៏ដោយ ភាពស្មុគស្មាញ និងកម្រិតទាបនៃវិធីសាស្ត្រកំណត់ការអនុវត្តប្រព័ន្ធនេះ។ថ្មីៗនេះ មន្ទីរពិសោធន៍របស់យើងបានបង្កើតប្រព័ន្ធវប្បធម៌សាមញ្ញមួយ ដោយប្រើការភ្ញោចអគ្គិសនី និងឧបករណ៍ផ្ទុកដែលប្រសើរឡើង ដើម្បីរក្សាលទ្ធភាពជោគជ័យនៃផ្នែកនៃ porcine និងជាលិកាបេះដូងរបស់មនុស្សរហូតដល់ 6 ថ្ងៃ 20,21 ។
នៅក្នុងសាត្រាស្លឹករឹតបច្ចុប្បន្ន យើងពណ៌នាអំពីគំរូវប្បធម៌ជាលិកាបេះដូង (CTCM) ដោយប្រើផ្នែកនៃបេះដូង porcine ដែលរួមបញ្ចូលសញ្ញាកំប្លែងដើម្បីរំលឹកឡើងវិញនូវសរីរវិទ្យាបេះដូងបីវិមាត្រ និងការរីករាលដាលនៃរោគសាស្ត្រអំឡុងពេលវដ្តបេះដូង។CTCM នេះអាចបង្កើនភាពត្រឹមត្រូវនៃការទស្សន៍ទាយថ្នាំមុនគ្លីនិកដល់កម្រិតដែលមិនធ្លាប់មានពីមុនមក ដោយផ្តល់នូវប្រព័ន្ធបេះដូងពាក់កណ្តាលឆ្លងកាត់ប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព ដែលធ្វើត្រាប់តាមសរីរវិទ្យា/រោគសរីរវិទ្យានៃបេះដូងថនិកសត្វសម្រាប់ការធ្វើតេស្តថ្នាំមុនគ្លីនិក។
សញ្ញាមេកានិច Hemodynamic ដើរតួយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការរក្សាមុខងារ cardiomyocyte នៅក្នុង vitro 22,23,24 ។នៅក្នុងសាត្រាស្លឹករឹតបច្ចុប្បន្ន យើងបានបង្កើត CTCM (រូបភាពទី 1a) ដែលអាចធ្វើត្រាប់តាមបរិយាកាសបេះដូងមនុស្សពេញវ័យ ដោយជំរុញទាំងការរំញោចអគ្គិសនី និងមេកានិចនៅប្រេកង់សរីរវិទ្យា (1.2 Hz, 72 ដងក្នុងមួយនាទី)។ដើម្បីជៀសវាងការលាតសន្ធឹងជាលិកាច្រើនពេកក្នុងអំឡុងពេល diastole ឧបករណ៍បោះពុម្ព 3D ត្រូវបានប្រើដើម្បីបង្កើនទំហំជាលិកា 25% (រូបភាព 1b) ។ល្បឿនអគ្គិសនីដែលបង្កឡើងដោយប្រព័ន្ធ C-PACE ត្រូវបានកំណត់ពេលដើម្បីចាប់ផ្តើម 100 ms មុនពេល systole ដោយប្រើប្រព័ន្ធទទួលទិន្នន័យដើម្បីបង្កើតវដ្តបេះដូងឡើងវិញយ៉ាងពេញលេញ។ប្រព័ន្ធវប្បធម៌ជាលិកាប្រើឧបករណ៍រំញោចខ្យល់ដែលអាចសរសេរកម្មវិធីបាន (LB Engineering, Germany) ដើម្បីពង្រីកភ្នាសស៊ីលីកុនដែលអាចបត់បែនបានតាមរង្វង់ ដើម្បីបង្កឱ្យមានការពង្រីកផ្នែកបេះដូងនៅក្នុងបន្ទប់ខាងលើ។ប្រព័ន្ធនេះត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងខ្សែខ្យល់ខាងក្រៅតាមរយៈឧបករណ៍ប្តូរសម្ពាធដែលធ្វើឱ្យវាអាចលៃតម្រូវសម្ពាធបានត្រឹមត្រូវ (± 1 mmHg) និងពេលវេលា (± 1 ms) (រូបភាព 1c) ។
a ភ្ជាប់ផ្នែកជាលិកាទៅនឹងក្រវ៉ាត់ជំនួយ 7 មីលីម៉ែត្រ ដែលបង្ហាញជាពណ៌ខៀវ នៅខាងក្នុងបន្ទប់វប្បធម៌របស់ឧបករណ៍។អង្គជំនុំជម្រះវប្បធម៌ត្រូវបានបំបែកចេញពីបន្ទប់ខ្យល់ដោយភ្នាសស៊ីលីកុនដែលអាចបត់បែនបានស្តើង។ដាក់ gasket រវាងបន្ទប់នីមួយៗដើម្បីការពារការលេចធ្លាយ។គម្របឧបករណ៍មានអេឡិចត្រូតក្រាហ្វីតដែលផ្តល់ការរំញោចអគ្គិសនី។b តំណាងគ្រោងការណ៍នៃឧបករណ៍ជាលិកាធំ ចិញ្ចៀនណែនាំ និងចិញ្ចៀនជំនួយ។ផ្នែកជាលិកា (ពណ៌ត្នោត) ត្រូវបានដាក់នៅលើឧបករណ៍ដែលមានទំហំធំជាមួយនឹងចិញ្ចៀនណែនាំដែលដាក់នៅក្នុងចង្អូរនៅគែមខាងក្រៅនៃឧបករណ៍។ដោយប្រើមគ្គុទ្ទេសក៍ សូមដាក់ក្រវ៉ាត់ជំនួយដោយប្រុងប្រយ័ត្នដែលស្រោបដោយសារធាតុស្អិត acrylic លើផ្នែកនៃជាលិកាបេះដូង។c ក្រាហ្វបង្ហាញពីពេលវេលានៃការភ្ញោចអគ្គិសនីជាមុខងារនៃសម្ពាធបន្ទប់ខ្យល់ដែលគ្រប់គ្រងដោយឧបករណ៍បំប្លែងខ្យល់តាមកម្មវិធី (PPD)។ឧបករណ៍ទទួលទិន្នន័យត្រូវបានប្រើដើម្បីធ្វើសមកាលកម្មរំញោចអគ្គិសនីដោយប្រើឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាសម្ពាធ។នៅពេលដែលសម្ពាធនៅក្នុងអង្គជំនុំជម្រះវប្បធម៌ឈានដល់កម្រិតកំណត់ សញ្ញាជីពចរត្រូវបានបញ្ជូនទៅ C-PACE-EM ដើម្បីជំរុញការរំញោចអគ្គិសនី។d រូបភាពនៃ CTCMs ចំនួនបួនដែលដាក់នៅលើធ្នើរ incubator ។ឧបករណ៍ចំនួនបួនត្រូវបានភ្ជាប់ទៅ PPD មួយតាមរយៈសៀគ្វី pneumatic ហើយឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាសម្ពាធត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុងសន្ទះ hemostatic ដើម្បីត្រួតពិនិត្យសម្ពាធនៅក្នុងសៀគ្វី pneumatic ។ឧបករណ៍នីមួយៗមានផ្នែកជាលិកាចំនួនប្រាំមួយ។
ដោយប្រើឧបករណ៍បញ្ចេញខ្យល់តែមួយ យើងអាចគ្រប់គ្រងឧបករណ៍ CTCM ចំនួន 4 ដែលឧបករណ៍នីមួយៗអាចផ្ទុកបាន 6 ផ្នែកជាលិកា (រូបភាពទី 1 ឃ) ។នៅក្នុង CTCM សម្ពាធខ្យល់នៅក្នុងបន្ទប់ខ្យល់ត្រូវបានបំប្លែងទៅជាសម្ពាធសមកាលកម្មនៅក្នុងបន្ទប់អង្គធាតុរាវ ហើយជំរុញឱ្យមានការពង្រីកសរីរវិទ្យានៃដុំបេះដូង (រូបភាពទី 2 ក និងភាពយន្តបន្ថែម 1) ។ការវាយតម្លៃនៃជាលិកាលាតសន្ធឹងនៅ 80 mm Hg ។សិល្បៈ។បានបង្ហាញពីការលាតសន្ធឹងនៃផ្នែកជាលិកាដោយ 25% (រូបភាព 2b) ។ការលាតសន្ធឹងភាគរយនេះត្រូវបានគេបង្ហាញថាត្រូវគ្នាទៅនឹងប្រវែង sarcomere សរីរវិទ្យានៃ 2.2-2.3 µm សម្រាប់ភាពកន្ត្រាក់នៃផ្នែកបេះដូងធម្មតា 17,19,25 ។ចលនារបស់ជាលិកាត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើការកំណត់កាមេរ៉ាផ្ទាល់ខ្លួន (រូបភាពបន្ថែមទី 1)។ទំហំ និងល្បឿននៃចលនាជាលិកា (រូបភាព 2c, d) ត្រូវគ្នាទៅនឹងការលាតសន្ធឹងអំឡុងពេលវដ្តបេះដូង និងពេលវេលាអំឡុងពេល systole និង diastole (រូបភាព 2b) ។ការលាតសន្ធឹង និងល្បឿននៃជាលិកាបេះដូងកំឡុងពេលកន្ត្រាក់ និងការសំរាកលំហែនៅតែថេរសម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃក្នុងវប្បធម៌ (រូបភាព 2f) ។ដើម្បីវាយតម្លៃឥទ្ធិពលនៃការរំញោចអគ្គិសនីលើការចុះកិច្ចសន្យាអំឡុងពេលវប្បធម៌ យើងបានបង្កើតវិធីសាស្រ្តសម្រាប់កំណត់ការខូចទ្រង់ទ្រាយសកម្មដោយប្រើក្បួនដោះស្រាយការដាក់ស្រមោល (រូបភាពបន្ថែម 2a, ខ) ហើយអាចបែងចែករវាងការខូចទ្រង់ទ្រាយដោយមាន និងគ្មានការរំញោចអគ្គិសនី។ផ្នែកដូចគ្នានៃបេះដូង (រូបភាព 2f) ។នៅក្នុងតំបន់ដែលអាចចល័តបាននៃការកាត់ (R6-9) វ៉ុលកំឡុងពេលរំញោចអគ្គិសនីគឺខ្ពស់ជាង 20% បើគ្មានការរំញោចអគ្គិសនីដែលបង្ហាញពីការរួមចំណែកនៃការរំញោចអគ្គិសនីទៅនឹងមុខងារ contractile ។
ដានតំណាងនៃសម្ពាធបន្ទប់ខ្យល់ សម្ពាធអង្គធាតុរាវ និងការវាស់វែងចលនាជាលិកាបញ្ជាក់ថាសម្ពាធអង្គជំនុំជម្រះផ្លាស់ប្តូរសម្ពាធអង្គធាតុរាវ ដែលបណ្តាលឱ្យមានចលនាដែលត្រូវគ្នានៃបំណែកជាលិកា។b ដានតំណាងនៃភាគរយ stretch (ពណ៌ខៀវ) នៃផ្នែកជាលិកាដែលត្រូវគ្នាទៅនឹងភាគរយ stretch (ពណ៌ទឹកក្រូច) ។c ចលនាវាស់នៃដុំបេះដូងគឺស្របនឹងល្បឿនវាស់នៃចលនា។(ឃ) គន្លងតំណាងនៃចលនារង្វិល (បន្ទាត់ពណ៌ខៀវ) និងល្បឿន (បន្ទាត់ចំនុចពណ៌ទឹកក្រូច) នៅក្នុងផ្នែកមួយនៃបេះដូង។e បរិមាណនៃពេលវេលាវដ្ត (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ពេលវេលាកន្ត្រាក់ (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម) ពេលវេលាសម្រាក (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ចលនាជាលិកា (n = 25) ។ចំណិត)/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ល្បឿនស៊ីស្តូលីកកំពូល (n = 24(D0) 25(D12) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) និងអត្រានៃការសម្រាកខ្ពស់បំផុត (n=24(D0) 25(D12) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា)។ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សដែលមានកន្ទុយពីរមិនបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាខ្លាំងនៅក្នុងប៉ារ៉ាម៉ែត្រណាមួយឡើយ។f ការវិភាគសំពាធតំណាងដាននៃផ្នែកជាលិកាដែលមាន (ក្រហម) និងដោយគ្មាន (ខៀវ) រំញោចអគ្គិសនី តំបន់ដប់នៃផ្នែកជាលិកាពីផ្នែកដូចគ្នា។បន្ទះខាងក្រោមបង្ហាញពីបរិមាណនៃភាពខុសគ្នាភាគរយនៃសំពាធនៅក្នុងផ្នែកជាលិកាដោយមាន និងគ្មានការរំញោចអគ្គិសនីនៅក្នុងតំបន់ដប់ពីផ្នែកផ្សេងៗគ្នា។ (n = 8 ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្តសិស្សកន្ទុយពីរត្រូវបានអនុវត្ត; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05) ។ (n = 8 ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្តសិស្សកន្ទុយពីរត្រូវបានអនុវត្ត; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05) ។ (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; ****p<0,0001, **p<0,01,*5). (n = 8 ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សកន្ទុយពីរ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05)។ (n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验； ****p < 0.0001, ** p < 0.01, * p < 0.05) ។ (n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验； ****p < 0.0001, ** p < 0.01, * p < 0.05) ។ (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05)។ (n = 8 ផ្នែក/ក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សកន្ទុយពីរ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05)។របារកំហុសតំណាងឱ្យគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារ។
នៅក្នុងប្រព័ន្ធវប្បធម៌ស្ទីមបេះដូងជីវមាត្រឋិតិវន្តពីមុនរបស់យើង [20, 21] យើងបានរក្សាលទ្ធភាពជោគជ័យ មុខងារ និងភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃចំណិតបេះដូងសម្រាប់រយៈពេល 6 ថ្ងៃដោយអនុវត្តការរំញោចអគ្គិសនី និងបង្កើនប្រសិទ្ធភាពសមាសភាពមធ្យម។ទោះយ៉ាងណាក៏ដោយបន្ទាប់ពីរយៈពេល 10 ថ្ងៃតួលេខទាំងនេះបានធ្លាក់ចុះយ៉ាងខ្លាំង។យើងនឹងយោងទៅលើផ្នែកដែលត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងប្រព័ន្ធវប្បធម៌ជីវមាត្រឋិតិវន្តពីមុនរបស់យើង 20, 21 លក្ខខណ្ឌត្រួតពិនិត្យ (Ctrl) ហើយយើងនឹងប្រើឧបករណ៍ផ្ទុកដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរពីមុនរបស់យើងជាលក្ខខណ្ឌ MC និងវប្បធម៌ក្រោមការរំញោចមេកានិច និងអគ្គិសនីក្នុងពេលដំណាលគ្នា (CTCM) ។ហៅទីមួយ យើងបានកំណត់ថាការភ្ញោចដោយមេកានិក ដោយមិនមានការភ្ញោចអគ្គិសនីគឺមិនគ្រប់គ្រាន់ដើម្បីរក្សាបាននូវលទ្ធភាពជោគជ័យនៃជាលិកាសម្រាប់រយៈពេល 6 ថ្ងៃ (រូបភាពបន្ថែម 3a, ខ)។គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ ជាមួយនឹងការណែនាំនៃការរំញោចរូបវិទ្យា-មេកានិក និងអគ្គិសនីដោយប្រើ STCM លទ្ធភាពជោគជ័យនៃផ្នែកបេះដូងរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៅតែដដែលដូចនៅក្នុងផ្នែកបេះដូងស្រស់ក្រោមលក្ខខណ្ឌ MS ប៉ុន្តែមិនស្ថិតនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ Ctrl ដូចដែលបានបង្ហាញដោយការវិភាគ MTT (រូបភាព 1) ។៣ ក)នេះបង្ហាញថាការរំញោចមេកានិច និងការក្លែងធ្វើនៃវដ្តបេះដូងអាចរក្សាផ្នែកជាលិកាឱ្យដំណើរការបានពីរដងដូចដែលបានរាយការណ៍នៅក្នុងប្រព័ន្ធវប្បធម៌ឋិតិវន្តពីមុនរបស់យើង។ទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការវាយតម្លៃលើភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃផ្នែកជាលិកាដោយ immunolabeling នៃ cardiac troponin T និង connexin 43 បានបង្ហាញថា connexin 43 expression គឺខ្ពស់ជាងយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងជាលិកា MC នៅថ្ងៃទី 12 ជាងការគ្រប់គ្រងនៅថ្ងៃតែមួយ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ កន្សោម connexin 43 ឯកសណ្ឋាន និងការបង្កើត Z-disc មិនត្រូវបានរក្សាទុកពេញលេញទេ (រូបភាព 3b) ។យើងប្រើក្របខណ្ឌបញ្ញាសិប្បនិម្មិត (AI) ដើម្បីកំណត់បរិមាណសុចរិតភាពនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកា 26 ដែលជាបំពង់សិក្សាជ្រៅដែលផ្អែកលើរូបភាពដោយផ្អែកលើ troponin-T និង connexin staining43 ដើម្បីកំណត់បរិមាណដោយស្វ័យប្រវត្តិនូវភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធ និង fluorescence នៃចំណិតបេះដូងនៅក្នុងលក្ខខណ្ឌនៃកម្លាំងនៃការធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្ម។វិធីសាស្រ្តនេះប្រើបណ្តាញសរសៃប្រសាទ Convolutional (CNN) និងក្របខណ្ឌសិក្សាស៊ីជម្រៅ ដើម្បីកំណត់បរិមាណភាពជឿជាក់នៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃជាលិកាបេះដូងក្នុងលក្ខណៈស្វ័យប្រវត្តិ និងមិនលំអៀង ដូចដែលបានពិពណ៌នានៅក្នុងឯកសារយោង។26. ជាលិកា MC បានបង្ហាញភាពស្រដៀងគ្នានៃរចនាសម្ព័ន្ធទៅនឹងថ្ងៃទី 0 បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកគ្រប់គ្រងឋិតិវន្ត។លើសពីនេះ ស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson បានបង្ហាញពីភាគរយទាបជាងយ៉ាងខ្លាំងនៃជំងឺ fibrosis នៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ MS បើប្រៀបធៀបទៅនឹងលក្ខខណ្ឌត្រួតពិនិត្យនៅថ្ងៃទី 12 នៃវប្បធម៌ (រូបភាព 3c) ។ខណៈពេលដែល CTCM បានបង្កើនលទ្ធភាពជោគជ័យនៃផ្នែកជាលិកាបេះដូងនៅថ្ងៃទី 12 ដល់កម្រិតស្រដៀងនឹងជាលិកាបេះដូងស្រស់ វាមិនធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវភាពរឹងមាំនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃផ្នែកបេះដូងនោះទេ។
ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យរបស់ MTT នៃចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) ឬវប្បធម៌ចំណិតបេះដូងសម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃទាំងនៅក្នុងវប្បធម៌ឋិតិវន្ត (D12 Ctrl) ឬនៅក្នុង CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមពីវិធីមួយ NO #0 # ការធ្វើតេស្ត 10 # ជ្រូក។ ទៅ D0 និង **p < 0.01 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។ ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យរបស់ MTT នៃចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) ឬវប្បធម៌ចំណិតបេះដូងសម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃទាំងនៅក្នុងវប្បធម៌ឋិតិវន្ត (D12 Ctrl) ឬនៅក្នុង CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុម NO#0# ការធ្វើតេស្ត A ផ្សេងគ្នា។ បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង **p < 0.01 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញពីបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យនៃផ្នែកបេះដូងស្រស់ MTT (D0) ឬវប្បធម៌នៃផ្នែកបេះដូងសម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃនៅក្នុងវប្បធម៌ឋិតិវន្ត (D12 control) ឬ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 control)) ), 12 (D12 MC) ជ្រូក/ក្រុមមួយគឺខុសគ្នាពីការធ្វើតេស្តមួយ។####p < 0,0001 по сравнению с D0 និង **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl) ។ ####p < 0.0001 ធៀបនឹង D0 និង **p < 0.01 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។ a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切片焈切(1幇)天的MTT 活力的量化)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 縛#00比, ** p < 0.01) ។ a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脪窪片(D0) ， 1 MC ) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 相比，####p < 0.0001，与D12 Ctrl 相比，**p.)អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញពីបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យរបស់ MTT នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) ឬផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៅក្នុងវប្បធម៌ឋិតិវន្ត (ការគ្រប់គ្រង D12) ឬ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 control)) , 12 (D12 MC) ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកមួយផ្លូវ NOVA####p < 0,0001 по сравнению с D0, **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl) ។ ####p < 0.0001 ធៀបនឹង D0, **p < 0.01 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។b Troponin-T (ពណ៌បៃតង), connexin 43 (ក្រហម) និង DAPI (ពណ៌ខៀវ) នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងដែលដាច់ដោយឡែកថ្មីៗ (D0) ឬផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌឋិតិវន្ត (Ctrl) ឬលក្ខខណ្ឌ CTCM (MC) រយៈពេល 12 ថ្ងៃ) នៃរូបភាព immunofluorescence តំណាង (មាត្រដ្ឋានទទេ = 100 µm) ។ បរិមាណបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូង (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមនីមួយៗមកពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង ****p < 0.01201 ធៀបនឹង D0.0001) ។ បរិមាណបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូង (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមនីមួយៗមកពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង ****p < Ctrl) ។ Количественная оценка структурной целостности сердечной ткани искусственным интеллектом (n = 7 (D0)), Ctrl 2 (D0), 7 (D0) пп от разных свиней, проводится однофакторный тест ANOVA; ####p < 0,0001 по сравнению с D0 និង ****p < 0,0001). បរិមាណនៃភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃជាលិកាបេះដូងដោយបញ្ញាសិប្បនិមិត្ត (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 ទល់នឹង D0 និង ****p < Ctrl 1) ។人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមនីមួយៗនៃជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវ;####0D 支 < 10 *** .0001 与D12 Ctrl 相比).人工智能量化心脏组织结构完整性(n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមជ្រូកនីមួយៗ ការធ្វើតេស្ត ANOVA ផ្លូវមួយ;####0D 10 * 縸 <0.0*0 * .0001 与D12 Ctrl 相比). Искусственный интеллект для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (n = 7 Ctrl 2 MC (D0), группу каждой из разных свиней, односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001 ទល់នឹង D0 Для сравнения ****p < 0,0001 Ctrl) по 1нерния ។ បញ្ញាសិប្បនិមិត្ត ដើម្បីកំណត់បរិមាណភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃជាលិកាបេះដូង (n=7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ផ្នែក/ក្រុមនីមួយៗនៃជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវ; ####p<0.0001 ទល់នឹង .D0 សម្រាប់ការប្រៀបធៀប ****p < 10 ។ c រូបភាពតំណាង (ឆ្វេង) និងបរិមាណ (ស្តាំ) សម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (មាត្រដ្ឋានទទេ = 500 µm) (n = 10 slices/group នីមួយៗមកពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0. និង Ctrl) ។ c រូបភាពតំណាង (ឆ្វេង) និងបរិមាណ (ស្តាំ) សម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (មាត្រដ្ឋានទទេ = 500 µm) (n = 10 ចំណិត/ក្រុមនីមួយៗមកពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; #### p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង 10 ***) ។ c Репрезентативные изображения (слева) និង количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашенныхрорина а (масштаб без покрытия = 500 мкм) (n = 10 срезов/группу от разных свиней, выполняется одно#сторонний 0 VA #0 сторонний , 010000 нению с D0 និង ***p < 0.001 по сравнению с D12 Ctrl) ។ c រូបភាពតំណាង (ឆ្វេង) និងបរិមាណ (ស្តាំ) នៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (មាត្រដ្ឋាន uncoated = 500 µm) (n = 10 sections/group from different pigs, one-way ANOVA tested) #### p < 0 .0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 ។ c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸尺度= 500 μm，爇代表性图像）来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 相比，***p < 0.001 与D12 Ctrl 相比)។ C 用 masson 三色染料的心脏切片的代表性（左左）量化（右）裸尺度裸尺度尸尦 5 m³ （n=10个切片组每组来自不同猪，进行单向单向 Anova 测试；，###猪，进行单向单向 Anova 测试；，###猪< 0.0001 ***与 0.0001 *** D12 Ctrl 相比) ។ c Репрезентативные изображения (слева) និង количественный анализ (справа) срезов сердца, окрашенныроро т на (чистая шкала = 500 мкм) (n = 10 срезов/группа, каждый от другой свиньи, протестировано с помощонгью одрисоньк ализа ;### #p < 0,0001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl)។ c រូបភាពតំណាង (ឆ្វេង) និងបរិមាណ (ស្តាំ) នៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (ទទេ = 500 µm) (n = 10 ផ្នែក/ក្រុម ដែលនីមួយៗមកពីជ្រូកផ្សេងគ្នា សាកល្បងដោយការវិភាគមួយផ្លូវនៃការប្រែប្រួល ;### # p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0.របារកំហុសតំណាងឱ្យគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារ។
យើងបានសន្មត់ថាដោយការបន្ថែមម៉ូលេគុលតូចៗទៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុកវប្បធម៌ ភាពសុចរិតនៃ cardiomyocyte អាចត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើង ហើយការអភិវឌ្ឍសរសៃអំបោះត្រូវបានកាត់បន្ថយក្នុងអំឡុងពេលវប្បធម៌ CTCM ។ដូច្នេះហើយ យើងបានពិនិត្យរកម៉ូលេគុលតូចៗដោយប្រើវប្បធម៌គ្រប់គ្រងឋិតិវន្តរបស់យើង 20,21 ដោយសារកត្តាមួយចំនួនតូច។Dexamethasone (Dex), triiodothyronine (T3) និង SB431542 (SB) ត្រូវបានជ្រើសរើសសម្រាប់អេក្រង់នេះ។ម៉ូលេគុលតូចៗទាំងនេះពីមុនត្រូវបានប្រើប្រាស់នៅក្នុងវប្បធម៌ hiPSC-CM ដើម្បីជំរុញភាពចាស់ទុំនៃ cardiomyocytes ដោយបង្កើនប្រវែង sarcomere, T-tubules និងល្បឿន conduction។លើសពីនេះ ទាំង Dex (a glucocorticoid) និង SB ត្រូវបានគេដឹងថាអាចទប់ស្កាត់ការរលាក 29,30 ។ដូច្នេះហើយ យើងបានសាកល្បងថាតើការដាក់បញ្ចូលមួយ ឬការរួមបញ្ចូលគ្នានៃម៉ូលេគុលតូចៗទាំងនេះនឹងធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃផ្នែកបេះដូង។សម្រាប់ការពិនិត្យដំបូង កម្រិតថ្នាំនៃសមាសធាតុនីមួយៗត្រូវបានជ្រើសរើសដោយផ្អែកលើការប្រមូលផ្តុំដែលប្រើជាទូទៅនៅក្នុងគំរូវប្បធម៌កោសិកា (1 μM Dex27, 100 nM T327 និង 2.5 μM SB31) ។បន្ទាប់ពីរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៃវប្បធម៌ ការរួមបញ្ចូលគ្នានៃ T3 និង Dex បណ្តាលឱ្យមានភាពរឹងមាំនៃរចនាសម្ព័ន្ធ cardiomyocyte ដ៏ល្អប្រសើរ និងការកែទម្រង់សរសៃតិចតួចបំផុត (រូបភាពបន្ថែម 4 និង 5) ។លើសពីនេះ ការប្រើប្រាស់កំហាប់ T3 និង Dex ទ្វេដង ឬទ្វេដងនៃ T3 និង Dex បានបង្កើតផលអាក្រក់បើប្រៀបធៀបទៅនឹងកំហាប់ធម្មតា (រូបភាពបន្ថែម 6a, ខ) ។
បន្ទាប់ពីការពិនិត្យដំបូង យើងបានធ្វើការប្រៀបធៀបពីក្បាលទៅក្បាលនៃលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ចំនួន 4 (រូបភាពទី 4a): បញ្ជា(Ctrl)៖ ផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានពិពណ៌នានៅក្នុងវប្បធម៌ឋិតិវន្តដែលបានពិពណ៌នាពីមុនរបស់យើងដោយប្រើឧបករណ៍ផ្ទុកដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើររបស់យើង។20.21 TD: T3 និង Ctrl s បានបន្ថែម Dex នៅថ្ងៃពុធ;MC: ផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុង CTCM ដោយប្រើឧបករណ៍ផ្ទុកដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរពីមុនរបស់យើង;និង MT: CTCM ជាមួយ T3 និង Dex ត្រូវបានបន្ថែមទៅឧបករណ៍ផ្ទុក។បន្ទាប់ពីការដាំដុះរយៈពេល 12 ថ្ងៃ លទ្ធភាពជោគជ័យនៃជាលិកា MS និង MT នៅតែដូចគ្នានឹងជាលិកាស្រស់ដែលត្រូវបានវាយតម្លៃដោយ MTT assay (រូបភាព 4b) ។គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ការបន្ថែម T3 និង Dex ទៅនឹងវប្បធម៌ឆ្លងកាត់ (TD) មិនបាននាំមកនូវភាពប្រសើរឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់ទេបើប្រៀបធៀបទៅនឹងលក្ខខណ្ឌ Ctrl ដែលបង្ហាញពីតួនាទីសំខាន់នៃការរំញោចមេកានិចក្នុងការរក្សាលទ្ធភាពជោគជ័យនៃផ្នែកបេះដូង។
ដ្យាក្រាមរចនាពិសោធន៍ដែលពិពណ៌នាអំពីលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ចំនួនបួនដែលប្រើដើម្បីវាយតម្លៃផលប៉ះពាល់នៃការរំញោចមេកានិច និងការបន្ថែម T3/Dex នៅលើមធ្យមសម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃ។ b ក្រាហ្វរបារបង្ហាញបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យ 12 ថ្ងៃក្រោយវប្បធម៌ក្នុងលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (Ctrl, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MT), 12 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុម NO#0# ត្រូវបានអនុវត្តដោយវិធីផ្សេងគ្នា។ 01, ###p < 0.001 ធៀបនឹង D0 និង **p < 0.01 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។ b ក្រាហ្វរបារបង្ហាញបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យ 12 ថ្ងៃក្រោយវប្បធម៌ក្នុងលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (Ctrl, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MT), 12 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុម NO#0# ត្រូវបានអនុវត្តដោយវិធីផ្សេងគ្នា។ 01, ###p < 0.001 ធៀបនឹង D0 និង **p < 0.01 ធៀបនឹង D12 ctrl)។ b гистограмапоказываетветветветветветветветветветветвенуюжизнесососососособнособнособнособнособнособнособнособнособнособнособнособнособнособнособнособнособнособнособнососорездейпослекультивированияивсехсох4утивсевиях ទោះជាយ៉ាងណា, TD, MC & Mc Mt) посравениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвениюсосвенисосвенисердца (D0), 15 (D12 MC) срезозозов / грезов / гр утыыывинейроводитороннийений an an anний Anva; #### P <0000 ទំព័រ # 0001 посравниюс ) ។ b ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីបរិមាណនៃលទ្ធភាពជោគជ័យនៅ 12 ថ្ងៃក្រោយវប្បធម៌ក្នុងលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (control, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, និង D12 MT), 12 (D12 ឡើង MC ពីផ្នែកផ្សេងគ្នា។ # A-0) 0001, ###p < 0.001 ទល់នឹង D0 និង **p < 0.01 ដោយប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ b 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC和MT）与新鲜心脏切片(D0) (n = 18 (D0) 、 15 (D12，D1 MT) Ctrl 2、D同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；####p < 0.0001，###p < 0.001 与D0 相毸，.*刧 1*p <)b 4 12 (D12 MC) ខ. 8 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MT), от разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односторонний тест ANOVA; ###0#0понер, ###0#0, ###0#0 нию с D0, **p <0,01 по сравнению с контролем D12). b អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (ការគ្រប់គ្រង, TD, MC និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MT) ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា 12 (D12 MC) ផ្នែក/ក្រុម ការសាកល្បង ANOVA មួយផ្លូវមួយ<0.#0##0. ** p<0.01 ទល់នឹងការគ្រប់គ្រង D12) ។ c ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីបរិមាណនៃលំហូរជាតិស្ករ 12 ថ្ងៃក្រោយវប្បធម៌ក្នុងលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (Ctrl, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 6 slices/groups from different pigs, one-way ANOVA test is performed; ###p < 0.001, បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង Ctrl. <0) ។ c ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីបរិមាណនៃលំហូរជាតិស្ករ 12 ថ្ងៃក្រោយវប្បធម៌ក្នុងលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (Ctrl, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 6 slices/groups from different pigs, one-way ANOVA test is performed; ###p < 0.001, បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង Ctrl. <0) ។ c Гистограмма показывает количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивирования во 4 культивирования восле ания (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группоу от разнойх , всезов/группоу от разноный с виноный с виноный с виноный с виноный с винтроль контроль (контроль, контроль, контроль) ся тест ANOVA; ###p < 0,001 по сравнению с D0 និង ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl)។ c អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញពីបរិមាណនៃលំហូរជាតិស្ករក្នុងរយៈពេល 12 ថ្ងៃក្រោយការដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (control, TD, MC និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 6 ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត ; ###p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង Ctrl ***p 1) ។ c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) 相比，培养倏的12 培兏的顏= 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试；###p < 0.001，与D0 相比，***p < 0.001 与D12曯 ) C 条形图显示所有 4种条件（（ctrl、td、mc和 mt）新鲜心脏切片切矉切片君君天的通量定量（n=6片/组，来自猪，，，，，，，，，，猪猪单向执行ANOVA 测踯0 ， #0*** 猪猪； #0*** .001 与D12 Ctrl 相比). c Гистограмма, показывающая количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивиляния ирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группа, от рвсиниохныныноны, от равсиных проведены тесты ANOVA; ###p < 0,001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 (контроль) ។ c អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញពីបរិមាណនៃលំហូរជាតិស្ករនៅរយៈពេល 12 ថ្ងៃក្រោយវប្បធម៌សម្រាប់លក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (control, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) (n = 6 ផ្នែក/ក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ឯកតោភាគីត្រូវបានធ្វើតេស្ត ANOVA ត្រូវបានអនុវត្ត ###p < 0.0012c ធៀបនឹង D) ។d ការវិភាគសំពាធនៃបំណែកនៃស្រស់ (ពណ៌ខៀវ) ថ្ងៃទី 12 MC (ពណ៌បៃតង) និងថ្ងៃទី 12 MT (ក្រហម) ជាលិកានៅចំនុចផ្នែកជាលិកាចំនួនដប់ (n = 4 slices/group, one-way ANOVA test; មិនមានភាពខុសគ្នាខ្លាំងរវាងក្រុម)។e គម្រោង Volcano បង្ហាញហ្សែនដែលបង្ហាញដោយឌីផេរ៉ង់ស្យែលនៅក្នុងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌឋិតិវន្ត (Ctrl) ឬក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT (MT) រយៈពេល 10-12 ថ្ងៃ។f ផែនទីកំដៅនៃហ្សែន sarcomere សម្រាប់ផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌នីមួយៗ។របារកំហុសតំណាងឱ្យគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារ។
ការពឹងផ្អែកលើមេតាបូលីសលើការផ្លាស់ប្តូរពីការកត់សុីអាស៊ីតខ្លាញ់ទៅជា glycolysis គឺជាសញ្ញាសម្គាល់នៃការបែងចែក cardiomyocyte dedifferentiation ។cardiomyocytes មិនទាន់ពេញវ័យប្រើប្រាស់ជាចម្បងនូវជាតិស្ករសម្រាប់ការផលិត ATP និងមាន mitochondria hypoplastic ជាមួយនឹង cristae 5,32 មួយចំនួន។ការវិភាគការប្រើប្រាស់គ្លុយកូសបានបង្ហាញថានៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ MC និង MT ការប្រើប្រាស់គ្លុយកូសគឺស្រដៀងគ្នាទៅនឹងជាលិកាថ្ងៃ 0 (រូបភាពទី 4 គ) ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយសំណាក Ctrl បានបង្ហាញពីការកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងនៃការប្រើប្រាស់គ្លុយកូសបើប្រៀបធៀបទៅនឹងជាលិកាស្រស់។នេះបង្ហាញថាការបញ្ចូលគ្នានៃ CTCM និង T3/Dex បង្កើនលទ្ធភាពជោគជ័យនៃជាលិកា និងរក្សា phenotype មេតាបូលីសនៃផ្នែកបេះដូងដែលមានវប្បធម៌រយៈពេល 12 ថ្ងៃ។លើសពីនេះ ការវិភាគសំពាធបានបង្ហាញថាកម្រិតសំពាធនៅតែដដែលដូចក្នុងជាលិកាបេះដូងស្រស់សម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT និង MS (រូបភាពទី 4 ឃ)។
ដើម្បីវិភាគផលប៉ះពាល់ទាំងមូលនៃ CTCM និង T3/Dex លើទិដ្ឋភាពប្រតិចារិកសកលនៃជាលិការបេះដូង យើងបានអនុវត្ត RNAseq លើផ្នែកបេះដូងពីលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ផ្សេងគ្នាទាំងបួន (ទិន្នន័យបន្ថែម 1)។គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ផ្នែក MT បានបង្ហាញពីភាពស្រដៀងគ្នានៃប្រតិចារិកខ្ពស់ទៅនឹងជាលិកាបេះដូងស្រស់ ដោយមានតែ 16 ប៉ុណ្ណោះដែលបង្ហាញដោយឌីផេរ៉ង់ស្យែលក្នុងចំណោម 13,642 ហ្សែន។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ដូចដែលយើងបានបង្ហាញមុននេះ បន្ទះ Ctrl បង្ហាញ 1229 ហ្សែនដែលបង្ហាញដោយឌីផេរ៉ង់ស្យែលបន្ទាប់ពី 10-12 ថ្ងៃនៅក្នុងវប្បធម៌ (រូបភាព 4e) ។ទិន្នន័យទាំងនេះត្រូវបានបញ្ជាក់ដោយ qRT-PCR នៃហ្សែនបេះដូង និង fibroblast (រូបភាពបន្ថែម 7a-c)។គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ផ្នែក Ctrl បានបង្ហាញពីការថយចុះនៃហ្សែននៃវដ្តបេះដូង និងកោសិកា និងការធ្វើឱ្យសកម្មនៃកម្មវិធីហ្សែនរលាក។ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញថា ភាពខុសគ្នាដែលជាធម្មតាកើតឡើងបន្ទាប់ពីការដាំដុះរយៈពេលវែងត្រូវបានកាត់បន្ថយទាំងស្រុងនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT (រូបភាពបន្ថែម 8a, ខ)។ការសិក្សាដោយប្រុងប្រយ័ត្ននៃហ្សែន sarcomere បានបង្ហាញថាមានតែនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT គឺហ្សែនដែលអ៊ិនកូដ sarcomere (រូបភាព 4f) និងឆានែលអ៊ីយ៉ុង (រូបភាពបន្ថែម 9) ត្រូវបានបម្រុងទុក ការពារពួកវាពីការបង្ក្រាបក្រោមលក្ខខណ្ឌ Ctrl, TD និង MC ។ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញថា ជាមួយនឹងការរួមបញ្ចូលគ្នានៃការរំញោចមេកានិក និងកំប្លែង (T3/Dex) ប្រតិចារិកនៃដុំបេះដូងអាចនៅតែស្រដៀងនឹងដុំបេះដូងស្រស់ៗបន្ទាប់ពីរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៅក្នុងវប្បធម៌។
ការរកឃើញប្រតិចារិកទាំងនេះត្រូវបានគាំទ្រដោយការពិតដែលថាភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃ cardiomyocytes នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងត្រូវបានរក្សាទុកយ៉ាងល្អបំផុតក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT សម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃ ដូចដែលបានបង្ហាញដោយ connexin 43 នៅដដែល និងបានធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្ម (រូបភាព 5a) ។លើសពីនេះទៀត ដុំសាច់នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT ត្រូវបានកាត់បន្ថយយ៉ាងខ្លាំងបើប្រៀបធៀបទៅនឹង Ctrl និងស្រដៀងទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (រូបភាព 5b)។ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញថាការរួមបញ្ចូលគ្នានៃការរំញោចមេកានិក និងការព្យាបាល T3/Dex មានប្រសិទ្ធភាពរក្សារចនាសម្ព័ន្ធបេះដូងនៅក្នុងផ្នែកបេះដូងនៅក្នុងវប្បធម៌។
រូបភាព immunofluorescence តំណាងនៃ troponin-T (បៃតង) connexin 43 (ក្រហម) និង DAPI (ពណ៌ខៀវ) នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងដែលដាច់ថ្មីៗ (D0) ឬដាំដុះរយៈពេល 12 ថ្ងៃក្នុងលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ផ្នែកបេះដូងទាំងបួន (របារមាត្រដ្ឋាន = 100 µm) ។) បរិមាណបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូង (n = 7 (D0 និង D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC និង D12 MT) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 < បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0.0*0. បញ្ជា (Ctrl) ។ ការគណនាបរិមាណបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូង (n = 7 (D0 និង D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC និង D12 MT) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; #### p < 0.0001 < ធៀបនឹង D0.0*0. បញ្ជា (Ctrl) ។ Количественная оценка структурной целостности ткани сердца с помощью искусственного интеллекта D 1 2 D 1 MC (n = 7) и D12 MT) срезов/группу от разных свиней, проведен однофакторный тест ANOVA; #### p < 0,0001 по сравнинию, 0*0p*0 D ប្រើ сравнению ជាមួយ D12 Ctrl) ។ បរិមាណនៃភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃជាលិកាបេះដូងដោយប្រើបញ្ញាសិប្បនិម្មិត (n = 7 (D0 និង D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC និង D12 MT) ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវបានអនុវត្ត; #### p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង *0001 ធៀបនឹង D0 និង *010 *p.***对不同猪的心脏组织结构完整性(n = 7(D0 和D12 Ctrl)、5(D12 TD、D12 MC 和D12 MT)切片/组鿡化进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比).对不同猪的心脏结构完整性（n=7（d0和d12 ctrl）（5（d12 td、d12 mc 和 d12 mt）巙人菥）对不同猪的心脏行单向单向单向测试； ########## p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或 ****p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或 ****p < 0.0001 与縎បរិមាណនៃភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃជាលិកាបេះដូងដោយប្រើបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៅក្នុងជ្រូកផ្សេងៗគ្នា (n = 7 (D0 និង D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC និង D12 MT) ផ្នែក/ក្រុម) ជាមួយនឹងការធ្វើតេស្ត ANOVA ផ្លូវមួយ;#### p < 0,0001 по сравнению с D0 និង *p < 0,05 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl)។ #### p < 0.0001 ធៀបនឹង D0 និង *p < 0.05 ឬ ****p < 0.0001 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។ b រូបភាពតំណាង និងបរិមាណសម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (របារមាត្រដ្ឋាន = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, និង D12 MC), 9 (D12 MT) slices/group from different pigs, one-way test #0#1VA) p < 0.001 ឬ ****p < 0.0001 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។ b រូបភាពតំណាង និងបរិមាណសម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (របារមាត្រដ្ឋាន = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, និង D12 MC), 9 (D12 MT) slices/group from different pigs, one-way test #0#1VA) p < 0.001 ឬ ****p < 0.0001 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។ ខ. инейка = 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MC), 9 (D12 MT) срезов/группу от разных свиней, вы#полнятся A 0,0001 по сравнению с D0 និង ***p < 0,001 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl)។ b រូបភាពតំណាង និងបរិមាណនៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ trichrome របស់ Masson (របារមាត្រដ្ឋាន = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MC), 9 (D12 MT) ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា អនុវត្តវិធីមួយ ###0#0VA; .001 ឬ ****p < 0.0001 ទល់នឹង D12 Ctrl)។ ខ.自不同猪的9个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分析；####p < 0.0001 与D0 相渔 <済.0*0*p < 1.0001 与D0 相渔 <渔, 0.*0*1. Ctrl 相比) ។ b 用 masson 三色染料的心脏切片的代表性和量化（比例尺尺尺 = 500 µm) (d 1 1 0 μm) (d 1 0 μm)和 d12 mc) 来自不同的 9个 d12 mt 切片 切片 切片 切片 切片 切片爇片 切片 切片切片切片切片切片切片切片/组，进行单因素方差分析；####p< 0.0001*戯 0.***0.*0. 001 与D12 Ctrl 相比) ។ ខ. км) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD и D12 MC), 9 (D12 MT) срезов от разных свиней / группы, один- способ ANOVA; ####0 сораста <0 0,001 ឬ ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl)។ b រូបភាពតំណាង និងបរិមាណនៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយសារធាតុ trichrome របស់ Masson (របារមាត្រដ្ឋាន = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MC), 9 (D12 MT) ផ្នែកពីជ្រូក/ក្រុមផ្សេងៗគ្នា វិធីសាស្ត្រ ANOVA មួយ <#p.#0#p; #p.#*0. ***p < 0.0001 ធៀបនឹង D12 Ctrl)។របារកំហុសតំណាងឱ្យគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារ។
ជាចុងក្រោយ សមត្ថភាពរបស់ CTCM ក្នុងការធ្វើត្រាប់តាមជំងឺលើសឈាមបេះដូងត្រូវបានវាយតម្លៃដោយការកើនឡើងនៃជាលិកាបេះដូង។នៅក្នុង CTCM សម្ពាធបន្ទប់ខ្យល់កំពូលបានកើនឡើងពី 80 mmHg ដល់ 80 mmHg ។សិល្បៈ។(ការលាតសន្ធឹងធម្មតា) រហូតដល់ 140 mmHg សិល្បៈ។(រូបភាពទី 6 ក) ។នេះត្រូវគ្នាទៅនឹងការកើនឡើង 32% នៃការលាតសន្ធឹង (រូបភាព 6b) ដែលត្រូវបានបង្ហាញពីមុនថាជាភាគរយដែលត្រូវគ្នាដែលត្រូវការសម្រាប់ផ្នែកបេះដូងដើម្បីសម្រេចបានប្រវែង sarcomere ស្រដៀងនឹងអ្វីដែលឃើញនៅក្នុង hypertrophy ។ការលាតសន្ធឹង និងល្បឿននៃជាលិកាបេះដូងកំឡុងពេលកន្ត្រាក់ និងការសំរាកលំហែនៅតែថេរក្នុងអំឡុងពេលប្រាំមួយថ្ងៃនៃវប្បធម៌ (រូបភាព 6c) ។ជាលិកាបេះដូងពីលក្ខខណ្ឌ MT ត្រូវបានទទួលរងនូវការលាតសន្ធឹងធម្មតា (MT (Normal)) ឬស្ថានភាពហួសប្រមាណ (MT (OS)) សម្រាប់រយៈពេលប្រាំមួយថ្ងៃ។រួចហើយបន្ទាប់ពីរយៈពេលបួនថ្ងៃនៅក្នុងវប្បធម៍ សារធាតុ biomarker hypertrophic NT-ProBNP ត្រូវបានកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងក្នុងកម្រិតមធ្យមក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT (OS) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងលក្ខខណ្ឌ MT (ធម្មតា) (រូបភាព 7a) ។លើសពីនេះទៀតបន្ទាប់ពីរយៈពេលប្រាំមួយថ្ងៃនៃការដាំដុះទំហំកោសិកានៅក្នុង MT (OS) (រូបភាព 7b) បានកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងបើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកនៃបេះដូង MT (ធម្មតា) ។លើសពីនេះ ការផ្លាស់ប្តូរទីតាំងនុយក្លេអ៊ែរ NFATC4 ត្រូវបានកើនឡើងយ៉ាងខ្លាំងនៅក្នុងជាលិកាដែលលាតសន្ធឹង (រូបភាព 7c) ។លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញពីការវិវឌ្ឍន៍នៃការផ្លាស់ប្តូររោគសាស្ត្របន្ទាប់ពីជំងឺលើសសម្ពាធឈាម និងគាំទ្រគំនិតដែលឧបករណ៍ CTCM អាចត្រូវបានប្រើជាវេទិកាមួយដើម្បីសិក្សាពីសញ្ញានៃការឡើងសម្ពាធឈាមដែលបណ្ដាលមកពីការលាតសន្ធឹង។
ដានតំណាងនៃសម្ពាធបន្ទប់ខ្យល់ សម្ពាធអង្គធាតុរាវ និងការវាស់វែងចលនាជាលិកាបញ្ជាក់ថាសម្ពាធអង្គជំនុំជម្រះផ្លាស់ប្តូរសម្ពាធអង្គធាតុរាវ ដែលបណ្តាលឱ្យមានចលនាដែលត្រូវគ្នានៃបំណែកជាលិកា។b តំណាងភាគរយនៃការលាតសន្ធឹង និងខ្សែកោងអត្រាលាតសន្ធឹងសម្រាប់ផ្នែកជាលិកាដែលលាតសន្ធឹងធម្មតា (ពណ៌ទឹកក្រូច) និងហួសកម្រិត (ពណ៌ខៀវ) ។c ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីពេលវេលាវដ្ត (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ពេលវេលាកន្ត្រាក់ (n = 18-19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ពេលវេលាសម្រាក (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា)) ទំហំនៃចលនាជាលិកា (n = 14 ចំណិត/ក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) peak1/systolic ខុសគ្នា អត្រាបន្ធូរអារម្មណ៍ (n = 14 (D0), 15 (D6) ) ផ្នែក/ក្រុម) ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សដែលមានកន្ទុយពីរមិនមានភាពខុសប្លែកគ្នាខ្លាំងនៅក្នុងប៉ារ៉ាម៉ែត្រណាមួយទេ ដែលបង្ហាញថាប៉ារ៉ាម៉ែត្រទាំងនេះនៅតែថេរក្នុងអំឡុងពេល 6 ថ្ងៃនៃវប្បធម៌ដែលមានវ៉ុលលើស។របារកំហុសតំណាងឱ្យគម្លាតមធ្យម ± ស្តង់ដារ។
តារាងបរិមាណក្រាហ្វនៃកំហាប់ NT-ProBNP នៅក្នុងប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយវប្បធម៌ពីបំណែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT normal stretch (Norm) ឬ overstretching (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, និង D4 MTOS)) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការលាតសន្ធឹងតាមពីរផ្លូវ ** ANOVA ។ <** ត្រូវបានអនុវត្ត។ តារាងបរិមាណក្រាហ្វនៃកំហាប់ NT-ProBNP នៅក្នុងប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយវប្បធម៌ពីចំណិតបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT normal stretch (Norm) ឬ overstretching (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, និង D4 MTOS)) slices/group from different pigs, two-way is បើធៀបនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា។ 0** NO.អ៊ីស្តូក្រាមបរិមាណនៃកំហាប់ NT-ProBNP នៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុកវប្បធម៌ពីបំណែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃការលាតសន្ធឹង MT ធម្មតា (បទដ្ឋាន) ឬ overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm និង D4) ។ MTOS) ចំណិត / ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការវិភាគកត្តាពីរត្រូវបានអនុវត្ត។**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). ** p < 0.01 ធៀបនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា) ។ a 在MT 正常拉伸(Norm) 或过度拉伸(OS) 条件下培养的心脏切片培养基中NT-ProBNP 浓度的匢 (2nm) 、3 (D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS）来自不同猪的切片/组，进行双向方差分析；。**与正常拉伛，*与正常拉伛。 បរិមាណនៃកំហាប់ NT-ProBNP នៅក្នុងចំណិតបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT normal stretch (Norm) ឬ overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS) ពី 猪的切片/疄幑可; ធៀបនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា p <0.01)។អ៊ីស្តូក្រាម បរិមាណនៃការប្រមូលផ្តុំ NT-ProBNP នៅក្នុងចំណិតបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃការលាតសន្ធឹង MT ធម្មតា (បទដ្ឋាន) ឬ overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) និង D4 MTOS) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការវិភាគពីរផ្លូវនៃភាពប្រែប្រួល។**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). ** p < 0.01 ធៀបនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា) ។ b រូបភាពតំណាងសម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយ troponin-T និង WGA (ឆ្វេង) និងបរិមាណកោសិកា (ស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) កោសិកា/ក្រុមពី 10 បំណែកពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត t-tailed Student ពីរត្រូវបានអនុវត្តធៀបនឹង 10 ។ b រូបភាពតំណាងសម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយ troponin-T និង WGA (ឆ្វេង) និងបរិមាណកោសិកា (ស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) កោសិកា/ក្រុមពី 10 បំណែកផ្សេងគ្នាពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត t-tailed Student ពីរគឺត្រូវបានអនុវត្តធៀបនឹង 10 ។ **** ខ. клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) клеток/группу из 10 разных срезов от разных свиовохтрятря-t ий Стьюдента; ****p < 0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b រូបភាពតំណាងនៃផ្នែកបេះដូងប្រឡាក់ដោយសារធាតុ troponin-T និង AZP (ខាងឆ្វេង) និងបរិមាណកោសិកា (ស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) កោសិកា/ក្រុមពី 10 ផ្នែកពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្តពីរកន្ទុយរបស់សិស្សធៀបនឹង t-0***stra ។ 1 ត្រូវបានអនុវត្ត។ b 用肌钙蛋白-T 和WGA（左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代表性，窏量像（n = 330） 0 个不同切片的369(D6 MTNorm)细胞/组，两进行有尾学生t 检验；与正常拉伸相比，0**0. b រូបភាពតំណាងនៃចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយ calcarein-T និង WGA (ឆ្វេង) និងទំហំកោសិកា (ស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 ពី 10 slices (D6 MTNorm)) Cells/组，两方法有尾学0p生t ការធ្វើតេស្តធម្មតា ខ. (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 различных срезов от разных свиней Клетки/групки/групипа, двуськеронетронетронетеронетеронетеронет 0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b រូបភាពតំណាងនៃផ្នែកបេះដូងប្រឡាក់ដោយ troponin-T និង AZP (ឆ្វេង) និងបរិមាណនៃទំហំកោសិកា (ស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ពី 10 ផ្នែកផ្សេងគ្នាពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) កោសិកា/ក្រុម លក្ខណៈវិនិច្ឆ័យពីរកន្ទុយរបស់សិស្ស។****p <0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹងសំពាធធម្មតា)។ c រូបភាពតំណាងសម្រាប់ថ្ងៃទី 0 និងថ្ងៃទី 6 ចំណិតបេះដូង MTOS immunolabeled សម្រាប់ troponin-T និង NFATC4 និងបរិមាណនៃការផ្ទេរ NFATC4 ទៅស្នូលនៃ CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS)) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្តពីរកន្ទុយគឺ 0. *0-5 ។ c រូបភាពតំណាងសម្រាប់ថ្ងៃទី 0 និងថ្ងៃទី 6 បំណែកបេះដូង MTOS immunolabeled សម្រាប់ troponin-T និង NFATC4 និងបរិមាណនៃការផ្ទេរ NFATC4 ទៅស្នូលនៃ CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS)) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា , ការធ្វើតេស្តពីរកន្ទុយ។ 0. c Репрезентативные изображения для срезов сердца 0 និង 6 дней MTOS, иммуномеченых для тропонина-Тл и NFATC транслокации NFATC4 в ядра кавернозных клеток (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срезов/группу от разных свиней , вырйсолня ий Стьюдента; * p < 0,05) ។ c រូបភាពតំណាងសម្រាប់ផ្នែកបេះដូងនៅ 0 និង 6 ថ្ងៃ MTOS, immunolabeled សម្រាប់ troponin-T និង NFATC4 និងបរិមាណនៃការផ្លាស់ប្តូរទីតាំង NFATC4 នៅក្នុងស្នូលនៃកោសិកា cavernous (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS)) ចំណិត/ក្រុមពីសត្វជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) បានធ្វើការធ្វើតេស្តពីរកន្ទុយ។*p < 0.05) ។ c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4 免疫标记的第0 天和第6 天MTOS 心脏切片的代表怪的第6 天MTOS 心脏切片的代表怪祾像，易位至CM 细胞核的量化(n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) 切片/组, 进行双尾学生t 检验；*p < 0.05). c រូបភាពតំណាងនៃ calcanin-T និង NFATC4 immunolabeling 第0天和第6天MTOS ដុំបេះដូង និង NFATC4 ពី NFATC4 ផ្សេងគ្នា 易位至CM កោសិកា nucleus的quantity化 (n = 4 (D0), 弴珶錄珶 列 珶郄珶 弗 弗 匄珶 匄約珸尾学生et 电影；*p < 0.05)។ c Репрезентативные изображения срезов сердца MTOS на 0 និង 6 день для иммуномаркировки тропонином-Т и NFATCоt4 ранслокации NFATC4 в ядра CM от разных свиней (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срез/группа, два- хвостатый t-критерий). c រូបភាពតំណាងនៃចំណិតបេះដូង MTOS នៅថ្ងៃ 0 និង 6 សម្រាប់ troponin-T និង NFATC4 immunolabeling និងបរិមាណនៃការផ្លាស់ប្តូរទីតាំង NFATC4 នៅក្នុងស្នូលនៃ CM ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS)) slices/group, two-tailed t -criterion) សិស្ស។របារកំហុសតំណាងឱ្យ ± គម្លាតស្តង់ដារ។
ការស្រាវជ្រាវសរសៃឈាមបេះដូងបកប្រែតម្រូវឱ្យមានគំរូកោសិកាដែលបង្កើតឡើងវិញនូវបរិយាកាសបេះដូង។នៅក្នុងការសិក្សានេះ ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានបង្កើតឡើង និងកំណត់លក្ខណៈដែលអាចជំរុញផ្នែក ultrathin នៃបេះដូង។ប្រព័ន្ធ CTCM រួមបញ្ចូលទាំងការរំញោចអេឡិចត្រូមេកានិចដែលធ្វើសមកាលកម្មសរីរវិទ្យា និងការបង្កើនសារធាតុរាវ T3 និង Dex ។នៅពេលដែលផ្នែកបេះដូង porcine ត្រូវបានប៉ះពាល់នឹងកត្តាទាំងនេះ លទ្ធភាពជោគជ័យ ភាពរឹងមាំនៃរចនាសម្ព័ន្ធ សកម្មភាពមេតាបូលីស និងការបញ្ចេញមតិចម្លងនៅតែដដែលដូចនៅក្នុងជាលិកាបេះដូងស្រស់ បន្ទាប់ពីវប្បធម៌ 12 ថ្ងៃ។លើសពីនេះទៀត ការលាតសន្ធឹងលើសនៃជាលិកាបេះដូងអាចបណ្តាលឱ្យមានការកើនឡើងនៃបេះដូងដែលបណ្តាលមកពី hyperextension ។សរុបមក លទ្ធផលទាំងនេះគាំទ្រដល់តួនាទីសំខាន់នៃលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌សរីរវិទ្យាក្នុងការរក្សាទម្រង់បេះដូងធម្មតា និងផ្តល់វេទិកាសម្រាប់ការពិនិត្យថ្នាំ។
កត្តាជាច្រើនរួមចំណែកដល់ការបង្កើតបរិយាកាសដ៏ល្អប្រសើរសម្រាប់ដំណើរការ និងការរស់រាននៃ cardiomyocytes ។កត្តាជាក់ស្តែងបំផុតគឺទាក់ទងទៅនឹង (1) អន្តរកម្មរវាងកោសិកា (2) ការរំញោចដោយមេកានិច (3) កត្តាកំប្លែង និង (4) ស្រទាប់ខាងក្រោមមេតាបូលីស។អន្តរកម្មនៃកោសិកាសរីរវិទ្យា ទាមទារបណ្តាញបីវិមាត្រស្មុគស្មាញនៃប្រភេទកោសិកាច្រើន ដែលគាំទ្រដោយម៉ាទ្រីសក្រៅកោសិកា។អន្តរកម្មកោសិកាស្មុគ្រស្មាញបែបនេះគឺពិបាកក្នុងការបង្កើតឡើងវិញនៅក្នុង vitro ដោយសហវប្បធម៌នៃប្រភេទកោសិកានីមួយៗ ប៉ុន្តែអាចសម្រេចបានយ៉ាងងាយស្រួលដោយប្រើលក្ខណៈសរីរាង្គនៃផ្នែកបេះដូង។
ការលាតសន្ធឹងមេកានិច និងការរំញោចអគ្គិសនីនៃ cardiomyocytes គឺមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការថែរក្សា phenotype បេះដូង 33,34,35 ។ខណៈពេលដែលការរំញោចមេកានិកត្រូវបានប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយសម្រាប់លក្ខខណ្ឌ hiPSC-CM និងភាពចាស់ទុំ ការសិក្សាដ៏ឆើតឆាយជាច្រើននាពេលថ្មីៗនេះបានព្យាយាមរំញោចមេកានិចនៃដុំបេះដូងនៅក្នុងវប្បធម៌ដោយប្រើការផ្ទុក uniaxial ។ការសិក្សាទាំងនេះបង្ហាញថាការផ្ទុកមេកានិច uniaxial 2D មានឥទ្ធិពលវិជ្ជមានទៅលើ phenotype នៃបេះដូងអំឡុងពេលវប្បធម៌។នៅក្នុងការសិក្សាទាំងនេះ ផ្នែកនៃបេះដូងត្រូវបានផ្ទុកដោយកម្លាំង tensile isometric 17, linear auxotonic loading18 ឬវដ្តនៃបេះដូងត្រូវបានបង្កើតឡើងវិញដោយប្រើមតិត្រឡប់របស់ transducer force និង tension drives ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ វិធីសាស្រ្តទាំងនេះប្រើការលាតសន្ធឹងជាលិកា uniaxial ដោយគ្មានការធ្វើឱ្យប្រសើរពីបរិស្ថាន ដែលបណ្តាលឱ្យមានការបង្ក្រាបហ្សែនបេះដូងជាច្រើន ឬការបញ្ចេញហ្សែនច្រើនពេកដែលទាក់ទងនឹងការឆ្លើយតបនឹងការលាតសន្ធឹងមិនធម្មតា។CTCM ដែលបានពិពណ៌នានៅទីនេះផ្តល់នូវការរំញោចអេឡិចត្រូម៉ាញេទិក 3D ដែលធ្វើត្រាប់តាមវដ្តនៃបេះដូងធម្មជាតិទាក់ទងនឹងពេលវេលាវដ្ត និងការលាតសន្ធឹងខាងសរីរវិទ្យា (25% stretch, 40% systole, 60% diastole និង 72 ដងក្នុងមួយនាទី) ។ទោះបីជាការភ្ញោចមេកានិកបីវិមាត្រនេះតែមួយមុខមិនគ្រប់គ្រាន់ដើម្បីរក្សាភាពសុចរិតនៃជាលិកាក៏ដោយ ការរួមបញ្ចូលគ្នានៃការរំញោចបែបកំប្លែង និងមេកានិចដោយប្រើ T3/Dex គឺត្រូវបានទាមទារដើម្បីរក្សាឱ្យបានគ្រប់គ្រាន់នូវលទ្ធភាពជោគជ័យ មុខងារ និងភាពសុចរិតនៃជាលិកា។
កត្តាកំប្លែងដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការកែប្រែទម្រង់បេះដូងមនុស្សពេញវ័យ។នេះត្រូវបានគូសបញ្ជាក់នៅក្នុងការសិក្សា HiPS-CM ដែល T3 និង Dex ត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុងប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយវប្បធម៌ ដើម្បីពន្លឿនការលូតលាស់កោសិកា។T3 អាចមានឥទ្ធិពលលើការដឹកជញ្ជូនអាស៊ីតអាមីណូ ជាតិស្ករ និងកាល់ស្យូមឆ្លងកាត់ភ្នាសកោសិកា 36 ។លើសពីនេះទៀត T3 លើកកម្ពស់ការបញ្ចេញមតិ MHC-α និងការគ្រប់គ្រងការថយចុះ MHC-β ដែលលើកកម្ពស់ការបង្កើត myofibrils រមួលយ៉ាងលឿននៅក្នុង cardiomyocytes ចាស់ទុំបើប្រៀបធៀបទៅនឹង myofibrils រមួលយឺតនៅក្នុង CM ទារក។កង្វះ T3 ចំពោះអ្នកជំងឺ hypothyroid បណ្តាលឱ្យបាត់បង់នូវ myofibrillar bands និងកាត់បន្ថយអត្រានៃការវិវត្តនៃសម្លេង 37 ។Dex ធ្វើសកម្មភាពលើអ្នកទទួល glucocorticoid ហើយត្រូវបានបង្ហាញដើម្បីបង្កើនការកន្ត្រាក់ myocardial នៅក្នុងបេះដូងដែលដាច់ឆ្ងាយ។38 ការកែលម្អនេះត្រូវបានគេគិតថាទាក់ទងទៅនឹងឥទ្ធិពលលើការបញ្ចូលកាល់ស្យូមដែលជំរុញដោយប្រាក់បញ្ញើ (SOCE) 39,40 ។លើសពីនេះទៀត Dex ភ្ជាប់ទៅនឹងអ្នកទទួលរបស់វាដែលបណ្តាលឱ្យមានការឆ្លើយតបយ៉ាងទូលំទូលាយនៅក្នុងកោសិកាដែលរារាំងមុខងារនៃប្រព័ន្ធភាពស៊ាំនិងការរលាក 30 ។
លទ្ធផលរបស់យើងបង្ហាញថាការរំញោចមេកានិចរាងកាយ (MS) បានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវដំណើរការវប្បធម៌ទាំងមូលបើប្រៀបធៀបទៅនឹង Ctrl ប៉ុន្តែបានបរាជ័យក្នុងការរក្សាបាននូវលទ្ធភាពជោគជ័យ ភាពរឹងមាំនៃរចនាសម្ព័ន្ធ និងកន្សោមបេះដូងក្នុងរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៅក្នុងវប្បធម៌។បើប្រៀបធៀបទៅនឹង Ctrl ការបន្ថែម T3 និង Dex ទៅ CTCM (MT) វប្បធម៌ធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវលទ្ធភាពជោគជ័យ និងរក្សាទម្រង់ប្រតិចារិកស្រដៀងគ្នា ភាពរឹងមាំនៃរចនាសម្ព័ន្ធ និងសកម្មភាពមេតាបូលីសជាមួយនឹងជាលិកាបេះដូងស្រស់សម្រាប់រយៈពេល 12 ថ្ងៃ។លើសពីនេះទៀត តាមរយៈការគ្រប់គ្រងកម្រិតនៃការលាតសន្ធឹងជាលិកា គំរូ hyperextension-induced cardiac hypertrophy ត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយប្រើ STCM ដែលបង្ហាញពីភាពបត់បែននៃប្រព័ន្ធ STCM ។វាគួរតែត្រូវបានកត់សម្គាល់ថាទោះបីជាការជួសជុលបេះដូងនិងជំងឺ fibrosis ជាធម្មតាពាក់ព័ន្ធនឹងសរីរាង្គដែលនៅដដែលដែលកោសិកាឈាមរត់អាចផ្តល់នូវ cytokines សមស្របក៏ដូចជា phagocytosis និងកត្តាផ្លាស់ប្តូរផ្សេងទៀតក៏ដោយផ្នែកនៃបេះដូងនៅតែអាចធ្វើត្រាប់តាមដំណើរការ fibrotic ក្នុងការឆ្លើយតបទៅនឹងភាពតានតឹងនិងរបួស។ចូលទៅក្នុង myofibroblasts ។នេះត្រូវបានគេវាយតម្លៃពីមុននៅក្នុងគំរូដុំបេះដូងនេះ។វាគួរតែត្រូវបានកត់សម្គាល់ថាប៉ារ៉ាម៉ែត្រ CTCM អាចត្រូវបានកែប្រែដោយការផ្លាស់ប្តូរសម្ពាធ / អំព្លីទីតអគ្គិសនី និងភាពញឹកញាប់ដើម្បីក្លែងធ្វើលក្ខខណ្ឌជាច្រើនដូចជា tachycardia, bradycardia និងការគាំទ្រចលនាឈាមរត់មេកានិច (បេះដូង unloaded មេកានិច) ។នេះធ្វើឱ្យប្រព័ន្ធមានដំណើរការមធ្យមសម្រាប់ការធ្វើតេស្តថ្នាំ។សមត្ថភាពរបស់ CTCM ដើម្បីធ្វើគំរូការលើសសម្ពាធឈាមដែលបណ្ដាលមកពីការធ្វើលំហាត់ប្រាណខ្លាំងពេក ត្រួសត្រាយផ្លូវសម្រាប់ការធ្វើតេស្តប្រព័ន្ធនេះសម្រាប់ការព្យាបាលផ្ទាល់ខ្លួន។សរុបសេចក្តីមក ការសិក្សាបច្ចុប្បន្នបង្ហាញថា ការអូសបន្លាយដោយមេកានិច និងការរំញោចបែបកំប្លែងគឺមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការថែរក្សាវប្បធម៌នៃផ្នែកជាលិកាបេះដូង។
ទោះបីជាទិន្នន័យដែលបានបង្ហាញនៅទីនេះបង្ហាញថា CTCM គឺជាវេទិកាដ៏ជោគជ័យមួយសម្រាប់ការធ្វើគំរូ myocardium ដដែល ប៉ុន្តែវិធីសាស្ត្រវប្បធម៌នេះមានដែនកំណត់មួយចំនួន។ដែនកំណត់សំខាន់នៃវប្បធម៌ CTCM គឺថាវាដាក់ភាពតានតឹងផ្នែកមេកានិចជាបន្តនៅលើចំណិត ដែលរារាំងសមត្ថភាពក្នុងការត្រួតពិនិត្យយ៉ាងសកម្មនូវការកន្ត្រាក់បេះដូងអំឡុងពេលវដ្តនីមួយៗ។លើសពីនេះទៀត ដោយសារតែទំហំតូចនៃផ្នែកបេះដូង (7 ម.ម) សមត្ថភាពក្នុងការវាយតម្លៃមុខងារស៊ីស្តូលិកនៅខាងក្រៅប្រព័ន្ធវប្បធម៌ដោយប្រើឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាកម្លាំងប្រពៃណីមានកម្រិត។នៅក្នុងសាត្រាស្លឹករឹតបច្ចុប្បន្ន យើងយកឈ្នះលើដែនកំណត់នេះដោយផ្នែកដោយការវាយតម្លៃវ៉ុលអុបទិកជាសូចនាករនៃមុខងារ contractile ។ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការកំណត់នេះនឹងតម្រូវឱ្យមានការងារបន្ថែមទៀត ហើយអាចត្រូវបានដោះស្រាយនៅពេលអនាគត ដោយណែនាំវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការត្រួតពិនិត្យអុបទិកនៃមុខងារនៃដុំបេះដូងនៅក្នុងវប្បធម៌ ដូចជាការធ្វើផែនទីអុបទិកដោយប្រើជាតិកាល់ស្យូម និងថ្នាំពណ៌ដែលងាយនឹងវ៉ុល។ដែនកំណត់មួយទៀតនៃ CTCM គឺថាគំរូការងារមិនគ្រប់គ្រងភាពតានតឹងខាងសរីរវិទ្យា (ការផ្ទុកជាមុន និងក្រោយពេលផ្ទុក) ។នៅក្នុង CTCM សម្ពាធត្រូវបានជំរុញក្នុងទិសដៅផ្ទុយដើម្បីបង្កើតឡើងវិញនូវ 25% physiological stretch នៅក្នុង diastole (ការលាតសន្ធឹងពេញលេញ) និង systole (ប្រវែងនៃការកន្ត្រាក់អំឡុងពេលរំញោចអគ្គិសនី) នៅក្នុងជាលិកាធំណាស់។ការកំណត់នេះគួរតែត្រូវបានដកចេញនៅក្នុងការរចនា CTCM នាពេលអនាគតដោយសម្ពាធគ្រប់គ្រាន់លើជាលិកាបេះដូងពីភាគីទាំងពីរ និងដោយអនុវត្តទំនាក់ទំនងសម្ពាធ-បរិមាណពិតប្រាកដដែលកើតឡើងនៅក្នុងបន្ទប់នៃបេះដូង។
ការកែទម្រង់ដែលបណ្ដាលមកពីការលាតសន្ធឹងហួសប្រមាណដែលបានរាយការណ៍នៅក្នុងសាត្រាស្លឹករឹតនេះត្រូវបានកំណត់ចំពោះការធ្វើត្រាប់តាមសញ្ញា hypertrophic hyperstretch ។ដូច្នេះ គំរូនេះអាចជួយក្នុងការសិក្សាអំពីសញ្ញា hypertrophic ដែលបណ្ដាលមកពីការលាតសន្ធឹង ដោយមិនចាំបាច់មានកត្តាកំប្លែង ឬសរសៃប្រសាទ (ដែលមិនមាននៅក្នុងប្រព័ន្ធនេះ)។ការសិក្សាបន្ថែមគឺត្រូវការជាចាំបាច់ដើម្បីបង្កើនភាពច្រើននៃ CTCM ជាឧទាហរណ៍ ការបង្រួបបង្រួមជាមួយកោសិកាភាពស៊ាំ ការធ្វើចរាចរកត្តាកំប្លែងក្នុងប្លាស្មា និងការបង្រួបបង្រួមនៅពេលដែលការបង្កាត់ពូជជាមួយកោសិកាសរសៃប្រសាទនឹងធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវលទ្ធភាពនៃគំរូជំងឺជាមួយ CTCM ។
ជ្រូកចំនួនដប់បីត្រូវបានប្រើប្រាស់ក្នុងការសិក្សានេះ។នីតិវិធីសត្វទាំងអស់ត្រូវបានអនុវត្តដោយអនុលោមតាមការណែនាំរបស់ស្ថាប័ន និងត្រូវបានអនុម័តដោយគណៈកម្មាធិការថែទាំ និងប្រើប្រាស់សត្វរបស់សាកលវិទ្យាល័យ Louisville ។ក្លោងទ្វារ aortic ត្រូវបានគៀប ហើយបេះដូងត្រូវបានរំខានជាមួយនឹង 1 L នៃ cardioplegia មាប់មគ (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL heparin, pH រហូតដល់ 7.4); បេះដូងត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងដំណោះស្រាយ cardioplegic ត្រជាក់ទឹកកករហូតដល់បញ្ជូនទៅមន្ទីរពិសោធន៍លើទឹកកកដែលជាធម្មតាគឺ <10 នាទី។ បេះដូងត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងដំណោះស្រាយ cardioplegic ត្រជាក់ទឹកកករហូតដល់បញ្ជូនទៅមន្ទីរពិសោធន៍លើទឹកកកដែលជាធម្មតាគឺ <10 នាទី។ сердца хранили в ледяном кардиоплегическом растворе до транспортировки в лабораторию на льду, что обаты បេះដូងត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងដំណោះស្រាយ cardioplegic ត្រជាក់ទឹកកក រហូតដល់ការដឹកជញ្ជូនទៅកាន់មន្ទីរពិសោធន៍លើទឹកកក ដែលជាធម្មតាចំណាយពេលតិចជាង 10 នាទី។将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟។将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟។ Держите сердца в ледяной кардиоплегии до транспортировки в лабораторию на льду, обычно <10 мин. រក្សាបេះដូងនៅលើទឹកកក cardioplegia រហូតដល់ការដឹកជញ្ជូនទៅមន្ទីរពិសោធន៍លើទឹកកក ជាធម្មតា <10 នាទី។
ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានបង្កើតឡើងនៅក្នុងកម្មវិធី SolidWorks computer-aided design (CAD) software ។បន្ទប់វប្បធម៌ បន្ទប់ចែក និងបន្ទប់ខ្យល់ត្រូវបានធ្វើពីប្លាស្ទិកអាគ្រីលីកច្បាស់លាស់ CNC ។ចិញ្ចៀនខាងក្រោយមានអង្កត់ផ្ចិត 7mm ធ្វើពីប៉ូលីអេទីឡែនដង់ស៊ីតេខ្ពស់ (HDPE) នៅចំកណ្តាល ហើយមានចង្អូរ o-ring ដើម្បីផ្ទុកស៊ីលីកូន o-ring ដែលប្រើសម្រាប់បិទប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយនៅក្រោម។ភ្នាសស៊ីលីកាស្តើងបំបែកបន្ទប់វប្បធម៌ពីចានបំបែក។ភ្នាសស៊ីលីកូនត្រូវបានកាត់ដោយឡាស៊ែរពីសន្លឹកស៊ីលីកូនក្រាស់ 0.02 អ៊ីញ និងមានភាពរឹង 35A ។បន្ទះស៊ីលីកុនខាងក្រោម និងផ្នែកខាងលើត្រូវបានកាត់ដោយឡាស៊ែរពីសន្លឹកស៊ីលីកូនក្រាស់ 1/16 អ៊ីញ និងមានភាពរឹង 50A។វីសដែកអ៊ីណុក 316L និងគ្រាប់ស្លាបត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការតោងប្លុក និងបង្កើតត្រាខ្យល់។
បន្ទះសៀគ្វីបោះពុម្ពពិសេស (PCB) ត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីរួមបញ្ចូលជាមួយប្រព័ន្ធ C-PACE-EM ។រន្ធឧបករណ៍ភ្ជាប់ម៉ាស៊ីនស្វីសនៅលើ PCB ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅអេឡិចត្រូតក្រាហ្វិចដោយខ្សែស្ពាន់ស្រោបដោយប្រាក់ និងសំរិទ្ធ 0-60 វីសដែលដោតចូលទៅក្នុងអេឡិចត្រូត។បន្ទះសៀគ្វីដែលបានបោះពុម្ពត្រូវបានដាក់ក្នុងគម្របម៉ាស៊ីនបោះពុម្ព 3D ។
ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយឧបករណ៍បំប្លែងខ្យល់ដែលអាចសរសេរកម្មវិធីបាន (PPD) ដែលបង្កើតសម្ពាធឈាមរត់ដែលបានគ្រប់គ្រងស្រដៀងទៅនឹងវដ្តបេះដូង។នៅពេលដែលសម្ពាធខាងក្នុងបន្ទប់ខ្យល់កើនឡើង ភ្នាសស៊ីលីកូនអាចបត់បែនបានពង្រីកឡើងលើ ដោយបង្ខំឧបករណ៍ផ្ទុកនៅក្រោមកន្លែងជាលិកា។បន្ទាប់មកតំបន់នៃជាលិកានឹងត្រូវបានលាតសន្ធឹងដោយការបណ្តេញសារធាតុរាវនេះដោយធ្វើត្រាប់តាមការពង្រីកសរីរវិទ្យានៃបេះដូងអំឡុងពេល diastole ។នៅកម្រិតកំពូលនៃការសំរាកលំហែ ការរំញោចអគ្គិសនីត្រូវបានអនុវត្តតាមរយៈអេឡិចត្រូតក្រាហ្វីត ដែលកាត់បន្ថយសម្ពាធក្នុងបន្ទប់ខ្យល់ និងបណ្តាលឱ្យមានការកន្ត្រាក់នៃផ្នែកជាលិកា។នៅខាងក្នុងបំពង់គឺជាសន្ទះ hemostatic ដែលមានឧបករណ៏សម្ពាធដើម្បីរកមើលសម្ពាធនៅក្នុងប្រព័ន្ធខ្យល់។សម្ពាធដែលចាប់បានដោយឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាសម្ពាធត្រូវបានអនុវត្តទៅឧបករណ៍ប្រមូលទិន្នន័យដែលភ្ជាប់ទៅកុំព្យូទ័រយួរដៃនេះអនុញ្ញាតឱ្យមានការត្រួតពិនិត្យជាបន្តបន្ទាប់នៃសម្ពាធនៅខាងក្នុងបន្ទប់ឧស្ម័ន។នៅពេលដែលសម្ពាធអង្គជំនុំជម្រះអតិបរមាត្រូវបានឈានដល់ (ស្តង់ដារ 80 mmHg, 140 mmHg OS) ឧបករណ៍ទទួលទិន្នន័យត្រូវបានបញ្ជាឱ្យបញ្ជូនសញ្ញាទៅប្រព័ន្ធ C-PACE-EM ដើម្បីបង្កើតសញ្ញាវ៉ុល biphasic សម្រាប់ 2 ms កំណត់ទៅ 4 V ។
ផ្នែកបេះដូងត្រូវបានគេទទួលបាន ហើយលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌នៅក្នុងអណ្តូងចំនួន 6 ត្រូវបានអនុវត្តដូចខាងក្រោម៖ ផ្ទេរបេះដូងដែលប្រមូលបានពីធុងផ្ទេរទៅថាសដែលមានជំងឺបេះដូងត្រជាក់ (4°C.)។ventricle ខាងឆ្វេងត្រូវបានញែកដាច់ពីគ្នាជាមួយនឹង blade មាប់មគនិងកាត់ជាបំណែកនៃ 1-2 cm3 ។បណ្តុំជាលិកាទាំងនេះត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងជាលិកាទ្រទ្រង់ដោយសារធាតុស្អិត ហើយដាក់ក្នុងអាងងូតទឹកជាលិកា microtome រំញ័រដែលមានដំណោះស្រាយ Tyrode និងបន្តអុកស៊ីហ្សែន (3 g/L 2,3-butanedione monooxime (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g) . ), 6 mM KCl (0.447 ក្រាម), 18 mEP (0.447 ក្រាម), 10 mM ។ 38 ក្រាម), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M ដំណោះស្រាយ), 1.8 mM CaCl2 (ដំណោះស្រាយ 1.8 ml 1 M) រហូតដល់ 1 L ddH2O) ។microtome រំញ័រត្រូវបានកំណត់ដើម្បីកាត់បំណែកក្រាស់ 300 µm នៅប្រេកង់ 80 Hz ទំហំរំញ័រផ្ដេក 2 មម និងអត្រាជាមុន 0.03 ម.ម/វិនាទី។ការងូតទឹកជាលិកាត្រូវបានហ៊ុំព័ទ្ធដោយទឹកកកដើម្បីរក្សាដំណោះស្រាយឱ្យត្រជាក់ ហើយសីតុណ្ហភាពត្រូវបានរក្សានៅ 4 ° C ។ផ្ទេរផ្នែកជាលិកាពីការងូត microtome ទៅកាន់បន្ទប់ទឹក incubation ដែលមានដំណោះស្រាយ Tyrode អុកស៊ីហ្សែនជាបន្តបន្ទាប់នៅលើទឹកកករហូតដល់ផ្នែកគ្រប់គ្រាន់ត្រូវបានទទួលសម្រាប់ចានវប្បធម៌មួយ។សម្រាប់ការឆ្លងរាលដាល ផ្នែកជាលិកាត្រូវបានភ្ជាប់ជាមួយនឹងជំនួយ polyurethane ទទឹង 6 ម.ម មាប់មគ ហើយដាក់ក្នុង 6 មីលីលីត្រនៃឧបករណ៍ផ្ទុកដែលប្រសើរឡើង (199 មធ្យម, 1x ITS supplement, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-alkaline និង 2X antibiotic-antifungal) ។ការរំញោចអគ្គិសនី (10 V, ប្រេកង់ 1.2 Hz) ត្រូវបានអនុវត្តទៅផ្នែកជាលិកាតាមរយៈ C-Pace ។សម្រាប់លក្ខខណ្ឌ TD ស្រស់ T3 និង Dex ត្រូវបានបន្ថែមនៅ 100 nM និង 1 μM នៅការផ្លាស់ប្តូរមធ្យមនីមួយៗ។ឧបករណ៍ផ្ទុកត្រូវបានឆ្អែតដោយអុកស៊ីសែនមុនពេលជំនួស 3 ដងក្នុងមួយថ្ងៃ។ផ្នែកជាលិកាត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងកន្លែងភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C និង 5% CO2។
សម្រាប់វប្បធម៌ CTCM ផ្នែកជាលិកាត្រូវបានដាក់នៅលើម៉ាស៊ីនបោះពុម្ព 3D ដែលផលិតដោយខ្លួនឯងនៅក្នុងចាន Petri ដែលមានដំណោះស្រាយរបស់ Tyrode ដែលបានកែប្រែ។ឧបករណ៍នេះត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីបង្កើនទំហំនៃចំណិតនៃបេះដូងដោយ 25% នៃផ្ទៃនៃរង្វង់ជំនួយ។នេះត្រូវបានធ្វើដូច្នេះថាផ្នែកនៃបេះដូងមិនលាតសន្ធឹងបន្ទាប់ពីត្រូវបានផ្ទេរពីដំណោះស្រាយរបស់ Tyrode ទៅឧបករណ៍ផ្ទុកនិងអំឡុងពេល diastole ។ដោយប្រើកាវ histoacrylic ផ្នែកដែលមានកម្រាស់ 300 µm ត្រូវបានជួសជុលនៅលើក្រវ៉ាត់ជំនួយដែលមានអង្កត់ផ្ចិត 7 មីលីម៉ែត្រ។បន្ទាប់ពីភ្ជាប់ផ្នែកជាលិកាទៅនឹងក្រវ៉ាត់ជំនួយហើយ កាត់ផ្នែកជាលិកាដែលលើស ហើយដាក់ផ្នែកជាលិកាភ្ជាប់វិញទៅក្នុងអាងងូតទឹកនៃដំណោះស្រាយ Tyrode នៅលើទឹកកក (4°C) រហូតដល់ផ្នែកគ្រប់គ្រាន់ត្រូវបានរៀបចំសម្រាប់ឧបករណ៍មួយ។ពេលវេលាដំណើរការសរុបសម្រាប់ឧបករណ៍ទាំងអស់មិនគួរលើសពី 2 ម៉ោង។បន្ទាប់ពីផ្នែកជាលិកាចំនួន 6 ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងចិញ្ចៀនជំនួយរបស់ពួកគេ ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានផ្គុំ។អង្គជំនុំជម្រះវប្បធម៍ CTCM ត្រូវបានបំពេញជាមុនជាមួយនឹងឧបករណ៍ផ្ទុកមុនអុកស៊ីហ្សែន 21 មីលីលីត្រ។ផ្ទេរផ្នែកជាលិកាទៅបន្ទប់វប្បធម៌ ហើយយកពពុះខ្យល់ចេញដោយប្រុងប្រយ័ត្នដោយប្រើបំពង់។បនា្ទាប់មក ផ្ន្រកជាលិកាត្រូវបានដឹកនាំទៅក្នុងរន្ធ ហើយចុចថ្នមៗចូលកន្លែង។ជាចុងក្រោយ ដាក់គម្របអេឡិចត្រូតនៅលើឧបករណ៍ ហើយផ្ទេរឧបករណ៍ទៅកន្លែងភ្ញាស់។បន្ទាប់មកភ្ជាប់ CTCM ទៅនឹងបំពង់ខ្យល់ និងប្រព័ន្ធ C-PACE-EM ។សន្ទះបិទបើកខ្យល់បើក ហើយសន្ទះខ្យល់បើក CTCM ។ប្រព័ន្ធ C-PACE-EM ត្រូវបានកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធដើម្បីផ្តល់ 4 V នៅ 1.2 Hz ក្នុងអំឡុងពេល biphasic pacing សម្រាប់ 2 ms ។ឧបករណ៍ផ្ទុកត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរពីរដងក្នុងមួយថ្ងៃហើយអេឡិចត្រូតត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរម្តងក្នុងមួយថ្ងៃដើម្បីជៀសវាងការប្រមូលផ្តុំក្រាហ្វិចនៅលើអេឡិចត្រូត។បើចាំបាច់ ផ្នែកជាលិកាអាចត្រូវបានយកចេញពីអណ្តូងវប្បធម៌របស់ពួកគេ ដើម្បីបណ្តេញពពុះខ្យល់ដែលអាចធ្លាក់នៅក្រោមពួកវា។សម្រាប់លក្ខខណ្ឌនៃការព្យាបាល MT T3/Dex ត្រូវបានបន្ថែមថ្មីជាមួយនឹងការផ្លាស់ប្តូរមធ្យមនីមួយៗជាមួយនឹង 100 nM T3 និង 1 μM Dex ។ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុង incubator នៅ 37 ° C និង 5% CO2 ។
ដើម្បីទទួលបានគន្លងដែលលាតសន្ធឹងនៃដុំបេះដូង ប្រព័ន្ធកាមេរ៉ាពិសេសមួយត្រូវបានបង្កើតឡើង។កាមេរ៉ា SLR (Canon Rebel T7i, Canon, Tokyo, Japan) ត្រូវបានប្រើជាមួយនឹង Navitar Zoom 7000 18-108mm macro lens (Navitar, San Francisco, CA)។ការមើលឃើញត្រូវបានអនុវត្តនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់បន្ទាប់ពីការជំនួសឧបករណ៍ផ្ទុកជាមួយឧបករណ៍ផ្ទុកស្រស់។កាមេរ៉ាត្រូវបានដាក់នៅមុំ 51° ហើយវីដេអូត្រូវបានថតក្នុងល្បឿន 30 ហ្វ្រេមក្នុងមួយវិនាទី។ជាដំបូង កម្មវិធីប្រភពបើកចំហ (MUSCLEMOTION43) ត្រូវបានប្រើជាមួយ Image-J ដើម្បីកំណត់បរិមាណចលនានៃដុំបេះដូង។របាំងនេះត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយប្រើប្រាស់ MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) ដើម្បីកំណត់តំបន់ដែលចាប់អារម្មណ៍សម្រាប់វាយដុំបេះដូង ដើម្បីជៀសវាងសំលេងរំខាន។របាំងដែលបែងចែកដោយដៃត្រូវបានអនុវត្តចំពោះរូបភាពទាំងអស់នៅក្នុងលំដាប់ស៊ុមមួយ ហើយបន្ទាប់មកបញ្ជូនទៅកម្មវិធីជំនួយ MUSCLEMOTION ។Muscle Motion ប្រើអាំងតង់ស៊ីតេមធ្យមនៃភីកសែលក្នុងស៊ុមនីមួយៗ ដើម្បីកំណត់បរិមាណចលនារបស់វាទាក់ទងទៅនឹងស៊ុមយោង។ទិន្នន័យត្រូវបានកត់ត្រា ត្រង និងប្រើដើម្បីកំណត់បរិមាណនៃវដ្តរដូវ និងវាយតម្លៃការលាតសន្ធឹងនៃជាលិកាអំឡុងពេលវដ្ដបេះដូង។វីដេអូដែលបានថតត្រូវបានដំណើរការក្រោយដំណើរការដោយប្រើតម្រងឌីជីថលសូន្យដំណាក់កាលដំបូង។ដើម្បីកំណត់បរិមាណនៃការលាតសន្ធឹងជាលិកា (ពីកំពូលទៅកំពូល) ការវិភាគពីកំពូលទៅកំពូលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីបែងចែករវាងកំពូល និង troughs នៅក្នុងសញ្ញាដែលបានកត់ត្រា។លើសពីនេះទៀត detrending ត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើពហុនាមលំដាប់ទី 6 ដើម្បីលុបបំបាត់ការរសាត់នៃសញ្ញា។កូដកម្មវិធីត្រូវបានបង្កើតឡើងនៅក្នុង MATLAB ដើម្បីកំណត់ចលនាជាលិកាសកល ពេលវេលាវដ្ត ពេលវេលាសម្រាក និងពេលវេលាកន្ត្រាក់ (កូដកម្មវិធីបន្ថែម 44)។
សម្រាប់ការវិភាគសំពាធ ដោយប្រើវីដេអូដូចគ្នាដែលបានបង្កើតសម្រាប់ការវាយតម្លៃការលាតសន្ធឹងមេកានិច ដំបូងយើងតាមដានរូបភាពពីរដែលតំណាងឱ្យកំពូលចលនា (ចំណុចខ្ពស់បំផុត (ខាងលើ) និងទាបបំផុត (ទាបបំផុត) នៃចលនា) យោងតាមកម្មវិធី MUSCLEMOTION ។បន្ទាប់មកយើងបែងចែកតំបន់ជាលិកា ហើយអនុវត្តទម្រង់នៃក្បួនដោះស្រាយការដាក់ស្រមោលទៅជាលិកាដែលបែងចែក (រូបភាពបន្ថែម 2a)។ជាលិកាដែលបានបែងចែកបន្ទាប់មកត្រូវបានបែងចែកទៅជាផ្ទៃរងចំនួនដប់ ហើយភាពតានតឹងលើផ្ទៃនីមួយៗត្រូវបានគណនាដោយប្រើសមីការដូចខាងក្រោម៖ Strain = (Sup-Sdown)/Sdown ដែល Sup និង Sdown គឺជាចម្ងាយនៃរូបរាងពីស្រមោលផ្នែកខាងលើ និងខាងក្រោមនៃក្រណាត់ រៀងគ្នា (រូបភាពបន្ថែម .2b)។
ផ្នែកបេះដូងត្រូវបានជួសជុលក្នុង 4% paraformaldehyde រយៈពេល 48 ម៉ោង។ជាលិកាថេរត្រូវបានខ្សោះជាតិទឹកក្នុង 10% និង 20% sucrose រយៈពេល 1 ម៉ោងបន្ទាប់មកក្នុង 30% sucrose ពេញមួយយប់។បន្ទាប់មកផ្នែកទាំងនោះត្រូវបានបង្កប់នៅក្នុងបរិវេណសីតុណ្ហភាពកាត់ល្អបំផុត (សមាសធាតុ OCT) ហើយត្រូវបានបង្កកបន្តិចម្តងៗនៅក្នុងអាងងូតទឹកទឹកកក isopentane/ស្ងួត។ទុកប្លុកបង្កប់ OCT នៅ -80 °C រហូតដល់ការបំបែក។ស្លាយត្រូវបានរៀបចំជាផ្នែកដែលមានកម្រាស់ 8 μm។
ដើម្បីដក OCT ចេញពីផ្នែកបេះដូង កំដៅស្លាយនៅលើប្លុកកំដៅនៅ 95 °C រយៈពេល 5 នាទី។បន្ថែម 1 មីលីលីត្រ PBS ទៅក្នុងស្លាយនីមួយៗ និង incubate 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ បន្ទាប់មក permeate ផ្នែកដោយកំណត់ 0.1% Triton-X ក្នុង PBS រយៈពេល 15 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។ដើម្បីបងា្ករអង្គបដិបក្ខដែលមិនជាក់លាក់ពីការចងទៅនឹងសំណាក បន្ថែម 1 មីលីលីត្រនៃដំណោះស្រាយ BSA 3% ទៅស្លាយនិង incubate សម្រាប់រយៈពេល 1 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។បន្ទាប់មក BSA ត្រូវបានដកចេញហើយស្លាយត្រូវបានទឹកនាំទៅជាមួយ PBS ។សម្គាល់គំរូនីមួយៗដោយខ្មៅដៃ។អង្គបដិប្រាណបឋម (រំលាយ 1:200 ក្នុង 1% BSA) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) និង troponin-T (Thermo Scientific; #MA5-12960) ត្រូវបានបន្ថែមលើសពី 90 នាទី ប្រឆាំងទៅនឹងកណ្ដុរ 10% (បន្ទាប់មក 2% BSA) Fluor 488 (Thermo Scientific; #A16079) ប្រឆាំងនឹងទន្សាយ Alexa Fluor 594 (Thermo Scientific; #T6391) សម្រាប់រយៈពេល 90 នាទីបន្ថែម លាងសម្អាត 3 ដងជាមួយ PBS ដើម្បីបែងចែកគោលដៅស្នាមប្រឡាក់ចេញពីផ្ទៃខាងក្រោយ យើងបានប្រើតែអង្គបដិប្រាណបន្ទាប់បន្សំជាឧបករណ៍គ្រប់គ្រង។ ចុងក្រោយត្រូវបានដាក់បញ្ចូលទៅក្នុង Laboratory និង DA Slide (PI) ។ និងផ្សាភ្ជាប់ជាមួយនឹងថ្នាំក្រចក។ -x magnification) និង Keyence microscope ដែលមានការពង្រីក 40x ។
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) នៅ 5 μg/ml ក្នុង PBS ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ស្នាមប្រឡាក់ WGA ហើយបានអនុវត្តទៅផ្នែកថេររយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។បន្ទាប់មក ស្លាយត្រូវលាងសម្អាតជាមួយ PBS ហើយខ្មៅស៊ូដង់ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងស្លាយនីមួយៗ ហើយភ្ញាស់រយៈពេល 30 នាទី។បន្ទាប់មកស្លាយត្រូវបានលាងសម្អាតជាមួយ PBS ហើយឧបករណ៍ផ្ទុក vectashield ត្រូវបានបន្ថែម។ស្លាយត្រូវបានគេមើលឃើញនៅលើមីក្រូទស្សន៍ Keyence ក្នុងកម្រិតពង្រីក 40x ។
OCT ត្រូវបានដកចេញពីគំរូដូចដែលបានពិពណ៌នាខាងលើ។បន្ទាប់ពីយក OCT ចេញ សូមជ្រមុជស្លាយនៅក្នុងដំណោះស្រាយរបស់ Bouin ពេញមួយយប់។បន្ទាប់មក ស្លាយត្រូវបានលាងជម្រះដោយទឹកចម្រោះរយៈពេល 1 ម៉ោង ហើយបន្ទាប់មកដាក់ក្នុងដំណោះស្រាយ Bibrich aloe acid fuchsin រយៈពេល 10 នាទី។បន្ទាប់មក ស្លាយត្រូវលាងសម្អាតដោយទឹកចម្រោះ ហើយដាក់ក្នុងដំណោះស្រាយ 5% phosphomolybdenum / phosphotungstic acid 5% រយៈពេល 10 នាទី។ដោយមិនចាំបាច់លាងជមែះទេ ផ្ទេរស្លាយដោយផ្ទាល់ទៅក្នុងសូលុយស្យុងពណ៌ខៀវ aniline រយៈពេល 15 នាទី។បន្ទាប់មកស្លាយត្រូវបានទឹកនាំទៅដោយទឹកចម្រោះ ហើយដាក់ក្នុងដំណោះស្រាយអាស៊ីតអាសេទិក 1% រយៈពេល 2 នាទី។ស្លាយត្រូវបានស្ងួតនៅក្នុងអេតាណុល 200 N ហើយផ្ទេរទៅ xylene ។ស្លាយដែលមានស្នាមប្រឡាក់ត្រូវបានគេមើលឃើញដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍ Keyence ជាមួយនឹងគោលបំណង 10x ។ភាគរយនៃតំបន់ Fibrosis ត្រូវបានគណនាដោយប្រើកម្មវិធី Keyence Analyzer ។
CyQUANT™ MTT Cell Viability Assay (Invitrogen, Carlsbad, CA) លេខកាតាឡុក V13154 យោងតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិតជាមួយនឹងការកែប្រែមួយចំនួន។ជាពិសេស កណ្តាប់ដៃវះកាត់ដែលមានអង្កត់ផ្ចិត 6 មីលីម៉ែត្រ ត្រូវបានប្រើដើម្បីធានាបាននូវទំហំជាលិកាឯកសណ្ឋានក្នុងអំឡុងពេលការវិភាគ MTT ។ជាលិកាត្រូវបានផ្សាភ្ជាប់ជាលក្ខណៈបុគ្គលទៅក្នុងអណ្តូងនៃចានអណ្តូង 12 ដែលមានស្រទាប់ខាងក្រោម MTT យោងតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត។ផ្នែកត្រូវបាន incubated នៅសីតុណ្ហភាព 37 ° C. សម្រាប់រយៈពេល 3 ម៉ោងហើយជាលិការស់ metabolizes ស្រទាប់ខាងក្រោម MTT ដើម្បីបង្កើតជាសមាសធាតុ formazan ពណ៌ស្វាយ។ជំនួសដំណោះស្រាយ MTT ជាមួយ 1 មីលីលីត្រ DMSO និង incubate នៅ 37 ° C សម្រាប់រយៈពេល 15 នាទីដើម្បីទាញយក formazan ពណ៌ស្វាយពីផ្នែកបេះដូង។គំរូត្រូវបានពនឺក្នុងសមាមាត្រ 1:10 នៅក្នុង DMSO នៅក្នុងចានបាតដែលស្អាតចំនួន 96 និងអាំងតង់ស៊ីតេពណ៌ស្វាយដែលត្រូវបានវាស់នៅ 570 nm ដោយប្រើឧបករណ៍អានចាន Cytation (BioTek) ។ការអានត្រូវបានធ្វើឱ្យធម្មតាទៅនឹងទម្ងន់នៃផ្នែកនីមួយៗនៃបេះដូង។
ប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយចំណិតបេះដូងត្រូវបានជំនួសដោយមេឌៀដែលមាន 1 μCi/ml [5-3H]-glucose (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) សម្រាប់ការវិភាគការប្រើប្រាស់គ្លុយកូស ដូចដែលបានពិពណ៌នាពីមុន។បន្ទាប់ពីការភ្ញាស់រយៈពេល 4 ម៉ោង បន្ថែម 100 µl នៃមធ្យមទៅក្នុងបំពង់មីក្រូកណ្តាលបើកចំហដែលមាន 100 µl នៃ 0.2 N HCl ។បន្ទាប់មក បំពង់ត្រូវបានដាក់ក្នុងបំពង់ផ្សែងដែលមាន 500 μlនៃ dH2O ដើម្បីហួត [3H]2O សម្រាប់រយៈពេល 72 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាព 37 អង្សាសេ។បន្ទាប់មកយកបំពង់ microcentrifuge ចេញពីបំពង់ scintillation ហើយបន្ថែមសារធាតុរាវ scintillation 10 មីលីលីត្រ។ការរាប់ស្កែនត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើឧបករណ៍វិភាគរាវ Tri-Carb 2900TR (Packard Bioscience Company, Meriden, CT, USA)។បន្ទាប់មកការប្រើប្រាស់គ្លុយកូសត្រូវបានគណនាដោយគិតគូរពី [5-3H] - សកម្មភាពជាក់លាក់នៃជាតិស្ករ លំនឹងមិនពេញលេញ និងផ្ទៃខាងក្រោយ ការពនលាយនៃ [5-3H] ទៅគ្លុយកូសដែលមិនមានស្លាក និងប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងការស្រមើស្រមៃ។ទិន្នន័យត្រូវបានធ្វើឱ្យធម្មតាទៅនឹងម៉ាស់នៃផ្នែកនៃបេះដូង។
បន្ទាប់ពីការធ្វើឱ្យដូចគ្នានៃជាលិកានៅក្នុង Trizol RNA ត្រូវបានញែកចេញពីផ្នែកបេះដូងដោយប្រើ Qiagen miRNeasy Micro Kit #210874 យោងតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត។ការរៀបចំបណ្ណាល័យ RNAsec លំដាប់លំដោយ និងការវិភាគទិន្នន័យត្រូវបានអនុវត្តដូចខាងក្រោម៖
1 μgនៃ RNA ក្នុងមួយគំរូត្រូវបានប្រើជាសម្ភារៈចាប់ផ្តើមសម្រាប់ការរៀបចំបណ្ណាល័យ RNA ។បណ្ណាល័យតាមលំដាប់លំដោយត្រូវបានបង្កើតដោយប្រើ NEBNext UltraTM RNA Library Preparation Kit for Illumina (NEB, USA) តាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត ហើយលេខកូដលិបិក្រមត្រូវបានបន្ថែមទៅលំដាប់គុណលក្ខណៈសម្រាប់គំរូនីមួយៗ។និយាយឱ្យខ្លី mRNA ត្រូវបានបន្សុតចេញពី RNA សរុបដោយប្រើអង្កាំម៉ាញេទិកភ្ជាប់ជាមួយ poly-T oligonucleotides ។ការបំបែកត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ cations divalent នៅសីតុណ្ហភាពខ្ពស់នៅក្នុង NEBNext First Strand Synthesis Buffer (5X) ។cDNA strand ដំបូងត្រូវបានសំយោគដោយប្រើថ្នាំ primers hexamer ចៃដន្យ និង M-MuLV reverse transcriptase (RNase H-)។បន្ទាប់មក strand cDNA ទីពីរត្រូវបានសំយោគដោយប្រើ DNA polymerase I និង RNase H. ខ្សែដែលនៅសេសសល់ត្រូវបានបំប្លែងទៅជាចុងត្រង់ដោយសកម្មភាព exonuclease/polymerase ។បន្ទាប់ពីការបញ្ចូលចុង 3′ នៃបំណែក DNA អាដាប់ទ័រ NEBNext ដែលមានរចនាសម្ព័ន្ធរង្វិលជុំសក់ត្រូវបានភ្ជាប់ជាមួយវា ដើម្បីរៀបចំវាសម្រាប់ការបង្កាត់។សម្រាប់ការជ្រើសរើសបំណែក cDNA នៃប្រវែងដែលពេញចិត្ត 150-200 bp ។បំណែកបណ្ណាល័យត្រូវបានសម្អាតដោយប្រើប្រព័ន្ធ AMPure XP (Beckman Coulter, Beverly, USA)។បន្ទាប់មក អង់ស៊ីម 3 μl USER (NEB, USA) ដែលមានទំហំជ្រើសរើស cDNA ភ្ជាប់ជាមួយអាដាប់ទ័រ ត្រូវបានប្រើសម្រាប់រយៈពេល 15 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 37 ° C ហើយបន្ទាប់មក 5 នាទីនៅ 95 ° C មុនពេល PCR ។បន្ទាប់មក PCR ត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ Phusion High-Fidelity DNA polymerase, universal PCR primers និង Index (X) primers ។ជាចុងក្រោយ ផលិតផល PCR ត្រូវបានបន្សុត (ប្រព័ន្ធ AMPure XP) និងគុណភាពបណ្ណាល័យដែលត្រូវបានវាយតម្លៃលើប្រព័ន្ធ Agilent Bioanalyzer 2100។បន្ទាប់មកបណ្ណាល័យ cDNA ត្រូវបានបន្តបន្ទាប់គ្នាដោយប្រើ Novaseq sequencer ។ឯកសាររូបភាពដើមពី Illumina ត្រូវបានបំប្លែងទៅជាការអានឆៅដោយប្រើ CASAVA Base Calling។ទិន្នន័យដើមត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងឯកសារទម្រង់ FASTQ(fq) ដែលមានលំដាប់អាននិងគុណភាពមូលដ្ឋានដែលត្រូវគ្នា។ជ្រើសរើស HISAT2 ដើម្បីផ្គូផ្គងការអានលំដាប់លំដោយដែលបានត្រងទៅហ្សែនយោង Sscrofa11.1 ។ជាទូទៅ HISAT2 គាំទ្រហ្សែននៃទំហំណាមួយ រួមទាំងហ្សែនធំជាង 4 ពាន់លានមូលដ្ឋាន ហើយតម្លៃលំនាំដើមត្រូវបានកំណត់សម្រាប់ប៉ារ៉ាម៉ែត្រភាគច្រើន។ការបំបែកការអានពីទិន្នន័យ RNA Seq អាចត្រូវបានតម្រឹមប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាពដោយប្រើ HISAT2 ដែលជាប្រព័ន្ធលឿនបំផុតដែលអាចប្រើបាននាពេលបច្ចុប្បន្ន ជាមួយនឹងភាពត្រឹមត្រូវដូចគ្នា ឬប្រសើរជាងវិធីសាស្ត្រផ្សេងទៀត។
ភាពសម្បូរបែបនៃប្រតិចារិកឆ្លុះបញ្ចាំងដោយផ្ទាល់នូវកម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែន។កម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែនត្រូវបានវាយតម្លៃដោយភាពសម្បូរបែបនៃប្រតិចារិក (ចំនួនលំដាប់លំដោយ) ដែលទាក់ទងនឹងហ្សែន ឬ exons ។ចំនួននៃការអានគឺសមាមាត្រទៅនឹងកម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែន ប្រវែងហ្សែន និងជម្រៅនៃលំដាប់។FPKM (បំណែកក្នុងមួយពាន់គូមូលដ្ឋាននៃប្រតិចារិកដែលបានបន្តបន្ទាប់គ្នាក្នុងមួយលានគូមូលដ្ឋាន) ត្រូវបានគណនា ហើយតម្លៃ P នៃកន្សោមឌីផេរ៉ង់ស្យែលត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើកញ្ចប់ DESeq2 ។បន្ទាប់មក យើងបានគណនាអត្រាការរកឃើញមិនពិត (FDR) សម្រាប់តម្លៃ P នីមួយៗដោយប្រើវិធី Benjamini-Hochberg ដោយផ្អែកលើមុខងារ R ដែលភ្ជាប់មកជាមួយ “p.adjust”។
RNA ដែលដាច់ចេញពីផ្នែកបេះដូងត្រូវបានបំប្លែងទៅជា cDNA នៅកំហាប់ 200 ng/μl ដោយប្រើ SuperScript IV Vilo Master mix ពី Thermo (Thermo, cat. no. 11756050)។Quantitative RT-PCR ត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ Applied Biosystems Endura Plate Microamp 384-well transparent reaction plate (Thermo, cat. no. 4483319) និង microamp optical adhesive (Thermo, cat. no. 4311971)។ល្បាយប្រតិកម្មមាន 5 µl Taqman Fast Advanced Master mix (Thermo, cat #4444557), 0.5 µl Taqman Primer និង 3.5 µl H2O លាយក្នុងអណ្តូង។វដ្ត qPCR ស្តង់ដារត្រូវបានដំណើរការ ហើយតម្លៃ CT ត្រូវបានវាស់ដោយប្រើឧបករណ៍ប្រើប្រាស់ PCR ពេលវេលាពិតប្រាកដ Quantstudio 5 (ម៉ូឌុល 384-well; ផលិតផល # A28135)។ថ្នាំ primers Taqman ត្រូវបានទិញពី Thermo (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss890879_16) mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1) , COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss0424555) ការរក្សាហ្សែនទាំងអស់នៃផ្ទះគំរូ 888_m PDH
ការចេញផ្សាយប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយនៃ NT-ProBNP ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើឧបករណ៍ NT-ProBNP (ជ្រូក) (លេខឆ្មា MBS2086979, MyBioSource) យោងតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត។ដោយសង្ខេប 250 µl នៃគំរូ និងស្តង់ដារនីមួយៗត្រូវបានបន្ថែមក្នុងការស្ទួនទៅអណ្តូងនីមួយៗ។ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីបន្ថែមសំណាក បន្ថែម 50 µl នៃ Assay Reagent A ទៅអណ្តូងនីមួយៗ។អ្រងួនចានថ្នមៗហើយបិទភ្ជាប់ជាមួយ sealant ។បន្ទាប់មកគ្រាប់ត្រូវបាន incubated នៅ 37 ° C រយៈពេល 1 ម៉ោង។បន្ទាប់មកយកសូលុយស្យុងមកលាងសម្អាតអណ្តូង ៤ ដងជាមួយនឹងទឹក ៣៥០ µl នៃដំណោះស្រាយលាង ១ ដង ដោយញាស់សូលុយស្យុងលាងរយៈពេល ១-២ នាទីរាល់ពេល។បន្ទាប់មកបន្ថែម 100 μl នៃ Assay Reagent B ក្នុងមួយអណ្តូង ហើយបិទភ្ជាប់ជាមួយ sealant ។ថេប្លេតត្រូវបានអង្រួនថ្នមៗ ហើយដាក់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 30 នាទី។យកសូលុយស្យុងមកលាងសម្អាតអណ្តូងចំនួន 5 ដងជាមួយនឹង 350 µl នៃដំណោះស្រាយ 1X ។បន្ថែមដំណោះស្រាយស្រទាប់ខាងក្រោម 90 µl ទៅអណ្តូងនីមួយៗ ហើយបិទចាន។ដាក់ចាននៅសីតុណ្ហភាព 37 អង្សាសេរយៈពេល 10-20 នាទី។បន្ថែមដំណោះស្រាយបញ្ឈប់ 50 µl ទៅអណ្តូងនីមួយៗ។ចានត្រូវបានវាស់ភ្លាមៗដោយប្រើឧបករណ៍អានចាន Cytation (BioTek) ដែលកំណត់នៅ 450 nm ។
ការវិភាគថាមពលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីជ្រើសរើសទំហំក្រុមដែលនឹងផ្តល់ថាមពល> 80% ដើម្បីរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរដាច់ខាត 10% នៅក្នុងប៉ារ៉ាម៉ែត្រជាមួយនឹងអត្រាកំហុស 5% ប្រភេទ I ។ ការវិភាគថាមពលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីជ្រើសរើសទំហំក្រុមដែលនឹងផ្តល់ថាមពល> 80% ដើម្បីរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរដាច់ខាត 10% នៅក្នុងប៉ារ៉ាម៉ែត្រជាមួយនឹងអត្រាកំហុស 5% ប្រភេទ I ។ Анализ мощности был выполнен для выбора размеров групп, которые обеспечат >80% мощности для обяжа 10% мощеости для обяжа нения параметра с 5% частотой ошибок типа I. ការវិភាគថាមពលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីជ្រើសរើសទំហំក្រុមដែលនឹងផ្តល់ថាមពល> 80% ដើម្បីរកមើលការផ្លាស់ប្តូរប៉ារ៉ាម៉ែត្រដាច់ខាត 10% ជាមួយនឹងអត្រាកំហុស 5% ប្រភេទ I ។进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I寎部。进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I寎部。 Был проведен анализ мощности для выбора размера группы, который обеспечил бы > 80% мощности для 10% мощности для обеспечил изменения параметров и 5% частоты ошибок типа I. ការវិភាគថាមពលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីជ្រើសរើសទំហំក្រុមដែលនឹងផ្តល់ថាមពល> 80% ដើម្បីរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរប៉ារ៉ាម៉ែត្រដាច់ខាត 10% និងអត្រាកំហុសប្រភេទ I 5% ។ផ្នែកជាលិកាត្រូវបានជ្រើសរើសដោយចៃដន្យមុនពេលពិសោធន៍។ការវិភាគទាំងអស់គឺពិការភ្នែក ហើយសំណាកគំរូត្រូវបានឌិកូដបន្ទាប់ពីទិន្នន័យទាំងអស់ត្រូវបានវិភាគ។កម្មវិធី GraphPad Prism (San Diego, CA) ត្រូវបានប្រើដើម្បីអនុវត្តការវិភាគស្ថិតិទាំងអស់។ សម្រាប់ស្ថិតិទាំងអស់ p-values ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់នៅតម្លៃ <0.05។ សម្រាប់ស្ថិតិទាំងអស់ p-values ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់នៅតម្លៃ <0.05។ Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. សម្រាប់ស្ថិតិទាំងអស់ p-values ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់នៅតម្លៃ <0.05។对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的 ។对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的 ។ Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. សម្រាប់ស្ថិតិទាំងអស់ p-values ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់នៅតម្លៃ <0.05។ការធ្វើតេស្ត t-Two-tailed Student ត្រូវបានអនុវត្តលើទិន្នន័យដោយមានការប្រៀបធៀបតែ 2 ប៉ុណ្ណោះ។ANOVA ផ្លូវមួយឬពីរផ្លូវត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់សារៈសំខាន់រវាងក្រុមជាច្រើន។នៅពេលធ្វើតេស្តក្រោយម៉ោងធ្វើការ ការកែតម្រូវរបស់ Tukey ត្រូវបានអនុវត្តក្នុងគណនីសម្រាប់ការប្រៀបធៀបជាច្រើន។ទិន្នន័យ RNAsec មានការពិចារណាស្ថិតិពិសេសនៅពេលគណនា FDR និង p.adjust ដូចដែលបានពិពណ៌នានៅក្នុងផ្នែក Methods ។
សម្រាប់ព័ត៌មានបន្ថែមអំពីការរចនាការសិក្សា សូមមើលរបាយការណ៍ស្រាវជ្រាវធម្មជាតិអរូបីដែលភ្ជាប់ទៅអត្ថបទនេះ។
ពេលវេលាប្រកាស៖ ថ្ងៃទី ២៨ ខែកញ្ញា ឆ្នាំ ២០២២