សូមអរគុណសម្រាប់ការចូលមើលគេហទំព័រ Nature.com។ កំណែកម្មវិធីរុករកដែលអ្នកកំពុងប្រើមានការគាំទ្រ CSS មានកំណត់។ ដើម្បីទទួលបានបទពិសោធន៍ល្អបំផុត យើងសូមណែនាំឱ្យអ្នកប្រើកម្មវិធីរុករកដែលបានធ្វើបច្ចុប្បន្នភាព (ឬបិទរបៀបឆបគ្នានៅក្នុង Internet Explorer)។ ទន្ទឹមនឹងនេះ ដើម្បីធានាបាននូវការគាំទ្រជាបន្តបន្ទាប់ យើងនឹងបង្ហាញគេហទំព័រដោយគ្មានរចនាប័ទ្ម និង JavaScript។
មានតម្រូវការសម្រាប់ប្រព័ន្ធក្នុងវីត្រូដែលអាចទុកចិត្តបាន ដែលអាចបង្កើតឡើងវិញនូវបរិយាកាសសរីរវិទ្យានៃបេះដូងសម្រាប់ការធ្វើតេស្តថ្នាំបានយ៉ាងត្រឹមត្រូវ ។ ភាពអាចរកបានមានកំណត់នៃប្រព័ន្ធវប្បធម៌ជាលិកាបេះដូងរបស់មនុស្សបាននាំឱ្យមានការបកស្រាយមិនត្រឹមត្រូវនៃផលប៉ះពាល់នៃថ្នាំបេះដូង។ នៅទីនេះ យើងបានបង្កើតគំរូវប្បធម៌ជាលិកាបេះដូង (CTCM) ដែលរំញោចផ្នែកបេះដូងដោយអេឡិចត្រូមេកានិច និងឆ្លងកាត់ការលាតសន្ធឹងសរីរវិទ្យាក្នុងដំណាក់កាលស៊ីស្តូលិក និងឌីអាស្តូលិកនៃវដ្តបេះដូង។ បន្ទាប់ពីការវប្បធម៌រយៈពេល 12 ថ្ងៃ វិធីសាស្រ្តនេះបានធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវភាពរស់រវើកនៃផ្នែកបេះដូងមួយផ្នែក ប៉ុន្តែមិនបានរក្សាបាននូវភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធរបស់វាទាំងស្រុងនោះទេ។ ដូច្នេះ បន្ទាប់ពីការត្រួតពិនិត្យម៉ូលេគុលតូចៗ យើងបានរកឃើញថាការបន្ថែម 100 nM triiodothyronine (T3) និង 1 μM dexamethasone (Dex) ទៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុករបស់យើងរក្សាបាននូវមីក្រូស្ត្រូក្រាមនៃផ្នែកទាំងនេះរយៈពេល 12 ថ្ងៃ។ រួមផ្សំជាមួយនឹងការព្យាបាលដោយ T3/Dex ប្រព័ន្ធ CTCM បានរក្សាទម្រង់ប្រតិចារិក ភាពរស់រវើក សកម្មភាពមេតាប៉ូលីស និងភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៅកម្រិតដូចគ្នានឹងជាលិកាបេះដូងស្រស់រយៈពេល 12 ថ្ងៃ។ លើសពីនេះ ការលាតសន្ធឹងហួសប្រមាណនៃជាលិកាបេះដូងក្នុងការដាំដុះបង្កឱ្យមានសញ្ញាបេះដូងលើសកម្រិត ដែលផ្តល់ភស្តុតាងសម្រាប់សមត្ថភាពរបស់ CTCM ក្នុងការធ្វើត្រាប់តាមស្ថានភាពលើសកម្រិតដែលបង្កឡើងដោយការលាតសន្ធឹងបេះដូង។ សរុបមក CTCM អាចធ្វើគំរូសរីរវិទ្យា និងរោគសាស្ត្រនៃបេះដូងក្នុងការដាំដុះក្នុងរយៈពេលយូរ ដែលអាចឱ្យមានការត្រួតពិនិត្យគ្រឿងញៀនដែលអាចទុកចិត្តបាន។
មុនពេលការស្រាវជ្រាវគ្លីនិក ប្រព័ន្ធនៅក្នុងវីត្រូដែលអាចទុកចិត្តបានគឺត្រូវបានទាមទារ ដែលអាចបង្កើតឡើងវិញនូវបរិស្ថានសរីរវិទ្យានៃបេះដូងមនុស្សបានយ៉ាងត្រឹមត្រូវ។ ប្រព័ន្ធបែបនេះគួរតែធ្វើត្រាប់តាមការលាតសន្ធឹងមេកានិច អត្រាបេះដូង និងលក្ខណៈសម្បត្តិអេឡិចត្រូសរីរវិទ្យាដែលបានផ្លាស់ប្តូរ។ គំរូសត្វត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅជាវេទិកាត្រួតពិនិត្យសម្រាប់សរីរវិទ្យាបេះដូងដែលមានភាពជឿជាក់មានកម្រិតក្នុងការឆ្លុះបញ្ចាំងពីផលប៉ះពាល់នៃថ្នាំនៅក្នុងបេះដូងមនុស្ស1,2។ នៅទីបំផុត គំរូពិសោធន៍វប្បធម៌ជាលិកាបេះដូងដ៏ល្អ (CTCM) គឺជាគំរូដែលមានភាពរសើបខ្ពស់ និងជាក់លាក់សម្រាប់អន្តរាគមន៍ព្យាបាល និងឱសថសាស្ត្រផ្សេងៗ ដោយបង្កើតឡើងវិញនូវសរីរវិទ្យា និងរោគសាស្ត្រនៃបេះដូងមនុស្សបានយ៉ាងត្រឹមត្រូវ។ អវត្តមាននៃប្រព័ន្ធបែបនេះកំណត់ការរកឃើញការព្យាបាលថ្មីសម្រាប់ជំងឺខ្សោយបេះដូង4,5 ហើយបាននាំឱ្យមានជាតិពុលបេះដូងថ្នាំជាហេតុផលចម្បងសម្រាប់ការចាកចេញពីទីផ្សារ6។
ក្នុងរយៈពេលមួយទសវត្សរ៍កន្លងមកនេះ ថ្នាំចំនួនប្រាំបីប្រភេទដែលមិនមែនជាថ្នាំសម្រាប់ជំងឺបេះដូងត្រូវបានដកចេញពីការប្រើប្រាស់គ្លីនិក ពីព្រោះវាបណ្តាលឱ្យមានការពន្យារពេល QT ដែលនាំឱ្យមានចង្វាក់បេះដូងលោតញាប់ និងការស្លាប់ភ្លាមៗ។ ដូច្នេះ មានតម្រូវការកាន់តែខ្លាំងឡើងសម្រាប់យុទ្ធសាស្ត្រត្រួតពិនិត្យមុនគ្លីនិកដែលអាចទុកចិត្តបាន ដើម្បីវាយតម្លៃប្រសិទ្ធភាព និងជាតិពុលសរសៃឈាមបេះដូង។ ការប្រើប្រាស់ថ្មីៗនេះនៃកោសិកាដើមដែលបង្កើតដោយមនុស្ស ដែលមានប្រភពមកពីកោសិកាដើម pluripotent (hiPS-CM) ក្នុងការត្រួតពិនិត្យថ្នាំ និងការធ្វើតេស្តជាតិពុល ផ្តល់នូវដំណោះស្រាយមួយផ្នែកចំពោះបញ្ហានេះ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ លក្ខណៈមិនទាន់ពេញវ័យនៃ hiPS-CMs និងកង្វះភាពស្មុគស្មាញពហុកោសិកានៃជាលិកាបេះដូង គឺជាដែនកំណត់ចម្បងនៃវិធីសាស្ត្រនេះ។ ការសិក្សាថ្មីៗបានបង្ហាញថា ដែនកំណត់នេះអាចត្រូវបានយកឈ្នះដោយផ្នែក ដោយប្រើ hiPS-CM ដំបូង ដើម្បីបង្កើតជាអ៊ីដ្រូជែលជាលិកាបេះដូងភ្លាមៗបន្ទាប់ពីការចាប់ផ្តើមនៃការកន្ត្រាក់ដោយឯកឯង និងបង្កើនការរំញោចអគ្គិសនីបន្តិចម្តងៗតាមពេលវេលា។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ជាលិកាតូចៗ hiPS-CM ទាំងនេះខ្វះលក្ខណៈសម្បត្តិអេឡិចត្រូសរីរវិទ្យា និងការកន្ត្រាក់ដែលចាស់ទុំនៃសាច់ដុំបេះដូងពេញវ័យ។ លើសពីនេះ ជាលិកាបេះដូងរបស់មនុស្សមានរចនាសម្ព័ន្ធស្មុគស្មាញជាង ដែលមានល្បាយចម្រុះនៃប្រភេទកោសិកាផ្សេងៗគ្នា រួមទាំងកោសិកា endothelial ណឺរ៉ូន និង fibroblast stromal ដែលភ្ជាប់គ្នាដោយសំណុំជាក់លាក់នៃប្រូតេអ៊ីនម៉ាទ្រីសក្រៅកោសិកា។ ភាពចម្រុះនៃចំនួនប្រជាជនដែលមិនមែនជា cardiomyocyte11,12,13 នៅក្នុងបេះដូងថនិកសត្វពេញវ័យ គឺជាឧបសគ្គចម្បងមួយចំពោះការធ្វើគំរូជាលិកាបេះដូងដោយប្រើប្រភេទកោសិកានីមួយៗ។ ដែនកំណត់សំខាន់ៗទាំងនេះសង្កត់ធ្ងន់លើសារៈសំខាន់នៃការអភិវឌ្ឍវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការដាំដុះជាលិកា myocardial ដែលនៅដដែល ក្រោមលក្ខខណ្ឌសរីរវិទ្យា និងរោគសាស្ត្រ។
ផ្នែកស្តើងៗ (300 µm) នៃបេះដូងមនុស្សដែលត្រូវបានដាំដុះបានបង្ហាញថាជាគំរូដ៏ជោគជ័យមួយនៃសាច់ដុំបេះដូងរបស់មនុស្សដែលនៅដដែល។ វិធីសាស្ត្រនេះផ្តល់នូវការចូលទៅកាន់ប្រព័ន្ធពហុកោសិកា 3D ពេញលេញស្រដៀងនឹងជាលិកាបេះដូងមនុស្ស។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ រហូតដល់ឆ្នាំ 2019 ការប្រើប្រាស់ផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះត្រូវបានកំណត់ដោយការរស់រានមានជីវិតរយៈពេលខ្លី (24 ម៉ោង) នៃការដាំដុះ។ នេះគឺដោយសារតែកត្តាមួយចំនួនរួមទាំងកង្វះនៃការលាតសន្ធឹងរូបវន្ត-មេកានិច ចំណុចប្រទាក់ខ្យល់-រាវ និងការប្រើប្រាស់ឧបករណ៍ផ្សព្វផ្សាយសាមញ្ញដែលមិនគាំទ្រតម្រូវការរបស់ជាលិកាបេះដូង។ នៅឆ្នាំ 2019 ក្រុមស្រាវជ្រាវជាច្រើនបានបង្ហាញថាការដាក់បញ្ចូលកត្តាមេកានិចទៅក្នុងប្រព័ន្ធដាំដុះជាលិកាបេះដូងអាចពន្យារអាយុជីវិតនៃការដាំដុះ ធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវការបញ្ចេញមតិបេះដូង និងធ្វើត្រាប់តាមរោគសាស្ត្របេះដូង។ ការសិក្សាពីរដ៏ប្រណិត 17 និង 18 បង្ហាញថាការផ្ទុកមេកានិចឯកតោភាគីមានឥទ្ធិពលវិជ្ជមានទៅលើលក្ខណៈបេះដូងក្នុងអំឡុងពេលដាំដុះ។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការសិក្សាទាំងនេះមិនបានប្រើការផ្ទុករូបវន្ត-មេកានិចបីវិមាត្រថាមវន្តនៃវដ្តបេះដូងនោះទេ ដោយសារផ្នែកបេះដូងត្រូវបានផ្ទុកដោយកម្លាំងទាញអ៊ីសូម៉ែត្រ 17 ឬការផ្ទុកអូសូតូនិចលីនេអ៊ែរ 18។ វិធីសាស្រ្តទាំងនេះនៃការលាតសន្ធឹងជាលិកាបានបណ្តាលឱ្យមានការបង្ក្រាបហ្សែនបេះដូងជាច្រើន ឬការបញ្ចេញហ្សែនច្រើនពេកដែលទាក់ទងនឹងការឆ្លើយតបលាតសន្ធឹងមិនប្រក្រតី។ ជាពិសេស Pitoulis et al. 19 បានបង្កើតអាងងូតទឹកវប្បធម៌ចំណិតបេះដូងថាមវន្តសម្រាប់ការកសាងឡើងវិញនូវវដ្តបេះដូងដោយប្រើមតិប្រតិកម្មបញ្ជូនកម្លាំង និងដ្រាយភាពតានតឹង។ ទោះបីជាប្រព័ន្ធនេះអនុញ្ញាតឱ្យមានការធ្វើគំរូវដ្តបេះដូងក្នុងវីត្រូកាន់តែត្រឹមត្រូវក៏ដោយ ភាពស្មុគស្មាញ និងអត្រាទិន្នផលទាបនៃវិធីសាស្រ្តនេះកំណត់ការអនុវត្តប្រព័ន្ធនេះ។ មន្ទីរពិសោធន៍របស់យើងថ្មីៗនេះបានបង្កើតប្រព័ន្ធវប្បធម៌សាមញ្ញមួយដោយប្រើការរំញោចអគ្គិសនី និងឧបករណ៍ផ្ទុកដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងដើម្បីរក្សាភាពរស់រវើកនៃផ្នែកនៃជាលិកាបេះដូងជ្រូក និងមនុស្សរហូតដល់ 6 ថ្ងៃ20,21។
នៅក្នុងសាត្រាស្លឹករឹតបច្ចុប្បន្ន យើងពិពណ៌នាអំពីគំរូវប្បធម៌ជាលិកាបេះដូង (CTCM) ដោយប្រើផ្នែកនៃបេះដូងជ្រូក ដែលរួមបញ្ចូលសញ្ញាសម្គាល់សរីរាង្គដើម្បីសង្ខេបសរីរវិទ្យាបេះដូងបីវិមាត្រ និងការរីកធំនៃរោគសាស្ត្រក្នុងអំឡុងពេលវដ្តបេះដូង។ CTCM នេះអាចបង្កើនភាពត្រឹមត្រូវនៃការទស្សន៍ទាយថ្នាំមុនព្យាបាលដល់កម្រិតដែលមិនធ្លាប់មានពីមុនមក ដោយផ្តល់នូវប្រព័ន្ធបេះដូងដែលមានតម្លៃសមរម្យ និងមានប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់ ដែលធ្វើត្រាប់តាមសរីរវិទ្យា/រោគសាស្ត្រនៃបេះដូងថនិកសត្វសម្រាប់ការធ្វើតេស្តថ្នាំមុនព្យាបាល។
សញ្ញាមេកានិច Hemodynamic ដើរតួនាទីយ៉ាងសំខាន់ក្នុងការរក្សាមុខងារ cardiomyocyte នៅក្នុង vitro 22, 23, 24។ នៅក្នុងសាត្រាស្លឹករឹតបច្ចុប្បន្ន យើងបានបង្កើត CTCM (រូបភាពទី 1a) ដែលអាចធ្វើត្រាប់តាមបរិស្ថានបេះដូងមនុស្សពេញវ័យដោយបង្កើតទាំងការរំញោចអគ្គិសនី និងមេកានិចនៅប្រេកង់សរីរវិទ្យា (1.2 Hz, 72 ចង្វាក់ក្នុងមួយនាទី)។ ដើម្បីជៀសវាងការលាតសន្ធឹងជាលិកាហួសប្រមាណក្នុងអំឡុងពេល diastole ឧបករណ៍បោះពុម្ព 3D ត្រូវបានប្រើដើម្បីបង្កើនទំហំជាលិកា 25% (រូបភាពទី 1b)។ ល្បឿនអគ្គិសនីដែលបង្កឡើងដោយប្រព័ន្ធ C-PACE ត្រូវបានកំណត់ពេលវេលាដើម្បីចាប់ផ្តើម 100 ms មុនពេល systole ដោយប្រើប្រព័ន្ធទទួលទិន្នន័យដើម្បីបង្កើតវដ្តបេះដូងឡើងវិញយ៉ាងពេញលេញ។ ប្រព័ន្ធវប្បធម៌ជាលិកាប្រើឧបករណ៍បញ្ជាខ្យល់ដែលអាចសរសេរកម្មវិធីបាន (LB Engineering, អាល្លឺម៉ង់) ដើម្បីពង្រីកភ្នាសស៊ីលីកូនដែលអាចបត់បែនបានជាវដ្តដើម្បីបណ្តាលឱ្យមានការពង្រីកចំណិតបេះដូងនៅក្នុងបន្ទប់ខាងលើ។ ប្រព័ន្ធនេះត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងបំពង់ខ្យល់ខាងក្រៅតាមរយៈឧបករណ៍បញ្ជូនសម្ពាធ ដែលធ្វើឱ្យវាអាចកែតម្រូវសម្ពាធ (± 1 mmHg) និងពេលវេលា (± 1 ms) បានយ៉ាងត្រឹមត្រូវ (រូបភាពទី 1c)។
ក. ភ្ជាប់ផ្នែកជាលិកាទៅនឹងចិញ្ចៀនទ្រទ្រង់ 7 ម.ម ដែលបង្ហាញជាពណ៌ខៀវ នៅខាងក្នុងបន្ទប់ដាំដុះនៃឧបករណ៍។ បន្ទប់ដាំដុះត្រូវបានបំបែកចេញពីបន្ទប់ខ្យល់ដោយភ្នាសស៊ីលីកូនស្តើងដែលអាចបត់បែនបាន។ ដាក់ប្រដាប់បិទភ្ជាប់រវាងបន្ទប់នីមួយៗដើម្បីការពារការលេចធ្លាយ។ គម្របឧបករណ៍មានអេឡិចត្រូតក្រាហ្វីតដែលផ្តល់ការរំញោចអគ្គិសនី។ ខ. ការតំណាងគ្រោងការណ៍នៃឧបករណ៍ជាលិកាធំ ចិញ្ចៀនណែនាំ និងចិញ្ចៀនទ្រទ្រង់។ ផ្នែកជាលិកា (ពណ៌ត្នោត) ត្រូវបានដាក់នៅលើឧបករណ៍ដែលមានទំហំធំជាមួយនឹងចិញ្ចៀនណែនាំដែលដាក់នៅក្នុងចង្អូរនៅលើគែមខាងក្រៅនៃឧបករណ៍។ ដោយប្រើការណែនាំ សូមដាក់ចិញ្ចៀនទ្រទ្រង់ដែលស្រោបដោយសារធាតុស្អិតអាគ្រីលីកជាលិកាលើផ្នែកនៃជាលិកាបេះដូងដោយប្រុងប្រយ័ត្ន។ គ. ក្រាហ្វបង្ហាញពីពេលវេលានៃការរំញោចអគ្គិសនីជាមុខងារនៃសម្ពាធបន្ទប់ខ្យល់ដែលគ្រប់គ្រងដោយឧបករណ៍បញ្ជាខ្យល់ដែលអាចសរសេរកម្មវិធីបាន (PPD)។ ឧបករណ៍ទទួលទិន្នន័យត្រូវបានប្រើដើម្បីធ្វើសមកាលកម្មការរំញោចអគ្គិសនីដោយប្រើឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាសម្ពាធ។ នៅពេលដែលសម្ពាធនៅក្នុងបន្ទប់ដាំដុះឈានដល់កម្រិតកំណត់ សញ្ញាជីពចរត្រូវបានបញ្ជូនទៅ C-PACE-EM ដើម្បីបង្កឱ្យមានការរំញោចអគ្គិសនី។ ឃ. រូបភាពនៃ CTCM ចំនួនបួនដែលដាក់នៅលើធ្នើរម៉ាស៊ីនភ្ញាស់។ ឧបករណ៍ចំនួនបួនត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹង PPD មួយតាមរយៈសៀគ្វីខ្យល់ ហើយឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាសម្ពាធត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុងសន្ទះបិទបើកឈាម ដើម្បីតាមដានសម្ពាធនៅក្នុងសៀគ្វីខ្យល់។ ឧបករណ៍នីមួយៗមានផ្នែកជាលិកាចំនួនប្រាំមួយ។
ដោយប្រើឧបករណ៍បញ្ជាខ្យល់តែមួយ យើងអាចគ្រប់គ្រងឧបករណ៍ CTCM ចំនួន 4 ដែលឧបករណ៍នីមួយៗអាចផ្ទុកផ្នែកជាលិកាចំនួន 6 (រូបភាពទី 1d)។ នៅក្នុង CTCM សម្ពាធខ្យល់នៅក្នុងបន្ទប់ខ្យល់ត្រូវបានបំប្លែងទៅជាសម្ពាធសមកាលកម្មនៅក្នុងបន្ទប់សារធាតុរាវ និងបង្កឱ្យមានការពង្រីកសរីរវិទ្យានៃចំណិតបេះដូង (រូបភាពទី 2a និងភាពយន្តបន្ថែមទី 1)។ ការវាយតម្លៃការលាតសន្ធឹងជាលិកានៅ 80 mm Hg។ សិល្បៈ។ បានបង្ហាញការលាតសន្ធឹងនៃផ្នែកជាលិកាចំនួន 25% (រូបភាពទី 2b)។ ការលាតសន្ធឹងភាគរយនេះត្រូវបានបង្ហាញថាត្រូវគ្នាទៅនឹងប្រវែង sarcomere សរីរវិទ្យា 2.2–2.3 µm សម្រាប់ការកន្ត្រាក់ផ្នែកបេះដូងធម្មតា17,19,25។ ចលនាជាលិកាត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើការកំណត់កាមេរ៉ាផ្ទាល់ខ្លួន (រូបភាពបន្ថែមទី 1)។ ទំហំ និងល្បឿននៃចលនាជាលិកា (រូបភាពទី 2c, d) ត្រូវគ្នាទៅនឹងការលាតសន្ធឹងក្នុងអំឡុងពេលវដ្តបេះដូង និងពេលវេលាក្នុងអំឡុងពេល systole និង diastole (រូបភាពទី 2b)។ ការលាតសន្ធឹង និងល្បឿននៃជាលិកាបេះដូងក្នុងអំឡុងពេលកន្ត្រាក់ និងការសម្រាកនៅតែថេររយៈពេល 12 ថ្ងៃក្នុងការដាំដុះ (រូបភាពទី 2f)។ ដើម្បីវាយតម្លៃពីឥទ្ធិពលនៃការរំញោចអគ្គិសនីលើការកន្ត្រាក់អំឡុងពេលដាំដុះ យើងបានបង្កើតវិធីសាស្ត្រមួយសម្រាប់កំណត់ការខូចទ្រង់ទ្រាយសកម្មដោយប្រើក្បួនដោះស្រាយការដាក់ស្រមោល (រូបភាពបន្ថែម 2a,b) ហើយអាចបែងចែករវាងការខូចទ្រង់ទ្រាយដែលមាន និងគ្មានការរំញោចអគ្គិសនី។ ផ្នែកដូចគ្នានៃបេះដូង (រូបភាពទី 2f)។ នៅក្នុងតំបន់ចល័តនៃស្នាមកាត់ (R6-9) វ៉ុលអំឡុងពេលរំញោចអគ្គិសនីគឺខ្ពស់ជាង 20% បើប្រៀបធៀបទៅនឹងករណីដែលគ្មានការរំញោចអគ្គិសនី ដែលបង្ហាញពីការរួមចំណែកនៃការរំញោចអគ្គិសនីចំពោះមុខងារកន្ត្រាក់។
ដានតំណាងនៃសម្ពាធបន្ទប់ខ្យល់ សម្ពាធបន្ទប់សារធាតុរាវ និងការវាស់វែងចលនាជាលិកាបញ្ជាក់ថាសម្ពាធបន្ទប់ផ្លាស់ប្តូរសម្ពាធបន្ទប់សារធាតុរាវ ដែលបណ្តាលឱ្យមានចលនាដែលត្រូវគ្នានៃចំណិតជាលិកា។ ខ ដានតំណាងនៃភាគរយលាតសន្ធឹង (ពណ៌ខៀវ) នៃផ្នែកជាលិកាដែលត្រូវគ្នាទៅនឹងភាគរយលាតសន្ធឹង (ពណ៌ទឹកក្រូច)។ គ ចលនាដែលវាស់វែងនៃចំណិតបេះដូងគឺស្របនឹងល្បឿននៃចលនាដែលវាស់វែង។ (ឃ) គន្លងតំណាងនៃចលនាវដ្ត (ខ្សែពណ៌ខៀវ) និងល្បឿន (ខ្សែចំនុចពណ៌ទឹកក្រូច) នៅក្នុងចំណិតបេះដូង។ ង ការវាស់បរិមាណនៃពេលវេលាវដ្ត (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ពេលវេលាកន្ត្រាក់ (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម) ពេលវេលាសម្រាក (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ចលនាជាលិកា (n = 25 ចំណិត)/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ល្បឿនស៊ីស្តូលិកកំពូល (n = 24(D0), 25(D12) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) និងអត្រាបន្ធូរកំពូល (n=24(D0), 25(D12) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា)។ ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សកន្ទុយពីរបានបង្ហាញថាមិនមានភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងប៉ារ៉ាម៉ែត្រណាមួយឡើយ។ f ការវិភាគសំពាធតំណាង ដាននៃផ្នែកជាលិកាដែលមានការរំញោចអគ្គិសនី (ក្រហម) និងគ្មាន (ខៀវ) តំបន់តំបន់ចំនួនដប់នៃផ្នែកជាលិកាពីផ្នែកដូចគ្នា។ បន្ទះខាងក្រោមបង្ហាញពីការវាស់វែងនៃភាពខុសគ្នាភាគរយនៃសំពាធនៅក្នុងផ្នែកជាលិកាដែលមាន និងគ្មានការរំញោចអគ្គិសនីនៅក្នុងតំបន់ចំនួនដប់ពីផ្នែកផ្សេងៗគ្នា។ (n = 8 ចំណិត/ក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សកន្ទុយពីរត្រូវបានអនុវត្ត; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05)។ (n = 8 ចំណិត/ក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សកន្ទុយពីរត្រូវបានអនុវត្ត; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05)។ (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; ****p<0,0001, **p<0,01,*5). (n = 8 ផ្នែក/ក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សកន្ទុយពីរ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05)។ (n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验； ****p < 0.0001, ** p < 0.01, * p < 0.05) ។ (n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验； ****p < 0.0001, ** p < 0.01, * p < 0.05) ។ (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05)។ (n = 8 ផ្នែក/ក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សកន្ទុយពីរ; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05)។របារកំហុសតំណាងឱ្យមធ្យមភាគ ± គម្លាតស្តង់ដារ។
នៅក្នុងប្រព័ន្ធវប្បធម៌ចំណិតបេះដូងជីវមាត្រឋិតិវន្តពីមុនរបស់យើង [20, 21] យើងបានរក្សាបាននូវលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិត មុខងារ និងភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃចំណិតបេះដូងរយៈពេល 6 ថ្ងៃដោយអនុវត្តការរំញោចអគ្គិសនី និងធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវសមាសភាពឧបករណ៍ផ្ទុក។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ បន្ទាប់ពី 10 ថ្ងៃ តួលេខទាំងនេះបានធ្លាក់ចុះយ៉ាងខ្លាំង។ យើងនឹងសំដៅទៅលើផ្នែកដែលត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងប្រព័ន្ធវប្បធម៌ជីវមាត្រឋិតិវន្ត 20, 21 ពីមុនរបស់យើង លក្ខខណ្ឌត្រួតពិនិត្យ (Ctrl) ហើយយើងនឹងប្រើឧបករណ៍ផ្ទុកដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងពីមុនរបស់យើងជាលក្ខខណ្ឌ MC និងការដាំដុះក្រោមការរំញោចមេកានិច និងអគ្គិសនីក្នុងពេលដំណាលគ្នា (CTCM)។ ដំបូង យើងបានកំណត់ថាការរំញោចមេកានិចដោយគ្មានការរំញោចអគ្គិសនីមិនគ្រប់គ្រាន់ដើម្បីរក្សាលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិតជាលិការយៈពេល 6 ថ្ងៃ (រូបភាពបន្ថែម 3a,b)។ គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ ជាមួយនឹងការណែនាំនៃការរំញោចសរីរវិទ្យា-មេកានិច និងអគ្គិសនីដោយប្រើ STCM លទ្ធភាពរស់រានមានជីវិតនៃផ្នែកបេះដូងរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៅតែដូចគ្នាទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ៗក្រោមលក្ខខណ្ឌ MS ប៉ុន្តែមិនមែនក្រោមលក្ខខណ្ឌ Ctrl ទេ ដូចដែលបានបង្ហាញដោយការវិភាគ MTT (រូបភាពទី 1)។ 3a)។ នេះបង្ហាញថា ការរំញោចមេកានិច និងការក្លែងធ្វើនៃវដ្តបេះដូងអាចរក្សាផ្នែកជាលិកាឱ្យនៅរស់បានពីរដងយូរជាងការរាយការណ៍នៅក្នុងប្រព័ន្ធវប្បធម៌ឋិតិវន្តពីមុនរបស់យើង។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការវាយតម្លៃអំពីភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃផ្នែកជាលិកាដោយការដាក់ស្លាកសញ្ញា troponin T និង connexin 43 បេះដូងបានបង្ហាញថា ការបញ្ចេញមតិ connexin 43 គឺខ្ពស់ជាងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងជាលិកា MC នៅថ្ងៃទី 12 ជាងនៅក្នុងក្រុមត្រួតពិនិត្យនៅថ្ងៃដដែល។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ការបញ្ចេញមតិ connexin 43 ឯកសណ្ឋាន និងការបង្កើតឌីស Z មិនត្រូវបានរក្សាយ៉ាងពេញលេញទេ (រូបភាពទី 3b)។ យើងប្រើក្របខ័ណ្ឌបញ្ញាសិប្បនិម្មិត (AI) ដើម្បីវាស់បរិមាណសុចរិតភាពនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកា26 ដែលជាបំពង់សិក្សាស៊ីជម្រៅដែលមានមូលដ្ឋានលើរូបភាពដែលផ្អែកលើ troponin-T និង connexin staining43 ដើម្បីវាស់បរិមាណសុចរិតភាពនៃរចនាសម្ព័ន្ធ និងពន្លឺនៃចំណិតបេះដូងដោយស្វ័យប្រវត្តិទាក់ទងនឹងកម្លាំងនៃការធ្វើមូលដ្ឋានីយកម្ម។ វិធីសាស្រ្តនេះប្រើបណ្តាញសរសៃប្រសាទ Convolutional (CNN) និងក្របខ័ណ្ឌសិក្សាស៊ីជម្រៅដើម្បីវាស់បរិមាណសុចរិតភាពនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃជាលិកាបេះដូងដោយភាពជឿជាក់តាមរបៀបស្វ័យប្រវត្តិ និងមិនលំអៀង ដូចដែលបានពិពណ៌នានៅក្នុងឯកសារយោង។ 26. ជាលិកា MC បានបង្ហាញពីភាពស្រដៀងគ្នានៃរចនាសម្ព័ន្ធដែលប្រសើរឡើងទៅនឹងថ្ងៃទី 0 បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកត្រួតពិនិត្យឋិតិវន្ត។ លើសពីនេះ ការជ្រលក់ពណ៌បីក្រូមរបស់ Masson បានបង្ហាញពីភាគរយនៃជាលិការជាលិកាទាបជាងគួរឱ្យកត់សម្គាល់ក្រោមលក្ខខណ្ឌ MS បើប្រៀបធៀបទៅនឹងលក្ខខណ្ឌត្រួតពិនិត្យនៅថ្ងៃទី 12 នៃការដាំដុះ (រូបភាពទី 3c)។ ខណៈពេលដែល CTCM បានបង្កើនលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិតនៃផ្នែកជាលិកាបេះដូងនៅថ្ងៃទី 12 ដល់កម្រិតស្រដៀងគ្នាទៅនឹងជាលិកាបេះដូងស្រស់ វាមិនបានធ្វើអោយប្រសើរឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នូវភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃផ្នែកបេះដូងនោះទេ។
ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីការវាស់វែងបរិមាណនៃលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិត MTT នៃចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) ឬការដាំដុះចំណិតបេះដូងរយៈពេល 12 ថ្ងៃ ទាំងក្នុងការដាំដុះឋិតិវន្ត (D12 Ctrl) ឬក្នុង CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង **p < 0.01 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីការវាស់វែងបរិមាណនៃលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិត MTT នៃចំណិតបេះដូងស្រស់ (D0) ឬការដាំដុះចំណិតបេះដូងរយៈពេល 12 ថ្ងៃ ទាំងក្នុងការដាំដុះឋិតិវន្ត (D12 Ctrl) ឬក្នុង CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង **p < 0.01 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញពីការវាស់វែងបរិមាណនៃលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិតនៃផ្នែកបេះដូងស្រស់របស់ MTT (D0) ឬការដាំដុះផ្នែកបេះដូងរយៈពេល 12 ថ្ងៃក្នុងការដាំដុះឋិតិវន្ត (ក្រុមត្រួតពិនិត្យ D12) ឬ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (ក្រុមត្រួតពិនិត្យ D12)។ ) ), 12 (D12 MC) ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត។####p < 0,0001 по сравнению с D0 និង **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl) ។ ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង **p < 0.01 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl)) 中新鲜心脏切片(D0)或心脏切片培养12 天的MTT 活力的量化)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行OV单向AN︎相比，####p < 0.0001，与D12 Ctrl 相比，**p < ០.០១)។ a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl)) 中新鲜心脪切片(楐匇) (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0相比，####p < 0.0001，与D12 Ctrl 相比，**p.)អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញពីការវាស់វែងបរិមាណនៃលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិត MTT នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) ឬផ្នែកបេះដូងដែលដាំដុះរយៈពេល 12 ថ្ងៃក្នុងការដាំដុះឋិតិវន្ត (ក្រុមត្រួតពិនិត្យ D12) ឬ CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (ក្រុមត្រួតពិនិត្យ D12)), 12 (D12 MC) ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវ;####p < 0,0001 по сравнению с D0, **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl) ។ ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0, **p < 0.01 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ខ Troponin-T (ពណ៌បៃតង), connexin 43 (ពណ៌ក្រហម) និង DAPI (ពណ៌ខៀវ) នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងដែលទើបញែកចេញថ្មីៗ (D0) ឬផ្នែកបេះដូងដែលដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌឋិតិវន្ត (Ctrl) ឬលក្ខខណ្ឌ CTCM (MC) រយៈពេល 12 ថ្ងៃ) នៃរូបភាពតំណាងអ៊ីមមូណូហ្វ្លុយអូរីសង់ (មាត្រដ្ឋានទទេ = 100 µm)។ ការវាស់វែងបរិមាណបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៃភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូង (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមនីមួយៗពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA តែមួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ ការវាស់វែងបរិមាណបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៃភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូង (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមនីមួយៗពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ Количественная оценка структурной целостности сердечной ткани искусственным интеллектом (n = 7 (D0)), 7 (D0), Ctrl срезов/групп от разных свиней, проводится однофакторный тест ANOVA; បញ្ជា (Ctrl) D12 ។ ការវាស់បរិមាណនៃភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូងដោយបញ្ញាសិប្បនិម្មិត (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 ធៀបនឹង D0 និង ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។人工智能量化心脏组织结构完整性(n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមជ្រូកនីមួយៗ ការធ្វើតេស្ត ANOVA ផ្លូវមួយ;###0D <10 .相比, ****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比) ។人工智能量化心脏组织结构完整性(n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមជ្រូកនីមួយៗ ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវ;###0.0 <10与D0相比, ****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比). Искусственный интеллект для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (n = 7D) CTRL (10) срезов/группу каждой из разных свиней, односторонний тест ANOVA; បញ្ជា (Ctrl) ។ បញ្ញាសិប្បនិម្មិត ដើម្បីវាស់បរិមាណសុចរិតភាពរចនាសម្ព័ន្ធនៃជាលិកាបេះដូង (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ផ្នែក/ក្រុមនីមួយៗនៃជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវ; ####p<0.0001 ទល់នឹង .D0 សម្រាប់ការប្រៀបធៀប ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ គ រូបភាពតំណាង (ខាងឆ្វេង) និងការវាស់បរិមាណ (ខាងស្តាំ) សម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ Masson's trichrome (មាត្រដ្ឋានទទេ = 500 µm) (n = 10 ចំណិត/ក្រុមនីមួយៗពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង ***p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ c រូបភាពតំណាង (ខាងឆ្វេង) និងការវាស់បរិមាណ (ខាងស្តាំ) សម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ Masson's trichrome (Scale bare = 500 µm) (n = 10 ចំណិត/ក្រុមនីមួយៗពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; #### p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង ***p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ c Репрезентативные изображения (слева) និង количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашенныхрорим Массона (масштаб без покрытия = 500 мкм) (n = 10 срезов/группу от разных свиней, выполняется < одностйте ; 0,0001 по сравнению с D0 និង ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl)។ គ រូបភាពតំណាង (ខាងឆ្វេង) និងការវាស់បរិមាណ (ខាងស្តាំ) នៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ Masson's trichrome (មាត្រដ្ឋានមិនស្រោប = 500 µm) (n = 10 ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; #### p < 0 .0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង ***p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸尺度= 500 µm) (n = 500 µm)个切片/组，每组来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 相比，***p 1 減 0.0) C用 masson 三色染料的心脏切片的代表性（左左）量化（右）裸尺度裸尺度尸度尸度500 µm) (n = 10个切片组每组来自不同猪，进行单向单向 Anova 测试；###.00 <1.相比，***p < 0.001 Ctrl D12 相比) ។ c Репрезентативные изображения (слева) និង количественный анализ (справа) срезов сердца, окрашеннырох т Массона (чистая шкала = 500 мкм) (n = 10 срезов/группа, каждый от другой свиньи, протестировано с помощью дисперсионного анализа ;### #p < 0,0001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 បញ្ជា)។ c រូបភាពតំណាង (ខាងឆ្វេង) និងការកំណត់បរិមាណ (ខាងស្តាំ) នៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយថ្នាំលាប Masson's trichrome (ទទេ = 500 µm) (n = 10 ផ្នែក/ក្រុម ដែលផ្នែកនីមួយៗមកពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ត្រូវបានសាកល្បងដោយការវិភាគតែមួយផ្លូវនៃភាពខុសគ្នា ;### # p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0, ***p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។របារកំហុសតំណាងឱ្យមធ្យមភាគ ± គម្លាតស្តង់ដារ។
យើងបានសន្និដ្ឋានថា ដោយការបន្ថែមម៉ូលេគុលតូចៗទៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុកកោសិកា ភាពសុចរិតនៃកោសិកាបេះដូងអាចត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើង ហើយការវិវត្តនៃជាលិកាស្លាកស្នាមត្រូវបានកាត់បន្ថយក្នុងអំឡុងពេលផ្ទុកកោសិកា CTCM។ ដូច្នេះ យើងបានពិនិត្យរកម៉ូលេគុលតូចៗដោយប្រើការផ្ទុកកោសិកាត្រួតពិនិត្យឋិតិវន្តរបស់យើង20,21 ដោយសារតែចំនួនកត្តាច្របូកច្របល់មានតិចតួច។ Dexamethasone (Dex), triiodothyronine (T3) និង SB431542 (SB) ត្រូវបានជ្រើសរើសសម្រាប់ការពិនិត្យនេះ។ ម៉ូលេគុលតូចៗទាំងនេះពីមុនត្រូវបានគេប្រើប្រាស់ក្នុងការផ្ទុកកោសិកា hiPSC-CM ដើម្បីបង្កឱ្យមានភាពចាស់ទុំនៃកោសិកាបេះដូងដោយបង្កើនប្រវែង sarcomere, T-tubules និងល្បឿននៃចរន្ត។ លើសពីនេះ ទាំង Dex (glucocorticoid) និង SB ត្រូវបានគេដឹងថាអាចទប់ស្កាត់ការរលាក29,30។ ដូច្នេះ យើងបានសាកល្បងថាតើការដាក់បញ្ចូលម៉ូលេគុលតូចៗមួយ ឬការរួមបញ្ចូលគ្នានៃម៉ូលេគុលតូចៗទាំងនេះនឹងធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃផ្នែកបេះដូងដែរឬទេ។ សម្រាប់ការពិនិត្យដំបូង កម្រិតថ្នាំនៃសមាសធាតុនីមួយៗត្រូវបានជ្រើសរើសដោយផ្អែកលើកំហាប់ដែលត្រូវបានប្រើជាទូទៅនៅក្នុងគំរូផ្ទុកកោសិកា (1 μM Dex27, 100 nM T327 និង 2.5 μM SB31)។ បន្ទាប់ពីការដាំដុះរយៈពេល 12 ថ្ងៃ ការរួមបញ្ចូលគ្នានៃ T3 និង Dex បាននាំឱ្យមានភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធ cardiomyocyte ដ៏ល្អប្រសើរ និងការកែច្នៃសរសៃឡើងវិញតិចតួចបំផុត (រូបភាពបន្ថែម 4 និង 5)។ លើសពីនេះ ការប្រើប្រាស់កំហាប់ T3 និង Dex ទ្វេដងទាំងនេះបានបង្កើតផលប៉ះពាល់អវិជ្ជមានបើប្រៀបធៀបទៅនឹងកំហាប់ធម្មតា (រូបភាពបន្ថែម 6a,b)។
បន្ទាប់ពីការត្រួតពិនិត្យដំបូង យើងបានធ្វើការប្រៀបធៀបដោយផ្ទាល់ទៅលើលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ចំនួន ៤ (រូបភាពទី ៤ក)៖ Ctrl៖ ផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងវប្បធម៌ឋិតិវន្តដែលបានពិពណ៌នាពីមុនរបស់យើងដោយប្រើឧបករណ៍ផ្សព្វផ្សាយដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងរបស់យើង; 20.21 TD៖ T3 និង Ctrl បានបន្ថែម Dex នៅថ្ងៃពុធ; MC៖ ផ្នែកបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុង CTCM ដោយប្រើឧបករណ៍ផ្សព្វផ្សាយដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងពីមុនរបស់យើង; និង MT៖ CTCM ជាមួយ T3 និង Dex បានបន្ថែមទៅក្នុងឧបករណ៍ផ្សព្វផ្សាយ។ បន្ទាប់ពីការដាំដុះរយៈពេល 12 ថ្ងៃ លទ្ធភាពរស់រានមានជីវិតនៃជាលិកា MS និង MT នៅតែដដែលដូចនៅក្នុងជាលិកាស្រស់ៗដែលវាយតម្លៃដោយការវិភាគ MTT (រូបភាពទី ៤ខ)។ គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ ការបន្ថែម T3 និង Dex ទៅក្នុងវប្បធម៌ transwell (TD) មិនបាននាំឱ្យមានភាពប្រសើរឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិតបើប្រៀបធៀបទៅនឹងលក្ខខណ្ឌ Ctrl ដែលបង្ហាញពីតួនាទីសំខាន់នៃការរំញោចមេកានិចក្នុងការរក្សាលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិតនៃផ្នែកបេះដូង។
ដ្យាក្រាមរចនាពិសោធន៍ដែលពិពណ៌នាអំពីលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំងបួនដែលប្រើដើម្បីវាយតម្លៃផលប៉ះពាល់នៃការរំញោចមេកានិច និងការបន្ថែម T3/Dex លើឧបករណ៍ផ្សព្វផ្សាយរយៈពេល 12 ថ្ងៃ។ ខ. ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីការវាស់វែងបរិមាណនៃលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិត 12 ថ្ងៃបន្ទាប់ពីការដាំដុះក្នុងលក្ខខណ្ឌដាំដុះទាំង 4 (Ctrl, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងចំណិតបេះដូងស្រស់ៗ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MT), 12 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង **p < 0.01 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ ខ. ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីការវាស់វែងបរិមាណនៃលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិត 12 ថ្ងៃបន្ទាប់ពីការដាំដុះក្នុងលក្ខខណ្ឌដាំដុះទាំង 4 (Ctrl, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងចំណិតបេះដូងស្រស់ៗ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MT), 12 (D12 MC) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA តែមួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង **p < 0.01 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 ctrl)។ b Гистограмма показывает количественную оценку жизнеспособности через 12 дней после культивир ова ни культивирования (контроль, TD, MC និង MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 TD), D1 Ctrl និង D1 MC) срезов/группу от разных свиней, проводится односторонний тест ANOVA; ###p < 0,001 по сравнению с D0 និង **p < 0.01 по сравнению с D12 Ctrl) ។ ខ. ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីការវាស់វែងបរិមាណនៃលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិតនៅ 12 ថ្ងៃបន្ទាប់ពីការដាំដុះក្នុងលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង 4 (ក្រុមត្រួតពិនិត្យ TD, MC និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ៗ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, និង D12 MT), 12 (D12 MC) ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវ; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 ទល់នឹង D0 និង **p < 0.01 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ b 条形图显示所有4种培养条件（Ctrl、TD、MC和MT）与新鲜心脏切片(D0) (n = 18 (D0) 、 15 (D12 D1 Ctrl 2、D) MT), 来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；####p < 0.0001,###p < 0.001*曯 0.001 与D0与D12控制)។ខ ៤ ១២ (D១២ MC) b Гистограмма, показывающая все 4 условия культивирования (контроль, TD, MC និង MT) по сравнению со свижижим (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MT), от разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односторонний тест ANOVA<1,#0# по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с контролем D12). ខ ហ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញពីលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំង ៤ (ក្រុមត្រួតពិនិត្យ, TD, MC និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ៗ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MT), ពីផ្នែក/ក្រុមជ្រូកផ្សេងៗគ្នាចំនួន 12 (D12 MC), ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវ; ####p<0.0001, ###p<0.001 ទល់នឹង D0, **p<0.01 ទល់នឹងក្រុមត្រួតពិនិត្យ D12)។ គ. ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីការវាស់វែងបរិមាណលំហូរគ្លុយកូស 12 ថ្ងៃបន្ទាប់ពីការដាំដុះក្នុងលក្ខខណ្ឌដាំដុះទាំង 4 (Ctrl, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងចំណិតបេះដូងស្រស់ៗ (D0) (n = 6 ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ###p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង ***p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ គ. ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីការវាស់វែងបរិមាណលំហូរគ្លុយកូស 12 ថ្ងៃបន្ទាប់ពីការដាំដុះក្នុងលក្ខខណ្ឌដាំដុះទាំង 4 (Ctrl, TD, MC, និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងចំណិតបេះដូងស្រស់ៗ (D0) (n = 6 ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ###p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង ***p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ c Гистограмма показывает количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивирования во 4 культивирования во 4 культивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группуы отнезов/группуы) односторонний Выполняется тест ANOVA; c អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញពីការវាស់វែងបរិមាណលំហូរគ្លុយកូស 12 ថ្ងៃបន្ទាប់ពីការដាំដុះ ក្រោមលក្ខខណ្ឌដាំដុះទាំង 4 (ក្រុមត្រួតពិនិត្យ TD, MC និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ៗ (D0) (n = 6 ផ្នែក/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA តែមួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ###p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង ***p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC和MT）与新鲜心脏切片(D0) 相比，培养后12天的葡萄糖通量定量（n=6片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试；###p < 0.001，縎D Ctrl D12 相比) ។ C 条形图显示所有 4种条件（（ctrl、td、mc和 mt）新鲜心脏切片切矉切片君吸12天的通量定量（n=6片/组，来自猪，，，，，，，，，，，猪猪单向执行ANOVA<#0.#0相比, *** p < 0.001 与D12 Ctrl 相比) ។ c Гистограмма, показывающая количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивиляния культивирования (контроль, TD, MC និង MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/груйспа, срезов/групра, односторонний Были проведены тесты ANOVA; ###p < 0,001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 (контроль)។ c អ៊ីស្តូក្រាមបង្ហាញពីការវាស់វែងបរិមាណលំហូរគ្លុយកូសនៅ 12 ថ្ងៃបន្ទាប់ពីការដាំដុះសម្រាប់លក្ខខណ្ឌដាំដុះទាំង 4 (ក្រុមត្រួតពិនិត្យ TD, MC និង MT) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ៗ (D0) (n = 6 ផ្នែក/ក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ឯកតោភាគី) តើការធ្វើតេស្ត ANOVA ត្រូវបានអនុវត្តទេ ###p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0, ***p < 0.001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 (ក្រុមត្រួតពិនិត្យ)។ឃ. គំនូសតាងវិភាគសំពាធនៃជាលិកាស្រស់ (ខៀវ) ជាលិកា MC ថ្ងៃទី 12 (បៃតង) និងជាលិកា MT ថ្ងៃទី 12 (ក្រហម) នៅចំណុចផ្នែកជាលិកាតំបន់ចំនួនដប់ (n = 4 ចំណិត/ក្រុម ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវ; មិនមានភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់រវាងក្រុមទេ)។ ង. គំនូសតាងភ្នំភ្លើងបង្ហាញហ្សែនដែលបង្ហាញខុសគ្នានៅក្នុងផ្នែកបេះដូងស្រស់ (D0) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកបេះដូងដែលដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌឋិតិវន្ត (Ctrl) ឬក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT (MT) រយៈពេល 10-12 ថ្ងៃ។ ច. ផែនទីកំដៅនៃហ្សែន sarcomere សម្រាប់ផ្នែកបេះដូងដែលដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌នីមួយៗ។ របារកំហុសតំណាងឱ្យមធ្យម ± គម្លាតស្តង់ដារ។
ការពឹងផ្អែកមេតាបូលីសលើការប្តូរពីអុកស៊ីតកម្មអាស៊ីតខ្លាញ់ទៅជាគ្លីកូលីសគឺជាសញ្ញាសម្គាល់នៃការបំបែកកោសិកាបេះដូង។ កោសិកាបេះដូងដែលមិនទាន់ពេញវ័យប្រើគ្លុយកូសជាចម្បងសម្រាប់ការផលិត ATP ហើយមានមីតូខនឌ្រីន hypoplastic ដែលមាន cristae តិចតួច 5,32។ ការវិភាគការប្រើប្រាស់គ្លុយកូសបានបង្ហាញថាក្រោមលក្ខខណ្ឌ MC និង MT ការប្រើប្រាស់គ្លុយកូសគឺស្រដៀងគ្នាទៅនឹងជាលិកាថ្ងៃទី 0 (រូបភាពទី 4c)។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ គំរូ Ctrl បានបង្ហាញពីការកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៃការប្រើប្រាស់គ្លុយកូសបើប្រៀបធៀបទៅនឹងជាលិកាស្រស់។ នេះបង្ហាញថាការរួមបញ្ចូលគ្នានៃ CTCM និង T3/Dex បង្កើនភាពរស់រានមានជីវិតរបស់ជាលិកា និងរក្សាលក្ខណៈមេតាបូលីសនៃផ្នែកបេះដូងដាំដុះរយៈពេល 12 ថ្ងៃ។ លើសពីនេះ ការវិភាគសំពាធបានបង្ហាញថាកម្រិតសំពាធនៅតែដូចគ្នាទៅនឹងជាលិកាបេះដូងស្រស់រយៈពេល 12 ថ្ងៃក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT និង MS (រូបភាពទី 4d)។
ដើម្បីវិភាគផលប៉ះពាល់រួមរបស់ CTCM និង T3/Dex លើទេសភាពប្រតិចារិកសកលនៃជាលិកាចំណិតបេះដូង យើងបានអនុវត្ត RNAseq លើចំណិតបេះដូងពីលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌ទាំងបួនផ្សេងគ្នា (ទិន្នន័យបន្ថែមទី 1)។ គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ ផ្នែក MT បានបង្ហាញពីភាពស្រដៀងគ្នានៃការប្រតិចារិកខ្ពស់ទៅនឹងជាលិកាបេះដូងស្រស់ ដោយមានត្រឹមតែ 16 ប៉ុណ្ណោះដែលបង្ហាញខុសគ្នាក្នុងចំណោមហ្សែនចំនួន 13,642។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ដូចដែលយើងបានបង្ហាញពីមុន ចំណិត Ctrl បានបង្ហាញហ្សែនដែលបង្ហាញខុសគ្នាចំនួន 1229 បន្ទាប់ពីវប្បធម៌រយៈពេល 10-12 ថ្ងៃ (រូបភាពទី 4e)។ ទិន្នន័យទាំងនេះត្រូវបានបញ្ជាក់ដោយ qRT-PCR នៃហ្សែនបេះដូង និងហ្សែន fibroblast (រូបភាពបន្ថែមទី 7a-c)។ គួរឱ្យចាប់អារម្មណ៍ ផ្នែក Ctrl បានបង្ហាញពីការថយចុះនៃហ្សែនបេះដូង និងហ្សែនវដ្តកោសិកា និងការធ្វើឱ្យសកម្មនៃកម្មវិធីហ្សែនរលាក។ ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញថា ការបំបែកភាពខុសគ្នា ដែលជាធម្មតាកើតឡើងបន្ទាប់ពីការដាំដុះរយៈពេលវែង ត្រូវបានចុះខ្សោយទាំងស្រុងក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT (រូបភាពបន្ថែមទី 8a,b)។ ការសិក្សាដោយប្រុងប្រយ័ត្នលើហ្សែន sarcomere បានបង្ហាញថា មានតែក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT ប៉ុណ្ណោះដែលហ្សែនដែលអ៊ិនកូដ sarcomere (រូបភាពទី 4f) និងឆានែលអ៊ីយ៉ុង (រូបភាពបន្ថែមទី 9) ត្រូវបានថែរក្សា ដោយការពារពួកវាពីការបង្ក្រាបក្រោមលក្ខខណ្ឌ Ctrl, TD និង MC។ ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញថា ជាមួយនឹងការរួមបញ្ចូលគ្នានៃការរំញោចមេកានិច និងការរំញោចសរីរាង្គ (T3/Dex) ប្រតិចារិកចំណិតបេះដូងអាចនៅតែស្រដៀងនឹងចំណិតបេះដូងស្រស់ៗបន្ទាប់ពីរយៈពេល 12 ថ្ងៃក្នុងការដាំដុះ។
ការរកឃើញប្រតិចារិកទាំងនេះត្រូវបានគាំទ្រដោយការពិតដែលថា ភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃ cardiomyocytes នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងត្រូវបានថែរក្សាបានល្អបំផុតក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT រយៈពេល 12 ថ្ងៃ ដូចដែលបានបង្ហាញដោយ connexin 43 ដែលនៅដដែល និងមានទីតាំងនៅកន្លែងតែមួយ (រូបភាពទី 5a)។ លើសពីនេះ ជាលិកាភ្ជាប់នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT ត្រូវបានកាត់បន្ថយគួរឱ្យកត់សម្គាល់បើប្រៀបធៀបទៅនឹង Ctrl និងស្រដៀងគ្នាទៅនឹងផ្នែកបេះដូងស្រស់ៗ (រូបភាពទី 5b)។ ទិន្នន័យទាំងនេះបង្ហាញថា ការរួមបញ្ចូលគ្នានៃការរំញោចមេកានិច និងការព្យាបាលដោយ T3/Dex រក្សារចនាសម្ព័ន្ធបេះដូងនៅក្នុងផ្នែកបេះដូងក្នុងការដាំដុះប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាព។
រូបភាពតំណាងនៃសារធាតុ immunofluorescence នៃ troponin-T (ពណ៌បៃតង), connexin 43 (ពណ៌ក្រហម) និង DAPI (ពណ៌ខៀវ) នៅក្នុងផ្នែកបេះដូងដែលទើបញែកដាច់ពីគេថ្មីៗ (D0) ឬដាំដុះរយៈពេល 12 ថ្ងៃនៅក្នុងលក្ខខណ្ឌដាំដុះផ្នែកបេះដូងទាំងបួន (របារមាត្រដ្ឋាន = 100 µm)។ ការវាស់វែងបរិមាណបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៃភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូង (n = 7 (D0 និង D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC និង D12 MT) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង *p < 0.05 ឬ ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ ការវាស់វែងបរិមាណបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៃភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូង (n = 7 (D0 និង D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC និង D12 MT) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; #### p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង *p < 0.05 ឬ ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ Количественная оценка структурной целостности ткани сердца с помощью искусственного интеллекта D0 (n = 7) D12 MC និង D12 MT) срезов/группу от разных свиней, проведен однофакторный тест ANOVA; ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl) ។ ការវាស់បរិមាណនៃភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធជាលិកាបេះដូងដោយប្រើបញ្ញាសិប្បនិម្មិត (n = 7 (D0 និង D12 Ctrl), ផ្នែក/ក្រុម 5 (D12 TD, D12 MC និង D12 MT) ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា, ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវបានអនុវត្ត; #### p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង *p < 0.05 ឬ ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។对不同猪的心脏组织结构完整性(n = 7(D0 和D12 Ctrl)), 5 (D12 TD、D12 MC 和D12 MT)切片/组)进行人工智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 戈 0.05* 相Ctrl D12 相比) ។对不同猪的心脏结构完整性（n=7（d0和d12 ctrl）（5（d12 td、d12 mc和 d12 mt）巺茽）州进行单向单向单向测试； ########## p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或 ****p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或 ****p < 0.000 )ការវាស់បរិមាណនៃភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធនៃជាលិកាបេះដូងដោយប្រើបញ្ញាសិប្បនិម្មិតនៅក្នុងជ្រូកផ្សេងៗគ្នា (n = 7 (D0 និង D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC និង D12 MT) ផ្នែក/ក្រុម) ជាមួយនឹងការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវ;#### p < 0,0001 по сравнению с D0 និង *p < 0,05 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl)។ #### p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង *p < 0.05 ឬ ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ ខ រូបភាពតំណាង និងការវាស់វែងបរិមាណសម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ Masson's trichrome (របារមាត្រដ្ឋាន = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, និង D12 MC), ចំណិត/ក្រុមចំនួន 9 (D12 MT) ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង ***p < 0.001, ឬ ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ ខ រូបភាពតំណាង និងការវាស់វែងបរិមាណសម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ Masson's trichrome (របារមាត្រដ្ឋាន = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, និង D12 MC), ចំណិត/ក្រុមចំនួន 9 (D12 MT) ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត ANOVA មួយផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0 និង ***p < 0.001, ឬ ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។ b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромным клсет (масштабная линейка = 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MC), 9 (D12 MT) срезов/группу от разных свиней, односторонний тест ANOVA; сравнению ជាមួយ D12 Ctrl) ។ ខ រូបភាពតំណាង និងការវាស់វែងបរិមាណនៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយស្នាមប្រឡាក់ Masson's trichrome (របារមាត្រដ្ឋាន = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MC), ផ្នែក/ក្រុមចំនួន 9 (D12 MT) ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ដែលបានអនុវត្ត ANOVA មួយផ្លូវ; ####p < 0.0001 ទល់នឹង D0 និង ***p < 0.001 ឬ ****p < 0.0001 ទល់នឹង D12 Ctrl)។ b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化(比例尺= 500 µm) (n = 10 (D0, 12) MC)，来自不同猪的9个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分析；####p < 0.0001 与D0 相*p < 0.0001 与D0 相0.0001 与D12 Ctrl 相比) ។ b用 masson 三色染料的心脏切片的代表性和量化（比例尺尺尺 = 500 µm) ( d 1 1 0 µm ) td 和 d12 mc) 来自不同的 9个 d12 mt 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片切片切片切片 切片切片切片切片切片/组，进行单因素方差分析；####p < 0.0001 与D0 相< 戈 0.**** ， 0.0001 与D12 Ctrl 相比) ។ b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромом Массята 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MC), 9 (D12 MT) срезов от разных свиней / группы, один- способ ANOVA <0 , #пособ ANOVA <0 , #0 сравнению с D0, ***p < 0,001 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl)។ ខ រូបភាពតំណាង និងការវាស់វែងបរិមាណនៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយ Masson's trichrome (របារមាត្រដ្ឋាន = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD និង D12 MC), ផ្នែកចំនួន 9 (D12 MT) ពីជ្រូក/ក្រុមផ្សេងៗគ្នា, វិធីសាស្ត្រ ANOVA មួយ; ####p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D0, ***p < 0.001 ឬ ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹង D12 Ctrl)។របារកំហុសតំណាងឱ្យមធ្យមភាគ ± គម្លាតស្តង់ដារ។
ជាចុងក្រោយ សមត្ថភាពរបស់ CTCM ក្នុងការធ្វើត្រាប់តាមជំងឺបេះដូងរីកធំត្រូវបានវាយតម្លៃដោយការបង្កើនការលាតសន្ធឹងជាលិកាបេះដូង។ នៅក្នុង CTCM សម្ពាធបន្ទប់ខ្យល់កំពូលបានកើនឡើងពី 80 mmHg ដល់ 80 mmHg។ សិល្បៈ។ (ការលាតសន្ធឹងធម្មតា) រហូតដល់ 140 mmHg សិល្បៈ។ (រូបភាពទី 6a)។ នេះត្រូវគ្នាទៅនឹងការកើនឡើង 32% នៃការលាតសន្ធឹង (រូបភាពទី 6b) ដែលពីមុនត្រូវបានបង្ហាញថាជាភាគរយនៃការលាតសន្ធឹងដែលត្រូវគ្នាដែលត្រូវការសម្រាប់ផ្នែកបេះដូងដើម្បីសម្រេចបាននូវប្រវែង sarcomere ស្រដៀងគ្នាទៅនឹងអ្វីដែលឃើញនៅក្នុងជំងឺបេះដូងរីកធំ។ ការលាតសន្ធឹង និងល្បឿននៃជាលិកាបេះដូងអំឡុងពេលកន្ត្រាក់ និងការសម្រាកនៅតែថេរក្នុងអំឡុងពេលប្រាំមួយថ្ងៃនៃការដាំដុះ (រូបភាពទី 6c)។ ជាលិកាបេះដូងពីលក្ខខណ្ឌ MT ត្រូវបានទទួលរងនូវការលាតសន្ធឹងធម្មតា (MT (ធម្មតា)) ឬលក្ខខណ្ឌលាតសន្ធឹងហួសប្រមាណ (MT (OS)) រយៈពេលប្រាំមួយថ្ងៃ។ បន្ទាប់ពីរយៈពេលបួនថ្ងៃនៅក្នុងការដាំដុះ សញ្ញាសម្គាល់ជីវសាស្ត្ររីកធំ NT-ProBNP ត្រូវបានកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុកក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT (OS) បើប្រៀបធៀបទៅនឹងលក្ខខណ្ឌ MT (ធម្មតា) (រូបភាពទី 7a)។ លើសពីនេះ បន្ទាប់ពីការដាំដុះរយៈពេលប្រាំមួយថ្ងៃ ទំហំកោសិកានៅក្នុង MT (OS) (រូបភាពទី 7b) បានកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់បើប្រៀបធៀបទៅនឹងផ្នែកនៃបេះដូង MT (ធម្មតា)។ លើសពីនេះ ការផ្លាស់ទីលំនៅនុយក្លេអ៊ែរ NFATC4 បានកើនឡើងគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងជាលិកាដែលលាតសន្ធឹងហួសប្រមាណ (រូបភាពទី 7c)។ លទ្ធផលទាំងនេះបង្ហាញពីការវិវឌ្ឍន៍ជាលំដាប់នៃការកែលំអឡើងវិញខាងរោគសាស្ត្របន្ទាប់ពីការរីកធំហួសប្រមាណ និងគាំទ្រគោលគំនិតដែលថាឧបករណ៍ CTCM អាចត្រូវបានប្រើជាវេទិកាដើម្បីសិក្សាពីសញ្ញានៃការរីកធំនៃបេះដូងដែលបង្កឡើងដោយការលាតសន្ធឹង។
ដានតំណាងនៃសម្ពាធបន្ទប់ខ្យល់ សម្ពាធបន្ទប់សារធាតុរាវ និងការវាស់វែងចលនាជាលិកាបញ្ជាក់ថាសម្ពាធបន្ទប់ផ្លាស់ប្តូរសម្ពាធបន្ទប់សារធាតុរាវ ដែលបណ្តាលឱ្យមានចលនាដែលត្រូវគ្នានៃចំណិតជាលិកា។ ខ. ខ្សែកោងភាគរយលាតសន្ធឹងតំណាង និងអត្រាលាតសន្ធឹងសម្រាប់ផ្នែកជាលិកាដែលលាតសន្ធឹងធម្មតា (ពណ៌ទឹកក្រូច) និងលាតសន្ធឹងលើស (ពណ៌ខៀវ)។ គ. ក្រាហ្វរបារបង្ហាញពីពេលវេលាវដ្ត (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ពេលវេលាកន្ត្រាក់ (n = 18-19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ពេលវេលាសម្រាក (n = 19 ចំណិតក្នុងមួយក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ទំហំនៃចលនាជាលិកា (n = 14 ចំណិត/ក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ល្បឿនស៊ីស្តូលិកកំពូល (n = 14 ចំណិត/ក្រុម ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) និងអត្រាបន្ធូរកំពូល (n = 14 (D0), 15 (D6) ) ផ្នែក/ក្រុម) ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សពីរកន្ទុយមិនបានបង្ហាញពីភាពខុសគ្នាគួរឱ្យកត់សម្គាល់នៅក្នុងប៉ារ៉ាម៉ែត្រណាមួយទេ ដែលបង្ហាញថាប៉ារ៉ាម៉ែត្រទាំងនេះនៅតែថេរក្នុងអំឡុងពេល 6 ថ្ងៃនៃការដាំដុះជាមួយនឹងវ៉ុលលើស។ របារកំហុសតំណាងឱ្យមធ្យម ± គម្លាតស្តង់ដារ។
ការវាស់វែង​កំហាប់ NT-ProBNP នៅក្នុង​ឧបករណ៍​ផ្សព្វផ្សាយ​វប្បធម៌​ពី​ចំណិត​បេះដូង​ដែល​ដាំដុះ​ក្រោម​លក្ខខណ្ឌ​លាតសន្ធឹង​ធម្មតា MT (Norm) ឬ​លាតសន្ធឹង​លើស​កម្រិត (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, និង D4 MTOS) ចំណិត/ក្រុម​ពី​ជ្រូក​ផ្សេងៗគ្នា, ការវិភាគ​វិភាគ​ពីរផ្លូវ​ត្រូវបាន​អនុវត្ត; **p < 0.01 បើ​ធៀប​នឹង​ការលាតសន្ធឹង​ធម្មតា)។ ការវាស់វែងក្រាហ្វរបារនៃកំហាប់ NT-ProBNP នៅក្នុងមេឌៀវប្បធម៌ពីចំណិតបេះដូងដែលដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌលាតសន្ធឹងធម្មតា MT (Norm) ឬលាតសន្ធឹងលើសកម្រិត (OS) (n ​​= 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, និង D4 MTOS) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា, ការវិភាគ ANOVA ពីរផ្លូវត្រូវបានអនុវត្ត; **p < 0.01 បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា)។អ៊ីស្តូក្រាមបរិមាណនៃកំហាប់ NT-ProBNP នៅក្នុងឧបករណ៍ផ្សព្វផ្សាយវប្បធម៌ពីចំណិតបេះដូងដែលដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃការលាតសន្ធឹង MT ធម្មតា (បទដ្ឋាន) ឬលាតសន្ធឹងលើស (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, និង D4).MTOS) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការវិភាគពីរកត្តានៃភាពខុសគ្នាត្រូវបានអនុវត្ត។**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p < 0.01 បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា)។ a 在MT 正常拉伸(Norm) 或过度拉伸(OS) 条件下培养的心脏切片培养基中NT-ProBNP 浓叇的匡MTNorm)、3(D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS）来自不同猪的切片/组，进行双向方差分析； **与渣常。 បរិមាណនៃកំហាប់ NT-ProBNP នៅក្នុងចំណិតបេះដូងដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌ MT ធម្មតា (Norm) ឬ overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS) ពីភាពខុសគ្នា猪的切片/组，可以双向方方发发动 **ធៀបនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា ទំ<0.01)។អ៊ីស្តូក្រាម ការវាស់បរិមាណកំហាប់ NT-ProBNP នៅក្នុងចំណិតបេះដូងដែលដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃការលាតសន្ធឹង MT ធម្មតា (បទដ្ឋាន) ឬលើសកម្រិត (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) និង D4 MTOS) ចំណិត/ក្រុមពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការវិភាគទ្វេភាគីនៃភាពខុសគ្នា;**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p < 0.01 បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា)។ ខ រូបភាពតំណាងសម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយ troponin-T និង WGA (ខាងឆ្វេង) និងការវាស់បរិមាណទំហំកោសិកា (ខាងស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) កោសិកា/ក្រុមពីចំណិតចំនួន 10 ផ្សេងគ្នាពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា។ ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សកន្ទុយពីរត្រូវបានអនុវត្ត; ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា)។ ខ រូបភាពតំណាងសម្រាប់ចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយ troponin-T និង WGA (ខាងឆ្វេង) និងការវាស់បរិមាណទំហំកោសិកា (ខាងស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) កោសិកា/ក្រុមពីចំណិតចំនួន 10 ផ្សេងគ្នាពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា។ ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សពីរកន្ទុយត្រូវបានអនុវត្ត; ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា)។ ខ. размера клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) клеток/группу из 10 разных срезов от разовных свинай, хвостовой t-критерий Стьюдента; ****p < 0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). ខ រូបភាពតំណាងនៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយ troponin-T និង AZP (ខាងឆ្វេង) និងការវាស់បរិមាណទំហំកោសិកា (ខាងស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) កោសិកា/ក្រុមពី 10 ផ្នែកផ្សេងៗគ្នាពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សកន្ទុយពីរត្រូវបានអនុវត្ត; ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹងសំពាធធម្មតា)។ b用肌钙蛋白-T 和WGA（左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代表性图像（n = 330 MTOS)，来自不同猪的10个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组，两进行有尾学生t 检验Ｘ与歋尾学生t 检验Ｘ与歋0.0001) ។ ខ រូបភាពតំណាងនៃចំណិតបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយ calcarein-T និង WGA (ខាងឆ្វេង) និងទំហំកោសិកា (ខាងស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 ពីចំណិតចំនួន 10 ផ្សេងគ្នា (D6 MTNorm)) កោសិកា/ការធ្វើតេស្តកោសិកា ដែលត្រូវបានសាកល្បងដោយសិស្ស; បើប្រៀបធៀបជាមួយនឹងការលាតសន្ធឹងធម្មតា,****p < 0.0001)។ ខ. клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 различных срезов от разных свиней Клетки/группрой, д Стьюдента; ****p < 0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). ខ រូបភាពតំណាងនៃផ្នែកបេះដូងដែលប្រឡាក់ដោយ troponin-T និង AZP (ខាងឆ្វេង) និងការវាស់បរិមាណទំហំកោសិកា (ខាងស្តាំ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ពីផ្នែកផ្សេងៗគ្នាចំនួន 10 ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) កោសិកា/ក្រុម លក្ខណៈវិនិច្ឆ័យកន្ទុយពីរ t របស់សិស្ស; ****p < 0.0001 បើប្រៀបធៀបទៅនឹងពូជធម្មតា)។ c រូបភាពតំណាងសម្រាប់ចំណិតបេះដូង MTOS ថ្ងៃទី 0 និងថ្ងៃទី 6 ដែលត្រូវបានសម្គាល់ដោយ troponin-T និង NFATC4 និងការវាស់បរិមាណនៃការផ្លាស់ទី NFATC4 ទៅកាន់ស្នូលនៃ CMs (n = 4 (D0), ចំណិត/ក្រុម 3 (D6 MTOS) ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា, ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សកន្ទុយពីរត្រូវបានអនុវត្ត; *p < 0.05)។ c រូបភាពតំណាងសម្រាប់ចំណិតបេះដូង MTOS ថ្ងៃទី 0 និងថ្ងៃទី 6 ដែលត្រូវបានសម្គាល់ដោយ troponin-T និង NFATC4 និងការវាស់បរិមាណនៃការផ្លាស់ទី NFATC4 ទៅកាន់ស្នូលនៃ CMs (n = 4 (D0), ចំណិត/ក្រុម 3 (D6 MTOS) ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា, ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សកន្ទុយពីរត្រូវបានអនុវត្ត; *p < 0.05)។ c Репрезентативные изображения для срезов сердца 0 និង 6 дней MTOS, иммуномеченых для тропонина-Тл и NFATC оценка транслокации NFATC4 в ядра кавернозных клеток (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срезов/группу от разных свиней , двусторонний t-критерий Стьюдента *p < 0,05) ។ c រូបភាពតំណាងសម្រាប់ផ្នែកបេះដូងនៅថ្ងៃទី 0 និង 6 នៃ MTOS ដែលមានស្លាកសញ្ញា troponin-T និង NFATC4 និងការវាស់បរិមាណនៃការផ្លាស់ទីលំនៅ NFATC4 នៅក្នុងស្នូលនៃកោសិកា cavernous (n = 4 (D0), ចំណិត/ក្រុមចំនួន 3 (D6 MTOS) ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា) បានអនុវត្តការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សពីរកន្ទុយ; *p < 0.05)។ c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4 免疫标记的第0 天和第6 天MTOS心脏切片的代表性图像，以及来自不同猪的NFATC4 易位至CM 细胞核的量化(n = 4 (爇 MT)) 、3 (D / 6 (爇 MT))进行双尾学生t 检验；*p < 0.05) ។ c រូបភាពតំណាងនៃ calcanin-T និង NFATC4 immunolabeling 第0天和第6天MTOS បំណែកបេះដូង និង NFATC4 ពី NFATC4 ផ្សេងគ្នា 易位至CM កោសិកា nucleus的quantity化 (n = 4 (D0), 3 (D6 礄礄礄礄))时间双尾学生et 电影；*p < 0.05)។ c Репрезентативные изображения срезов сердца MTOS на 0 និង 6 день для иммуномаркировки тропонином-Ти NFATCот4 оценка транслокации NFATC4 в ядра CM от разных свиней (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срез/группа, два- хвостатыйС; 0,05) ។ c រូបភាពតំណាងនៃចំណិតបេះដូង MTOS នៅថ្ងៃទី 0 និងទី 6 សម្រាប់ការសម្គាល់ស្លាកសញ្ញា troponin-T និង NFATC4 និងការវាស់បរិមាណនៃការផ្លាស់ទីលំនៅ NFATC4 នៅក្នុងស្នូលនៃ CM ពីជ្រូកផ្សេងៗគ្នា (n = 4 (D0), ចំណិត 3 (D6 MTOS)/ក្រុម, លក្ខណៈវិនិច្ឆ័យ t ពីរកន្ទុយ របស់សិស្ស; *p < 0.05)។របារកំហុសតំណាងឱ្យមធ្យមភាគ ± គម្លាតស្តង់ដារ។
ការស្រាវជ្រាវសរសៃឈាមបេះដូងបកប្រែតម្រូវឱ្យមានគំរូកោសិកាដែលបង្កើតឡើងវិញនូវបរិស្ថានបេះដូងបានយ៉ាងត្រឹមត្រូវ។ នៅក្នុងការសិក្សានេះ ឧបករណ៍ CTCM មួយត្រូវបានបង្កើតឡើង និងកំណត់លក្ខណៈដែលអាចជំរុញផ្នែកស្តើងបំផុតនៃបេះដូង។ ប្រព័ន្ធ CTCM រួមមានការរំញោចអេឡិចត្រូមេកានិចដែលធ្វើសមកាលកម្មខាងសរីរវិទ្យា និងការបង្កើនសារធាតុរាវ T3 និង Dex។ នៅពេលដែលផ្នែកបេះដូងជ្រូកត្រូវបានប៉ះពាល់នឹងកត្តាទាំងនេះ សមត្ថភាពរស់រានមានជីវិត ភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធ សកម្មភាពមេតាប៉ូលីស និងការបញ្ចេញមតិចម្លងរបស់វានៅតែដដែលដូចនៅក្នុងជាលិកាបេះដូងស្រស់បន្ទាប់ពីការដាំដុះរយៈពេល 12 ថ្ងៃ។ លើសពីនេះ ការលាតសន្ធឹងហួសប្រមាណនៃជាលិកាបេះដូងអាចបណ្តាលឱ្យមានការរីកធំនៃបេះដូងដែលបណ្តាលមកពីការរីកធំនៃបេះដូង។ ជារួម លទ្ធផលទាំងនេះគាំទ្រដល់តួនាទីសំខាន់នៃលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌សរីរវិទ្យាក្នុងការរក្សាបាននូវលក្ខណៈធម្មតានៃបេះដូង និងផ្តល់វេទិកាសម្រាប់ការត្រួតពិនិត្យគ្រឿងញៀន។
កត្តាជាច្រើនរួមចំណែកដល់ការបង្កើតបរិយាកាសល្អប្រសើរបំផុតសម្រាប់មុខងារ និងការរស់រានមានជីវិតរបស់កោសិកាសាច់ដុំបេះដូង។ កត្តាជាក់ស្តែងបំផុតនៃកត្តាទាំងនេះគឺទាក់ទងនឹង (1) អន្តរកម្មអន្តរកោសិកា (2) ការរំញោចអេឡិចត្រូមេកានិច (3) កត្តាសរីរាង្គ និង (4) ស្រទាប់ខាងក្រោមមេតាប៉ូលីក។ អន្តរកម្មកោសិកាទៅកោសិកាសរីរវិទ្យាតម្រូវឱ្យមានបណ្តាញបីវិមាត្រស្មុគស្មាញនៃប្រភេទកោសិកាច្រើនដែលគាំទ្រដោយម៉ាទ្រីសក្រៅកោសិកា។ អន្តរកម្មកោសិកាស្មុគស្មាញបែបនេះពិបាកក្នុងការកសាងឡើងវិញនៅក្នុងវីត្រូដោយការដាំដុះរួមគ្នានៃប្រភេទកោសិកានីមួយៗ ប៉ុន្តែអាចសម្រេចបានយ៉ាងងាយស្រួលដោយប្រើលក្ខណៈសរីរវិទ្យានៃផ្នែកបេះដូង។
ការលាតសន្ធឹងមេកានិច និងការរំញោចអគ្គិសនីនៃកោសិកាសាច់ដុំបេះដូង គឺមានសារៈសំខាន់ណាស់សម្រាប់ការរក្សាលក្ខណៈរូបីបេះដូង33,34,35។ ខណៈពេលដែលការរំញោចមេកានិចត្រូវបានគេប្រើប្រាស់យ៉ាងទូលំទូលាយសម្រាប់ការកែតម្រូវ hiPSC-CM និងភាពចាស់ទុំ ការសិក្សាដ៏ប្រណិតជាច្រើនថ្មីៗនេះបានព្យាយាមរំញោចមេកានិចនៃចំណិតបេះដូងក្នុងការដាំដុះដោយប្រើបន្ទុកអ័ក្សឯកតោភាគី។ ការសិក្សាទាំងនេះបង្ហាញថា ការផ្ទុកមេកានិចអ័ក្សឯកតោភាគី 2D មានឥទ្ធិពលវិជ្ជមានទៅលើលក្ខណៈរូបីនៃបេះដូងអំឡុងពេលដាំដុះ។ នៅក្នុងការសិក្សាទាំងនេះ ផ្នែកនៃបេះដូងត្រូវបានផ្ទុកដោយកម្លាំងទាញអ៊ីសូម៉ែត្រិច17 ការផ្ទុកអូសូតូនិចលីនេអ៊ែរ18 ឬវដ្តបេះដូងត្រូវបានបង្កើតឡើងវិញដោយប្រើមតិប្រតិកម្មបញ្ជូនកម្លាំង និងដ្រាយភាពតានតឹង។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ វិធីសាស្រ្តទាំងនេះប្រើការលាតសន្ធឹងជាលិកាអ័ក្សឯកតោភាគីដោយគ្មានការបង្កើនប្រសិទ្ធភាពបរិស្ថាន ដែលបណ្តាលឱ្យមានការបង្ក្រាបហ្សែនបេះដូងជាច្រើន ឬការបញ្ចេញហ្សែនច្រើនពេកដែលទាក់ទងនឹងការឆ្លើយតបលាតសន្ធឹងមិនប្រក្រតី។ CTCM ដែលបានពិពណ៌នានៅទីនេះផ្តល់នូវការរំញោចអេឡិចត្រូមេកានិច 3D ដែលធ្វើត្រាប់តាមវដ្តបេះដូងធម្មជាតិទាក់ទងនឹងពេលវេលាវដ្ត និងការលាតសន្ធឹងសរីរវិទ្យា (ការលាតសន្ធឹង 25% ស៊ីស្តូល 40% ឌីអាស្តូល 60% និងចង្វាក់ 72 ក្នុងមួយនាទី)។ ទោះបីជាការរំញោចមេកានិចបីវិមាត្រនេះតែម្នាក់ឯងមិនគ្រប់គ្រាន់ដើម្បីរក្សាភាពសុចរិតនៃជាលិកាក៏ដោយ ការរួមបញ្ចូលគ្នានៃការរំញោចអរម៉ូន និងការរំញោចមេកានិចដោយប្រើ T3/Dex គឺត្រូវបានទាមទារដើម្បីរក្សាភាពរស់រវើក មុខងារ និងភាពសុចរិតនៃជាលិកាបានគ្រប់គ្រាន់។
កត្តា​កំប្លែង​ដើរតួនាទី​យ៉ាងសំខាន់​ក្នុង​ការ​កែប្រែ​លក្ខណៈ​បេះដូង​របស់​មនុស្ស​ពេញវ័យ។ ចំណុច​នេះ​ត្រូវ​បាន​គូសបញ្ជាក់​នៅក្នុង​ការសិក្សា HiPS-CM ដែល T3 និង Dex ត្រូវ​បាន​បន្ថែម​ទៅក្នុង​ឧបករណ៍​ផ្សព្វផ្សាយ​វប្បធម៌​ដើម្បី​ពន្លឿន​ភាពចាស់ទុំ​កោសិកា។ T3 អាច​មាន​ឥទ្ធិពល​លើ​ការដឹកជញ្ជូន​អាស៊ីត​អាមីណូ ស្ករ និង​កាល់ស្យូម​ឆ្លងកាត់​ភ្នាស​កោសិកា36។ លើសពីនេះ T3 ជំរុញ​ការបញ្ចេញមតិ MHC-α និង​ការថយចុះ​នៃ MHC-β ដែល​ជំរុញ​ការបង្កើត​សាច់ដុំ ...
លទ្ធផលរបស់យើងបង្ហាញថា ការរំញោចមេកានិចរាងកាយ (MS) បានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវដំណើរការវប្បធម៌ទាំងមូលបើប្រៀបធៀបទៅនឹង Ctrl ប៉ុន្តែបានបរាជ័យក្នុងការរក្សាលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិត ភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធ និងការបញ្ចេញមតិបេះដូងក្នុងរយៈពេល 12 ថ្ងៃក្នុងការវប្បធម៌។ បើប្រៀបធៀបទៅនឹង Ctrl ការបន្ថែម T3 និង Dex ទៅក្នុងវប្បធម៌ CTCM (MT) បានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើងនូវលទ្ធភាពរស់រានមានជីវិត និងរក្សាទម្រង់ប្រតិចារិកស្រដៀងគ្នា ភាពសុចរិតនៃរចនាសម្ព័ន្ធ និងសកម្មភាពមេតាប៉ូលីសជាមួយនឹងជាលិកាបេះដូងស្រស់រយៈពេល 12 ថ្ងៃ។ លើសពីនេះ តាមរយៈការគ្រប់គ្រងកម្រិតនៃការលាតសន្ធឹងជាលិកា គំរូ hypertrophy បេះដូងដែលបង្កឡើងដោយ hyperextension ត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយប្រើ STCM ដែលបង្ហាញពីភាពបត់បែននៃប្រព័ន្ធ STCM។ គួរកត់សម្គាល់ថា ទោះបីជាការរៀបចំឡើងវិញនៃបេះដូង និងជាលិកាភ្ជាប់ជាធម្មតាពាក់ព័ន្ធនឹងសរីរាង្គដែលនៅដដែលដែលកោសិកាឈាមរត់អាចផ្តល់ cytokines សមស្របក៏ដូចជា phagocytosis និងកត្តារៀបចំឡើងវិញផ្សេងទៀតក៏ដោយ ផ្នែកនៃបេះដូងនៅតែអាចធ្វើត្រាប់តាមដំណើរការ fibrotic ក្នុងការឆ្លើយតបទៅនឹងភាពតានតឹង និងរបួស។ នេះត្រូវបានវាយតម្លៃពីមុននៅក្នុងគំរូចំណិតបេះដូងនេះ។ គួរកត់សម្គាល់ថាប៉ារ៉ាម៉ែត្រ CTCM អាចត្រូវបានកែប្រែដោយការផ្លាស់ប្តូរសម្ពាធ/ទំហំអគ្គិសនី និងប្រេកង់ដើម្បីក្លែងធ្វើលក្ខខណ្ឌជាច្រើនដូចជា tachycardia, bradycardia និងការគាំទ្រចរន្តឈាមមេកានិច (បេះដូងដែលមិនមានផ្ទុកមេកានិច)។ នេះធ្វើឱ្យប្រព័ន្ធនេះក្លាយជាប្រព័ន្ធមធ្យមសម្រាប់ការធ្វើតេស្តថ្នាំ។ សមត្ថភាពរបស់ CTCM ក្នុងការធ្វើជាគំរូនៃជំងឺលើសឈាមបេះដូងដែលបង្កឡើងដោយការងារហួសកម្លាំង បើកផ្លូវសម្រាប់ការសាកល្បងប្រព័ន្ធនេះសម្រាប់ការព្យាបាលផ្ទាល់ខ្លួន។ សរុបមក ការសិក្សាបច្ចុប្បន្នបង្ហាញថា ការលាតសន្ធឹងមេកានិច និងការរំញោចសរីរាង្គបេះដូងគឺមានសារៈសំខាន់សម្រាប់ការរក្សាវប្បធម៌នៃផ្នែកជាលិកាបេះដូង។
ទោះបីជាទិន្នន័យដែលបង្ហាញនៅទីនេះបង្ហាញថា CTCM គឺជាវេទិកាដ៏ជោគជ័យមួយសម្រាប់ការធ្វើគំរូសាច់ដុំបេះដូងដែលនៅដដែលក៏ដោយ វិធីសាស្ត្រដាំដុះនេះមានដែនកំណត់មួយចំនួន។ ដែនកំណត់ចម្បងនៃការដាំដុះ CTCM គឺថាវាដាក់ភាពតានតឹងមេកានិចថាមវន្តជាបន្តបន្ទាប់លើចំណិតបេះដូង ដែលរារាំងសមត្ថភាពក្នុងការត្រួតពិនិត្យការកន្ត្រាក់បេះដូងយ៉ាងសកម្មក្នុងអំឡុងពេលវដ្តនីមួយៗ។ លើសពីនេះ ដោយសារតែទំហំតូចនៃផ្នែកបេះដូង (7 ម.ម) សមត្ថភាពក្នុងការវាយតម្លៃមុខងារស៊ីស្តូលិកនៅខាងក្រៅប្រព័ន្ធដាំដុះដោយប្រើឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាកម្លាំងប្រពៃណីមានកម្រិត។ នៅក្នុងសាត្រាស្លឹករឹតបច្ចុប្បន្ន យើងយកឈ្នះលើដែនកំណត់នេះដោយផ្នែកដោយវាយតម្លៃវ៉ុលអុបទិកជាសូចនាករនៃមុខងារកន្ត្រាក់។ ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយ ដែនកំណត់នេះនឹងត្រូវការការងារបន្ថែមទៀត ហើយអាចត្រូវបានដោះស្រាយនាពេលអនាគតដោយការណែនាំវិធីសាស្រ្តសម្រាប់ការត្រួតពិនិត្យអុបទិកនៃមុខងារនៃចំណិតបេះដូងនៅក្នុងការដាំដុះ ដូចជាការគូសផែនទីអុបទិកដោយប្រើកាល់ស្យូម និងថ្នាំជ្រលក់ដែលងាយនឹងវ៉ុល។ ដែនកំណត់មួយទៀតរបស់ CTCM គឺថាគំរូការងារមិនរៀបចំភាពតានតឹងខាងសរីរវិទ្យា (ផ្ទុកជាមុន និងផ្ទុកក្រោយ) ទេ។ នៅក្នុង CTCM សម្ពាធត្រូវបានជំរុញក្នុងទិសដៅផ្ទុយគ្នាដើម្បីបង្កើតឡើងវិញនូវការលាតសន្ធឹងសរីរវិទ្យា 25% នៅក្នុងឌីអាស្តូល (លាតសន្ធឹងពេញ) និងស៊ីស្តូល (រយៈពេលនៃការកន្ត្រាក់អំឡុងពេលរំញោចអគ្គិសនី) នៅក្នុងជាលិកាធំៗ។ ដែនកំណត់នេះគួរតែត្រូវបានដកចេញនៅក្នុងការរចនា CTCM នាពេលអនាគតដោយសម្ពាធគ្រប់គ្រាន់លើជាលិកាបេះដូងពីភាគីទាំងសងខាង និងដោយអនុវត្តទំនាក់ទំនងសម្ពាធ-បរិមាណពិតប្រាកដដែលកើតឡើងនៅក្នុងបន្ទប់នៃបេះដូង។
ការរៀបចំឡើងវិញដែលបង្កឡើងដោយការលាតសន្ធឹងហួសប្រមាណដែលបានរាយការណ៍នៅក្នុងសាត្រាស្លឹករឹតនេះត្រូវបានកំណត់ចំពោះការធ្វើត្រាប់តាមសញ្ញា hyperstretch hypertrophic។ ដូច្នេះ គំរូនេះអាចជួយក្នុងការសិក្សាអំពីសញ្ញា hypertrophic ដែលបង្កឡើងដោយការលាតសន្ធឹងដោយមិនចាំបាច់មានកត្តា humoral ឬសរសៃប្រសាទ (ដែលមិនមាននៅក្នុងប្រព័ន្ធនេះ)។ ការសិក្សាបន្ថែមទៀតគឺត្រូវការដើម្បីបង្កើនពហុភាពនៃ CTCM ឧទាហរណ៍ ការដាំដុះរួមគ្នាជាមួយកោសិកាភាពស៊ាំ កត្តា humoral ក្នុងប្លាស្មាដែលចរាចរ និង innervation នៅពេលដែលដាំដុះរួមគ្នាជាមួយកោសិកាសរសៃប្រសាទនឹងធ្វើអោយប្រសើរឡើងនូវលទ្ធភាពនៃការធ្វើគំរូជំងឺជាមួយ CTCM។
ជ្រូកចំនួន ១៣ ក្បាលត្រូវបានប្រើប្រាស់ក្នុងការសិក្សានេះ។ នីតិវិធីសត្វទាំងអស់ត្រូវបានអនុវត្តស្របតាមគោលការណ៍ណែនាំរបស់ស្ថាប័ន និងត្រូវបានអនុម័តដោយគណៈកម្មាធិការថែទាំ និងប្រើប្រាស់សត្វស្ថាប័ននៃសាកលវិទ្យាល័យ Louisville។ ក្លោងទ្វារអាអកត្រូវបានខ្ទាស់ ហើយបេះដូងត្រូវបានបញ្ចូលជាមួយនឹងថ្នាំ cardioplegia មាប់មគចំនួន ១ លីត្រ (NaCl ១១០ mM, CaCl២ ១.២ mM, KCl ១៦ mM, MgCl២ ១៦ mM, NaHCO៣ ១០ mM, heparin ៥ U/mL, pH រហូតដល់ ៧.៤); បេះដូងត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងដំណោះស្រាយត្រជាក់ដូចទឹកកករហូតដល់ដឹកជញ្ជូនទៅមន្ទីរពិសោធន៍លើទឹកកក ដែលជាធម្មតាចំណាយពេលតិចជាង ១០ នាទី។ បេះដូងត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងដំណោះស្រាយត្រជាក់ដូចទឹកកករហូតដល់ដឹកជញ្ជូនទៅមន្ទីរពិសោធន៍លើទឹកកក ដែលជាធម្មតាចំណាយពេលតិចជាង ១០ នាទី។ сердца хранили в ледяном кардиоплегическом растворе до транспортировки в лабораторию на льду, что обаты បេះដូងត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងដំណោះស្រាយត្រជាក់ដូចទឹកកករហូតដល់ការដឹកជញ្ជូនទៅមន្ទីរពិសោធន៍លើទឹកកក ដែលជាធម្មតាចំណាយពេលតិចជាង ១០ នាទី។将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟។将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟។ Держите сердца в ледяной кардиоплегии до транспортировки в лабораторию на льду, обычно <10 мин. ទុកបេះដូងឱ្យនៅលើទឹកកក ជំងឺបេះដូងរហូតដល់បញ្ជូនទៅមន្ទីរពិសោធន៍លើទឹកកក ជាធម្មតាតិចជាង ១០ នាទី។
ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានបង្កើតឡើងនៅក្នុងកម្មវិធីរចនាដោយកុំព្យូទ័រ (CAD) របស់ SolidWorks។ បន្ទប់ដាំដុះ បន្ទប់បែងចែក និងបន្ទប់ខ្យល់ត្រូវបានផលិតពីផ្លាស្ទិចអាគ្រីលីកថ្លា CNC។ ចិញ្ចៀនបម្រុងដែលមានអង្កត់ផ្ចិត 7 មីលីម៉ែត្រត្រូវបានផលិតពីប៉ូលីអេទីឡែនដង់ស៊ីតេខ្ពស់ (HDPE) នៅចំកណ្តាល និងមានចង្អូររាងអក្សរ O ដើម្បីដាក់ចិញ្ចៀនរាងអក្សរ O ស៊ីលីកូនដែលប្រើសម្រាប់ផ្សាភ្ជាប់ឧបករណ៍ផ្សព្វផ្សាយនៅខាងក្រោម។ ភ្នាសស៊ីលីកាស្តើងមួយបំបែកបន្ទប់ដាំដុះចេញពីចានបំបែក។ ភ្នាសស៊ីលីកូនត្រូវបានកាត់ដោយឡាស៊ែរពីសន្លឹកស៊ីលីកូនកម្រាស់ 0.02 អ៊ីញ និងមានភាពរឹង 35A។ ប្រដាប់បិទជិតស៊ីលីកូនខាងក្រោម និងខាងលើត្រូវបានកាត់ដោយឡាស៊ែរពីសន្លឹកស៊ីលីកូនកម្រាស់ 1/16 អ៊ីញ និងមានភាពរឹង 50A។ វីស និងគ្រាប់ស្លាបដែកអ៊ីណុក 316L ត្រូវបានប្រើសម្រាប់តោងប្លុក និងបង្កើតការផ្សាភ្ជាប់ខ្យល់។
បន្ទះសៀគ្វីបោះពុម្ព (PCB) ដែលឧទ្ទិសដល់ការរចនាត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីរួមបញ្ចូលជាមួយប្រព័ន្ធ C-PACE-EM។ រន្ធភ្ជាប់ម៉ាស៊ីនស្វីសនៅលើបន្ទះសៀគ្វី PCB ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងអេឡិចត្រូតក្រាហ្វីតដោយខ្សែស្ពាន់ស្រោបប្រាក់ និងវីសសំរិទ្ធ 0-60 ដែលវីសចូលទៅក្នុងអេឡិចត្រូត។ បន្ទះសៀគ្វីបោះពុម្ពត្រូវបានដាក់នៅក្នុងគម្របម៉ាស៊ីនបោះពុម្ព 3D។
ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយឧបករណ៍បញ្ជាខ្យល់ដែលអាចសរសេរកម្មវិធីបាន (PPD) ដែលបង្កើតសម្ពាធឈាមរត់ដែលគ្រប់គ្រងបានស្រដៀងនឹងវដ្តបេះដូង។ នៅពេលដែលសម្ពាធនៅខាងក្នុងបន្ទប់ខ្យល់កើនឡើង ភ្នាសស៊ីលីកូនដែលអាចបត់បែនបានពង្រីកឡើងលើ ដោយបង្ខំឧបករណ៍ផ្ទុកនៅក្រោមកន្លែងជាលិកា។ តំបន់នៃជាលិកានឹងត្រូវបានលាតសន្ធឹងដោយការបណ្តេញសារធាតុរាវនេះ ដោយធ្វើត្រាប់តាមការពង្រីកសរីរវិទ្យានៃបេះដូងក្នុងអំឡុងពេល diastole ។ នៅចំណុចកំពូលនៃការសម្រាក ការរំញោចអគ្គិសនីត្រូវបានអនុវត្តតាមរយៈអេឡិចត្រូតក្រាហ្វីត ដែលបានកាត់បន្ថយសម្ពាធនៅក្នុងបន្ទប់ខ្យល់ និងបណ្តាលឱ្យមានការកន្ត្រាក់នៃផ្នែកជាលិកា។ នៅខាងក្នុងបំពង់គឺជាសន្ទះបិទបើក hemostatic ជាមួយនឹងឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាសម្ពាធដើម្បីរកឃើញសម្ពាធនៅក្នុងប្រព័ន្ធខ្យល់។ សម្ពាធដែលចាប់បានដោយឧបករណ៍ចាប់សញ្ញាសម្ពាធត្រូវបានអនុវត្តទៅឧបករណ៍ប្រមូលទិន្នន័យដែលភ្ជាប់ទៅនឹងកុំព្យូទ័រយួរដៃ។ នេះអនុញ្ញាតឱ្យមានការត្រួតពិនិត្យជាបន្តបន្ទាប់នៃសម្ពាធនៅក្នុងបន្ទប់ឧស្ម័ន។ នៅពេលដែលសម្ពាធបន្ទប់អតិបរមាត្រូវបានឈានដល់ (ស្តង់ដារ 80 mmHg, 140 mmHg OS) ឧបករណ៍ទទួលទិន្នន័យត្រូវបានបញ្ជាឱ្យផ្ញើសញ្ញាទៅប្រព័ន្ធ C-PACE-EM ដើម្បីបង្កើតសញ្ញាវ៉ុលពីរដំណាក់កាលរយៈពេល 2 ms កំណត់ទៅ 4 V។
ផ្នែកបេះដូងត្រូវបានទទួល ហើយលក្ខខណ្ឌវប្បធម៌នៅក្នុងអណ្តូងចំនួន 6 ត្រូវបានអនុវត្តដូចខាងក្រោម៖ ផ្ទេរបេះដូងដែលប្រមូលផលពីនាវាផ្ទេរទៅថាសដែលមានកន្លែងត្រជាក់ (៤អង្សាសេ)។ បន្ទប់ខាងឆ្វេងត្រូវបានញែកដោយកាំបិតមាប់មគ ហើយកាត់ជាបំណែកៗទំហំ 1-2 សង់ទីម៉ែត្រគូប។ ប្លុកជាលិកាទាំងនេះត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងទ្រជាលិកាជាមួយនឹងសារធាតុស្អិតជាលិកា ហើយដាក់ក្នុងអាងងូតទឹកជាលិកាមីក្រូតូមរំញ័រដែលមានដំណោះស្រាយរបស់ Tyrode និងបន្ថែមអុកស៊ីសែនជាបន្តបន្ទាប់ (3 ក្រាម/លីត្រ 2,3-butanedione monooxime (BDM), 140 mM NaCl (8.18 ក្រាម)។ 6 mM KCl (0.447 ក្រាម) 10 mM D-glucose (1.86 ក្រាម) 10 mM HEPES (2.38 ក្រាម) 1 mM MgCl2 (ដំណោះស្រាយ 1 មីលីលីត្រ 1 M) 1.8 mM CaCl2 (ដំណោះស្រាយ 1.8 មីលីលីត្រ 1 M) រហូតដល់ 1 L ddH2O)។ មីក្រូតូមរំញ័រត្រូវបានកំណត់ឱ្យកាត់ចំណិតក្រាស់ 300 µm ក្នុងប្រេកង់ 80 Hz ទំហំរំញ័រផ្ដេក 2 mm និងអត្រាជឿនលឿន 0.03 mm/s។ អាងងូតទឹកជាលិកាត្រូវបានហ៊ុំព័ទ្ធដោយទឹកកកដើម្បីរក្សាដំណោះស្រាយឱ្យត្រជាក់ ហើយសីតុណ្ហភាពត្រូវបានរក្សានៅសីតុណ្ហភាព 4°C។ ផ្ទេរផ្នែកជាលិកាពីអាងងូតទឹកមីក្រូតូមទៅអាងភ្ញាស់ដែលមានដំណោះស្រាយ Tyrode ដែលមានអុកស៊ីសែនជាបន្តបន្ទាប់លើទឹកកករហូតដល់ទទួលបានផ្នែកគ្រប់គ្រាន់សម្រាប់ចានវប្បធម៌មួយ។ សម្រាប់ការដាំដុះ transwell ផ្នែកជាលិកាត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងជើងទ្រ polyurethane ទទឹង 6 mm ដែលគ្មានមេរោគ ហើយដាក់ក្នុងឧបករណ៍ផ្ទុកដែលបានធ្វើឱ្យប្រសើរឡើង 6 ml (ឧបករណ៍ផ្ទុក 199, 1x ITS supplement, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-alkaline និង 2X antibiotic-antifungal)។ ការរំញោចអគ្គិសនី (10 V, ប្រេកង់ 1.2 Hz) ត្រូវបានអនុវត្តទៅផ្នែកជាលិកាតាមរយៈ C-Pace។ សម្រាប់លក្ខខណ្ឌ TD, T3 ស្រស់ និង Dex ត្រូវបានបន្ថែមនៅ 100 nM និង 1 μM នៅពេលផ្លាស់ប្តូរឧបករណ៍ផ្ទុកនីមួយៗ។ ឧបករណ៍​ផ្ទុក​ត្រូវ​បាន​ធ្វើ​ឲ្យ​ឆ្អែត​ដោយ​អុកស៊ីសែន​មុន​ពេល​ជំនួស 3 ដង​ក្នុង​មួយថ្ងៃ។ ផ្នែក​ជាលិកា​ត្រូវ​បាន​ដាំដុះ​ក្នុង​ម៉ាស៊ីន​ភ្ញាស់​នៅសីតុណ្ហភាព 37°C និង 5% CO2។
សម្រាប់ការដាំដុះ CTCM ផ្នែកជាលិកាត្រូវបានដាក់នៅលើម៉ាស៊ីនបោះពុម្ព 3D ដែលផលិតតាមតម្រូវការនៅក្នុងចាន Petri ដែលមានដំណោះស្រាយ Tyrode ដែលបានកែប្រែ។ ឧបករណ៍នេះត្រូវបានរចនាឡើងដើម្បីបង្កើនទំហំនៃចំណិតបេះដូងចំនួន 25% នៃផ្ទៃរង្វង់ទ្រទ្រង់។ នេះត្រូវបានធ្វើឡើងដើម្បីកុំឱ្យផ្នែកនៃបេះដូងលាតសន្ធឹងបន្ទាប់ពីត្រូវបានផ្ទេរពីដំណោះស្រាយ Tyrode ទៅឧបករណ៍ផ្ទុក និងក្នុងអំឡុងពេល diastole ។ ដោយប្រើកាវ histoacrylic ផ្នែកដែលមានកម្រាស់ 300 µm ត្រូវបានជួសជុលនៅលើរង្វង់ទ្រទ្រង់ដែលមានអង្កត់ផ្ចិត 7 mm ។ បន្ទាប់ពីភ្ជាប់ផ្នែកជាលិកាទៅនឹងរង្វង់ទ្រទ្រង់ សូមកាត់ផ្នែកជាលិកាលើសចេញ ហើយដាក់ផ្នែកជាលិកាដែលភ្ជាប់ត្រឡប់ទៅក្នុងអាងងូតទឹកនៃដំណោះស្រាយ Tyrode លើទឹកកក (4°C) រហូតដល់ផ្នែកគ្រប់គ្រាន់ត្រូវបានរៀបចំសម្រាប់ឧបករណ៍មួយ។ ពេលវេលាដំណើរការសរុបសម្រាប់ឧបករណ៍ទាំងអស់មិនគួរលើសពី 2 ម៉ោង។ បន្ទាប់ពីផ្នែកជាលិកាចំនួន 6 ត្រូវបានភ្ជាប់ទៅនឹងរង្វង់ទ្រទ្រង់របស់ពួកគេ ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានផ្គុំ។ បន្ទប់ដាំដុះ CTCM ត្រូវបានបំពេញជាមុនជាមួយនឹងឧបករណ៍ផ្ទុកដែលមានអុកស៊ីសែនជាមុនចំនួន 21 ml ។ ផ្ទេរផ្នែកជាលិកាទៅបន្ទប់ដាំដុះ ហើយយកពពុះខ្យល់ចេញដោយប្រុងប្រយ័ត្នដោយប្រើបំពង់។ បន្ទាប់មក ផ្នែកជាលិកាត្រូវបាននាំចូលទៅក្នុងរន្ធ ហើយចុចថ្នមៗឱ្យនៅនឹងកន្លែង។ ជាចុងក្រោយ ដាក់គម្របអេឡិចត្រូតនៅលើឧបករណ៍ ហើយផ្ទេរឧបករណ៍ទៅឧបករណ៍ភ្ញាស់។ បន្ទាប់មកភ្ជាប់ CTCM ទៅនឹងបំពង់ខ្យល់ និងប្រព័ន្ធ C-PACE-EM។ ឧបករណ៍បញ្ជាខ្យល់បើក ហើយសន្ទះបិទបើកខ្យល់បើក CTCM។ ប្រព័ន្ធ C-PACE-EM ត្រូវបានកំណត់រចនាសម្ព័ន្ធដើម្បីផ្តល់ 4 V នៅ 1.2 Hz ក្នុងអំឡុងពេលបង្កើនល្បឿនពីរដំណាក់កាលរយៈពេល 2 ms។ ឧបករណ៍ផ្ទុកត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរពីរដងក្នុងមួយថ្ងៃ ហើយអេឡិចត្រូតត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរម្តងក្នុងមួយថ្ងៃ ដើម្បីជៀសវាងការប្រមូលផ្តុំក្រាហ្វីតនៅលើអេឡិចត្រូត។ បើចាំបាច់ ផ្នែកជាលិកាអាចត្រូវបានយកចេញពីអណ្តូងវប្បធម៌របស់វា ដើម្បីបណ្តេញពពុះខ្យល់ណាមួយដែលអាចធ្លាក់នៅក្រោមពួកវា។ សម្រាប់លក្ខខណ្ឌព្យាបាល MT T3/Dex ត្រូវបានបន្ថែមស្រស់ជាមួយនឹងការផ្លាស់ប្តូរឧបករណ៍ផ្ទុកនីមួយៗជាមួយ 100 nM T3 និង 1 μM Dex។ ឧបករណ៍ CTCM ត្រូវបានដាំដុះនៅក្នុងឧបករណ៍ភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C និង 5% CO2។
ដើម្បីទទួលបានគន្លងលាតសន្ធឹងនៃចំណិតបេះដូង ប្រព័ន្ធកាមេរ៉ាពិសេសមួយត្រូវបានបង្កើតឡើង។ កាមេរ៉ា SLR (Canon Rebel T7i, Canon, តូក្យូ, ជប៉ុន) ត្រូវបានប្រើប្រាស់ជាមួយកែវម៉ាក្រូ Navitar Zoom 7000 18-108mm (Navitar, San Francisco, CA)។ ការមើលឃើញត្រូវបានអនុវត្តនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់បន្ទាប់ពីជំនួសឧបករណ៍ផ្ទុកដោយឧបករណ៍ផ្ទុកថ្មី។ កាមេរ៉ាត្រូវបានដាក់នៅមុំ 51° ហើយវីដេអូត្រូវបានថតក្នុងល្បឿន 30 ហ្វ្រេមក្នុងមួយវិនាទី។ ដំបូង កម្មវិធីប្រភពបើកចំហ (MUSCLEMOTION43) ត្រូវបានប្រើជាមួយ Image-J ដើម្បីវាស់បរិមាណចលនានៃចំណិតបេះដូង។ របាំងនេះត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយប្រើ MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) ដើម្បីកំណត់តំបន់ដែលចាប់អារម្មណ៍សម្រាប់ការវាយដំចំណិតបេះដូងដើម្បីជៀសវាងសំឡេងរំខាន។ របាំងដែលបែងចែកដោយដៃត្រូវបានអនុវត្តចំពោះរូបភាពទាំងអស់នៅក្នុងលំដាប់ស៊ុម ហើយបន្ទាប់មកបញ្ជូនទៅកម្មវិធីជំនួយ MUSCLEMOTION។ Muscle Motion ប្រើអាំងតង់ស៊ីតេជាមធ្យមនៃភីកសែលនៅក្នុងស៊ុមនីមួយៗដើម្បីវាស់បរិមាណចលនារបស់វាទាក់ទងទៅនឹងស៊ុមយោង។ ទិន្នន័យត្រូវបានកត់ត្រា ត្រង និងប្រើដើម្បីវាស់បរិមាណពេលវេលាវដ្ត និងវាយតម្លៃការលាតសន្ធឹងជាលិកាក្នុងអំឡុងពេលវដ្តបេះដូង។ វីដេអូដែលបានថតត្រូវបានដំណើរការឡើងវិញដោយប្រើតម្រងឌីជីថលដំណាក់កាលសូន្យលំដាប់ទីមួយ។ ដើម្បីវាស់បរិមាណនៃការលាតសន្ធឹងជាលិកា (កំពូលទៅកំពូល) ការវិភាគកំពូលទៅកំពូលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីបែងចែករវាងកំពូល និងចំណុចទាបនៅក្នុងសញ្ញាដែលបានថត។ លើសពីនេះ ការបន្ថយនិន្នាការត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើពហុធាលំដាប់ទី 6 ដើម្បីលុបបំបាត់ការរសាត់សញ្ញា។ កូដកម្មវិធីត្រូវបានបង្កើតឡើងនៅក្នុង MATLAB ដើម្បីកំណត់ចលនាជាលិកាសកល ពេលវេលាវដ្ត ពេលវេលាសម្រាក និងពេលវេលាកន្ត្រាក់ (កូដកម្មវិធីបន្ថែម 44)។
ចំពោះការវិភាគភាពតានតឹង ដោយប្រើវីដេអូដូចគ្នាដែលបង្កើតឡើងសម្រាប់ការវាយតម្លៃការលាតសន្ធឹងមេកានិច ដំបូងយើងបានតាមដានរូបភាពពីរដែលតំណាងឱ្យកំពូលចលនា (ចំណុចចលនាខ្ពស់បំផុត (ខាងលើ) និងទាបបំផុត (ខាងក្រោម)) យោងទៅតាមកម្មវិធី MUSCLEMOTION។ បន្ទាប់មកយើងបានបែងចែកតំបន់ជាលិកា ហើយអនុវត្តទម្រង់នៃក្បួនដោះស្រាយការដាក់ស្រមោលទៅលើជាលិកាដែលបានបែងចែក (រូបភាពបន្ថែម 2a)។ ជាលិកាដែលបានបែងចែកត្រូវបានបែងចែកជាដប់ផ្ទៃរង ហើយភាពតានតឹងលើផ្ទៃនីមួយៗត្រូវបានគណនាដោយប្រើសមីការដូចខាងក្រោម៖ ភាពតានតឹង = (Sup-Sdown)/Sdown ដែល Sup និង Sdown គឺជាចម្ងាយនៃរូបរាងពីស្រមោលខាងលើ និងខាងក្រោមនៃក្រណាត់រៀងៗខ្លួន (រូបភាពបន្ថែម 2b)។
ផ្នែកបេះដូងត្រូវបានជួសជុលក្នុង paraformaldehyde 4% រយៈពេល 48 ម៉ោង។ ជាលិកាជួសជុលត្រូវបានខ្សោះជាតិទឹកក្នុង sucrose 10% និង 20% រយៈពេល 1 ម៉ោង បន្ទាប់មកក្នុង sucrose 30% ពេញមួយយប់។ បន្ទាប់មកផ្នែកទាំងនោះត្រូវបានបង្កប់ក្នុងសមាសធាតុសីតុណ្ហភាពកាត់ល្អបំផុត (សមាសធាតុ OCT) ហើយកកបន្តិចម្តងៗក្នុងអាងងូតទឹក isopentane/ទឹកកកស្ងួត។ រក្សាទុកប្លុកបង្កប់ OCT នៅ -80 °C រហូតដល់ការបំបែក។ ស្លាយត្រូវបានរៀបចំជាផ្នែកដែលមានកម្រាស់ 8 μm។
ដើម្បីយក OCT ចេញពីផ្នែកបេះដូង សូមកំដៅស្លាយនៅលើប្លុកកំដៅនៅសីតុណ្ហភាព 95°C រយៈពេល 5 នាទី។ បន្ថែម PBS 1 មីលីលីត្រទៅក្នុងស្លាយនីមួយៗ ហើយភ្ញាស់រយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ បន្ទាប់មកជ្រាបចូលទៅក្នុងផ្នែកទាំងនោះដោយកំណត់ Triton-X 0.1% ក្នុង PBS រយៈពេល 15 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។ ដើម្បីការពារអង្គបដិប្រាណមិនជាក់លាក់ពីការភ្ជាប់ទៅនឹងគំរូ សូមបន្ថែមដំណោះស្រាយ BSA 3% ចំនួន 1 មីលីលីត្រទៅក្នុងស្លាយ ហើយភ្ញាស់រយៈពេល 1 ម៉ោងនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។ បន្ទាប់មក BSA ត្រូវបានយកចេញ ហើយស្លាយត្រូវបានលាងសម្អាតជាមួយ PBS។ សម្គាល់គំរូនីមួយៗដោយខ្មៅដៃ។ អង្គបដិប្រាណបឋម (ពនលាយ 1:200 ក្នុង 1% BSA) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) និង troponin-T (Thermo Scientific; #MA5-12960) ត្រូវបានបន្ថែមក្នុងរយៈពេល 90 នាទី បន្ទាប់មកអង្គបដិប្រាណបន្ទាប់បន្សំ (ពនលាយ 1:200 ក្នុង 1% BSA) ប្រឆាំងនឹងកណ្តុរ Alexa Fluor 488 (Thermo Scientific; #A16079) ប្រឆាំងនឹងទន្សាយ Alexa Fluor 594 (Thermo Scientific; #T6391) រយៈពេល 90 នាទីបន្ថែម។ លាងសម្អាត 3 ដងជាមួយ PBS ដើម្បីបែងចែកស្នាមប្រឡាក់គោលដៅពីផ្ទៃខាងក្រោយ យើងបានប្រើតែអង្គបដិប្រាណបន្ទាប់បន្សំជាការគ្រប់គ្រង។ ជាចុងក្រោយ ស្នាមប្រឡាក់នុយក្លេអ៊ែរ DAPI ត្រូវបានបន្ថែម ហើយស្លាយត្រូវបានដាក់ក្នុង vectashield (Vector Laboratories) ហើយបិទជិតដោយថ្នាំលាបក្រចក (ការពង្រីក -x) និងមីក្រូទស្សន៍ Keyence ជាមួយនឹងការពង្រីក 40x។
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) ក្នុងកំហាប់ 5 μg/ml ក្នុង PBS ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការជ្រលក់ពណ៌ WGA ហើយលាបលើផ្នែកថេររយៈពេល 30 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។ បន្ទាប់មក ស្លាយត្រូវបានលាងសម្អាតជាមួយ PBS ហើយពណ៌ខ្មៅ Sudan ត្រូវបានបន្ថែមទៅក្នុងស្លាយនីមួយៗ ហើយភ្ញាស់រយៈពេល 30 នាទី។ បន្ទាប់មក ស្លាយត្រូវបានលាងសម្អាតជាមួយ PBS ហើយឧបករណ៍បង្កប់ vectashield ត្រូវបានបន្ថែម។ ស្លាយត្រូវបានមើលឃើញនៅលើមីក្រូទស្សន៍ Keyence ក្នុងកម្រិតពង្រីក 40x។
OCT ត្រូវបានយកចេញពីសំណាកដូចដែលបានពិពណ៌នាខាងលើ។ បន្ទាប់ពីយក OCT ចេញ សូមជ្រលក់ស្លាយក្នុងដំណោះស្រាយរបស់ Bouin ពេញមួយយប់។ បន្ទាប់មក ស្លាយត្រូវបានលាងសម្អាតជាមួយទឹកចម្រោះរយៈពេល 1 ម៉ោង ហើយបន្ទាប់មកដាក់ក្នុងដំណោះស្រាយអាស៊ីតអាឡូវ៉េរ៉ា Bibrich aloe fuchsin រយៈពេល 10 នាទី។ បន្ទាប់មក ស្លាយត្រូវបានលាងសម្អាតជាមួយទឹកចម្រោះ ហើយដាក់ក្នុងដំណោះស្រាយអាស៊ីតផូស្វ័រម៉ូលីបដេនុម 5%/អាស៊ីតផូស្វ័រតុងស្ទិក 5% រយៈពេល 10 នាទី។ ដោយមិនចាំបាច់លាងសម្អាតទេ សូមផ្ទេរស្លាយដោយផ្ទាល់ទៅក្នុងដំណោះស្រាយពណ៌ខៀវអានីលីនរយៈពេល 15 នាទី។ បន្ទាប់មក ស្លាយត្រូវបានលាងសម្អាតជាមួយទឹកចម្រោះ ហើយដាក់ក្នុងដំណោះស្រាយអាស៊ីតអាសេទិក 1% រយៈពេល 2 នាទី។ ស្លាយត្រូវបានសម្ងួតក្នុងអេតាណុល 200 N ហើយផ្ទេរទៅស៊ីលីន។ ស្លាយដែលមានស្នាមប្រឡាក់ត្រូវបានមើលឃើញដោយប្រើមីក្រូទស្សន៍ Keyence ដែលមានគោលបំណង 10x។ ភាគរយនៃតំបន់ជាលិកាភ្ជាប់ត្រូវបានវាស់វែងដោយប្រើកម្មវិធី Keyence Analyzer។
ការវិភាគសមត្ថភាពកោសិកា CyQUANT™ MTT (Invitrogen, Carlsbad, CA) លេខកាតាឡុក V13154 ស្របតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត ដោយមានការកែប្រែមួយចំនួន។ ជាពិសេស ដាល់វះកាត់ដែលមានអង្កត់ផ្ចិត 6 ម.ម ត្រូវបានប្រើដើម្បីធានាបាននូវទំហំជាលិកាឯកសណ្ឋានក្នុងអំឡុងពេលវិភាគ MTT។ ជាលិកាត្រូវបានដាក់ជាស្រទាប់ៗចូលទៅក្នុងរន្ធនៃចាន 12 រន្ធដែលមានស្រទាប់ខាងក្រោម MTT ស្របតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត។ ផ្នែកទាំងនោះត្រូវបានភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 3 ម៉ោង ហើយជាលិការស់រំលាយស្រទាប់ខាងក្រោម MTT ដើម្បីបង្កើតជាសមាសធាតុ formazan ពណ៌ស្វាយ។ ជំនួសដំណោះស្រាយ MTT ជាមួយ DMSO 1 មីលីលីត្រ ហើយភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 15 នាទី ដើម្បីទាញយក formazan ពណ៌ស្វាយចេញពីផ្នែកបេះដូង។ គំរូត្រូវបានពនលាយ 1:10 ក្នុង DMSO ក្នុងចានបាតថ្លា 96 រន្ធ ហើយអាំងតង់ស៊ីតេពណ៌ស្វាយត្រូវបានវាស់នៅ 570 nm ដោយប្រើឧបករណ៍អានបន្ទះ Cytation (BioTek)។ ការអានត្រូវបានធ្វើឱ្យមានលក្ខណៈធម្មតាទៅនឹងទម្ងន់នៃចំណិតបេះដូងនីមួយៗ។
ឧបករណ៍​វិភាគ​ចំណិត​បេះដូង​ត្រូវ​បាន​ជំនួស​ដោយ​ឧបករណ៍​វិភាគ​ដែល​មាន​ផ្ទុក 1 μCi/ml [5-3H]-គ្លុយកូស (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) សម្រាប់​ការ​វាស់​ស្ទង់​ការ​ប្រើប្រាស់​គ្លុយកូស​ដូច​បាន​ពិពណ៌នា​ពីមុន។ បន្ទាប់​ពី​ភ្ញាស់​រយៈពេល 4 ម៉ោង សូម​បន្ថែម​ឧបករណ៍​វិភាគ 100 µl ទៅ​ក្នុង​បំពង់​មីក្រូ​សង់ទ្រីហ្វុយ​ដែល​បើក​ដែល​មាន 0.2 N HCl 100 µl។ បន្ទាប់​មក​បំពង់​ត្រូវ​បាន​ដាក់​ក្នុង​បំពង់​ស្កែន​ដែល​មាន dH2O 500 μl ដើម្បី​ហួត [3H]2O រយៈពេល 72 ម៉ោង​នៅ​សីតុណ្ហភាព 37°C។ បន្ទាប់​មក​យក​បំពង់​មីក្រូ​សង់ទ្រីហ្វុយ​ចេញ​ពី​បំពង់​ស្កែន​ហើយ​បន្ថែម​សារធាតុ​រាវ​ស្កែន​ចំនួន 10 មីលីលីត្រ។ ការ​រាប់​ចំនួន​ស្កែន​ត្រូវ​បាន​អនុវត្ត​ដោយ​ប្រើ​ឧបករណ៍​វិភាគ​ស្កែន​រាវ Tri-Carb 2900TR (Packard Bioscience Company, Meriden, CT, USA)។ បន្ទាប់មក ការប្រើប្រាស់គ្លុយកូសត្រូវបានគណនាដោយគិតគូរពីសកម្មភាពជាក់លាក់នៃគ្លុយកូស [5-3H] លំនឹងមិនពេញលេញ និងផ្ទៃខាងក្រោយ ការពនលាយ [5-3H] ទៅនឹងគ្លុយកូសដែលមិនមានស្លាកសញ្ញា និងប្រសិទ្ធភាពប្រឆាំងការឆ្លុះពន្លឺ។ ទិន្នន័យត្រូវបានធ្វើឱ្យមានលក្ខណៈធម្មតាទៅនឹងម៉ាស់នៃផ្នែកនៃបេះដូង។
បន្ទាប់ពីការធ្វើឱ្យជាលិកាដូចគ្នានៅក្នុង Trizol RNA ត្រូវបានញែកចេញពីផ្នែកបេះដូងដោយប្រើ Qiagen miRNeasy Micro Kit #210874 ស្របតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត។ ការរៀបចំបណ្ណាល័យ RNAsec ការរៀបចំលំដាប់ និងការវិភាគទិន្នន័យត្រូវបានអនុវត្តដូចខាងក្រោម៖
RNA ចំនួន 1 μg ក្នុងមួយគំរូត្រូវបានប្រើជាសម្ភារៈចាប់ផ្តើមសម្រាប់ការរៀបចំបណ្ណាល័យ RNA។ បណ្ណាល័យស៊ីក្វេនត្រូវបានបង្កើតដោយប្រើឧបករណ៍រៀបចំបណ្ណាល័យ RNA NEBNext UltraTM សម្រាប់ Illumina (NEB, សហរដ្ឋអាមេរិក) ដោយអនុវត្តតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិត ហើយលេខកូដលិបិក្រមត្រូវបានបន្ថែមទៅលំដាប់គុណលក្ខណៈសម្រាប់គំរូនីមួយៗ។ ជាសង្ខេប mRNA ត្រូវបានបន្សុទ្ធពី RNA សរុបដោយប្រើអង្កាំម៉ាញេទិកដែលភ្ជាប់ជាមួយ poly-T oligonucleotides។ ការបំបែកត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ cations divalent នៅសីតុណ្ហភាពខ្ពស់នៅក្នុង NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer (5X)។ cDNA ខ្សែទីមួយត្រូវបានសំយោគដោយប្រើ primers hexamer ចៃដន្យ និង M-MuLV reverse transcriptase (RNase H-)។ បន្ទាប់មក cDNA ខ្សែទីពីរត្រូវបានសំយោគដោយប្រើ DNA polymerase I និង RNase H។ ផ្នែកខាងលើដែលនៅសល់ត្រូវបានបំប្លែងទៅជាចុងមូលដោយសកម្មភាព exonuclease/polymerase។ បន្ទាប់ពីការ adenylation នៃចុង 3′ នៃបំណែក DNA អាដាប់ទ័រ NEBNext ដែលមានរចនាសម្ព័ន្ធរង្វិលជុំម្ជុលត្រូវបានភ្ជាប់ទៅវាដើម្បីរៀបចំវាសម្រាប់ការបង្កាត់ពូជ។ សម្រាប់ការជ្រើសរើសបំណែក cDNA ដែលមានប្រវែងពេញចិត្ត 150-200 bp។ បំណែកបណ្ណាល័យត្រូវបានបន្សុទ្ធដោយប្រើប្រព័ន្ធ AMPure XP (Beckman Coulter, Beverly, សហរដ្ឋអាមេរិក)។ បន្ទាប់មក អង់ស៊ីម USER 3 μl (NEB, សហរដ្ឋអាមេរិក) ដែលមាន cDNA ដែលបានជ្រើសរើសទំហំ ដែលភ្ជាប់ជាមួយអាដាប់ទ័រ ត្រូវបានប្រើរយៈពេល 15 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 37°C ហើយបន្ទាប់មករយៈពេល 5 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 95°C មុនពេល PCR។ បន្ទាប់មក PCR ត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើ Phusion High-Fidelity DNA polymerase, ប្រាយម័រ PCR សកល និងប្រាយម័រ Index (X)។ ជាចុងក្រោយ ផលិតផល PCR ត្រូវបានបន្សុទ្ធ (ប្រព័ន្ធ AMPure XP) ហើយគុណភាពបណ្ណាល័យត្រូវបានវាយតម្លៃលើប្រព័ន្ធ Agilent Bioanalyzer 2100។ បន្ទាប់មក បណ្ណាល័យ cDNA ត្រូវបានរៀបលំដាប់ដោយប្រើប្រាយម័រ Novaseq។ ឯកសាររូបភាពឆៅពី Illumina ត្រូវបានបំប្លែងទៅជាការអានឆៅដោយប្រើ CASAVA Base Calling។ ទិន្នន័យឆៅត្រូវបានរក្សាទុកក្នុងឯកសារទម្រង់ FASTQ(fq) ដែលមានលំដាប់អាន និងគុណភាពមូលដ្ឋានដែលត្រូវគ្នា។ ជ្រើសរើស HISAT2 ដើម្បីផ្គូផ្គងការអានលំដាប់ដែលបានត្រងទៅនឹងហ្សែនយោង Sscrofa11.1។ ជាទូទៅ HISAT2 គាំទ្រហ្សែនគ្រប់ទំហំ រួមទាំងហ្សែនធំជាង 4 ពាន់លានមូលដ្ឋាន ហើយតម្លៃលំនាំដើមត្រូវបានកំណត់សម្រាប់ប៉ារ៉ាម៉ែត្រភាគច្រើន។ ការអានបំបែកពីទិន្នន័យ RNA Seq អាចត្រូវបានតម្រឹមប្រកបដោយប្រសិទ្ធភាពដោយប្រើ HISAT2 ដែលជាប្រព័ន្ធលឿនបំផុតដែលមាននាពេលបច្ចុប្បន្ន ជាមួយនឹងភាពត្រឹមត្រូវដូចគ្នា ឬល្អជាងវិធីសាស្ត្រផ្សេងទៀត។
ភាពសម្បូរបែបនៃប្រតិចារិកឆ្លុះបញ្ចាំងដោយផ្ទាល់ពីកម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែន។ កម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែនត្រូវបានវាយតម្លៃដោយភាពសម្បូរបែបនៃប្រតិចារិក (ចំនួនលំដាប់) ដែលជាប់ទាក់ទងនឹងហ្សែន ឬអ៊ិចសុង។ ចំនួននៃការអានគឺសមាមាត្រទៅនឹងកម្រិតនៃការបញ្ចេញហ្សែន ប្រវែងហ្សែន និងជម្រៅនៃលំដាប់។ FPKM (បំណែកក្នុងមួយពាន់គូមូលដ្ឋាននៃប្រតិចារិកដែលត្រូវបានរៀបចំលំដាប់ក្នុងមួយលានគូមូលដ្ឋាន) ត្រូវបានគណនា ហើយតម្លៃ P នៃការបញ្ចេញឌីផេរ៉ង់ស្យែលត្រូវបានកំណត់ដោយប្រើកញ្ចប់ DESeq2។ បន្ទាប់មកយើងបានគណនាអត្រារកឃើញមិនពិត (FDR) សម្រាប់តម្លៃ P នីមួយៗដោយប្រើវិធីសាស្ត្រ Benjamini-Hochberg9 ដោយផ្អែកលើអនុគមន៍ R ដែលភ្ជាប់មកជាមួយ "p.adjust"។
RNA ដែលញែកចេញពីផ្នែកបេះដូងត្រូវបានបំប្លែងទៅជា cDNA ក្នុងកំហាប់ 200 ng/μl ដោយប្រើល្បាយ SuperScript IV Vilo Master ពី Thermo (Thermo, លេខប្រភេទ 11756050)។ ការធ្វើតេស្ត RT-PCR បរិមាណត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើបន្ទះប្រតិកម្មថ្លា Applied Biosystems Endura Plate Microamp 384-well (Thermo, លេខប្រភេទ 4483319) និងសារធាតុស្អិតអុបទិក microamp (Thermo, លេខប្រភេទ 4311971)។ ល្បាយប្រតិកម្មមានល្បាយ Taqman Fast Advanced Master 5 µl (Thermo, លេខប្រភេទ # 4444557), ថ្នាំលាបបឋម Taqman 0.5 µl និងទឹក 3.5 µl លាយក្នុងមួយអណ្តូង។ វដ្ត qPCR ស្តង់ដារត្រូវបានដំណើរការ ហើយតម្លៃ CT ត្រូវបានវាស់ដោយប្រើឧបករណ៍ PCR ពេលវេលាជាក់ស្តែង Applied Biosystems Quantstudio 5 (ម៉ូឌុល 384-well; ផលិតផល # A28135)។ ប្រាយមឺរ Taqman ត្រូវបានទិញពី Thermo (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss06868890_m1), ACTN1 (Ss01009508_mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss04245588_m1)។ តម្លៃ CT នៃគំរូទាំងអស់ត្រូវបានធ្វើឱ្យមានលក្ខណៈធម្មតាទៅនឹងហ្សែន housekeeping GAPDH។
ការចេញផ្សាយព័ត៌មានរបស់ NT-ProBNP ត្រូវបានវាយតម្លៃដោយប្រើឧបករណ៍ NT-ProBNP (ជ្រូក) (លេខកាតាឡុក MBS2086979, MyBioSource) ស្របតាមពិធីការរបស់អ្នកផលិត។ ជាសង្ខេប 250 µl នៃគំរូនីមួយៗ និងស្តង់ដារត្រូវបានបន្ថែមជាពីរផ្នែកទៅក្នុងអណ្តូងនីមួយៗ។ ភ្លាមៗបន្ទាប់ពីបន្ថែមគំរូ សូមបន្ថែមសារធាតុវិភាគ A ចំនួន 50 µl ទៅក្នុងអណ្តូងនីមួយៗ។ អង្រួនបន្ទះថ្នមៗ ហើយបិទជិតជាមួយសារធាតុផ្សាភ្ជាប់។ បន្ទាប់មកថេប្លេតត្រូវបានភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 1 ម៉ោង។ បន្ទាប់មកបឺតយកដំណោះស្រាយ ហើយលាងសម្អាតអណ្តូងចំនួន 4 ដងជាមួយនឹងដំណោះស្រាយលាង 1X ចំនួន 350 µl ដោយភ្ញាស់ដំណោះស្រាយលាងរយៈពេល 1-2 នាទីរាល់ពេល។ បន្ទាប់មកបន្ថែមសារធាតុវិភាគ B ចំនួន 100 µl ក្នុងមួយអណ្តូង ហើយបិទជិតជាមួយសារធាតុផ្សាភ្ជាប់បន្ទះ។ ថេប្លេតត្រូវបានអង្រួនយកដំណោះស្រាយ ហើយភ្ញាស់នៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 30 នាទី។ បឺតយកដំណោះស្រាយ ហើយលាងសម្អាតអណ្តូងចំនួន 5 ដងជាមួយនឹងដំណោះស្រាយលាង 1X ចំនួន 350 µl។ បន្ថែមដំណោះស្រាយស្រទាប់ខាងក្រោម 90 µl ទៅក្នុងអណ្តូងនីមួយៗ ហើយបិទបន្ទះឱ្យជិត។ ភ្ញាស់បន្ទះនៅសីតុណ្ហភាព 37°C រយៈពេល 10-20 នាទី។ បន្ថែមដំណោះស្រាយបញ្ឈប់ 50 µl ទៅក្នុងអណ្តូងនីមួយៗ។ បន្ទះនេះត្រូវបានវាស់ភ្លាមៗដោយប្រើឧបករណ៍អានបន្ទះ Cytation (BioTek) ដែលកំណត់នៅ 450 nm។
ការវិភាគថាមពលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីជ្រើសរើសទំហំក្រុមដែលនឹងផ្តល់ថាមពល >80% ដើម្បីរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរដាច់ខាត 10% នៅក្នុងប៉ារ៉ាម៉ែត្រជាមួយនឹងអត្រាកំហុសប្រភេទ I 5%។ ការវិភាគថាមពលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីជ្រើសរើសទំហំក្រុមដែលនឹងផ្តល់ថាមពល >80% ដើម្បីរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរដាច់ខាត 10% នៅក្នុងប៉ារ៉ាម៉ែត្រជាមួយនឹងអត្រាកំហុសប្រភេទ I 5%។ Анализ мощности был выполнен для выбора размеров групп, которые обеспечат >80% мощности для обяжа 10% изменения параметра с 5% частотой ошибок типа I. ការវិភាគថាមពលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីជ្រើសរើសទំហំក្រុមដែលនឹងផ្តល់ថាមពល >80% ដើម្បីរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរប៉ារ៉ាម៉ែត្រដាច់ខាត 10% ជាមួយនឹងអត្រាកំហុសប្រភេទ I 5%។进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I寎部。进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I寎部。 Был проведен анализ мощности для выбора размера группы, который обеспечил бы > 80% мощности для 10% абсолютного изменения параметров и 5% частоты ошибок типа I. ការវិភាគថាមពលត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីជ្រើសរើសទំហំក្រុមដែលនឹងផ្តល់ថាមពល >80% ដើម្បីរកឃើញការផ្លាស់ប្តូរប៉ារ៉ាម៉ែត្រដាច់ខាត 10% និងអត្រាកំហុសប្រភេទ I 5%។ផ្នែកជាលិកាត្រូវបានជ្រើសរើសដោយចៃដន្យមុនពេលពិសោធន៍។ ការវិភាគទាំងអស់គឺមើលមិនឃើញស្ថានភាព ហើយគំរូត្រូវបានឌិគ្រីបលុះត្រាតែទិន្នន័យទាំងអស់ត្រូវបានវិភាគរួច។ កម្មវិធី GraphPad Prism (សាន់ឌីអាហ្គោ រដ្ឋកាលីហ្វ័រញ៉ា) ត្រូវបានប្រើដើម្បីធ្វើការវិភាគស្ថិតិទាំងអស់។ សម្រាប់ស្ថិតិទាំងអស់ តម្លៃ p ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់នៅតម្លៃ <0.05។ សម្រាប់ស្ថិតិទាំងអស់ តម្លៃ p ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់នៅតម្លៃ <0.05។ Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. សម្រាប់ស្ថិតិទាំងអស់ តម្លៃ p ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់នៅតម្លៃ <0.05។对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的 ។对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的 ។ Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. សម្រាប់ស្ថិតិទាំងអស់ តម្លៃ p ត្រូវបានចាត់ទុកថាសំខាន់នៅតម្លៃ <0.05។ការធ្វើតេស្ត t របស់សិស្សពីរកន្ទុយត្រូវបានអនុវត្តលើទិន្នន័យដោយមានការប្រៀបធៀបតែ 2 ប៉ុណ្ណោះ។ ការវិភាគ ANOVA មួយផ្លូវ ឬពីរផ្លូវត្រូវបានប្រើដើម្បីកំណត់សារៈសំខាន់រវាងក្រុមច្រើន។ នៅពេលអនុវត្តការធ្វើតេស្តក្រោយការសិក្សា ការកែតម្រូវ Tukey ត្រូវបានអនុវត្តដើម្បីរាប់បញ្ចូលការប្រៀបធៀបច្រើន។ ទិន្នន័យ RNAsec មានការពិចារណាខាងស្ថិតិពិសេសនៅពេលគណនា FDR និង p.adjust ដូចដែលបានពិពណ៌នានៅក្នុងផ្នែកវិធីសាស្ត្រ។
សម្រាប់ព័ត៌មានបន្ថែមអំពីការរចនាការសិក្សា សូមមើលសេចក្តីសង្ខេបនៃរបាយការណ៍ស្រាវជ្រាវធម្មជាតិដែលភ្ជាប់ទៅនឹងអត្ថបទនេះ។