Go raibh maith agat as cuairt a thabhairt ar Nature.com.Tá tacaíocht teoranta CSS ag an leagan brabhsálaí atá in úsáid agat.Chun an taithí is fearr a fháil, molaimid duit brabhsálaí nuashonraithe a úsáid (nó Mód Comhoiriúnachta a dhíchumasú in Internet Explorer).Idir an dá linn, chun tacaíocht leanúnach a chinntiú, cuirfimid an suíomh gan stíleanna agus JavaScript.
Tá gá le córas in vitro iontaofa atá in ann timpeallacht fhiseolaíoch an chroí a atáirgeadh go cruinn le haghaidh tástála drugaí.Mar gheall ar infhaighteacht theoranta na gcóras cultúir fíocháin croí daonna tá léirmhínithe míchruinn ar éifeachtaí drugaí cairdiacha.Anseo, tá samhail cultúr fíocháin cairdiach (CTCM) forbartha againn a spreagann slisní croí leictrimheicniúla agus a théann faoi stráice fiseolaíoch le linn na gcéimeanna systolic agus diastólacha den timthriall cairdiach.Tar éis 12 lá de chultúr, d'fheabhsaigh an cur chuige seo go páirteach inmharthanacht na hailt croí, ach níor chaomhnaigh sé a n-ionracas struchtúrach go hiomlán.Dá bhrí sin, tar éis scagadh móilín beag, fuair muid amach gur chothaigh cur leis 100 nM triiodothyronine (T3) agus 1 μM dexamethasone (Dex) chuig ár meán microstructure na hailt ar feadh 12 lá.I gcomhcheangal le cóireáil T3/Dex, choinnigh an córas CTCM próifílí trascríobh, inmharthanacht, gníomhaíocht meitibileach, agus sláine struchtúrach ag an leibhéal céanna le fíochán croí úr ar feadh 12 lá.Ina theannta sin, cuireann síneadh iomarcach fíocháin chairdiach sa chultúr le comharthaíocht cairdiach hipertrófa, ag soláthar fianaise ar chumas CTCM aithris a dhéanamh ar choinníollacha hipertrófacha de bharr stráice cairdiach.Mar fhocal scoir, is féidir le CTCM fiseolaíocht agus paiteolaíocht an chroí a shamhaltú i gcultúr thar thréimhsí fada ama, rud a chumasaíonn scagadh iontaofa drugaí.
Roimh thaighde cliniciúil, tá gá le córais in vitro iontaofa ar féidir leo timpeallacht fhiseolaíoch an chroí daonna a atáirgeadh go cruinn.Ba cheart go ndéanfadh córais dá leithéid aithris ar stráice meicniúil athraithe, ráta croí agus airíonna leictreifiseolaíocha.Úsáidtear samhlacha ainmhithe go coitianta mar ardán scagtha don fhiseolaíocht chairdiach le hiontaofacht theoranta maidir le héifeachtaí na ndrugaí ar an gcroí daonna a léiriú1,2.I ndeireadh na dála, is samhail í an tSamhail Turgnamhach um Chultúr Fíocháin Chairdiach Idéalach (CTCM) atá an-íogair agus sainiúil d’idirghabhálacha teiripeacha agus cógaseolaíochta éagsúla, ag atáirgeadh go cruinn fiseolaíocht agus paiteolaíocht an chroí dhaonna3.Cuireann easpa córais dá leithéid teorainn le teacht ar chóireálacha nua le haghaidh cliseadh croí4,5 agus tá cardatocsaineacht drugaí mar phríomhchúis leis an margadh a fhágáil6.
Le deich mbliana anuas, tarraingíodh siar ocht ndrugaí neamh-chardashoithíoch ó úsáid chliniciúil toisc go mbíonn siad ina gcúis le fadú eatramh QT as a dtagann arrhythmias ventricular agus bás tobann7.Mar sin, tá gá méadaitheach le straitéisí scagthástála réamhchliniciúla iontaofa chun éifeachtúlacht cardashoithíoch agus tocsaineacht a mheasúnú.Soláthraíonn an úsáid a baineadh as le déanaí de chardaimíicítí ilchumhachtach gascheall díorthaithe (hiPS-CM) i scagadh drugaí agus i dtástáil tocsaineachta réiteach páirteach ar an bhfadhb seo.Mar sin féin, is teorainneacha móra den mhodh seo iad nádúr neamhaibí hiPS-CMs agus easpa castachta ilcheallach fíocháin chairdiach.Léirigh staidéir le déanaí gur féidir an teorannú seo a shárú go páirteach trí úsáid a bhaint as hiPS-CM luath chun hidrogels fíocháin cairdiacha a fhoirmiú go gairid tar éis crapadh spontáineach a thosú agus spreagadh leictreach a mhéadú de réir a chéile le himeacht ama.Mar sin féin, níl na hairíonna leictreifiseolaíocha agus conarthacha aibí atá ag an miócairdiam aosach ag na micríteas hiPS-CM seo.Ina theannta sin, tá struchtúr níos casta ag fíochán cairdiach daonna, atá comhdhéanta de mheascán ilchineálach de chineálacha éagsúla cille, lena n-áirítear cealla endothelial, néaróin, agus fibroblasts stromal, idirnasctha ag tacair shonracha de phróitéiní maitrís extracellular.Tá an ilchineálacht seo de dhaonraí neamh-cardiomyocyte11,12,13 i gcroílár mamaigh fásta ina bhac mór ar shamhaltú fíochán cairdiach ag baint úsáide as cineálacha cealla aonair.Leagann na teorainneacha móra seo béim ar an tábhacht a bhaineann le modhanna a fhorbairt chun fíochán miócairdiach slán a shaothrú faoi choinníollacha fiseolaíocha agus paiteolaíocha.
Tá sé cruthaithe go bhfuil codanna saothraithe tanaí (300 µm) de chroí an duine ina múnla gealltanais den mhiocairdiam daonna slán.Soláthraíonn an modh seo rochtain ar chóras iomlán ilcheallach 3D atá cosúil le fíochán croí an duine.Mar sin féin, go dtí 2019, bhí úsáid na hailt croí saothraithe teoranta ag maireachtáil an chultúir ghearr (24 h).Tá sé seo mar gheall ar roinnt fachtóirí lena n-áirítear an easpa stráice fisiceach-meicniúil, an comhéadan aer-leachtach, agus úsáid a bhaint as meáin shimplí nach dtacaíonn riachtanais fíochán cairdiach.In 2019, léirigh roinnt grúpaí taighde gur féidir le fachtóirí meicniúla a ionchorprú i gcórais chultúir fíocháin cairdiach saol an chultúir a leathnú, léiriú cairdiach a fheabhsú, agus aithris a dhéanamh ar phaiteolaíocht chairdiach.Léiríonn dhá staidéar galánta 17 agus 18 go bhfuil tionchar dearfach ag luchtú meicniúil uniaxial ar fheinitíopa cairdiach le linn cultúir.Mar sin féin, níor bhain na staidéir seo úsáid as an luchtú fisiceach-meicniúil tríthoiseach dinimiciúil den timthriall cairdiach, ós rud é go raibh na hailt croí luchtaithe le fórsaí teanntachta isiméadracha 17 nó le luchtú líneach auxotonic 18 .Mar thoradh ar na modhanna síneadh fíocháin seo cuireadh deireadh le go leor géinte cairdiacha nó ró-léiriú géinte a bhaineann le freagraí neamhghnácha stráice.Go háirithe, tá Pitoulis et al.D'fhorbair 19 folcadán dinimiciúil cultúir slisne croí le haghaidh atógáil timthriall cairdiach ag baint úsáide as aiseolas trasduchtóir fórsa agus tiomántáin teannais.Cé go gceadaíonn an córas seo samhaltú timthriall cairdiach in vitro níos cruinne, cuireann castacht agus tréchur íseal an mhodha teorainn le cur i bhfeidhm an chórais seo.D'fhorbair ár saotharlann córas cultúir simplithe le déanaí ag baint úsáide as spreagadh leictreach agus meán optamaithe chun inmharthanacht codanna de mhuc agus fíochán croí an duine a chothabháil ar feadh suas le 6 lá20,21.
Sa lámhscríbhinn reatha, déanaimid cur síos ar mhúnla cultúir fíocháin cairdiach (CTCM) ag baint úsáide as codanna de chroí na muc a ionchorpraíonn leideanna humoral chun fiseolaíocht cairdiach tríthoiseach agus distension pathophysiological a athfhoilsiú le linn an timthriall cairdiach.Is féidir leis an CTCM seo cruinneas réamh-mheastacháin drugaí réamhchliniciúla a mhéadú go leibhéal nár baineadh amach riamh cheana trí chóras cairdiach meán-tréchur cost-éifeachtach a sholáthar a dhéanann aithris ar fhiseolaíocht/phaitisiseolaíocht chroí mhamach le haghaidh tástála drugaí réamhchliniciúil.
Tá ról ríthábhachtach ag comharthaí meicniúla hemodinimiciúla maidir le feidhm chardamyocyte a chothabháil in vitro 22,23,24.Sa lámhscríbhinn reatha, tá CTCM (Fíor 1a) forbartha againn a fhéadfaidh aithris a dhéanamh ar an timpeallacht chairdiach do dhaoine fásta trí spreagadh leictreach agus meicniúil araon a spreagadh ag minicíochtaí fiseolaíocha (1.2 Hz, 72 bhuille in aghaidh an nóiméid).Chun stráice fíocháin iomarcach a sheachaint le linn diastole, baineadh úsáid as gléas priontála 3D chun méid fíocháin a mhéadú 25% (Fíor 1b).Cuireadh am luascadh leictreach arna tharlú ag an gcóras C-PACE chun tús a chur le 100 ms roimh systole ag baint úsáide as córas fála sonraí chun an timthriall cairdiach a atáirgeadh go hiomlán.Úsáideann an córas cultúir fíocháin actuator aeroibrithe in-ríomhchláraithe (LB Engineering, an Ghearmáin) chun membrane solúbtha silicone a leathnú go timthriallach chun leathnú na slices croí sa seomra uachtarach a chur faoi deara.Bhí an córas ceangailte le haerlíne seachtrach trí thrasduchtóir brú, rud a d'fhág gur féidir an brú (± 1 mmHg) agus an t-am (± 1 ms) (Fíor 1c) a choigeartú go cruinn.
a Ceangail an t-alt fíocháin leis an bhfáinne tacaíochta 7 mm, a thaispeántar i gorm, taobh istigh de chultúir an fheiste.Tá an seomra cultúir scartha ón seomra aeir ag membrane tanaí solúbtha silicone.Cuir gasket idir gach seomra chun sceitheadh ​​a chosc.Tá leictreoidí graifíte ar chlúdach an fheiste a sholáthraíonn spreagadh leictreach.b Léiriú scéimreach ar an bhfeiste fíocháin mhóra, an fáinne treorach agus an fáinne tacaíochta.Cuirtear na hailt fíocháin (donn) ar an bhfeiste ró-mhór agus cuirtear an fáinne treorach sa groove ar imeall seachtrach an fheiste.Ag baint úsáide as an treoir, cuir go cúramach an fáinne tacaíochta atá brataithe le greamachán aicrileach fíocháin thar an gcuid den fhíochán cairdiach.c Graf a thaispeánann am an spreagadh leictrigh mar fheidhm de bhrú an tseomra aeir arna rialú ag actuator neomatach in-ríomhchláraithe (PPD).Baineadh úsáid as gléas fála sonraí chun spreagadh leictreach a shioncronú ag baint úsáide as braiteoirí brú.Nuair a shroicheann an brú sa seomra cultúir an tairseach socraithe, seoltar comhartha cuisle chuig an C-PACE-EM chun spreagadh leictreach a spreagadh.d Íomhá de cheithre CTCM curtha ar sheilf ghorlainne.Tá ceithre fheiste ceangailte le PPD amháin trí chiorcad aeroibrithe, agus cuirtear braiteoirí brú isteach sa chomhla hemostatach chun monatóireacht a dhéanamh ar bhrú sa chiorcad aeroibrithe.Tá sé rannóg fíocháin i ngach gléas.
Ag baint úsáide as actuator aeroibrithe amháin, bhíomar in ann a rialú 4 feistí CTCM, gach ceann acu d'fhéadfadh a shealbhú 6 rannóg fíocháin (Fig. 1d).I CTCM, déantar an brú aeir sa seomra aeir a thiontú go brú sioncrónach sa seomra sreabhán agus spreagann sé leathnú fiseolaíoch an chroí-slis (Fíor 2a agus Scannán Forlíontach 1).Meastóireacht ar stráice fíocháin ag 80 mm Hg.Ealaín.léirigh síneadh na hailt fíocháin faoi 25% (Fíor 2b).Léiríodh go gcomhfhreagraíonn an stráice céatadáin seo d’fhad sarcóiméir fiseolaíoch 2.2–2.3 µm le haghaidh gnáthchonarthachta na coda cairdiach17,19,25.Rinneadh measúnú ar ghluaiseacht fíocháin trí úsáid a bhaint as socruithe ceamara saincheaptha (Fíor Forlíontach 1).An aimplitiúid agus treoluas na gluaiseachta fíocháin (Fíor 2c, d) fhreagraíonn do stráice le linn an timthrialla cairdiach agus am le linn systole agus diastole (Fig. 2b).D'fhan síneadh agus treoluas fíocháin chairdiach le linn crapadh agus scíthe seasta ar feadh 12 lá sa chultúr (Fíor 2f).Chun meastóireacht a dhéanamh ar éifeacht an spreagadh leictreach ar contractility le linn cultúir, d'fhorbraíomar modh chun a chinneadh deformity gníomhach ag baint úsáide as algartam scáthú (Fíor Forlíontach 2a, b) agus bhí siad in ann idirdhealú a dhéanamh idir deformities le agus gan spreagadh leictreach.An chuid chéanna den chroí (Fig. 2f).I réigiún shochorraithe na gearrtha (R6-9), bhí an voltas le linn spreagadh leictreach 20% níos airde ná in éagmais spreagadh leictreach, rud a léiríonn an méid a chuireann spreagadh leictreach le feidhm contractile.
Deimhníonn rianta ionadaíocha brú an tseomra aeir, brú seomra sreabhán, agus tomhais gluaiseachta fíocháin go n-athraíonn brú an tseomra brú seomra sreabhán, rud a fhágann go bhfuil gluaiseacht comhfhreagrach sa slice fíocháin.b Rianta ionadaíocha de stráice faoin gcéad (gorm) de na hailt fíocháin a fhreagraíonn don stráice faoin gcéad (oráiste).c Tá gluaisne tomhaiste na slise cairdiach comhsheasmhach le luas tomhaiste na gluaisne.(d) Conairí ionadaíocha gluaisne thimthriallaigh (líne ghorm) agus treoluas (líne poncaithe oráiste) i slisne den chroí.e Cainníochtú am timthriall (n = 19 slices in aghaidh an ghrúpa, ó mhuca éagsúla), am crapadh (n = 19 slices in aghaidh an ghrúpa), am scíthe (n = 19 slices in aghaidh an ghrúpa, ó mhuca éagsúla), gluaiseacht fíocháin (n = 25).slisní)/grúpa ó mhuca éagsúla), buaic-treoluas systolic (n = 24(D0), slisní 25(D12)/grúpa ó mhuca éagsúla) agus buaicráta scíthe (l=24(D0), 25(D12) slisní/grúpa ó mhuca éagsúla).Níor léirigh tástáil t dhá earball aon difríocht shuntasach in aon pharaiméadar.f Rianta ionadaíocha anailíse brú ar na hailt fíocháin le spreagadh leictreach (dearg) agus gan (gorm), deich réimse réigiúnacha de na hailt fíocháin ón roinn chéanna.Léiríonn na painéil íochtair cainníochtú na difríochta céatadáin i brú i rannóga fíocháin le agus gan spreagadh leictreach i ndeich réimse ó rannóga éagsúla. (n = 8 slisne/grúpa ó mhuca éagsúla, déantar t-tástáil Mhic Léinn Dhá-earball; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05). (n = 8 slisne/grúpa ó mhuca éagsúla, déantar t-tástáil Mhic Léinn Dhá-earball; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05). (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; ****p<0,000,0,*, **p<0,00,0,0, **p). (n = 8 roinn/grúpa ó mhuca éagsúla, t-tástáil an Mhic Léinn dhá eireaball; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05). n = 8 片/组, 来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；****p < 0.0001,**p < 0.01，*p <0.05） n = 8 片/组, 来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；****p < 0.0001,**p < 0.01，*p <0.05） (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,00). (n = 8 rannóg/grúpa, ó mhuca éagsúla, t-tástáil an Mhic Léinn dhá eireaball; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05).Seasann barraí earráide don mheán ± diall caighdeánach.
Inár gcóras cultúir slisne croí bithmhiméadach statach roimhe seo [20, 21], choinnigh muid inmharthanacht, feidhm agus sláine struchtúrach slices croí ar feadh 6 lá trí spreagadh leictreach a chur i bhfeidhm agus an comhdhéanamh meánach a bharrfheabhsú.Mar sin féin, tar éis 10 lá, thit na figiúirí seo go géar.Déanfaimid tagairt do na hailt saothraithe inár gcóras cultúir bithmhiméadach statach roimhe seo 20, 21 coinníollacha rialaithe (Ctrl) agus úsáidfimid ár meán optamaithe roimhe seo mar choinníollacha MC agus cultúr faoi spreagadh meicniúil agus leictreach comhuaineach (CTCM).ar a dtugtar .Ar dtús, chinneamar nach raibh spreagadh meicniúil gan spreagadh leictreach leordhóthanach chun inmharthanacht fíocháin a choinneáil ar feadh 6 lá (Fíor Forlíontach 3a,b).Suimiúil go leor, le tabhairt isteach spreagadh fisi-meicniúil agus leictreach ag baint úsáide as STCM, d'fhan inmharthanacht na hailt croí 12-lá mar an gcéanna le hailt croí úr faoi choinníollacha MS, ach ní faoi choinníollacha Ctrl, mar a léirítear ag anailís MTT (Fíor 1).3a).Tugann sé seo le tuiscint gur féidir le spreagadh meicniúil agus insamhalta den timthriall cairdiach ailt fíocháin a choinneáil inmharthana ar feadh dhá uair chomh fada agus a tuairiscíodh inár gcóras cultúir statach roimhe seo.Mar sin féin, léirigh measúnú ar shláine struchtúrach na hailt fíocháin trí imdhíonlipéadú troponin cairdiach T agus connexin 43 go raibh léiriú connexin 43 i bhfad níos airde i bhfíocháin MC ar lá 12 ná i rialuithe ar an lá céanna.Mar sin féin, níor coinníodh go hiomlán léiriú connexin 43 aonfhoirmeach agus foirmiú diosca Z (Fíor 3b).Bainimid úsáid as creat hintleachta saorga (AI) chun sláine struchtúrach fíocháin a chainníochtú26, píblíne foghlama domhain bunaithe ar íomhá bunaithe ar troponin-T agus staining connexin43 chun sláine struchtúrach agus fluaraiseacht slisní croí a chainníochtú go huathoibríoch i dtéarmaí neart logánaithe.Úsáideann an modh seo Líonra Néarrach Comhdhlúite (CNN) agus creat foghlama domhain chun sláine struchtúrach fíochán cairdiach a chainníochtú go hiontaofa ar bhealach uathoibrithe agus neamhchlaonta, mar a thuairiscítear sa tagairt.26. Léirigh fíochán MC cosúlacht struchtúrach feabhsaithe le lá 0 i gcomparáid le hailt rialaithe statacha.Ina theannta sin, léirigh staining trichrome Masson céatadán suntasach níos ísle de fiobróis faoi choinníollacha MS i gcomparáid le coinníollacha rialaithe ar lá 12 de chultúr (Fíor 3c).Cé gur mhéadaigh CTCM inmharthanacht na hailt fíocháin croí ag lá 12 go leibhéal cosúil leis an bhfíochán croí úr, níor fheabhsaigh sé go mór sláine struchtúrach na n-alt croí.
Léiríonn graf Barra cainníochtú inmharthanacht MTT slisní croí úra (D0) nó cultúr slisní croí ar feadh 12 lá i gcultúr statach (D12 Ctrl) nó i CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) slisní/grúpa bealach amháin ó # VA i gcomparáid le muca difriúil #0; D0 agus **p < 0.01 i gcomparáid le D12 Ctrl). Léiríonn graf Barra cainníochtú inmharthanacht MTT slisní croí úra (D0) nó cultúr slisní croí ar feadh 12 lá i gcultúr statach (D12 Ctrl) nó i CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl ), 12 (D12 MC) slices/grúpa i gcomparáid le muc #0; go D0 agus **p < 0.01 i gcomparáid le D12 Ctrl).Léiríonn an histeagram cainníochtú inmharthanacht na gcodanna croí úra MTT (D0) nó cultúir na n-alt croí ar feadh 12 lá i gcultúr statach (rialú D12) nó CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (rialú D12). ), 12 (D12 MC) rannóga/grúpa aontreo ó mhuca éagsúla;####p < 0,0001 по сравнению с D0 agus **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p < 0.0001 i gcomparáid le D0 agus **p <0.01 i gcomparáid le D12 Ctrl). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n= 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏培 版版版版12 天的MTT 活力的量化), 来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组,进行单向ANOVA 测试；与#0.#0. D12 Ctrl 相比，**p <0.01). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n=18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切皌猐片片片片片版(D12 MC) 切片/组，ANOVA 测试；与D0相比,####p <0.0001，D12 Ctrl 相比，**p。)histeagram a thaispeánann cainníochtú inmharthanacht MTT i ranna croí úra (D0) nó i gcodanna croí atá saothraithe ar feadh 12 lá i gcultúr statach (rialú D12) nó CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (rialú D12)), 12 (D12 MC) rannóga / grúpa ó mhuca éagsúla, tástáil aontreo ANO;####p < 0,0001 по сравнению с D0, **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p < 0.0001 i gcomparáid le D0, **p <0.01 i gcomparáid le D12 Ctrl).b Troponin-T (glas), connexin 43 (dearg) agus DAPI (gorm) i gcodanna croí úr-scoite (D0) nó codanna croí saothraithe faoi choinníollacha statacha (Ctrl) nó coinníollacha CTCM (MC) ar feadh 12 lá) d’íomhánna inmunofluorescence ionadaíocha (scála bán = 100 µm). Cainníochtú hintleachta saorga ar shláine struchtúrach fíocháin chroí (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) slisne/grúpa an ceann ó mhuc dhifriúla, déantar tástáil ANOVA aontreo; ####p <0.0001 i gcomparáid le D0 agus ****p <0.0001 i gcomparáid le D12 Ctrl). Cainníochtú hintleachta saorga ar shláine struchtúrach fíocháin chroí (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) slisne / grúpa an ceann ó mhuca éagsúla, déantar tástáil ANOVA aontreo; ####p <0.0001 i gcomparáid le D0 agus ****p <0.0001 i gcomparáid le D12 Ctrl). Количественная оценка структурной целостности сердечной ткани искусственным интеллектом (n = 7 (D0), 7 (D0), 7 (D0), 7 (D0), 7 (D0), 7 (D0), 7 (D 1) упп от разных свиней, проводится однофакторный тест ANOVA; ####p < 0,0001 по сравнению с D0 и ****p < пню0 сли 0,00 C. Cainníochtú sláine struchtúrach fíocháin chairdiach de réir hintleachta saorga (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) rannóg/grúpa ó mhuca éagsúla, tástáil aontreo ANOVA déanta; ####p <0.0001 vs. le D0 agus ****p < 0.0001 i gcomparáid le D12 Ctrl).n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) slisní/grúpa gach ceann de mhuc dhifriúil, tástáil aontreo ANOVA;###p. < 0.0001与D12 Ctrl 相比）。人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) slisne/grúpa gach ceann de mhuca éagsúla, tástáil aontreo ANOVA; <##0. < 0.0001与D12 Ctrl 相比）。 Искусственный интеллект для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (n = 7 (D1) C 7 (D1), 7 (D1), 7 (D1) зов/группу каждой из разных свиней, односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001 vs. D0 Для сравнения ****сревния **** сревнения ****001 сравнения ****001 сравнения ****001 C<0,001 Intleacht shaorga chun sláine struchtúrach fíocháin chairdiach a chainníochtú (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) rannóg/grúpa gach ceann de mhuca éagsúla, tástáil ANOVA aontreo; ####p<0.0001 vs .D0 Chun comparáid a dhéanamh ****p < 0.0001 i gcomparáid le D12 Ct). c Íomhánna ionadaíocha (ar chlé) agus cainníochtú (ar dheis) do slisní croí daite le stain trichrome Masson (Scála lom = 500 µm) (n = 10 slisne/grúpa an ceann ó mhuc dhifriúla, déantar tástáil ANOVA aontreo; ####p < 0.0001 i gcomparáid le D0 agus ***p < 0.02 C1 <0.02 i gcomparáid le D1. c Íomhánna ionadaíocha (ar chlé) agus cainníochtú (ar dheis) do slisní croí daite le stain trichrome Masson (Scála lom = 500 µm) (n = 10 slisne/grúpa an ceann ó mhuca éagsúla, déantar tástáil ANOVA aontreo; #### p < 0.0001 i gcomparáid le D0 agus ***p < 0.0001 i gcomparáid le D0 agus ***p < 0. c Репрезентативные изображения (слева) и количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашенныќќесрима она (масштаб без покрытия = 500 мкм) (n = 10 срезов/группу от разных свиней, выполняется односто, выполняется односто; по сравнению с D0 agus ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c Íomhánna ionadaíocha (ar chlé) agus cainníochtú (ar dheis) de chodanna croí daite le stain trichrome Masson (scála neamhbhrataithe = 500 µm) (n = 10 rannóg/grúpa ó mhuca éagsúla, rinneadh tástáil ANOVA aontreo; #### p < 0 .0001 i gcomparáid le D0 agus ***p < 0.001 Crl i gcomparáid le D0. c 用Masson三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（覸=尺）个切片/组，每组来自不同的猪, 进行单向ANOVA 䵋试；#### p < 0.0001 与D0 相渔,***p < 0.0001 渎 D0 相渔,***0 < C 0 、 01 相渔比,***0 < C 0 ≤ 1 相渔比,***0 < C. C用 Masson三色染料的心脏切片的代表性（左左）量化（右）裸尺度帰表性 量化 (右)度 = 500 µm）（n = 10 个切片组每组来自不同猪，进行单向 单向 Anova 测 #0.00 Anova #0.比, *** p < 0.001 与D12 Ctrl 相比）。 c Репрезентативные изображения (слева) agus количественный анализ (справа) срезов сердца, окрашенныќќе срезов сердца, окрашенныќе ассона (чистая шкала = 500 мкм) (n = 10 срезов/группа, каждый от другой свиньи, протестировано спомый от другой свиньи, протестировано спомокировано спомый ионного анализа;### #p < 0,0001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c Íomhánna ionadaíocha (ar chlé) agus cainníochtú (ar dheis) de chodanna croí daite le smál trichrome Masson (bán = 500 µm) (n = 10 rannóg/grúpa, gach ceann acu ó mhuc dhifriúil, arna thástáil trí anailís aontreo ar athraithí;### # p < 0.0001 i gcomparáid le D0, ***p <0.02 Crl).Seasann barraí earráide don mheán ± diall caighdeánach.
Rinneamar hipitéisiú, trí mhóilíní beaga a chur leis an meán cultúir, go bhféadfaí sláine cardiomyocyte a fheabhsú agus forbairt fiobróis a laghdú le linn cultúir CTCM.Mar sin rinneamar scagthástáil le haghaidh móilíní beaga ag baint úsáide as ár gcultúir rialaithe statacha20,21 mar gheall ar an líon beag fachtóirí mearbhall.Roghnaíodh Dexamethasone (Dex), triiodothyronine (T3), agus SB431542 (SB) don scáileán seo.Baineadh úsáid as na móilíní beaga seo roimhe seo i gcultúir hiPSC-CM chun aibiú cardiomyocytes a spreagadh trí fhad sarcomere, feadáin T, agus treoluas seolta a mhéadú.Ina theannta sin, is eol go gcuireann Dex (glucocorticoid) agus SB athlasadh faoi chois29,30.Dá bhrí sin, rinneamar tástáil ar cibé an bhfeabhsódh cuimsiú ceann amháin nó meascán de na móilíní beaga seo sláine struchtúrach na hailt croí.Le haghaidh scagadh tosaigh, roghnaíodh dáileog gach cumaisc bunaithe ar na tiúchain a úsáidtear go coitianta i múnlaí cultúir cille (1 μM Dex27, 100 nM T327, agus 2.5 μM SB31).Tar éis 12 lá de chultúr, mar thoradh ar an meascán de T3 agus Dex bhí sláine struchtúrach cardiomyocyte optamach agus athmhúnlú snáithíneach íosta (Figiúirí Forlíontacha 4 agus 5).Ina theannta sin, chruthaigh úsáid na dtiúchan seo de T3 agus Dex faoi dhó nó faoi dhó éifeachtaí díobhálacha i gcomparáid le comhchruinnithe gnáth (Fíor Forlíontach 6a,b).
Tar éis an scagadh tosaigh, rinneamar comparáid ceann-le-ceann ar 4 choinníoll cultúir (Fíor 4a): Ctrl: codanna croí saothraithe inár gcultúr statach a bhfuil cur síos déanta air roimhe seo ag baint úsáide as ár meán optamaithe;20.21 TD: T3 agus Ctrl s Added Dex Dé Céadaoin;MC: codanna croí saothraithe i CTCM ag baint úsáide as ár meán optamaithe roimhe seo;agus MT: CTCM le T3 agus Dex curtha leis an meán.Tar éis 12 lá saothraithe, d'fhan inmharthanacht fíocháin MS agus MT mar a bhí i bhfíocháin úra a ndearnadh measúnú MTT orthu (Fíor 4b).Is díol spéise é nach raibh feabhas suntasach ar inmharthanacht mar thoradh ar T3 agus Dex a chur le cultúir traswell (TD) i gcomparáid le coinníollacha Ctrl, rud a léirigh ról tábhachtach spreagadh meicniúil maidir le hinmharthanacht na hailt croí a chothabháil.
Léaráid dearaidh thrialach a thaispeánann na ceithre choinníoll cultúir a úsáidtear chun éifeachtaí spreagtha meicniúil agus forlíonadh T3/Dex ar mheán ar feadh 12 lá a mheas. b Léiríonn graf barra cainníochtú inmharthanachta 12 lá iar-chultúr i ngach 4 choinníoll cultúir (Ctrl, TD, MC, agus MT) i gcomparáid le slisní croí úr (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD agus D12 MT), 12 (D12 MC) slices/grúpa aon-bhealach <#0; muc#0; 1, ###p < 0.001 i gcomparáid le D0 agus **p < 0.01 i gcomparáid le D12 Ctrl). b Léiríonn graf barra cainníochtú inmharthanachta 12 lá iar-chultúr i ngach 4 choinníoll cultúir (Ctrl, TD, MC, agus MT) i gcomparáid le slisní croí úr (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD agus D12 MT), 12 (D12 MC) slices/grúpa aon-bhealach <#0; muc#0; 1, ###p < 0.001 i gcomparáid le D0 agus **p <0.01 i gcomparáid le D12 ctrl). b gistограма показывает количественную оценку жизнеспобности 12 dней после количественную оценку жизнеспобности 12 dней после куличественную 4 ультивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 C TD 1), 15 (D12 C TD 12), 15 (D12 C TD 12), D12 C TD 12 резов/группу от разных свиней, проводится односторонний тест ANOVA; ####p < 0,0001, ###p < 0,001 по сравн, проводится односторонний тест ANOVA; ию с D12 Ctrl). b Léiríonn an graf barra cainníochtú inmharthanachta ag 12 lá tar éis an chultúir sna 4 choinníoll cultúir go léir (rialú, TD, MC, agus MT) i gcomparáid le hailt croí úr (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, agus D12 MT), 12 (D12 MC) ailt/grúpa aon-bhealaigh #, # VA, # 12 (D12 MC), # VA, #10; ###p < 0.001 vs. D0 agus **p < 0.01 i gcomparáid le D12 Ctrl). b 条形图显示所有4种培养条件（Ctrl,TD,MC和MT）与新鲜心脏切片(D0) (n= 12D 、T) (n= 12D 、 TD) D12 MT), 来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，ANOVA 测试；####p < 0.0001，###p <0.000 渔游#p < 0.001 组 ， D12 且 测试 与 丸##p < 0.000 渔游#p < 0.000 渔 渔 测试 东 游##p < 0.000 且 渔渔12 ar aghaidh.b 4 12 (D12 MC) b Гистограмма, показывающая все 4 условия культивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со сезад (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со сезад (контроль, TD, MC и MT) n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD и D12 MT), от разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односторонний односторонний т0,#0 <A0, #0, #0, #0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0, # 0; по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с контролем D12). b Histeagram a thaispeánann na 4 choinníoll cultúir go léir (rialú, TD, MC agus MT) i gcomparáid le hailt croí úr (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD agus D12 MT), ó mhuca éagsúla 12 (D12 MC) ailt/grúpa, tástáil aon-bhealach ANOVA; ##0#0p<0,#0; .01 vs rialú D12). c Léiríonn graf barra cainníochtú flosc glúcóis tar éis 12 lá tar éis an chultúir sna 4 choinníoll cultúir go léir (Ctrl, TD, MC, agus MT) i gcomparáid le slices croí úr (D0) (n = 6 slisne / grúpa ó mhuca éagsúla, déantar tástáil ANOVA aon-bhealach; ###p < 0.001, i gcomparáid le D0 agus ***p < 0.001, i gcomparáid le D0 agus ***p <0. c Léiríonn graf barra cainníochtú flosc glúcóis tar éis 12 lá tar éis an chultúir sna 4 choinníoll cultúir go léir (Ctrl, TD, MC, agus MT) i gcomparáid le slices croí úr (D0) (n = 6 slisne / grúpa ó mhuca éagsúla, déantar tástáil ANOVA aon-bhealach; ###p < 0.001, i gcomparáid le D0 agus ***p < 0.001, i gcomparáid le D0 agus ***p <0. c gistограма показывает количественную оценку потока глюкозы 12 dней после количественную оценку потока глюкозы 12 после количественную 4 ультивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/групзо срезами сердца (D0) онний Выполняется тест ANOVA; ###p < 0,001 по сравнению с D0 и ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c Léiríonn histeagram cainníochtú flosc glúcóis 12 lá tar éis an chultúir faoi na 4 choinníoll cultúir go léir (rialú, TD, MC agus MT) i gcomparáid le hailt croí úr (D0) (n = 6 rannóg/grúpa ó mhuca éagsúla, rinneadh tástáil ANOVA aontreo; ###p <0.001 i gcomparáid le D0 agus ***p <0.001t i gcomparáid le D1). c 条形图显示所有4种培养条件（Ctrl,TD,MC和MT）与新鲜心脏切片(D0)脏培养条件（Ctrl,TD,MC和MT）与新鲜心脏切片(D0)脏培养夐儿糖通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试; ）. C条形图显示所有4种条件（（ctrl、td、 mc和 mt） 新鲜心脏切片切片埇埇埇埇和和和后 12 天的通量定量（n = 6 片/组，来自猪，，，，,，,，, 猪 猪单向执行#0.ANO#0. 0 相比, ***p < 0.001 与D12 Ctrl 相比）。 c Гистограмма, показывающая количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после кульильи кульильевили овий культивирования (контроль, TD, MC agus MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срепзз, зами односторонний Были проведены тесты ANOVA; ###p < 0,001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D1рол (кон). c Histeagram a thaispeánann cainníochtú flosc glúcóis ag 12 lá tar éis an chultúir do na 4 choinníoll cultúir go léir (rialú, TD, MC, agus MT) i gcomparáid le hailt croí úr (D0) (n = 6 rannóg/grúpa, ó mhuca éagsúla, aontaobhach An raibh tástálacha ANOVA déanta, ###p <0.001 i gcomparáid le D0, ***p < 0.001 rialú i gcomparáid le D0.d Ceapacha anailíse ar fhíocháin úra (gorm), lá 12 MC (glas), agus lá 12 MT (dearg) ag deich bpointe roinne fíocháin réigiúnacha (n = 4 slisne/grúpa, tástáil ANOVA aontreo; ní raibh aon difríocht shuntasach idir grúpaí).e Plota bolcáin a thaispeánann géinte a chuirtear in iúl go difreálach i gcodanna croí úr (D0) i gcomparáid le codanna croí saothraithe faoi choinníollacha statacha (Ctrl) nó faoi choinníollacha MT (MT) ar feadh 10-12 lá.f Léarscáil teasa de ghéinte sarcomere do chodanna croí saothraithe faoi gach ceann de na coinníollacha cultúir.Seasann barraí earráide don mheán ± diall caighdeánach.
Tá spleáchas meitibileach ar an aistriú ó ocsaídiú aigéid shailligh go glicealú ina shainmharc de dhifreáil cardiomyocyte.Úsáideann cardiomyocytes neamhaibí glúcós go príomha le haghaidh táirgeadh ATP agus tá mitochondria hipoplaisteach acu gan mórán cristae5,32.Léirigh anailísí ar úsáid glúcóis, faoi choinníollacha MC agus MT, go raibh úsáid glúcóis cosúil le húsáid i bhfíocháin an lae 0 (Fíor 4c).Mar sin féin, léirigh samplaí Ctrl méadú suntasach ar úsáid glúcóis i gcomparáid le fíochán úr.Tugann sé seo le fios go gcuireann an meascán de CTCM agus T3/Dex le hinmharthanacht fíocháin agus caomhnaíonn sé feinitíopa meitibileach na gcodanna croí saothraithe 12 lá.Ina theannta sin, léirigh anailís brú gur fhan leibhéil brú mar a bhí i bhfíochán croí úr ar feadh 12 lá faoi choinníollacha MT agus MS (Fíor 4d).
Chun anailís a dhéanamh ar thionchar iomlán CTCM agus T3/Dex ar thírdhreach tras-scríobhach domhanda na bhfíochán cairdiach, rinneamar RNAseq ar slisní cairdiacha ó na ceithre riocht cultúir éagsúla (Sonraí Forlíontacha 1).Suimiúil go leor, léirigh rannóga MT cosúlachtaí tras-trascríobh ard le fíochán croí úr, agus níor léiríodh ach 16 go difreálach as 13,642 géinte.Mar sin féin, mar a léirigh muid níos luaithe, ar taispeáint slisní Ctrl 1229 géinte in iúl difreálach tar éis 10-12 lá i gcultúr (Fig. 4e).Deimhníodh na sonraí seo ag qRT-PCR de ghéinte croí agus fibroblast (Fíor Forlíontach 7a-c).Suimiúil go leor, léirigh na hailt Ctrl íosrialáil géinte timthriall cairdiach agus cille agus gníomhachtú clár géine athlastacha.Tugann na sonraí seo le fios go ndéantar dídhifreáil, a tharlaíonn de ghnáth tar éis saothrú fadtéarmach, a mhaolú go hiomlán faoi choinníollacha MT (Fíor Forlíontach 8a,b).Léirigh staidéar cúramach ar ghéinte sarcomere nach bhfuil ach faoi choinníollacha MT na géinte a ionchódaíonn an sarcomere (Fíor 4f) agus an cainéal ian (Fíor Forlíontach 9) leasaithe, á gcosaint ó shochtadh faoi choinníollacha Ctrl, TD, agus MC.Léiríonn na sonraí seo, le meascán de spreagadh meicniúil agus greann (T3/Dex), gur féidir leis an tras-scríbhinn slice croí fanacht cosúil le slices croí úr tar éis 12 lá sa chultúr.
Tacaíonn an fhíric gur fearr sláine struchtúrach cardiomyocytes i gcodanna croí a chaomhnú faoi choinníollacha MT ar feadh 12 lá, mar a léirítear le connexin slán agus logánta 43 (Fíor 5a).Ina theannta sin, laghdaíodh fiobróis i hailt croí faoi choinníollacha MT go suntasach i gcomparáid le Ctrl agus cosúil le hailt croí úr (Fíor 5b).Léiríonn na sonraí seo go gcaomhnaíonn an meascán de spreagadh meicniúil agus cóireáil T3/Dex struchtúr cairdiach go héifeachtach i gcodanna croí sa chultúr.
a Íomhánna immunofluorescence Ionadaí de troponin-T (glas), connexin 43 (dearg), agus DAPI (gorm) i gcodanna croí úr-scoite (D0) nó saothraithe ar feadh 12 lá i ngach ceann de na ceithre coinníollacha cultúir alt croí (barra scála = 100 µm).). Cainníochtú hintleachta saorga ar shláine struchtúrach an fhíocháin chroí (n = 7 (D0 agus D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC agus D12 MT) slisne/grúpa ó mhuca éagsúla, déantar tástáil ANOVA aontreo; ####p <0.0001 i gcomparáid le D0 agus *p < 0**** <0.02 C, i gcomparáid le D0 agus *p <0**** <0.05 <0.05, 0.05 C. Cainníochtú hintleachta saorga ar shláine struchtúrach an fhíocháin chroí (n = 7 (D0 agus D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC agus D12 MT) slisne/grúpa ó mhuca éagsúla, déantar tástáil ANOVA aontreo; #### p <0.0001 i gcomparáid le D0 agus *p < 0**** <0.05 C, i gcomparáid le D0 agus *p <0**** <0.05 <0.05 C. Количественная on енка струрной целостности ткани сердцц с с о с с с и и Mc и d12 mt) сров/груп о т с с с с с с . Cainníochtú sláine struchtúrach fíocháin chroí ag baint úsáide as hintleachta saorga (n = 7 (D0 agus D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC agus D12 MT) rannáin/grúpa ó mhuca éagsúla, rinneadh tástáil ANOVA aontreo; #### p <0.0001 i gcomparáid le D0 agus *p <0.00 <0.01C i gcomparáid le 0****p.对不同猪的心脏组织结构完整性（n = 7（D0 和D12 Ctrl）,5（D12 TD,D12聄（D12（）工智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比,或****p < 0.0001 或****p < 0.0001 渎 渎渉）对 不同 猪 的 心脏 结构 完整性 （（n = 7 （D0 和 D12 Ctrl） （5 （D12 TD 、 D12 MC 和 D12 MT））） 人工 智能量 化 化 进行 进行 单 向 单 向 向 向 ； ； ； 测试 ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； ； 向 测试 向#向 ； ； ； ； 向 向<0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。Cainníochtú sláine struchtúrach fíochán cairdiach ag baint úsáide as hintleachta saorga i muca éagsúla (n = 7 (D0 agus D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC agus D12 MT) rannáin/grúpa) le tástáil aontreo ANOVA;#### p < 0,0001 по сравнению с D0 agus *p < 0,05 nó ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). #### p < 0.0001 i gcomparáid le D0 agus *p < 0.05 nó ****p < 0.0001 i gcomparáid le D12 Ctrl). b Íomhánna ionadaíocha agus cainníochtú slisní croí daite le smál trichrome Masson (barra scála = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, agus D12 MC), slisní 9 (D12 MT)/grúpa ó mhuca éagsúla, déantar tástáil aon-bhealaigh ANOVA agus < #0.00p; 01, nó ****p < 0.0001 i gcomparáid le D12 Ctrl). b Íomhánna ionadaíocha agus cainníochtú slisní croí daite le smál trichrome Masson (barra scála = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, agus D12 MC), slisní 9 (D12 MT)/grúpa ó mhuca éagsúla, déantar tástáil aon-bhealaigh ANOVA agus < #0.00p; 01, nó ****p < 0.0001 i gcomparáid le D12 Ctrl). b reprезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромным красматема линейка = 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD agus D12 MC), 9 (D12 MT) срезов/группу от разных свиней, выпо стон, выпо страница; ####p < 0,0001 по сравнению с D0 agus ***p < 0,001 nó ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b Íomhánna ionadaíocha agus cainníochtú codanna croí daite le smál tríchrome Masson (barra scála = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD agus D12 MC), 9 (D12 MT) rannóga/grúpa ó mhuca éagsúla, léirithe aontreo ANOVA; ###0p < 1 vs ANOVA; ###0p < . 0.0001 vs D12 Ctrl). b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺= 500 µm） 1D = 1 D = 1 D（1！ D 和D12 MC）,来自不同猪的9个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分析；####0p <0. 001, 或****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比）. b用 masson三色染料的心脏切片的代表性和量化（比例尺尺尺 = 500 µm 100  ctrl、d12 td和d12 mc）来自不同的 9个 d12 mt切片切片切片切片切片切片切片切片切片切片切片切片切片切片切片切片切片切片版切片切片切片切片切片切片切片切片/组，进行单因素方差分析；#.**#0 <p> 1 片片片切片切片/组, 001, 或****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比）. b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромом (маласше оличественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромом Масше мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD и D12 MC), 9 (D12 MT) срезов от разных свиней / группы, один- способ, один- способ ANOp; 9 (D12 MT) D0, ***p < 0,001 nó ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b Íomhánna ionadaíocha agus cainníochtú codanna croí daite le trichrome Masson (barra scála = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD agus D12 MC), 9 (D12 MT) rannóga ó mhuca/grúpa éagsúla, modh ANOVA amháin; ####p1;0.0 i gcomparáid le 0. 0001 i gcomparáid le D12 Ctrl).Seasann barraí earráide don mheán ± diall caighdeánach.
Ar deireadh, rinneadh measúnú ar chumas CTCM chun aithris a dhéanamh ar hipertróf cairdiach trí stráice fíocháin chairdiach a mhéadú.I CTCM, mhéadaigh buaicbhrú an tseomra aeir ó 80 mmHg go 80 mmHg.Ealaín.(gnáth stráice) suas le 140 mmHg Airt.(Fig. 6a).Freagraíonn sé seo le méadú 32% ar stráice (Fíor 6b), a léiríodh roimhe seo mar an céatadán stráice comhfhreagrach a theastaíonn le haghaidh hailt croí chun fad sarcomere a bhaint amach cosúil leis an gceann a fheictear i hypertrophy.D'fhan síneadh agus treoluas fíocháin chairdiach le linn crapadh agus scíthe seasta le linn sé lá cultúir (Fíor 6c).Bhí fíochán cairdiach ó choinníollacha MT faoi réir gnáth-stráice (MT (Gnáth)) nó coinníollacha róshínte (MT (OS)) ar feadh sé lá.Cheana féin tar éis ceithre lá i gcultúr, bhí an bithmharcóir hipertrófa NT-ProBNP ardaithe go suntasach sa mheán faoi choinníollacha MT (OS) i gcomparáid le coinníollacha MT (gnáth) (Fíor 7a).Ina theannta sin, tar éis sé lá de shaothrú, tháinig méadú suntasach ar an méid cille i MT (OS) (Fíor 7b) i gcomparáid le hailt de chroí MT (gnáth).Ina theannta sin, méadaíodh trasghluaiseacht núicléach NFATC4 go suntasach i bhfíocháin ró-shínte (Fíor 7c).Léiríonn na torthaí seo forbairt chomhleanúnach ar athmhúnlú paiteolaíochta tar éis hipirdiachas agus tacaíonn siad leis an gcoincheap gur féidir an fheiste CTCM a úsáid mar ardán chun staidéar a dhéanamh ar chomharthaíocht hipertrófaithe cairdiach de bharr stráice.
Deimhníonn rianta ionadaíocha brú an tseomra aeir, brú seomra sreabhán, agus tomhais gluaiseachta fíocháin go n-athraíonn brú an tseomra brú seomra sreabhán, rud a fhágann go bhfuil gluaiseacht comhfhreagrach sa slice fíocháin.b Céatadán stráice ionadaíoch agus cuair ráta stráice do chodanna fíocháin gnáthshínte (oráiste) agus róshínte (gorm).c Barragraf a thaispeánann an t-am timthrialla (n = 19 slisne in aghaidh an ghrúpa, ó mhuca éagsúla), am crapadh (n = 18-19 slisne in aghaidh an ghrúpa, ó mhuca éagsúla), am scíthe (n = 19 slisne in aghaidh an ghrúpa, ó mhuca éagsúla), aimplitiúid gluaiseachta fíocháin (n = 14 slisne/grúpa, ó mhuca éagsúla), buaic-treoluas systolic (muca/grúpa) buaic-treoluas systolic (n = 1 ghrúpa) 4 (D0), 15 (D6) ) rannáin/grúpaí) ó mhuca éagsúla), níor léirigh tástáil t dhá eireaball aon difríocht shuntasach in aon pharaiméadar, rud a léirigh gur fhan na paraiméadair seo seasmhach le linn 6 lá saothraithe le róvoltas.Seasann barraí earráide don mheán ± diall caighdeánach.
a Cainníochtú graf Barra ar thiúchan NT-ProBNP sna meáin chultúir ó slisní croí saothraithe faoi ghnáthchoinníollacha MT stráice (Norm) nó róshínte (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, agus D4 MTOS) slisní/grúpa ó mhuca éagsúla, Déantar ANOVA dhá bhealach i gcomparáid le gnáthshíneadh <01p). a Cainníochtú graf Barra ar thiúchan NT-ProBNP i meáin chultúir ó slisní croí saothraithe faoi ghnáthstráice MT (Norm) nó overstretching coinníollacha (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, agus D4 MTOS) slices / grúpa ó mhuca éagsúla, Déantar stráice dhá bhealach ANOVA <01p;Histeagram cainníochtúil de thiúchan NT-ProBNP i meán cultúir ó slisní croí saothraithe faoi choinníollacha gnáthshínte MT (norm) nó róshínte (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, agus D4).MTOS) slisne / grúpa ó mhuca éagsúla, déantar anailís dhá fhachtóir ar athraitheacht;**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p < 0.01 i gcomparáid leis an bpíosa gnáth). a 在MT 正常拉伸(Norm) 或过度拉伸(OS) 条件下培养的心脏切片培养基中NT-ProBNP 暄庼在(D2 MTNorm). 01）. a Cainníochtú tiúchan NT-ProBNP i slisní croí saothraithe faoi ghnáthchoinníollacha MT stráice (Norm) nó róshínte (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS) ó éagsúla 猪的切片/组，可可可可réidh le gnáthshíneadh, p < 0.01).histeagram Cainníochtú tiúchan NT-ProBNP i slisní croí arna saothrú faoi choinníollacha gnáthshínte MT (norm) nó róshínte (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) agus D4 MTOS) slisne/grúpa ó mhuca éagsúla, anailís dhéthreo ar athraitheas;**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p < 0.01 i gcomparáid leis an bpíosa gnáth). b Íomhánna ionadaíocha do slisní croí daite le troponin-T agus WGA (ar chlé) agus cainníochtú méid cille (ar dheis) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) cealla / grúpa ó 10 slisní éagsúla ó mhuca éagsúla, Déantar t-tástáil mac léinn dhá eireaball; ****p < 0.0001 i gcomparáid leis an bpíosa gnáth). b Íomhánna ionadaíocha do slisní croí daite le troponin-T agus WGA (ar chlé) agus cainníochtú méid cille (ar dheis) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) cealla/grúpa ó 10 slisní éagsúla ó mhuca éagsúla, Déantar t-tástáil mac léinn dhá eireaball; ****p < 0.0001 i gcomparáid leis an bpíosa gnáth). b Репрезентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) и колипроме клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) клеток/группу из 10 разных срезов от разных свиней, по-презова ритерий Стьюдента;****p < 0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b Íomhánna ionadaíocha de chodanna croí daite le troponin-T agus AZP (ar chlé) agus cainníochtú méid cille (ar dheis) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) cealla/grúpa ó 10 rannóg éagsúil ó mhuca éagsúla, rinneadh t-tástáil dhá earr an mhic léinn; ****p < 0.0001 i gcomparáid leis an ngnáthphéine). b 用肌钙蛋白-T和WGA（左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代表怼（ ）,来自不同猪的10 个不同切片的369 (D6 MTNorm) 0.0001）. b Íomhánna ionadaíocha de shlisníní croí daite le calcarein-T agus WGA (ar chlé) agus méid cille (ar dheis) (n = 330 (D6 MTOS), 369 ó 10 slisní éagsúla (D6 MTNorm)) Cealla/组，两方法有尾 学生t tástála ；,0.0. b Репрезентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) и коликеначе страница (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 различных срезов от разных свиней Клетки/группа, дничных срезов ента;****p < 0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b Íomhánna ionadaíocha de chodanna croí daite le troponin-T agus AZP (ar chlé) agus cainníochtú ar mhéid na gceall (ar dheis) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ó 10 rannóg dhifriúla ó mhuca éagsúla) Cealla/grúpa, critéar dhá earr t;****p < 0.0001 i gcomparáid le gnáthbhrú). c Íomhánna ionadaíocha do lá 0 agus lá 6 slices croí MTOS imdhíon-lipéadaithe le haghaidh troponin-T agus NFATC4 agus cainníochtú trassuíomh NFATC4 go núicléis CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) slisne/grúpa ó mhuca éagsúla, Déantar t-tástáil dhá earr an Mhic Léinn; *p < 0.0). c Íomhánna ionadaíocha do lá 0 agus lá 6 slisní croí MTOS arna n-imdhíonlipéadú do troponin-T agus NFATC4 agus cainníochtú traslonnú NFATC4 go núicléis CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) slisne/grúpa ó mhuca éagsúla , Déantar t-tástáil dhá earr an Mhic Léinn; *p <0.0.0). c Репрезентативные изображения для срезов сердца 0 agus 6 le MTS, имуномеченых для тропонина-Тце срезов сердца 0 agus 6 le MTS енка транслокации NFATC4 в ядра кавернозных клеток (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срезов/группу от разных свинепия t-критерий Стьюдента; *p < 0,05). c Íomhánna ionadaíocha do chodanna croí ag 0 agus 6 lá MTOS, imdhíonlipéadaithe le haghaidh troponin-T agus NFATC4, agus cainníochtú trasghluaiseacht NFATC4 i núicléas na gceall uaimheach (n = 4 (D0), 3 slisne (D6 MTOS)/grúpa ó mhuca éagsúla) rinne t-tástáil dhá earr an Mhic Léinn;*p < 0.05). c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4 免疫标记的第0 天和第6 天MTOS 心脏切片的代表性丌匏幯的NFATC4 易位至CM 细胞核的量化（n = 4 (D0)、3 (D6 MTOS) 切片/组, 进行双尾学生t  、 、 、 、 c Íomhánna ionadaíocha de lipéadú imdhíon-lipéadaithe calcanin-T agus NFATC4 第0天和第6天MTOS slisní croí, agus NFATC4 ó núicléas cille éagsúla NFATC4 易位至CM 的quantity化 (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS, 痌 尜 刏)生et 电影；*p < 0.05). c reprезентативные изображения срезов сердца MTOS ag 0 agus 6 ag имуномаркировки тропображения срезов сердца MTOS ag 0 agus 6 bliain d' имуномаркировки тропонином-Тино 4 фиткение ранслокации NFATC4 в ядра CM от разных свиней (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срез/группа, два- хвостатый t-крупа, два- хвостатый t-крупа, * 0; c Íomhánna ionadaíocha de shlisne croí MTOS ag lá 0 agus 6 le haghaidh lipéadú imdhíon-lipéadaithe troponin-T agus NFATC4 agus cainníochtú trasshuíomh NFATC4 i núicléas CM ó mhuca éagsúla (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) slisne/grúpa, t -critéar dhá-earrtha Critéar an Mhic Léinn; *p).Is ionann barraí earráide agus meándiall ± caighdeánach.
Éilíonn taighde cardashoithíoch aistritheach samhlacha ceallacha a atáirgeann go cruinn an timpeallacht chairdiach.Sa staidéar seo, forbraíodh agus tréithrithe feiste CTCM a fhéadfaidh ailt ultrathin den chroí a spreagadh.Áirítear leis an gcóras CTCM spreagadh leictrimheicniúla atá sioncronaithe go fiseolaíoch agus saibhriú sreabhach T3 agus Dex.Nuair a bhí na hailt croí muc faoi lé na fachtóirí seo, d'fhan a n-inmharthanacht, sláine struchtúrach, gníomhaíocht meitibileach, agus léiriú trascríobh mar an gcéanna i bhfíochán croí úr tar éis 12 lá de chultúr.Ina theannta sin, is féidir le síneadh iomarcach fíochán cairdiach hypertrophy an chroí de bharr hyperextension.Tríd is tríd, tacaíonn na torthaí seo le ról ríthábhachtach na gcoinníollacha cultúir fiseolaíocha maidir le gnáth-fheinitíopa cairdiach a chothabháil agus cuireann siad ardán ar fáil le haghaidh scagadh drugaí.
Cuidíonn go leor fachtóirí le timpeallacht optamach a chruthú maidir le feidhmiú agus maireachtáil cardiomyocytes.Baineann na fachtóirí is soiléire de na fachtóirí seo le (1) idirghníomhaíochtaí idircheallacha, (2) spreagadh leictrimheicniúla, (3) fachtóirí humoral, agus (4) foshraitheanna meitibileach.Éilíonn idirghníomhaíochtaí fiseolaíocha cille-go-cill líonraí casta tríthoiseach de chineálacha iolracha cille arna dtacú ag maitrís eischeallach.Tá sé deacair idirghníomhaíochtaí ceallacha casta den sórt sin a athchruthú in vitro trí chomhchultúr de chineálacha cille aonair, ach is féidir iad a bhaint amach go héasca trí úsáid a bhaint as nádúr orgánailipeach na hailt croí.
Tá stráice meicniúil agus spreagadh leictreach cardiomyocytes ríthábhachtach chun feinitíopa cairdiach a chothabháil33,34,35.Cé gur úsáideadh spreagadh meicniúil go forleathan le haghaidh aeroiriúnaithe agus aibithe hiPSC-CM, rinne roinnt staidéar galánta iarracht le déanaí ar spreagadh meicniúil slisní croí sa chultúr ag baint úsáide as luchtú uniaiseach.Léiríonn na staidéir seo go bhfuil tionchar dearfach ag luchtú meicniúil 2D uniaxial ar fheinitíopa an chroí le linn cultúir.Sna staidéir seo, rinneadh codanna den chroí a luchtú le fórsaí teanntachta isiméadracha17, le luchtú líneach auxotonic18, nó rinneadh an timthriall cairdiach a athchruthú le haiseolas trasduchtóra fórsa agus tiomántáin teannais.Mar sin féin, úsáideann na modhanna seo stráice fíocháin uniaxial gan leas iomlán a bhaint comhshaoil, rud a fhágann go gcuirtear go leor géinte cairdiach faoi chois nó go gcuirtear ró-bhrú ar ghéinte a bhaineann le freagraí neamhghnácha stráice.Soláthraíonn an CTCM a ndéantar cur síos air anseo spreagadh leictrimheicniúla 3D a dhéanann aithris ar an timthriall cairdiach nádúrtha i dtéarmaí am timthriall agus stráice fiseolaíoch (25% stráice, 40% systole, 60% diastole, agus 72 bhuille in aghaidh an nóiméid).Cé nach leor an spreagadh meicniúil tríthoiseach seo amháin chun sláine fíocháin a choinneáil, tá gá le meascán de spreagadh greannach agus meicniúil ag baint úsáide as T3/Dex chun inmharthanacht, feidhm agus sláine fíocháin a chothabháil go leordhóthanach.
Tá ról tábhachtach ag fachtóirí greann i modhnú feinitíopa croí fásta.Leagadh béim air seo i staidéir HiPS-CM inar cuireadh T3 agus Dex le meáin chultúir chun aibiú cille a luathú.D’fhéadfadh tionchar a bheith ag T3 ar iompar aimínaigéad, siúcraí agus cailciam thar na seicní cille36.Ina theannta sin, cuireann T3 léiriú MHC-α agus downregulation MHC-β chun cinn, ag cur chun cinn foirmiú myofibrils twitch tapa i cardiomyocytes aibí i gcomparáid le myofibrils twitch mall i CM féatais.Mar thoradh ar easnamh T3 in othair hypothyroid cailltear bannaí mióifibrileacha agus ráta laghdaithe forbartha ton37.Feidhmíonn Dex ar ghabhdóirí glucocorticoid agus tá sé léirithe go méadaíonn sé contractility miócairdiach i gcroí scoite scoite;38 meastar go bhfuil baint ag an bhfeabhsúchán seo leis an éifeacht ar iontráil cailciam-tiomáinte (SOCE) 39,40.Ina theannta sin, ceanglaíonn Dex lena ghabhdóirí, rud a chruthaíonn freagairt leathan incheallach a shochtann feidhm imdhíonachta agus athlasadh30.
Léiríonn ár dtorthaí gur fheabhsaigh spreagadh meicniúil fisiceach (MS) feidhmíocht cultúir iomlán i gcomparáid le Ctrl, ach níor éirigh leis inmharthanacht, sláine struchtúrach, agus léiriú cairdiach a choinneáil thar 12 lá sa chultúr.I gcomparáid le Ctrl, chuir cultúir T3 agus Dex le CTCM (MT) feabhas ar inmharthanacht agus chothaigh siad próifílí trascríobh den chineál céanna, sláine struchtúrach, agus gníomhaíocht meitibileach le fíochán croí úr ar feadh 12 lá.Ina theannta sin, trí rialú a dhéanamh ar an méid stráice fíocháin, cruthaíodh samhail hipertrófa cairdiach hyperextension-spreagtha ag baint úsáide as STCM, a léirigh solúbthacht an chórais STCM.Ba chóir a thabhairt faoi deara, cé gur gnách go mbíonn orgáin shlána i gceist le hathmhúnlú cairdiach agus fiobróis a bhfuil a gcealla imshruthaithe in ann na cítocíní cuí a sholáthar chomh maith le fagaicíotóis agus fachtóirí athmhúnlaithe eile, is féidir le hailt an chroí fós aithris a dhéanamh ar an bpróiseas fibrotic mar fhreagra ar strus agus tráma.isteach i myofibroblasts.Rinneadh é seo a mheas roimhe seo sa mhúnla slisne cairdiach seo.Ba chóir a thabhairt faoi deara gur féidir paraiméadair CTCM a mhodhnú trí bhrú / aimplitiúid leictreach agus minicíocht a athrú chun go leor coinníollacha a insamhail mar tachycardia, bradycardia, agus tacaíocht imshruthaithe meicniúil (croí meicniúil gan ualach).Mar sin is tréchur meánach é an córas le haghaidh tástála drugaí.Réitíonn cumas CTCM hipertróf cairdiach de bharr ró-imní an bealach chun an córas seo a thástáil le haghaidh teiripe phearsantaithe.Mar fhocal scoir, léiríonn an staidéar reatha go bhfuil stráice meicniúil agus spreagadh greannachta ríthábhachtach chun cultúr na n-alt fíocháin chairdiacha a chothú.
Cé go dtugann na sonraí a chuirtear i láthair anseo le fios gur ardán an-gheallta é CTCM chun miócairdiam slán a shamhaltú, tá roinnt teorainneacha ag baint leis an modh cultúir seo.Is é príomhtheorannú chultúr CTCM ná go gcuireann sé strusanna meicniúla dinimiciúla leanúnacha ar na slisní, rud a chuireann cosc ​​​​ar an gcumas monatóireacht ghníomhach a dhéanamh ar chrapadh slice cairdiach le linn gach timthriall.Ina theannta sin, mar gheall ar mhéid beag na hailt cairdiacha (7 mm), tá an cumas chun feidhm systolic lasmuigh de chórais cultúir a mheas ag baint úsáide as braiteoirí fórsa traidisiúnta teoranta.Sa lámhscríbhinn reatha, sáraítear an teorainn seo go páirteach trí voltas optúil a mheas mar tháscaire ar fheidhm chonarthach.Mar sin féin, beidh gá le tuilleadh oibre leis an teorannú seo agus féadfar aghaidh a thabhairt air sa todhchaí trí mhodhanna a thabhairt isteach chun monatóireacht optúil a dhéanamh ar fheidhm na slisní croí sa chultúr, amhail mapáil optúil ag baint úsáide as cailciam agus ruaimeanna atá íogair ó thaobh voltais.Teorainn eile ar CTCM ná nach n-ionramhálann an tsamhail oibre strus fiseolaíoch (réamh-ualach agus iar-ualach).I CTCM, tionscnaíodh brú i dtreonna contrártha chun stráice fiseolaíoch 25% i diastole (stráice iomlán) agus systole (fad crapadh le linn spreagadh leictreach) a atáirgeadh i bhfíocháin an-mhór.Ba cheart an teorannú seo a bhaint i ndearaí CTCM amach anseo trí bhrú leordhóthanach ar an bhfíochán cairdiach ón dá thaobh agus trí na caidrimh brú-toirte cruinn a tharlaíonn i ndlísheomraí an chroí a chur i bhfeidhm.
Tá an t-athmhúnlú róshínte a thuairiscítear sa lámhscríbhinn seo teoranta d'aithris a dhéanamh ar chomharthaí hipertrófacha hipearshínte.Mar sin, is féidir leis an tsamhail seo cabhrú le staidéar a dhéanamh ar chomharthaíocht hipertrófa spreagtha stráice gan gá le fachtóirí greannacha nó néaracha (nach bhfuil sa chóras seo).Tá gá le tuilleadh staidéir chun iolrachas CTCM a mhéadú, mar shampla, feabhsóidh comhshaothrú le cealla imdhíonachta, fachtóirí greannachta plasma a scaiptear, agus innervation nuair a dhéantar comhshaothrú le cealla néaróineacha féidearthachtaí samhaltú galair le CTCM.
Baineadh úsáid as trí mhuc déag sa staidéar seo.Rinneadh na nósanna imeachta ainmhithe go léir de réir threoirlínte na n-institiúidí agus d'fhaomh Coiste Institiúideach um Chúram agus Úsáid Ainmhithe Ollscoil Louisville iad.clampáladh an áirse Aortach agus braitheadh ​​​​an croí le 1 L de chardaplegia steiriúil (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL heparin, pH suas le 7.4); caomhnaíodh na croíthe i dtuaslagán cairdiach-fuar oighir go dtí go n-iompraítear iad chuig an saotharlann ar oighear a bhíonn de ghnáth <10 min. caomhnaíodh na croíthe i dtuaslagán cairdiach-fuar oighir go dtí go n-iompraítear iad chuig an saotharlann ar oighear a bhíonn de ghnáth <10 min. сердца хранили в ледяном кардиоплегическом растворе do транспортировки в лабораторию ag льду, что обызанию1. bhí stóráilte hearts i oighear-fuar tuaslagán cardioplegic go dtí go iompar chuig an tsaotharlann ar oighear, a thógann de ghnáth <10 min.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中,直到冰上运送到实验室, 通常<10分钟。将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中,直到冰上运送到实验室, 通常<10分钟。 Держите сердца в ледяной кардиоплегии до транспортировки в лабораторию на льду, обычно <10 мин. Coinnigh croíthe ar oighear cardioplegia go dtí go n-iompraítear go dtí an tsaotharlann ar oighear é, de ghnáth <10 min.
Forbraíodh an gléas CTCM i mbogearraí dearaidh ríomhchuidithe SolidWorks (CAD).Tá na seomraí cultúir, na roinnteoirí agus na seomraí aeir déanta as plaisteach aicrileach soiléir CNC.Tá an fáinne cúltaca 7mm trastomhas déanta as poileitiléin ard-dlúis (HDPE) sa lár agus tá groove o-fáinne aige chun freastal ar an o-fáinne silicone a úsáidtear chun na meáin thíos a shéaladh.Scarann ​​membrane tanaí shilice an seomra cultúir ón pláta deighilte.Tá an scannán silicone gearrtha léasair ó leathán silicone tiubh 0.02″ agus tá cruas 35A aige.Déantar na gaiscéid silicone bun agus barr a ghearradh le léasair ó leathán silicone tiubh 1/16″ agus tá cruas 50A acu.Úsáidtear scriúnna cruach dhosmálta 316L agus cnónna sciatháin chun an bloc a cheangal agus séala aerdhíonach a chruthú.
Tá bord ciorcad priontáilte tiomnaithe (PCB) deartha chun a chomhtháthú leis an gcóras C-PACE-EM.Tá na soicéid cónascaire meaisín na hEilvéise ar an PCB ceangailte le leictreoidí graifíte ag sreanga copair airgead-phlátáilte agus scriúnna cré-umha 0-60 scriúdaithe isteach sna leictreoidí.Cuirtear an bord ciorcad priontáilte i gclúdach an printéir 3D.
Tá an gléas CTCM á rialú ag actuator aeroibrithe ríomhchláraithe (PPD) a chruthaíonn brú imshruthaithe rialaithe cosúil le timthriall cairdiach.De réir mar a mhéadaíonn an brú taobh istigh den seomra aeir, leathnaíonn an membrane solúbtha silicone aníos, ag brú an mheán faoin suíomh fíocháin.Déanfar limistéar an fhíocháin a shíneadh ansin leis an díbirt sreabhán seo, ag déanamh aithrise ar leathnú fiseolaíoch an chroí le linn diastole.Ag buaic an scíthe, cuireadh spreagadh leictreach i bhfeidhm trí leictreoidí graifíte, rud a laghdaigh an brú sa seomra aeir agus ba chúis le crapadh na hailt fíocháin.Taobh istigh den phíobán tá comhla hemostatach le braiteoir brú chun an brú sa chóras aer a bhrath.Cuirtear an brú a bhraitheann an braiteoir brú i bhfeidhm ar bhailitheoir sonraí atá ceangailte leis an ríomhaire glúine.Ligeann sé seo monatóireacht leanúnach a dhéanamh ar an mbrú taobh istigh den seomra gáis.Nuair a thángthas ar an uasbhrú seomra (caighdeánach 80 mmHg, 140 mmHg OS), ordaíodh don fheiste fála sonraí comhartha a sheoladh chuig an gcóras C-PACE-EM chun comhartha voltais déphasic a ghiniúint ar feadh 2 ms, socraithe go 4 V.
Fuarthas codanna croí agus rinneadh coinníollacha cultúir i 6 tobar mar seo a leanas: Aistrigh na croíthe bainte ón soitheach aistrithe chuig tráidire ina raibh cardioplegia fuar (4 ° C.).Bhí an ventricle clé scoite amach le lann steiriúil agus gearrtha i bpíosaí 1-2 cm3.Bhí na bloic fíochán seo ceangailte le tacaíochtaí fíochán le greamaitheacht fíochán agus iad a chur i ndabhach fíochán microtome creathadh ina raibh tuaslagán Tyrode agus ocsaiginithe go leanúnach (3 g/L 2,3-butanedione monooxime (BDM), 140 mm Nacl (8.18 g). MM HEPES (2.38 g), 1 mm mgcl2 (tuaslagán 1 ml 1 m), 1.8 mm CaCl2 (tuaslagán 1.8 ml 1 m), suas le 1 L DDH2O).Socraíodh an micritome creathadh chun slisní tiubh 300 µm a ghearradh ar mhinicíocht 80 Hz, aimplitiúid tonnchreatha cothrománach 2 mm, agus réamhráta de 0.03 mm/s.Bhí oighear timpeall ar an bhfíochán fíocháin chun an tuaslagán a choinneáil fionnuar agus coinníodh an teocht ag 4°C.Aistrigh na hailt fíocháin ón folctha microtome go folctha gortha ina bhfuil tuaslagán Tyrode ocsaiginithe go leanúnach ar oighear go dtí go bhfaightear go leor codanna le haghaidh pláta saothraithe amháin.Maidir le cultúir traswell, ceanglaíodh na hailt fíocháin le tacaí polúireatán steiriúla 6 mm ar leithead agus cuireadh iad i 6 ml de mheán optamaithe (199 meán, forlíonadh 1x ITS, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-alcaileach agus 2X antaibheathach-antifungal ).Cuireadh spreagadh leictreach (10 V, minicíocht 1.2 Hz) i bhfeidhm ar na hailt fíocháin tríd an C-Pace.I gcás coinníollacha TD, cuireadh T3 agus Dex úr leis ag 100 nM agus 1 μM ag gach athrú meánach.Sáithítear an meán le ocsaigin roimh athsholáthar 3 huaire sa lá.Saothraíodh codanna fíocháin i gorlann ag 37°C agus 5% CO2.
Maidir le cultúir CTCM, cuireadh rannóga fíocháin ar phrintéir 3D saincheaptha i mias Petri ina raibh tuaslagán modhnaithe Tyrode.Tá an gléas deartha chun méid slice an chroí a mhéadú 25% d'achar an fháinne tacaíochta.Déantar é seo ionas nach ndéanann na hailt den chroí síneadh tar éis iad a aistriú ó thuaslagán Tyrode go dtí an meán agus le linn diastole.Ag baint úsáide as gliú histeaicrileach, socraíodh codanna 300 µm tiubh ar fháinne tacaíochta 7 mm ar trastomhas.Tar éis na hailt fíocháin a cheangal leis an bhfáinne tacaíochta, gearr amach na codanna fíocháin iomarcacha agus cuir na codanna fíocháin atá ceangailte ar ais isteach sa dabhach de thuaslagán Tyrode ar oighear (4 ° C) go dtí go mbeidh go leor codanna ullmhaithe d'fheiste amháin.Níor cheart go mbeadh an t-am próiseála iomlán do gach feiste níos mó ná 2 uair an chloig.Tar éis 6 rannóg fíocháin a bheith ceangailte lena fáinní tacaíochta, cuireadh an gléas CTCM le chéile.Tá an seomra cultúir CTCM réamhlíonta le meán réamh-ocsaiginithe 21 ml.Aistrigh na hailt fíocháin chuig an seomra cultúir agus bain go cúramach aon boilgeoga aeir le pípéad.Treoraítear an t-alt fíocháin isteach sa pholl ansin agus brúitear go réidh é.Ar deireadh, cuir an caipín leictreoid ar an bhfeiste agus aistrigh an gléas chuig an gorlann.Ansin ceangail an CTCM leis an bhfeadán aeir agus leis an gcóras C-PACE-EM.Osclaíonn an actuator aeroibrithe agus osclaíonn an comhla aeir an CTCM.Cumraíodh an córas C-PACE-EM chun 4 V a sheachadadh ag 1.2 Hz le linn luascadh déphasic ar feadh 2 ms.Athraíodh an meán dhá uair sa lá agus athraíodh na leictreoidí uair amháin sa lá chun carnadh graifít ar na leictreoidí a sheachaint.Más gá, is féidir hailt fíocháin a bhaint as a gcuid toibreacha cultúir chun aon boilgeoga aeir a d'fhéadfadh a bheith tar éis titim fúthu a dhíbirt.I gcás coinníollacha cóireála MT, cuireadh T3/Dex úr le gach athrú meánach le 100 nM T3 agus 1 μM Dex.Saothraíodh na gléasanna CTCM i gorlann ag 37°C agus 5% CO2.
Chun ruthag sínte de slisní croí a fháil, forbraíodh córas ceamara speisialta.Baineadh úsáid as ceamara SLR (Canon Rebel T7i, Canon, Tóiceo, an tSeapáin) le macra-lionsa Navitar Zoom 7000 18-108mm (Navitar, San Francisco, CA).Rinneadh léirshamhlú ag teocht an tseomra tar éis meán úr a chur in ionad an mheán.Tá an ceamara suite ar uillinn 51° agus déantar an físeán a thaifeadadh ag 30 fráma in aghaidh an tsoicind.Ar dtús, baineadh úsáid as bogearraí foinse oscailte (MUSCLEMOTION43) le Image-J chun gluaiseacht slisní croí a chainníochtú.Cruthaíodh an masc ag baint úsáide as MATLAB (MathWorks, Natick, MA, SAM) chun réigiúin spéise a shainiú chun slisní croí a bhualadh chun torann a sheachaint.Cuirtear maisc deighilte de láimh ar gach íomhá i seicheamh fráma agus ansin cuirtear ar aghaidh chuig an breiseán MUSCLEMOTION iad.Úsáideann Muscle Motion meándéine na bpicteilín i ngach fráma chun a ghluaiseacht i gcoibhneas leis an bhfráma tagartha a chainníochtú.Rinneadh sonraí a thaifeadadh, a scagadh agus a úsáid chun am timthriall a chainníochtú agus chun stráice fíocháin a mheasúnú le linn na timthriall cairdiach.Rinneadh an físeán taifeadta a iarphróiseáil ag baint úsáide as scagaire digiteach den chéad ordú de chéim nialasach.Chun stráice fíocháin (buaic go buaic) a chainníochtú, rinneadh anailís bhuaic-go-buaic chun idirdhealú a dhéanamh idir buaiceanna agus trachanna sa chomhartha taifeadta.Ina theannta sin, déantar díspreagadh trí úsáid a bhaint as ilchineálach den 6ú hordú chun sruth comhartha a dhíchur.Forbraíodh cód cláir i MATLAB chun tairiscint fíocháin dhomhanda, am timthriall, am scíthe, agus am crapadh a chinneadh (Cód Clár Forlíontach 44).
Le haghaidh anailíse brú, ag baint úsáide as na físeáin chéanna a cruthaíodh le haghaidh measúnú stráice meicniúil, rinneamar dhá íomhá a rianú ar dtús a léirigh buaiceanna gluaisne (na pointí gluaisne is airde (uachtair) agus na pointí is ísle (níos ísle) de réir na mbogearraí MUSCLEMOTION.Rinneamar na réigiúin fíocháin a dheighilt ansin agus chuireamar foirm de algartam scáthaithe i bhfeidhm ar an bhfíochán deighilte (Fíor Forlíontach 2a).Ansin roinntear an fíochán deighilte ina dheich bhfodhromchla, agus ríomhadh an strus ar gach dromchla ag baint úsáide as an gcothromóid seo a leanas: Strain = (Sup-Sdown)/Sdown, áit arb é Sup agus Sdown fad an chrutha ó scáthanna barr agus bun na fabraice, faoi seach (Fíor Forlíontach. .2b).
Socraíodh hailt croí i 4% paraformaldehyde ar feadh 48 uair an chloig.Díhiodráitíodh fíocháin sheasta i 10% agus 20% de shiúcrós ar feadh 1 h, ansin i siúcrós 30% thar oíche.Leabaíodh na codanna ansin sa chomhdhúil teocht ghearrtha is fearr (comhdhúil OCT) agus de réir a chéile reo i ndabhach oighir isopentane/tirim.Stóráil bloic leabaithe OCT ag -80 °C go dtí go scaradh.Ullmhaíodh sleamhnáin mar ailt le tiús 8 μm.
Chun OCT a bhaint as codanna croí, teas na sleamhnáin ar bhloc téimh ag 95 °C ar feadh 5 nóiméad.Cuir 1 ml PBS le gach sleamhnán agus gor ar feadh 30 nóiméad ag teocht an tseomra, ansin tríd na hailt trí 0.1% Triton-X a shocrú i PBS ar feadh 15 nóiméad ag teocht an tseomra.Chun antasubstaintí neamhshonracha a chosc ó cheangal leis an sampla, cuir 1 ml de thuaslagán 3% BSA ar na sleamhnáin agus gor ar feadh 1 uair ag teocht an tseomra.Baineadh an BSA ansin agus nite na sleamhnáin le PBS.Marcáil gach sampla le peann luaidhe.Cuireadh antasubstaintí príomhúla (caolaithe 1:200 in 1% BSA) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) agus troponin-T (Thermo Scientific; #MA5-12960)) thar 90 nóiméad (connexin 43 (Abcam; #AB11370); 88 (Thermo Scientific; #A16079), i gcoinne coinín Alexa Fluor 594 (Thermo Scientific; #T6391) ar feadh 90 nóiméad breise Nite 3 huaire le PBS Chun idirdhealú a dhéanamh ar staining sprice ón gcúlra, níor úsáidamar ach an antashubstaint tánaisteach mar rialú.Ar deireadh, cuireadh stain núicléach DAPI leis agus cuireadh na sleamhnáin i vectashield agus i magile vectashiel. micreascóp le formhéadú 40x.
Baineadh úsáid as WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) ag 5 μg/ml i PBS le haghaidh staining WGA agus cuireadh i bhfeidhm ar chodanna seasta ar feadh 30 nóiméad ag teocht an tseomra.Ansin nite na sleamhnáin le PBS agus cuireadh an tSúdáin dubh le gach sleamhnán agus gor iad ar feadh 30 nóiméad.Ansin nite na sleamhnáin le PBS agus cuireadh meán leabaithe vectashield leis.Rinneadh na sleamhnáin a léirshamhlú ar mhicreascóp Keyence ag formhéadú 40x.
Baineadh OCT de na samplaí mar a thuairiscítear thuas.Tar éis an OCT a bhaint, tumtar na sleamhnáin i dtuaslagán Bouin thar oíche.Ansin sruthaíodh na sleamhnáin le huisce driogtha ar feadh 1 uair an chloig agus ansin cuireadh iad i dtuaslagán fuchsin aigéad Bibrich aló ar feadh 10 nóiméad.Ansin nitear na sleamhnáin le huisce driogtha agus cuireadh i dtuaslagán d'aigéad fosphomolybdenum / 5% fosphotungstic ar feadh 10 nóiméad.Gan sruthlú, aistrigh na sleamhnáin go díreach isteach sa tuaslagán gorm anilín ar feadh 15 nóiméad.Ansin nitear na sleamhnáin le huisce driogtha agus cuireadh iad i dtuaslagán d'aigéad aicéiteach 1% ar feadh 2 nóiméad.Triomaíodh na sleamhnáin in eatánól 200 N agus aistríodh iad go xiléin.Rinneadh sleamhnáin dhaite a léirshamhlú ag baint úsáide as micreascóp Keyence le cuspóir 10x.Rinneadh céatadán achair fiobróis a chainníochtú trí úsáid a bhaint as bogearraí Keyence Analyzer.
Measúnacht Inmharthanachta Cealla CyQUANT™ MTT (Invitrogen, Carlsbad, CA), uimhir chatalóg V13154, de réir phrótacal an mhonaróra le roinnt modhnuithe.Go háirithe, baineadh úsáid as punch máinliachta le trastomhas de 6 mm chun méid fíocháin aonfhoirmeach a chinntiú le linn anailíse MTT.Plátáladh fíocháin ina n-aonar isteach sna toibreacha de phláta 12-tobar ina raibh foshraith MTT de réir phrótacal an mhonaróra.Goirtear na hailt ag 37° C. ar feadh 3 huaire an chloig agus meitibilíonn an fíochán beo an tsubstráit MTT chun comhdhúil formazan corcra a dhéanamh.Cuir 1 ml DMSO in ionad an tuaslagán MTT agus gor ag 37 °C ar feadh 15 nóiméad chun formazan corcra a bhaint as na codanna croí.Caolaíodh samplaí 1:10 in DMSO i bplátaí bun soiléir 96-go maith agus tomhaiseadh déine dath corcra ag 570 nm ag baint úsáide as léitheoir pláta Cytation (BioTek).Rinneadh normalú ar léamha go meáchan gach slice den chroí.
Cuireadh meáin ina bhfuil 1 μCi/ml [5-3H]-glúcóis (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) le haghaidh measúnachta ar úsáid glúcóis mar a thuairiscítear roimhe seo, in ionad meáin slisne croí.Tar éis 4 huaire goir, cuir 100 µl de mheán le feadán oscailte micrealártheifneora a bhfuil 100 µl de 0.2 N HCl ann.Ansin cuireadh an feadán i bhfeadán scintillation ina raibh 500 μl dH2O chun galú [3H]2O ar feadh 72 uair ag 37°C.Ansin bain an feadán micrealártheifneoir den fheadán scintillation agus cuir 10 ml de shreabhán scintillation leis.Rinneadh comhaireamh scintillation ag baint úsáide as anailíseoir scintillation leacht Tri-Carb 2900TR (Packard Bioscience Company, Meriden, CT, SAM).Rinneadh úsáid glúcóis a ríomh ansin ag cur san áireamh [5-3H]-gníomhaíocht shonrach glúcóis, cothromaíocht agus cúlra neamhiomlán, caolú [5-3H] - go glúcóis neamhlipéadaithe, agus éifeachtúlacht chuntar scintillation.Déantar na sonraí a normalú go mais na hailt den chroí.
Tar éis aonchineálú fíocháin i Trizol, rinneadh RNA a leithlisiú ó chodanna croí ag baint úsáide as Kit Micrimhilseogra Qiagen miRNeasy #210874 de réir phrótacal an mhonaróra.Rinneadh ullmhúchán leabharlainne RNAsec, seicheamhú agus anailís sonraí mar seo a leanas:
Baineadh úsáid as 1 µg de RNA in aghaidh an tsampla mar ábhar tosaigh chun an leabharlann RNA a ullmhú.Gineadh leabharlanna seicheamhaithe trí úsáid a bhaint as Trealamh Ullmhúcháin Leabharlainne RNA UltraTM NEBNext for Illumina (NEB, USA) tar éis mholtaí an déantóra, agus cuireadh cóid innéacs leis na sraitheanna tréithe do gach sampla.Go hachomair, íonaíodh mRNA ó RNA iomlán ag baint úsáide as coirníní maighnéadacha ceangailte le oligonucleotides pola-T.Déantar an scoilteadh trí úsáid a bhaint as caitíocha défhiúsacha ag teocht ard i Maolán Imoibrithe Sintéis Chéad Snáithe NEBNext (5X).Rinneadh cDNA den chéad snáithe a shintéisiú ag baint úsáide as primers heicsamair randamach agus M-MuLV droim ar ais transcriptase (RNase H-).Déantar an dara snáithe cDNA a shintéisiú ansin trí úsáid a bhaint as DNA polaiméaráis I agus RNase H. Déantar na forchrochtaí atá fágtha a thiontú go foircinn mhaol trí ghníomhaíocht exonuclease/polaiméiráis.Tar éis deireadh 3′ an bhlúire DNA a adenylation, tá Adaptóir NEBNext le struchtúr lúb hairpin ceangailte leis chun é a ullmhú le haghaidh hibridiú.Le haghaidh roghnú blúirí cDNA den fhad is fearr 150-200 bp.Glanadh blúirí leabharlainne ag baint úsáide as an gcóras AMPure XP (Beckman Coulter, Beverly, SAM).Ansin, úsáideadh einsím 3 μl USER (NEB, SAM) le cDNA a roghnaíodh i méid agus é ceangailte le cuibheoir ar feadh 15 nóiméad ag 37°C agus ansin ar feadh 5 nóiméad ag 95°C roimh PCR.Rinneadh PCR ansin ag baint úsáide as Phusion High-Fidelity DNA polymerase, uilíoch PCR primers, agus Innéacs (X) primers.Ar deireadh, rinneadh táirgí PCR a íonú (córas AMPure XP) agus rinneadh measúnú ar cháilíocht na leabharlainne ar chóras Agilent Bioanalyzer 2100.Cuireadh an leabharlann cDNA in ord ansin le seicheamhóir Novaseq.Tiontaíodh comhaid íomhá amh ó Illumina go léamha amh ag baint úsáide as Bonnghlao CASAVA.Stóráiltear sonraí amha i gcomhaid bhformáid FASTQ(fq) ina bhfuil seichimh léite agus buncháilíochtaí comhfhreagracha.Roghnaigh HISAT2 chun léamha seicheamhaithe scagtha a mheaitseáil leis an ngéanóm tagartha Sscrofa11.1.Go ginearálta, tacaíonn HISAT2 le genomes d'aon mhéid, lena n-áirítear genomes níos mó ná 4 billiún bonn, agus socraítear luachanna réamhshocraithe don chuid is mó de na paraiméadair.Is féidir léamha splicing ó shonraí RNA Seq a ailíniú go héifeachtach trí úsáid a bhaint as HISAT2, an córas is tapúla atá ar fáil faoi láthair, leis an cruinneas céanna nó níos fearr ná aon mhodh eile.
Léiríonn raidhse na n-athscríbhinní go díreach leibhéal léiriú géine.Déantar leibhéil slonn géine a mheas ag an raidhse tras-scríbhinní (comhaireamh seicheamhaithe) a bhaineann leis an ngéanóm nó leis na heasóin.Tá líon na léite i gcomhréir le leibhéil slonn géine, fad géine, agus doimhneacht seicheamhaithe.Ríomhadh FPKM (blúirí in aghaidh an mhíle bunphéire de thrascríobh in ord in aghaidh an mhilliúin péirí bonn) agus socraíodh luachanna P-léiriú difreálach ag baint úsáide as an bpacáiste DESeq2.Ansin rinneamar an ráta fionnachtana bréagach (FDR) a ríomh do gach luach P ag baint úsáide as modh Benjamini-Hochberg9 bunaithe ar an bhfeidhm R-ionsuite “p.adjust”.
Tiontaíodh RNA scoite amach ó chodanna croí go cDNA ag tiúchan 200 ng/μl ag baint úsáide as an meascán SuperScript IV Vilo Master ó Thermo (Thermo, cat. uimh. 11756050).Rinneadh RT-PCR cainníochtúil ag baint úsáide as pláta imoibrithe trédhearcach 384-tobar Microamp Bithchórais Fheidhmeach (Thermo, cat. uimh. 4483319) agus greamachán optúil microamp (Thermo, cat. uimh. 4311971).Bhí an meascán imoibrithe comhdhéanta de 5 µl meascán Taqman Fast Advanced Master (Thermo, cat # 4444557), 0.5 µl Taqman Primer agus 3.5 µl H2O measctha in aghaidh an tobair.Ritheadh ​​timthriallta caighdeánach qPCR agus rinneadh luachanna CT a thomhas ag baint úsáide as ionstraim PCR fíor-ama Quantstudio 5 Biosystems Feidhmeach (modúl 384-tobar; táirge # A28135).Ceannaíodh primers Taqman ó Thermo (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss068601), RGL1 (Ss068601), RGL1 (Ss068601) GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1 ), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss04245588_m1), COL1A2 (Ss03375009_u1 ), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss04245588_m1) Ba iad na gnáth-luachanna CTDH na samplaí tí.
Rinneadh measúnú ar scaoileadh meáin NT-ProBNP ag baint úsáide as an trealamh NT-ProBNP (muc) (Cat. Uimh. MBS2086979, MyBioSource) de réir phrótacal an mhonaróra.Go hachomair, cuireadh 250 µl de gach sampla agus caighdeán i ndúblach le gach tobar.Díreach tar éis an sampla a chur leis, cuir 50 µl d’Imoibrí Measúnach A le gach tobar.Croith go réidh an pláta agus séalaigh le séalaithe.Ansin goradh na táibléid ag 37°C ar feadh 1 uair.Ansin asúigh an tuaslagán agus nigh na toibreacha 4 huaire le 350 µl de thuaslagán níocháin 1X, ag gor an tuaslagán níocháin ar feadh 1-2 nóiméad gach uair.Ansin cuir 100 µl Imoibrí Measúnach B in aghaidh an tobair agus séalaigh le séalaithe pláta.Croitheadh ​​an táibléad go réidh agus gor é ag 37°C ar feadh 30 nóiméad.Asúigh an tuaslagán agus nigh na toibreacha 5 huaire le 350 µl de thuaslagán níocháin 1X.Cuir 90 µl de thuaslagán foshraithe le gach tobar agus séalaigh an pláta.Gorraigh an pláta ag 37°C ar feadh 10-20 nóiméad.Cuir 50 µl Stop Réiteach le gach tobar.Rinneadh an pláta a thomhas láithreach ag baint úsáide as léitheoir pláta Cytation (BioTek) socraithe ag 450 nm.
Rinneadh anailís chumhachta chun na méideanna grúpa a roghnú a sholáthróidh >80% de chumhacht chun athrú iomlán 10% sa pharaiméadar a bhrath le ráta earráide Cineál I 5%. Rinneadh anailís chumhachta chun na méideanna grúpa a roghnú a sholáthróidh >80% de chumhacht chun athrú iomlán 10% sa pharaiméadar a bhrath le ráta earráide Cineál I 5%. Анализ мощности был выполнен для выбора размера групп, которые обеспечат >80% мощности для обинаружо 1 мения параметра с 5% частотой ошибок типа I. Rinneadh anailís chumhachta chun méideanna grúpa a roghnú a sholáthródh >80% de chumhacht chun fíorathrú paraiméadar 10% a bhrath le ráta earráide Cineál I 5%.进行功效分析以选择将提供> 80功效以检测参数中10,绝对变化和5!进行功效分析以选择将提供> 80功效以检测参数中10,绝对变化和5! Был проведен анализ мощности для выбора размера размера группы, который обеспечил бы > 80% мощности для выбора размера размера группы, который обеспечил бы > 80% мощности для ноля для доно 1 ого изменения параметров agus 5% частоты ошибок типа I. Rinneadh anailís chumhachta chun méid grúpa a roghnú a sholáthródh >80% de chumhacht chun absalóideach athrú paraiméadar 10% agus ráta earráide cineál I 5% a bhrath.Roghnaíodh rannáin fíocháin go randamach roimh an turgnamh.Bhí na hanailísí go léir dall ar an riocht agus níor díchódaíodh samplaí ach amháin tar éis anailís a dhéanamh ar na sonraí go léir.Baineadh úsáid as bogearraí GraphPad Prism (San Diego, CA) chun gach anailís staitistiúil a dhéanamh. Maidir le gach staidreamh, measadh go raibh p-luachanna suntasach ag luachanna <0.05. Maidir le gach staidreamh, measadh go raibh p-luachanna suntasach ag luachanna <0.05. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Maidir le gach staidreamh, measadh go raibh p-luachanna suntasach ag luachanna <0.05.对于所有统计数据，p值在值<0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据，p值在值<0.05 时被认为是显着的。 Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Maidir le gach staidreamh, measadh go raibh p-luachanna suntasach ag luachanna <0.05.Rinneadh tástáil t dhá eireaball ar na sonraí gan ach 2 chomparáid.Baineadh úsáid as ANOVA aontreo nó dhá bhealach chun suntas idir grúpaí iolracha a chinneadh.Agus tástálacha post hoc á ndéanamh, cuireadh ceartú Tukey i bhfeidhm chun comparáidí iolracha a chur san áireamh.Tá cúinsí staitistiúla speisialta ag baint le sonraí RNAsec agus FDR agus p.adjust á ríomh mar a thuairiscítear sa rannán Modhanna.
Le haghaidh tuilleadh eolais ar dhearadh an staidéir, féach ar an Tuarascáil Taighde Dúlra achomair atá nasctha leis an alt seo.