Nature.com saytiga tashrif buyurganingiz uchun tashakkur.Siz foydalanayotgan brauzer versiyasi cheklangan CSS-ni qo'llab-quvvatlaydi.Eng yaxshi tajriba uchun yangilangan brauzerdan foydalanishni tavsiya qilamiz (yoki Internet Explorer-da Moslik rejimini o'chirib qo'ying).Shu bilan birga, doimiy qo'llab-quvvatlashni ta'minlash uchun biz saytni uslublarsiz va JavaScript-ni ishlatmasdan taqdim etamiz.
Giyohvand moddalar testi uchun yurakning fiziologik muhitini aniq ko'paytiradigan vitro tizimda ishonchli bo'lishi kerak.Insonning yurakdagi to'qimalarning tabiiy tizimlarining cheklanganligi yurak dori effektlarining noaniq talqinlariga olib keldi.Bu erda biz yurak bo'laklarini (CTCM) ishlab chiqdik (CTCM) ni (CTCM) rivojlantiramiz va yurak tilimlarini elektr tarqaladi va yurak tilimlarini, ya'ni yurak tilimlarini va yurak bo'laklarini teradi.12 kunlik madaniyatdan so'ng, bu yondashuv yurak uchini qisman yaxshiladi, ammo ularning tarkibiy yaxlitligini to'liq saqlab qolmadi.Shuning uchun, kichik molekula ekranidan keyin biz 100 NM trisiototyoninin (T3) va 1 mkm dexamethine (DEX) 12 kun davomida mikroektoni ekish uchun mikroektoni saqlab qolishini aniqladik.T3 / DEXni davolash bilan birgalikda CTCM tizimi tranzitorli profillar, hayotiylik, metabolik faollik va tarkibiy yaxlitlikni 12 kun davomida yangi yurak to'qimalari bilan bir xil darajada saqlab qo'yilgan.Bundan tashqari, madaniyat to'qimalarining madaniyat to'qimalarining haddan tashqari cho'zilishi, KTCMning yurak strekti tomonidan qo'zg'atilgan gipertrofik sharoitlarga mos keladigan gipertrofik sharoitlarga oid dalillarni keltirib chiqaradi.Xulosa qilib, KTM, yurakning fiziologiyasi va patofisiologiyasini uzoq vaqt davomida madaniy namoyishga imkon beradigan madaniyatdagi fiziologiyasi va patofisiologiyasini modellashtirishi mumkin.
Klinik tadqiqotlar oldidan, in vitro tizimlarida ishonchli inson qalbining fiziologik muhitini aniq aks ettirishi mumkin.Bunday tizimlar o'zgargan mexanik tamg'or, yurak urishi va elektrotiziologik xususiyatlarini taqlid qilishi kerak.Hayvonlarning modellari odatda, inson yuraklarida giyohvand moddalar ta'sirini aks ettiruvchi, noqulaylik tug'dirgan holda yurak fiziologiyasi uchun skrining platformasi sifatida ishlatiladi.Oxir oqibat, ideal yurak to'qimasi madaniy modeli (CTCM) - bu turli xil terapevtik va farmakologik aralashuvlar, inson yuraklarining fiziologiyasi va patofisiologiyasini aniq takrorlash uchun juda sezgir va xos xususiyatdir.Bunday tizimning yo'qligi yurak etishmovchiligi uchun yangi davolash usullarini cheklaydi4,5, giyohvand moddalarni kariyotoksikligiga bozorga chiqishning asosiy sababi sifatida olib bordi.
So'nggi o'n yil ichida klinik foydalanishdan olib tashlangan, chunki ular qorincha aritmlariga va to'satdan o'limga olib keladigan QT oralig'ini uzaytirishga olib keladi.Shunday qilib, yurak-qon tomir samaradorligi va toksiklikni baholash uchun ishonchli prinsikl strategiyalari uchun tobora ishonchli bo'lishi kerak.Giyohvand moddalar skriningida va toksiklik sinovida inson tomonidan qo'zg'atilgan plyuripotsiz plyuritor hujayrali hujayrali hujayrali hujayrali hujayrali hujayralar (IIS-Cm) tomonidan olingan.Biroq, yurak to'qimalarining etakchiligining etmagan tabiati va yurak to'qimalarining ko'p qirrali murakkabligi yo'qligi ushbu usulning asosiy cheklovlari hisoblanadi.So'nggi tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, bu cheklov o'z-o'zidan qisqarish boshlanganidan ko'p o'tmay, yurak to'qimalari gidrogellarini hosil qilish va vaqt o'tishi bilan elektr stimulyatsiyasini kuchaytirish uchun.Biroq, ushbu kestirib, Mikrotekisliklar kattalar miyokardining etuk elektrofiziologik va tartiblov xususiyatlariga ega emaslar.Bundan tashqari, inson yurak to'qimasi yanada murakkab tuzilishga ega, ular orasida turli xil hujayralar, shu jumladan endotelial hujayralar, shu jumladan enstalampulz moddalarning ekstrakulyar matritsa oqsillari bilan o'zaro bog'langan.Ushbu populyatsiyaning ushbu sohilining ushbu populyatsiyasining 1,1,13, katta yoshlian yuragi individual hujayra turlaridan foydalangan holda yurak to'qimalarini modellashtirish uchun katta to'siqdir.Ushbu asosiy cheklovlar fiziologik va patologik sharoitlarda miyokard to'qimalarini buzish usullarini ishlab chiqish muhimligini ta'kidlaydi.
Sohatning ingichka (300 mkm), insonning yurak uchastkalari inson miyokarddiumining istiqbolli modeli ekanligini isbotladi.Ushbu usul insonning yurak to'qimalariga o'xshash to'liq 3D ko'p sonli tizimga kirishni ta'minlaydi.Biroq, 2019 yilgacha, madaniyatli yurak uchastkalaridan foydalanish qisqa (24 H) madaniyatdan omon qolish bilan cheklangan.Bu bir qator omillar, shu jumladan jismoniy-mexanik, havo suyuq interfeysi va yurak to'qimalarining ehtiyojlarini qo'llab-quvvatlamaydigan oddiy ommaviy axborot vositalarining etishmasligi.2019 yilgi bir qator tadqiqot guruhlari yurak to'qimalari madaniyat tizimlariga mexanik omillarni kiritish madaniyat hayotini kengaytirish, yurak ifodasini yaxshilash va yurak patologiyasini taqroni aks ettirishi mumkinligini namoyish etdilar.Ikki va 18 yoshda ko'rsatilganki, madaniy fenotiping madaniyati paytida birlashtiruvchi mexanik penotipga ijobiy ta'sir ko'rsatadi.Biroq, bu tadqiqotlar yurak tsiklining dinamik uch o'lchovli fizik-mexanik yuklanishidan foydalanmadi, chunki yurak uchastkalari ham izometrik tanglik kuchlari bilan 17 yoki chiziqli auxotonali yuklash bilan to'ldirilgan.Ushbu to'qimalarni cho'zish usullari ko'plab yuraklarning ko'plab genlarini bostirish yoki g'ayritabiiy cho'zish javoblari bilan bog'liq bo'lgan genlarni bostirish yoki haddan tashqari oshirib yuborish.Xususan, Pituulis va boshqalar.19 Yurak tsiklini o'zgartirish uchun yurak tsikllari madaniyatini rivojlantirdi va transductier fikr-mulohazalar va keskinlik firmasidan foydalangan holda.Ushbu tizim Ax Axiv aylanma modelini modellashtirishga imkon beradigan bo'lsa-da, usulning murakkabligi va pastligi ushbu tizimning qo'llanilishini cheklaydi.Yaqinda laboratoriyamiz elektr stimulyatsiyasini va portsiniy va inson yurak to'qimalarining 6 kunigacha, 6 kungacha bo'lgan portlashning oqibatlarini ta'minlash uchun optimallashtirildi va optimallashtirilgan vositani ishlab chiqdi.
Hozirgi qo'lyozmada biz yurak taqsimotining uch o'lchovli fiziologiya va patofiziologiya tarqalishini, yurak tsiklini takrorlash paytida uch o'lchovli kardiologiyani va patofiziologik tarqalishini o'z ichiga olgan yurak to'qimalarining madaniyatini (CTCM) tasvirlaymiz.Ushbu CTCM giyohvand moddalarni bashorat qilishning aniqligini oshirishi, sutemizuvchi yuragining klinik preparatni sinovdan o'tkazish uchun sutemizuvchi yuragining fiziologiya / patofiziologiyasini taqlid qiladigan o'rta oqim tizimiga erishilmasligi mumkin.
Gemodinamik mexanik signallar vitro 22,23,24-dagi kardiyomyotitni yuritishda muhim rol o'ynaydi.Joriy qo'lyozmada biz katta yoshdagi CTCM (1A-rasm) ishlab chiqdik (1,2 Hz, 72 kalit) dagi elektr va mexanik stimulyatsiyani taqqoslash orqali biz voyaga etdi.Distolda haddan tashqari to'qima cho'zishning oldini olish uchun to'qima hajmini 25% ga oshirish uchun 3D bosib chiqarish qurilmasi (1B-rasm).CARDIDIC tsiklini to'liq takrorlash uchun C-SACA-tizimi tizimiga kiritilgan elektr tekisidagi elektr toki 100 ms ni ishga tushirish uchun 100 ms dan oldin 100 ms ni ishga tushirish vaqti keldi.To'qima madaniyati tizimi dasturiy simli silikon membranasini tsiklik ravishda kengaytirish uchun dasturlashtirilgan pnevmatik aktuator (LB muhandisligi, Germaniya) yuqori palatadagi yurak tilimini kengaytirishiga olib keladigan dasturiy tutqichni o'lchash uchun dasturlashtirilgan pnevmatik aktuator (LB muhandisligi, Germaniya) dan foydalanadi.Tizim bosim o'tkazgich orqali tashqi havo liniyasi bilan ulangan, bu esa bosimni (± 1 mm) va vaqtni (± 1 ms) (1C-rasm) amalga oshirishga imkon berdi.
Qurilmaning madaniyat kamerasida ko'k rangda ko'rsatilgan 7 mm qo'llab-quvvatlash halqasiga to'qima qismini 7 mm qo'llab-quvvatlash halqasiga qo'shing.Madaniyat kamerasi havo kamerasidan ingichka egiluvchan silikon membranasi bilan ajratilgan.Oqishning oldini olish uchun har bir kameraga har bir kameraga qo'ying.Qurilmaning qopqog'i tarkibida elektr stimulyatsiyasini ta'minlaydigan grafit elektodod mavjud.B katta to'qima qurilmasining sxematik vakolatxonasi, qo'llanma uzuk va yordami.To'liq bo'limlar (jigarrang) asbobning tashqi chetiga o'ralgan qo'llanmada joylashgan qo'l uzuk bilan birga yuk tashilgan qurilmaga joylashtiriladi.Qo'llanmadan foydalanib, yurak to'qimalari qismidagi to'qima akril yopishtiruvchilari bilan mahkamlangan uzukni diqqat bilan joylashtiring.C grafi - elektr stimulyatsiyasi vaqtini ko'rsatadigan havo kamerasi bosimi sifatida dasturlashtirilgan pnevmatik aktuator (PPD) tomonidan boshqariladi.Bosim sensorlaridan foydalangan holda elektr stimulyatsiyasini sinxronlashtirish uchun ma'lumotlar sotib olish moslamasi ishlatilgan.Madaniyat kamerasida bosim belgilangan chegaraga yetganda, pulsion signal elektr stimulyatsiyasini boshlash uchun C-Pece-EMga yuboriladi.d inkubator tokchasiga joylashtirilgan to'rtta CTMS-ning tasviri.Pnevmatik palvativdagi bosimni kuzatish uchun to'rtta qurilma bitta PPD-ga bir ppd bilan ulangan, va pnevmatik klapanga bosimli sensorlarga bosimli bosim o'tkaziladi.Har bir qurilmada oltita to'qima qism mavjud.
Bitta pnevmatik aktuatordan foydalanish, biz 4 CTCM moslamasini boshqarishga muvaffaq bo'ldik, ularning har biri 6 ta to'qima qismini ushlab tura olmadi (1D-rasm).STCMda havo kamerasida havo bosimi suyuqlik kamerasida sinxron bosimga aylantiriladi va yurak sonining fiziologik kengayishi (2-rasm va qo'shimcha kino 1).To'qimachilikni baholash 80 mm HG da cho'zish.San'at.to'qima qismlarini 25% ga cho'zish (2b-rasm).Ushbu foiz strosida fiziologik sarsvachmiya uzunligi uchun 2,2-2,3 mkm uchun mos keladi.Kamera sozlamalari (1-rasm qo'shimcha) yordamida to'qima harakati baholandi.To'qima harakatining amplitsivligi va tezligi (d)) yurak tsiklini va Sistole va diazol paytida vaqt o'tishi (2b-rasm).Qishloq to'qimalarining cho'zilishi va tezligi qisqarish va yengillik paytida 12 kun davomida doimiy ravishda saqlanib qoldi (2F-rasm).Madaniyat davomida institutni rag'batlantirish samaradorligini baholash uchun biz soyali algoritm (2a, b) yordamida faol deformatsiyani aniqlash usulini ishlab chiqdik.Yurakning bir xil qismida (2F-rasm).Qisqartirilgan (R6-9), elektr stimulyatsiyasini elektr stimulyatsiya qilish paytida kuchlanish elektr stimulyatsiyasining 20 foizga ko'pligini ko'rsatadi, bu esa pudratli funktsiyaga elektr stimulyatsiyasini hissa qo'shadi.
Havo kamerasining bosimi, suyuqlik kamerasi bosimi va to'qima harakati o'lchovlari va to'qimalarning o'zgarishi fundali kamera bosimini o'zgartiradi, bu esa to'qimalarning qisqarishi.B foiz izlari foiz strelkasining foiz stavkalarini (ko'k) foiz strelkasiga mos keladi (to'q sariq).C Yurak tilimining o'lchangan harakati o'lchanadigan harakat tezligiga mos keladi.(d) yurak tsiklik harakati (ko'k chiziq) va tezlik (ko'k liniyasi) va yurak bir tilida.e tsikl vaqtini (n = 19 tilimdan) kozikatsiyasi, qisqarish vaqtini (n = 19 tilimdan), dam olish vaqti (n = 19 tilim), to'qima harakati (n = 25).Slimes) / Turli cho'chqalardan guruh), cho'qqisi sistolik tezligi (n / 24), 25 (D0), 25 (D0) va turli cho'chqalardan iborat.Ikki dumli talabaning T-testi har qanday parametrda sezilarli farqni ko'rsatdi.f (qizil) va (ko'k) elektr stimulyatsiyasini (ko'k) elektr stimulyatsiyasini (ko'k) elektr stimulyatsiyasini, bir xil bo'limdan boshlab o'nta mintaqaviy burilish izlarini tahlil qilish.Pastki panellar to'qima bo'laklarida har xil bo'limlardan o'nta hududda elektr stimulyatsiyasini elektr stimulyatsiya qilishsiz va boshqa o'nta hududda elektr stimulyatsiyasini keltirib chiqaradi. (n = 8 tillar / turli cho'chqalardan iborat guruh, ikki dumli talaba T-testi amalga oshiriladi; **** p <0.0001, ** p <0.01, * p <0.05). (n = 8 tillar / turli cho'chqalardan iborat guruh, ikki dumli talaba T-testi amalga oshiriladi; **** p <0.0001, ** p <0.01, * p <0.05). (n = 8 sreov / gruppu ot raznyx sviney, provoditsya dvustonniy t-kryuenniy t-kryuenniy t-kryid), ** p <0,05, * p <0,05). (n = 8 qismlar / turli cho'chqalardan iborat guruh, ikki dumli talaba T-sinov; **** p <0.0001, ** p <0.01, * p <0.05). (N = 8 片 / 组, 来自 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生; **** p <0.0001, ** p <0.0001, * p <0.05). (N = 8 片 / 组, 来自 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生 学生; **** p <0.0001, ** p <0.0001, * p <0.05). (n = 8 srezu, ot raznyx sviney, dvutonenniy kriteriy studyuenta; ** 0,01, * p <0,05). (n = 8 bo'limlar / guruh, turli xil cho'chqalardan, ikki dumli talabaning T-sinovi; **** p <0.0001, * p <0.05).Xato panellari o'rtacha ± standart og'ishni anglatadi.
Oldingi statik biomimetik yurakda madaniyat tizimi [20, 21], biz 6 kun davomida elektr tijoratini elektrlashtirish va o'rta kompozitsiyani optimallashtirish orqali 6 kun davomida hayotiy tiniqlikni saqlab qoldik.Biroq, 10 kundan keyin bu raqam keskin pasaydi.Biz oldingi statik biomimetik madaniyat tizimimizda 20, 21 ta nazorat shartnomasi (CTRL) va biz bir vaqtning o'zida mexanik va elektr stimulyatsiyasini (CTCM) yo'naltiramiz.deb nomlangan.Birinchidan, siz elektr stimulyatsiyasiz mexanik stimulyatsiyani 6 kun davomida ushlab turish uchun elektr stimulyatsiyasini ta'minlash uchun mexanik stimulyatsiya etarli emasligini aniqladik (3a, b).Qizig'i shundaki, STCM-dan tashqari fizio-mexanik va elektr stimulyatsiyasini joriy etish bilan MS shartlari ostida 12 kunlik yurak uchastkalarining hayotiyligi, ammo MTT tahlili (1-rasm) bo'lganidek, yangi yurak uchastkalari bilan bir xil bo'lib qoldi.3a).Bu shuni ko'rsatadiki, yurak tsiklini mexanik rag'batlantirish va simulyatsiya qilish to'qima qismlarini oldingi statik madaniyat tizimimizda ma'lum darajada yasha oladi.Biroq, yurak uchastkalarini iste'mol qilish va ulanish 43-dagi tarkibiy yaxlitlikni baholash, 43-kuni MC to'qimalarida xuddi shu kuni boshqaruvga qaraganda 12-kunga qaraganda 12-kunga qaraganda, 43-kunlik so'zlarni baholadi.Biroq, forma ugexin 43 ifodasi va z-diskni shakllantirish to'liq saqlanmadi (3b-rasm).Biz to'qima tarkibiy yaxlitligini aniqlash uchun biz sun'iy intizomni aniqlash uchun sun'iy razvedka (AI) asosidan foydalanamiz, Troponin-T va Contexin Stoke43-ga asoslangan Imkoniyatlarga asoslangan chuqur o'quv qo'llanma.Ushbu usul konveroltal Neron tarmog'idan (CNN) va bu ma'lumotnomada ko'rsatilganidek, avtomatlashtirilgan va xolis ravishda tarkibiy yaxlitlikni ishonchli tarzda to'ldirish uchun chuqur o'rganish tizimidan foydalanadi.26. MC to'qimasi statik nazorat bo'limlariga nisbatan 0 kunga nisbatan yaxshilangan tarkibiy o'xshashlikni ko'rsatdi.Bundan tashqari, Masdonning ta'tili, MS shartlari ostidagi fibrozning 12-kunlik madaniyat sharoitlari bilan taqqoslaganda (3C-rasm).KTCM 12 kun davomida yurak to'qimalarining toza to'qimalariga o'xshash darajaga qadar, yurak qismlarining tarkibiy yaxlitligini sezilarli darajada oshirmadi.
Barg grafikasi 12 kun davomida 12 kun davomida yangi yurak bo'laklarining (D1 MC) (D0 CTRL), 12 (D0 CTRL), 12 (D1 MC), 12 va ** p <0.0001-ga qaraganda, 12 (D1 STRL), 1 (D1 STRL) va ** p <0.0001-dagi MTT-ni keltirib chiqaradi. d12 Ctrl-ga o'tdi). Barg grafikasi 12 kun davomida 12 kun davomida yangi yurak bo'laklarining (D1 MC) (D0 CTRL), 12 (D0 CTRL), 12 (D1 MC), 12 va ** p <0.0001-ga qaraganda, 12 (D1 STRL), 1 (D1 STRL) va ** p <0.0001-dagi MTT-ni keltirib chiqaradi. d12 Ctrl-ga o'tdi).gistogrammada 12 kun davomida (D1 boshqaruvi) yoki Yurak qismlari madaniyatining (D1) (D0), 15 (D0) bo'limlari (D1) va turli xil cho'chqalardagi (D1) guruhlarining hayotiyligini keltirib chiqaradi.#### p <0,0001 po sravneniyu s d0 i ** p <0,01 po sratneniyu s d12 Ctrl). #### p <0.0001 d0 va *** CTRL ga nisbatan *** p <0.01 ga qaraganda. a 条形图 显示 显示 培养 培养 培养 (D12 CTRL) 或 CTCM (D1 MC), 15 (D0 CTRL) 培养 的 培养 培养 培养 切片 切片 培养 切片 培养 培养 培养 ↑ (D1 MC) 切片 的 的 的 的 的 培养 培养 ↑ (D1 MC) , #### p <0.0001, 与 D12 CTRL ↓, ** P <0.01). a 条形图 显示 显示 显示 培养 培养 (D12 CTRL) 或 CTCM (D1 MC) (D0 CTRL), 15 (D0 CTRL), 来自 不同 的 的 的 的 的 (D0 CTRL), 与 不同 新鲜 的 ↑, 与 D01 p < ** p.)Tug'ilgan yurak uchastkalarida (D0) yoki Yurak sektsiyalarini (D1) (D1) (D1) (D1) va CTCM (D1) va CTCM (D0) bo'limlarida (D1 MC), 12 (D1) va CTCM (D0) bo'limlarida (D1) sinash va turli xil cho'chqalar (D1 MC), STANS (D0 MC), 12 (D1 MC), 12 (D1 MC), 12 (D1 MC) va CTCM (D1) bo'limlari (D1) va CTCM (D1) bo'limlari (D1) bo'lgan va turli xil cho'chqalar (D1) bo'limlarida (D1 MC).#### p <0,0001 po sravneniyu s d0, ** p <0,01 po sraneniyu s d12 ctrl). #### p <0.0001 ga qaraganda, ** D12 CTRL bilan solishtirganda P <0.01).b troponin-t (yashil), ANGEXIN 43 (REDEXIN) va DTCM (MOL) (CTRL) (CTRL) yoki STRM-ning yangi shartlari (MC) (CWRL) yoki CTCM-ning yangi shartlari (MC). Sun'iy intellekton yurak to'qimalarining tarkibiy yaxlitligini undirish (n = 7 (D0), 5 (D12 CTRL), 5 (D12 CTRL) ga, **** p <0.0001 d0 Ctrl bilan solishtirganda. Sun'iy intellekton yurak to'qimalarining tarkibiy yaxlitligini (N = 7 (D0), 5 (D12 CTRL), 5 (D12 CTRL), *** 0.0001 d0 va * 0.0001 d12 Ctrl bilan solishtirganda. Kosichestvennaya OTsenka strukturnoy tsicechoy tkainiy iskusstvenm stodechnoy Tkysstvenm INSOZOM (D0 CTRUS) Sarezov / grupp ot raznyx svineyx sparyx svineyx spartirey, p1tyx tsya odnfaktortornyy TEST ANO; #### p <0,0001 po sravneniyu s l0 i * 0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p Sun'iy to'qimaning sun'iy intellektining tarkibiy yaxlitligini (N = 7 (D0), 7 (D1 CTRL), 5 (D12 CTRL) va D0 CTRL bilan taqqoslaganda.① ② ③ ④ (n = 7 (D0), 5 (D12 CTRL), 5 (D12 MC) turli xil cho'chqa / masalan, har xil cho'chqa, ** 0.0001 与 D12 CTRL 与).① ② ③ ④ (n = 7 (D0), 7 (D12 CTRL), 5 (D12 MC), 5 (D12 MC). Iskusstvennyy dlya kolichestvennoy otdechnoy tselosti Serdechnoy Tselosti Serdechnoy Tselosti Serdechnoy Tselosti, 5 (D12 MC) Sarezov / gruppu kajdoy iz seknyx s s Viney, odnstonnniy test anova; #### p <0 0001 va d0 dlya savneniya **** p <0,0001 p <0,0001 po sraneniyu s d12 ctrl). Qarg'ol to'qimalarining tarkibiy yaxlitligini (N = 7 (D0), 5 (D1000 CTRL), 5 (D12M MC) va D12 Ctrl-ga nisbatan o'lchash uchun sun'iy aql. Ruxsatnoma tilovati (chapda) va yalang'ochlik (shkalasi = 500 mkm) (N = 10 smmm) (N = 10 tillar / 1-sonli), D0 va ** p <0.001 d0 Ctrl bilan taqqoslaganda. Ruxsatnoma tilimlari (chapda) va miqdordagi (shkalada bo'lak) (shkalasi = 500 mkm) (N = 10 tillar / 1 soniya) yoki har xil cho'chqalar terma jamoalarining bir yo'nalishi, *** p <0.001 d0 Ctrl bilan solishtirganda. C reporentivtivnye izobrajeniya (sleva) i kolikestvennaya OTSENKA (Sprava) sekeztsa, okshennyx trirromnmym krasrym krasrym krasrym krasrym massona (N = 10 srezo) (n = 10 srezo v / gruppu ot raznyx sviney, vypolnstoskoriy test anova; #### p <0,0001 p <0,001 p <0,001 p <0,001 p <0,001 p <0,001 p <0,001 p <0,001 p <0,001 p <0,001 p <0,001 p C vakili rasmlari (chapda) va yurak uchastkasining (chapdan) va turli xil cho'chqalar / turli xil cho'chqalar / turli xil cho'chqalar / turli xil cho'chqalar / turli xil cho'chqalar / 1-guruhga, *** p <0.001 d12 Ctrl bilan solishtirganda. c 用 用用 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 ↓ ↑ (裸尺度 = 500 mkm / ↑, ↑ 单向; #### p <0.0001 0 D0 0 D1 D12 CTRL ↑). C ♪ rsic 色 色 色 色 色 色 色 色 ↓ ↑ (↓) ↓ ↑, ↑, ↑, ↑, ↑, 0.001 与 D0 0 D1 D12 CTRL ↑). C reporenttivnye izobrajeniya (sleva) i kolikestvennyy analiz (Sprava) Sardrab, okashennyx trirromnmnmnem sirtromnomlari PPA, KAJDYY ot drugogoy svini, Protstirovano s pomoshchyu odnozaktornogo dispersiynoogo analizo disperireniyu s d0, ** p <0,001 po sraneniyu s d12 ctrl). Ruxsatnomali rasmlar (chapda) va miqdoriy qismlar (bo'sh = 500 mkm) (n = 10 qismlar / 1-sonli) (n = 10 qismlar / guruh) ga nisbatan farqlangan.Xato panellari o'rtacha ± standart og'ishni anglatadi.
Madaniyatli o'rtadagi kichik molekulalarni qo'shib, KTCM madaniyatida kardiomyootsitning yaxlitligi yaxshilanishi va fibrozni rivojlantirishning pasayishi mumkinligini taxmin qildik.Shuning uchun biz tezkor omillar tufayli kichik molekulalarimiz 20,21 ta statik boshqaruv madaniyatlaridan foydalangan holda, kichik molekulalar uchun namoyish etiladi.Ushbu ekran uchun Dexamethason (Dex), Triodotiranine (T3) va SB431542 (SB) tanlandi.Ushbu kichik molekulalar, sariyomimotsitlarni sarkarshunoslar, t-naychani va konducumning tezligini oshirish orqali kardiomyotitlarni kamolotini oshirish uchun, bu kichik molekulalarda ishlatilgan.Bundan tashqari, ikkala dex (glyukkortikoid) va SB yallig'lanishni bostirishi ma'lum bo'ladi29,30.Shuning uchun biz bir yoki ushbu kichik molekulalarning kombinatsiyasining qo'shilishi yurak bo'limlarining tarkibiy yaxlitligini yaxshilaydimi yoki yo'qligini sinab ko'rdik.12 kunlik madaniyatdan so'ng T3 va DEX kombinatsiyasi yuqori qismli kardiomyootsitning maqbulligi va minimal tolalarni minimal tolali ta'mirlash (4 va 5 qo'shimcha).Bundan tashqari, T3 va Dex-ning ushbu konsentratsiyasidan ikki baravar yoki dex normal konsentratsiyalar bilan taqqoslaganda dumbin ta'sir ko'rsatadi (qo'shimcha anjom. 6a, b).
Boshlang'ich skriningidan keyin 4 ta madaniyatni taqqoslashimiz (4A-rasm): CTRL: bizning optimallashtirilgan muhitimizdan foydalangan holda, ilgari tasvirlangan statik madaniyatimizda madaniyat bo'limlari;20.21 TD: T3 va Chorshanba kuni CTRL va CTRL va CTRL va CTRL S qo'shilgan dex;MC: KTCMda ilgari optimallashtirilgan muhitdan foydalangan holda, yurak bo'limlari;va MT: T3 va DEX bilan CTCM bilan qo'shilgan.12 kunlik etishtirishdan so'ng, MS va MT to'qimalarining hayotiyligi MTT Assasi tomonidan baholangan yangi to'qimalarda (4b-rasm) yangilangan.
Mexanik stimulyatsiya va T3 / Dex qo'shimchalarining 12 kun davomida mexanik stimulyatsiyaning ta'sirini baholash uchun ishlatiladigan to'rtta madaniy sharoitlarni aks ettiruvchi eksperimental dizayn sxemasi. B bar chizig'i 4 kunlik 4 kunlik madaniyat madaniyatini ko'rsatadi (D0 (D0 (D0), 12 (D1 CTRM, MC, MC), 12 (D1 CTRL, MC, MM), ### p <0.001 taqqoslanadi D0 va *** D12 CTRL bilan solishtirganda <0.01 gacha). B bar chizig'i 4 kunlik 4 kunlik madaniyat madaniyatini ko'rsatadi (D0 (D0 (D0), 12 (D1 CTRM, MC, MC), 12 (D1 CTRL, MC, MM), ### p <0.001 taqqoslanadi D0 va *** D12 CTRL bilan solishtirganda <0.01 gacha). b Gistraxramma pokazyvaet kalichestvennuyu tsenku jiznesposobnosuxnou Chizez 12 dneyovaniya vo vsex 4 Usloveniya (Koney, TD Niuyu Serdmi Serdmi (D0 (D0 (D0), 15 (d0 Ctrl, d12 td i d12 mc) sparyot, prododitsya odnstorronniy test anova; #### p <0,000 1, ### p <0,001 po sratneniyu s d0 i ** p <0,01 p <0,01 po sratneniyu s d12 ctrl). b ‡ 所有 所有 所有 所有 所有 所有 条件 条件 (CTRL, TD, MC 和 mc 与 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 (D0 (D0), 来自 不同 的 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 新鲜 ↑, ↑, ↑, ↑, ↑, ↑. 和1 与 D0 ↓, ** P <0.01 与 D12 ↑).B 4 12 (D12 MC) B youre sektsiyalari / guruhi (D1) bo'limlari / D1.001 va D12 MT va D12 MMT), * ** P <0.001 va D12 MT va D12 MT orqali (D12 MC va D12 MT) ko'rsatilgan. 12). c gistramamamamamamamamamammamet kalichestvennuyu totenku totentueny Cheez 12 dneyvirovaniya vo vsex 4 Usloveniya (Koney, TD VeJimi sronmi Serdmi (D0) (n = 6 srezu ot raznyx sviney v <0,001 p <0,001 p <0,001 po sraneniyu s d12 CTRL). C ‡ 所有 所有 4 所有 所有 条件 (CTRL, TD, MC 和 MC ↑, 后 后 后 后, ↑ 后 后 后 相比 (N = 6 片 / ↑, 执行 后 后 后 (n = 6 片 / ↑, 与 后 后 后 后 ↑, ↑ 不同, ** P <0.001 与 D12 CTRL ↑). C ‡ 所有 所有 所有 所有 所有 所有 条件 (CTRL, TD, MC 和 mc 后 后 后 后 后 后 后 后 后 ↑, ↑ ,,001, ** p <0.001 ↑ d与 d12 ctr l ‡)). c gistramama, pokakyvayushchaya kolichestvennuyu totentuu totentyery cherez 12 dneyvina glyukoty cherez 12 dneyvirovaniya dlya vsex 4 usloviy kulirovaniy kulirovaniy (konverol, td Yu so Svejimi Serdmi Serdsa (D0) (N = 6 sreov / gruppa, ot raznyx sviney, odnostniy byli p <0,001 po sraneniyu s D12 (Kontron). Sarkeer gen siyosati madaniyat sharoitida madaniyatli yurak uchastkalari uchun.Xato panellari o'rtacha ± standart og'ishni anglatadi.
Yog 'kislotasi oksidlanishidan metabolik qaramlik glokolizga aylantirishning belgisidir.Kambag'al kardiomyotsitlar birinchi navbatda ATP ishlab chiqarish uchun glyukozadan foydalanishadi va bir nechta kristalli mitoxonkria bilan bir nechta kristalli mitoxonkria bilan bir nechta kristace5,32.Glyukozadan foydalanish bo'yicha tahlillar shuni ko'rsatdiki, MC va MT shartlari, kunlik glyukozdan glyukozadan foydalanishning 0 to'qimalari (4C-rasm).Biroq, CTRL namunalari yangi to'qimalarga nisbatan glyukozadan qoniqish sezilarli darajada oshdi.Bu shuni ko'rsatadiki, CTCM va T3 / DEX kombinatsiyasi to'qimalarning hayotiyligini oshiradi va 12 kunlik madaniyatli yurak uchastkasining metabolik fenotipini saqlaydi.
CTCM va T3 / DEXning umumiy ta'sirini tahlil qilish uchun yurak tilida transkrice to'qimaidagi global ta'sirini tahlil qilish uchun biz to'rt xil madaniyat sharoitidan (1 qo'shimcha qo'shimcha).Biroq, yuqorida aytib o'tilganimizdek, CTRL tillari 10-12 kundan keyin 10-12 kundan keyin 10-12 kundan keyin namoyish etilgan (4E-rasm).Ushbu ma'lumotlar QRT-PCR tomonidan yurak va fibroblast genlar tomonidan tasdiqlangan (qo'shimcha rasm. 7a-c qo'shimcha).Qizig'i shundaki, CTRL bo'limlari yurak va hujayra tsikli genlarini, yallig'lanish geni dasturlarini faollashtirishni qayd etdi.Ushbu ma'lumotlar shuni ko'rsatadiki, uzoq muddatli madaniyatdan so'ng odatda MT shartlari ostida mutlaqo o'zgarib turadi (8a, b).Sarome Genes-ni sinchkovlik bilan o'rganish shuni ko'rsatdiki, SARCREME (4F-rasm) va Ion kanalida (9-rasm) Ctrl, TD, TD va MC shartlari ostida saqlanmoqda.Ushbu ma'lumotlar mexanik va kamorli stimulyatsiya (T3 / DEX) kombinatsiyasi bilan yurak trifali tranzitma 12 kundan keyin yangi yurak bo'laklariga o'xshashdir.
Ushbu ma'lumotlar, mexanik stimulyatsiya va T3 / DEXni davolash kombinatsiyasi madaniyatdagi yurak uchastkalarida yurak tuzilishini samarali saqlab qoladi.
). Sun'iy intellekton yurak to'qimalarining tarkibiy yaxlitligini undirish (n = 7 (D0 va D12 CTRL), 5 (D12 TD, D12 MC va D12 MC) va *** CTRL-ga nisbatan. Sun'iy intellekton yurak to'qimalarining tarkibiy yaxlitligini undirish (n = 7 (D0 va D12 CTRL), 5 (D12 TD, D12 MC va D12 MC) va *** CTRL-ga nisbatan. Kosichestvennaya OTsenka struktura tselostnosti Tskussta s pomoshchyu s d0 i d12 mc i d12 mc i d d12 mc i druppu ot r Aznyx Sviney, Prujetktornyy TEST ANOVA; #### p <0 0001 p <0 0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p ① ② ③ ④ (n = 7 (D0 和 D12 CTRL), 5 (D12 TD, D12 MC 和 D12 MC 和 D12 MC 和 1 0.0001 与 D12 CTRL相比).① ② ③ ④ (n = 7 (D1 和 d12 CTRL) (5 (D12 TD, D12 MC 和 D12 MC 和 D12 MC 和 D12 MC 和 * P <0.0001 与 d 12 CTRL 相比).#### p <0,0001 po sraneniyu s d0 i * p <0,05 ili **** p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 po sraneniyu s d12 Ctrl). #### p <0.0001 ga qaraganda D0 va * P <0.05 yoki **** p <0.0001 d12 Ctrl bilan solishtirganda. Bassisning trichrome dog 'drag'ini (shkalasi = 500 mkm, D12 td, D12 TD, D12 TD), yoki *** p <0.0001 bilan solishtirganda. D12 CTRL bilan taqqoslaganda). Bassisning trichrome dog 'drag'ini (shkalasi = 500 mkm, D12 td, D12 TD, D12 TD), yoki *** p <0.0001 bilan solishtirganda. D12 CTRL bilan taqqoslaganda). b repobrajeniya i kolichestvennaya otdenka srezov Serditsa, okashennyx Trixrommnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnamnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmnmym krijorat 12 MC), 9 (d12 mt) sparyot / gruppu ot raznyx sviney, v <0 0001 p <0 0001 p <0 0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p ). B.S.Ronning Trichrome dog '(shkalasi = 500 mkm) bilan to'qilgan yurak uchastkalarini (N / 101 va D121 va D121-son) va *** p <0.0001 va D12 p <0.0001 va d12 p <0.001 va d12 p <0.001 va d12 p <0.001 va d12 p <0.0001 va d12 p <0.001 va d12 p <0.0001 va d12 p12-sonli guruhlar o'tkazib yuborilgan. CTRL). B 用 Rasmon 三 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色量化 色 色 色色 色 色 色 色 色 色色 色 色色 色 色 色, *** p <0.001, 或 **** p <0.0001 与 D12 CTRL 相比). b 用 Rasmon 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 色 ↓ ↑, (D0, D11 CTRTL, D12 td 和 D12 MC ↑ 的 ↑ ↓ ↑ yoki ↑ ① ② ③ ④; #### p <0.0001 与 D0 0, *** P <0.001, 或 **** p <0.0001 与 D12 CTRL ↑). b repobranjeniya i kolichestvennaya otdenka sekezsa, okashennyx trireyamom massona (N = 10 Ctrl, D12 td i d12 mc), 9 ( D12 MT) srezov ot raznyx sviney / grin- sposob anova; #### p <0,001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 po sraneniyu s d12 ctrl). B vakili Massonning Trichrome (shkalasi = 500 mkm) bilan qoplangan yurak uchastkasini (N12, D10001, *** P <0.0001). l).Xato panellari o'rtacha ± standart og'ishni anglatadi.
Va nihoyat, CTCMning yurak gipertrofiyasini taqr qilish qobiliyati yurak to'qimalarining cho'zilishi bilan baholandi.CTCMda yuqori havo kamerasi bosimi 80 MMHg dan 80 MMHg gacha ko'tarildi.San'at.(normal cho'zish) 140 mmHg san'at.(6a-rasm).Bu 32% cho'zilgan (6b-rasm), ilgari gipertrofiyada ko'rinadigan sarmoyalar uchun zarur bo'lgan foiz stantsiyalari uchun belgilangan foiz stantsiyalari sifatida ko'rsatilgan.Qishloq to'qimalarining cho'zilishi va tezligi qisqarish va yengillik paytida olti kun davomida doimiy ravishda saqlanib qoldi (6C-rasm).MT shartlaridan yurak to'qimalari olti kun davomida normal cho'zilgan (normal)) (Oddiy)) (MT (OS)).To'rt kundan keyin to'rt kundan keyin, MT (normal) holatlar bilan solishtirganda MT (OT) sharoitida (OT) shartlari (OT) shartlarida (OT) shartlar sezilarli darajada oshdi (7A-rasm).Bundan tashqari, olti kunlik madaniyatdan so'ng, MT (OT) (7b-rasm) dagi hujayra hajmi (7B-rasm) Mt Yurak (normal) bo'limlariga qaraganda sezilarli darajada oshdi.Bundan tashqari, NFATC4 yadroviy tarjimai ko'tarilgan to'qimalarda sezilarli darajada oshdi (7C-rasm).Ushbu natijalar giperdistizmdan keyin patologik kondodlik rivojlanishini ko'rsatadi va CTCM qurilmasi qisqartirilgan yurak gipertrofiy signalini o'rganish uchun platforma sifatida ishlatilishi mumkinligini qo'llab-quvvatlaydi.
Havo kamerasining bosimi, suyuqlik kamerasi bosimi va to'qima harakati o'lchovlari va to'qimalarning o'zgarishi fundali kamera bosimini o'zgartiradi, bu esa to'qimalarning qisqarishi.b, odatda cho'zilgan foizlar va cho'zilgan stavka egri chiziqli (to'q sariq) va duranglangan to'qima qismlari uchun.Sl barg grafikasi tsikl vaqti ko'rsatilgan (har xil cho'chqalardan, turli xil cho'chqalardan) va turli xil cho'chqalardan (n = 14 tillardan) amplituda (n = 14 tillar / 1 bo'lak), eng yuqori cho'qqilar (n = 14 bo'lakdan) (n = 14 (d0), 15 (n = 14), 15 (n = 14). D6) Turli cho'chqalardan iborat bo'limlar / guruhlar), har qanday talaba T-testi har qanday parametrda sezilarli farqni ko'rsatmadi, shuni ko'rsatadiki, ushbu parametrlar madaniyatning 6 kun davomida doimiy ravishda saqlanib qolgan.Xato panellari o'rtacha ± standart og'ishni anglatadi.
Barg gazidagi NT-prognp kontsentratsiyasining "Nectle" yoki D.4 MTOM, D.4 MTOM, D.4 MTOM, D.4 MTOM, ANOVA-da, ikki tomonlama Anova, ikki tomonlama Anova amalga oshiriladi. Barg gazidagi NT-prognp kontsentratsiyasining "Nectle" yoki D.4 MTOM, D.4 MTOM, D.4 MTOM, D.4 MTOM, ANOVA-da, ikki tomonlama Anova, ikki tomonlama Anova amalga oshiriladi.NT-propp kontsentratsiyasining normal mtning cho'zilishi (OT) yoki DRESPREKTdan (D2 MTOM), 3 (D2 MTOM, va D4), turli xil cho'chqalarning variantlaridan iborat bo'lgan, turli xil cho'chqalarning ikki faktorli anjomlari.** p <0,01 po sraneniyu s normalnym rastyujeniem). ** p <0.01 normal cho'qqi bilan taqqoslaganda). A 在 Mt ↑ 过度 过度 过度 过度 过度 过度 中 中 中 下 中 中 中 中 中 中 中 中 下 下 中 中 中 中 中 中 中 中 中 下 中 中 中 中 中 中 中 中 中 中 中 中 中 中 中 中 中 中 中 中 中 下 中 中 下 中 中 中 中 中 中 中 中 中 ↑) (D2 MTNPNP (d2 MTOS, D4 MTOS) 1). MT normal sur'atli (OT) shartlari (OT) shartlari (D2 MTOM), 3 (D2 MTOS), 3 (D2 MTOM, D4 MTOC), 3 (D2 MTOS, D4 MTOC), p <0.01 bilan taqqoslaganda.Oddiy MT tarqalgan (norma) yoki diplom (D2 MTOM) (D2 MTOM) va D2 MTOS (D2 MTOM) va D2 MTOSning turli xil cho'chqalarning ikki tomonlama tahririyatining pasayishi;** p <0,01 po sraneniyu s normalnym rastyujeniem). ** p <0.01 normal cho'qqi bilan taqqoslaganda). Troponin-t va WGA (chapda) va hujayra o'lchamlari bilan qoplangan yurak tilimlari (D6 MTOS), 369 (D6 MTOM), 369 (D6 MTOM), 369 (D6 MTOM), 369 (D6 MTOM). Troponin-t va WGA (chapda) va hujayra o'lchamlari bilan qoplangan yurak tilimlari (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTOM), 369 (D6 MTOM). b repobrantaivnye izobrajeniya srezov, okashennyx troponnom-t i Azp (Sprava) (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorM) K letok / gruppu iz 10 raznyx srezov ot raznyx sviney, dva- provojitsya xvstoshovoy t-kriteriy studovyra t-kriteriy stweniem). Troponin-t va AZP (chapda) va hujayra o'lchamlari bilan qoplangan yurak qatlamlari (o'ngda) va normal shtamm bilan taqqoslaganda. b ‡ 肌钙 蛋白 和 和 和 大小量化 大小量化 大小量化 大小量化 大小量化 大小量化 大小量化 大小量化 大小量化 大小量化 大小量化 (D6 MTO (D6 MTO 330 (D6 MTOS) 细胞 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 ↑, ↑, ↑, 正常 学生 学生 学生 学生 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 ↑, ↑, ↓ ↑, ↓ ↑, P <0001). B kalshchin-t va hujayralar hajmi (D6 MTS) (D6 MTO) bilan qoplangan yurak tillari (D6 MTO (D6 MTOS), 369 ni sinab ko'ring; normal cho'zish bilan solishtirganda, **** p <0.0001. b repobrajivnye izobrajeniya srezov, okashennyx troponom-t i avra) (d6 MTOS), 369 (D6 MTOM), 369 (D6 MTOM), 369 (D6 MTOM), 369 (D6 MTOM), 369 (D6 MTOM), 369 (D6 MTOM), 369 (D6 MTOM), 369 (D6 MTOM), 369 (D6 MTOM), 369 (D6 MTOC) Iz 10 razli Chnyx srezov ot raznyx sviney kletki / gruppa, dvutonnie kryidiy; *** p <0,0001 p <0,0001 p <0,0001 rostyajeniem). Troponin-t va AZP (chapda) va hujayralar hajmini (D6 MTO (D6 MTOS) yoki 80 xil bo'limdan (D6 MTOS) yoki 80 xil qismdan (D6 MTOS) yoki 80 xil bo'lgan, 369 (D6 MTOS) bilan to'ldirish, hujayralar / guruh (D6 MTOS), 369 (D6 MTOS), 369 (D6 MTOS), 369 (D6 MTOS), 369 (D6 MTOS), 369 (D6 MTOS), 369 (D6 MTOS), 369 (D6 MTOS), 369 (D6 MTOS).**** p <0.0001 normal shtamm bilan solishtirganda. 0 va kunduzi 6 kunlik TrMS4 va NFATC4 va NFATC4-ning TRMS (D6 MTO), 3 dumli talabalarning T-sinovi, ikki dumli talabalarga kiritish va NFATC4-ning T-STES-ning T-STES-ga qo'shilgan. 0 va kunduzi 6 kunlik TrMS4 va NFATC4 va NFATC4-ning TRMS (D6 MTO), 3 dumli talabalarning T-sinovi, ikki dumli talabalarga kiritish va NFATC4-ning T-STES-ning T-STES-ga qo'shilgan. C reporenttivnye izobrajeniya dlya srezov Serdtza 0 i 6 Dneyom Mtos, immmomeme mtos, immmomonim mtos dlya tropinina OTMENARA OTSENA TSALSLOKTII NFATC4 v Yedra Kavernoznyy X kletok (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) sparyov / gruppu ot raznyx sviney, vypolnyaetsya dvuchonraniy t-kryudenta; * p <0,05). 0 va 6 kunlik yurak uchastkalari uchun vakillik tasvirlari, troponin-t va nfatc4 uchun (n foiz) va nfatc4, turli xil cho'chqalar / guruhning yadrosi (D6 MTO) va turli xil cho'chqalar uchun mo'ljallangan.* p <0.05). c lǐ 于 肌钙 肌钙 - nfatc4 第 第 第 第 第 第 第 第 第 第 第 第 第 第 的 第 的 的 第 的 的 第 第 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 的 第 的 的 的 ↑) (D0 (D0), 3 (D6 MTO) CMNDANIN-T va NFATC4 immunolobeling-ning vakillik tasvirlari 第 0 第 第 6 第 第 第 第 6 ↑, MTOS YUNCHI NUCLE ↑ (D6 MTO), 3 (D6 MTO) C reporentivtivnye izobrajeniya srezov Serdtsa Mtos na 0 i 6 den tranon-t i nfatc4 i kolikc4 i kolachvennaya OTSENA TAFRA CM ot raznyx svi Ney (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) srez / gruppa, dva - xvevstatyy t-kryuenta; * p <0,05). Troponin-T va NFATC4-dagi Tropkonin-T va NFATC4-ning immunollabeling (N / 4 (D0), 3 (D6 MTO), ikki dumli T-akeritivion talabalarining yoki yadrodan yadroslash uchun.Xato panellari o'rtacha ± standart og'ishni anglatadi.
Tarjimali yurak-qon tomir tadqiqoti, yurak muhitini aniq oshiradigan uyali modellarni talab qiladi.Ushbu tadqiqotda CTCM qurilmasi ishlab chiqilgan va xarakterlangan, bu yurakning ultratin qismlarini rag'batlantirishi mumkin.CTCM tizimiga fiziologik sinxronizatsiyalash va T3 va DEX suyuqlik boyitishni o'z ichiga oladi.Ushbu omillarga, ularning hayotiyligi, tarkibiy yaxlitligi, metabolik hissasi va transkripektlar 12 kunlik madaniyat to'qimalarida paydo bo'lganida.Bundan tashqari, yurak to'qimalarining haddan tashqari cho'zilishi giperteksi tufayli yurakning gipertrofiyasini keltirib chiqarishi mumkin.Umuman olganda, bu natijalar normal yurak fenotipini yuritishda fiziologik madaniyat sharoitlarining muhim rolini qo'llab-quvvatlaydi va giyohvand moddalar skrining platformasini taqdim etadi.
Ko'pgina omillar kardiyomimotsitlarning ishlashi va tirik qolishi uchun maqbul muhit yaratishga yordam beradi.Ushbu omillarning eng ravshanligi (1) hujayralararo o'zaro ta'sirlar, (2) elektromexanik stimulyatsiya, (3) metrallik ommalari va (4) metabolik substratlar.Fiziologik hujayralarning o'zaro ta'siri hujayralar matritsasi tomonidan qo'llab-quvvatlanadigan bir nechta hujayra turlarining murakkab uch o'lchovli tarmoqlarini talab qiladi.Bunday murakkab hujayralarning aralashuvlari individual hujayra turlari madaniyati bilan qayta qurish qiyin, ammo yurak uchastkasining organotipik xususiyatidan foydalanib osonlikcha erishish qiyin.
Mexanik cho'zish va elektriomiyotsitlarni elektrlashtirish karortotipni saqlash uchun muhim ahamiyatga ega.Yaqinda "Xipsc-Cm" konditsionerlik va kamolot uchun mexanik stimulyatsiya keng qo'llanilgan bo'lsa-da, yaqinda bir nechta oqlangan tadqiqotlar uneyial yuklashdan foydalanib, madaniyat tilini mexanik rag'batlantirishga uringan.Ushbu tadqiqotlar shuni ko'rsatadiki, 2D Uniyatsion mexanik yuklash madaniyat davrida yurakning fenotipiga ijobiy ta'sir ko'rsatadi.Ushbu tadqiqotlarda yurak bo'limlari ishlab chiqaruvchi kuchlar17, chiziqli auxotonik yuklash18 yoki yurak tsikli kuch tinkiri Forcegiker Fikr-mulohazalari va keskinliklarni hisobga olgan holda qayta terilgan.Biroq, ushbu usullar atrof-muhitni optimallashtirishsiz, uniatli to'qimachilikni qo'llash, shuningdek, ko'plab yuraklarni optimallashtirish yoki g'ayritabiiy cho'zish javoblari bilan bog'liq ko'plab yuraklarni optimallashtirish yoki genlar bilan bog'lanish.Bu erda tasvirlangan CTCM tsikl va fiziologik cho'zish nuqtai nazaridan tabiiy yurak tsiklini taqlid qiladigan 3D elektromexanikalyator (25% stystol, 60% stystol, daqiqada 72 ta urish).Faqatgina ushbu uch o'lchovli mexanik mexanik stimulyatsiyani to'qima yaxlitligini saqlash uchun etarli emas, chunki T3 / DEX yordamida kamchilik va mexanik stimulyatsiyaning kombinatsiyasi to'qimalarning hayotiyligini, funktsionallikni va yaxlitlikni etarli darajada ushlab turish kerak.
Kattalar yurak fenotipini modulyatsiya qilishda kamchilik omillari muhim rol o'ynaydi.Bunga xip-km kurslarida ta'kidlangan bo'lib, ularda T3 va Dex madaniyatning kifoyalanishini tezlashtirish uchun madaniyat medialariga qo'shilgan.T3 hujayra memranes36 orqali aminokislotalar, shakar va kaltsiy transportga ta'sir qilishi mumkin.Bundan tashqari, T3 MHC-A ta ifodasi va MHC-Anistürulyulyatsiyasini rag'batlantiradi, bu xomilalik sm sekundilik sekundilik sekundchil twitişles bilan taqqoslaganda, etuk kardiomimyotsitlar soniyasini slaydlar bilan solishtirganda tez burg'ulash.Gipotiroid bemorlarda T3 etishmovchiligi miyofibrillalar guruhlarini yo'qotadi va ohang rivojlanishining pasayishi37.Glyukokortika retseptorlarida ishlaydi va izolyatsiya qilingan yuraklarda miyokard institutini ko'paytirish uchun ko'rsatildi;Bu yaxshilanish kaltsiy depozitiga kiritilgan kaltsiyaga ta'siri bilan bog'liq deb taxmin qilinadi.Bundan tashqari, Dex o'zining retseptorlariga bog'laydi va immunitet funktsiyasini va yallig'lanishini bostiruvchi keng ichakli ta'sir ko'rsatadi.
Bizning natijalarimiz shuni ko'rsatadiki, jismoniy mexanik stimulyatsiyani CTRL bilan taqqoslagan holda umumiy madaniyatni yaxshilash (MS) 12 kundan ortiq madaniyat, tarkibiy yaxlitlikni va yurak omili.CTRL-ga qaraganda, T3 va DEX (MT) madaniyatiga (MT) qo'shimchalar uchun shunga o'xshash qo'shimcha ma'lumotni, tarkibiy yaxlitlik va metabolik faoliyatni 12 kun davomida yaxshilanadi va yangi yurak to'qimalari va metabolik faollikni 12 kun davomida yaxshilanadi va yangi yurak to'qimalari va metabolik faollikni 12 kun davomida yaxshilanadi.Bundan tashqari, to'qimachilik darajasini boshqarish orqali STCM-ning STCM tizimining ko'p qirraliligini aks ettirgan STCM yordamida yaratilgan.Shuni ta'kidlash kerakki, yurakni ta'mirlash va fibroz odatda shikastlanuvchi hujayralar, stress va jarohatlarga javoban yurakning uchastkalari, yurakning uchastkalarini qondirishi mumkin.miyofibreblalastlarga.Bu ilgari ushbu yurak tsensicel modelida ilgari baholandi.Shuni ta'kidlash kerakki, CTCM parametrlari taxtikardiya, bradikardiya va mexanik qon aylanishini qo'llab-quvvatlash (mexanik tushirilgan yurak) kabi ko'plab shartlarni taqlid qilish orqali o'zgartirish mumkin.Bu tizim dori-darmonlarni sinovdan o'tkazish uchun o'rta oqim qiladi.CTCM-ning haddan tashqari gipertrofiyasi shaxsiy terapiya uchun ushbu tizimni sinab ko'rish imkoniyatini ochib beradi.Xulosa qilib, ushbu tadqiqot yurak to'qima qismlarining madaniyatini saqlash uchun mexanik va kamtar stimulyatsiyani namoyish etadi.
Bu erda keltirilgan ma'lumotlar CTCM inaktiv miyokardni modellashtirish uchun juda istiqbolli platforma, bu madaniyat usulida ba'zi cheklovlarga ega.CTCM madaniyatining asosiy cheklanishi shundaki, bu tillarda doimiy dinamik mexanik stresslarni keltirib chiqaradi, bu har bir tsikl davomida yurak tsidziyasini qisqartirish qobiliyatini oldini oladi.Bundan tashqari, yurak bo'limlarining kichik hajmi (7 mm), madaniy tizimlardan tashqarida an'anaviy kuch sensori yordamida madaniy tizimlardan tashqarida baholash imkoniyati cheklangan.Hozirgi qo'lyozmada biz optik kuchlanishni institutli funktsiya belgisi sifatida baholayapmiz.Biroq, bu cheklov yana bir ish talab qiladi va kelajakda yurak tillarida yurak tilim funktsiyasini optik monitoring qilish usullarini joriy etish, masalan, kaltsiy va kuchlanish sezgir bo'yoqlardan foydalangan holda optik xaritalash usullarini joriy etish usullarini joriy etish.CTCMning yana bir cheklovi shundaki, ish model fiziologik stressni (oldindan yuklash va undan keyingi) boshqarmaydi.CTCMda diazolda (to'liq cho'zish) va distrolda 25% fiziologik qismini (elektr stimulyatsiya paytida qisqarish davomiyligi) ko'paytirish uchun bosimning qarama-qarshi yo'nalishda ta'sir ko'rsatdi.Ushbu cheklov kelajakdagi CTCM-ning har ikki tomondan etarli bosim bilan va yurakning palatalarida uchraydigan aniq bosimlilarning aniqliklarini qo'llash orqali olib tashlanishi kerak.
Ushbu qo'lyozmada ishlab chiqariladigan kompetentatsiya qilingan ta'mirlash moslamasi gipertrofik gipertrofik gipertrofik signallarni taqlid qilish bilan cheklangan.Shunday qilib, ushbu model kamchilik yoki neyron omillariga ehtiyoj sezmasdan cho'zilgan gipertrofik signalizatsiya qilishni o'rganishda yordam berishi mumkin (ushbu tizimda mavjud emas).STCMning ko'payishi, masalan, neyraal hujayralar bilan birgalikda o'stirish paytida immunitar hujayralar va innemorderatni ko'paytirish uchun qo'shimcha tadqiqotlar uchun CTCM bilan kasallanish imkoniyatlarini yaxshilaydi.
Ushbu tadqiqotda o'n uchta cho'chqa ishlatilgan.Hayvonlarning barcha protseduralari institutsional ko'rsatmalar asosida amalga oshirildi va Luisville Institutsional hayvonotni parvarishlash va undan foydalanish qo'mitasi tomonidan tasdiqlandi.Aorta ark qisilgan va yurak steril kardialigialar bilan qoplangan (NACL, 16 mm kakl2, 16 mm mm, 16 mm mm, ni 7,4 ga) pH infroly; Qalblar muzda bo'lgan muzda olib borilgunga qadar, albatta muzli kardonopolitik echimda saqlanib qolgan. Qalblar muzda bo'lgan muzda olib borilgunga qadar, albatta muzli kardonopolitik echimda saqlanib qolgan. Serdtsa Xrannilin v ledyanom kardioplegicheskom rastvore do transitiyu na laboratoriyu na lboratoriyu na lau, chto obychno zaniaet <10 min. Ko'zlar muzda bo'lgan laboratoriyaga transportda muzda bo'lgan laboratoriyaga olib borguncha muzli karshialjik echimda saqlangan.① ② ③ ↑, 直到 冰上 冰上, 通常 <10 分钟.① ② ③ ↑, 直到 冰上 冰上, 通常 <10 分钟. Derjite Serdsa v ledyanoy kardigi do transporti v lakoratoriyu na labu, obychno <10 min. Muz ustidagi laboratoriyaga olib kelgunga qadar qalblarni muzdan yasalgan yuraklarni tuting, odatda <10 min.
CTCM qurilmasi kompyuteriy dizayn (CAD) dasturiy ta'minotida mustahkam ishlar olib borildi.Madaniyat kameralari, bo'linuvchi va havo xonalari CNC tomonidan aniq akril plastmassadan qilingan.Markazda 7 mm diametrli orqa halqa yuqori zichlikli polietilen (HDPE) dan tayyorlanadi va O-ringni ostiga joylashtirish uchun ishlatiladigan silikon O-ringni joylashtirish uchun O-Ring Grouchga ega.Yengil kremniy membranasi ajratish plitasining madaniyatli xonasini ajratadi.Silikon membranasi 0,02 "qalin kremniy varaqdan kesilgan va qattiqligi 35Aning qattiqligi bor.Pastki va yuqori silikon qobig'i 1/16 "qalin kremniy varaqdan" 50a "qattiqligi bor.Bloksiz po'latdan tashqari temir vintlar va yong'oqlar blokni mahkamlash va havo o'tkazmaydigan muhr yaratish uchun ishlatiladi.
Belgilangan bosilgan elektron pochta kengashi (PCB) C-PACE-EM tizimi bilan birlashtirilgan.Shveytsariya mashinasi ulagichi ulagichining PCB grafit elektrodlariga kumush qoplamali mis simlari va 0-60 vintlar bilan bog'langan.Chop etilgan elektron taxtasi 3D printer qopqog'iga joylashtiriladi.
CTCM qurilmasi dasturlashtiriladigan pnevmatik aktuator (PPD) tomonidan boshqariladi, bu yurak tsikliga o'xshash boshqariladigan qon aylanish bosimini keltirib chiqaradi.Efir kamerasining bosimi oshadi, egiluvchan silikon membranasi o'rtacha darajaga ko'tarilib, o'rta holda to'qima saytida.Keyin to'qima maydoni diazol paytida yurakning fiziologik kengayishini taqlid qilib, suyuqlikni chiqarib yuboradi.Yengillik cho'qqisida elektr palatasida bosimni kamaytirgan va to'qima qismlarining qisqarishi natijasida elektr stimulyatsiyasi qo'llanilgan.Quvur ichidagi havo tizimidagi bosimni aniqlash uchun bosimli sensorli gemostatik valf.Bosimning bosimi zaiflik hissi noutbukga ulangan ma'lumotlarni yig'uvchiga nisbatan qo'llaniladi.Bu gaz palatasi ichidagi bosimni doimiy ravishda monitoring qilishga imkon beradi.Malakadagi maksimal bosimga erishilganda (80 mmHg, 140 mmHg OT), 4 ms uchun badiiy kuchlanish signalini yaratish uchun C-PACE-EM tizimiga signal yuborishga buyruq berildi.
Yurak uchlari, 6 quduqda 6 quduqda olib borildi: o'ralgan qalblarni o'tkazib yuborilgan yuraklarni o'tkazib yuborgan yuraklarni qonni sovuq (4 ° C.) o'z ichiga olgan patriga o'tkazadi.Chap qorincha steril pichoq bilan ajratilgan va 1-2 sm3 bo'laklariga bo'lingan.Ushbu to'qima bloklari to'qima yopishtiruvchi va doimiy ravishda kmozli (BDM) bo'lgan mikrotomik to'qimalarni (BDM) o'z ichiga olgan holda, 10 mm d-glyukoza (1,86 g), 10 mm h Raes (2.38 g), 1 mm MM MM (1 mm 1 m), 1,8 mm CACL2 (1,8 mm 1 m), 1 l ddh2o gacha).Saytning tebranishi 300 gkm qalinlikdagi 300 gm, 2 mm gagizontal tebranish amplyatsiyasida 300 mm, 2 mm va 0,03 mm / s tez sur'atlarda 300 mkm uzunlikdagi bo'laklarni kesib tashladi.To'qima vannasi muz bilan o'ralgan va harorat 4 ° Cda saqlanib qolgan.Bir madaniyatli plastinka uchun doimiy ravishda kislorodli tirody tirgunali tirgunali tirgunali tirody tirodye yemiruvi uchun to'qima qismlarini mikrotome vannadan o'tkazish.Kengliklarga, to'qima bo'laklari uchun keng poliamizli polimike rusumli poluretlilar (199 ml fb), 5 NG / ml fgf-alkalin va 2X antivirotik).Elektr stimulyatsiyasi (10 V, chastotali 1,2 GZ) C-tezlik orqali to'qima bo'limlariga qo'llanilgan.TD shartlari uchun, yangi T3 va Dex har bir o'rtacha o'zgarishga 100 nm va 1 mkm qo'shildi.O'rnatish kuniga 3 marta almashtirishdan oldin kislorod bilan to'yingan.To'qimalar bo'limlari inkubatorda 37 ° C va 5% CO2-da etishtirildi.
CTCM madaniyati uchun, to'qima qismlari traeded yechimini o'z ichiga olgan Petri taomida maxsus tayyorlangan 3D printerga joylashtirildi.Qurilma yurak tilimining o'lchamini 25% qo'llab-quvvatlash halqasining 25 foiziga etkazish uchun mo'ljallangan.Bu Tirodning o'rta va diazkani berish paytida Tirodning echimidan uzatilgandan keyin yurak uchastkalari cho'zilmaydi.Histoacrylli elimdan foydalanish, 300 mkm qismlardan foydalanish diametri 7 mm yordamida 7 mm.To'liq bo'limlarni qo'llab-quvvatlash ringiga qo'shilgandan so'ng, ortiqcha to'qimalarni kesib oling va biriktirilgan to'qima qismlarini muzda (4 ° C) vannachasini bitta qurilmaga olib borguncha joylashtiring.Barcha qurilmalarning umumiy ishlash vaqti 2 soatdan oshmasligi kerak.6 to'qima qismlarini qo'llab-quvvatlash halqalariga qo'shilgandan so'ng, CTCM qurilmasi yig'ildi.CTCM Madaniyat kamerasi 21 ml oldindan kislorodlangan vositasi bilan to'ldirilgan.To'liq bo'limlarni madaniyat kamerasiga o'tkazing va havo pufakchalarini pietka bilan olib tashlang.To'qima bo'limi keyin teshikka yo'naltirilgan va muloyimlik bilan joylashtirilgan.Va nihoyat, elektrodni qurilmani qo'ying va qurilmani inkubatorga o'tkazing.Keyin CTCMni havo naychasiga va C-Pece-EM tizimiga ulang.Pnevmatik aktuator ochilgan va havo valfi CTCMni ochadi.C-PASCE-EM tizimi 2 ms ni 2 ms ni sekish paytida 1,2 soat davomida etkazib berish uchun sozlangan.O'rta kuniga ikki marta o'zgartirildi va elektrodlarga grafit to'plamasligi kuniga bir marta o'zgartirildi.Agar kerak bo'lsa, to'qima qismlarini ularning ostiga qulab tushgan har qanday havo pufakchalarini chiqarib yuborish uchun ajratish mumkin.Mt davolash shartlari uchun, T3 / Dex 100 nm t3 va 1 mkm dex bilan har bir o'rtacha o'zgarish bilan yangi qo'shildi.CTCM qurilmasi inkubatorda 37 ° C va 5% CO2 bilan madaniy sepildi.
Yurak tilimlarining cho'zilgan traektoriyalarini olish uchun maxsus kamera tizimi ishlab chiqilgan.Navitar Zoom 7000 18-108mmmmmm so'yar 7000 18-108mm Makro Lins (Navitar, San-Fransisko, CA) bilan SLR kamerasi ishlatilgan.Mediualizatsiya vositani yangi muhit bilan almashtirgandan so'ng xona haroratida amalga oshirildi.Kamera 51 ° burchakli va video sekundiga 30 ta freymda yozilgan.Birinchidan, ochiq manbali dasturiy ta'minot (Musclemot43) Yurak tilimining harakatini aniqlash uchun Image-J bilan ishlatilgan.Niqob matlana (matematika buyumlari, tug'ma, ma, AQSh) Shovqindan qochish uchun yurak tilini kaltaklash uchun qiziqish uyg'otadigan mintaqalarni aniqlash uchun yaratilgan.Qo'lda segmentli niqoblar barcha rasmlarga ramka ketma-ketligidagi va keyin mushccater plaginiga topshiriladi.Mushaklar harakati har bir freymdagi pikselning o'rtacha intensivligini ishlatish uchun harakatlanish ramkaga nisbatan aniqlash uchun ishlatiladi.Ma'lumotlar yozib olindi, filtrlanadi va yurak tsiklida tsikl vaqti va tsikl vaqtini aniqlash va baholash uchun ishlatiladi.Yozib olingan video peshtaxta nolga-fazali raqamli filtr yordamida qayta ishlangan.To'qimachining cho'zilishini aniqlash uchun (cho'qqisi), eng yuqori darajadagi va yiqilgan signalda novdalarni ajratish uchun eng yuqori darajadagi tahlillar amalga oshirildi.Bundan tashqari, signallashuvni bartaraf etish uchun 6-chi buyurtma polinomiya yordamida amalga oshiriladi.Dastur kodi Matlab Global to'qima harakati, tsikl vaqti, dam olish vaqti va qisqarish vaqtini aniqlash uchun dasturlar ishlab chiqilgan (44 qo'shimcha kodeksi).
Mexanik tariqgohni baholash uchun yaratilgan bir xil videolardan foydalanib, biz avval ikkita rasmni (yuqori (yuqori) va eng past (yuqori) va eng past (pastki) va eng past (pastki) va eng past (pastki) va eng past (pastki) va eng past (pastki) va eng past (pastki) va eng past (pastki) va eng past (pastki) va eng past (pastki) va eng past (pastki) va eng past (pastki) va eng past (pastki) va eng past (pastki) va eng past (pastki) va eng past (pastki) ish joyini aks ettirdik.Keyin biz to'qima hududlarini sepeddik va soyali algoritm shaklida segmentli to'qimaga (2adan)) qo'lladik.Keyin segment qilingan to'qima o'ntagacha er osti qatlamlariga bo'lingan va har bir sirtdagi stress quyidagicha hisoblanadi: str va yod sadosi matoning yuqori va pastki soyalaridan olingan.
Yurak sektsiyalari 48 soat davomida paraforaldegide 4% paraforaldegidda o'rnatildi.Ruxsat etilgan to'qimalar 10% va 20% saxaroza bilan 1 soat davomida suvsizlangan, keyin bir kechada 30% satrida.Keyin uchastkalarning tegmaslik harorat birikmasi (oktyabrda) va asta-sekin izopentane / quruq muzli vannada joylashtirildi.Ajratish bo'lguncha oktnyos bloklarni -80 ° C da saqlang.Slaydlar qalinligi 8 mkm bo'lgan qism sifatida tayyorlangan.
Yurak qismlaridan oktunda olib tashlash uchun, issiqlik blokidagi slaydlarni 5 minut davomida 2 minut davomida qizdiring.Har bir slayd va 30 daqiqa davomida xona haroratida 30 minut davomida 30 daqiqa davomida 1 ml pb qo'shing, so'ngra xona haroratida 15 daqiqa davomida 0,1% triton-x ni o'rnating.Namunaviy antikorlarning oldini olish uchun xona haroratida 1 soat davomida 1 ml 3% BSA 3% eritma qo'shing.Keyin BSA olib tashlandi va slaydlar pbalar bilan yuvildi.Har bir namunani qalam bilan belgilang.Birlamchi antibodlar (o'zgartirilgan 1: 200%) (ulanish 43 (ABCAM; # AB99931) (Termo ilmiy; # AB99960) (Termo ilmiy, 1%) (TEMODE 1: 2000). 079), "Alexsa" dan 594 (Thermo ilmiy) ga qarshi (T6391) Bizda faqat ikkilamchi stolni almashtirdik va slaydlar Vectshage (vektorli laboratoriya) va slaydlar 40x kattalashtirish bilan yopildi.
WGA-Alexsadagi ftor 555 (Termo ilmiy; # W32464) 5 minb / mk pbalar uchun 5 minut davomida 30 minut davomida belgilangan bo'limlarga qo'llangan.Keyin slaydlar har bir slaydga PBS va Sudan qora bilan yuvilgan va Sudan qora qo'shiladi.Keyin slaydlar Pbs bilan yuvindi va Vectanligeldni etkazib berish vositasi bilan yuvildi.Slaydlar 40x kattalashtirishda kalit mikroskopi mikroskopida ingl.
Okt oldin namunadan yuqorida tavsiflanganidek chiqarildi.Oktani olib tashlaganingizdan so'ng, Bouinning eritmasidagi slaydlarni bir kechada ushlab turing.Keyin slaydlar distillangan suv bilan 1 soat davomida chayqaladi va keyin 10 daqiqa davomida Bibrimon aloe kislotasi fuchisin eritmasiga joylashtirildi.Keyin slaydlar distillangan suv bilan yuvindi va 10 daqiqa davomida 5% fosmolimybdy / 5% fosforlybdik kislota eritmasiga joylashtirildi.Shinlarsiz, slaydlarni 15 daqiqa davomida to'g'ridan-to'g'ri ananin ko'k eritmasiga o'tkazing.Keyin slaydlar distillangan suv bilan yuvindi va 2 daqiqa davomida 1% sirka kislotasi eritmasiga joylashtirildi.Slaydlar 200 n etanolda quritilgan va kylega o'tkazilgan.Bo'ri olingan slaydlar 10x ob'ektiv bilan kalitlik mikroskopidan foydalangan holda ingl.Fibroz hududining foizi tugmachalar analizatsion dasturi yordamida hisoblangan.
Kliq to'ti ™ MTT HAYoT HAYoTION HAQIQATI (Invitrogen, Carlsbad, CA), katalog raqamlari katalog raqami.Xususan, MTT tahlili davomida bir tekis to'qima hajmini ta'minlash uchun 6 mm bo'lgan jarrohlik mushr zarrachasi ishlatilgan.To'qimalar alohida-alohida bo'lib, ishlab chiqaruvchining protokoliga muvofiq 12 ta oqim plitasi bo'lgan MTT skrstratining quduqlariga joylashtirilgan.Bo'limlar 37 ° C ga inkubatsiya qilinadi. 3 soat davomida va tirik to'qima binafsha rang birikma hosilini hosil qilish uchun MTT Substratini mettradlaydi.MTT eritmasini 1 ml dmso bilan almashtiring va 37 ° C inkubate 37 ° C ni yurak qismlaridan chiqarib oling.96-sonli namunalar 96-sonli domat va 570 nm-da, syotate plastinkasini o'quvchi (biotek) yordamida o'lchanadigan toza pastki plita va binafsha rang intensivligi.O'qishlar har bir tiniq yurakning og'irligiga normalizatsiya qilindi.
Yurak tilimidagi ommaviy axborot vositalari 1 mkni / ml [5-3ht] vagoz biokimyoviylari, blyuz biokimyoviy buyumlari, blyuze, ca, AQSh) ilgari tasvirlanganidek.4 soatlik inkubatsiyadan so'ng 100 mkl 0,2 n hcll bo'lgan ochiq mikrokentali naycha qo'shing.Keyin naychani 37 ° C da 72 ° C uchun 500 mkl dh2o-ni o'z ichiga olgan maydalagich naychasiga joylashtirildi.Keyin maydalangan naychadan mikrokentsifikrakçali naychani olib tashlang va 10 ml skrillatatsiya suyuqligini qo'shing.Tri-Carb 2900tr CHINELLANLANLANLANLANLANLANATILOT ANADERATER (Padval biosektivi, Meriden, CT, AQSh) yordamida amalga oshirildi.Keyinchalik glyukozadan foydalanish [5-3ht] -ldoza aniq faoliyatini hisobga olgan holda hisoblab chiqilgan (5-3htulbozli ma'lum bir faoliyatni, [5-3htrillocations-/ soatlab hisob-kitob fondining pasayishi.Ma'lumotlar yurak uchastkalariga normallashtiriladi.
Trizolda to'qima gomogenizatsiyasidan keyin RNA Qiagen MirNiasy MicNiasy MicroIgy Micro Micro MicroIgy Micro MicroIgy Micro Micro Micro-Kit # 5-sonli sug'urta bo'limlaridan ajratilgan.RNasec kutubxonani tayyorlash, ketma-ketlik va ma'lumotlarni tahlil qilish quyidagicha bajarildi:
RNN kutubxonasini tayyorlash uchun boshlang'ich material sifatida 1 mkg rena ishlatilgan.Izohning tavsiyalariga binoan (neb, AQSh) Nebneke uchun (NEb, AQSh) Nebneke uchun kutubxonalarni ishlab chiqarishni (Neb, AQSh) har bir namunaning atribut shartlariga qo'shildi.Qisqasi, MRNA polizli tolalukitidlar bilan biriktirilgan magnit munchoqlardan foydalangan holda RNKdan tozalangan.Sülgentatsiya 1 ta NarneText-dagi yuqori haroratda, sintez reaktsion buferi (5x).Birinchi Strand CDNA CDNAsi tasodifiy hexamer primerlar va M-Mulv teskari tintuv o'tkazilgan (RNAZ H-) yordamida sintez qilindi.Ikkinchi Strand CDNA DNK polimeraza i va Rnase H. Rnase H. Qolgan ortiqcha narsalar oronuksiz / polimeraza faoliyati bilan to'mtoq uchlari bilan almashtiriladi.DNK parchasining adenilatilatsiyasidan so'ng, uni gibridlanish uchun tayyorlash uchun nebnekext adapteri u biriktirilgan.Oldindan afzal ko'rgan uzunligi 150-200 BP ni tanlash uchun.Kutubxona bo'laklari Ompure XP tizimidan (Beckman Kvanter, Beverli, AQSh) yordamida tozalandi.Keyin adapter bilan 37 ° C uchun o'rnatilgan CDNa bilan 37 ° C da ishlatilgan 3 mkl foydalanuvchisiga (Neb, AQSh).Keyin PCR Phution DNK polimeraz, universal PRN polimerazi, universal PCRENRENTLAR, Indeks (x) Asrchilar.Va nihoyat, PCR mahsulotlari tozalangan (Ampure XP tizimi) va kutubxona sifati 2100 tizimga baholandi.CDNA kutubxonasi Novasq sonidan foydalangan holda amalga oshirildi.Illuminadan Image fayllari CACAVA-BASTER qo'ng'iroqidan foydalangan holda restoranlarga aylantirildi.Xom, Ratq (FQ) da saqlanadi (FQ) formatdagi fayllar va tegishli asosiy fazilatlarni o'z ichiga oladi.SSCROFA11.1 mos yozuvlar genomiga mos keladigan tartibli tartib-ketma-ketlik bilan mos keladigan serat2 ni tanlang.Umuman olganda, Atat2 har qanday o'lchamdagi, shu jumladan 4 milliard bazaga, shu jumladan 4 milliard bazaga, odatiy qiymatlar eng parametrlarga o'rnatiladi.RNN SEq ma'lumotlaridan olingan RNA SEq ma'lumotlaridan boshlab, hozirgi yoki yaxshiroq aniqlik bilan, boshqa usuldan ko'ra eng aniq aniqlik bilan samarali bo'lishi mumkin.
Tekketlarning ko'pligi gen ifodasi darajasini bevosita aks ettiradi.Gene ifodasi darajasi genom yoki exkond bilan bog'liq transkriptlarning ko'pligi tufayli baholanadi.O'qilganlarning soni genlarning ifoda darajasi, gen uzunligi va ketma-ketlik chuqurligi bilan mutanosib.FPKM (bir million turdagi juft joylashtirilgan juftlikning bir-birlariga bo'laklari, densak2 paketidan foydalanib, differentsial ifodaning p-qiymatlari aniqlandi.Keyin biz Inenamini-Xochberg-ning o'rnatilgan "P.Dj.Just" ga asoslangan Benjamini-Xochberg-ning umumiyligi uchun soxta kashfiyot stavkasini (FDR) hisoblab chiqdik.
Termosodan (Termo, mushukdan foydalanib, yurak bo'limlaridan ajratilgan RNNA CDNAga 200 ni (Thermo, mushuk) konsentratsiyasining konsentratsiyasiga aylantirdi. 11756050.Qimmatli RT-PCR amaliy biosentstemalarni enrana plastinka yordamida amalga oshirdi.Reaktsiya aralashmasi 5 mkt tog 'master mixidan iborat edi (termo, mushuk # 44445557), 0,5 mkl h2o quduq uchun 3,5 mkl h2o aralashtirilgan.Standart QNCR tsikllari qo'llanilgan va CT qiymatlari Qabul qilingan SiosSistio 5 real vaqt rejimida (384-yaxshi modul; A28135).Taqman Asmer (SS0690875_M1), PKDCC (SS06903888890_m1), Cigb (SS068688890_M1), Cigbc (SS06009508_), Cigbc (SS01009508_), Cigbc (SS01009508_). MH), GATA4 (SS03383805_u1), Gja1 (SS03375009_M1), Col1a2 (SS042455888888888888_m1), barcha namunalarning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT-ning CT qiymatlari normallashtirildi H.
NT-pickp to'plamidan (cho'chqa) (cho'chqa) (cho'chqa) yordamida OAV materiallari (cho'chqa) (MBS20869779, mybioss20869799, mybiosssasctors) tomonidan moliyalashtirildi.Qisqacha, har bir namunaning 250 mkl va har bir standartga qo'shildi.Namuna qo'shilgandan so'ng darhol, har bir quduqqa 50 mk trakent reaktiv qo'shing.Plastinka bilan muloyimlik bilan silkiting va muhr bilan muhrlang.Keyin planshetlar 1 soat davomida 37 ° C da inkubatsiya qilindi.Keyin eritmani 350 mk 1-chi 1x ni yuvish eritmasi bilan 350 mkni yuvish eritmasini har safar 1-2 daqiqa davomida yuving.Keyin yaxshi va plastinka plomba bilan muhrlang.Planshet ohista silkinib, 30 daqiqa davomida 37 ° C da inkubatsiya qilingan.Qarorni 350 mk 1 ni yuvish eritmasi bilan 5 marta yuving.Har birida 90 mkl substrat yechimini qo'shing va plastinkaga muhrlang.Plitani 10-20 daqiqa davomida 37 ° C ga olib chiqing.Har bir quduqqa 50 mkl to'xtatadigan eritma qo'shing.Plitasi zudlik bilan sitatsiyani (Biotek) plitani o'quvchi 450 nm 450 nm yordamida o'lchashdi.
Elektr kattaligini 40% gacha o'zgargan 40% metrldagi mutlaq o'zgarishini aniqlaydigan guruh o'lchamlarini tanlash uchun elektr energiyasini tahlil qilish uchun 280% quvvatni 40% igam o'zgarishi mumkin. Elektr kattaligini 40% gacha o'zgargan 40% metrldagi mutlaq o'zgarishini aniqlaydigan guruh o'lchamlarini tanlash uchun elektr energiyasini tahlil qilish uchun 280% quvvatni 40% igam o'zgarishi mumkin. Andialz Moshchnosti byl Vypolnen dlya vybora razmerov grupp, kotspechat> 80% Moshchnosto dlya obnarujeniya dlya Oshibok thepa . Quvvatni tahlil qilish 1 8% quvvatni aniqlaydigan Guruh o'lchamlarini tanlang, bu 5% the i 5% turdagi i 5% miqdoridagi o'zgarishlarni aniqlash uchun.① ② ③ ④ 80% 中 中 中 中 中 和 和 和 和 和 和 和 和 大小 大小 大小 大小 大小① ② ③ ④ 80% 中 中 中 中 中 和 和 和 和 和 和 和 和 大小 大小 大小 大小 大小 Byl proveden analiz Moshchnosti dlya vybora razmera gruppy, kotoryy obespechil by> 80% Moshchnosto dlya Oshibokiv thepa I. 80% quvvatni tanlash uchun bir guruh hajmini tanlash uchun elektr tahlilini tanlash uchun amalga oshirildi.Tasodifiy bo'limlar tajribadan oldin tasodifiy tanlangan.Barcha tahlillar ahvoli ko'r bo'lib, barcha ma'lumotlar tahlil qilingandan keyingina dekodlanadi.Grafr Prizise dasturi (San Diego, Ca) barcha statistik tahlillarni o'tkazish uchun ishlatilgan. Barcha statistika, P-qiymatlar uchun <0.05 qiymatlarida muhim deb hisoblangan. Barcha statistika, P-qiymatlar uchun <0.05 qiymatlarida muhim deb hisoblangan. Dlya vsey statistiki P-Znacheniya ssichimmi pri znacheniyx <0,05. Barcha statistika, P-qiymatlar uchun <0.05 qiymatlarida muhim deb hisoblangan.① ② ③, p 值 在值 <0.05 ↑ 被 的 的 的① ② ③, p 值 在值 <0.05 ↑ 被 的 的 的 Dlya vsey statistiki P-Znacheniya ssichimmi pri znacheniyx <0,05. Barcha statistika, P-qiymatlar uchun <0.05 qiymatlarida muhim deb hisoblangan.Faqatgina 2 ta taqqoslash bilan ma'lumotlarda ikki dumli talabaning T-testi o'tkazildi.Bir nechta guruh o'rtasidagi ahamiyatni aniqlash uchun bir tomonlama yoki ikki tomonlama Anova ishlatiladi.Post HOC testlarini o'tkazishda Tukin tuzatilishi ko'p taqqoslash uchun hisobga olindi.RNASEC ma'lumotlari FDR va P.Ajjustni hisoblab chiqilganda, usullar bo'limida tasvirlanganidek, alohida statistik mulohazalarga ega.
Tadqiqot dizayni haqida ko'proq ma'lumot olish uchun ushbu maqolaga bog'liq bo'lgan tabiatni tekshirish hisobotini ko'ring.