Spas ji bo serdana Nature.com. Guhertoya geroka ku hûn bikar tînin piştgiriya CSS-ê bi sînor e. Ji bo ezmûna çêtirîn, em pêşniyar dikin ku hûn gerokek nûvekirî bikar bînin (an jî Moda Lihevhatinê di Internet Explorer-ê de neçalak bikin). Di vê navberê de, ji bo ku piştgiriya domdar misoger bikin, em ê malperê bêyî şêwaz û JavaScript-ê nîşan bidin.
Pêdivî bi pergaleke pêbawer a in vitro heye ku bikaribe bi awayekî rast jîngeha fîzyolojîk a dil ji bo ceribandina dermanan hilberîne. Hebûna sînorkirî ya pergalên çanda tevna dilê mirovan bûye sedema şîrovekirinên nerast ên bandorên dermanên dil. Li vir, me modelek çanda tevna dil (CTCM) pêşxistiye ku bi awayekî elektromekanîkî perçeyên dil teşwîq dike û di qonaxên sîstolîk û diyastolîk ên çerxa dil de dirêjkirina fîzyolojîk derbas dike. Piştî 12 rojan çandinê, vê rêbazê qismî zindîbûna beşên dil baştir kir, lê bi tevahî yekparebûna wan a avahîsaziyê neparast. Ji ber vê yekê, piştî ceribandina molekulên piçûk, me dît ku zêdekirina 100 nM triiodothyronine (T3) û 1 μM dexamethasone (Dex) li navgîna me mîkroavahîya beşan ji bo 12 rojan parast. Bi hev re bi dermankirina T3/Dex, pergala CTCM profîlên transkrîpsiyonê, zindîbûn, çalakiya metabolîk û yekparebûna avahîsaziyê di heman astê de wekî tevna dil a teze ji bo 12 rojan parast. Wekî din, dirêjkirina zêde ya tevna dil di çandinê de sînyala dil a hîpertrofîk çêdike, ku delîlan ji bo şiyana CTCM-ê peyda dike ku şert û mercên hîpertrofîk ên ku ji ber dirêjkirina dil çêdibin teqlîd bike. Di encamê de, CTCM dikare fîzyolojî û patofîzyolojiya dil di kulturê de di demên dirêj de model bike, û bi vî awayî ceribandina dermanan a pêbawer gengaz bike.
Berî lêkolînên klînîkî, pergalên pêbawer ên in vitro hewce ne ku dikarin hawîrdora fîzyolojîk a dilê mirov bi rastî hilberînin. Divê pergalên weha dirêjkirina mekanîkî ya guhertî, rêjeya lêdana dil û taybetmendiyên elektrofîzyolojîk teqlîd bikin. Modelên heywanan bi gelemperî wekî platformek pişkinînê ji bo fîzyolojiya dil têne bikar anîn, bi pêbaweriyek sînorkirî di nîşandana bandorên dermanan li ser dilê mirov de1,2. Di dawiyê de, Modela Ceribandina Çanda Tevna Dil a Îdeal (CTCM) modelek e ku ji bo destwerdanên cûrbecûr ên dermanî û farmakolojîk pir hesas û taybetî ye, ku fîzyolojî û patofîzyolojiya dilê mirov bi rastî hilberîne3. Nebûna pergalek wusa kifşkirina dermankirinên nû ji bo têkçûna dil sînordar dike4,5 û bûye sedema kardiyotoksîsîteya dermanan wekî sedemek sereke ji bo derketina ji bazarê6.
Di deh salên borî de, heşt dermanên ne-kardiovaskuler ji karanîna klînîkî hatine vekişandin ji ber ku ew dibin sedema dirêjkirina navbera QT ku dibe sedema aritmiya ventrikuler û mirina ji nişka ve7. Ji ber vê yekê, hewcedariyek zêde bi stratejiyên pişkinîna pêş-klînîkî yên pêbawer heye da ku bandor û jehrîbûna kardiovaskuler binirxînin. Bikaranîna dawî ya kardiyomîyosîtên ji hucreyên kok ên pirpotent ên ji hêla mirovan ve hatine çêkirin (hiPS-CM) di pişkinîna dermanan û ceribandina jehrîbûnê de çareseriyek qismî ji bo vê pirsgirêkê peyda dike. Lêbelê, xwezaya negihîştî ya hiPS-CM û nebûna tevliheviya pirhucreyî ya tevna dil sînorkirinên sereke yên vê rêbazê ne. Lêkolînên dawî nîşan dane ku ev sînorkirin dikare bi karanîna hiPS-CM-ya zû ji bo çêkirina hîdrojelên tevna dil di demek kurt de piştî destpêkirina girjbûnên xweber û zêdekirina teşwîqkirina elektrîkê bi demê re qismî were derbas kirin. Lêbelê, van mîkrotevheyên hiPS-CM taybetmendiyên elektrofîzyolojîk û girjbûnê yên gihîştî yên mîyokardiyûma mezinan tune ne. Wekî din, tevna dil a mirovan xwedî avahiyek tevlihevtir e, ku ji tevliheviyek heterojen a celebên hucreyên cûda pêk tê, di nav de hucreyên endotel, neuron û fîbroblastên stromal, ku bi komên taybetî yên proteînên matrîksa derveyî hucreyê ve girêdayî ne. Ev nehevsengiya nifûsên ne-kardiyomîyosîtî11,12,13 di dilê memikên mezinan de astengiyeke mezin e ji bo modelkirina tevna dil bi karanîna celebên şaneyên ferdî. Ev sînorkirinên sereke girîngiya pêşxistina rêbazên ji bo çandina tevna mîyokardê ya sax di bin şert û mercên fîzyolojîk û patolojîk de tekez dikin.
Beşên zirav ên çandî (300 µm) ên dilê mirov wekî modelek sozdar a mîyokarda mirovî ya saxlem derketine holê. Ev rêbaz gihîştina pergalek pirhucreyî ya 3D ya bêkêmasî peyda dike ku dişibihe tevna dilê mirov. Lêbelê, heta sala 2019-an, karanîna beşên dil ên çandî ji ber mayîndehiya çanda kurt (24 demjimêr) sînordar bû. Ev ji ber hejmarek faktoran e, di nav de nebûna dirêjkirina fîzîkî-mekanîkî, navbeynkariya hewa-şilavê, û karanîna medyayên hêsan ên ku piştgiriyê nadin hewcedariyên tevna dil. Di sala 2019-an de, çend komên lêkolînê nîşan dan ku tevlêkirina faktorên mekanîkî di nav pergalên çanda tevna dil de dikare temenê çandê dirêj bike, îfadeya dil baştir bike, û patolojiya dil teqlîd bike. Du lêkolînên elegant 17 û 18 nîşan didin ku barkirina mekanîkî ya yekalî bandorek erênî li ser fenotipa dil di dema çandiniyê de dike. Lêbelê, van lêkolînan barkirina fîzîkî-mekanîkî ya sê-alî ya dînamîk a çerxa dil bikar neanîne, ji ber ku beşên dil bi hêzên kişandina îzometrîk 17 an barkirina oksotonîk a xêzik 18 hatine barkirin. Ev rêbazên dirêjkirina tevnan bûn sedema tepeserkirina gelek genên dil an jî zêdebûna derbirîna genên ku bi bersivên dirêjkirina anormal ve girêdayî ne. Bi taybetî, Pitoulis û hevkarên wî 19 ji bo ji nû ve avakirina çerxa dil bi karanîna bersiva veguherînera hêzê û ajokarên tansiyonê serşokek çanda perçeyên dil a dînamîk pêş xistin. Her çend ev pergal rê dide modelkirina çerxa dil a in vitro rasttir, tevlihevî û rêjeya kêm a rêbazê sepandina vê pergalê sînordar dike. Laboratuwara me vê dawiyê pergalek çanda hêsankirî bi karanîna teşwîqkirina elektrîkê û navgînek çêtirînkirî pêşxistiye da ku heya 6 rojan zindîbûna beşên tevna dil a beraz û mirovan biparêze 20,21.
Di destnivîsa heyî de, em modelek çanda tevna dil (CTCM) bi karanîna beşên dilê berazan ku nîşanên humoral dihewîne da ku fîzyolojiya dil a sê-alî û firehbûna patofîzyolojîk di dema çerxa dil de ji nû ve diyar bike, vedibêjin. Ev CTCM dikare rastbûna pêşbîniya dermanê pêş-klînîkî bigihîne astek ku berê qet nehatiye bidestxistin bi peyda kirina pergalek dil a lêçûn-bandor, navîn-derbasbûnê ku fîzyolojî/patofîzyolojiya dilê memikan ji bo ceribandina dermanan a pêş-klînîkî teqlîd dike.
Sînyalên mekanîkî yên hemodînamîk di parastina fonksiyona kardiyomîyosîtê de di vitro de roleke girîng dilîzin 22,23,24. Di destnivîsa heyî de, me CTCM pêşxistiye (Wêne 1a) ku dikare bi teşwîqkirina hem teşwîqa elektrîkî û hem jî mekanîkî li frekansên fîzyolojîk (1.2 Hz, 72 lêdan di hûrdemê de) hawîrdora dil a mezinan teqlîd bike. Ji bo dûrketina ji dirêjkirina zêde ya tevnê di dema dîastolê de, amûrek çapkirina 3D hate bikar anîn da ku mezinahiya tevnê bi rêjeya 25% zêde bike (Wêne 1b). Leza elektrîkî ya ku ji hêla pergala C-PACE ve hatî çêkirin, bi karanîna pergala bidestxistina daneyan ji bo hilberandina tevahî ya çerxa dil, bi 100 ms berî sîstolê dest pê kir. Pergala çanda tevnê çalakkerek pneumatîk a bernamekirî (LB Engineering, Almanya) bikar tîne da ku membranek silîkonê ya nerm bi rengek çerxî berfireh bike da ku bibe sedema berfirehbûna perçeyên dil di odeya jorîn de. Pergal bi rêya veguherînerek zextê bi xêzek hewayî ya derveyî ve hate girêdan, ku ev yek gengaz kir ku zext (± 1 mmHg) û dem (± 1 ms) bi rastî were verast kirin (Wêne 1c).
a Beşa tevnê bi zengila piştgiriyê ya 7 mm ve girêdin, ku bi şîn tê nîşandan, di hundirê odeya çandiniyê ya cîhazê de. Odeya çandiniyê ji odeya hewayê bi membranek silîkonî ya nerm a zirav veqetandî ye. Ji bo rêgirtina li rijandinê, di navbera her odeyê de gasketek deynin. Qapaxa cîhazê elektrodên grafît dihewîne ku teşwîqkirina elektrîkê peyda dikin. b Nûneratiya şematîk a cîhaza tevnê ya mezin, zengila rêber û zengila piştgirî. Beşên tevnê (qehweyî) li ser cîhaza mezin bi zengila rêber ve têne danîn ku di xêzika li ser qiraxa derve ya cîhazê de ye. Bi karanîna rêbernameyê, bi baldarî zengila piştgiriyê ya ku bi zeliqê akrîlîk ê tevnê hatiye pêçandin li ser beşa tevna dil deynin. c Grafîka ku dema teşwîqkirina elektrîkê wekî fonksiyonek zexta odeya hewayê ya ku ji hêla aktûatorek pneumatîk a bernamekirî (PPD) ve tê kontrol kirin nîşan dide. Amûrek bidestxistina daneyan ji bo senkronîzekirina teşwîqkirina elektrîkê bi karanîna sensorên zextê hate bikar anîn. Dema ku zexta di odeya çandiniyê de digihîje sînorê diyarkirî, sînyalek pulsê ji C-PACE-EM re tê şandin da ku teşwîqkirina elektrîkê bide destpêkirin. d Wêneya çar CTCM-yan ku li ser refikek înkubatorê hatine danîn. Çar cîhaz bi rêya çerxek pneumatîk bi yek PPD ve girêdayî ne, û sensorên zextê têne danîn nav valva hemostatîk da ku zexta di çerxeya pneumatîk de bişopînin. Her amûrek şeş beşên tevnê dihewîne.
Bi karanîna aktûatorek pneumatîk a yekane, me karî 4 cîhazên CTCM kontrol bikin, ku her yek ji wan dikaribû 6 beşên tevnê bigire (Wêne 1d). Di CTCM de, zexta hewayê di odeya hewayê de vediguhere zexta senkronîk di odeya şilavê de û berfirehbûna fîzyolojîk a perçeya dil çêdike (Wêne 2a û Fîlma Pêvek 1). Nirxandina dirêjkirina tevnê li 80 mm Hg. Huner dirêjkirina beşên tevnê bi rêjeya 25% nîşan da (Wêne 2b). Ev rêjeya dirêjkirinê hatiye nîşandan ku bi dirêjahiya sarkomera fîzyolojîk a 2.2-2.3 µm re ji bo girêbestiya beşa dil a normal re têkildar e17,19,25. Tevgera tevnê bi karanîna mîhengên kameraya xwerû hate nirxandin (Wêne Pêvek 1). Mezinahî û leza tevgera tevnê (Wêne 2c, d) bi dirêjkirina di dema çerxa dil de û dema di dema sîstol û dîastolê de re têkildar bû (Wêne 2b). Dirêjkirin û leza tevna dil di dema girjbûn û rihetbûnê de di kulturê de 12 rojan sabît ma (Wêne 2f). Ji bo nirxandina bandora teşwîqkirina elektrîkê li ser girêbestbûnê di dema çandiniyê de, me rêbazek ji bo destnîşankirina deformîteya çalak bi karanîna algorîtmayek siyakirinê pêşxist (Wêneya Pêvek 2a,b) û me karibû deformîteyên bi û bê teşwîqkirina elektrîkê ji hev cuda bikin. Heman beşa dil (Wêne 2f). Li herêma tevgerbar a birînê (R6-9), voltaja di dema teşwîqkirina elektrîkê de ji nebûna teşwîqkirina elektrîkê %20 bilindtir bû, ku ev yek beşdariya teşwîqkirina elektrîkê di fonksiyona girêbestbûnê de nîşan dide.
Şopên nûner ên zexta odeya hewayê, zexta odeya şilavê, û pîvandina tevgera tevnê piştrast dikin ku zexta odeyê zexta odeya şilavê diguherîne, û dibe sedema tevgerînek hevber a perçeya tevnê. b Şopên nûner ên ji sedî dirêjkirinê (şîn) ên beşên tevnê yên ku bi ji sedî dirêjkirinê re têkildar in (porteqalî). c Tevgera pîvandî ya perçeya dil bi leza tevgerê ya pîvandî re lihevhatî ye. (d) Rêgehên nûner ên tevgera çerxî (xeta şîn) û leza (xeta xalxalî ya porteqalî) di perçeyek dil de. e Pîvandina dema çerxê (n = 19 perçe ji bo her komê, ji berazên cûda), dema girjbûnê (n = 19 perçe ji bo her komê, ji berazên cûda), tevgera tevnê (n = 25 perçe)/kom ji berazên cûda), leza sîstolîk a lûtkeyê (n = 24(D0), 25(D12) perçe/kom ji berazên cûda) û rêjeya rihetbûna lûtkeyê (n=24(D0), 25(D12) perçe/kom ji berazên cûda). Testa t-ya Xwendekar a du-alî di tu parametreyê de ferqek girîng nîşan neda. f Şopên analîza zorê ya nûner a beşên tevnê bi (sor) û bê (şîn) teşwîqkirina elektrîkê, deh deverên herêmî yên beşên tevnê ji heman beşê. Panelên jêrîn hejmartina cudahiya ji sedî ya zorê di beşên tevnê de bi û bê teşwîqkirina elektrîkê di deh deverên ji beşên cuda de nîşan didin. (n = 8 perçe/kom ji berazên cuda, Testa t ya Xwendekarê Du-alî tê kirin; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05). (n = 8 perçe/kom ji berazên cuda, Testa t ya Xwendekarê Du-alî tê kirin; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05). (n = 8 срезов/группу од разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; ****p<0,0001, **p<0,01, *p<0,05). (n = 8 beş/kom ji berazên cuda, testa t ya Student a du-alî; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05). （n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；****p < 0.0001，**p < 0.01，5p < 0.01，5 （n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；****p < 0.0001，**p < 0.01，5p < 0.01，5 (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05). (n = 8 beş/kom, ji berazên cuda, testa t ya du-alî ya Xwendekar; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05).Çîpên çewtiyê navînî ± devîasyona standard temsîl dikin.
Di sîstema me ya berê ya çandina perçeyên dil ên biyomîmetîk ên statîk de [20, 21], me bi sepandina teşwîqkirina elektrîkî û baştirkirina pêkhateya navînê jiyan, fonksiyon û yekparebûna avahîsaziyê ya perçeyên dil ji bo 6 rojan parast. Lêbelê, piştî 10 rojan, ev hejmar bi tundî daketin. Em ê behsa beşên ku di şert û mercên kontrolê yên sîstema me ya çandina biyomîmetîk a statîk a berê 20, 21 de hatine çandin (Ctrl) bikin û em ê medyaya me ya berê ya çêtirkirî wekî şert û mercên MC û çandina di bin teşwîqkirina mekanîkî û elektrîkî ya hevdem (CTCM) de bikar bînin. Bi navê . Pêşî, me diyar kir ku teşwîqkirina mekanîkî bêyî teşwîqkirina elektrîkî ji bo parastina jiyanbariya tevnê ji bo 6 rojan ne bes bû (Wêneya Pêvek 3a,b). Balkêş e ku bi danasîna teşwîqkirina fîzyomekanîkî û elektrîkî bi karanîna STCM, jiyanbariya beşên dil ên 12-rojî wekî beşên dil ên teze di bin şert û mercên MS de ma, lê ne di bin şert û mercên Ctrl de, wekî ku ji hêla analîza MTT ve hatî nîşandan (Wêne 1). 3a). Ev pêşniyar dike ku teşwîqkirina mekanîkî û simulasyona çerxa dil dikare beşên tevnê ji bo du qat zêdetir ji ya ku di sîstema me ya çandina statîk a berê de hatî ragihandin zindî bihêle. Lêbelê, nirxandina yekparçeyiya avahîsaziyê ya beşên tevnê bi rêya nîşankirina îmmunolojîk a troponîn T ya dil û connexin 43 nîşan da ku îfadeya connexin 43 di roja 12-an de di tevnên MC de ji kontrolên di heman rojê de bi girîngî bilindtir bû. Lêbelê, îfadeya yekreng a connexin 43 û avakirina dîska Z bi tevahî nehat parastin (Wêne 3b). Em çarçoveyek zekaya sûnî (AI) bikar tînin da ku yekparçeyiya avahîsaziyê ya tevnê bipîvin26, boriyek fêrbûna kûr a li ser bingeha wêneyê li ser bingeha boyaxkirina troponîn-T û connexin43 da ku yekparçeyiya avahîsaziyê û fluoresansa perçeyên dil di warê hêza cihgirtinê de bixweber bipîvin. Ev rêbaz Tora Neural a Konvolusyonî (CNN) û çarçoveyek fêrbûna kûr bikar tîne da ku yekparçeyiya avahîsaziyê ya tevna dil bi awayekî otomatîk û bêalî bi pêbawer bipîve, wekî ku di referansê de hatî vegotin. 26. Tevna MC di roja 0-an de li gorî beşên kontrola statîk dişibiya avahîsaziyê ya çêtir nîşan da. Wekî din, boyaxkirina sê-reng a Masson di roja 12-an a çandiniyê de rêjeyek fîbrozê ya pir kêmtir di bin şert û mercên MS de li gorî şert û mercên kontrolê eşkere kir (Wêne 3c). Her çend CTCM di roja 12-an de zindîbûna beşên şaneyên dil zêde kir û gihand astek dişibihe şaneyên dil ên teze, lê yekparçeyiya avahiya beşên dil bi girîngî baştir nekir.
Grafîkek barî pîvandina jiyanbûna MTT ya perçeyên dil ên teze (D0) an jî çanda perçeyên dil ji bo 12 rojan nîşan dide, çi di çanda statîk (D12 Ctrl) de çi jî di CTCM (D12 MC) de (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) perçe/kom ji berazên cuda, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; ####p < 0.0001 li gorî D0 û **p < 0.01 li gorî D12 Ctrl). Grafîkek barî pîvandina jiyanbûna MTT ya perçeyên dil ên teze (D0) an jî çanda perçeyên dil ji bo 12 rojan nîşan dide, çi di çanda statîk (D12 Ctrl) de çi jî di CTCM (D12 MC) de (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) perçe/kom ji berazên cuda, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; ####p < 0.0001 li gorî D0 û **p < 0.01 li gorî D12 Ctrl).Hîstogram pîvandina jiyanbûna beşên dilê teze yên MTT (D0) an jî çanda beşên dil ji bo 12 rojan di çanda statîk (kontrola D12) an CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (kontrola D12). ) , 12 (D12 MC) beş/kom ji berazên cuda nîşan dide, testa ANOVA ya yekalî tê kirin;####p < 0,0001 по сравнению со D0 и **p < 0,01 ji sravneniyu bi D12 Ctrl). ####p < 0.0001 li gorî D0 û **p < 0.01 li gorî D12 Ctrl). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏(D0)或心脏切片培养12 天的MTT 活力的量化)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，VA化测试；与D0 相比，####p < 0.0001，与D12 Ctrl 相比，**p < 0.01). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏(D0) ，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 相比，#####p <1.0trlD，相比,**p.)hîstograma ku pîvandina jiyanbûna MTT di beşên dilê teze (D0) an jî beşên dil ên ku 12 rojan di çanda statîk (kontrola D12) an CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (kontrola D12)), 12 (D12 MC) beş/kom ji berazên cuda nîşan dide, testa ANOVA ya yekalî;####p < 0,0001 li ser D0, ** p < 0,01 bi D12 Ctrl). ####p < 0.0001 li gorî D0, **p < 0.01 li gorî D12 Ctrl).b Troponin-T (kesk), connexin 43 (sor) û DAPI (şîn) di beşên dil ên nû veqetandî (D0) an jî beşên dil ên ku di bin şert û mercên statîk (Ctrl) an şert û mercên CTCM (MC) de ji bo 12 rojan hatine çandin) ji wêneyên îmmunofluoresansa temsîlkar (pîvana vala = 100 µm). Pîvandina yekparçeyiya avahiya tevna dil bi saya aqilê sûnî (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) perçe/kom her yek ji berazên cuda, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; ####p < 0.0001 li gorî D0 û ****p < 0.0001 li gorî D12 Ctrl). Pîvandina yekparçeyiya avahiya tevna dil bi saya aqilê sûnî (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) perçe/kom ji berazan cuda, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; ####p < 0.0001 li gorî D0 û ****p < 0.0001 li gorî D12 Ctrl). Количественная оценка структурной целостности сердечной ткани искусственным интеллектом (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) резов/групп од разных свиней, проводится однофакторный, проводится однофакторный, проводится однофакторный, проводится однофакторный сравнению с D0 и ****p < 0,0001 по сравнению со D12 Ctrl). Pîvandina yekparçeyiya avahiya tevna dil bi aqilê sûnî (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) beş/kom ji berazên cuda, testa ANOVA ya yekalî hat kirin; ####p < 0.0001 li gorî D0 û ****p < 0.0001 li gorî D12 Ctrl).人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) perçe/kom her yek ji berazên cuda, testa yek-alî #0#0D0;相比，****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比）.人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) perçe/kom her yek ji berazên cihê, yekalî testa ANOVA.#0#0与D0相比，****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比）. Искусственный интеллект для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) срезов/группу каждой из разных свиней; Для сравнения ****p < 0,0001 по сравнению со D12 Ctrl). Zekaya sûnî ji bo pîvandina yekparçeyiya avahiya tevna dil (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) beş/kom her yek ji berazên cuda, testa ANOVA ya yekalî; ####p<0.0001 li hember .D0 Ji bo berawirdkirinê ****p < 0.0001 li gorî D12 Ctrl). c Wêneyên temsîlkar (çep) û hejmartin (rast) ji bo perçeyên dil ên bi boyaxa Masson a sêqromî (Scale bare = 500 µm) (n = 10 perçe/kom ji berazê cuda, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; ####p < 0.0001 li gorî D0 û ***p < 0.001 li gorî D12 Ctrl). c Wêneyên temsîlkar (çep) û hejmartin (rast) ji bo perçeyên dil ên bi boyaxa Masson a sêqromî (Scale bare = 500 µm) (n = 10 perçe/kom ji berazan cuda, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; #### p < 0.0001 li gorî D0 û ***p < 0.001 li gorî D12 Ctrl). c. têkiliya тест ANOVA #### p < 0,0001 по сравнению со D0 и ***p < 0,001 по сравнению со D12 Ctrl). c Wêneyên temsîlkar (çep) û hejmartin (rast) yên beşên dil ên bi boyaxa Masson a sêqat (pîvana bê pêçandin = 500 µm) hatine boyaxkirin (n = 10 beş/kom ji berazên cuda, testa ANOVA ya yekalî hat kirin; #### p < 0 .0001 li gorî D0 û ***p < 0.001 li gorî D12 Ctrl). c.个切片/组，每组来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 相0l0 相0，相比）. C 用 masson 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 （左 左） 量化 （右） 裸尣庣度裸尺度 = 500 μm） （n = 10 个 切片 组 每 组 来自 不同 猪 ， 进行 单向 单#＋ p 0.0001 与D0 相比，***p < 0.001 与D12 Ctrl 相比）. c. помощью однофакторного дисперсионного анализа ;### #p < 0,0001 по сравнению со D0, ***p < 0,001 по сравнению со D12 Ctrl). c Wêneyên temsîlkar (çep) û hejmartin (rast) yên beşên dil ên ku bi boyaxa Masson a sêqromî hatine boyaxkirin (vala = 500 µm) (n = 10 beş/kom, her yek ji berazekî cuda, bi analîza yekalî ya guherînê hatine ceribandin ;### # p < 0.0001 li gorî D0, ***p < 0.001 li gorî D12 Ctrl).Çîpên çewtiyê navînî ± devîasyona standard temsîl dikin.
Me texmîn kir ku bi zêdekirina molekulên piçûk li navgîna çandiniyê, yekparebûna kardiyomîyosîtan dikare were baştirkirin û pêşveçûna fîbrozê di dema çandina CTCM de were kêmkirin. Ji ber vê yekê, me bi karanîna çandên kontrolê yên statîk ên xwe molekulên piçûk lêkolîn kirin20,21 ji ber hejmareke piçûk a faktorên tevlihev. Dexamethasone (Dex), triiodothyronine (T3), û SB431542 (SB) ji bo vê lêkolînê hatin hilbijartin. Ev molekulên piçûk berê di çandên hiPSC-CM de hatine bikar anîn da ku bi zêdekirina dirêjahiya sarcomere, T-tubul, û leza rêvebirinê, gihîştina kardiyomîyosîtan teşwîq bikin. Wekî din, hem Dex (glukokortîkoîdek) û hem jî SB têne zanîn ku iltîhabê tepeser dikin29,30. Ji ber vê yekê, me ceriband ka gelo tevlêkirina yek an jî tevlîheviyek ji van molekulên piçûk dê yekparebûna avahiya beşên dil baştir bike. Ji bo lêkolîna destpêkê, doza her pêkhateyê li gorî konsantrasyonên ku bi gelemperî di modelên çandiniya hucreyê de têne bikar anîn (1 μM Dex27, 100 nM T327, û 2.5 μM SB31) hate hilbijartin. Piştî 12 rojan çandinê, tevlîheviya T3 û Dex bû sedema yekparebûna avahiya kardiyomîyosîtê ya çêtirîn û ji nû ve çêkirina fîbrozê ya herî kêm (Wêneyên Pêvek 4 û 5). Wekî din, karanîna duqat an duqat van konsantrasyonên T3 û Dex bandorên zirardar li gorî konsantrasyonên normal çêkir (Wêneya Pêvek 6a,b).
Piştî lêkolîna destpêkê, me berawirdkirinek serî bi serî ya 4 şert û mercên çandiniyê pêk anî (Wêne 4a): Ctrl: beşên dil di çanda statîk a ku me berê bi karanîna navgîniya me ya optimîzekirî de çandinî kirin; 20.21 TD: T3 û Ctrl roja Çarşemê Dex zêde kirin; MC: beşên dil di CTCM de bi karanîna navgîniya me ya berê optimîzekirî çandinî kirin; û MT: CTCM bi zêdekirina T3 û Dex li navgînê. Piştî 12 rojan çandiniyê, zindîbûna tevnên MS û MT wekî di tevnên teze de ku bi ceribandina MTT hatine nirxandin ma (Wêne 4b). Balkêş e ku lêzêdekirina T3 û Dex li çandên transwell (TD) li gorî şert û mercên Ctrl nebû sedema başbûnek girîng di zindîbûnê de, ku rolek girîng a teşwîqkirina mekanîkî di parastina zindîbûna beşên dil de nîşan dide.
Diyagrameke sêwirana ceribandinî ku çar şert û mercên çandiniyê yên ku ji bo nirxandina bandorên teşwîqa mekanîkî û lêzêdekirina T3/Dex li ser navgînê ji bo 12 rojan hatine bikar anîn nîşan dide. b Grafîka barî pîvandina jiyanbariyê 12 roj piştî çandiniyê di hemî 4 şert û mercên çandiniyê de (Ctrl, TD, MC, û MT) li gorî perçeyên dilê teze (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD û D12 MT), 12 (D12 MC) perçe/kom ji berazên cuda nîşan dide, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 li gorî D0 û **p < 0.01 li gorî D12 Ctrl). b Grafîka barî pîvandina jiyanbariyê 12 roj piştî çandiniyê di hemî 4 şert û mercên çandiniyê de (Ctrl, TD, MC, û MT) li gorî perçeyên dilê teze (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD û D12 MT), 12 (D12 MC) perçe/kom ji berazên cuda nîşan dide, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 li gorî D0 û **p < 0.01 li gorî D12 ctrl). B وملاو показывает показественнннннннннннннию оизнеспособности через 12 Дней после культививания Во всех 4 условиях культивиovî MC и MT) по сравнению со свежими Срезами сердца (D0) (N = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD и D12 MT), 12 (D12 MC) срезов/группу од разных свиней, проводится односторонний тест ANOVA ####p < 0,0001, ###p < 0,001 по сравнению < 0,001 по сравнению; 0,01 по сравнению со D12 Ctrl). b Grafîka bar pîvandina jiyanbariyê di 12 rojan piştî çandiniyê de di hemî 4 şert û mercên çandiniyê de (kontrol, TD, MC, û MT) li gorî beşên dilê teze (D0) nîşan dide (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, û D12 MT), 12 (D12 MC) beş/kom ji berazên cuda, testa ANOVA ya yek-alî; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 li hember D0 û **p < 0.01 li gorî D12 Ctrl). b. TD 和D12 MT)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；#####p < 0.00001相比，**p < 0.01 与D12控制）.b 4 12 (D12 MC) b Гистограмма, показывающая все 4 условия культивирования (kontrol, TD, MC û MT) по sravneniyu со свежими srezami serdca (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, D12 TD и D12). MC) срезы/группа, односоронний тест ANOVA ####p <0,0001, ###p <0,001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению со контролем D12). b Hîstograma ku hemû 4 şert û mercên çandiniyê (kontrol, TD, MC û MT) nîşan dide li gorî beşên dilê teze (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD û D12 MT), ji berazên cuda 12 (D12 MC) beş/kom, testa ANOVA ya yekalî; ####p<0.0001, ###p<0.001 li hember D0, **p<0.01 li hember kontrola D12). c Grafîka barî pîvandina herikîna glukozê 12 roj piştî çandiniyê di hemî 4 şert û mercên çandiniyê de (Ctrl, TD, MC, û MT) li gorî perçeyên dilê teze (D0) nîşan dide (n = 6 perçe/kom ji berazên cûda, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; ###p < 0.001, li gorî D0 û ***p < 0.001 li gorî D12 Ctrl). c Grafîka barî pîvandina herikîna glukozê 12 roj piştî çandiniyê di hemî 4 şert û mercên çandiniyê de (Ctrl, TD, MC, û MT) li gorî perçeyên dilê teze (D0) nîşan dide (n = 6 perçe/kom ji berazên cûda, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; ###p < 0.001, li gorî D0 û ***p < 0.001 li gorî D12 Ctrl). c Gistogramma nîşan dide kolîçeya bilind a nirxê ku ji 12 rojan piştî girtina grûpê di hemî 4 şert û mercên grûpê de (kontrol, TD, MC û MT) li ser pîvana glîkozы (6) li ser hev (6) разных свиней, односторонний Выполняется тест ANOVA; c Hîstogram pîvandina herikîna glukozê 12 roj piştî çandiniyê di bin her 4 şert û mercên çandiniyê de (kontrol, TD, MC û MT) li gorî beşên dilê teze (D0) nîşan dide (n = 6 beş/kom ji berazên cûda, testa ANOVA ya yekalî hatî kirin; ###p < 0.001 li gorî D0 û ***p < 0.001 li gorî D12 Ctrl). c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) 相湯2，弌天的葡萄糖通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试；#0#0p < 0.相比，***p < 0.001 与D12 Ctrl 相比）. C 条形图 显示 所有 4 种 条件 （（ctrl 、 td 、 mc 和 mt） 新鲜 心脏 切片 切片 切片 切片培养 后 后 12 天 的 通量 定量 （n = 6 片/组 , 来自 猪 , , , , , , , ，猪单向执行ANOVA 测试；###p < 0.001，与D0 相比，***p < 0.001 与D12 Ctrl 相比）. c Gistogramma, nîşan dide ku ji bo 12 rojan piştî ku ji her tiştî 4 şert û mercên (kontrol, TD, MC û MT) bi hev re (60 roj) li ser hev (60 roj) срезов/группа, од разных свиней, односоронний Были проведены тесты ANOVA ###p < 0,001 по сравнению со D0, ***p < 0,001 по сравнению со D12 (kontrol). c Hîstograma ku pîvandina herikîna glukozê di 12 rojan piştî çandiniyê de ji bo hemî 4 şert û mercên çandiniyê (kontrol, TD, MC, û MT) li gorî beşên dilê teze (D0) nîşan dide (n = 6 beş/kom, ji berazên cûda, yekalî Testên ANOVA yên Were hatin kirin, ###p < 0.001 li gorî D0, ***p < 0.001 li gorî D12 (kontrol).d Nexşeyên analîza zorê yên tevnên teze (şîn), roja 12 MC (kesk), û roja 12 MT (sor) li deh xalên beşa tevnên herêmî (n = 4 perçe/kom, testa ANOVA ya yekalî; di navbera koman de ferqek girîng tune bû). e Nexşeya Volcano ku genên bi awayên cuda di beşên dil ên teze de nîşan dide (D0) li gorî beşên dil ên ku di bin şert û mercên statîk (Ctrl) an di bin şert û mercên MT (MT) de ji bo 10-12 rojan hatine çandin. f Nexşeya germê ya genên sarcomere ji bo beşên dil ên ku di bin her şert û mercên çandiniyê de hatine çandin. Barên çewtiyê navînî ± devîasyona standard temsîl dikin.
Girêdayîbûna metabolîk a li ser guheztina ji oksîdasyona asîda rûn bo glîkolîzê nîşaneyek ji cudakirina kardiyomîyosîtê ye. Kardiyomîyosîtên negihîştî bi giranî glukozê ji bo hilberîna ATP-ê bikar tînin û mîtokondriyên hîpoplastîk hene ku krîstayên wan kêm in5,32. Analîzên karanîna glukozê nîşan dan ku di bin şert û mercên MC û MT de, karanîna glukozê dişibihe ya di tevnên roja 0-an de (Wêne 4c). Lêbelê, nimûneyên Ctrl li gorî tevnên teze zêdebûnek girîng di karanîna glukozê de nîşan dan. Ev nîşan dide ku têkeliya CTCM û T3/Dex zindîbûna tevnên zêde dike û fenotipa metabolîk a beşên dil ên çandî yên 12-rojî diparêze. Wekî din, analîza zorê nîşan da ku asta zorê di nav tevnên dil ên teze de ji bo 12 rojan di bin şert û mercên MT û MS de wekî xwe maye (Wêne 4d).
Ji bo analîzkirina bandora giştî ya CTCM û T3/Dex li ser dîmena transkrîpsiyonî ya gerdûnî ya tevna perçeyên dil, me RNAseq li ser perçeyên dil ji her çar şert û mercên çandiniyê yên cûda pêk anî (Daneyên Pêvek 1). Bi balkêşî, beşên MT dişibin hevşibiya transkrîpsiyonê ya bilind bi tevna dil a teze re nîşan dan, bi tenê 16 ji 13,642 genan bi awayekî cuda hatin îfadekirin. Lêbelê, wekî ku me berê nîşan da, perçeyên Ctrl piştî 10-12 rojan di çandiniyê de 1229 genên bi awayekî cuda hatin îfadekirin nîşan dan (Wêne 4e). Ev dane bi qRT-PCR ya genên dil û fîbroblast hatin piştrast kirin (Wêneya Pêvek 7a-c). Bi balkêşî, beşên Ctrl kêmbûna genên dil û çerxa hucreyê û aktîvkirina bernameyên genên înflamatuar nîşan dan. Ev dane pêşniyar dikin ku dedîferanskirin, ku bi gelemperî piştî çandiniya demdirêj çêdibe, di bin şert û mercên MT de bi tevahî qels dibe (Wêneya Pêvek 8a,b). Lêkolîneke baldar a genên sarkomerê nîşan da ku tenê di bin şert û mercên MT de genên ku sarkomerê (Wêne 4f) û kanala îyonê (Wêne 9 a Pêvek) kod dikin têne parastin, û wan di bin şert û mercên Ctrl, TD, û MC de ji tepeserkirinê diparêzin. Ev dane nîşan didin ku bi tevlîheviyek ji teşwîqkirina mekanîkî û humoral (T3/Dex), transkrîptoma perçeya dil dikare piştî 12 rojan di kulturê de dişibihe perçeyên dil ên teze.
Ev dîtinên transkrîpsiyonê bi vê rastiyê ve têne piştgirî kirin ku yekparçeyiya avahiya kardiyomîyosîtên di beşên dil de di bin şert û mercên MT de ji bo 12 rojan çêtirîn tê parastin, wekî ku ji hêla connexin 43-a bêkêmasî û herêmî ve tê nîşandan (Wêne 5a). Wekî din, fîbroza di beşên dil de di bin şert û mercên MT de li gorî Ctrl û dişibihe beşên dil ên teze bi girîngî kêm bû (Wêne 5b). Ev dane nîşan didin ku têkeliya teşwîqkirina mekanîkî û dermankirina T3/Dex bi bandor avahiya dil di beşên dil de di kulturê de diparêze.
Wêneyên îmmunofluoresansa temsîlkar ên troponin-T (kesk), connexin 43 (sor), û DAPI (şîn) di beşên dil ên nû veqetandî (D0) de an jî di şert û mercên çandiniyê yên her çar beşên dil de ji bo 12 rojan hatine çandin (şerê pîvanê = 100 µm). Pîvandina yekparçeyiya avahiya tevna dil bi saya aqilê sûnî (n = 7 (D0 û D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC û D12 MT) perçe/kom ji berazên cuda, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; ####p < 0.0001 li gorî D0 û *p < 0.05, an ****p < 0.0001 li gorî D12 Ctrl). Pîvandina yekparçeyiya avahiya tevna dil bi saya aqilê sûnî (n = 7 (D0 û D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC û D12 MT) perçe/kom ji berazên cuda, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; #### p < 0.0001 li gorî D0 û *p < 0.05, an ****p < 0.0001 li gorî D12 Ctrl). Количественная оценка структурной целостности ткани сердца с помощью искусственного интеллекта (n = 7 (D0 и D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC и D12 MT) тестрезов/группу от разных свиней, #против#VA; 0,0001 bi sravneniyu bi D0 и *p < 0,05 или ****p < 0,0001 по sravneniyu bi D12 Ctrl). Pîvandina yekparçeyiya avahiya tevna dil bi karanîna zekaya sûnî (n = 7 (D0 û D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC û D12 MT) beş/kom ji berazên cuda, testa ANOVA ya yekalî hate kirin; #### p < 0.0001 li gorî D0 û *p < 0.05 an ****p < 0.0001 li gorî D12 Ctrl).对不同猪的心脏组织结构完整性（n = 7（D0 和D12 Ctrl）、5（D12 TD、D12 MC 和D12 MT）切片/组）进行人工智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 和0*p < 0.0001 与D0 和0*p <. 0.0001 与D12 Ctrl 相比）.对 不同 猪 的 心脏 结构 完整性 （n = 7 (d0 和 d12 ctrl） （5 （d12 td 、 d12 mc） d12 mc人工 智能量 化 进行 单向 单向 单向 测试 ； ########## p < 0.0001 与D0 和*p < 0****5. 0.0001 与D12 Ctrl 相比）.Pîvandina yekparçeyiya avahiya tevna dil bi karanîna zekaya sûnî li berazên cuda (n = 7 (D0 û D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC û D12 MT) beş/kom) bi testa ANOVA ya yekalî;#### p < 0,0001 по сравнению со D0 и *p < 0,05 или ****p < 0,0001 по сравнению со D12 Ctrl). #### p < 0.0001 li gorî D0 û *p < 0.05 an ****p < 0.0001 li gorî D12 Ctrl). b Wêneyên temsîlkar û hejmartin ji bo perçeyên dil ên bi boyaxa Masson a sêqromî hatine boyaxkirin (Scale bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, û D12 MC), 9 (D12 MT) perçe/kom ji berazên cuda, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; ####p < 0.0001 li gorî D0 û ***p < 0.001, an ****p < 0.0001 li gorî D12 Ctrl). b Wêneyên temsîlkar û hejmartin ji bo perçeyên dil ên bi boyaxa Masson a sêqromî hatine boyaxkirin (Scale bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, û D12 MC), 9 (D12 MT) perçe/kom ji berazên cuda, testa ANOVA ya yekalî tê kirin; ####p < 0.0001 li gorî D0 û ***p < 0.001, an ****p < 0.0001 li gorî D12 Ctrl). b Representativnыe isobrazenia and colyчественная оценка bi serdca, okraşennыh trihromnыh rengdêrên Massona (masstabnaya lineyka = 500 mkm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD2, D12 TD9) срезов/группу от разных свиней, выполняется односторонний тест ANOVA. b Wêneyên temsîlkar û hejmartina beşên dil ên bi boyaxa Masson a sêqromî (pîvana bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD û D12 MC), 9 (D12 MT) beş/kom ji berazên cuda, ANOVA-ya yekalî pêk anîn; ####p < 0.0001 li hember D0 û ***p < 0.001 an ****p < 0.0001 li hember D12 Ctrl). b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺= 500 μm））10（0D = Ctrl、D12 TD 和D12 MC），来自不同猪的9 个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差弉#p与D0 相比，***p < 0.001，或****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比）. b 用 masson 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 和 量化 （比例 尺 尺 尺 【 ） d = 500 μm） d12 ctrl 、 d12 td 和 d12 mc） 来自 不同 的 9 个 d12 mt 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片/组，进行单因素方差分析；0.#0#D；0.相比，***p < 0.001，或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）. b Reпрезентативные изображения и количественная оценка оценка на срдца, окрашенных трихром Massona (масштабная линейка = 500 mkm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD и D12 MC), / группы, один- способ ANOVA; b Wêneyên temsîlî û hejmartina beşên dil ên bi sê-rengiya Masson hatine boyaxkirin (pîvana bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD û D12 MC), 9 (D12 MT) beşên ji beraz/komên cuda, yek rêbaza ANOVA; ####p < 0.0001 li gorî D0, ***p < 0.001 an ****p < 0.0001 li gorî D12 Ctrl).Çîpên çewtiyê navînî ± devîasyona standard temsîl dikin.
Di dawiyê de, şiyana CTCM-ê ya teqlîdkirina hipertrofiya dil bi zêdekirina dirêjkirina tevna dil hate nirxandin. Di CTCM-ê de, zexta odeya hewayê ya herî zêde ji 80 mmHg zêde bû heta 80 mmHg. Art. (dirêjkirina normal) heta 140 mmHg Art. (Wêne 6a). Ev bi zêdebûna 32% di dirêjkirinê de re têkildar e (Wêne 6b), ku berê wekî rêjeya dirêjkirina têkildar a ku ji bo beşên dil hewce ye da ku dirêjahiya sarkomerê bigihîne ya ku di hîpertrofiyê de tê dîtin, hate nîşandan. Dirêjkirin û leza tevna dil di dema girjbûn û rihetbûnê de di şeş rojên çandiniyê de sabît ma (Wêne 6c). Tevna dil ji şert û mercên MT-ê şeş ​​rojan di bin dirêjkirina normal (MT (Normal)) an şert û mercên zêde dirêjkirinê (MT (OS)) de hate derbas kirin. Piştî çar rojan di çandiniyê de, nîşankera hîpertrofîk NT-ProBNP di navgînê de di bin şert û mercên MT (OS) de li gorî şert û mercên MT (normal) bi girîngî bilind bû (Wêne 7a). Herwiha, piştî şeş rojan çandiniyê, mezinahiya şaneyê di MT (OS) (Wêne 7b) de li gorî beşên dilê MT (normal) bi girîngî zêde bû. Wekî din, veguhastina navokî ya NFATC4 di tevnên zêde dirêjkirî de bi girîngî zêde bû (Wêne 7c). Ev encam pêşveçûna pêşverû ya ji nû ve avakirina patolojîk piştî hîperdirêjbûnê nîşan didin û piştgirî didin wê ramanê ku cîhaza CTCM dikare wekî platformek ji bo lêkolîna sînyala hîpertrofiya dil a bi dirêjkirinê ve hatî çêkirin were bikar anîn.
Şopên nûner ên zexta odeya hewayê, zexta odeya şilavê, û pîvandina tevgera tevnê piştrast dikin ku zexta odeyê zexta odeya şilavê diguherîne, û dibe sedema tevgerînek hevber a perçeya tevnê. b Xêzên rêjeya dirêjkirinê û rêjeya dirêjkirinê yên nûner ji bo beşên tevnê yên bi awayekî normal dirêjkirî (porteqalî) û zêde dirêjkirî (şîn). c Grafîka bar dema çerxê (n = 19 perçe ji bo her komê, ji berazên cûda), dema girjbûnê (n = 18-19 perçe ji bo her komê, ji berazên cûda), dema rihetbûnê (n = 19 perçe ji bo her komê, ji berazên cûda) nîşan dide, amplîtuda tevgera tevnê (n = 14 perçe/kom, ji berazên cûda), leza sîstolîk a herî bilind (n = 14 perçe/kom, ji berazên cûda) û rêjeya rihetbûna herî bilind (n = 14 (D0), 15 (D6)) beş/kom) ji berazên cûda), testa t ya Xwendekar a du-alî di tu parametreyê de ferqek girîng nîşan neda, ku nîşan dide ku ev parametre di 6 rojên çandiniyê de bi voltaja zêde sabît man. Barên çewtiyê navînî ± devîasyona standard temsîl dikin.
Pîvandina grafîka barî ya rêjeya NT-ProBNP di navgîna çandiniyê de ji perçeyên dil ên di bin şert û mercên dirêjkirina normal a MT (Norm) an zêde dirêjkirinê (OS) de (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, û D4 MTOS) perçe/kom ji berazên cûda, ANOVA-ya du-alî tê kirin; **p < 0.01 li gorî dirêjkirina normal). پێشنیاریکردنی گرافیکی بارییەکانی ترکیا نت-ProBNP لە مادیای ڕووناک ...Hîstografa hejmarî ya rêjeya NT-ProBNP di navgîna çandiniyê de ji perçeyên dil ên ku di bin şert û mercên dirêjkirina MT ya normal (norm) an zêdedirêjkirinê (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, û D4) perçe / kom ji berazên cûda de hatine çandin, analîza du-faktorî ya guherînê tê kirin;**p < 0,01 по сравнению со нормальным растяжением). **p < 0.01 li gorî dirêjkirina normal). a 在MT 正常拉伸(Norm) 或过度拉伸(OS) 条件下培养的心脏切片培养基中NT-ProBNP浓度的条形图量化（n = 4 (D2 MTNorm)、3（D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS）来自不同猪的切片/组，进行双向方差分析；**与正常拉伸相比，p < 0.01) Pîvanek hûrgelê ya NT-ProBNP di perçeyên dil de ku di bin şert û mercên dirêjbûna normal MT (Norm) an zêde dirêjkirina (OS) de hatine çandin (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS) ji cûda cûda猪的切片/组，可以双向方方发发动 **lihevkirina bi dirêjkirina normal, p <0,01).histogram Pîvandina hejmarî ya konsantrasyonên NT-ProBNP di perçeyên dil de ku di bin şert û mercên dirêjkirina MT ya normal (norm) an zêdedirêjkirinê (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) û D4 MTOS) perçe/kom ji berazên cûda hatine çandin, analîza du-alî ya guherînê;**p < 0,01 по сравнению со нормальным растяжением). **p < 0.01 li gorî dirêjkirina normal). b Wêneyên temsîlî ji bo perçeyên dil ên bi troponin-T û WGA hatine boyaxkirin (çep) û pîvandina mezinahiya şaneyê (rast) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) şaneyên/kom ji 10 perçeyên cuda ji berazên cuda, Testa t ya Xwendekarê Du-alî tê kirin; ****p < 0.0001 li gorî dirêjkirina normal). b Wêneyên temsîlî ji bo perçeyên dil ên bi troponin-T û WGA hatine boyaxkirin (çep) û pîvandina mezinahiya şaneyê (rast) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) şaneyên/kom ji 10 perçeyên cuda ji berazên cuda, Testa t ya Xwendekarê Du-alî tê kirin; ****p < 0.0001 li gorî dirêjkirina normal). b Representativnыe isobrazheniya srezov serdca, okrashennыh troponinom-T and AZP (sleva) and colychestvennogo diyardeyeka razmera kletok (sправa) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ji rez1 ve свиней, два- проводится хвостовой t-критерий Стьюдента ****p < 0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b Wêneyên temsîlî yên beşên dil ên ku bi troponin-T û AZP hatine boyaxkirin (çep) û pîvandina mezinahiya şaneyan (rast) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) şaneyên/kom ji 10 beşên cuda ji berazên cuda, testa t ya du-alî ya Student hate kirin; ****p < 0.0001 li gorî şaneya normal). b 用肌钙蛋白-T 和WGA（左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代表MTOS），来自不同猪的10 个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组，两进行有尾学生t检验；与正常拉伸相比，****p < 0.0001). b Wêneyên temsîlî yên perçeyên dil ên bi kalkareîn-T û WGA hatine boyaxkirin (çep) û mezinahiya şaneyê (rast) (n = 330 (D6 MTOS), 369 ji 10 perçeyên cuda (D6 MTNorm)) Şane/mîkrofon, testa dirêjkirina normal a bi dirêjkirina normal re; li gorî dirêjkirina normal, ****p < 0.0001). b Reпрезентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) и количественная оценка размера клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm cuda cuda) из 10 Клетки/группа, двусторонние критерий Стьюдента ****p < 0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b Wêneyên temsîlî yên beşên dil ên ku bi troponin-T û AZP hatine boyaxkirin (çep) û pîvandina mezinahiya şaneyê (rast) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ji 10 beşên cuda ji berazên cuda) Şane/kom, pîvana du-alî ya Student's t; ****p < 0.0001 li gorî şaneya normal). c Wêneyên temsîlkar ji bo perçeyên dil ên MTOS ên roja 0 û roja 6-an ên ku ji bo troponîn-T û NFATC4-ê îmûnetîketkirî ne û pîvandina veguhastina NFATC4-ê bo navokên CM-an (n = 4 (D0), 3 (MTOS D6) perçe/kom ji berazên cûda, Testa t-ya Xwendekarê Du-alî tê kirin; *p < 0.05). c Wêneyên temsîlkar ji bo perçeyên dil ên MTOS ên roja 0 û roja 6-an ên ku ji bo troponîn-T û NFATC4-ê hatine îmûnetîketkirin û pîvandina veguhastina NFATC4-ê bo navokên CM-an (n = 4 (D0), 3 (MTOS D6) perçe/kom ji berazên cûda, Testa t-ya Xwendekarê ya Du-alî hate kirin; *p < 0.05). c. срезов/группу от разных свиней , выполняется двусторонний t-критерий Стьюдента *p < 0,05). c Wêneyên temsîlkar ji bo beşên dil di rojên 0 û 6 MTOS de, ku ji bo troponîn-T û NFATC4 îmûno-etîketkirî ne, û pîvandina veguhastina NFATC4 di navika şaneyên kavernoz de (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) perçe/kom ji berazên cûda) testa t-ya du-alî ya Xwendekar pêk anîn; *p < 0.05). c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4 免疫标记的第0 天和第6 天MTOS心脏切片的代表性图像，以及来自不同猪的NFATC4 易位至CM 细胞核的量化 (4（0D)切片/组, 进行双尾学生t 检验；*p < 0.05)". c Wêneyên nûnerê nîşankirina calcanin-T û NFATC4 第0天和第6天MTOS perçeyên dil, û NFATC4 ji nucleya hucreya NFATC4 cuda 易位至CM 的 mîqdara化 (n = 4 (D6MTOS),时间双尾学生et 电影；*p < 0,05). c Репрезентативные изображения срезов сердца MTOS на 0 и 6 ден за иммуномаркировки тропонино-Т и NFATC4 и kolîчественная оценка транслокации NFATC4 во ядра CM от разных свијней (n = 4, 4 (D6-D0), хвостатый t-критерий Стьюдента *p < 0,05). c Wêneyên temsîlkar ên perçeyên dilê MTOS di roja 0 û 6an de ji bo nîşankirina îmmunolojîk a troponîn-T û NFATC4 û pîvandina veguhastina NFATC4 di navika CM de ji berazan cuda (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) perçe/kom, du-alî -krîtera t ya Xwendekar; *p < 0.05).Çewtiya barên navînî ± devîasyona standard temsîl dikin.
Lêkolîna kardiovaskuler a wergerî modelên şaneyî hewce dike ku hawîrdora dil bi rastî dubare dikin. Di vê lêkolînê de, amûrek CTCM hate pêşve xistin û taybetmendîkirin ku dikare beşên ultra zirav ên dil teşwîq bike. Sîstema CTCM teşwîqkirina elektromekanîkî ya bi awayekî fîzyolojîkî senkronîzekirî û dewlemendkirina şilava T3 û Dex vedihewîne. Dema ku beşên dilê berazan bi van faktoran re rû bi rû man, jiyanbûna wan, yekparçeyiya avahîsaziyê, çalakiya metabolîk û îfadeya transkrîpsiyonê piştî 12 rojan çandiniyê wekî di tevna dil a teze de man. Wekî din, dirêjkirina zêde ya tevna dil dikare bibe sedema hipertrofiya dil ji ber hîperdirêjkirinê. Bi tevahî, ev encam rola krîtîk a şert û mercên çandina fîzyolojîk di parastina fenotipek dil a normal de piştgirî dikin û platformek ji bo ceribandina dermanan peyda dikin.
Gelek faktor beşdarî afirandina hawîrdorek çêtirîn ji bo kar û domandina jiyana kardiyomîyosîtan dibin. Ya herî eşkere ji van faktoran bi (1) têkiliyên navbera hucreyan, (2) teşwîqkirina elektromekanîkî, (3) faktorên humoral, û (4) substratên metabolîk ve girêdayî ne. Têkiliyên fîzyolojîk ên hucre-bi-hucre hewceyê torên sê-alî yên tevlihev ên gelek celebên hucreyan in ku ji hêla matrîksek derveyî hucreyê ve têne piştgirî kirin. Têkiliyên hucreyî yên tevlihev ên weha dijwar in ku di vitro de bi hev-çandiniya celebên hucreyên ferdî ji nû ve werin çêkirin, lê dikarin bi hêsanî bi karanîna xwezaya organotîpîk a beşên dil werin bidestxistin.
Dirêjkirina mekanîkî û teşwîqkirina elektrîkî ya kardiyomîyosîtan ji bo parastina fenotipa dil girîng in33,34,35. Her çend teşwîqkirina mekanîkî ji bo şertkirin û gihîştina hiPSC-CM bi berfirehî hatiye bikar anîn jî, çend lêkolînên elegant vê dawiyê hewl dane ku teşwîqkirina mekanîkî ya perçeyên dil di kulturê de bi karanîna barkirina yekalî biceribînin. Ev lêkolîn nîşan didin ku barkirina mekanîkî ya yekalî ya 2D di dema kulturê de bandorek erênî li ser fenotipa dil dike. Di van lêkolînan de, beşên dil an bi hêzên kişandina îzometrîk17, barkirina oksotonîk a xêzik18 hatine barkirin, an jî çerxa dil bi karanîna bersiva veguhezkarê hêzê û ajokarên tansiyonê ji nû ve hatiye afirandin. Lêbelê, ev rêbaz dirêjkirina tevna yekalî bêyî optimîzasyona jîngehê bikar tînin, ku di encamê de gelek genên dil têne tepeserkirin an jî zêde îfadeya genên ku bi bersivên dirêjkirina anormal ve girêdayî ne. CTCM-ya ku li vir tê vegotin teşwîqek elektromekanîkî ya 3D peyda dike ku di warê dema çerxê û dirêjkirina fîzyolojîk de çerxa dil a xwezayî dişibihe (25% dirêjkirin, 40% sîstol, 60% dîastol, û 72 lêdan di hûrdemê de). Her çend ev teşwîqkirina mekanîkî ya sê-alî bi tena serê xwe ji bo parastina yekparçeyiya tevnê têrê nake jî, tevlîheviyek ji teşwîqkirina humoral û mekanîkî bi karanîna T3/Dex hewce ye da ku jiyan, fonksiyon û yekparçeyiya tevnê bi awayekî têrker were parastin.
Faktorên humoral di modûlkirina fenotipa dilê mezinan de roleke girîng dilîzin. Ev yek di lêkolînên HiPS-CM de hate destnîşankirin ku tê de T3 û Dex li medyaya çandî hatin zêdekirin da ku gihîştina hucreyan bileztir bikin. T3 dikare bandorê li veguhastina asîdên amînî, şekir û kalsiyûmê li seranserê membranên hucreyan bike36. Wekî din, T3 derbirîna MHC-α û kêmkirina MHC-β pêş dixe, avakirina mîyofîbrîlên bilez di kardiyomîyosîtên gihîştî de li gorî mîyofîbrîlên hêdî di CM-ya fetusê de pêş dixe. Kêmasiya T3 di nexweşên hîpotîroîdê de dibe sedema windabûna bendên mîyofîbrîlar û rêjeya kêmbûna pêşkeftina tonê37. Dex li ser reseptorên glukokortîkoîd tevdigere û hatiye nîşandan ku girêbesta mîyokardê di dilên perfuzkirî yên îzolekirî de zêde dike; 38 tê texmîn kirin ku ev başbûn bi bandora li ser ketina ji hêla depoya kalsiyûmê ve (SOCE) ve girêdayî ye 39,40. Wekî din, Dex bi reseptorên xwe ve girêdide, dibe sedema bersivek fireh a nav hucreyê ku fonksiyona parastinê û iltîhabê tepeser dike30.
Encamên me nîşan didin ku teşwîqa mekanîkî ya fîzîkî (MS) performansa giştî ya çandê li gorî Ctrl baştir kir, lê di 12 rojan de di çandê de nekarî zindîbûn, yekparçeyiya avahî û îfadeya dil biparêze. Li gorî Ctrl, zêdekirina T3 û Dex li çandên CTCM (MT) zindîbûn baştir kir û profîlên transkrîpsiyonê, yekparçeyiya avahî û çalakiya metabolîk a wekhev bi tevna dil a teze re ji bo 12 rojan parast. Wekî din, bi kontrolkirina asta dirêjkirina tevnê, modelek hîpertrofiya dil a bi hîperextensionê ve hatî çêkirin bi karanîna STCM hate afirandin, ku pirrengiya pergala STCM nîşan dide. Divê were zanîn ku her çend ji nû ve avakirina dil û fîbrozê bi gelemperî organên bêkêmasî vedihewîne ku hucreyên wan ên di gera xwînê de dikarin sîtokînên guncan û her weha fagosîtoz û faktorên din ên ji nû ve avakirina peyda bikin jî, beşên dil hîn jî dikarin pêvajoya fîbrotîk di bersiva stres û trawmayê de teqlîd bikin. Ev berê di vê modela perçeya dil de hatiye nirxandin. Divê were zanîn ku parametreyên CTCM dikarin bi guhertina zext/amplîtuda elektrîkê û frekansê werin modul kirin da ku gelek şert û mercan wekî takîkardî, bradîkardî û piştgiriya gera mekanîkî (dilê bê barkirina mekanîkî) simul bikin. Ev yek pergalê ji bo ceribandina dermanan dike derûdora navîn. Şîyana CTCM-ê ya modelkirina hipertrofiya dil a ji ber zêdewestandinê rê li ber ceribandina vê pergalê ji bo terapiya kesane vedike. Di encamê de, lêkolîna heyî nîşan dide ku dirêjkirina mekanîkî û teşwîqkirina humoral ji bo parastina çanda beşên tevna dil girîng in.
Her çend daneyên ku li vir hatine pêşkêş kirin nîşan didin ku CTCM platformek pir sozdar e ji bo modelkirina mîyokarda saxlem, ev rêbaza çandiniyê hin sînorkirin hene. Sînorkirina sereke ya çandiniya CTCM ew e ku ew stresên mekanîkî yên dînamîk ên domdar li ser perçeyan ferz dike, ku ev yek rê li ber şiyana şopandina çalak a girjbûna perçeyên dil di her çerxê de digire. Wekî din, ji ber mezinahiya piçûk a beşên dil (7 mm), şiyana nirxandina fonksiyona sîstolîk li derveyî pergalên çandiniyê bi karanîna sensorên hêzê yên kevneşopî sînorkirî ye. Di destnivîsa heyî de, em bi nirxandina voltaja optîkî wekî nîşaneyek fonksiyona girjbûnê vê sînorkirinê qismî derbas dikin. Lêbelê, ev sînorkirin dê hewceyê xebata bêtir be û dibe ku di pêşerojê de bi danasîna rêbazên ji bo çavdêriya optîkî ya fonksiyona perçeyên dil di çandiniyê de, wekî nexşeya optîkî bi karanîna kalsiyûm û boyaxên hesas ên voltaja, were çareser kirin. Sînorkirinek din a CTCM ew e ku modela xebatê stresa fîzyolojîk (pêşbarkirin û piştîbarkirin) manîpule nake. Di CTCM de, zext di aliyên berevajî de hate çêkirin da ku 25% dirêjkirina fîzyolojîk di diyastolê (dirêjkirina tevahî) û sîstolê (dirêjahiya girjbûnê di dema teşwîqkirina elektrîkê de) di tevnên pir mezin de hilberîne. Ev sînorkirin divê di sêwiranên CTCM yên pêşerojê de bi zexta têrker li ser tevna dil ji her du aliyan ve û bi sepandina têkiliyên zext-qebareyê yên rast ên ku di odeyên dil de çêdibin, were rakirin.
Nûjenkirina ji ber dirêjkirina zêde ya ku di vê destnivîsê de hatî ragihandin bi tenê teqlîdkirina sînyalên dirêjkirina zêde ya hîpertrofîk ve sînorkirî ye. Bi vî rengî, ev model dikare di lêkolîna sînyalên hîpertrofîk ên ji ber dirêjkirinê ve bêyî hewcedariya faktorên humoral an neural (ku di vê pergalê de tune ne) de bibe alîkar. Ji bo zêdekirina pirjimariya CTCM-ê lêkolînên din hewce ne, mînakî, hev-çandin bi hucreyên parastinê re, faktorên humoral ên plazmaya gerok, û înnervasyon dema ku hev-çandin bi hucreyên neuronal re dê îhtîmalên modelkirina nexweşiyê bi CTCM-ê re baştir bike.
Di vê lêkolînê de sêzdeh beraz hatin bikaranîn. Hemû prosedurên heywanan li gorî rêbernameyên sazûmanî hatin kirin û ji hêla Komîteya Lênihêrîn û Bikaranîna Heywanên Sazûmanî ya Zanîngeha Louisville ve hatin pejirandin. Kevana aortê hate kelepçekirin û dil bi 1 lître kardioplegiya sterîl (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL heparin, pH heta 7.4) hate perfuzkirin; Dil heta ku li ser qeşayê hatin veguhastin laboratûarê, ku bi gelemperî <10 hûrdem e, di çareseriya kardioplegîk a sar a bi qeşayê de hatin parastin. Dil heta ku li ser qeşayê hatin veguhastin laboratûarê, ku bi gelemperî <10 hûrdem e, di çareseriya kardioplegîk a sar a bi qeşayê de hatin parastin. Serdca хранили в ледяном кардиоплегическом blovawe to transportirovki di laboratorên lüdu de, что обычно занимает <10 мин. Dil heta ku li ser qeşayê bo laboratuwarê hatin veguhastin, ku bi gelemperî kêmtir ji 10 hûrdeman digire, di çareseriya kardioplegîk a sar a bi qeşayê de hatin hilanîn.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钒将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钒 Derжиte Serdca во ледяной кардиоплегии до транспортировки во лабораторию на льду, обычно <10 мин. Dil li ser kardioplegiya qeşayê bihêlin heta ku werin veguhastin laboratûvarê li ser qeşayê, bi gelemperî <10 hûrdeman.
Amûra CTCM di nermalava sêwirana bi alîkariya komputerê (CAD) ya SolidWorks de hate pêşve xistin. Odeyên çandiniyê, dabeşker û odeyên hewayê ji plastîka akrîlîk a zelal a CNC hatine çêkirin. Xeleka piştgir a bi qûtra 7 mm di navendê de ji polîetîleneya dendika bilind (HDPE) hatiye çêkirin û xelekek o-ring heye da ku xeleka o-ring a silîkonî ya ku ji bo morkirina medyayê li binê wê tê bikar anîn bicîh bike. Membranek silîkonî ya zirav odeya çandiniyê ji plakaya veqetandinê vediqetîne. Membrana silîkonî ji pelê silîkonî ya 0.02″ stûr bi lazerê hatiye birîn û hişkiya wê 35A ye. Gasketên silîkonî yên jêrîn û jorîn ji pelê silîkonî ya 1/16″ stûr bi lazerê hatine birîn û hişkiya wan 50A ye. Vîd û gwîzên baskê yên pola zengarnegir ên 316L ji bo girêdana blokê û çêkirina mohrek hewayî têne bikar anîn.
Qerta çerxa çapkirî (PCB) ya taybet ji bo entegrekirina bi sîstema C-PACE-EM re hatiye sêwirandin. Soketên girêdana makîneya Swîsreyî yên li ser PCB bi têlên sifir ên zîvînkirî û pêçên bronz ên 0-60 ên ku di elektrodan de hatine pêçandin, bi elektrodên grafît ve girêdayî ne. Qerta çerxa çapkirî di bergê çapkerê 3D de tê danîn.
Amûra CTCM ji hêla aktûatorek pneumatîk a bernamekirî (PPD) ve tê kontrol kirin ku zextek gera xwînê ya kontrolkirî dişibihe çerxek dil diafirîne. Her ku zexta di hundurê odeya hewayê de zêde dibe, membrana silîkonê ya nerm ber bi jor ve berfireh dibe, navgîna di bin cihê tevnê de neçar dike. Dûv re qada tevnê dê bi vê derxistina şilavê were dirêj kirin, ku berfirehbûna fîzyolojîk a dil di dema dîastolê de teqlîd dike. Di lûtkeya rihetbûnê de, teşwîqa elektrîkê bi rêya elektrodên grafîtê hate sepandin, ku zexta di odeya hewayê de kêm kir û bû sedema girjbûna beşên tevnê. Di hundurê lûleyê de valvek hemostatîk bi sensorek zextê heye da ku zexta di pergala hewayê de tespît bike. Zeexta ku ji hêla sensora zextê ve tê hîskirin li ser berhevkarek daneyan a ku bi laptopê ve girêdayî ye tê sepandin. Ev dihêle ku çavdêriya domdar a zexta di hundurê odeya gazê de were kirin. Dema ku zexta odeya herî zêde gihîşt (standard 80 mmHg, 140 mmHg OS), amûra bidestxistina daneyan hate ferman kirin ku sînyalek ji pergala C-PACE-EM re bişîne da ku sînyalek voltaja du-qonaxî ji bo 2 ms çêbike, ku li ser 4 V hatî danîn.
Beşên dil hatin wergirtin û şert û mercên çandiniyê di 6 qulan de wiha hatin kirin: Dilên berhevkirî ji konteynirê veguhastinê veguhezînin tepsiyeke ku tê de kardioplegiya sar (4°C) heye. Ventrikula çepê bi kêrek sterîl hate veqetandin û perçeyên 1-2 cm3 hatin birîn. Ev blokên tevnê bi pêvekên tevnê ve bi zeliqê tevnê ve hatin girêdan û di nav hemamek tevnê ya mîkrotom a lerzok de hatin danîn ku tê de çareseriya Tyrode heye û bi berdewamî oksîjenkirî bûn (3 g/L 2,3-butanedione monooxime (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g). ), 6 mM KCl (0.447 g), 10 mM D-glukoz (1.86 g), 10 mM HEPES (2.38 g), 1 mM MgCl2 (1 ml çareseriya 1 M), 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml çareseriya 1 M), heta 1 L ddH2O). Mîkrotoma lerzok ji bo birîna perçeyên bi stûriya 300 µm bi frekanseke 80 Hz, amplîtuda lerzîna horizontî ya 2 mm, û rêjeya pêşveçûnê ya 0.03 mm/s hat danîn. Serşoka tevnê bi qeşayê hat dorpêçkirin da ku çareserî sar bimîne û germahî li 4°C hat parastin. Beşên tevnê ji serşoka mîkrotomê veguhezînin serşokeke înkubasyonê ku çareseriya Tyrode ya bi berdewamî oksîjenkirî li ser qeşayê tê de heye heta ku beşên têr ji bo yek plakaya çandiniyê werin bidestxistin. Ji bo çandinên transwell, beşên tevnê bi piştgirên polîuretanê yên sterîl ên 6 mm fireh ve hatin girêdan û di 6 ml navgîniya çêtirînkirî de hatin danîn (navgîna 199, 1x pêveka ITS, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-alkalîn û 2X antîbiyotîk-antîfungal). Stimulasyona elektrîkê (10 V, frekans 1.2 Hz) bi rêya C-Pace li beşên tevnê hat sepandin. Ji bo şert û mercên TD, T3 û Dex-a teze bi 100 nM û 1 μM di her guheztina navîn de hatin zêdekirin. Berî guhertinê, navgîn rojê 3 caran bi oksîjenê tê têrkirin. Beşên tevnan di înkubatorekê de di 37°C û %5 CO2 de hatin çandin.
Ji bo kulturên CTCM, beşên tevnê li ser çapkerek 3D ya taybetî di kaseyek Petri de ku çareseriya Tyrode ya guhertî tê de hebû, hatin danîn. Amûr ji bo zêdekirina mezinahiya perçeya dil bi rêjeya 25% ji rûbera zengila piştgirîyê hatiye çêkirin. Ev yek ji bo wê yekê tê kirin ku beşên dil piştî veguheztina ji çareseriya Tyrode bo navgînê û di dema dîastolê de dirêj nebin. Bi karanîna çîmentoya hîstoakrîlîk, beşên bi stûriya 300 µm li ser zengilek piştgirîyê ya bi qûtra 7 mm hatin sabît kirin. Piştî girêdana beşên tevnê bi zengila piştgirîyê, beşên tevnê yên zêde jê bikin û beşên tevnê yên pêvekirî dîsa têxin nav hemama çareseriya Tyrode ya li ser qeşayê (4°C) heta ku beşên têra xwe ji bo yek amûrê werin amadekirin. Dema pêvajoyê ya tevahî ji bo hemî amûran divê ji 2 demjimêran derbas nebe. Piştî ku 6 beşên tevnê bi zengilên xwe yên piştgirîyê ve hatin girêdan, amûra CTCM hate kom kirin. Odeya kulturê ya CTCM bi 21 ml navgîna pêş-oksîjenkirî tê dagirtin. Beşên tevnê veguhezînin odeya kulturê û bi baldarî bi pîpetekê her bilbilên hewayê derxînin. Beşa tevnê paşê tê nav qulikê û bi nermî li cihê xwe tê pêlkirin. Di dawiyê de, qapaxa elektrodê li ser cîhazê tê danîn û cîhazê vediguhezînin înkubatorê. Piştre CTCM bi lûleya hewayê û pergala C-PACE-EM ve girêdin. Aktîvatora pneumatîk vedike û valva hewayê CTCM vedike. Pergala C-PACE-EM ji bo radestkirina 4 V bi 1.2 Hz di dema pacing du-qonaxî de ji bo 2 ms hate mîheng kirin. Navgîn rojê du caran hate guhertin û elektrod rojê carekê hatin guhertin da ku ji kombûna grafîtê li ser elektrodan dûr bikevin. Ger hewce be, beşên tevnê dikarin ji bîrên xwe yên çandiniyê werin derxistin da ku her bilbilên hewayê yên ku dibe ku di bin wan de ketibin derxînin. Ji bo şert û mercên dermankirina MT, T3/Dex bi her guheztina navînê re bi 100 nM T3 û 1 μM Dex teze hate zêdekirin. Amûrên CTCM di înkubatorê de di 37°C û 5% CO2 de hatin çandin.
Ji bo bidestxistina rêyên dirêjkirî yên perçeyên dil, sîstemeke kamerayê ya taybet hate pêşxistin. Kamerayeke SLR (Canon Rebel T7i, Canon, Tokyo, Japonya) bi lenzeke makro ya Navitar Zoom 7000 18-108mm (Navitar, San Francisco, CA) hate bikaranîn. Piştî guhertina navgînê bi navgîneke teze, dîtbarîkirin di germahiya odeyê de hate kirin. Kamera di goşeyeke 51° de tê bicihkirin û vîdyo bi 30 çarçove di çirkeyê de tê tomarkirin. Pêşî, nermalava çavkaniya vekirî (MUSCLEMOTION43) bi Image-J re hate bikaranîn da ku tevgera perçeyên dil bipîve. Mask bi karanîna MATLAB (MathWorks, Natick, MA, DYA) hate afirandin da ku herêmên balkêş ji bo perçeyên dilê lêdanê destnîşan bike da ku ji deng dûr bikeve. Maskên bi destan hatine parçekirin li ser hemî wêneyan di rêzeya çarçoveyekê de têne sepandin û dûv re ji pêveka MUSCLEMOTION re têne şandin. Tevgera Muscle şiddeta navînî ya pîkselan di her çarçoveyekê de bikar tîne da ku tevgera wê ya li gorî çarçoveya referansê bipîve. Daneyên hatin tomarkirin, fîltrekirin û ji bo bipîvekirina dema çerxê û nirxandina dirêjkirina tevnê di dema çerxa dil de hatin bikar anîn. Vîdyoya tomarkirî bi karanîna fîlterek dîjîtal a qonaxa sifir a rêza yekem hate pêvajokirin. Ji bo pîvandina dirêjkirina tevnê (lûtke-bi-lûtke), analîza lûtke-bi-lûtke hate kirin da ku di navbera lûtke û kêmbûnên di sînyala tomarkirî de were cûdakirin. Wekî din, ji bo rakirina dûrketina sînyalê, detrending bi karanîna polînomiyalek rêza 6-an tê kirin. Koda bernameyê di MATLAB-ê de hate pêşve xistin da ku tevgera tevnê ya gerdûnî, dema çerxê, dema rihetbûnê û dema girjbûnê were destnîşankirin (Koda Bernameya Pêvek 44).
Ji bo analîza zorê, bi karanîna heman vîdyoyên ku ji bo nirxandina dirêjkirina mekanîkî hatine çêkirin, me pêşî du wêneyên ku lûtkeyên tevgerê (xalên tevgerê yên herî bilind (jorîn) û herî nizm (jêrîn)) li gorî nermalava MUSCLEMOTION temsîl dikin şopand. Piştre me herêmên tevnê parçe kirin û celebek algorîtmaya siyakirinê li ser tevnê parçekirî sepandin (Wêneya Pêvek 2a). Dûv re tevnê parçekirî li deh binrûyan hate dabeş kirin, û zexta li ser her rûyekî bi karanîna hevkêşeya jêrîn hate hesab kirin: Zor = (Sup-Sdown)/Sdown, ku Sup û Sdown dûrbûna şeklê ji siyên jorîn û jêrîn ên qumaşê ne, bi rêzê ve (Wêneya Pêvek .2b).
Beşên dil di nav %4 paraformaldeîd de ji bo 48 saetan hatin sabît kirin. Tevnên sabît di nav %10 û %20 sukroz de ji bo 1 saetê hatin zuwakirin, dû re jî tevahiya şevê di nav %30 sukroz de hatin zuwakirin. Piştre beş di nav pêkhateya germahiya birrîna çêtirîn (pêkhateya OCT) de hatin bicihkirin û hêdî hêdî di hemama îzopentan/qeşaya hişk de hatin cemidandin. Blokên bicihkirina OCT heta veqetandinê di -80°C de hilînin. Slayt wekî beşên bi qalindahiya 8 μm hatin amadekirin.
Ji bo rakirina OCT ji beşên dil, slaytan li ser blokek germkirinê di 95°C de 5 deqîqeyan germ bikin. 1 ml PBS li her slaytê zêde bikin û 30 deqîqeyan di germahiya odeyê de înkubasyonê bikin, dûv re bi danîna 0.1% Triton-X di PBS de 15 deqîqeyan di germahiya odeyê de beşan tijî bikin. Ji bo pêşîgirtina li girêdana antîkorên ne-taybetî bi nimûneyê re, 1 ml çareseriya BSA ya 3% li slaytan zêde bikin û 1 saetê di germahiya odeyê de înkubasyonê bikin. Dû re BSA hate derxistin û slayt bi PBS hatin şuştin. Her nimûneyek bi qelemekê nîşan bikin. Antîkorên seretayî (di nav 1% BSA de bi rêjeya 1:200 şilkirî) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) û troponin-T (Thermo Scientific; #MA5-12960) di nav 90 hûrdeman de hatin zêdekirin, paşê antîkorên duyemîn (di nav 1% BSA de bi rêjeya 1:200 şilkirî) li dijî mişk Alexa Fluor 488 (Thermo Scientific; #A16079), li dijî kêvroşk Alexa Fluor 594 (Thermo Scientific; #T6391) ji bo 90 hûrdemên din hatin zêdekirin. 3 caran bi PBS hate şuştin. Ji bo cudakirina boyaxkirina hedef ji paşxaneyê, me tenê antîkorê duyemîn wekî kontrol bikar anî. Di dawiyê de, boyaxa navokî ya DAPI hate zêdekirin û slayt di nav vectashield (Vector Laboratories) de hatin danîn û bi boyaxa neynûkan hatin mohrkirin. -x mezinkirin) û mîkroskopa Keyence bi mezinkirina 40x.
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) bi 5 μg/ml di PBS de ji bo boyaxkirina WGA hate bikar anîn û 30 deqîqeyan di germahiya odeyê de li ser beşên sabît hate sepandin. Piştre slayt bi PBS hatin şuştin û Sudan black li her slaytê hate zêdekirin û 30 deqîqeyan hatin înkubasyonkirin. Piştre slayt bi PBS hatin şuştin û navgîniya bicihkirina vectashield hate zêdekirin. Slayt li ser mîkroskopa Keyence bi mezinkirina 40x hatin xuyang kirin.
OCT wekî ku li jor hatî vegotin ji nimûneyan hat derxistin. Piştî derxistina OCT, slaytan tevahiya şevê di çareseriya Bouin de bihêlin. Piştre slayt bi ava distîlekirî 1 saet hatin şuştin û dûv re 10 deqîqeyan di çareseriya Bibrich a aloe acid fuchsin de hatin danîn. Piştre slayt bi ava distîlekirî hatin şuştin û 10 deqîqeyan di çareseriya 5% fosfomolîbdenum/5% asîda fosfotungstîk de hatin danîn. Bêyî şuştinê, slaytan rasterast 15 deqîqeyan veguhezînin çareseriya şîn a anîlînê. Piştre slayt bi ava distîlekirî hatin şuştin û 2 deqîqeyan di çareseriya 1% asîda asetîk de hatin danîn. Slayt di etanolê 200 N de hatin hişk kirin û veguheztin ksîlînê. Slaytên boyaxkirî bi mîkroskopa Keyence bi objektîfek 10x hatin xuyang kirin. Rêjeya qada fîbrozê bi karanîna nermalava Keyence Analyzer hate hejmartin.
Ceribandina Jiyana Hucreyê ya CyQUANT™ MTT (Invitrogen, Carlsbad, CA), hejmara katalogê V13154, li gorî protokola çêker bi hin guhertinan. Bi taybetî, ji bo misogerkirina mezinahiya tevnê ya yekreng di dema analîza MTT de, qulikek neştergeriyê ya bi qûtra 6 mm hate bikar anîn. Tevn li gorî protokola çêker bi awayekî ferdî di qulên plakaya 12-qulî de hatin danîn ku substrata MTT tê de hebû. Beş di 37°C de ji bo 3 saetan têne înkubasyon kirin û tevna zindî substrata MTT metabolîze dike da ku pêkhateyek formazanê binefşî çêbike. Çareseriya MTT bi 1 ml DMSO biguherînin û di 37°C de ji bo 15 hûrdeman înkubasyon bikin da ku formazanê binefşî ji beşên dil derxînin. Nimûne di plakayên binê zelal ên 96-qulî de bi rêjeya 1:10 di DMSO de hatin şilkirin û şîdeta rengê binefşî di 570 nm de bi karanîna xwendevanek plakaya Cytation (BioTek) hate pîvandin. Xwendin li gorî giraniya her perçeyek dil hatin normalîzekirin.
Medyaya perçeyên dil bi medyaya ku 1 μCi/ml [5-3H]-glukoz (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) ji bo ceribandina bikaranîna glukozê wekî ku berê hatiye vegotin, hat guhertin. Piştî 4 demjimêran înkubasyonê, 100 µl medyayê li lûleyek mîkrosantrifûjê ya vekirî ku 100 µl 0.2 N HCl tê de heye zêde bikin. Dûv re lûle di lûleyek sîntilasyonê de ku 500 μl dH2O tê de heye hat danîn da ku [3H]2O ji bo 72 demjimêran di 37°C de buhar bibe. Dûv re lûleya mîkrosantrifûjê ji lûleya sîntilasyonê derxînin û 10 ml şileya sîntilasyonê lê zêde bikin. Jimartinên sîntilasyonê bi karanîna analîzkerek sîntilasyona şile ya Tri-Carb 2900TR (Packard Bioscience Company, Meriden, CT, USA) hatin kirin. Dû re bikaranîna glukozê bi berçavgirtina çalakiya taybetî ya glukoza [5-3H], hevsengiya netemam û paşxaneya wê, şilbûna [5-3H]- bo glukoza bê nîşankirin, û karîgeriya jimêra sîntilasyonê hate hesabkirin. Daneyên li gorî giraniya beşên dil têne normalîzekirin.
Piştî homojenîzekirina tevnan di Trizol de, RNA ji beşên dil bi karanîna Qiagen miRNeasy Micro Kit #210874 li gorî protokola çêker hate veqetandin. Amadekirina pirtûkxaneya RNAsec, rêzkirina û analîzkirina daneyan wiha hate kirin:
1 μg RNA ji bo her nimûneyê wekî materyalê destpêkê ji bo amadekirina pirtûkxaneya RNAyê hat bikar anîn. Pirtûkxaneyên rêzkirinê bi karanîna Kîta Amadekirina Pirtûkxaneya RNA ya NEBNext UltraTM ji bo Illumina (NEB, USA) li gorî pêşniyarên çêker hatin çêkirin, û kodên endeksê li rêzikên taybetmendiyê ji bo her nimûneyê hatin zêdekirin. Bi kurtasî, mRNA ji RNAya tevahî bi karanîna morîkên magnetîkî yên ku bi olîgonukleotîdên polî-T ve girêdayî ne, hat paqijkirin. Parçekirin bi karanîna katyonên duvalent di germahiya bilind de di NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer (5X) de tê kirin. cDNAya zincîra yekem bi karanîna primerên heksamer ên rasthatî û transkrîptaza berevajî ya M-MuLV (RNase H-) hat sentezkirin. Dûv re cDNAya zincîra duyemîn bi karanîna DNA polîmeraz I û RNase H tê sentezkirin. Zêdebûnên mayî bi çalakiya eksonukleaz/polîmeraz vediguherin serên qalind. Piştî adenîlasyona dawiya 3' ya perçeya DNAyê, Adaptorek NEBNext bi avahiyek halqeya porê pê ve tê girêdan da ku ji bo hîbrîdasyonê were amadekirin. Ji bo hilbijartina perçeyên cDNA yên bi dirêjahiya tercîhkirî 150-200 bp, perçeyên pirtûkxaneyê bi karanîna pergala AMPure XP (Beckman Coulter, Beverly, USA) hatin paqijkirin. Piştre, 3 μl USER Enzyme (NEB, USA) bi cDNA-ya bi mezinahiya bijartî ve girêdayî bi adapterekê ji bo 15 hûrdeman li 37°C û dûv re ji bo 5 hûrdeman li 95°C berî PCR-ê hat bikar anîn. Piştre PCR bi karanîna polîmeraza DNA-ya Phusion High-Fidelity, primerên PCR-ya gerdûnî, û primerên Index (X) hat kirin. Di dawiyê de, berhemên PCR hatin paqijkirin (sîstema AMPure XP) û kalîteya pirtûkxaneyê li ser pergala Agilent Bioanalyzer 2100 hat nirxandin. Pirtûkxaneya cDNA dûv re bi karanîna rêzkerek Novaseq hat rêzkirin. Pelên wêneyên xav ji Illumina bi karanîna CASAVA Base Calling veguherî xwendinên xav. Daneyên xav di pelên formata FASTQ(fq) de têne hilanîn ku rêzikên xwendinê û taybetmendiyên bingehîn ên têkildar dihewînin. HISAT2 hilbijêre da ku xwendinên rêzkirina fîltrekirî bi genoma referansê ya Sscrofa11.1 re li hev bike. Bi gelemperî, HISAT2 genomên her mezinahî piştgirî dike, tevî genomên ji 4 mîlyar bingehan mezintir, û nirxên xwerû ji bo piraniya parametreyan têne danîn. Xwendinên splicing ji daneyên RNA Seq dikarin bi karanîna HISAT2, pergala herî bilez a heyî, bi heman rastbûn an jî rastbûnek çêtir ji her rêbazek din, bi bandor werin hevrêz kirin.
Pirbûna transkrîptan rasterast asta îfadeya genan nîşan dide. Asta îfadeya genan bi pirbûna transkrîptan (hejmara rêzkirinê) ya bi genom an eksonan ve girêdayî tê nirxandin. Hejmara xwendinê bi astên îfadeya genan, dirêjahiya genan û kûrahiya rêzkirinê re rêjeyî ye. FPKM (perçeyên her hezar cotên bingehîn ên transkrîptên rêzkirî her milyon cotên bingehîn) hatin hesabkirin û nirxên P yên îfadeya cûda bi karanîna pakêta DESeq2 hatin destnîşankirin. Piştre me rêjeya kifşkirina derewîn (FDR) ji bo her nirxa P bi karanîna rêbaza Benjamini-Hochberg9 li ser bingeha fonksiyona R ya çêkirî "p.adjust" hesab kir.
RNAya ji beşên dil hatiye veqetandin bi karanîna tevliheviya SuperScript IV Vilo Master ji Thermo (Thermo, jimara katalogê 11756050) bi rêjeya 200 ng/μl veguherî cDNAyê. RT-PCRya hejmarî bi karanîna plakaya reaksiyonê ya şefaf a Microamp a 384-qulikî ya Applied Biosystems Endura Plate (Thermo, jimara katalogê 4483319) û adhesiveya optîkî ya mîkroamp (Thermo, jimara katalogê 4311971) hate kirin. Tevliheviya reaksiyonê ji 5 µl tevliheviya Taqman Fast Advanced Master (Thermo, jimara katalogê 4444557), 0.5 µl Taqman Primer û 3.5 µl H2O ya tevlihevkirî ji bo her qulikê pêk dihat. Çerxên qPCR yên standard hatin xebitandin û nirxên CT bi karanîna amûrek PCR ya demrast Quantstudio 5 ya Applied Biosystems (modula 384-qulikî; jimara hilberê A28135) hatin pîvandin. Prîmerên Taqman ji Thermo hatin kirîn (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss06868890_m1), ACTN1 (Ss01009508_mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss04245588_m1). Nirxên CT yên hemî nimûneyan li gorî gena paqijiyê GAPDH hatin normalîzekirin.
Berdana medyayê ya NT-ProBNP bi karanîna kîta NT-ProBNP (beraz) (Hejmara Katalogê MBS2086979, MyBioSource) li gorî protokola çêker hate nirxandin. Bi kurtasî, 250 µl ji her nimûne û standardê du caran li her qulikê hate zêdekirin. Di cih de piştî zêdekirina nimûneyê, 50 µl Reaktîfa Ceribandinê A li her qulikê zêde bikin. Plaqeyê bi nermî bihejînin û bi madeya morkirinê bigirin. Piştre tablet di 37°C de ji bo 1 saetê hatin înkubasyonkirin. Piştre çareseriyê bihelînin û qulikan 4 caran bi 350 µl çareseriya şuştinê ya 1X bişon, her carê çareseriya şuştinê ji bo 1-2 deqeyan înkubasyon bikin. Piştre 100 µl Reaktîfa Ceribandinê B li her qulikê zêde bikin û bi madeya morkirinê ya plakeyê bigirin. Tablet bi nermî hate hejandin û di 37°C de ji bo 30 deqeyan hate înkubasyonkirin. Çareserî bihelînin û qulikan 5 caran bi 350 µl çareseriya şuştinê ya 1X bişon. 90 µl çareseriya substratê li her qulikê zêde bikin û plakayê bigirin. Plakê di 37°C de ji bo 10-20 deqîqeyan înkubasyon bikin. 50 µl Çareseriya Stop li her qulikê zêde bikin. Plak tavilê bi karanîna xwendevanek plakaya Cytation (BioTek) ku li 450 nm hatî saz kirin hate pîvandin.
Analîzên hêzê hatin kirin da ku mezinahiyên komê werin hilbijartin ku dê ji bo tespîtkirina guhertina mutleq a 10% di parametreyê de bi rêjeya xeletiya Tîpa I ya 5% hêzê ji %80 zêdetir peyda bikin. Analîzên hêzê hatin kirin da ku mezinahiyên komê werin hilbijartin ku dê ji bo tespîtkirina guhertina mutleq a 10% di parametreyê de bi rêjeya xeletiya Tîpa I ya 5% hêzê ji %80 zêdetir peyda bikin. Analîzkirina îmkanên bi tevahî ji bo hilberandina grûpê, ku çapkirinê > 80% jêhatîbûn ji bo nûvekirinê 10% absolutnogo guherbarên parametra bi 5% demjimêrên cureyê I. Analîza hêzê hate kirin da ku mezinahiyên komê werin hilbijartin ku dê ji bo tespîtkirina 10% guherîna parametreya mutleq bi rêjeyek xeletiya Tîpa I ya 5% hêzê ji %80 zêdetir peyda bikin.进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I型错误率的组大小。进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I型错误率的组大小。 Ji bo vebijarkên cuda yên grûpên taybet ên ji bo hilberandina vebijarkan, ji bo 80% vebijarkên ji bo kêmasiya 10% absolutnogo guherbarên parametrov û 5% demjimêr ji bo cureyên I. Ji bo hilbijartina mezinahiyek komê ku dê ji bo tespîtkirina 10% guherîna parametreya mutleq û 5% rêjeya xeletiya tîpa I ji %80 hêzê zêdetir peyda bike, analîzek hêzê hate kirin.Beriya ceribandinê, beşên tevnê bi awayekî rasthatî hatin hilbijartin. Hemû analîz bê şert û merc bûn û nimûne tenê piştî analîzkirina hemû daneyan hatin deşîfrekirin. Ji bo pêkanîna hemû analîzên îstatîstîkî, nermalava GraphPad Prism (San Diego, CA) hat bikaranîn. Ji bo hemî îstatîstîkan, nirxên p di nirxên <0.05 de wekî girîng hatin hesibandin. Ji bo hemî îstatîstîkan, nirxên p-yê di nirxên <0.05 de wekî girîng hatin hesibandin. Dlya hemû statîstîkên p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Ji bo hemî îstatîstîkan, nirxên p-yê di nirxên <0.05 de wekî girîng hatin hesibandin.对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。 Dlya hemû statîstîkên p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Ji bo hemî îstatîstîkan, nirxên p-yê di nirxên <0.05 de wekî girîng hatin hesibandin.Testa t-ya Student a du-alî li ser daneyan bi tenê 2 berawirdkirinan hate kirin. ANOVA-ya yek-alî an du-alî ji bo destnîşankirina girîngiya di navbera gelek koman de hate bikar anîn. Dema ku testên post hoc têne kirin, sererastkirina Tukey ji bo hesabkirina gelek berawirdkirinan hate sepandin. Daneyên RNAsec dema hesabkirina FDR û p.adjust wekî ku di beşa Rêbazan de hatî vegotin, xwedî ramanên îstatîstîkî yên taybetî ne.
Ji bo bêtir agahdarî li ser sêwirana lêkolînê, li kurtasiya Nature Research Report a ku bi vê gotarê ve girêdayî ye binêre.