Faafetai mo le asiasi ile Nature.com.O le su'esu'ega o lo'o e fa'aogaina e fa'atapula'aina le lagolago a le CSS.Mo le poto sili ona lelei, matou te fautuaina oe e te faʻaogaina se suʻesuʻega fou (pe faʻamalo le Faiga Faʻatasi i Internet Explorer).I le taimi nei, ina ia mautinoa le faʻaauauina o le lagolago, matou te tuʻuina atu le saite e aunoa ma sitaili ma JavaScript.
O loʻo i ai le manaʻoga mo se faʻatuatuaina in vitro system e mafai ona toe faʻaleleia saʻo le siosiomaga faʻaletino o le fatu mo suʻega vailaʻau.O le fa'atapula'aina o le maua o faiga fa'aleaganu'u fatu o le tagata ua mafua ai ona le sa'o fa'auigaga o a'afiaga o vaila'au o le fatu.O iinei, ua matou atiaʻe ai se faʻataʻitaʻiga faʻaleaganuʻu fatu (CTCM) e faʻaosoina faʻamalosi fatu fatu ma faʻaosoina le faʻalauteleina o le tino i le taimi o le systolic ma le diastolic vaega o le taamilosaga o le fatu.Ina ua maeʻa le 12 aso o le aganuu, o lenei faiga na faʻaleleia atili ai le faʻaogaina o vaega o fatu, ae e leʻi faʻasaoina atoatoa lo latou faʻatonuga.O le mea lea, ina ua maeʻa suʻesuʻega mole mole laiti, na matou iloa ai o le faʻaopoopoga o le 100 nM triiodothyronine (T3) ma le 1 μM dexamethasone (Dex) i la matou auala na tausia ai le microstructure o vaega mo le 12 aso.I le tuʻufaʻatasia ma togafitiga T3 / Dex, o le CTCM system o loʻo tausia faʻamaumauga faʻaliliuga, faʻaogaina, gaioiga faʻasolosolo, ma le faʻatulagaina faʻamaoni i le tulaga tutusa e pei o fatu fatu fou mo 12 aso.E le gata i lea, o le tele o le faʻalauteleina o le fatu fatu i le aganuu e faʻaosoina ai le hypertrophic cardiac signaling, e maua ai faʻamaoniga mo le mafai e le CTCM ona faʻataʻitaʻiina tulaga hypertrophic faʻaosoina e le cardiac stretch.I le faaiuga, e mafai e le CTCM ona faʻataʻitaʻiina le physiology ma le pathophysiology o le fatu i le aganuu i taimi uumi, e mafai ai ona faʻamaonia le suʻesuʻeina o vailaʻau.
Aʻo leʻi faia suʻesuʻega faʻapitoa, e manaʻomia le faʻatuatuaina in vitro system e mafai ona toe gaosia saʻo le siosiomaga physiological o le fatu o le tagata.O ia faiga e tatau ona fa'ata'ita'i i suiga fa'ainisinia, ta'alili o le fatu, ma mea fa'aletino.O faʻataʻitaʻiga o manu e masani ona faʻaaogaina e fai ma faʻataʻitaʻiga suʻesuʻe mo le physiology cardiac ma faʻatapulaʻaina le faʻatuatuaina i le atagia o aʻafiaga o vailaʻau i le fatu o le tagata1,2.Mulimuli ane, o le Ideal Cardiac Tissue Culture Experimental Model (CTCM) o se faʻataʻitaʻiga e sili ona maaleale ma faʻapitoa mo togafitiga faʻapitoa ma vailaʻau faʻapitoa, toe faʻaleleia saʻo le physiology ma pathophysiology o le fatu o le tagata3.O le leai o sea faiga faʻatapulaʻa le mauaina o togafitiga fou mo le faʻaletonu o le fatu4,5 ma ua taʻitaʻia ai le cardiotoxicity fualaau o se mafuaʻaga tele mo le alu ese mai le maketi6.
I le sefulu tausaga ua tuana'i, e valu vaila'au e le'o fatu fatu ua ave'esea mai le fa'aogaina ile falema'i ona e mafua ai le fa'aumiumi ole taimi ole QT e o'o atu ai ile ventricular arrhythmias ma le oti fa'afuase'i7.O le mea lea, o loʻo i ai se manaʻoga faʻateleina mo taʻiala faʻapitoa suʻesuʻega faʻapitoa e iloilo ai le aoga o le cardiovascular ma le oona.O le fa'aaogaina lata mai nei o le cardiomyocytes e maua mai i le cell cell cell (hiPS-CM) i le su'esu'eina o vaila'au ma su'ega oona e maua ai se vaega o fofo i lenei fa'afitauli.Ae ui i lea, o le natura leʻo o le hiPS-CMs ma le leai o se faʻalavelave tele o le fatu fatu o ni tapulaʻa tele o lenei metotia.O suʻesuʻega talu ai nei ua faʻaalia ai o lenei tapulaʻa e mafai ona faʻatoʻilaloina i se vaega e ala i le faʻaaogaina vave o le hiPS-CM e faʻatupu ai faʻamaʻi fatu fatu i se taimi e leʻi leva ona amata le faʻalavelave faʻafuaseʻi ma faasolosolo malie le faʻaosofia o le eletise i le taimi.Ae ui i lea, o nei hiPS-CM microtissues e leai ni mea faʻaeletise faʻapitoa ma konekarate matua o le myocardium matua.E le gata i lea, o le fatu o le tagata e iai se fausaga e sili atu ona faigata, e aofia ai se faʻafefiloi eseese o ituaiga sela eseese, e aofia ai sela endothelial, neurons, ma stromal fibroblasts, e fesoʻotaʻi faʻatasi e seti faʻapitoa o matrix matrix proteins.O lenei heterogeneity o tagata e le o cardiomyocyte 11,12,13 i le fatu mammalian matutua o se pa puipui tele i le faʻataʻitaʻiina o le fatu fatu e faʻaaoga ai ituaiga sela taʻitasi.O nei tapula'a tetele o lo'o fa'amamafaina ai le taua o le atina'eina o metotia mo le fa'atupuina o le tino o le myocardial i lalo ole physiological ma pathological tulaga.
O vaega manifinifi (300 µm) o le fatu o le tagata ua fa'amaonia o se fa'ata'ita'iga lelei o le myocardium o le tagata.O lenei metotia e maua ai le avanoa i se 3D multicellular system atoatoa e tutusa ma le fatu o le tagata.Ae ui i lea, seia oʻo i le 2019, o le faʻaogaina o vaega faʻaleaganuʻu fatu na faʻatapulaʻaina e le ola puupuu (24 h) aganuu.E mafua lenei mea i le tele o mea e aofia ai le le lava o le faʻalauteleina o le tino-mechanical, le faʻaogaina o le ea-suavai, ma le faʻaogaina o ala faʻasalalau faigofie e le lagolagoina manaʻoga o le fatu fatu.I le 2019, e tele vaega suʻesuʻe na faʻaalia o le tuʻufaʻatasia o mea faʻainisinia i faiga faʻaleaganuʻu fatu e mafai ona faʻalauteleina ai le ola o aganuu, faʻaleleia le faʻaalia o le fatu, ma faʻataʻitaʻiina faʻamaʻi fatu.E lua suʻesuʻega mataʻina 17 ma le 18 o loʻo faʻaalia ai o le utaina o masini uniaxial e iai se aafiaga lelei i le fatu fatu i le taimi o aganuu.Ae ui i lea, o nei suʻesuʻega e leʻi faʻaogaina ai le faʻaogaina o le physico-mechanical faʻamalosi e tolu-dimensional o le taamilosaga o le loto, talu ai o vaega o le fatu na faʻapipiʻiina i le isometric tensile forces 17 poʻo le linear auxotonic loading 18.O nei metotia o le faʻalauteleina o aano na mafua ai le taofiofia o le tele o genes cardiac poʻo le faʻaalia o kenera e fesoʻotaʻi ma tali faʻalavelave faʻafuaseʻi.Ae maise, Pitoulis et al.19 atia'e se ta'ele fa'aleaganu'u fa'ato'aga fatu mo le toe fa'aleleia o le ta'amilosaga o le fatu e fa'aaoga ai le fa'aogaina o le fa'aliliuga malosi ma fa'alavelave fa'alavelave.E ui lava o lenei faiga e mafai ai ona sili atu le saʻo i vitro cardiac cycle faʻataʻitaʻiga, o le lavelave ma le maualalo o le gaosiga o le auala e faʻatapulaʻaina ai le faʻaogaina o lenei faiga.O le matou fale su'esu'e talu ai nei na fausia ai se faiga fa'aleaganu'u fa'afaigofie e fa'aoga ai le fa'aosoina o le eletise ma se auala fa'atumauina e fa'amautu ai le fa'atumauina o vaega o puaa ma fatu fatu o le tagata mo le 6 aso20,21.
I le tusitusiga o loʻo i ai nei, matou te faʻamatalaina se faʻataʻitaʻiga aganuʻu o le fatu (CTCM) e faʻaaoga ai vaega o le fatu puaa e faʻapipiʻi ai faʻamatalaga malie e toe faʻamatalaina le tolu-dimensional cardiac physiology ma pathophysiological distension i le taimi o le taamilosaga o le fatu.O lenei CTCM e mafai ona faʻateleina le saʻo o faʻamaʻi faʻamaʻi i se tulaga e leʻi ausia muamua e ala i le tuʻuina atu o se tau faʻapitoa, ogatotonu o le faʻaogaina o le fatu e faʻataʻitaʻiina le physiology / pathophysiology o le fatu mammalian mo suʻega vailaʻau muamua.
O faʻailoga faʻainisinia Hemodynamic e taua tele i le faʻamautuina o galuega cardiomyocyte i vitro 22,23,24.I le tusitusiga o loʻo i ai nei, ua matou atinaʻeina se CTCM (Ata 1a) e mafai ona faʻataʻitaʻiina le siosiomaga o le fatu matua e ala i le faʻaosofiaina o le eletise ma le masini faʻamalosi i laina o le physiological (1.2 Hz, 72 paʻu i le minute).Ina ia aloese mai le faʻalauteleina o le tino i le taimi o le diastole, sa faʻaaogaina se masini lomitusi 3D e faʻateleina ai le tele o le tino i le 25% (Fig. 1b).O le saoasaoa o le eletise na fa'aosoina e le C-PACE system na fa'atulaga e amata i le 100 ms a'o le'i fa'aogaina le fa'aogaina o le fa'aogaina o fa'amaumauga e toe fa'asolo atoa ai le taamilosaga o le fatu.O lo'o fa'aogaina e le faiga o le aganu'u a le tissue se fa'apolokalame pneumatic actuator (LB Engineering, Siamani) e fa'atupu fa'ata'amilomilo fa'alautele ai se pa'u silikoni fetu'una'i e fa'atupu ai le fa'alauteleina o fasi fatu i le potu pito i luga.O le faiga na fesoʻotaʻi atu i se laina ea i fafo e ala i se faʻasalalauga faʻamalosi, lea na mafai ai ona faʻafetaui saʻo le mamafa (± 1 mmHg) ma le taimi (± 1 ms) (Fig 1c).
Fa'apipi'i le vaega o mea i le mama lagolago 7 mm, o lo'o fa'aalia i le lanumoana, i totonu o le potu fa'aleaganu'u o le masini.O le potu fa'aleaganu'u e tu'u'ese'ese mai le potu ea e se pa'u silikoni fa'alelei manifinifi.Tu'u se kesi i le va o potu ta'itasi ina ia puipuia ai le gase.O le tapuni o le masini o loʻo i ai graphite electrodes e maua ai faʻamalosi eletise.b Fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga o le masini masini tele, mama ta'iala ma mama lagolago.O vaega o le aano (lanu enaena) e tu'u i luga o le masini lapo'a ma le mama ta'iala e tu'u i totonu o le tootoo i le pito i fafo o le masini.I le fa'aogaina o le ta'iala, tu'u ma le fa'aeteete le mama lagolago o lo'o ufiufi i le mea fa'apipi'i fa'apipi'i i luga o le vaega o le fatu.c Kalafi o lo'o fa'aalia ai le taimi o le fa'aosoina o le eletise e pei o se galuega o le mamafa o potu ea e pulea e se fa'apolokalame pneumatic actuator (PPD).O se masini e maua ai faʻamatalaga na faʻaogaina e faʻafetaui ai le faʻaosofia o le eletise e faʻaaoga ai masini faʻamalosi.A oʻo atu le mamafa i totonu o le potu faʻaleaganuʻu i le faʻamaufaʻailoga, e tuʻuina atu se faailo o le pulupulu i le C-PACE-EM e faʻaosoina ai le eletise.o Ata o CTCM e fa ua tuu i luga o se fata incubator.E fa masini e fesoʻotaʻi atu i le tasi PPD e ala i se taʻavale pneumatic, ma faʻapipiʻi masini faʻapipiʻi i totonu o le valve hemostatic e mataʻituina ai le mamafa i totonu o le eletise pneumatic.O masini ta'itasi o lo'o iai vaega e ono.
I le faʻaaogaina o se tasi pneumatic actuator, na mafai ai ona matou pulea le 4 CTCM masini, e mafai e ia mea taʻitasi ona faʻapipiʻi vaega 6 tissue (Fig. 1d).I totonu o le CTCM, o le mamafa o le ea i totonu o le potu ea ua liua i le mamafa faʻatasi i totonu o le potu vai ma faʻaosofia ai le faʻalauteleina o le physiological o le fasi fatu (Ata 2a ma Ata Ata Faʻaopoopo 1).Iloiloga o le faʻalauteleina o le tino ile 80 mm Hg.Art.fa'aalia le fa'aloaloa o vaega o a'a e 25% (Ata 2b).O lenei pasene faʻalautele ua faʻaalia e fetaui ma le umi o le sarcomere o le physiological o le 2.2-2.3 µm mo le faʻalavelave masani o le cardiac section17,19,25.Sa su'esu'eina le fa'aogaina o le tino i le fa'aogaina o meapueata fa'apitoa (Ata Fa'aopoopo 1).O le maualuga ma le saoasaoa o le gaioiga o le tino (Fig. 2c, d) e fetaui ma le faʻalauteleina i le taimi o le taamilosaga o le fatu ma le taimi i le taimi o le systole ma le diastole (Fig. 2b).O le fa'aloaloa ma le saosaoa o le fatu fatu i le taimi o le fa'aitiitia ma le malolo sa tumau pea mo le 12 aso i le aganuu (Ata 2f).Ina ia iloilo le aʻafiaga o le faʻamalosia o le eletise i luga o le konekarate i le taimi o le aganuʻu, na matou fausia ai se metotia mo le fuafuaina o le faʻaogaina o le faʻaogaina o le faʻaogaina o le algorithm faʻapipiʻi (Faʻaopoopo Ata 2a, b) ma mafai ai ona iloa le va o faʻalavelave faʻatasi ma le leai o se eletise.O le vaega lava lea o le fatu (Ata 2f).I totonu o le itulagi feaveaʻi o le tipi (R6-9), o le voltage i le taimi o le faʻamalosia o le eletise e 20% maualuga atu nai lo le leai o se faʻamalosi eletise, lea e faʻaalia ai le sao o le faʻamalosia o le eletise i le galuega faʻapipiʻi.
O fa'ailoga fa'atusa o le mamafa o le potu ea, le mamafa o le potu su'esu'e, ma le fuaina o fe'avea'i o mea e fa'amaonia ai o le mamafa o le potu e suia ai le mamafa o le vai, ma mafua ai se gaioiga tutusa o le fasi pepa.e Fa'atusaina fa'ailoga o le pasene fa'aloaloa (lanumoana) o vaega aano e tutusa ma le pasene fa'aloaloa (lanu moli).c O le gaioi fuaina o le fasi fatu e ogatasi ma le fuaina o le saoasaoa o le gaioiga.(o) Fa'ata'ita'iga ala o le ta'amilosaga (laina lanumoana) ma le saoasaoa (laina togitogi moli) i totonu o se fasi fatu.e Fa'atatauina o le ta'amilosaga (n = 19 fasi i le vaega, mai pua'a eseese), taimi fa'aitiitiga (n = 19 fasi i le vaega), taimi malolo (n = 19 fasi i le vaega, mai pua'a eseese), fa'agaioiga o mea (n = 25).fasi)/vaega mai puaa eseese), tumutumu o le saoasaoa o le systolic (n = 24(D0), 25(D12) fasi/vaega mai puaa eseese) ma le maualuga o le malologa (n=24(D0), 25(D12) fasi/vaega mai puaa eseese).O le su'ega-t a Tamaiti e lua-tail e leai se eseesega tele i soo se parakalafa.f Fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga su'esu'ega fa'ailoga o vaega aano o lo'o iai (mūmū) ma e aunoa ma le (lanumoana) fa'aosofia eletise, vaega fa'aitulagi e sefulu o vaega o a'ano mai le vaega lava e tasi.O laulau pito i lalo o loʻo faʻaalia ai le faʻatusatusaina o le pasene o le eseesega i le faʻalavelave i vaega o le tino ma le leai o se eletise eletise i vaega e sefulu mai vaega eseese. (n = 8 fasi / vaega mai puaa eseese, lua-tailed Student t-test ua faia; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05). (n = 8 fasi / vaega mai puaa eseese, lua-tailed Student t-test ua faia; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05). (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; ****p<0,0001, **p<0,01, *p<0,05). (n = 8 vaega/vaega mai puaa eseese, su'ega-t a Tamaiti-a'oga lua-si'u; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05). （n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；****p < 0.0001，**p < 0.01，*p < 0.05）。 （n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；****p < 0.0001，**p < 0.01，*p < 0.05）。 (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05). (n = 8 vaega/vaega, mai puaa eseese, lua-si'usi'u su'ega a Tamaiti aoga; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05).Fa'amau fa'aletonu o lo'o fa'atusalia ai le uiga ± fa'asologa masani.
I la matou faiga fa'aleaganu'u fatu biomimetic talu ai [20, 21], matou te fa'atumauina le fa'aogaina, galuega, ma le fa'atulagaina lelei o fasi fatu mo 6 aso e ala i le fa'aogaina o le fa'aosoina o le eletise ma le fa'amalieina o le tu'ufa'atasiga.Ae ui i lea, ina ua mavae le 10 aso, o nei fuainumera na paʻu tele.O le a matou va'ai i vaega na fa'aleaganu'u i la matou faiga fa'aleaganu'u fa'ato'aga 20, 21 tulaga fa'atonutonu (Ctrl) ma o le a matou fa'aogaina la matou auala na fa'atumauina muamua e pei o tulaga MC ma aganu'u i lalo o le fa'aoso fa'ainisinia ma le eletise (CTCM).valaauina .Muamua, na matou fuafuaina o le faʻamalosia o masini e aunoa ma le faʻamalosia o le eletise e le lava e faʻatumauina ai le faʻaogaina o le tino mo aso 6 (Faʻaopoopo Fig. 3a,b).O le mea e malie ai, faʻatasi ai ma le faʻaofiina o le faʻaogaina o le physio-mechanical ma le eletise e faʻaaoga ai le STCM, o le faʻaogaina o vaega o le fatu 12-aso na tumau pea e pei o vaega fou o le fatu i lalo o tulaga MS, ae le o lalo o le Ctrl tulaga, e pei ona faʻaalia e le MTT suʻesuʻega (Fig 1).3a).O lo'o ta'u mai ai o le fa'aosoina fa'ainisinia ma le fa'ata'ita'iga o le taamilosaga o le loto e mafai ona fa'atumauina ai vaega o le tino e mafai ona fa'aluaina le umi e pei ona lipotia mai i la tatou faiga fa'aaganu'u fa'ata'atitia talu ai.Ae ui i lea, o le suʻesuʻeina o le faʻatulagaina o vaega o le tino e ala i le immunolabeling o le cardiac troponin T ma le connexin 43 na faʻaalia ai o le connexin 43 faʻamatalaga na sili atu le maualuga i le MC tissues i le aso 12 nai lo le pulea i le aso lava e tasi.Ae ui i lea, e leʻi faʻatumauina atoatoa le faʻaaliga connexin 43 ma le Z-disc (Fig. 3b).Matou te faʻaogaina se faʻataʻitaʻiga faʻapitoa (AI) e faʻatusatusa ai le faʻaogaina o le tino26, o se faʻataʻitaʻiga faʻavae aʻoaʻoga loloto e faʻavae i luga o le troponin-T ma le connexin staining43 e otometi ai ona faʻatusatusa le faʻatulagaina o le faʻamaoni ma le fluorescence o fasi fatu i tulaga o le malosi o le localization.O lenei metotia e faʻaogaina ai le Convolutional Neural Network (CNN) ma se faʻataʻitaʻiga loloto aʻoaʻoga e faʻalagolago i le faʻatusatusaina o le faʻatulagaina o le fatu fatu i se faiga faʻapitoa ma le le faʻaituau, e pei ona faʻamatalaina i le faʻamatalaga.26. MC tissue na faʻaalia le faʻaleleia atili o le faʻatulagaga tutusa i le aso 0 pe a faʻatusatusa i vaega faʻatonu.E le gata i lea, o le faʻaogaina o le trichrome a Masson na faʻaalia ai le maualalo o le pasene o fibrosis i lalo o tulaga MS pe a faʻatusatusa i tulaga faʻatonutonu i le aso 12 o aganuu (Fig. 3c).Aʻo faʻateleina e le CTCM le faʻaogaina o vaega o fatu fatu i le aso 12 i se tulaga tutusa ma le fatu fatu fou, e leʻi faʻaleleia atili ai le faʻatulagaina o vaega o fatu.
a Bar kalafi o loʻo faʻaalia ai le faʻatusatusaina o le MTT o le faʻaogaina o fasi fatu fou (D0) poʻo le aganuu fasi fatu mo le 12 aso a le o le tuʻufaʻatasia (D12 Ctrl) poʻo le CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) fasi/vaega/vaega e tasi mai le OVA suʻega <0##0, faʻatusatusa le tasi ala o le OVA i puaa <0##0. **p <0.01 fa'atusatusa ile D12 Ctrl). a Bar kalafi o loʻo faʻaalia ai le faʻatusatusaina o le MTT o le faʻaogaina o fasi fatu fou (D0) poʻo le aganuu fasi fatu mo le 12 aso pe i le aganuu masani (D12 Ctrl) poʻo le CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl ), 12 (D12 MC) faʻataʻitaʻiga / faʻataʻitaʻiga o le 12 (D12 MC) suʻega / kulupu a le AN##0. ma **p <0.01 fa'atusatusa ile D12 Ctrl).o le histogram o loʻo faʻaalia ai le faʻatusatusaina o le faʻaogaina o le MTT fatu fou vaega (D0) poʻo le aganuu o vaega o le fatu mo le 12 aso i soʻo se aganuʻu faʻamau (D12 pule) poʻo CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 pule) ), 12 (D12 MC) vaega / vaega o le suʻega e tasi mai ANOVA, se tasi o suʻega;####p < 0,0001 по сравнению с D0 и **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 fa'atusatusa ile D0 ma le **p <0.01 fa'atusatusa ile D12 Ctrl). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切幇(D12 MC) 片(D0) 12 天的MTT 活力的量化)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 ，盎00 D0 ，与D0 ， ####00相比，**p <0.01). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切)片(D12)猇(D0) 12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 相比，####p < 0.0001，与D12 Ctrl 相比，**p。)histogram o loʻo faʻaalia ai le faʻatusatusaina o le MTT viability i vaega fou fatu (D0) poʻo vaega fatu faʻaleaganuʻu mo 12 aso i le aganuʻu static (D12 pule) poʻo le CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 pule)), 12 (D12 MC) vaega / vaega mai suʻega ANOVA eseese, tasi-auala suʻega ANOVA;####p < 0,0001 по сравнению с D0, **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 fa'atusatusa ile D0, **p <0.01 fa'atusatusa ile D12 Ctrl).b Troponin-T (lanu meamata), connexin 43 (mumu) ma le DAPI (lanumoana) i vaega fatu fou fou (D0) po'o vaega fatu ua fa'atupuina i lalo o tulaga fa'amau (Ctrl) po'o tulaga CTCM (MC) mo le 12 aso) o fa'atusa ata immunofluorescence (fua avanoa = 100 µm). Fa'ata'ita'iga fa'apitoa fa'atusatusaga o le fatu fatu fatu fa'atulagaina fa'amaoni (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) fasi/vaega ta'itasi mai pua'a 'ese'ese, tasi le ala su'ega ANOVA; ####p <0.0001 fa'atusatusa i le D0 ma le ****p <0.0001 fa'atusatusa i le D12 Ctrl). Fa'ata'ita'iga fa'apitoa fa'atusatusaga o le fatu fatu fatu fa'atulagaina fa'amaoni (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) fasi/vaega ta'itasi mai pua'a eseese, o le su'ega ANOVA e tasi e faia; ####p <0.0001 fa'atusatusa i le D0 ma le ****p <0.0001 fa'atusatusa i le D12 Ctrl). Количественная оценка структурной целостности сердечной тпкани искусственным интеллектом (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl2), 7 (D12 Ctrl2) зных свиней, проводится однофакторный тест ANOVA; ####p < 0,0001 по сравнению с D0 ma ****p < 0,0001 по сравнению с D12нию). Fuafuaga o le faʻatulagaina faʻamaoni o le fatu fatu e ala i le atamai faʻapitoa (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) vaega / vaega mai puaa eseese, suʻega ANOVA e tasi na faia; ####p <0.0001 vs. ma D0 ma ****p <0.0001 faʻatusatusa i le D0 ma le ****p <0.0001 Ctrl).人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) fasi/vaega o puaa eseese taitasi, su'ega ANOVA tasi itu;####p01 ，0.****p01 ，0.****p01 ，0.****001 ， ####p01 ，0.****001 ，0.****p01 ，0.****001 ，0.****001 ，0.****p01 ， 001 与D12 Ctrl 相比）.人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) fasi/vaega puaa eseese taitasi, su'ega ANOVA e tasi le itu;##p00 <10.****p 0. 001 与D12 Ctrl 相比）. Искусственный интеллект для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (n = 7 (D0), 7 (D12) Ctrl (D0), 7 (D12) Ctrl/MC у каждой из разных свиней, односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001 vs. D0 Для сравнения ****p < 0,0001 по сравнению с D12). Faʻamatalaga faʻapitoa e faʻatusatusa ai le faʻatulagaina o le fatu fatu (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) vaega / vaega taʻitasi o puaa eseese, suʻega ANOVA e tasi; c Fa'atusa ata (agavale) ma le fa'atusatusaga (taumatau) mo fasi fatu ua pisia i le stains trichrome a Masson (Scale bare = 500 µm) (n = 10 fasi/vaega ta'itasi mai pua'a 'ese'ese, fai le su'ega ANOVA e tasi; ####p <0.0001 fa'atusatusa i le D0 ma le ***p <0.001 pe a fa'atusatusa i le D0 ma le ***p <0.02 Ctrl). c Fa'atusa ata (agavale) ma le fa'atusatusaga (taumatau) mo fasi fatu ua pisia i le stains trichrome a Masson (Scale bare = 500 µm) (n = 10 fasi/vaega ta'itasi mai pua'a eseese, fai le su'ega ANOVA e tasi; #### p <0.0001 fa'atusatusa i le D0 ma le ***p <0.001 pe a fa'atusatusa i le D0 ma le ***p <0.0. c Репрезентативные изображения (слева) ma количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашенных трихромным краснамлатеб ытия = 500 мкм) (n = 10 срезов/группу от разных посвиней, выполняется односторонний тест ANOVA; #### p < 0,0001 по синей, выполняется односторонний тест ANOVA; нию с D12 Ctrl). c Fa'atusa ata (agavale) ma le fa'atusatusaga (taumatau) o vaega o le fatu ua pisia i le stains trichrome a Masson (fua e le'i fa'asalaina = 500 µm) (n = 10 vaega/vaega mai pua'a eseese, su'ega ANOVA e tasi le auala; #### p <0 .0001 fa'atusatusa i le D0 ma le ***p <0.001 pe a fa'atusatusa i le D0 ma ***p <0.001). c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸尺右）（裸尺度 （裸尺度 （裸尺度 5（尺度 5 丶片/组，每组来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 相比，***p < 0.001 Ctrl 缛D1. C 用 masson 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 （左 左） 量化 （右） 裸尺度 裸尺度 裸尺度 裸尺度 裸度500 µm） （n = 10 个 切片 组 每 组 来自 不同 猪 ， 进行 单向 单向 Anova 测##00； 测##0； 中文 0. p < 0.001 与D12 Ctrl 相比）. c Репрезентативные изображения (слева) ma количественный анализ (справа) срезов сердца, окрашенных трихроямным красител50сти мкм) (n = 10 срезов/группа, каждый от другой свиньи, протестировано с помощью однофакторного дисперсиов;#0,0 расионсионсионность; нению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c Fa'atusa ata (agavale) ma le aofa'i (taumatau) o vaega o le fatu ua pisia i le stains trichrome a Masson (fa'asao = 500 µm) (n = 10 vaega/vaega, ta'itasi mai se pua'a 'ese'ese, fa'ata'ita'iina e ala i su'esu'ega e tasi le va'aiga ;### # p <0.0001 pe a fa'atusatusa i le D0, ***p <0.001 pe a fa'atusatusa i le D0, ***p <0.1).Fa'amau fa'aletonu o lo'o fa'atusalia ai le uiga ± fa'asologa masani.
Na matou manatu e ala i le faʻaopoopoina o molelaʻau laiti i le aganuu, e mafai ona faʻaleleia le amiosaʻo cardiomyocyte ma faʻaitiitia le atinaʻe fibrosis i le taimi o le aganuʻu CTCM.O lea na matou suʻesuʻeina ai mole mole laiti e faʻaaoga ai a matou aganuu faʻatonu20,21 ona o le laʻititi o mea faʻalavelave.Dexamethasone (Dex), triiodothyronine (T3), ma le SB431542 (SB) na filifilia mo lenei mata.O nei molelaiti laiti na faʻaaogaina muamua i aganuu hiPSC-CM e faʻaosofia ai le matua o cardiomyocytes e ala i le faʻateleina o le umi o le sarcomere, T-tubules, ma le saoasaoa o le faʻaogaina.E le gata i lea, o le Dex (se glucocorticoid) ma le SB ua lauiloa e taofiofia le mumū29,30.O le mea lea, na matou suʻesuʻeina pe o le faʻaofiina o se tasi poʻo se tuʻufaʻatasiga o nei molelaiti laiti o le a faʻaleleia ai le faʻatulagaina o vaega o fatu.Mo suʻesuʻega muamua, o le fua o faʻalapotopotoga taʻitasi na filifilia e faʻavae i luga o faʻatonuga e masani ona faʻaaogaina i faʻataʻitaʻiga o aganuu (1 μM Dex27, 100 nM T327, ma le 2.5 μM SB31).A maeʻa le 12 aso o le aganuu, o le tuʻufaʻatasiga o le T3 ma le Dex na maua ai le amio saʻo lelei o le cardiomyocyte ma le toe faʻaleleia o fibrous (Faʻaopoopo Faʻaopoopo 4 ma le 5).E le gata i lea, o le faʻaogaina o le faʻaluaina pe faʻaluaina o nei faʻatonuga o le T3 ma le Dex na maua ai aʻafiaga leaga pe a faʻatusatusa i faʻasalalauga masani (Faʻaopoopo Ata 6a,b).
Ina ua mae'a su'esu'ega muamua, sa matou faia se fa'atusatusaga fa'auluuluga o tulaga fa'ale-aganu'u e 4 (Ata 4a): Ctrl: vaega o le fatu na fa'atupuina i la matou aganu'u fa'ata'ita'i na fa'amatalaina muamua i le fa'aaogaina o la matou ala fa'apitoa;20.21 TD: T3 ma Ctrl s Added Dex i le Aso Lulu;MC: vaega o le fatu ua fa'atupuina ile CTCM e fa'aoga ai la tatou fa'aoga lelei;ma le MT: CTCM faʻatasi ma T3 ma Dex faʻaopoopo i le alalaupapa.A maeʻa le 12 aso o le faʻatoʻaga, o le faʻaogaina o le MS ma le MT na tumau pea e pei o ni mea fou na iloiloina e le MTT assay (Fig. 4b).O le mea e mataʻina ai, o le faʻaopoopoga o le T3 ma le Dex i le transwell cultures (TD) e leʻi iʻu ai i se faʻaleleia atili o le faʻaogaina pe a faʻatusatusa i tulaga Ctrl, e faʻaalia ai se matafaioi taua o le faʻamalosia o masini i le faatumauina o le gafatia o vaega o le fatu.
se fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga fa'ata'ita'iga o lo'o fa'aalia ai tulaga fa'aleaganu'u e fa'aaogaina e iloilo ai a'afiaga o le fa'aosoina fa'ainisinia ma le T3/Dex fa'aopoopo i luga ole laiga mo le 12 aso. b Bar kalafi o loʻo faʻaalia ai le faʻatusatusaina o le faʻaogaina o le 12 aso pe a uma le aganuʻu i tulaga uma o le aganuʻu 4 (Ctrl, TD, MC, ma MT) pe a faʻatusatusa i fasi fatu fou (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ma D12 MT), 12 (D12 MC, MC) faʻataʻitaʻiga / faʻataʻitaʻiga ###0; ###00 suʻega mai puaa eseese. p <0.001 faʻatusatusa ile D0 ma **p <0.01 faʻatusatusa ile D12 Ctrl). b Bar kalafi o loʻo faʻaalia ai le faʻatusatusaina o le faʻaogaina o le 12 aso pe a uma le aganuʻu i tulaga uma o le aganuʻu 4 (Ctrl, TD, MC, ma MT) pe a faʻatusatusa i fasi fatu fou (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ma D12 MT), 12 (D12 MC, MC) faʻataʻitaʻiga / faʻataʻitaʻiga ###0; ###00 suʻega mai puaa eseese. p <0.001 faʻatusatusa ile D0 ma **p <0.01 faʻatusatusa ile D12 ctrl). b Fa'atonuga fa'apitoa mo le fa'atonuga o le fa'atonuga o le fa'atonuga o le fa'atonuga o le fa'atonuga 12 mo le fa'atonuga o le fa'atonuga o le fa'atonuga 12 mo le fa'atonuga o le va'aiga o le 4 mata'itusi. роль, TD, MC ma MT) i luga o le сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ma D12 MT), 12 (D12 MC) тур. й, проводится односторонний тест ANOVA; ####p < 0,0001, ##p < 0,001 по сравнению с D0 ma **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). b O le kalafi paʻu o loʻo faʻaalia ai le faʻatusatusaina o le faʻaogaina i le 12 aso pe a maeʻa le aganuʻu i tulaga uma o le aganuʻu 4 (pulea, TD, MC, ma MT) faʻatusatusa i vaega fou o le fatu (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, ma D12 MT), 12 (D12 MC, ma le MT) faʻatusatusa i vaega o le fatu fou (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, ma le D12 MT), 12 (D12 MC, ##0) suʻega, ##0 suʻega 12 MC, tasi ##0 suʻega puaa, ##0. p <0.001 vs. D0 ma **p <0.01 e fa'atusatusa ile D12 Ctrl). b 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) (n = 18 (Dl1D0) TD0 . ）.e 4 12 (D12 MC) b Гистограма, показывающая все 4 условия культивирования (контроль, TD, MC ma MT) по сравнению со свежими сре0ди ца (8 DIRI) (8D) 12 Ctrl, D12 TD ma D12 MT), mai le разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односторонний тест ANOVA; внению с контролем D12). b Histogram o loʻo faʻaalia uma tulaga faʻaleaganuʻu 4 (pulea, TD, MC ma MT) faʻatusatusa i vaega fatu fou (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ma D12 MT), mai puaa eseese 12 (D12 MC) vaega / vaega, suʻega ANOVA tasi; ###0<0. 1 vs. pule D12). c Bar graph o loʻo faʻaalia ai le faʻatusatusaina o le kulukose flux 12 aso pe a maeʻa le aganuʻu i tulaga uma o le aganuʻu 4 (Ctrl, TD, MC, ma MT) faʻatusatusa i fasi fatu fou (D0) (n = 6 fasi / vaega mai puaa eseese, tasi le auala ANOVA suʻega e faia; ###p <0.001, faʻatusatusa i le D0 ma le ***p <0.001). c Bar graph o loʻo faʻaalia ai le faʻatusatusaina o le kulukose flux 12 aso pe a maeʻa le aganuʻu i tulaga uma o le aganuʻu 4 (Ctrl, TD, MC, ma MT) faʻatusatusa i fasi fatu fou (D0) (n = 6 fasi / vaega mai puaa eseese, tasi le auala ANOVA suʻega e faia; ###p <0.001, faʻatusatusa i le D0 ma le ***p <0.001). i Fa'atonuga fa'apitoa mo le fa'atonuga o le fa'atonuga o le fa'atonuga o le fa'atonuga o le fa'atonuga 12 o le fa'atonuga o le fa'atonuga i le va'aiga o le 4 mataitusi. ь, TD, MC ma MT) fa'atasi ai ma сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группу от разных свиней, одностостолнник, одностостолнни 1##, AN0сторонни 1 по сравнению с D0 ma ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c Histogram o loʻo faʻaalia ai le faʻatusatusaina o le kulukose flux 12 aso post-culture i lalo o tulaga uma o le aganuʻu 4 (pulea, TD, MC ma MT) faʻatusatusa i vaega fatu fou (D0) (n = 6 vaega / vaega mai puaa eseese, suʻega ANOVA e tasi na faia; ###p <0.001 faʻatusatusa i le D0 ma ***p <0.001 Ctrl faʻatusatusa i le D12). c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) 相比，吹行通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试；###p < 0.001，与D0 相比，0D1 相比，0D1 。 C 条形图 显示 所有 4 种 条件 （（ctrl 、 td 、 mc 和 mt） 新鲜 心脏 切片 切片 ， 切片后 后 12 天 的 通量 定量 （n = 6 片/组 ， 来自 猪 ， ， ， ， ， ， ， 猪 猪单向执 猪单向执 ， 0 .相比，***p < 0.001 与D12 Ctrl 相比）。 c Гистограма, показывающая количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивирования для вселькования для вселькрования нтроль, TD, MC ma MT) e mafai ona maua i luga ole laiga (D0) (n = 6 срезов/группа, от разных свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группа, от разных свиней, тердностроно; ##p < 0,001 по сравнению с D0, ***p <0,001 по сравнению с D12 (контроль). c Histogram o loʻo faʻaalia ai le faʻatusatusaina o le kulukose flux i le 12 aso pe a maeʻa le aganuu mo tulaga uma o le aganuʻu 4 (pule, TD, MC, ma MT) faʻatusatusa i vaega fatu fou (D0) (n = 6 vaega / vaega, mai puaa eseese, unilateral Na faia suʻega ANOVA, ###p <0.001 faʻatusatusa i le D0, ***p <0.001 faʻatusatusa i le D0, ***p <0.001).d Fuafuaga su'esu'ega fa'amama fou (lanu moana), aso 12 MC (lanu meamata), ma le aso 12 MT (mumu) i'a e sefulu vaega fa'aitulagi vaega (n = 4 fasi / vaega, su'ega ANOVA e tasi; e leai se eseesega tele i le va o vaega).u Fuafuaga o lo'o fa'aalia ai kenera o lo'o fa'aalia ese'ese i vaega fatu fou (D0) fa'atusatusa i vaega o fatu na fa'atupuina i lalo o tulaga fa'amau (Ctrl) po'o lalo ole MT (MT) mo le 10-12 aso.f Fa'afanua vevela o kenera sarcomere mo vaega o fatu na fa'atupuina i lalo o tulaga fa'aleaganu'u ta'itasi.Fa'amau fa'aletonu o lo'o fa'atusalia ai le uiga ± fa'asologa masani.
O le faʻalagolago i le metabolism i le suiga mai le faʻamaʻiina o le gaʻo gaʻo i le glycolysis o se faʻailoga o le faʻavasegaina o cardiomyocyte.O cardiomyocytes le matutua e fa'aaoga muamua le kulukose mo le gaosiga o le ATP ma maua ai le hypoplastic mitochondria ma nai cristae5,32.O su'esu'ega o le fa'aogaina o le kulukose na fa'aalia ai i lalo ole MC ma le MT, o le fa'aogaina o le kulukose e tutusa ma le fa'aoga ile aso 0 (Ata 4c).Peita'i, o fa'ata'ita'iga Ctrl na fa'aalia ai se fa'atuputeleina tele o le fa'aogaina o le kulukose pe a fa'atusatusa i le aano fou.O loʻo faʻaalia ai o le tuʻufaʻatasia o le CTCM ma le T3 / Dex e faʻaleleia ai le ola o le tino ma faʻasaoina le faʻamaʻi faʻamaʻi o le 12-day cultured heart sections.E le gata i lea, o suʻesuʻega faʻataʻitaʻiga na faʻaalia ai o tulaga faʻalavelave e tumau pea e pei o le fatu fatu fou mo 12 aso i lalo ole MT ma MS tulaga (Fig. 4d).
Ina ia auʻiliʻili le aofaʻi o aʻafiaga o le CTCM ma le T3 / Dex i luga o le faʻasologa o le lalolagi atoa o le fatu fasi fatu, matou te faia le RNAseq i luga o fasi fatu mai tulaga faʻale-aganuʻu uma e fa (Faʻamatalaga Faʻaopoopo 1).O le mea e malie ai, o vaega MT na faʻaalia ai le maualuga o le faʻaliliuga tutusa i fatu fatu fou, ma naʻo le 16 faʻaalia faʻaalia mai le 13,642 genes.Ae ui i lea, e pei ona matou faʻaalia muamua, o fasi Ctrl na faʻaalia 1229 faʻaaliga faʻaalia genes pe a uma le 10-12 aso i le aganuu (Fig. 4e).O nei faʻamaumauga na faʻamaonia e le qRT-PCR o fatu ma fibroblast genes (Faʻaopoopo Ata 7a-c).O le mea e malie ai, o vaega o le Ctrl na faʻaalia ai le faʻaitiitia o le faʻaogaina o le fatu ma le cell cycle genes ma le faʻagaoioia o polokalame faʻamaʻi.O nei faʻamatalaga o loʻo fautua mai ai o le faʻavasegaina, lea e masani ona tupu pe a uma le faʻatupuina o se taimi umi, e faʻaitiitia atoa i lalo ole MT tulaga (Faʻaopoopo Ata 8a, b).O suʻesuʻega faʻaeteete o genes sarcomere na faʻaalia ai e naʻo lalo ole MT tulaga o loʻo faʻapipiʻiina ai le sarcomere (Fig. 4f) ma le ion channel (Faʻaopoopo Fig. 9) faʻasaoina, puipuia i latou mai le taofiofia i lalo ole Ctrl, TD, ma MC tulaga.O nei fa'amaumauga o lo'o fa'aalia ai fa'atasi ai ma le tu'ufa'atasiga o le fa'aoso fa'ainisinia ma le aga malie (T3/Dex), e mafai ona tumau le fa'atusa o le fatu fasi fatu i fasi fatu fou pe a uma le 12 aso ile aganu'u.
O nei suʻesuʻega faʻasalalauga e lagolagoina e le mea moni o le faʻatulagaina o le cardiomyocytes i totonu o vaega o le fatu e sili ona lelei ona faʻasaoina i lalo ole MT mo aso 12, e pei ona faʻaalia e le fesoʻotaʻiga faʻatasi ma le faʻaogaina 43 (Fig 5a).E le gata i lea, o le fibrosis i vaega o le fatu i lalo o tulaga MT na matua faʻaititia pe a faʻatusatusa i le Ctrl ma tutusa ma vaega fou o le fatu (Fig. 5b).O nei faʻamaumauga o loʻo faʻaalia ai o le tuʻufaʻatasia o le faʻamalosiina o masini ma togafitiga T3 / Dex e faʻasaoina lelei le fausaga o le fatu i vaega o fatu i le aganuu.
a Sui immunofluorescence ata o le troponin-T (lanumeamata), connexin 43 (mumu), ma le DAPI (lanumoana) i vaega fatu fou faatoa vavae ese (D0) poʻo le faʻatupuina mo le 12 aso i tulaga faʻaleaganuʻu uma e fa (fua = 100 µm).). Fa'ata'ita'iga fa'apitoa fa'afuainumera o le fatu fatu fatu fa'atulagaina fa'amaoni (n = 7 (D0 ma D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ma D12 MT) fasi / vaega mai pua'a eseese, o le su'ega ANOVA e tasi e faia; ####p <0.0001 fa'atusatusa i le D0 ma le *p <0.00tr <0.05, po'o le C1. Fa'ata'ita'iga fa'apitoa fa'afuainumera o le fatu fatu fatu fa'atulagaina fa'amaoni (n = 7 (D0 ma D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ma D12 MT) fasi / vaega mai pua'a 'ese'ese, tasi le auala ANOVA su'ega e faia; #### p <0.0001 fa'atusatusa i le D0 ma le *p <0.00tr <1, ​​po'o le C <1.000.05. Количественная оценка структурной целостности ткани сердца с помощью искусственного интеллекта (n = 7 (D0 и 2 D15) D0 (D0 2 D12) D15 (D0 2 D12) срезов/группу от разных свиней, проведен однофакторный тест ANOVA; 2 Ctrl). Fuafuaga o le faʻatulagaina faʻamaoni o fatu fatu e faʻaaoga ai le atamai faʻapitoa (n = 7 (D0 ma D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ma D12 MT) vaega / vaega mai puaa eseese, tasi le auala ANOVA suʻega na faia; #### p <0.0001 faʻatusatusa i le D0 ma le *p <0.00 tr .对不同猪的心脏组织结构完整性（n = 7（D0 和D12 Ctrl）、5（D12 TD、D12 MC 和人/廇至）智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或****p < 0.0001 与缔物 Ctr。对 不同 猪 的 心脏 结构 完整性 （n = 7 （d0 和 d12 ctrl） （5 （d12 td 、 d12 mc 和 d1量 化 进行 单向 单向 单向 测试 ； ########## p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或****p0 < 0.05 相比，或****p < 0.0.Fuafuaina o le faʻatulagaina faʻamaoni o fatu fatu e faʻaaoga ai le atamai faʻapitoa i puaa eseese (n = 7 (D0 ma D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ma D12 MT) vaega / vaega) faʻatasi ai ma se suʻega ANOVA e tasi;#### p < 0,0001 по сравнению с D0 и *p < 0,05 или ****p < 0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). #### p <0.0001 fa'atusatusa ile D0 ma le *p <0.05 po'o le ****p <0.0001 fa'atusatusa ile D12 Ctrl). b Fa'atusa ata ma le fa'atusaina o fasi fatu ua pisia i le stains trichrome a Masson (Scale bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ma D12 MC), 9 (D12 MT) fasi/vaega mai pua'a eseese, tasi le ala ##0##0 su'ega o le ANOVA <0 fa'atusatusa i le ***0 ##0p <1 ala ##0##0; ***0. 1, poʻo le ****p <0.0001 faʻatusatusa ile D12 Ctrl). b Fa'atusa ata ma le fa'atusaina o fasi fatu ua pisia i le stains trichrome a Masson (Scale bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ma D12 MC), 9 (D12 MT) fasi/vaega mai pua'a eseese, tasi le ala ##0##0 su'ega o le ANOVA <0 fa'atusatusa i le ***0 ##0p <1 ala ##0##0; ***0. 1, poʻo le ****p <0.0001 faʻatusatusa ile D12 Ctrl). b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромным красителем Массона (массона 5) = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ma D12 MC), 9 (D12 MT) срезов/группу от разных свиней, выполняется односторонний теp01; ***p <0,001 po'o le ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b Fa'atusa ata ma le fa'atusaina o vaega o le fatu ua pisia i le stains trichrome a Masson (scale bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ma D12 MC), 9 (D12 MT) vaega/vaega mai puaa eseese, fa'atino <1-way ANOVA; ####00 <1-way ANOVA; ####0. p <0.0001 vs. D12 Ctrl). b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺= 500 µm）！n = 2（D 10（D 10（D 10）！D 10） D12 MC），来自不同猪的9 个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分析；##****##p < 0.0001 ，*p*p ​​< 0.0001 ，*p**<0.0001 ，*p** 0.0001 与D12 Ctrl 相比）. b 用 masson 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 和 量化 （比例 尺 尺 尺 = 500 µm） = 500 µm） 1（n） 、 d12 td 和 d12 mc） 来自 不同 的 9 个 d12 mt 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片/组，进行单因素方差分析；*####p < 0.0001 ， 曾001，盠方差分析；*####p < 0.0001 ， 曾001，曾001，曾001，丯我****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比）. b Репрезентативные изображения ma количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромом Массона (мастабная = лим50) (мастабная = лим50) 2 Ctrl, D12 TD ma D12 MC), 9 (D12 MT) срезов от разных свиней / группы, один- способ ANOVA; по сравнению с D12 Ctrl). b Faʻatusa ata ma le faʻatusatusaina o vaega o le fatu ua pisia i le Masson's trichrome (scale bar = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ma D12 MC), 9 (D12 MT) vaega mai puaa eseese / vaega, tasi ANOVA auala; ####001 <0. ####p <0. .0001 fa'atusatusa ile D12 Ctrl).Fa'amau fa'aletonu o lo'o fa'atusalia ai le uiga ± fa'asologa masani.
Mulimuli ane, o le gafatia o le CTCM e faʻataʻitaʻiina le hypertrophy cardiac na suʻesuʻeina e ala i le faʻalauteleina o le tino o le fatu.I le CTCM, o le maualuga o le mamafa o le potu ea na siitia mai le 80 mmHg i le 80 mmHg.Art.(fa'aloa masani) e o'o i le 140 mmHg Art.(Ata 6a).E fetaui lea ma le 32% o le faʻalauteleina o le faʻalauteleina (Fig. 6b), lea na faʻaalia muamua o le faʻasologa o pasene tutusa e manaʻomia mo vaega o le fatu e ausia ai le umi o le sarcomere e tutusa ma le vaʻaia i le hypertrophy.O le fa'aloaloa ma le saosaoa o le aano o le fatu i le taimi o le pa'u ma le malolo sa tumau pea i aso e ono o le aganuu (Ata 6c).O le fatu fatu mai tulaga MT na fa'atupuina i le fa'alauteleina masani (MT (Normal)) po'o tulaga fa'alautele (MT (OS)) mo aso e ono.Ua maeʻa aso e fa i le aganuʻu, o le hypertrophic biomarker NT-ProBNP na matua maualuga le maualuga i le ala i lalo ole MT (OS) tulaga faʻatusatusa ile MT (masani) tulaga (Fig. 7a).E le gata i lea, i le maeʻa ai o aso e ono o le faʻatupuina, o le tele o le cell i MT (OS) (Fig. 7b) na matua faʻateleina pe a faʻatusatusa i vaega o le fatu MT (masani).E le gata i lea, o le faʻaliliuga faaniukilia a le NFATC4 na matua faʻateleina i totonu o le tino faʻamalo (Fig. 7c).O nei faʻaiʻuga o loʻo faʻaalia ai le alualu i luma o le toe faʻaleleia o pathological pe a maeʻa le hyperdistension ma lagolagoina le manatu e mafai ona faʻaogaina le masini CTCM e fai ma faʻavae e suʻesuʻe ai le faʻaogaina o le hypertrophy cardiac signaling.
O fa'ailoga fa'atusa o le mamafa o le potu ea, le mamafa o le potu su'esu'e, ma le fuaina o fe'avea'i o mea e fa'amaonia ai o le mamafa o le potu e suia ai le mamafa o le vai, ma mafua ai se gaioiga tutusa o le fasi pepa.e Fa'atusaina le pasene fa'aloaloa ma fa'asolo fa'asologa pi'o mo vaega e masani ona fa'aloloa (lanu moli) ma le fa'aloaloa (lanumoana).c Bar kalafi o loʻo faʻaalia ai le taʻamilosaga taimi (n = 19 fasi i le vaega, mai puaa eseese), taimi faʻalavelave (n = 18-19 fasi vaega, mai puaa eseese), taimi malolo (n = 19 fasi i le vaega, mai puaa eseese) ), le tele o gaioiga o le tino (n = 14 fasi / vaega, mai puaa eseese, fua faʻaluega puaʻa 1), pito pito i luga ole fasi puaa (puaa / vaega eseese) n = 14 (D0), 15 (D6) ) vaega / vaega) mai puaa eseese), lua-tailed Student's t-test na faʻaalia ai le leai o se eseesega tele i soʻo se parakalafa, e faʻaalia ai o nei taʻaloga na tumau pea i le 6 aso o le aganuu ma le overvoltage.Fa'amau fa'aletonu o lo'o fa'atusalia ai le uiga ± fa'asologa masani.
a Bar graph quantification of NT-ProBNP concentration in culture media from heart slices cultured under MT normal stretch (Norm) or overstretching (OS) condition (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, and D4 MTOS) fasi / vaega mai puaa eseese, Lua-ala ANOVA e faia; **p <0.01. a Bar kalafi fuaina o le NT-ProBNP concentration i le aganuu ala o faasalalauga mai fasi fatu faʻatupuina i lalo o MT masani faʻalauteleina (Norm) poʻo le faʻalauteleina (OS) tulaga (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ma D4 MTOS) fasi / vaega mai puaa eseese, E faia le ANOVA e lua; **p <0.01 faʻatusatusa i le masani masani).Quantitative histogram of NT-ProBNP concentration in culture medium from heart slices cultured under conditions of normal MT stretch (masani) poʻo overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ma D4) .MTOS) fasi / vaega mai puaa eseese, faʻataʻitaʻiga lua-faʻailoga o le eseesega e faia;**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p <0.01 faʻatusatusa i le faʻalauteleina masani). a 在MT 正常拉伸(Norm) 或过度拉伸(OS) 条件下培养的心脏切片培养基中NT-ProBNP 浓度的心脏切片培养基中NT-ProBNP 浓度的曾 (D4) masani)、3（D2 MTOS,D4 MTNorm 和D4 MTOS）来自不同猪的切片/组，进行双向方差分析；**与正帯与与正帯，0与正帰。 a Fuafuaga o le NT-ProBNP fa'asalaina i fasi fatu ua fa'atupuina i lalo o le MT masani fa'alautele (Norm) po'o le fa'aosoina (OS) tulaga (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS) mai ese'ese 猪的切片/组，可以双双合 masani; , p <0.01).histogram Fuainumeraina o NT-ProBNP concentrations i fasi fatu ua faʻatupuina i lalo o tulaga masani MT faʻalautele (masani) poʻo le faʻalauteleina (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) ma D4 MTOS) fasi / vaega mai puaa eseese, suʻesuʻega e lua o le eseesega;**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p <0.01 faʻatusatusa i le faʻalauteleina masani). b Faʻatusa ata mo fasi fatu ua pisia i le troponin-T ma le WGA (agavale) ma le tele o le cell quantification (taumatau) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) sela / vaega mai 10 fasi pepa eseese mai puaa eseese, lua-tailed Student t-test ua faia; ****p <0.0001 faʻatusatusa i le faʻalautele masani). b Fa'atusa ata mo fasi fatu ua pisia i le troponin-T ma le WGA (agavale) ma le tele o le cell quantification (taumatau) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) sela / vaega mai 10 fasi pepa eseese mai pua'a eseese, lua-tailed Student t-test ua faia; ****p <0.0001 fa'atusatusa i le fa'alautele masani). b Репрезентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) ma le количественного опредрад () 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) клеток/группу из 10 разных срезов от разных свиней, два- проводится хвостовой t-крид **** ; сравнению с нормальным растяжением). b Faʻatusa ata o vaega o le fatu ua pisia i le troponin-T ma le AZP (agavale) ma le tele o le cell quantification (taumatau) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) sela / vaega mai le 10 vaega eseese mai puaa eseese, lua-tailed Student's t-test na faia; ****p <0.001 faʻatusatusa i le masani masani). b 用肌钙蛋白-T 和WGA（左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代表性（（6D）图右）染色的心脏切片的代表性（（3）图图自不同猪的10 个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组，两进行有尾学生t 检验；与曉学生t 检验；与曉又0. ）. b Fa'atusa ata o fasi fatu ua pisia i le calcarein-T ma le WGA (agavale) ma le tele o sela (taumatau) (n = 330 (D6 MTOS), 369 mai le 10 fasi pepa eseese (D6 MTNorm)) Cells/组，两方法有尾学生t su'ega masani <0.compatred su'ega ；0.compatred test；0. b Репрезентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) ma le количественная оцленка (30) 6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 различных срезов от разных свиней Клетки/группа, двусторонние критерий Стьюдента0; льным растяжением). b Faʻatusa ata o vaega o fatu ua pisia i le troponin-T ma le AZP (agavale) ma le faʻatusatusaina o le tele o le cell (taumatau) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) mai le 10 vaega eseese mai puaa eseese) Cells / group, criterion lua-tailed Student's t;****p <0.0001 pe a fa'atusatusa ile fa'alavelave masani). c Sui ata mo le aso 0 ma le aso 6 MTOS fasi fatu immunolabeled mo troponin-T ma NFATC4 ma quantification o le translocation o le NFATC4 i le nuclei o CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) fasi / vaega mai puaa eseese, lua-tailed Student t-suʻega ua faia; * p <0.05). c Sui ata mo le aso 0 ma le aso 6 MTOS fasi fatu immunolabeled mo troponin-T ma NFATC4 ma quantification o le translocation o le NFATC4 i le nuclei o CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) fasi / vaega mai puaa eseese , lua-tailed Student t-suʻega ua faia; * p <0.05. c Репрезентативные изображения для срезов сердца 0 i le 6 aso MTOS, fa'ailoga ole тропонина-Т ma le NFATC4, ma le колкацин. FATC4 в ядра кавернозных клеток (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срезов/группу от разных свиней , выполняется двустонкид , выполняется двустонюнид двустононнид . c Sui ata mo vaega fatu i 0 ma 6 aso MTOS, immunolabeled mo troponin-T ma NFATC4, ma quantification o le NFATC4 translocation i le nucleus o sela cavernous (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) fasi / vaega mai puaa eseese) faia le lua-tailed Student t-suʻega;*p <0.05). c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4 免疫标记的第0 天和第6 天MTOS 心脏切片的代表性图像，于于 NFA易位至CM 细胞核的量化（n = 4 (D0)、3 (D6 MTOS) 切片/组, 进行双尾学生t 检验；*p) < 。 c Fa'atusa ata o le calcanin-T ma le NFATC4 immunolabeling生et 电影；*p < 0.05). c Репрезентативные изображения срезов сердца MTOS i le 0 ma le 6 aso i le иммуномаркировки тропонином-Т ma le NFATC4 ma le NFATC4 ma le numera o le NFATC4 FATC4 i le ядра CM mai разных свиней (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срез/группа, два- хвостатый t-критерий Стьюдента; *p <0,05). c Fa'atusa ata o fasi fatu MTOS i le aso 0 ma le 6 mo troponin-T ma NFATC4 immunolabeling ma quantification o le NFATC4 translocation i totonu o le autu o CM mai puaa eseese (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) fasi / vaega, lua-tailed t -criterion Student's; *p <0.05).Fa'amau fa'aletonu o lo'o fa'atusalia ai le uiga ± fa'asologa masani.
Fa'aliliuga cardiovascular su'esu'ega e mana'omia ni fa'ata'ita'iga feavea'i e sa'o lelei ona toe gaosia le si'osi'omaga o le fatu.I lenei suʻesuʻega, na fausia ai se masini CTCM ma faʻaalia e mafai ona faʻaosofia vaega ultrathin o le fatu.O le faiga o le CTCM e aofia ai le physiologically synchronized electromechanical stimulation ma le T3 ma le Dex fluid enrichment.Ina ua faʻaalia vaega o le fatu puaa i nei mea, o lo latou gafatia, faʻatonuga faʻavae, gaioiga faʻasolosolo, ma faʻamatalaga tusitusia na tumau tutusa ma le fatu fatu fou pe a uma le 12 aso o le aganuu.E le gata i lea, o le tele o le faʻalauteleina o le fatu fatu e mafai ona mafua ai le hypertrophy o le fatu e mafua mai i le hyperextension.I le aotelega, o nei taunuʻuga e lagolagoina le taua tele o tulaga faʻale-aganuʻu o le physiological i le faatumauina o se faʻataʻitaʻiga masani o le fatu ma tuʻuina atu se faʻavae mo suʻesuʻega fualaau.
E tele mea e fesoasoani i le fatuina o se siosiomaga sili ona lelei mo le galue ma le ola o cardiomyocytes.O le mea sili ona manino o nei mea e fesoʻotaʻi ma (1) fesoʻotaʻiga intercellular, (2) faʻamalosi eletise eletise, (3) mea malie, ma le (4) mea faʻapitoa.Feso'ota'iga fa'ale-tino e mana'omia ai feso'ota'iga lavelave e tolu-dimensional o ituaiga sela e tele e lagolagoina e se matrix extracellular.O ia fegalegaleaiga faʻalavelave faʻapitoa e faigata ona toe faʻaleleia in vitro e ala i le tuʻufaʻatasia o ituaiga sela taʻitasi, ae mafai ona faigofie ona ausia i le faʻaogaina o le natura organotypic o vaega o fatu.
O le faʻaogaina o masini ma le faʻamalosi eletise o cardiomyocytes e taua tele mo le faʻatumauina o le fatu phenotype33,34,35.A'o fa'aogaina fa'ainisinia fa'ainisinia mo le fa'atulagaina o le hiPSC-CM ma le matua, o le tele o su'esu'ega aulelei na taumafai talu ai nei e fa'aoso fa'ainisinia o fasi fatu i le aganu'u e fa'aaoga ai le uta uniaxial.O nei suʻesuʻega o loʻo faʻaalia ai o le 2D uniaxial mechanical loading o loʻo i ai se aafiaga lelei i le phenotype o le fatu i le taimi o aganuu.I nei su'esu'ega, o vaega o le fatu na fa'atumuina ile isometric tensile forces17, linear auxotonic loading18, po'o le ta'amilosaga o le fatu na toe fa'aaogaina e fa'aaoga ai le fa'aogaina o le fa'aliliuga malosi ma fa'alavelave fa'alavelave.Ae ui i lea, o nei metotia e faʻaogaina ai le uniaxial tissue stretch e aunoa ma le suʻesuʻeina o le siosiomaga, e mafua ai le taofiofia o le tele o genes cardiac poʻo le overexpression o kenera e fesoʻotaʻi ma tali faʻalavelave faʻafuaseʻi.O le CTCM o loʻo faʻamatalaina iinei o loʻo tuʻuina atu ai le 3D electromechanical stimulus e faʻataʻitaʻiina le taamilosaga masani o le fatu i tulaga o le taamilosaga taimi ma le faʻalauteleina o le tino (25% faʻalautele, 40% systole, 60% diastole, ma 72 paʻu i le minute).E ui lava e le lava le faʻaogaina o masini e tolu-dimensional e faʻatumauina ai le amio saʻo, o le tuʻufaʻatasia o le faʻamalosi ma le faʻaogaina o masini e faʻaaoga ai le T3 / Dex e manaʻomia ina ia faʻatumauina lelei le faʻaogaina o le tino, galuega, ma le faʻamaoni.
O mea fa'aleagaga e iai sona sao taua i le fa'avasegaina o le fatu o tagata matutua.O lenei mea na faʻaalia i suʻesuʻega HiPS-CM lea na faʻaopoopoina ai le T3 ma le Dex i faʻasalalauga faʻaleaganuʻu e faʻavavevave ai le matua matua.T3 e ono a'afia ai le felauaiga o amino acids, suka ma le calcium i totonu o sela sela36.E le gata i lea, o le T3 o loʻo faʻalauiloaina le MHC-α faʻamatalaga ma le MHC-β downregulation, faʻalauiloaina le faʻatulagaina o myofibrils faʻavave vave i cardiomyocytes matutua faʻatusatusa i le faʻagesegese o myofibrils i fetal CM.O le le lava o le T3 i gasegase o le hypothyroid e mafua ai le leiloa o fusi o le myofibrillar ma le faʻaitiitia o le faʻatupulaia o le leo37.O le Dex e galue i luga o le glucocorticoid receptors ma ua faʻaalia e faʻateleina ai le myocardial contractility i totonu o fatu faʻafefeteina;38 o lenei faʻaleleia o loʻo manatu e fesoʻotaʻi ma le aʻafiaga o le calcium deposit-driven entry (SOCE) 39,40.E le gata i lea, o Dex e fusifusia i ona tali, e mafua ai se tali lautele lautele e taofia ai le puipuiga ma le mumū30.
O a matou faʻaiʻuga e faʻaalia ai o le faʻamalosia o le tino (MS) na faʻaleleia atili le faʻatinoga o aganuʻu pe a faʻatusatusa i le Ctrl, ae na le mafai ona faʻatumauina le faʻaogaina, faʻatulagaina faʻamaoni, ma le faʻaalia o le loto ile 12 aso ile aganuu.Pe a faʻatusatusa i le Ctrl, faʻaopoopoga o T3 ma Dex i aganuʻu CTCM (MT) faʻaleleia atili le faʻaogaina ma faʻamautu faʻamatalaga faʻamatalaga tutusa, faʻatonuga faʻavae, ma gaioiga faʻasolosolo ma fatu fatu fou mo 12 aso.E le gata i lea, e ala i le puleaina o le maualuga o le faʻalauteleina o le tino, na faia ai se faʻataʻitaʻiga hypertrophy cardiac hyperextension-induced e faʻaaoga ai le STCM, e faʻaalia ai le agavaʻa o le STCM system.E tatau ona maitauina e ui lava o le toe faʻaleleia o le fatu ma le fibrosis e masani ona aofia ai totoga le atoatoa o latou sela taʻamilo e mafai ona maua ai cytokines talafeagai faʻapea foʻi ma le phagocytosis ma isi mea e toe faʻaleleia ai, o vaega o le fatu e mafai lava ona faʻataʻitaʻiina le faʻagasologa o le fibrotic e tali atu i le atuatuvale ma le faʻalavelave.i myofibroblasts.Ua uma ona iloiloina lenei mea i lenei ata fa'ata'i fatu fatu.E tatau ona maitauina e mafai ona faʻaogaina le CTCM e ala i le suia o le mamafa / eletise eletise ma le tele o taimi e faʻataʻitaʻi ai le tele o tulaga e pei o le tachycardia, bradycardia, ma le lagolago faʻainisinia (mechanical unloaded heart).O lea ua avea ai le faiga ma auala e fa'aogaina mo su'ega vaila'au.O le mafaia e le CTCM ona fa'ata'ita'iina le hypertrophy cardiac e fa'aosoina i le fa'aosoina o le fa'amalositino e fa'aavanoaina le ala mo le su'eina o lenei faiga mo togafitiga fa'apitoa.I le faaiuga, o le suʻesuʻega o loʻo i ai nei o loʻo faʻaalia ai o le faʻaogaina o masini ma le faʻamalosi malie e taua tele mo le faʻatumauina o le aganuu o vaega o le fatu.
E ui lava o faʻamatalaga o loʻo tuʻuina atu iinei o loʻo fautua mai ai o le CTCM o se tulaga faʻamaonia tele mo le faʻataʻitaʻiina o le myocardium atoatoa, o lenei metotia faʻaleaganuʻu e iai ni tapulaʻa.Ole tapula'a autu ole aganu'u a le CTCM o le fa'atupuina lea o fa'amalosiga fa'ainisinia fa'aauau i fasi pepa, lea e le mafai ai ona mata'itū toto'a fa'a'oto'otoga fatu i taimi ta'amilosaga ta'itasi.E le gata i lea, ona o le laʻititi o vaega o le fatu (7 mm), e faʻatapulaʻaina le gafatia e iloilo ai galuega systolic i fafo atu o faiga faʻaleaganuʻu e faʻaaoga ai masini faʻamalosi masani.I le tusitusiga o loʻo iai nei, matou te manumalo i se vaega o lenei tapulaʻa e ala i le iloiloina o le voltage opitika e fai ma faʻailoga o galuega faʻakonekarate.Ae ui i lea, o lenei tapulaʻa o le a manaʻomia ai nisi galuega ma e mafai ona faʻatalanoaina i le lumanaʻi e ala i le faʻalauiloaina o metotia mo le mataʻituina mataʻituina o le gaioiga o fasi fatu i le aganuu, e pei o le faʻafanua faʻapipiʻi e faʻaaoga ai le calcium ma le voltage-sensitive dyes.O le isi tapula'a o le CTCM o le fa'ata'ita'iga galue e le mafai ona fa'aogaina le fa'alavelave fa'aletino (muamua ma le utaina).I totonu o le CTCM, o le mamafa na faʻaosoina i itu faʻafeagai e toe gaosia ai le 25% physiological stretch i le diastole (faʻalautele atoa) ma le systole (umi o le faʻalavelave i le taimi o le faʻamalosi eletise) i totonu o masini tetele.O lenei tapulaʻa e tatau ona aveese i le lumanaʻi CTCM mamanu e ala i le mamafa o le mamafa i luga o le fatu fatu mai itu uma e lua ma e ala i le faʻaogaina o fesoʻotaʻiga saʻo-volume e tupu i totonu o potu o le fatu.
O le toe fa'aleleia o lo'o fa'aosoina o lo'o lipotia mai i lenei tusitusiga e fa'atapula'aina i le fa'ata'ita'iina o fa'ailoga hypertrophic hyperstretch.O le mea lea, o lenei faʻataʻitaʻiga e mafai ona fesoasoani i le suʻesuʻeina o faʻailoga hypertrophic faʻalauteleina e aunoa ma le manaʻomia o mea malie poʻo neural (e le o iai i lenei faiga).O isi suʻesuʻega e manaʻomia e faʻateleina ai le tele o le CTCM, mo se faʻataʻitaʻiga, faʻapipiʻi faʻatasi ma sela puipuia, faʻasalalau plasma humoral mea, ma le innervation pe a faʻapipiʻi faʻatasi ma sela neuronal o le a faʻaleleia ai avanoa o faʻamaʻi faʻataʻitaʻiga ma CTCM.
E sefulutolu puaa na fa'aaogaina i lenei su'esu'ega.O faʻataʻitaʻiga uma o manu na faia e tusa ai ma taʻiala faʻalapotopotoga ma faʻamaonia e le Iunivesite o Louisville Institutional Animal Care and Use Committee.O le aortic arch na pipii ma le fatu na faʻafefeteina i le 1 L o le cardioplegia sterile (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U / mL heparin, pH e oʻo atu i le 7.4); o fatu na faʻasaoina ile aisa-malili cardioplegic solution seia oʻo ina ave ile fale suesue ile aisa lea e masani lava <10 min. o fatu na faʻasaoina ile aisa-malili cardioplegic solution seia oʻo ina ave ile fale suesue ile aisa lea e masani lava <10 min. сердца хранили в ледяном кардиоплегическом растворе до транспортировки в лабораторию на льду, что обычно за10мает <. fatu sa teuina i le aisa-maalili cardioplegic solution seia oo i le felauaiga i le falesuesue i luga o le aisa, lea e masani ona ave <10 min.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。 Держите сердца в ледяной кардиоплегии до транспортировки в лабораторию на льду, обычно <10 min. Taofi fatu ile aisa cardioplegia se'ia o'o ile felauaiga ile falesuesue ile aisa, masani <10 min.
O le masini CTCM na fausia ile SolidWorks computer-aided design (CAD) software.O potu faʻaleaganuʻu, vaeluaga ma potu ea o loʻo faia ile palasitika acrylic manino CNC.O le mama tua 7mm le lautele e faia i le polyethylene maualuga (HDPE) i le ogatotonu ma o loʻo i ai se o-mama mama e faʻaoga ai le silicone o-mama na faʻaaogaina e faʻamaufaʻailoga ai le aufaasālalau i lalo.O se membrane silica manifinifi e vavaeese ai le potu faʻaleaganuʻu mai le ipu vavae.O le pa'u silicone e tipi leisa mai le 0.02″ laupepa silikoni mafiafia ma e iai le maaa o le 35A.O le pito i lalo ma le pito pito i luga o pusa silikoni o loʻo tipiina leisa mai le 1/16″ laupepa silikoni mafiafia ma e iai le maaa o le 50A.316L fa'ailoga uamea u'amea ma nati apa'au e fa'aoga mo le fa'amauina o le poloka ma fai ai se fa'amaufa'ailoga malulu.
O se laupapa fa'asalalau lolomi fa'apitoa (PCB) ua mamanuina e tu'ufa'atasia ma le C-PACE-EM system.O sockets sockets masini Suiselani i luga o le PCB e fesootai i graphite electrodes e uaea apamemea apamemea ma apamemea 0-60 vili i le electrodes.O lo'o tu'u le laupapa fa'asalalau lolomi i le fa'avaa o le lomitusi 3D.
O le masini CTCM o lo'o pulea e se polokalame pneumatic actuator (PPD) e fa'atupuina ai le fa'atonuina o le ta'amilosaga e pei o le ta'amilosaga o le fatu.A'o fa'atupula'ia le mamafa i totonu o le potu o le ea, e fa'alautele atu i luga le pa'u o le silicone fe'avea'i, ma fa'amalosi ai le ala i lalo o le nofoaga.O le vaega o le 'ie o le a faʻalauteleina e lenei faʻateʻaina o le vai, faʻataʻitaʻiina le faʻalauteleina o le physiological o le fatu i le taimi o le diastole.I le pito i luga o le malologa, na faʻaogaina ai le faʻamalosia o le eletise e ala i graphite electrodes, lea na faʻaitiitia ai le mamafa i totonu o le potu ea ma mafua ai le faʻaitiitia o vaega o le tino.I totonu o le paipa o loʻo i ai se valve hemostatic ma se masini faʻamalosi e iloa ai le mamafa o le ea.O le mamafa e lagona e le masini faʻapipiʻi e faʻaoga i se aoina faʻamatalaga e fesoʻotaʻi ma le komepiuta.O lea e mafai ai ona mata'ituina pea le mamafa i totonu o le potu kesi.Ina ua oʻo i le maualuga o le mamafa o le potu (tulaga 80 mmHg, 140 mmHg OS), na faʻatonuina le masini e maua ai faʻamatalaga e tuʻuina atu se faʻailoga i le C-PACE-EM system e faʻatupu ai se faʻailoga eletise biphasic mo 2 ms, seti i le 4 V.
Na maua vaega o le fatu ma tulaga faʻaleaganuʻu i totonu o vaieli e 6 sa faia e pei ona taua i lalo: Faʻafeiloaʻi fatu ua seleseleina mai le vaʻa faʻafeiloaʻi i se fata o loʻo i ai le malulu (4° C.) cardioplegia.O le ventricle agavale sa tu'u'ese i se lau ma'i ma tipi i ni fasi vaega 1-2 cm3.O nei poloka poloka na faʻapipiʻiina i lagolago faʻapipiʻi ma mea faʻapipiʻi ma tuʻu i totonu o le taele microtome vibrating o loʻo i ai le vaifofo a Tyrode ma faʻaauau pea le okesene (3 g / L 2,3-butanedione monooxime (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g) . ), 6 mM KCl (0.407 mM) , 6 mM KCl (0.447 mM) (0.447 mM). PES (2.38 g), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M solution), 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml 1 M solution), e oʻo atu i le 1 L ddH2O).O le microtome vibrating na setiina e tipi 300 µm fasi fasi pepa mafiafia i le taimi ole 80 Hz, o le fa'alava o le vibration amplitude o le 2 mm, ma le maualuga o le 0.03 mm/s.Sa si'osi'omia le ta'ele i le aisa ina ia malu ai le vaifofo ma tausia le vevela ile 4°C.Fa'afesuia'i vaega mai le taele microtome ile ta'ele fa'ato'a o lo'o iai le vai vai o le Tyrode fa'aauau pea ile okesene ile aisa se'ia lava le vaega e maua mo le ipu fa'aleaganu'u tasi.Mo aganuʻu transwell, o vaega o le tino na faʻapipiʻi i le sterile 6 mm lautele polyurethane lagolago ma tuʻuina i le 6 ml o le auala sili (199 medium, 1x ITS faaopoopo, 10% FBS, 5 ng / ml VEGF, 10 ng / ml FGF-alkaline ma 2X antibiotic-antifungal).Faʻamalosi eletise (10 V, taimi 1.2 Hz) na faʻaaogaina i vaega o le tino e ala i le C-Pace.Mo tulaga TD, T3 fou ma Dex na faʻaopoopo i le 100 nM ma le 1 μM i suiga taʻitasi.Ua tumu le ala ile okesene a'o le'i suia 3 taimi ile aso.O vaega o mea'ai sa fa'atupuina ile incubator ile 37°C ma le 5% CO2.
Mo aganu'u a le CTCM, sa tu'u vaega o mea'ai i luga o se lomitusi 3D fa'apitoa i totonu o se ipu Petri o lo'o iai le vaifofo a Tyrode.Ua mamanuina le masini e faateleina ai le tele o le fasi fatu e 25% o le vaega o le mama lagolago.E faia lenei mea ina ia le faʻalauteleina vaega o le fatu pe a uma ona faʻafeiloaʻi mai le vaifofo a Tyrode i le ala ma le taimi o le diastole.I le fa'aaogaina o le kelu histoacrylic, o vaega 300 µm mafiafia sa fa'amau i luga o se mama lagolago e 7 mm le lautele.A maeʻa ona faʻapipiʻi vaega o mea i le mama lagolago, tipi ese vaega o loʻo tele ma toe tuʻu i totonu o le taele o Tyrode solution i luga o le aisa (4°C) seʻia lava le vaega ua saunia mo se masini e tasi.Ole taimi ole gaioiga mo masini uma e le tatau ona sili atu ile 2 itula.Ina ua mae'a ona fa'apipi'i vaega e 6 i a latou mama lagolago, ona fa'apotopotoina lea o le masini CTCM.O le potu aganu'u a le CTCM ua fa'atumu muamua i le 21 ml fa'aonaponei fa'ameamea.Fa'afeiloa'i vaega o le 'a'ano i le potu fa'aa'aga ma aveese ma le fa'aeteete so'o se ea ea i se paipa.Ona ta'ita'iina lea o le vaega o le aano i totonu o le pu ma oomi lemu i totonu.Mulimuli ane, tuʻu le pulou eletise i luga o le masini ma faʻafeiloaʻi le masini i le incubator.Ona faʻafesoʻotaʻi lea o le CTCM i le paipa ea ma le C-PACE-EM system.O le pneumatic actuator e tatala ma tatala e le valve ea le CTCM.O le C-PACE-EM system na faʻatulagaina e tuʻuina atu le 4 V i le 1.2 Hz i le taimi o le biphasic pacing mo 2 ms.O le ala na suia faalua i le aso ma o le eletise na suia tasi i le aso e aloese ai mai le faaputuputuina o kalafi i luga o le eletise.Afai e mana'omia, e mafai ona 'ave'esea vaega o a'a mai a latou vaieli fa'aleaganu'u e fa'ate'a ese ai so'o se ea mata'ina atonu na pa'u i lalo.Mo togafitiga MT, T3/Dex na fa'aopoopoina fou i suiga ta'itasi ma le 100 nM T3 ma le 1 μM Dex.O masini CTCM na fa'atupuina ile incubator ile 37°C ma le 5% CO2.
Mo le mauaina o auala faʻalautele o fasi fatu, na atiaʻe ai se masini puʻeata faʻapitoa.O se mea pu'eata SLR (Canon Rebel T7i, Canon, Tokyo, Iapani) sa fa'aogaina ma le Navitar Zoom 7000 18-108mm mata tioata (Navitar, San Francisco, CA).Na fa'atinoina le va'aiga ile vevela ole potu pe a uma ona sui le ala ile ala fou.O le meapueata o loʻo tuʻuina i le 51 ° angle ma le vitio e puʻeina i le 30 faʻavaa i le sekone.Muamua, na fa'aogaina le polokalama fa'apipi'i (MUSCLEMOTION43) fa'atasi ma le Image-J e fa'atatau ai le gaioiga o fasi fatu.O le matapulepule na faia e faʻaaoga ai le MATLAB (MathWorks, Natick, MA, ISA) e faʻamatala ai itulagi e fiafia i ai mo le sasaina o fasi fatu e aloese ai mai le pisa.E fa'aoga matapulepule fa'avasegaina i ata uma i se fa'asologa fa'avaa ona pasi atu lea i le fa'apipi'i MUSCLEMOTION.Muscle Motion e fa'aaogaina le mamafa masani o pika i fa'avaa ta'itasi e fa'atatauina lona fegasoloa'i e fa'atatau i le fa'avaa fa'asino.Fa'amaumauga na fa'amauina, fa'amama ma fa'aoga e fa'atatau le ta'amilosaga taimi ma su'esu'e le fa'asolo atu o le tino i le taimi o le ta'amilosaga o le fatu.O le vitio na pu'eina na mae'a ona fa'aogaina e fa'aaoga ai se fa'amama numera numera zero-phase.Ina ia faʻatusatusaina le faʻalauteleina o le tino (peak-to-peak), sa faia le suʻesuʻega pito i luga e iloa ai le va o tumutumu ma ala i le faailo faʻamau.E le gata i lea, o le detrending e faia i le faʻaaogaina o le 6th order polynomial e faʻaumatia ai faʻailoga faʻafefe.O le polokalame code na fausia i le MATLAB e fuafua ai le gaioiga o le lalolagi, ta'amilosaga taimi, taimi malolo, ma le taimi fa'aitiitia (Polokalame Fa'aopoopo 44).
Mo su'esu'ega fa'aletonu, fa'aaoga ata lava e tasi na faia mo su'esu'ega fa'ainisinia, na matou su'eina muamua ni ata se lua o lo'o fa'atusalia ai tumutumu o gaioioiga (o le pito i luga (luga) ma le pito i lalo (lalo) o le gaioioiga) e tusa ai ma le polokalama MUSCLEMOTION.Ona matou vaevaeina lea o vaega o le tino ma faʻaogaina se ituaiga o faʻataʻitaʻiga algorithm i le vaega faʻapipiʻi (Faʻaopoopo Ata 2a).Ona vaevaeina lea o le vaega vaega i lalo ifo o le sefulu, ma o le mamafa i luga o luga taʻitasi na fuafuaina e faʻaaoga ai le faʻatusatusaga o loʻo i lalo: Strain = (Sup-Sdown) / Sdown, lea o le Sup ma le Sdown o le mamao lea o foliga mai le pito i luga ma lalo o ata o le ie, i le faasologa (Fig.2b Faaopoopo).
Sa fa'amauina vaega o le fatu ile 4% paraformaldehyde mo le 48 itula.Sa fa'amama le tino i le 10% ma le 20% sucrose mo le 1 h, ona fa'asolo lea i le 30% sucrose i le po.Ona fa'apipi'i lea o vaega i totonu o le vevela sili ona lelei (OCT compound) ma fa'a'aisa fa'a'aisa i totonu ole ta'ele aisa/isopentane.Teu poloka poloka fa'apipi'i OCT i le -80 °C se'ia o'o 'ese'ese.Sa saunia fa'ase'e o ni vaega e 8 μm le mafiafia.
Ina ia aveese le OCT mai vaega o le fatu, faʻamafanafana le faʻasolo i luga o se poloka faʻamafanafana ile 95 °C mo le 5 min.Faʻaopoopo le 1 ml PBS i faʻataʻitaʻiga taʻitasi ma faʻafefe mo le 30 minute i le vevela o le potu, ona faʻapipiʻi lea o vaega e ala i le setiina o le 0.1% Triton-X i le PBS mo le 15 minute i le vevela o le potu.Ina ia taofia fa'ama'i fa'apitoa mai le fusifusia i le fa'ata'ita'iga, fa'aopoopo le 1 ml o le 3% BSA solution i fa'ase'e ma fa'asusu mo le 1 itula ile vevela ole potu.Ona aveese lea o le BSA ma fufulu solo i le PBS.Faailoga faataitaiga taitasi i se penitala.O antibodies Primary (diluted 1:200 i le 1% BSA) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) ma le troponin-T (Thermo Scientific; #MA5-12960) na faʻaopoopoina i luga ole 90 minute, ona faʻapipiʻi ai lea o le 1 faʻamaʻi B18 (diluted B18) (diluted B18) (diluted 1:%208) Thermo Scientific; #A16079), faasaga i le lapiti Alexa Fluor 594 (Thermo Scientific; #T6391) mo se 90 minute faaopoopo Fufulu 3 taimi i le PBS Ina ia iloa le pisia sini mai tua, matou te faaaogaina na o le antibody lona lua e fai ma pulea. Mulimuli ane, DAPI nuclear stains sa faaopoopo i se vector stains ma le slida V. fa'alautele) ma Keyence microscope fa'atasi ma le 40x fa'alautele.
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) i le 5 μg / ml i le PBS na faʻaaogaina mo le WGA staining ma faʻaoga i vaega faʻamautu mo minute 30 i le vevela o le potu.Ona fufulu lea o fa'ase'e i le PBS ma fa'aopoopo le Sudan uliuli i fa'ase'e ta'itasi ma fa'asusu mo le 30 minute.Ona fufuluina lea o ata i le PBS ma faʻaopopoina le vectashield embedding medium.Fa'ata'ita'i na va'aia i luga o le Keyence microscope ile 40x fa'alautele.
OCT na aveese mai faʻataʻitaʻiga e pei ona faʻamatalaina i luga.A mae'a ona aveese le OCT, fa'atofu fa'ata i le vaifofo a Bouin i le po.Ona fufulu lea o fa'ase'e i le vai fa'amama mo le 1 itula ona tu'u lea i se vaifofo fuchsin Bibrich aloe acid mo le 10 minute.Ona fufuluina lea o faʻataʻitaʻiga i vai faʻafefe ma tuʻu i totonu o se vaifofo o le 5% phosphomolybdenum / 5% phosphotungstic acid mo le 10 minute.A aunoa ma le fufuluina, fa'afeiloa'i sa'o le fa'ase'e i totonu ole vaifofo lanumoana aniline mo le 15 minute.Ona fufuluina lea o faʻataʻitaʻi i le vai faʻafefe ma tuʻu i totonu o le 1% acetic acid solution mo le 2 minute.Na fa'amago fa'ase'e ile 200 N ethanol ma tu'u ile xylene.O fa'ase'e pisipisia na va'aia i le fa'aogaina o le Keyence microscope ma le fa'amoemoe e 10x.Ole pasene ole vaega ole Fibrosis sa fa'atatau ile fa'aogaina ole Keyence Analyzer software.
CyQUANT™ MTT Cell Viability Assay (Invitrogen, Carlsbad, CA), numera o fa'amaumauga V13154, e tusa ai ma le fa'atonuga a le gaosiga ma nisi o suiga.Aemaise lava, o se ta'otoga tu'i ma le lautele o le 6 mm sa fa'aogaina e fa'amautinoa ai le tele o le tino i le taimi o su'esu'ega MTT.Na fa'apipi'i ta'itasi i totonu o vaieli o se ipu vaieli e 12 o lo'o iai le MTT substrate e tusa ai ma le fa'atonuga a le kamupani gaosi mea.O vaega o loʻo faʻapipiʻiina i le 37 ° C. mo le 3 itula ma o loʻo faʻaogaina e le tino ola le MTT substrate e fausia ai se vailaʻau formazan viole.Toe sui le vaifofo MTT ile 1 ml DMSO ma fa'asusu ile 37 °C mo le 15 minute e aveese mai ai le formazan viole mai vaega fatu.O faʻataʻitaʻiga na faʻafefeteina 1:10 i le DMSO i 96-lelei manino pito i lalo ipu ma lanu viole malosi fuaina i le 570 nm e faʻaaoga ai le Cytation plate reader (BioTek).O faitauga na fa'avasegaina i le mamafa o fasi fatu ta'itasi.
Na suia le faʻasalalauga o le fatu i le faʻasalalauga o loʻo i ai le 1 μCi / ml [5-3H]-glucose (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) mo le faʻaogaina o le kulukose e pei ona faʻamatalaina muamua.A maeʻa le 4 itula o faʻamaʻi, faʻaopopo le 100 µl o le medium i se faʻamau microcentrifuge o loʻo i ai le 100 μl o le 0.2 N HCl.Ona tu'u lea o le paipa i totonu o se paipa fa'afefete o lo'o i ai le 500 μl o le dH2O e fa'asao ai [3H]2O mo le 72 itula i le 37°C.Ona aveese lea o le microcentrifuge tube mai le scintillation tube ma faaopoopo le 10 ml o le scintillation vai.Na fa'atinoina le faitau aofa'i o le fa'aogaina o le Tri-Carb 2900TR su'esu'e su'esu'e vai (Packard Bioscience Company, Meriden, CT, ISA).Ona fuafua lea o le fa'aogaina o le kulukose e fa'atatau i le [5-3H]-glucose gaioioiga patino, le atoatoa o le paleni ma le talaaga, fa'afefeteina o le [5-3H]-i le kulukose e le'i fa'ailogaina, ma le scintillation fa'afetaui lelei.O faʻamaumauga e masani i le tele o vaega o le fatu.
Ina ua maeʻa le homogenization o mea i Trizol, na vavae ese le RNA mai vaega o fatu e faʻaaoga ai le Qiagen miRNeasy Micro Kit #210874 e tusa ai ma le faʻasologa o le gaosiga.O tapenaga a le faletusi RNAsec, fa'asologa ma su'esu'ega fa'amaumauga sa faia e pei ona taua i lalo:
1 μg o le RNA i le faʻataʻitaʻiga na faʻaaogaina e avea ma mea amata mo le saunia o le faletusi RNA.O le fa'asologa o faletusi na fa'atupuina i le fa'aogaina o le NEBNext UltraTM RNA Library Preparation Kit mo Illumina (NEB, ISA) i le mulimuli ai i fautuaga a le gaosiga, ma fa'aopoopo fa'ailoga fa'ailoga i fa'asologa o uiga mo fa'ata'ita'iga ta'itasi.I se faapuupuuga, o le mRNA na faʻamamaina mai le RNA atoa e faʻaaoga ai pulu mageta faʻapipiʻi i poly-T oligonucleotides.O le vaevaega o lo'o fa'atinoina i le fa'aaogaina o cation divalent ile vevela maualuga ile NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer (5X).O le vaega muamua o le cDNA na fa'apipi'iina i le fa'aogaina o fa'asologa o le hexamer ma le M-MuLV reverse transcriptase (RNase H-).O le vaega lona lua o le cDNA e fa'apipi'iina lea e fa'aaoga ai le DNA polymerase I ma le RNase H. O lo'o totoe o lo'o fa'aliliuina i pito fa'ama'i e ala i le gaioiga exonuclease/polymerase.A maeʻa le adenylation o le 3' pito o le vaega DNA, o le NEBNext Adapter faʻatasi ai ma se fausaga matasele lauulu e faʻapipiʻi i ai e saunia ai mo le faʻafefiloi.Mo le filifilia o vaega o le cDNA e sili ona umi 150-200 bp.na fa'amamāina vaega o le faletusi i le fa'aogaina o le AMPure XP system (Beckman Coulter, Beverly, ISA).Ona, 3 μl USER Enzyme (NEB, ISA) faʻatasi ma le tele-filifilia cDNA faʻapipiʻiina ma se mea faʻapipiʻi na faʻaaogaina mo le 15 minute i le 37 ° C ma mo le 5 minute i le 95 ° C aʻo leʻi PCR.Ona faia lea o le PCR e faaaoga ai le Phusion High-Fidelity DNA polymerase, universal PCR primers, ma Index (X) primers.Mulimuli ane, na fa'amamāina oloa PCR (AMPure XP system) ma su'esu'eina le tulaga lelei o le faletusi i le Agilent Bioanalyzer 2100 system.O le faletusi cDNA na faʻasolosolo faʻatasi e faʻaaoga ai le Novaseq sequencer.O faila ata mata'utia mai Illumina na liua i le faitau mata'utia e fa'aaoga ai le CASAVA Base Calling.O fa'amaumauga mata'utia o lo'o teuina i faila faila FASTQ(fq) o lo'o iai fa'asologa faitau ma uiga fa'avae tutusa.Filifili HISAT2 e fa'afetaui fa'asologa fa'asologa o lo'o fa'avasegaina i le Sscrofa11.1 reference genome.I se tulaga lautele, e lagolagoina e le HISAT2 genomes o soʻo se lapoʻa, e aofia ai genomes e sili atu nai lo le 4 piliona faʻavae, ma faʻamautu tulaga faʻaletonu mo le tele o tapulaʻa.O le fa'asoaina o faitau mai fa'amaumauga a le RNA Seq e mafai ona fa'aoga lelei i le fa'aogaina o le HISAT2, le faiga sili ona vave o lo'o avanoa nei, ma tutusa pe sili atu le sa'o nai lo se isi lava metotia.
O le tele o tusitusiga e atagia saʻo ai le maualuga o faʻamatalaga o kenera.E su'esu'eina le maualuga o fa'amatalaga i le tele o tusitusiga (fa'asologa o fa'asologa) e feso'ota'i ma le genome po'o le fa'asili.Ole aofa'i o faitau e fa'atatau ile fa'aaliga fa'atupu kenera, umi ole gene, ma le loloto ole fa'asologa.FPKM (vaega i le afe taitoalua faavae o tusitusiga faʻasologa i le miliona paʻu faavae) na fuafuaina ma P-taua o faʻamatalaga eseese na fuafuaina e faʻaaoga ai le DESeq2 afifi.Ona matou fuafuaina lea o le fua faatatau o le suʻesuʻeina sese (FDR) mo tau P taʻitasi e faʻaaoga ai le Benjamini-Hochberg method9 faʻavae i luga o le R-function ua fausia "p.adjust".
O le RNA vavae ese mai vaega o le fatu na liua i le cDNA i le maualuga o le 200 ng / μl e faʻaaoga ai le SuperScript IV Vilo Master mix mai Thermo (Thermo, cat. No. 11756050).Quantitative RT-PCR na faia i le faaaogaina o le Applied Biosystems Endura Plate Microamp 384-well transparent reaction plate (Thermo, cat. No. 4483319) ma microamp optical adhesive (Thermo, cat. No. 4311971).O le fa'afefiloi fa'afoliga e iai le 5 μl Taqman Fast Advanced Master mix (Thermo, cat # 4444557), 0.5 μl Taqman Primer ma le 3.5 μl H2O fa'afefiloi i le vaieli.Sa fa'atautaia ta'amilosaga masani qPCR ma sa fuaina le aofa'i o le CT e fa'aaoga ai le Applied Biosystems Quantstudio 5 mea faigaluega PCR taimi-moni (384-well module; oloa # A28135).Taqman primers na fa'atau mai Thermo (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss068795_m1) ), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1 ), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss04245588_m1) O le faʻataʻitaʻiga uma o le CT na faʻatumauina le faʻataʻitaʻiga o le CT sm1.
O faʻasalalauga faʻasalalauga o le NT-ProBNP na iloiloina e faʻaaoga ai le pusa NT-ProBNP (puaa) (Cat. No. MBS2086979, MyBioSource) e tusa ai ma le faʻasologa o le gaosiga.Fa'apuupuu, 250 µl o fa'ata'ita'iga ta'itasi ma fa'ata'ita'iga na fa'aopoopoina fa'alua i vaieli ta'itasi.A mae'a loa ona fa'aopoopo le fa'ata'ita'iga, fa'aopoopo le 50 µl ole Assay Reagent A ile vaieli ta'itasi.Lulu malie le ipu ma fa'amaufa'ailoga.Ona fa'a'ofuina lea o fualaau i le 37°C mo le 1 itula.Ona su'e lea o le vaifofo ma fufulu vaieli 4 taimi i le 350 µl o le 1X wash solution, fa'a'a'u le vaifofo fufulu mo le 1-2 minute i taimi ta'itasi.Ona fa'aopoopo lea o le 100 µl o le Assay Reagent B ile vaieli ma fa'amaufa'ailoga i le ipu fa'amau.O le laulau na lulu lemu ma fa'asusu i le 37°C mo le 30 minute.Fufulu le vaifofo ma fufulu vaieli 5 taimi ile 350 µl ole 1X fufulu vaifofo.Fa'aopoopo le 90 µl o le vaifofo o le substrate i vaieli ta'itasi ma fa'amau le ipu.Taofi le ipu i le 37°C mo le 10-20 minute.Fa'aopoopo le 50 µl Stop Solution i vaieli taitasi.Na vave fuaina le ipu e faʻaaoga ai le Cytation (BioTek) plate reader seti i le 450 nm.
Sa faia su'esu'ega malosi e filifili ai le tele o vaega e maua ai le >80% malosiaga e iloa ai se 10% suiga atoatoa i le parakalafa ma le 5% Type I error rate. Sa faia su'esu'ega malosi e filifili ai le tele o vaega e maua ai le >80% malosiaga e iloa ai se 10% suiga atoatoa i le parakalafa ma le 5% Type I error rate. Анализ мощности был выполнен для выбора размеров групп, которые обеспечат >80% мощности для обнаружения 10% раметра с 5% частотой ошибок типа I. Sa faia le su'esu'ega o le malosi e filifili ai le tele o vaega e maua ai le >80% malosiaga e iloa ai le 10% o le suiga o le parameter ma le 5% Type I error rate.进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I他的生。进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I他的生。 Был проведен анализ мощности для выбора размера группы, который обеспечил бы > 80% мощности для обнаруглежения я параметров и 5% частоты ошибок типа I. Sa faia se su'esu'ega malosi e filifili ai se vaega tele e maua ai le > 80% le malosi e iloa ai le 10% o le suiga o le parameter ma le 5% ituaiga I fua faatatau sese.Na filifilia fa'afuase'i vaega o 'ie a'o le'i faia le su'ega.O su'esu'ega uma e tauaso ma fa'ata'ita'iga na fa'ato'a fa'avasega pe a uma fa'amaumauga uma.GraphPad Prism software (San Diego, CA) sa fa'aaogaina e fa'atino ai su'esu'ega fa'afuainumera uma. Mo fa'amaumauga uma, p-taua na manatu taua i tau <0.05. Mo fa'amaumauga uma, p-taua na manatu taua i tau <0.05. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Mo fa'amaumauga uma, p-taua na manatu taua i tau <0.05.对于所有统计数据，p 会在伀<0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据，p 会在伀<0.05 时被认为是显着的。 Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Mo fa'amaumauga uma, p-taua na manatu taua i tau <0.05.Na faia le su'ega-t a Tamaiti aoga lua-tailed i fa'amaumauga ma na'o le 2 fa'atusatusaga.O le ANOVA e tasi-auala pe lua-auala na faʻaaogaina e fuafua ai le taua i le va o le tele o vaega.A'o faia su'ega post hoc, sa fa'aoga le fa'asa'oga a Tukey e fa'atatau mo le tele o fa'atusatusaga.O fa'amaumauga a le RNAsec e iai fa'amatalaga fa'afuainumera fa'apitoa pe a fa'atatau le FDR ma le p.adjust e pei ona fa'amatalaina i le vaega Metotia.
Mo nisi faʻamatalaga e uiga i suʻesuʻega suʻesuʻega, vaʻai i le Nature Research Report faʻamatalaga e fesoʻotaʻi ma lenei tusiga.