Tapadh leibh airson tadhal air Nature.com.Chan eil ach beagan taic CSS aig an tionndadh brobhsair a tha thu a’ cleachdadh.Airson an eòlas as fheàrr, tha sinn a’ moladh gun cleachd thu brobhsair ùraichte (no cuir à comas Modh Co-chòrdalachd ann an Internet Explorer).Anns an eadar-ama, gus dèanamh cinnteach à taic leantainneach, bheir sinn seachad an làrach gun stoidhlichean agus JavaScript.
Tha feum air earbsach ann an siostam Vitro a dh 'fhaodadh ath-riochdachadh ceart a dhèanamh air àrainneachd fheasiùileach a' chridhe airson deuchainn dhrogaichean.Tha cuingealachadh ruigsinneachd de shiostaman Cultar Tèartachd Daonna air leantainn gu mìneachaidhean mearachdach de bhuaidhean drogaichean Cardiac.An seo, tha sinn air modal cultair teannachaidh carantas a leasachadh gu bheil electromegheacan-eòlas a 'brosnachadh sliseagan cridhe agus a' dol tro shìneadh disclogy anns na h-ìrean a 'cheartais agus diastolic de chearcall an turstar.Às deidh 12 latha de chultar, leasaich an dòigh-obrach seo ann an comas obrachaidh earrannan cridhe, ach cha do ghluais iad gu tur an gnìomh structarail aca.Mar sin, às deidh sgrìonadh Molecule Beag, lorg sinn gu bheil 100 nm trìmeonorrounine (T3) agus 1 μm DexamehoSe (Dex) a 'cumail suas mi mhealladh nan earrannan airson 12 latha.Còmhla ri làimhseachadh T3 / Dex, lorg air gnàthasan CTCM air an cumail ri cruthan ath-dhealbhachaidh, comas obrachaidh, gnìomhachd metabolic, agus ionracas structarail aig an aon ìre ri clò-beò de chridhe airson 12 latha.A bharrachd air an sin, cus sìneadh de stuth tuarasta ann an cultar a 'comharrachadh comharrachadh carradh hypertrophic, a' toirt fianais airson CTCM a thaobh suidheachaidhean hypertrophic a tha air a bhrosnachadh le ceannard Cardiac.Anns a 'cho-dhùnadh, faodaidh CTCM Modaligh-eòlas agus Patophys-eòlas a' chridhe ann an cultar thairis air ùine mhòr, a 'comasachadh sgrìonadh dhrugaichean earbsach.
Mus tig rannsachadh clionaigeach, tha feum ceart ann an t-àrainneachd Vitro gu ceart a 'gintinn gu ceart cridhe cridhe an duine.Bu chòir siostaman mar sin pìos meacanaigeach, ìre cridhe atharraichte, cridhe, agus togalaichean electrophysiology a chur.Tha modalan bheathaichean air an cleachdadh gu cumanta mar àrd-ùrlar sgrìonaidh airson eòlas-inntinn Cardiac le earbsach de dhrogaichean ann an cridhe nan daonna1,2.Aig a 'cheann thall tha a' mhodal deuchainneach ris a 'chultar deuchainn-mhath cridhe (CTCM) na mhodail a tha fìor dhoirbh agus sònraichte airson diofar eadar-obrach agus pathalys cridhe an duine3.Às aonais sin tha a bhith a 'cuingealachadh a bhith a' cuingealachadh a bhith a 'cuingealachadh a bhith a' cleachdadh leigheasan ùra airson fàilligeadh cridhe4,5 agus tha e air ionnsaigh dhrogaichean a thoirt do Cardioxicity Drogaichean mar phrìomh adhbhar airson a 'mhargaidh a mhìneachadh.
Thairis air an deichead a chaidh seachad, chaidh ochdnar nach deach dhrogaichean neo-cardioiaclar a thoirt a-mach à cleachdadh clionaigeach oir tha iad ag adhbhrachadh gum bi iad ag adhbhrachadh gun tug iad a-mach à Arrythmias Ventricular agus bàs obann.Mar sin, tha feum a bharrachd air ro-innleachdan sgrìonaidh ro-shoilleir airson èifeachdas cardiovascular a mheasadh.Tha an cleachdadh o chionn ghoirid de chill gèist cealla-brosnachaidh cealla-brosnachaidh (Hips-cm) ann an sgrìobadh dhrogaichean agus deuchainn puinnseanachd a 'toirt seachad fuasgladh pàirt den duilgheadas seo.Ach, tha nàdar neo-àbhaisteach nan cnapan-stadan-cms agus dìth iom-fhillteachd ioma-chudromach de chuingealachadh mòra den dòigh seo.Tha sgrùdaidhean o chionn ghoirid air sealltainn gum faodar faighinn thairis air a 'chuingealachadh seo le bhith a' cleachdadh Hipiptean tràth le cam-uisge a dh 'aithghearr agus mean air mhean àrdachadh dealain thar ùine.Ach, chan eil na feartan electrophelly agus cùmhnantail sin sin a 'toirt an t-sònaidh Hips-cm sin agus cùmhnantan cùmhnantail myocardium inbheach.A bharrachd air an sin, tha structar nas toinnte aig ìre Daonnad Cardiac, a 'toirt a-steach ceallan cealla, niguns, agus fiblecballasan, eadar-cheangailte le seataichean sònraichte Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Matrix Marrycelelular.Tha an ceartas seo de bhuidhnean neo-cardiomyocyotyte11,12,13 anns a 'chridhe mamalan inbheach na chnap-starra mòr gus a bhith a' dèanamh suas stuth cairteal fa leth a 'cleachdadh seòrsan cealla fa leth.Bidh na prìomh chuingealachaidhean sin a 'cur cuideam air cho cudromach sa tha dòighean a leasachadh airson cultair a chultar gu bhith a' cultair gu bhith a 'cumhachan myocardial làn chumhachan fiosaigeach agus cùraman.
Tha earrannan de tha cumhach (300 μM) de na h-earrannan de chridhe an duine air a bhith na mhodail gealltanach de Myocard Daonn Daonna.Tha an dòigh seo a 'toirt cothrom air siostam iomagadachd 3D iomlan coltach ri clò cridhe dhaoine.Ach, gu 2019, bha cleachdadh earrannan cridhe cumhachdach air a chuingealachadh leis a 'chultar Goirid (24 h) cultair.Tha seo air sgàth grunn nithean a 'toirt a-steach dìth sìneadh corporra, an eadar-aghaidh adhair-he-adhair, agus cleachdadh meadhanan sìmplidh nach eil a' toirt taic do fheumalachdan tais cridhe.Ann an 2019, sheall grunn bhuidhnean rannsachaidh gu urrainn do nithean meacanaigeach a chur air siostatan cultar os cionndairdic, agus brath-eòlas dorriac a leasachadh.Tha dà sgrùdadh eireachdail 17 agus 18 a 'sealltainn gu bheil buaidh mhath aig luchd-meacanaigeach neo-sheasmhach air a bhith a' toirt buaidh mhath air pretrype candiac rè cultair.Ach, cha do chleachd na sgrùdaidhean sin a bhith a 'luchdachadh The Desico-Meacocho-Meacanaigeach Pysico-Meacanaigeach de chearcall na Creachainn, bho chaidh na roinnean cridhe a luchdachadh le feachdan làn-inntinneach isometric 17 no loidhneach Auxotonic Auxotic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic Auxotonic auxotonic auxotonic auxotonic auxotonic Auding 18.Mar thoradh air na modhan sìneadh clò seo thàinig na modhan sìneadh seo ann an cur an gnìomh grunn gheutairean cardiac no cus de ghinean co-cheangailte ri freagairtean sìneadh anabarrach.Gu sònraichte, pitoulis et al.19 Leasaich amar cultar sliseag slisinneachd cridhe glaodhach airson ath-thogail baidhsagal Cridible a 'cleachdadh Feachd Ro-làimhseachaidh Force Transducener agus draibhearan teannachaidh.Ged a cheadaicheas an siostam seo nas cruinne ann am modaladh cearcallach Vitro Crideag, iom-fhillteachd agus tro bhith a 'cuingealachadh an dòigh a tha a' cuingealachadh an t-siostam seo.O chionn ghoirid tha an obair-lann againn a leas a leasachadh o chionn ghoirid le bhith a 'cleachdadh brosnachadh dealain agus meadhan dealain gus comas obrachaidh de dh' àirde de phorcine agus tathall cridhe dhaoine a chumail suas airson suas ri 6 latha20,21.
Anns an làmh-sgrìobhainn a th-ann an-dràsta, tha sinn a 'toirt cunntas air Modail Cultar Tuarastail Cardiac (CTCM) a' cleachdadh earrannan den chridhe porcaine a tha a 'toirt a-steach cuilbheann humoralachFaodaidh an CTCM seo aithneachadh ro-aithris dhrogaichean ro-chlèireach gu ìre a chaidh a choileanadh le bhith a 'toirt seachad siostam cridhe / Patophys-eòlas Cosgais / Patophysical of Mamalian airson deuchainn dhrogaichean ro-chlionaigeach.
Tha comharran meacanaigeach Hemodynamic a 'cluich àite deatamach ann an iomairt Cardiomyocyte ann an Vitro 22,23,24.Anns an làmh-sgrìobhainn a th-ann an-dràsta, tha sinn air CTCM a leasachadh (Figear 1A) a dh 'fhaodadh a bhith a' cur a-mach brosnachadh cridhe is meacanaigeach aig tricead fiosaigeach (1.2 HZ, 72 Beats gach mionaid).Gus cus stuth a sheachnadh a sheachnadh aig diasgall, chaidh inneal clò-bhualaidh 3D a chleachdadh gus meud clò a mheudachadh 25% (Fig. 1b).Chaidh ùine dealain a mheudachadh leis an t-siostam C-Pace gus 100 ms a thòiseachadh ro Systole a 'cleachdadh siostam togail dàta gus làn-chuir a-rithist a dhèanamh air a' chearcall a 'Mhàl.Bidh an siostam cultar as ciùr a 'cleachdadh actuator pneumach prògramaichte (a' Ghearmailt, a 'Ghearmailt) a' leudachadh membrane siliceone silicone a 'leudachadh leudachadh air sliseagan cridhe san t-seòmar mhòr.Bha an siostam ceangailte ri loidhne adhair taobh a-muigh tro tar-chuir cuideam, a thug air an cuideam a chuir air atharrachadh gu ceart (± 1 mmhg) agus ùine (± 1 ms) (Fig. 1c).
Ceangail an roinn aodaich gu Cladachadh Taic 7 MM, a chithear ann an gorm, taobh a-staigh seòmar cultair an inneal.Tha Seòmar Cultar air a sgaradh bhon t-seòmar adhair le membran sùbailte tana sùla tana.Cuir gasket eadar gach seòmar gus casg a chuir air aodion.Tha eleclecaidean grafaidh a 'toirt seachad brosnachadh dealain.B Riochdachadh sgeama den inneal tais mòr, fàinne iùil agus cuingealachaidh.Tha na h-earrannan taisse (donn) air an cur air an inneal mu choinneimh leis an fhilleadh treòrachaidh air a chuir anns an groove air oir a-muigh an inneal.A 'cleachdadh an iùl, cuir an fhàinne taic a bha a' còmhdach gu sgiobalta le carraidh arrylive thairis air an earrann de stuth ris a 'Chaitriac.C Graf a 'sealltainn na h-ùine brosnachadh dealain mar ghnìomh de chuid de chuid de chumhachd an t-Seòmair fo smachd actuator pneumach (ppd).Chaidh inneal togail dàta a chleachdadh gus a bhith a 'sioncronachadh brosnachadh dealain a' cleachdadh mothalairean cuideam.Nuair a ruigeas an cuideam sa chultar a bhios a 'ruighinn an stairsneach suidhichte, thèid comharra pulse a chuir chun an c suidheachas gus brosnachadh dealain a bhrosnachadh.D ìomhaigh de cheithir ctcms air an cur air sgeilp giùlain.Tha ceithir innealan ceangailte ri aon ppd tro chuairt-chuairt, agus bidh luchd-mothachaidh cuideam air a chuir a-steach don bhalbha HEMESTICIC gus sùil a chumail air cuideam anns a 'chuairt chreute.Anns gach inneal tha sia earrannan clò.
A 'cleachdadh aon neach-atculator aon-bhualtachd, bha e comasach dhuinn smachd a chumail air 4 innealan CTCM, gach fear dhiubh sin a chumail air 6 roinnean clò (Fig. 1d).Ann an CTCM, cuideam an adhair tha an t-seòmar adhair air a thionndadh gu cuideam sioncronous anns an t-Seòmar Siongail agus a 'toirt a-steach leudachadh beul-aithris den sliseag cridhe (figear 2a agus film leasaichte 1).Leudaich luchdadh de stuth aig 80 mm HG.Ealain.Sheall e sìneadh de earrannan clò le 25% (Fig. 2b).Thathas air sealltainn gu bheil an pìos ceudad seo a bhith a 'freagairt ri fhad-eòlas brath-eòlasach de 2.2-2.3 μm Airson Cùmhnant 52,19,25.Chaidh gluasad clò a mheasadh a 'cleachdadh roghainnean camara gnàthaichte (Figear Leasachail 1).Bha amaideachd agus astar de ghluasad clò (Fig. 2c, d) a 'bruidhinn ri systole agus diasttole (Fig. 2b).Sìneadh agus astar de stuth tuarastal a-steach rè giorrachadh agus bha foiseach fhathast seasmhach airson 12 latha ann an cultar (Fig. 2F).Gus buaidh a dhèanamh air buaidh brosnachadh dealain air cùmhnant rè cumhnant, leasaich sinn dòigh airson a bhith a 'dearbhadh dì-cheadachadh a' cleachdadh algorithm a 'cleachdadh algorithm a' cleachdadh eadar lethfhainn le agus às aonais brosnachadh dealain.An aon earrann den chridhe (Fig. 2F).Ann an sgìre a ghabhas a thathar a 'gearradh (R6-9), bha an bholtachd aig ionad dealain 20% nas àirde na às aonais brosnachadh dealain, a tha a' nochdadh na tha a 'cur ri bhith a' connspaideach.
Bidh riochdachaidhean riochdachail de chuideam an seòmar-adhair, cuideam an t-Seòmair, agus tomhasan gluasaid gluasaid a dh 'Atharraicheas cuideam an t-Seòmisg an t-Seòmar Soblaich, ag adhbhrachadh gluasad co-fhreagarrach den t-Slice Lawuet.b lorg riochdachail de shìneadh sa cheud (gorm) de earrannan clò a rèir pìos sa cheud (orains).C Tha a bhith a 'tomhas a' ghluasaid tomhaiste de slice a 'Cheteriac co-chòrdail ris an astar tomhaiste.(d) trajective traujtorerations gluasad rothaireachd (loidhne gorm) agus astar luath (loidhne dotsted orains) ann an sliseag a 'chridhe.e tomhas de chòrr air baidhsagal (N = 19 sluasaidean gach buidheann, bho dhiofar mhucan), bho dhiofar fhlitheanas gach buidheann, bho dhiofar mhucan), gluasad clò (n = 25).sliseagan) / buidheann bho dhiofar mhucan), astar steys (n = 24 (d0 (d0 (d0) sliseagan / buidheann de dhiofar mhucan).Cha do sheall eadar-dhealachadh mòr oileanach dà-earbaill ann am paramadair sam bith.F Riochdairean Strain Straoin de earrannan clò le (dearg) agus às aonais (Blue) (gorm) de dh 'earrannan clò bhon aon roinn.Bidh na pannalan ìosal a 'sealltainn na h-ìre den àireamh sa cheud ann an cuideam ann an earrannan clò agus às aonais brosnachadh dealain ann an deich raointean bho dhiofar sgìrean. (n = 8 sliseagan / buidheann bho dhiofar mhucan, thathas a 'dèanamh deuchainn de dheuchainn oileanach oileanach-earbaill; **** p <0.01, * p <0.05). (n = 8 sliseagan / buidheann bho dhiofar mhucan, thathas a 'dèanamh deuchainn de dheuchainn oileanach oileanach-earbaill; **** p <0.01, * p <0.05). (n = 8 срезов / Групу ОТ От разнта; дтьюд 0,0001, * P <0,05). (n = 8 earrannan / buidheann bho dhiofar mhucan, deuchainn-t oileanach dà-earbaill; **** p <0.01, ** p <0.05). (N = 8 片 / 组, 来自 不同 的 猪 猪 猪, 学生进行 t <; **** P <0.01, * p <0.05). (N = 8 片 / 组, 来自 不同 的 猪 猪 猪, 学生进行 t <; **** P <0.01, * p <0.05). (n = 8 срезов / Групусвих, дВюю indнта; **** p <0,0001, * p <0,05). (n = 8 earrannan / buidheann, bho dhiofar mhucan, deuchainn-tail dà-earbaill; **** p <0.01, * p <0.05).Bidh bàraichean mearachd a 'riochdachadh cuibheasachd cuibheasach cuibheasach.
Anns an t-Siostam Cultar Slicus Seinnidh a thàinig roimhe bho bhith a 'cleachdadh BIMIMFetic [21], bha sinn a' cumail comas obrachail, agus ionracas structarail sliseagan airson 6 latha le bhith a 'cleachdadh am brosnachadh dealain agus a' cur an sàs de bhrosnachadh meadhanach.Ach, às deidh 10 latha, thuit na h-fhigearan sin gu sgiobalta.Bheir sinn sùil air na h-earrannan air an cultar anns an t-siostam cultar cumhachd cliùiteach rèil againn roimhe agus cleachdaidh sinn ar meadhan a th 'ann roimhe mar bhrosnachadh mc agus brosnachadh MC fo bhuileachadh meacanaigeach is dealain aig (CTCM).ris an canar.An toiseach, cho-dhùin sinn gu robh brosnachadh meacanaigeach gun brosnachadh dealain gu leòr gus comas obrachaidh clò a chumail suas airson 6 latha (Fig a bharrachd. 3a, b).Gu h-inntinneach, le toirt a-steach brosnachadh corporra agus dealain a 'cleachdadh Stcm, dh' fhan comas obrachaidh roinnean cridhe 12-latha an aon rud ri taobhan CTRL, mar a chithear le sgrùdadh CTRL (Fig. 1).3a).Tha seo a 'toirt a' bheachd gum faod modh meacanaigeach agus ath-mhìneachadh cearcall na Crìostar a chumail suas airson dà uair cho fad 's a chaidh aithris san t-siostam cultar statach aca roimhe.Ach, sheall measadh air ionracas structarail de dhiofar earrannan le bacadh air Troponin T agus Connexin 43 nas àirde ann an smachdan mc a 'dol air an aon latha.Ach, cha robhas a 'cumail sùil air faireachdainnean connexin 43 agus cha robh cruthachadh z-diosc air a chumail suas (Fig. 3b).Bidh sinn a 'cleachdadh frèam fiosrachaidh fuadain (AI) gus tomhas-phìoban domhainn a thomhas air teannachadh Tropen-T agus Cooulingsion gu fèin-ghluasadach a' tomhas ionracas structarail agus fluorescen of cridhe a thaobh neart sgiathan.Bidh an dòigh seo a 'cleachdadh lìonra neurour Convolutional (CNN) agus frèam ionnsachaidh domhainn gu earbsach a' stiùireadh teannachadh structarail tapiac ann an dòigh fèin-ghluasadach ris a 'chùis-mhadhagadh agus mar a chaidh a mhìneachadh san iomradh.26. Sheall mac de stuth structar nas fheàrr aig a 'chiad 0 an coimeas ri earrannan smachd statach.A bharrachd air an sin, nochd staining Trichrome Masson ceudad gu math nas ìsle de fhiodh an coimeas ri suidheachaidhean smachd air latha 12 de chultar (Fig. 3c).Fhad 's a mheudaich CTCM comas obrachaidh earrannan clò cridhe aig latha 12 gu ìre coltach ri tomad cridhe ùr, cha tug e gu mòr air ionracas structarail nan earrannan cridhe.
Tha graf bàr a 'sealltainn tomhas de chomas comasachd Mtt Fred (D0) no ann an CTRL) (N = 0.01 P <0.01 an coimeas ri d 12 CTRL). Tha graf bàr a 'sealltainn tomhas de chomas comasachd Mtt Fred (D0) no ann an CTRL) (N = 0.01 P <0.01 an coimeas ri d 12 CTRL).Tha an hissegram a 'sealltainn na tha comas obrachaidh earrannan Mition Malairt Mition (D12) no Cultar Roinne) no CTCM (D12 fo), tha deuchainn aon-shligheach ann an diofar mhucan,#### p <0,0001 по Сравнению Сنвнению С D12 CTRL). #### P <0.0001 an coimeas ri D0 agus ** p <0.01 an coimeas ri D12 CTRL). a 条形图 显示 在 静态 培养 培养 (D12 CTRL) 或 CTCM (D12 MC) (N = 量化 量化 切片 切片 培养) 相比 rova ​​相比; 与 d0 相比, #### P <0.0001, 与 D12 CTRL 相比, ** p <0.01). a 条形图 显示 在 静态 培养 (D12 CTRL) 或 CTCM (D12 MC) (N = = 心脏 猪 猪 心脏 心脏 的 心脏 心脏 猪 猪 心脏 心脏 心脏 心脏 心脏 心脏 心脏 心脏 心脏 心脏 猪 心脏 心脏 猪 猪 猪 心脏 心脏 心脏 心脏 心脏 c 心脏 d12 ctrl 相比, ** p.)Historog a 'sealltainn tomhas comas obrachaidh MtTure ann an earrannan Ar-a-mach (D0) no CTCM (D12 MC)), 15 Iuchar) Earrannan / Buidheann O chionn ghoirid a-mhàin;#### p <0,0001 по Сравнению С DR <0,01 по Сравнению С D12 CTRL). #### p <0.0001 an coimeas ri D0, ** p <0.01 an coimeas ri D12 CTRL).B Troponin-t (uaine), Connexin 43 (dearg) agus daptions) ann an òrdughan cridhe iomallach (CTRL) no Cùmhnantan CTCM) (MC) le 12 latha) de ìomhaighean InfunofloofLoflo prective (MC)) de na h-ìomhaighean geamhraidh eadar-dhealaichte (mc)) de na h-ìomhaighean geamhraidh / sgèile bàn = 100 μm). Tha mòran de mheud de na h-iomlan de dhragh cruaidh as chridhe (n = 7 (D0 (D12 CTRL), #### PiCh) an coimeas ri D12 CTRL). Tha mòran de thlachdmhor brìoghmhor a 'tomhas de dhragh structarail as cridhe (n = 7 (D0 (D12 CTRL), #### P <0.0001 an coimeas ri D12 CTRL). Количественная оценка струсти ской серезов / г руп разных Свиней, проводится поест1 по Сравнению С D12 CTRL). Measgachadh de dhragh structarail de stuth cridhe cridhe le eòlas fuadain (N = 7 (D0 CTRL), #### P <0.0001 an coimeas ri D12 CTRL).人工 智能量化 心脏 组织 结构 完整性 (n = 7 (D0 (D12 CTRL), 30 de mhuc eadar-dhealaichte, #### PiLs / buidheann aon de na sliseagan eadar-dhealaichte, ###) Triceagan / buidheann aon de gach seòrsa 相比, **** P <0.0001 CTRL 相比).人工 智能量化 心脏 组织 结构 完整性 (n = 7 (D0 (D12 CTRL), 30 de de dhiofar mhucan / buidheann aon-shligheach; #1.0001 <D12 CTRL 相比). Искусственный интелиту струа), 7 (D12 MC) срезов / Групу Каждой из нинtй, Те Anест1 по Сравнению С D12 CTRL). Ionnsiochd fuadain gus tomhas structarail torrerace of carandiac a thomhas (N = 7 (D0 (D12 CTRL), #### P <0.0001 an coimeas ri D12 CTRL). c de dh 'ìomhaighean riochdachail (clì) agus tomhas (deas) airson sliseagan cridhe a dh' fhaicsinn le staincean cridhe (n = 10 sliseagan / buidheann pibers c deiseachan riochdachail (clì) agus tomhas (deas) airson sliseagan cridhe a dh 'fhaicsinneach stins (300 μM) (n = 10 plich-starra an coimeas ri D0 agus **01 p <0.001 an coimeas ri D12 CTRL). c deiseachan riochdachail (clì) agus tomhas (deas) de earrannan cridhe a dh 'fhaicsinneach stains camon (n = 10.0001 an coimeas ri D12 CTRL). C 用 Mismon 三 色 染料 染料 染色 的 心脏 切片 的 的 代表性 图像 μ μ μ μ 来自 来自 切片 切片 来自 切片 切片 切片 切片 切片 切片 来自 来自 来自 切片 来自 来自 来自 切片 来自 切片 来自 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 d12 ctrl 相比). C 用 Mismon 三 色 染料 染料 的 切片 切片 的 代表性 代表性) 裸尺度 (= μ 单 切片 向 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 向 切片 向 向 向 向 向 向 向 向 切片 向 向 向 向 向 向 向 向 向 向 向 向 向 向 组 向 与 向 组 向 向 与 与 d12 ctrl 相比). C de dhealbhan riochdachaidh (clì) agus tomhas (deas) earrannan cridhe a dh 'fhaicsinn le meadhan-shligheach stainge (30 μM) (30 ^ 0.001 an coimeas ri D12 CTRL).Bidh bàraichean mearachd a 'riochdachadh cuibheasachd cuibheasach cuibheasach.
Bhanaich sinn beachd-bhòireach dhaibh le bhith a 'cur mhodailean beaga ris a' Chultair, Ionracation Cardiomyocyocity air a lughdachadh aig Cultar CTCM.Mar sin sheall sinn airson moileilean beaga a 'cleachdadh ar cultaran smachd statach (21 air sgàth an àireamh bheag de fheartan a bha a' diùltadh.Chaidh DexamethatEne (Dex), tridachthyroreronine (T3), agus SB431542 air an taghadh airson na sgrìn seo.Chaidh na moileilean beaga sin a chleachdadh roimhe seo ann an cultaran Hipsg-cm gus atharrachadh a bhrosnachadh le bhith a 'meudachadh sarmydocytes le bhith a' sìor fhàs, t-tubules, agus astar brosnachaidh.A bharrachd air an sin, tha an dà chuid dex (glcococoricioid) agus SB eòlach air sèid às sèididh29,30.Mar sin, rinn sinn deuchainn a dhèanamh am biodh toirt a-steach aon no measgachadh de na moileilean beaga sin a 'leasachadh ionracas structarail earrannan.Airson sgrìonadh tùsail, chaidh dòsan gach todhar a thaghadh stèidhichte air na mòr-mhodalan Cultar Cill (1 μm Dex27, 100 NM T327, agus 2.5 μm sb31).Às deidh 12 latha de chultar, thàinig eadar-obrachadh structarail cardiomyeocyeocydocydocydocysey (figearan leasaichte 4 agus 5).A bharrachd air an sin, rinn cleachdadh dùbailte no dùbailte de na tha a 'toirt a-steach buaidhean às-ghluasadach T3 agus DEX an coimeas ri dùmhlachd àbhaisteach (Fig a bharrachd. 6a, b).
Às deidh gnàthachadh a 'chiad sgrìonadh, rinn sinn coimeas aig ceannard ceannard (Figear 4a): CTRL: RIAGHAILTEAN CHULTALAN ANN AN CULT Cultar Brosnachail a' cleachdadh ar meadhan a leasachadh;20.21 TD: T3 agus CTRL SA air a chur ris Diciadain;MC: Rangachadh cridhe air a chultar ann an CTCM a 'cleachdadh ar meadhan a tha a' faighinn a-mach roimhe;agus MT: CTCM le T3 agus Dex a chuirear ris a 'mheadhan.Às deidh 12 latha de dh 'àiteachadh, dh' fhuirich comas obrachaidh MS agus MT mar an ceudna mar a rinn Motsa Ensay (Fig. 4b).Gu h-inntinneach, cha do nochd T3 agus DEX gu Cultaran Transwell (TD) Leasachadh mòr ann an aimsir, a 'nochdadh àite cudromach de bhun-stèidheachdan meacanaigeach ann a bhith a' cumail suas comas obrachaidh na h-earrannan de chridhe.
Tha diagram dealbhaidh deuchainneach a 'sealltainn na ceithir Cumhachan Cunnt a' cleachdadh gus buaidh a thoirt air buaidhean brosnachaidh meacanaigeach agus T3 / Dex Inflesgation air meadhan airson 12 latha. B Tows Graf a 'sealltainn togail comas obrachaidh 12 latha de chumadh puist (CTRL, MC, RI12 MT), ### P <0.001 an coimeas ri D0 agus ** p <0.01 an coimeas ri D12 CTRL). B Tows Graf a 'sealltainn togail comas obrachaidh 12 latha de chumadh puist (CTRL, MC, RI12 MT), ### P <0.001 an coimeas ri D0 agus ** p <0.01 an coimeas ri D12 CTRL). B истограма Показы Количести чуловия Культив ирования (контроль сравими СNTER), 12 (D12 MC) Срезов / групу От разных Свиней, проводитстhно و ** по Сنвнению С D12 CTRL). B Tha grafar bar a 'sealltainn tomhas obrachail aig 12 latha a' chumhachd gach dealbh de chumhachan cultair (F12T), ### P <0.001 vs d0 agus ** p < 0.01 an taca ri D12 CTRL). b 条形图 显示 所有 4 种 培养 条件 条件 (CTRL, Mc 和 Mt) 与 新鲜 心脏 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 猪 le p <0.001 与 d0相比, ** p <0.01 与 D12 控制).B 4 12 (D12 MC) B истограмtor, покваююая ВсловнивиВи срерами срерами срерра (d0) (N = 18 (D0), 15 (D12 CTRL, D12 TD разний 12 (Tionndaidhean Aoру 1 по Сравнению Сравнению С diomвнению С D0, ** P <0,01 по сравнению с контролем D12). Bòmas BATTUG a 'sealltainn a h-uile cumhachd 4 cumhaichean cultar (MC agus MT) an coimeas ri earrannan Friends / 2.001 vs P <0.01 vs smachd D12). C Tha graf casg a 'sealltainn ùmhlachd mheala glucose 12 latha sa chlàr puist (CTRL, MC, MC, an sàs ann an diofar mhucan, an coimeas ri D0 agus **01, an coimeas ri D12 CTRL). C Tha graf casg a 'sealltainn ùmhlachd mheala glucose 12 latha sa chlàr puist (CTRL, MC, MC, an sàs ann an diofar mhucan, an coimeas ri D0 agus **01, an coimeas ri D12 CTRL). C Гистограма Показы Количесловия КсNOSтивир ования (контроль, Mc, Mt) Свежнимт, Свежниний, Своронний вы полняется Тестho Anva; ### p <0,001 по Сنвнению С D12 CTRL). Tha CF Hygram a 'sealltainn tomhas delugacaidh glucose 12 latha às deidh na 4 cumhaichean cultair (RU = 6 earrannan / gach **01 P <0.001 an coimeas ri D12 CTRL). C 条形图 显示 所有 4 所有 培养 条件 (CTRL, Mc 和 Mt) 与 新鲜 心脏 葡萄糖 葡萄糖 猪 葡萄糖 猪 猪 猪 猪 葡萄糖 葡萄糖 猪 猪 猪 葡萄糖 猪 猪 猪 猪 猪 猪 与 与 d12 ctrl 相比). C 条形图 显示 所有 4 种 条件 ((CTRL, Mc 和 Mt) 新鲜 心脏 切片 切片 相比 向 向 向 向 向 向 向 向 向 向 向 向 向 向 向 向 向 与 d12 ctrl 相比). C Гистограммtor, оличеслей Послей Послей потивиВий Культи Вирования (контроль сравими Свежней, односторонни й были проведены Тесты Aorva; ## P <0,001 по Сравнению поению поению поению поению поению С D12 (контроль). CE Hisygram a 'sealltainn beagan flux Gluagh aig aois 12 latha (smachd, mc, agus mt) an coimeas ri D0, gach *** P <0.001 an coimeas ri D12 (Smachd).Dalach mion-sgrùdaidh Srain de Fràsan Fràs (Blue), latha 12 Mc (uaine), agus de fhiasaidean 1 MT (N = 4 Sliss / Buidheann One-Onet Chan eil eadar-dhealachadh aon-shligheach; cha robh eadar-dhealachadh aon-shligheach eadar buidhnean).E bholcàno a 'sealltainn gintinneachd a tha air an cur an cèill gu eadar-dhealaichte ann an earrannan cuspair ùra (D0) an coimeas ri earrannan cridhe air a chumha fo chumhachan statach (CTRL) no fo chumhachan MT) airson 10-12 latha.F Team de Sarcome Genes airson earrannan cridhe air an cultar fo gach suidheachadh cultair.Bidh bàraichean mearachd a 'riochdachadh cuibheasachd cuibheasach cuibheasach.
Is e an eisimeileachd metaboolic air an tionndadh bho oxidation gydcolysis a th 'ann an Glycolyssis de Deadiffeentiation CardiomyocySete.Bidh carmamyocytes neo-àbhaisteach a 'cleachdadh glucose airson cinneasachadh ATP agus tha mitchondria hypoplastic ann le glè bheag de christae5,32.Sheall mion-sgrùdaidhean cleachdaidh Glocose gu robh fo chumhachan MC is MT, cleachdadh glucose coltach ris an sin ann an cais-starra (Figear 4C).Ach, sheall sampaill CTRL àrdachadh mòr ann an cleachdadh glucose an coimeas ri clò ùr.Tha seo a 'sealltainn gu bheil am measgachadh de CTCM agus T3 / Dex ag àrdachadh comas obrachaidh clò agus a' gleidheadh ​​na creach Metaboolic de earrannan cridhe àiteach 12-latha.A bharrachd air an sin, sheall mion-sgrùdadh Strain gu robh ìrean craiceann a 'fuireach mar a bha iad ann an clò beò de chridhe airson 12 latha fo chumhachan mt agus ms. 4d).
Gus sgrùdadh iomlan CTCM agus T3 / Dex air cruth-tìre malairt cruinne de stuth trice cridhe Cardiac bho na ceithir cumhaichean cultar eadar-dhealaichte (dàta a bharrachd 1).Gu inntinneach, sheall earrannan MT coltach ri chèile coltach ri clò cridhe ùr, le dìreach 16 ceithir air an cur a-mach à 13,642 gine.Ach, mar a sheall sinn na bu thràithe, chaidh sliseagan CTRL a thaisbeanadh 1229 Genes a chuir an cèill eadar-dhealaichte às deidh 10-12 latha ann an cultar (Fig. 4e).Chaidh an dàta sin a dhearbhadh le Qort-PCR de ghinean cridhe agus gèilleadh fiach (Fig a bharrachd. 7A-c).Gu h-inntinneach, sheall na h-earrannan CTRL eadar-loidhne de chardiac agus ginean baidhsagal cealla agus gnìomh prògraman gèidh inflammatory.Tha an dàta sin a 'moladh gun tachair Deadifferentiation, a bhios a' tachairt às deidh grunn àicheadh ​​fad-ùine, gu tur air a lughdachadh fo chumhachan MT (Fig a bharrachd. 8A, b).Bha sgrùdadh faiceallach air Genes Sarcomere nach eil ach fo chumhachan MT a 'còdachadh an sarmered, gan dìon bho ghràidhBidh an dàta seo a 'sealltainn sin le measgachadh de bhrosnachadh meacanaigeach agus iriosal (T3 / DEX), faodaidh Tsitcriptome an cridhe a bhith coltach ri sliseagan cridhe ùra an dèidh do chultar.
Tha na toraidhean ath-dhealbh-sgrìobhaidh seo a 'faighinn taic bho bhith a' faighinn taic structarail cardiomyocytes ann an suidheachaidhean cridhe glèidhte fo chumhachan MT, mar a chithear le Connectace agus ConneXin ionadail (Fig. 5A).A bharrachd air an sin, chaidh fibrois ann an earrannan cridhe fo shuidheachadh MT a lùghdachadh gu CTRL agus coltach ri earrannan cridhe ùra (Fig. 5b).Tha an dàta sin a 'sealltainn gu bheil am measgachadh de bhrosnachadh meacanaigeach agus làimhseachadh T3 / DEX a' cumail structar cairt ann an earrannan cridhe ann an cultar ann an cultar ann an cultar ann an cultar ann an cultar ann an cultar ann an cultar ann an cultar.
Dealbhan dìonach riochdachail de Troponin-t (uaine), Connpa 43 (DPI) ann an earrannan cridhe iomallach (agus air a sgeadachadh airson 12 latha anns na ceithir cumhaichean cultar roinn-cridhe (bior sgèile = 100 μm).). Tha mòran fiosrachaidh fuadain a 'tomhas an t-sàrachadh structarail as cridhe (n = 7 (D0 agus D12 Ctrl), no * 0.0*1 an coimeas ri D12 CTRL). Tha mòran fiosrachaidh fuadain a 'tomhas an t-sàrachadh structarail as cridhe (n = 7 (D0 agus D12 Ctrl), no * 0.0*1 an coimeas ri D12 CTRL). Количественная оценка струкана (N = 7 (D12 TD, D12 MC и D12 MT) срезов / Груп ОТ рВНх, про Uarraprкй, # D05 па 1 Dàmhair По сра Внению с D12 CTRL). Le bhith a 'tomhas gnìomh structarail de stuth fuadain a' cleachdadh fiosrachadh fuadain (N = 7 (D12 Ctrl), # p <0.0*1 an coimeas ri D12 CTRL).对 不同 猪 的 心脏 组织 结构 结构 完整性 完整性 完整性 (N = 7 (D12 TD, # **** P <0.000 与 d <0.0001 与 D12 CTRL 相比).对 不同 猪 的 心脏 结构 结构 完整性 (n = 7 (D12 CTRL) (5 x 智能量 化 化 化 化 化 化 化 化 化 化 化 向 化 化 与 进行 向 与 与 与 与 与 与 d12 CTRL 相比).Mìle de dhragh structarail clò Applec a 'cleachdadh eòlas fuadain ann an diofar mhucan (N = 7 (D12 TD, D12 MT) le deuchainn aon-shligheach;#### p <0,0001 по сравнению С Duilleag1 иравнению С D12 CTRL). #### P <0.0001 an coimeas ri D0 agus * p <0.05 no **** P <0.0001 an coimeas ri D12 CTRL). B de ìomhaighean riochdachail agus tomhas a tha gaiseach airson sliseagan cridhe a 'ded stainean tritrome Massram (N = 1*1, no *0s1 p <0.0001 an coimeas ri D12 CTR l). B de ìomhaighean riochdachail agus tomhas a tha gaiseach airson sliseagan cridhe a 'ded stainean tritrome Massram (N = 1*1, no *0s1 p <0.0001 an coimeas ri D12 CTR l). B реПрентативны изображения Оцаситаситассона (Масштабная линейка = 500 Мкм) (N = 10 (D0, D12 CTRIOnTO) срт Mt) Тестhrucican; #### p <0,0001 по сравнению с D0 и *** P <0,001 или или <по Сравнению С D12 CTRL). B ìomhaighean riochdachail agus àrdachadh de earrannan cridhe a dh 'fhaodadh stains Trichrome a' ded (150 12 a chluich) (N = 1*1 vs ctrl). B 用 Masson 三 色 染料 染料 染色 的 的 切片 切片 代表性 图像 图像 和 μ μ 差 方 差 差 差 差 差 猪 差 猪 因素 与 差 与 与 与 与 d0 相比, *** P <0.00 1, 或 **** P <0.0001 与 D12 CTRL 相比). B 用 Mismon 三 色 染料 染料 的 心脏 切片 的 和 和 和 量化 尺 μ 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 / 组, 进行 单因素 方 差 分析; #### p <0.0001 相比 D0 相比, *** P <03 P <1.0001 与 D12 CTRL 相比). B реПрентатие изображения оцабная линейкая 500 Мк М) (N = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD и )уов Свин- побRению побRению поб по * p <0,0001 по сравнению с D12 CTRL). B ìomhaighean riochdachail agus àrdachadh de earraimirean cridhe air a dhath le Trandrome Massrome (BEACE PLASE) (N = 1*1 an coimeas ri D12 CTRL).Bidh bàraichean mearachd a 'riochdachadh cuibheasachd cuibheasach cuibheasach.
Mu dheireadh, chaidh comas CTCM a mheasadh hypertrophy dodiac Mimicte le hypertrophy le meudachadh le mullach cairt-ris a 'mheudachadh.Ann an CTCM, buidseeadh an taigh-adhair as àirde bho 80 mmhg gu 80 mmhg.Ealain.(pìos àbhaisteach) suas ri 140 mMHg ealain.(Fig. 6a).Tha seo a 'freagairt ri àrdachadh de 32% ann an sìneadh (Fig. 6b), a chaidh a shealltainn roimhe mar an raon ceudad co-fhreagarrach airson earrannan sarcome a choileanadh gu h-àrd ann an hypertrophy.Sìneadh agus astar de stuth tuarastal air a 'chùmhnantachadh agus bha fois a' dol seasmhach aig sia latha de chultar (Fig. 6c).Chaidh stuth adiac bho shuidheachadh MT a chuir a-steach gu ìre àbhaisteach (MT (àbhaisteach)) no cumhaichean cus (OS (OS)) airson sia latha.A-cheana às deidh ceithir latha ann an cultar, chaidh am bio nochdadh hypererrophic nt-probnk àrdachadh gu mòr sa mheadhan fo chumhachan mt (àbhaisteach) (Fig. 7a).A bharrachd air an sin, às deidh sia latha de chultarach, mheudaich meud an cealla ann am Mt (OS) (Fig. 7b) air a mheudachadh gu mòr an coimeas ri earrannan de chridhe MT (àbhaisteach).A bharrachd air an sin, chaidh eadar-ghluasad niùclasach ncsacuc4 a mheudachadh gu mòr ann an toitean thairis (Fig. 7c).Bidh na toraidhean sin a 'sealltainn leasachadh adhartach ath-dhealbhadh poca-eòlasach às deidh iomadhain agus taic a thoirt don bheachd gun urrainnear inneal CTCM a chleachdadh mar àrd-ùrlar gus sgrùdadh a dhèanamh air soidhne a-steach.
Bidh riochdachaidhean riochdachail de chuideam an seòmar-adhair, cuideam an t-Seòmair, agus tomhasan gluasaid gluasaid a dh 'Atharraicheas cuideam an t-Seòmisg an t-Seòmar Soblaich, ag adhbhrachadh gluasad co-fhreagarrach den t-Slice Lawuet.B sìneadh sìneadh no lùban ìre sìneadh airson mar as trice air a shìneadh gu h-àbhaisteach (orains) agus earrannan clò (gorm).C Gàr Bar a 'sealltainn àm baidhsagal (N = 19 sluasaid gach buidheann, bho dhiofar mhucan), bho dhiofar mhucan)) bho dhiofar mhucan)) bho dhiofar mhucan) agus ìre eadar-dhealaichte (n = 14 (D0), 15 (D6)) Cha do sheall eadar-dhealaichte ann am paramadair sam bith, a 'nochdadh nach robh na paramadairean sin seasmhach ann an 6 latha de chultar.Bidh bàraichean mearachd a 'riochdachadh cuibheasachd cuibheasach cuibheasach.
Tha graf bàr air dùmhlachd NT-Probnps ann an cultair de mheadhanan a tha air a chuimseachadh fo Mt Cultit / 3 (D4 p <0.01 an coimeas ri sìneadh àbhaisteach). Tha graf bàr air dùmhlachd NT-Probnps ann an cultair de mheadhanan a tha air a chuimseachadh fo Mt Cultit / 3 (D4 p <0.01 an coimeas ri sìneadh àbhaisteach).Neach-eachdraidh Cainnteach de dhiotalachd NT-Probnp ann an cultar bho mheadhan cridhe cus deàrrsadh Tha sliseagan-dubhan àbhaisteach (agus a 'bhuidheann bho dhiofar mhucan, agus buidheann bho dhiofar mhucan, agus a' bhuidheann bho dhiofar mhucan, agus a 'bhuidheann bho dhiofar mhucan,** p <0,01 по сравнению с НОрмальнием). ** p <0.01 an coimeas ri sìneadh àbhaisteach). A 在 Mt 正常 拉伸 (Norm) 或 过度 拉伸 (OS) 条件 下 培养 切片 猪 猪 猪 猪 分析 方差 分析 分析 分析 分析 拉伸相比 拉伸相比, p <0. 01). A 'tomhas dùmhlachd NT-Probnp ann an sliseagan cridhe fomh tha slighean a tha air a chuimseachadh fo Mt Cuingealachadh (N =_ 4) an coimeas ri sìneadh àbhaisteach, p <0.01).histogradh a 'tomhas dùmhlachd nt-probnp ann an sliseagan cridhe fo chumhachan sìneadh mt àbhaisteach (N = 4 mtnorm) sliseagan / buidheann bho dhiofar mhucan, mion-sgrùdadh dà-shligheach de chaochlaideach;** p <0,01 по сравнению с НОрмальнием). ** p <0.01 an coimeas ri sìneadh àbhaisteach). B de ìomhaighean riochdachail airson sliseagan cridhe air a dhath le trithealan / prìomh shreathan dà-earbaill), **** mTO); **** pibers, an coimeas ri sìneadh àbhaisteach). B Tha ìomhaighean riochdachail airson sliseagan cridhe a 'dathach le Troponin-T Troponin-T Tropedin-T Tropedin-T Tropedin-T Tropedin-T Tropedin-t agus bidh e (D6 MTNORS), **** MTNORS air a chluich; **** p <0.0001 an coimeas ri sìneadh àbhaisteach). B реПрентатие изображения срера) определения размера Клеток (Справа) (N = 330 (D6 MTO), 369 (D6 MtNormionодитстовой t-крите рий стьюдента; **** P <0,0001 по Сравнению Саральнием). B de thaisbeanaidhean a tha a 'riochdachadh de roinnean cridhe air an dath le Troponin-T Troponin-T Tropedin-T Troponin-T Tropedin-T Tropedin-T Tropedin-T Tropedin-T Tropedin-T agus AZP (D6 MTON), gun deach deuchainn de 279 (D6 mìosan a dhèanamh; **** p <0.0001 an coimeas ri strain àbhaisteach). b 用 肌钙 蛋白 -t 和 Wga (左) 和 细胞 大小量化 (右) 染色 的 心脏 的 猪 猪 有尾学生 t <有尾学生, **** P <0.0001). B de bhith a 'riochdachadh ìomhaighean de sliseagan cridhe air a dhath le cealla-co-aoisean (dìreach) (*** MtNorm)) A' CUR SÒNRAICHTE, gach **** P <0.0001). B реПрентативны изображения срерашеслета размера клеток (Справа) (N = 330 (D6 MTO), 369 (D6 MtNorm) ррита ;юента; **** p <ента; **** p < 0,0001 по сравнению с Нормальниением). B de ìomhaighean riochdachail de roinnean cridhe air a dhath le Tropedin-T agus AZP (D6 MTNorm) bho 10 diofar earrannan bho dhiofar mhucan) bho 10 diofar earrannan de dhiofar mhucan) de dhiofar bhucan),**** p <0.0001 an taca ri strain àbhaisteach). C CUNNTASAN CUNNTAS AIRSON LATHA 0 agus latha 6 MTO 6 MTOS BUPONSBLEBEED AIRSON NUCECITS / BLIADHNA Deuchainn CMS / BLIADHNA NA H-UILE MILES / BRANSE DESTS TESTERS TEST; * P <0.05). C CUNNTASAN CUNNTAS AIRSON LATHA 0 agus latha 6 MTO 6 MTOS BUPONSBLEBEED AIRSON NUCECITS / BLIADHNA Deuchainn CMS / BLIADHNA NA H-UILE MILES / BRANSE DESTS TESTERS TEST; * P <0.05). C реПрентативны изображения тو Слаc4, и количественнк а ТранслоКации nfatc4 В Каверето ОТх Оваз ОветсвиTт, гволнысторонний t- Критерий стьюдента; * p <0,05). c de dhealbhan riochdachaidh c airson earrannan cridhe aig 0 agus 6 latha mtos, agus tomhas de dhiofar mhucan / 3 (D6 MTO4* p <0.05). C 用 于 肌钙 -T 和 nfatc4 免疫 标记 的 第 第 第 第 第 代表性 代表性 代表性 不同 的 的 双尾 t 检验; 学生 t 检验; * p <0.05). C Dionnsachan de Calcanin-T agus NFATC3 AMBSUNOLBELLING 第 0 天 和 第 第 至 至 双尾 et 电影; * p <0.05). c a 'riochdachadh ìomhaighean de shligdan cridhe MTO aig an latha 0 agus 6 airson Tropedin-T Tropen-t agus nfatc4 Influccation agus cam air an imrich nfatc4, 3 (d <0.05).Bidh bàraichean mearachd a 'riochdachadh a' ciallachadh ± claonadh coitcheann.
Feumaidh rannsachadh cardiolascularach modalan cealla eadar-theangachaidh a dhèanamh air àrainneachd Thug Cardiac gu ceart.Anns an sgrùdadh seo, chaidh inneal CTCM a leasachadh agus air a chomharrachadh is urrainn sin a bhith a 'brosnachadh earrannan Oltraath den chridhe.Tha an siostam CTCM a 'toirt a-steach brosnachadh electromemetical neo-shoilleir agus beairteach T3 agus DEX a' beairteachadh.Nuair a bha earrannan cridhe porcine fosgailte do na factaran sin, bha comas obrachaidh, ioma-structarach, gnìomhachd metabolach, agus faireachdainn sga-sgrìobhadh fhathast ann an clò beò às deidh caism cridhe.A bharrachd air an sin, faodaidh cus sìneadh de stuth Cardiac ath-thogail den chridhe adhbhrachadh le hyperextension.Uile gu lèir, tha na toraidhean sin a 'toirt taic do àite èiginneach cumhachan brìoghmhor ann a bhith a' cumail suas preenipe cardiac àbhaisteach agus àrd-ùrlar a thoirt seachad airson sgrìonadh dhrogaichean.
Bidh mòran fhactaran a 'cur ri bhith a' cruthachadh àrainneachd as fheàrr airson obrachadh agus mairsinneachd cardiomydocytes.Tha an fheadhainn as follaisiche de na factaran sin co-cheangailte ri (1) eadar-obrachadh eadar-obrachail, (2) brosnachadh electromemetical, (3) factaran irisean, agus (4) fo-nota meabhail.Feumaidh eadar-obrachaidhean cealla-eòlasach-ri-cealla lìonraidhean trì-thaobhach de iomadh seòrsa cealla le taic bho mhaighstir a bharrachd.Tha e doirbh eadar-ghnìomhan cealla eacarsaich a leithid de sheòrsa a dhèanamh ann an Vitro le co-oleachaidh seòrsan cealla fa leth, ach faodar a choileanadh gu furasta le nàdar organtopic siorrachd earrannan.
Tha sìneadh meacanaigeach agus brosnachadh dealain de cardmayOcytes deatamach airson a bhith a 'cumail suas cairt-cheusta333,34,34,34,35.Fhad 's a tha brosnachadh meacanaigeach air a chleachdadh gu farsaing airson cruadhachadh Hips-cm tha grunn sgrùdaidhean eireachdail air feuchainn ri brosnachadh meacanaigeach de sliseagan cridhe ann an cultar a' cleachdadh luchdachadh mì-laghail a 'cleachdadh luchdachadh mì-laghail a' cleachdadh luchdachadh mì-laghail.Tha na sgrùdaidhean sin a 'sealltainn gu bheil buaidh mhath aig 2D Meacanaigeach Meacanaigeach mì-laghail air treunachadh a' chridhe rè cultair.Anns na sgrùdaidhean sin, chaidh earrannan den chridhe a luchdachadh le Impiles Tensile Impilement17, no chaidh an cearcall attariac ath-nuadhachadh le bhith a 'cleachdadh draibhearan feachd Feachd Transducener.Ach, bidh na modhan sin a 'cleachdadh sìneadh gun choimeas às aonais optimization àrainneachd, agus mar thoradh air a bhith a' cumail a-mach mòran gheugan cardiac no cus de ghines co-cheangailte ri freagairtean sìneadh anabarrach.Tha an CTCM a 'toirt air a mhìneachadh an seo a' toirt seachad brosnachadh electrochsical 3D a tha a 'mìneachadh cearcall nàdurrach 3D a tha a' nochdadh cearcall nàdurrach agus sìneadh diadhachd, 60% diastole, agus 72 buille gach mionaid).Ged nach eil am brosnachadh meacanaigeach trì-thaobhach seo gu leòr gus ionracas taise a chumail suas, measgachadh de bhrosnachadh èibhinn agus meacanaigeach a tha a 'cleachdadh T3 / DEX a chumail comas obrachaidh, gnìomh, agus ionracas.
Tha pàirt cudromach aig factaran iriseanail ann a bhith a 'dèanamh modaladh phenotype cridhe inbheach.Chaidh seo a shoilleireachadh ann an sgrùdaidhean Hips-cm anns an deach T3 agus Dex a chur ri meadhanan Cultar gus stòran cealla a luathachadh.Faodaidh T3 buaidh a thoirt air giùlan Amino Luchd-giùlan, siùcar agus calcium thairis air membres36.A bharrachd air an sin, bidh T3 a 'brosnachadh MHC-α a' nochdadh agus mc-Β inneal-beothail de myofidocytes tollaidh ann an geofidocions luath ann an cm fetal cm.Tha easbhaidh T3 ann an euslaintich hypothyroid a 'toirt a-steach call bannan myfiRilrar agus ìre nas lugha de leasachadh Tone37.Dex ag obair air gabhadan gluasadach glucoridoite agus chaidh a dhearbhadh gus a bhith a 'meudachadh cùmhnant myonaceial ann an cridheachan granaichte air leth;38 Thathas den bheachd gu bheil an leasachadh seo co-cheangailte ris a 'bhuaidh air inntrigeadh calcium (Soce) 39,40.A bharrachd air an sin, ceangailte dex gu a luchd-gabhail, ag adhbhrachadh freagairt eadar-nàiseanta eadar-nàiseanta a tha a 'dol thairis air gnìomh dìon agus sèididh 30.
Tha na toraidhean againn a 'comharrachadh gu bheil brosnachadh corporra corporra (MS) a' leasachadh coileanadh tro choileanadh iomlan iomlan an coimeas ri Ctrl, ach cha do shuidhich iad tiùrran, dian earbsach thairis air 12 latha ann an cultar.An coimeas ri Ctrl, a bharrachd air cultaran T3 agus DEX gu Cultaran CTCM (MT) Gnìomhachas cleasachd coltach ri seo, dian structarail, agus gnìomhachd metabolach le clò beòil airson 12 latha.A bharrachd air an sin, le bhith a 'cumail smachd air a' cheum de shìneadh clò, chaidh modail hypertrophy prespertrophy a chaidh a chruthachadh le stcm, a 'sealltainn inneal-sùim an t-siostam stcm.Bu chòir a thoirt fa-near, ged a tha e a 'toirt a-steach buill-fiachan iomlan a bharrachd air pastocytoces iomchaidh agus tha earrannan den phròiseas fiachan ann an freagairt air cuideam agus trauma.a-steach do Myofibroblasts.Chaidh seo a mheasadh roimhe anns a 'mhodal sliseag cridhe seo.Bu chòir a thoirt fa-near gum faod paramadairean CTCM a thoirt fa-near le bhith ag atharrachadh bodhaigean cuideam / dealain agus tricead de shreathan a rèir tachycardia, cridhe bradanaigeach (meacanaigeach gun lusachadh meacanaigeach).Tha seo a 'dèanamh an siostam troimhe airson deuchainn dhrogaichean.Tha comas CTCM a 'cur a-steach Overpertrophy Overtiuppy OvertExertion-Brosnachaidh an t-slighe airson a bhith a' dèanamh deuchainn air an t-siostam seo airson leigheas pearsanaichte.Anns a 'cho-dhùnadh, tha an sgrùdadh a th' ann an-dràsta a 'sealltainn gu bheil stimulation meacanaigeach agus brosnachadh iriosal deatamach airson a bhith a' cumail suas cultar Tagraidh Cardiac.
Ged a tha an dàta a tha air a tha air a thaisbeanadh seo a 'moladh gu bheil CTCM na àrd-ùrlar gu math brosnachail airson a bhith a' cumadh iomlanachd iomlan, tha cuid de chuingealachaidhean anns an dòigh cultair seo.Is e prìomh chuingealachadh Cultar CTCM gu bheil e a 'cur cuideaman minnamaigeach beòileachd leantainneach air na sliseagan, a tha a' cur luach air comas sùil a chumail air gnìomhachd sliseag Cardiac anns gach cearcall rèidh.A bharrachd air an sin, air sgàth cho beag ri meud beag abhainn (7 mm), comas a mheasadh gnìomhachd stestolic taobh a-muigh siostaman cultar a 'cleachdadh luchd-mothachaidh Feachd traidiseanta.Anns an làmh-sgrìobhainn gnàthach, bidh sinn a 'faighinn thairis air a' chuingealachadh seo le bhith a 'luachadh bholtachd optigeach mar chomharradh air gnìomh cùmhnant.Ach, dh 'fheumadh a' chuingealachadh seo a bharrachd obrach agus faodar dèiligeadh ris san àm ri teachd le bhith a 'toirt a-steach modhan airson sgrùdadh as fheàrr air obair sliseagan cridhe ann an cultar, mapadh optigeach a' cleachdadh dathan cumhachdach agus bholtachd.Is e cuingealachadh eile de CTCM gum bi am modal obrach a 'làimhseachadh cuideam corporra (preload agus às deidh).Ann an CTCM, bha cuideam air a bhaingneachadh ann an taobhan mu choinneimh gus 25% pìos beul-aithris 25% a chuir air ais ann an diasgall (làn leudaich (faid giollachd rè de bhrosnachadh dealain).Bu chòir an cuingealachadh seo a thoirt air falbh ann an dealbhadh CTCM san àm ri teachd le cuideam gu leòr air an torre Cardiac bho gach taobh agus le bhith a 'cur a-steach na fìor dhàimhean cuideam a tha a' tachairt ann an seòmraichean a 'chridhe.
Tha an ath-dhealbhadh mu dheireadh a chaidh a mhilleadh a-mach anns an làmh-sgrìobhainn seo cuingealachadh ri comharran hypertrofferch Hypertrophic.Mar sin, is urrainn don mhodail seo cuideachadh le bhith a 'sgrùdadh soidhnichean hypertrophic àrdaichte gun fheum air factaran iriosal no nural (nach eil ann san t-siostam seo).Bidh feum air tuilleadh sgrùdaidhean gus iomadachadh CTCM, mar eisimpleir, a bhith a 'culachadh le ceallan dìon plasune, agus a' co-staigh ann a bhith a 'dèanamh cothromachadh galair a'daladh a bhith a' dèanamhachadh galair le CTCM.
Chaidh trì mucan deug a chleachdadh san sgrùdadh seo.Chaidh a h-uile dòigh-obrach inbheach a thaisbeanadh a rèir stiùiridhean institiùideach agus chaidh aontachadh le Oilthigh Cùram Luchd-cùraim is Cleachdaidh Oilthigh Louchville Oilthigh Louchville.Bhathar a 'crathadh agus gun deach an llann a boric a ghlacadh agus chaidh an cridhe a thoirt gu crìch le 1 l de Cardiolpleggia sterile (11 mm kcl2, 16 mm Nahco3, 5 ml heParin, Pho suas gu 7.4); Chaidh an cridheachan a ghleidheadh ​​ann am fuasgladh carraichte deighean-deighe gus an deach an giùlan chun obair-lann air a 'chuid deigh a tha mar as trice <10 min. Chaidh an cridheachan a ghleidheadh ​​ann am fuasgladh carraichte deighean-deighe gus an deach an giùlan chun obair-lann air a 'chuid deigh a tha mar as trice <10 min. Сердца хранили В тиоплегичентворТчч нто оьтимает <10 Мин <10 мин. Bha cridheachan air an stòradh ann am fuasgladh carraichte deigh gus an còmhdhail chun obair-lann air deigh, a bhios mar as trice a 'toirt <10 min.将 心脏 保存 在 冰冷 的 的 心脏 停搏液 中 中 中 冰上 运送 到 到 实验室, 通常 <10 分钟.将 心脏 保存 在 冰冷 的 的 心脏 停搏液 中 中 中 冰上 运送 到 到 实验室, 通常 <10 分钟. Держите Сердца ن едиоплегии до лабортпВбду На льд бно <10 Мин. Cùm cridheachan air Cargarlegia deigh gus an còmhdhail chun obair-lann air deigh, mar as trice <10 min.
Chaidh inneal CTCM a leasachadh ann am bathar-bog dealbhadh le aon-le taic coimpiutair (CAD).Tha na seòmraichean cultair, sgaraidhean agus seòmraichean adhair air an dèanamh de phlastaig biorach CNC.Tha an fhàinne cùl-taic trì-cheàrnach 7mm air a dhèanamh le dùmhlachd àrd polyethylene (HDPE) san ionad agus tha groove O-ring a 'gabhail àite air an o-fhàinne silicone a chaidh a chleachdadh gus na meadhanan a ghlacadh.Tha membran tana silica silica a 'sgaradh Seòmar Cultar bhon phlàta dealachaidh.Tha an membran Silicone air a ghearradh bho 0.02 "duilleag tiugh silicone air agus tha cruas aig 35a.Tha na gasgaidean ìosal agus prìomh ghoid Silicone air a ghearradh bho 1/16 "duilleag tiugh silicone agus cho cruaidh 's a tha cruas aig 50A.Tha 316l luchd-stàladh stàilinn agus cnothan sgiathan air an cleachdadh airson am bloc a cheangal agus seula-dòrainn a chruthachadh.
Tha Bòrd Ciorc clò-bhuailte sònraichte (PCB) air a dhealbhadh gus a bhith air fhilleadh a-steach leis an t-siostam C-Pairt-Peace.Tha socaidean actions Astair Exiss air a 'PCB ceangailte ri dealanan grafite le uèirichean copair le airgead agus umha 0-60 air an sgrìobadh a-steach do na dealanan.Tha am Bòrd Cearcall Clò-bhuailte air a shuidheachadh ann an còmhdach a 'chlò-bhualadair 3D.
Tha an inneal CTCM air a smachdachadh le actuator pneumach prògramaichte a bhios a 'cruthachadh cuideam cuairteachaidh fo smachd coltach ri cearcall cardiac.Mar a bhios an cuideam taobh a-staigh an t-Seòmair a 'meudachadh, bidh am membran sùbailte sùbailte a' leudachadh suas, a 'faighinn a' mheadhan fon làrach tais.Thèid an raon de stuth a shìneadh leis an seo a chuir a-mach an uisge, a 'mallachadh leudachadh beul-aithris a' chridhe aig dialastole.Aig àirde fois, chaidh brosnachadh dealain a chuir an sàs tro leudachadh grafite, a lughdaicheadh ​​an t-seòmar-adhair agus dh 'adhbhraich iad giorrachadh earrannan clò.Taobh a-staigh na pìoban tha brata ann le sensor cuideam gus an cuideam a lorg san t-siostam adhair.Tha an cuideam a tha a 'mothachadh leis an t-sensor cuideam a chuir air neach-cruinneachaidh dàta ceangailte ris an laptop.Leigidh seo sgrùdadh leantainneach air an cuideam am broinn an t-seòmar gas.Nuair a ràinig an cuideam an t-Seòmrach (Ìre 80 mmhg, 140 mmhg OS), chaidh òrdugh a chuir chun t-siostam bhall-bhrosnachaidh Biphasic airson 2 ms, a chuir gu 4 v.
Chaidh na h-earrannan cridhe fhaighinn agus an cultar ann an 6 tobraichean air an coileanadh mar a leanas: gluais na cridheachan a bu thìridh bhon t-soitheach gluasaid gu treidhe anns a bheil fuachd (4 ° C.) Cardiollegia.Bha an Ventricle clì air an aonaranach le lann steril agus gearradh a-steach do phìosan de 1-2 cm3.Bha na blocaichean tais sin ceangailte ri taicean clòimhe le todhair clò agus air a chuir ann am fuasgladh Tyrode (3 mm kcloxe (3 mm D-Gluainn (3 MM D-Gluainn (386 G), 10 mm Hepes (2.38 G), 1 mm mgcl2 (1 ML 1 M Fuasgladh), 1.8 mm cacl2 (1.8 ml 1 mol 1 m fuasgladh), suas ri 1 l dy2o).Bha an microuneme Vibrating a 'gearradh 300 μm tiugh tiugh ann an tricead de 80 HZ, meud crath chòmhnard gun 2.03 mm / s.Bha an amar tais air a chuairteachadh le deigh gus am fuasgladh a chumail fionnar agus chaidh an teòthachd a chumail aig 4 ° C.Bidh earrannan clò a 'gluasad bhon amar microtome gu amar brosnachaidh anns a bheil fuasgladh tyrode ocsaidean gu leantainneach air deigh gus am faighear earrannan gu leòr airson aon phlàta cultair.Airson cultaran gluasaid, bha earrann-taidhraid ceangailte ri Sterils 6 mm a 'toirt taic do 6 mm de dh' ionnst mhath (1%, 5% FG / mL / 2x antifunal).Chaidh brosnachadh dealain (10 v, tricead 1.2 HZ) a chuir an sàs anns na h-earrannan aodaich tron ​​C-Pace.Airson suidheachaidhean td, chaidh T3 agus Dex ùr a chur ris aig 100 NM agus 1 μM aig gach atharrachadh meadhanach.Tha am meadhan shàrachadh le ocsaidean mus cuir thu an àite ath-nuadhachadh 3 tursan san latha.Chaidh earrannan clò a bhith air obrachadh ann an neach-ionaid aig 37 ° C agus 5% CO2.
Airson cultaran CTCM, chaidh earrannan clò a chuir air clò-bhualadair 3D air a dhèanamh suas ann am pesa petri anns a bheil fuasgladh toraidh atharraichte.Tha an inneal air a dhealbh gus meud sliseag a 'chridhe a mheudachadh 25% de na sgìre den fhàinne taic.Tha seo air a dhèanamh gus nach bi na h-earrannan den chridhe a 'sìneadh às deidh dha a bhith air a ghluasad bho fhuasgladh Tyrode don mheadhan agus aig àm diasale.A 'CLEACHDADH GLOLE HEPOLINELYLY, Chaidh earrannan 300 μm tiugh a chuir an dreuchd air fàinne taic 7 mm ann an trast-thomhas.Às deidh dhaibh na h-earrannan toraidh a cheangal ris an fhàinne taic, gearradh dheth na h-earrannan clòimhe a bharrachd agus cuir na h-earrannan toraidh ceangailte air ais air deigh (4 ° C) gus an tèid earrannan gu leòr ullachadh airson aon inneal.Cha bu chòir an ùine giullachd iomlan airson gach inneal a bhith nas àirde na 2 uair a thìde.Às deidh 6 earrannan clò a cheangal ris na fàinneachan taic aca, chaidh an inneal CTCM a chruinneachadh.Tha Seòmar Cultar CTCM ro mheadhan ro 21 ml ro-ocsaidean ro-ocsaidean.Gluais na h-earrannan clò air Seòmar a 'Chultair agus cuir air falbh builgeanan èadhair sam bith le pìob.Tha an roinn sgiobalta an uairsin air a stiùireadh san toll agus air a bhrùthadh gu socair na àite.Mu dheireadh, cuir an caip electrode air an inneal agus gluais an inneal chun neach-goireil.An uairsin ceangail an CTCM chun tiùb èadhair agus an siostam C-Pairt-Peace-em.Bidh an actuator Pneumach a 'fosgladh agus tha a' bhalaig èadhair a 'fosgladh an CTCM.Chaidh an siostam C-Pairt-Peacce-EM a rèiteachadh gus 4 v aig 1.2 HZ a lìbhrigeadh aig ìre MS BipHosic airson 2 ms.Chaidh am meadhan atharrachadh dà uair san latha agus chaidh na dealanan atharrachadh aon uair san latha gus cruinneachadh grafite air na dealanan.Ma tha feum air, faodar earrannan clò a thoirt a-mach às na tobraichean cultar aca a chuir a-mach a dh 'fhaodadh a bhith air tuiteam fodha.Airson suidheachaidhean làimhseachaidh MT, chaidh T3 / Dex a chur ris ùr le gach atharrachadh meadhanach le 100 NM T3 agus 1 μM Dex.Chaidh innealan CTCM a bhith air a bhith air obrachadh ann an neach-ionaid aig 37 ° C agus 5% CO2.
Gus luchd-obrach sìnte de sliseagan cridhe fhaighinn, chaidh siostam camara sònraichte a leasachadh.Chaidh camara Slr (Canon Relson t7i, Wonton, Iapan) a chleachdadh le Avitar Logo 7000 18-108mm Macro Lens (navitar, San Francisco, CA).Chaidh meòrachadh a dhèanamh aig teòthachd an t-seòmair às deidh dhaibh am meadhan a chur an àite meadhanach.Tha an camara air a shuidheachadh aig ceàrn agus bhidio 51 ° aig 30 frèam gach diog.Chaidh a 'chiad fhear, bathar-bog stòr fosgailte (feòraich43) a chleachdadh le ìomhaigh-J gus gluasad gluasad sliseagan cridhe.Chaidh am masg a chruthachadh a 'cleachdadh Matlab (matamataigs, MA, USA) gus cinneachaidhean inntinneach a mhìneachadh airson sliseagan cridhe a bhrosnachadh gus fuaim a sheachnadh gus fuaim a sheachnadh.Bithear a 'cleachdadh masgaichean le làimh anns a h-uile ìomhaigh ann an sreath frèam agus an uairsin a thoirt don phlug a-steach fhillidh.Bidh gluasad fèithe a 'cleachdadh dian cuibheasach nam piogsail anns gach frèam gus a bhith a' tomhas a ghluasaid a tha càirdeach don fhrèam iomraidh.Chaidh dàta a chlàradh, a chaidh a shìoladh agus a chleachdadh gus ùine baidhsagal a thomhas agus a mheasadh a 'dèanamh suas clò aig a' chearcall cairt-chrìche.Chaidh a 'bhidio clàraichte a phròiseasadh le bhith a' cleachdadh sìoltachan didseatach Ìre Didseatach Sent-Òrdugh.Gus pìos clò a thomhas (chaidh mion-sgrùdadh stùc), mion-sgrùdadh stùc), mion-sgrùdadh stùc) a choileanadh gus eadar-dhealachadh a dhèanamh eadar binnean agus amaran anns an comharra clàraichte.A bharrachd air an sin, thathas a 'detringing a' cleachdadh a bhith a 'cleachdadh polynomial 6mh òrdugh gus cuir às do shruth comharran.Chaidh còd a 'phrògraim a leasachadh ann am Baylab gus faighinn a-mach gluasad teannachadh cruinneil, àm baidhsagal, ùine fois, agus àm giorrachaidh (Còd Phrògram Leasachadh 44).
Airson mion-sgrùdadh Strain, a 'cleachdadh na h-aon bhideothan a chaidh a chruthachadh airson Measadh Leudachair Meacanaigeach, lorg sinn an toiseach dà ìomhaigh a' riochdachadh stùcan gluasadan (nas ìsle) a rèir bathar-bog fàisneachd.Bha sinn an uairsin a 'sgeadachadh air na roinnean taisidh agus chuir sinn gnìomh de algorithm dubhadh gu clò sgarte (Fig a bharrachd. 2A).Chaidh na stuthan sgaraidh an uairsin a roinn ann an deich fo-neach-fulang, agus chaidh an cuideam air gach uachdar a thomhas a 'cleachdadh an co-aontar a leanas: (Sudin Sdown The Spricting of the Top of the Top and Forectively (Fig a bharrachd. .2b).
Chaidh earrannan cridhe a choc ceangailte ann an 4% paramatorlDhyde airson 48 uairean.Bha sgrathan stèidhichte air an deshdrated ann an 10% agus 20% de shoirbheachadh airson 1 H, agus an uairsin ann an 30% Cherose thar oidhche.Bha na h-earrannan an uairsin air an stèidheachadh ann an co-theacsa teòthachd as fheàrr (toinnte oct) agus mean air mhean reothadh ann am amar ISOPNEENE / TRAN TEAT.Bùth de bhlocaichean a tha a 'daingneachadh blocaichean aig -80 ° C gus an dealachadh.Chaidh sleamhnagan ullachadh mar earrannan le tiugh de 8 μm.
Gus Ioc a thoirt air falbh bho earrannan cridhe, teas na sleamhnagan air bloc teasachaidh aig 95 ° C airson 5 min.Cuir 1 ML PBB gu gach sleamhnag agus appubate airson 30 mionaid aig teòthachd an t-seòmair le bhith a 'suidheachadh 0.1% Triton-X ann an PBS.Gus casg a chuir air antibodies neo-shònraichte bho cheangal ris an sampall, cuir 1 ML de 3% BSA de 3% BSA air sleamhnagan agus a ghoireas airson 1 uair aig teòthachd an t-slighe.Chaidh am BSA a thoirt air falbh agus chaidh na sleamhnagan a nighe le PBS.Comharraich gach sampall le peansail.Chaidh an t-antibodies bun-sgoile a dhèanamh (200 ann an 1% BSA) (Connexin 43 (Ab11370) a 'gluasad alwa) 079), an aghaidh fluor stiùiridh 594 (Armo Saidheansail; # T6391) Cha do chleachd na sleamhnaichean àrd-sgoile bho chùl-rathad (mu dheireadh, mialan verccones) agus microscope kyerence le 40x meudachadh.
Fluor Wga-Alexa 555 (tha termo Saidheansail; # W32464) aig 5 μg / ML ann am PBS air a chleachdadh airson staining wga airson 30 mionaid aig teòthachd an t-seòmair.Chaidh na sleamhnagan a nighe le PBS agus Sudan Black air a chur ri gach sleamhnag agus air a bhrosnachadh airson 30 mionaid.Chaidh na sleamhnagan a nighe an uairsin le PBan agus chaidh am meadhan a bhith a 'daingneachadh meadhanach a chur ris.Chaidh sleamhnagan a thoirt seachad air microscope keirycen aig meudachd 40x.
Chaidh Dàmhair a thoirt air falbh bho na samples mar a chaidh a mhìneachadh gu h-àrd.An dèidh dha na h-adhartais a thoirt air falbh, tha na sleamhnagan ann am fuasgladh Bouin thar oidhche.Bha na sleamhnagan an uairsin air an raingadh le uisge grùdaireachd airson 1 uair a thìde agus an uairsin air an cur ann am fuasgladh bràithrich aloe searbhagach airson 10 mionaidean.An uairsin chaidh na sleamhnagan a nighe le uisge grùide agus air a chuir ann am fuasgladh de 5% de 5% fosphotullickblyum / 5% fosphotungsticks airson 10 mionaidean.Gun rinsing, gluais na sleamhnagan dìreach a-steach gu fuasgladh an aninine gorm airson 15 mionaidean.An uairsin chaidh na sleamhnagan a nighe le uisge grùide agus air a chuir ann am fuasgladh searbhag 1% airson 2 mhionaid.Bha sleamhnagan air an tiormachadh ann an 200 n ethanol agus air a ghluasad gu xylene.Chaidh sleamhnagan de dhath a lorg a 'cleachdadh microscop kyireence le amas 10x.Bha ceudad sgìre fibrosis air a thomhas le bhith a 'cleachdadh bathar-bog an sgrùdaidh Keyece.
Comastachd Cill Comas ™ MtTught ™ (Helitrogen, Carlsbad, CA), Àireamh Catalog V13154, a rèir protocol an neach-dèanamh le beagan atharrachaidhean.Gu sònraichte, chaidh punch uachdaran le trast-thomhas de 6 mm a chleachdadh gus dèanamh cinnteach gum bi meud clòimhe èideadh ann an sgrùdadh MSTT.Chaidh toitean a chuir ann an tobraichean plàta 12-math anns a bheil MTT MTTTETED a rèir protocol an neach-dèanamh.Tha na h-earrannan air an toirt air adhart aig 37 ° C. airson 3 uairean a thìde agus bidh an toisle beò a 'mata-mhait airson supporail purpaidh purpaidh a chruthachadh.Cuir an àite fuasgladh MTT le 1 ML DMSO agus Infubate aig 37 ° C airson 15 mionaidean gus a thoirt a-mach formaces purpaidh bho earrannan cridhe.Chaidh sampallan a lagachadh 1:10 ann an DMSO ann an truinnsearan bun (dian dath purpaidh a thomhas aig 570 NM a 'cleachdadh leughadair truinnsear cytation (biotek).Chaidh leughaidhean a leasachadh gu cuideam gach sliseag a 'chridhe.
Chaidh meadhanan a chuir na h-àite le 1 μCI / ml [5-3h] -Gocosse (Bio, Ga, USA) airson Assay cleachdaidh glucoses mar a chaidh a mhìneachadh roimhe.Às deidh 4 uairean de bheairteas, cuir 100 μl de mheadhan meadhan ri 100 μl de 0.2 n hcl.An uairsin chaidh an tiùb a chuir ann an tiùb sgrionaidh anns a bheil 500 μl de Dhicurarate [3h] 22 aig 37 ° C.An uairsin thoir air falbh an tiùb microcerifuge bhon tiùb scintillation agus cuir 10 ml de dh 'uisge scintillation.Chaidh cunntasan scintillation a chluich le bhith a 'cleachdadh mion-sgrùdadh snaidhidh leaghan tri-carb 2900TR (Companach Bithionsard, Morinnen, CT, USA).Chaidh cleachdaidh glucose a thomhas a bhith a 'toirt cunntas air a bhith a' toirt aire do bhith a 'toirt aire do bhith a' toirt aire do Bhith-aithne [5-3h] -Grocose, co-dhùnaidhean neo-choileanta, Dealachadh de [5-3H] -to air an aghaidh mì-chothromach glùcosail, agus snaidhidh sgiontach.Tha an dàta air a chleachdadh gu mòr de na h-earrannan den chridhe.
Às deidh dha Homogenization taise ann an Trizol, bha RNA a bhith coltach ri earrannan cridhe a 'cleachdadh meanbh-chonc Mirnesy Qiagen Mirenasy A. 20874 a rèir protocol an neach-dèanamh.Chaidh ullachadh Leabharlann RNasec, sgeadachadh agus mion-sgrùdadh dàta a dhèanamh mar a leanas:
Chaidh 1 μg de Rnna gach sampall a chleachdadh mar stuth tòiseachaidh airson Leabharlann RNA ullachadh.Chaidh na leabharlannan òraidean a chruthachadh le bhith a 'cleachdadh uidheamachd Uinneachaidh Uinneachaidh Leabharlann Nebnett Cnoc airson Illumina (Neb, USA) às deidh molaidhean an neach-saothrachaidh, agus chaidh còdan clàr-amais a chur ris na sreathan buadhan airson gach sampall.Goirid, chaidh MRNA a ghlanadh bho RNA gu h-iomlan a 'cleachdadh grìogagan magnetach ceangailte le Poly-t Oileontisides.Tha briseadh a 'cleachdadh a' cleachdadh stòran eadar-dhealachaidh aig teòthachd àrd ann an NebNext a 'chiad bufair ath-dhearbhadh synthesis (5x).Chaidh a 'chiad CDNA dulan a cho-chur le bhith a' cleachdadh tar-sgrìobhadh hexamer air thuaiream agus cùl-sgrìobhte M-bhliadhnaichean (Rnase H-).Thathas an uairsin a 'co-chur an dàrna connadh an uairsin a' cleachdadh DNA Polymere I agus Rranase H. Tha na h-àiteachan-fuirich eile air an atharrachadh gu crìch le Exonuclease / Polymerase Gnìomhachd.Às deidh eas-aonta a dhèanamh aig 3 'ceann a' chriomag DNA, tha adaptair Nebnext gu bheil structar lùb fuilt ceangailte ris airson iomadachadh.Airson taghadh de mhìrean CDNA b 'fheàrr le fad 150-200 BP.Chaidh criomagan leabharlainn a ghlanadh a 'cleachdadh siostam ammpure ammpure (Beckman Coulter, Beverely, USA).An uairsin,, bidh 3 μL neach-cleachdaidh ICZYM (NEB, USA) le cuibhreann le meud air a luineadh airson 15 mionaidean aig 97 ° C agus Ùghdarraich 5 ° C ro PCR.Bha PCR an uairsin air a chluich a 'cleachdadh phusion High-Finnelity DNA Polymere, Caviding PCR PPR, agus Clàr-amais (X) Primers.Mu dheireadh, chaidh toraidhean PCR a ghlanadh (leth-dhleastanas XP) agus càileachd leabharlainn air am measadh air siostam bioralyzer 200.Chaidh an t-ainm a chuir an uairsin an uairsin le sreath NoveSQ.Chaidh faidhlichean ìomhaigh amh a thionndadh bho Illumina gu RAW a 'leughadh a' cleachdadh caideachan Bùth Casava.Tha dàta amh air a stòradh ann am faidhlichean cruth Fastq (FQ) anns a bheil sreathan leughaidh agus buadhan bunaiteach co-fhreagarrach.Tagh Aat2 gus a bhith a 'tuigsinn sequevencing sgithidh a' leughadh chun SSCROFA11.1 an neach-taice.San fharsaingeachd, tha a faire2 a 'toirt taic do ghnìomhachd sam bith, a' toirt a-steach genomes nas motha na 4 billeanan billean, agus tha luachan bunaiteach a 'dol air adhart airson a' mhòr-chuid de paramagan.Faodar spliging a tha a 'leughadh bho dhàta Seq a' cleachdadh gu h-èifeachdach a 'cleachdadh a hat2, an siostam as luaithe a tha ri fhaighinn an-dràsta, leis an aon rud no nas fheàrr na dhòigh sam bith eile.
Tha pailteas de tar-sgrìobhaidhean a 'nochdadh gu dìreach an ìre de mheur a' cheudaich.Bidh ìrean m còmhnaidh gine air am measadh le pailteas tar-sgrìobhaidhean (Cunntas Sequeening) co-cheangailte ris na genome no na h-earrannan.Tha an àireamh de leughaidhean co-rèireach ri ìrean faireachdainn a tha a 'ginc, fad ghinse, agus doimhneachd sìorraidh.Chaidh FPKMENT (criomagan gach mìle paidhir bonn de shreathan-taice sreathan-tar-sgrìobhadh gach millean paidhreachais) a thomhas agus chaidh luachan de dhiofar abairt eadar-dhealaichte a dhearbhadh a 'cleachdadh pasgan deq22.Bidh sinn an uairsin a 'tomhas a' gheàrr-eòlas mothachail meallta (FDR) airson gach luach P a 'cleachdadh modh Benjamini-HoCHberg stèidhichte air R-Opend "P.adjust".
Chaidh Rna a tha iomallach bho earrannan cridhe atharrachadh gu CDNA aig contation of 200 ng / μl a 'cleachdadh saorpiet Mix bho Thermo (Thermo, 117566050).Chaidh Rt-Clàraidh Rt-PCR a chluich le bhith a 'cleachdadh biobryms gnìomhaichte Endraura Plate (Thermo, Armmo, Cat. 4311971).Ann am measgachadh an ath-bhualadh bha 4 μl Taqman Onfared (Thermo, Cat # 44444557), 0.5 μl Taqman Primer agus 3.5 μl H2O.Chaidh cuairtean QPCR àbhaisteach a ruith agus chaidh luachan CT a thomhas le bhith a 'cleachdadh biomys shiostamaichte QuantTuduca 5 de ionnstramaid PCR (384-uchd; toradh # A28135).Chaidh prìosanaich taqman a cheannach bho themmo (ss03375629_M1), CLÀR-), CLÀR1), SS06918_MN), GTA4 ( SS038380805_U1), GJA1 (SS033748397_U1), Achd CRANE), SSNA1 (SS0423788_M1) Gu h-èifeachdach air na luachan CT a h-uile sampalachd a tha a 'cumail sùil air taigh-taighe Ga Stad.
Chaidh brath mheadhanan de NT-Probnp a mheasadh a 'cleachdadh a' chiogaid NT-Probnp (muc) NT-Probnp (Cat. Àireamh MBS208697979797979797.Goirid, chaidh 250 μl de gach sampall agus inbhe a chuir ris ann an dùblachadh do gach ceann.Dìreach às deidh dhut an sampall a chuir ris, cuir 50 μ μl à Insy air a gheasachadh a dh 'chuid gu math.Gu socair a 'crathadh a' phlàta agus ròn le sealant.An uairsin chaidh na clàran a thoirt gu crìch aig 37 ° C airson 1 uair a thìde.An uairsin a 'miannachadh am fuasgladh agus nigh na tobraichean 4 tursan le 350 μl de fhuasgladh 1x, a' toirt a-steach fuasgladh nighe airson 1-2 mionaid gach uair.An uairsin cuir 100 μl de Assay tapachent na h-Inseay B gach tobar agus ròn le sealant plot.Chaidh an clàr a chrathadh gu socair agus air a ghlasadh aig 37 ° C airson 30 mionaid.A 'miannachadh am fuasgladh agus nigh na tobraichean 5 tursan le 350 μl de fhuasgladh 1x.Cuir 90 μl de fhuasgladh subterate air gach ceann agus bidh an truinnsear.Incubate an truinnsear aig 37 ° C airson 10-20 mionaid.Cuir 50 μl stad air fuasgladh air gach ceann.Chaidh an truinnsear a thomhas sa bhad le bhith a 'cleachdadh inneal-siubhail (biotek) Leughadh plàta aig 450 nm.
Chaidh mion-sgrùdaidhean cumhachd a thaisbeanadh gus na meudan buidhne a thaghadh a bheir seachad cumhachd do> 80% atharrachadh iomlan 10% anns a 'pharamadair le ìre mearachd 5% I. Chaidh mion-sgrùdaidhean cumhachd a thaisbeanadh gus na meudan buidhne a thaghadh a bheir seachad cumhachd do> 80% atharrachadh iomlan 10% anns a 'pharamadair le ìre mearachd 5% I. Анализ Мощности блнорНоПбебсолютного измене Ния Параметра с 5% частотстоткокок типа I. Chaidh mion-sgrùdadh cumhachd a dhèanamh gus meudan buidhne a thaghadh a bhiodh a 'toirt seachad obair paramadair iomlan 10% le ìre mearachd 5% I. Был проведен Анализ мти бннт гаТйунара гаютного изм Енения Параметров и 5% частоты О 4ибок типа I. Chaidh mion-sgrùdadh cumhachd a dhèanamh gus meud buidhne a thaghadh a bheireadh a tha a 'toirt seachad obair paramadair iomlan agus 5% de sheòrsa mearais Ìre 8%.Chaidh earrannan clò a thaghadh air thuaiream ro na deuchainnean.Cha robh a h-uile mion-sgrùdaidhean dall is sampaill air an dìmeas dìreach às deidh a h-uile dàta a sgrùdadh.Chaidh bathar-bog Preappad Grafadh (San Diego, CA) a chleachdadh gus a h-uile mion-sgrùdaidhean staitistigeil a dhèanamh. Oir tha a h-uile àireamh, bha luachan pàran air am meas cudromach aig luachan <0.05. Oir tha a h-uile àireamh, bha luachan pàran air am meas cudromach aig luachan <0.05. Для статистики P-з ения считачь) пеачения <0,05. Oir tha a h-uile àireamh, bha luachan pàran air am meas cudromach aig luachan <0.05.对于 所有 统计 数据, P 值 在值 在值 <0.05 时 被 认为 是 显着 的.对于 所有 统计 数据, P 值 在值 在值 <0.05 时 被 认为 是 显着 的. Для статистики P-з ения считачь) пеачения <0,05. Oir tha a h-uile àireamh, bha luachan pàran air am meas cudromach aig luachan <0.05.Chaidh deuchainn-t Oileanach le dà earbaill a chluich air an dàta le dìreach 2 choimeavisons.Chaidh an aon-shligheach no dà-shligheach a chleachdadh gus cruthachadh cudromachd eadar grunn bhuidhnean.Nuair a bha iad a 'coileanadh deuchainnean puist hoc, chaidh ceartachadh Tukey a chuir an sàs ann a bhith a' toirt cunntas air grunn choimeasan.Tha beachdaistean-staitistigeil sònraichte aig dàta RNSasec nuair a bhios tu a 'tomhas FDR agus P.Adjust mar a chaidh a mhìneachadh anns an roinn Dòghainn.
Airson tuilleadh fiosrachaidh mu dhealbhadh sgrùdaidh, faic Aithisg Rannsachaidh Nàdar a-steach don artaigil seo.