Nature.com غا كىرگىنىڭىزگە رەھمەت. سىز ئىشلىتىۋاتقان تور كۆرگۈچنىڭ نەشرىدە CSS قوللاش چەكلىك. ئەڭ ياخشى تەجرىبە ئۈچۈن، يېڭىلانغان تور كۆرگۈچ ئىشلىتىشىڭىزنى (ياكى Internet Explorer دا ماسلىشىشچانلىق ھالىتىنى چەكلىشىڭىزنى) تەۋسىيە قىلىمىز. بۇ ئارىلىقتا، داۋاملىق قوللاشنى كاپالەتلەندۈرۈش ئۈچۈن، تور بېكەتنى ئۇسلۇب ۋە JavaScriptسىز كۆرسىتىمىز.
دورا سىنىقى ئۈچۈن يۈرەكنىڭ فىزىئولوگىيىلىك مۇھىتىنى توغرا كۆپەيتەلەيدىغان ئىشەنچلىك سىناق نەيچىسى سىستېمىسىغا ئېھتىياج بار. ئىنسانلارنىڭ يۈرەك توقۇلمىسىنى يېتىشتۈرۈش سىستېمىسىنىڭ چەكلىك بولۇشى يۈرەك دورىسىنىڭ تەسىرىنى توغرا چۈشەندۈرۈشكە سەۋەب بولدى. بۇ يەردە، بىز يۈرەك پارچىلىرىنى ئېلېكترومېخانىكىلىق غىدىقلايدىغان ۋە يۈرەك دەۋرىيلىكىنىڭ سىستولىك ۋە دىئاستولىك باسقۇچلىرىدا فىزىئولوگىيىلىك سوزۇلۇشقا ئۇچرايدىغان يۈرەك توقۇلمىسىنى يېتىشتۈرۈش مودېلى (CTCM) نى تەرەققىي قىلدۇردۇق. 12 كۈنلۈك يېتىشتۈرۈشتىن كېيىن، بۇ ئۇسۇل يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ھاياتىي كۈچىنى قىسمەن ياخشىلىدى، ئەمما ئۇلارنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى تولۇق ساقلىيالمىدى. شۇڭا، كىچىك مولېكۇلا تەكشۈرۈشىدىن كېيىن، بىز 100 nM تىرىيودوتىرونىن (T3) ۋە 1 μM دېكسامېتازون (Dex) نى ئارىمىزغا قوشۇش ئارقىلىق پارچىلارنىڭ مىكرو قۇرۇلمىسىنى 12 كۈن ساقلىغانلىقى بايقالدى. T3/Dex داۋالاش بىلەن بىرلەشتۈرۈلگەندە، CTCM سىستېمىسى 12 كۈن ئىچىدە يېڭى يۈرەك توقۇلمىسى بىلەن ئوخشاش سەۋىيىدە ترانسكرىپسىيە ئارخىپى، ھاياتىي كۈچى، ماددا ئالمىشىش پائالىيىتى ۋە قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى ساقلىدى. بۇنىڭدىن باشقا، مەدەنىيەتتە يۈرەك توقۇلمىلىرىنىڭ ھەددىدىن زىيادە سوزۇلۇشى يۈرەك سىگنالىنىڭ گىپېرتروفىكلىقىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ، بۇ CTCM نىڭ يۈرەك سوزۇلۇشى كەلتۈرۈپ چىقارغان گىپېرتروفىك ئەھۋاللارنى تەقلىد قىلىش ئىقتىدارىغا دەلىل بولۇپ بېرىدۇ. خۇلاسە قىلىپ ئېيتقاندا، CTCM ئۇزۇن ۋاقىت مەدەنىيەتتە يۈرەكنىڭ فىزىئولوگىيىسى ۋە پاتولوگىيىلىك فىزىئولوگىيەسىنى مودېللاشتۇرالايدۇ، بۇ ئىشەنچلىك دورا تەكشۈرۈشىنى ئىشقا ئاشۇرالايدۇ.
كلىنىكىلىق تەتقىقاتتىن ئىلگىرى، ئىنسان يۈرىكىنىڭ فىزىئولوگىيىلىك مۇھىتىنى توغرا قايتا ھاسىل قىلالايدىغان ئىشەنچلىك سىناق نەيچىسى سىستېمىلىرى لازىم. بۇ خىل سىستېمىلار ئۆزگەرتىلگەن مېخانىكىلىق سوزۇلۇش، يۈرەك سوقۇش سۈرئىتى ۋە ئېلېكترو فىزىئولوگىيىلىك خۇسۇسىيەتلەرنى تەقلىد قىلىشى كېرەك. ھايۋانات مودېللىرى ئادەتتە يۈرەك فىزىئولوگىيىسىنى تەكشۈرۈش سۇپىسى سۈپىتىدە ئىشلىتىلىدۇ، دورىلارنىڭ ئىنسان يۈرىكىگە بولغان تەسىرىنى ئەكس ئەتتۈرۈشتە ئىشەنچلىكلىكى چەكلىك1،2. ئاخىرىدا، ئەڭ ياخشى يۈرەك توقۇلمىسى مەدەنىيىتى تەجرىبە مودېلى (CTCM) ھەر خىل داۋالاش ۋە فارماكولوگىيىلىك ئارىلىشىشلارغا ئىنتايىن سەزگۈر ۋە خاس مودېل بولۇپ، ئىنسان يۈرىكىنىڭ فىزىئولوگىيىسى ۋە پاتوفىزىئولوگىيىسىنى توغرا قايتا ھاسىل قىلىدۇ3. بۇنداق سىستېمىنىڭ يوقلۇقى يۈرەك زەئىپلىكىنى داۋالاشنىڭ يېڭى ئۇسۇللىرىنى بايقاشنى چەكلەيدۇ4،5 ۋە دورا يۈرەك زەھەرلىنىشىنىڭ بازاردىن چېكىنىشنىڭ ئاساسلىق سەۋەبى بولۇشىغا سەۋەب بولدى6.
ئۆتكەن ئون يىلدا، يۈرەك-قان تومۇر كېسەللىكلىرىگە تەسىر كۆرسەتمەيدىغان سەككىز خىل دورا كلىنىكىلىق ئىشلىتىشتىن توختىتىلدى، چۈنكى ئۇلار QT ئارىلىقىنىڭ ئۇزىرىشىغا سەۋەب بولۇپ، يۈرەك قورساقچىسىنىڭ ئارتىمىيىسى ۋە تۇيۇقسىز ئۆلۈمگە ئېلىپ كېلىدۇ. شۇڭا، يۈرەك-قان تومۇر ئۈنۈمى ۋە زەھەرلىكلىكىنى باھالاش ئۈچۈن ئىشەنچلىك كلىنىكىلىق ئالدى تەكشۈرۈش ئىستراتېگىيىسىگە بولغان ئېھتىياج بارغانسېرى ئېشىپ بارماقتا. يېقىندا ئىنسانلار تەرىپىدىن قوزغىتىلغان كۆپ ئىقتىدارلىق ئاساسىي ھۈجەيرىدىن ئېلىنغان يۈرەك مىيوسىتسىتلىرى (hiPS-CM) نىڭ دورا تەكشۈرۈش ۋە زەھەرلىكلىك سىنىقىدا ئىشلىتىلىشى بۇ مەسىلىنىڭ قىسمەن ھەل قىلىش چارىسى بىلەن تەمىنلەيدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، hiPS-CM نىڭ يېتىلمىگەن تەبىئىتى ۋە يۈرەك توقۇلمىلىرىنىڭ كۆپ ھۈجەيرىلىك مۇرەككەپلىكىنىڭ يوقلۇقى بۇ ئۇسۇلنىڭ ئاساسلىق چەكلىمىلىرى. يېقىنقى تەتقىقاتلار شۇنى كۆرسەتتىكى، بۇ چەكلىمىنى قىسمەن يېڭىپ، دەسلەپكى hiPS-CM نى ئىشلىتىپ، ئۆزلۈكىدىن قىسقىرىشقا باشلىغاندىن كېيىنلا يۈرەك توقۇلمىسى گىدروگېللىرىنى ھاسىل قىلىش ۋە ۋاقىتنىڭ ئۆتۈشىگە ئەگىشىپ ئېلېكتر غىدىقلىشىنى تەدرىجىي ئاشۇرۇش ئارقىلىق ھەل قىلغىلى بولىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، بۇ hiPS-CM مىكرو توقۇلمىلىرىدا چوڭلارنىڭ مىيوكاردىغا ئوخشاش يېتىلگەن ئېلېكتروفىزىئولوگىيىلىك ۋە قىسقىرىغۇچ خۇسۇسىيەتلەر يوق. بۇنىڭدىن باشقا، ئىنسان يۈرەك توقۇلمىسى تېخىمۇ مۇرەككەپ قۇرۇلمىغا ئىگە بولۇپ، ئۇ ئېندوتېلىي ھۈجەيرىلىرى، نېرۋا ھۈجەيرىلىرى ۋە سترومال فىبروبلاست قاتارلىق ھەر خىل ھۈجەيرە تىپلىرىنىڭ ئارىلاشمىسىدىن تەركىب تاپقان بولۇپ، ھۈجەيرە سىرتىدىكى ماترىكسا ئاقسىللىرى ئارقىلىق ئۆزئارا باغلىنىدۇ. چوڭ سۈت ئەمگۈچىلەرنىڭ يۈرىكىدىكى كاردىئومىئوسىت بولمىغان توپلارنىڭ11،12،13 بۇ خىل كۆپ خىللىقى يەككە ھۈجەيرە تىپلىرىنى ئىشلىتىپ يۈرەك توقۇلمىسىنى مودېللاشتۇرۇشتىكى ئاساسلىق توسالغۇ. بۇ ئاساسلىق چەكلىمىلەر فىزىئولوگىيىلىك ۋە پاتولوگىيىلىك شارائىتتا پۈتۈن مىئوكارد توقۇلمىسىنى يېتىشتۈرۈش ئۇسۇللىرىنى تەرەققىي قىلدۇرۇشنىڭ مۇھىملىقىنى تەكىتلەيدۇ.
ئىنسان يۈرىكىنىڭ ئىنچىكە (300 µm) پارچىلىرى پۈتۈن ئىنسان مىئوكاردىنىڭ ئۈمىدۋار مودېلى ئىكەنلىكى ئىسپاتلاندى. بۇ ئۇسۇل ئىنسان يۈرەك توقۇلمىسىغا ئوخشاش تولۇق 3D كۆپ ھۈجەيرىلىك سىستېمىغا ئېرىشىش ئىمكانىيىتى بىلەن تەمىنلەيدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، 2019-يىلغىچە، مەدەنىيەت قىلىنغان يۈرەك پارچىلىرىنى ئىشلىتىش قىسقا (24 سائەت) مەدەنىيەتنىڭ ساقلىنىش ۋاقتى بىلەن چەكلىنىپ كەلگەن. بۇنىڭ سەۋەبى فىزىكىلىق-مېخانىكىلىق سوزۇلۇشنىڭ كەمچىل بولۇشى، ھاۋا-سۇيۇقلۇق چېگرىسى ۋە يۈرەك توقۇلمىسىنىڭ ئېھتىياجىنى قوللىمايدىغان ئاددىي ۋاسىتىلەرنى ئىشلىتىش قاتارلىق بىر قاتار ئامىللاردۇر. 2019-يىلى، بىر قانچە تەتقىقات گۇرۇپپىلىرى يۈرەك توقۇلمىسى مەدەنىيەت سىستېمىسىغا مېخانىكىلىق ئامىللارنى قوشۇش مەدەنىيەت ئۆمرىنى ئۇزارتىش، يۈرەك ئىپادىسىنى ياخشىلاش ۋە يۈرەك پاتولوگىيىسىنى تەقلىد قىلىش رولىنى ئوينايدىغانلىقىنى كۆرسەتتى. ئىككى نەپىس تەتقىقات 17 ۋە 18-كۆرسەتكۈچتە، بىر ئوقلۇق مېخانىكىلىق يۈكنىڭ مەدەنىيەت جەريانىدا يۈرەك فېنوتىپىغا ئىجابىي تەسىر كۆرسىتىدىغانلىقى كۆرسىتىلدى. قانداقلا بولمىسۇن، بۇ تەتقىقاتلاردا يۈرەك دەۋرىيلىكىنىڭ دىنامىك ئۈچ ئۆلچەملىك فىزىكىلىق-مېخانىكىلىق يۈكى ئىشلىتىلمىدى، چۈنكى يۈرەك پارچىلىرى ئىزومېتىرىك تارتىش كۈچى 17 ياكى سىزىقلىق ئاۋكسوتون يۈكى 18 بىلەن يۈكلەنگەن. بۇ توقۇلمىلارنى سوزۇش ئۇسۇللىرى نۇرغۇن يۈرەك گېنلىرىنىڭ باستۇرۇلۇشىغا ياكى نورمالسىز سوزۇلۇش ئىنكاسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك گېنلارنىڭ ئارتۇقچە ئىپادىلىنىشىگە ئېلىپ كەلدى. دىققەت قىلىشقا ئەرزىيدىغىنى شۇكى، پىتۇلىس قاتارلىقلار 19 كۈچ ئۆزگەرتكۈچ ئىنكاسى ۋە جىددىيلىك قوزغاتقۇچلىرىنى ئىشلىتىپ يۈرەك دەۋرىنى قايتا قۇرۇش ئۈچۈن دىنامىك يۈرەك پارچىسى مەدەنىيىتى ۋاننىسىنى ئىجاد قىلدى. بۇ سىستېما تېخىمۇ توغرا سىناق نەيچىسىدە يۈرەك دەۋرىيلىكىنى مودېللاشتۇرۇشقا يول قويسىمۇ، ئۇسۇلنىڭ مۇرەككەپلىكى ۋە تۆۋەن ئۆتكۈزۈشچانلىقى بۇ سىستېمىنىڭ قوللىنىلىشىنى چەكلەيدۇ. بىزنىڭ تەجرىبىخانىمىز يېقىندا ئېلېكتر غىدىقلاش ۋە ئەلالاشتۇرۇلغان مۇھىت ئارقىلىق ئاددىيلاشتۇرۇلغان مەدەنىيەت سىستېمىسىنى ئىجاد قىلىپ، چوشقا ۋە ئىنسان يۈرەك توقۇلمىلىرىنىڭ پارچىلىرىنىڭ 6 كۈنگىچە ياشاش ئىقتىدارىنى ساقلاپ قالدى20،21.
بۇ قول يازمىدا، بىز يۈرەك توقۇلمىسى مەدەنىيىتى مودېلىنى (CTCM) تەسۋىرلەيمىز، بۇ مودېل چوشقا يۈرىكىنىڭ بۆلەكلىرىنى ئىشلىتىپ، ئۈچ ئۆلچەملىك يۈرەك فىزىئولوگىيىسى ۋە يۈرەك دەۋرىيلىكى جەريانىدا پاتولوگىيىلىك فىزىئولوگىيىلىك كېڭىيىشنى قايتا تەسۋىرلەيدىغان گۇمورال ئىشارەتلەرنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. بۇ CTCM كلىنىكىلىق دورا سىنىقىدىن بۇرۇنقى دورا سىنىقى ئۈچۈن سۈت ئەمگۈچىلەر يۈرىكىنىڭ فىزىئولوگىيىسى/پاتولوگىيىلىك فىزىئولوگىيىسىگە تەقلىد قىلىدىغان، ئەرزان، ئوتتۇرا ئۈنۈملۈك يۈرەك سىستېمىسى بىلەن تەمىنلەش ئارقىلىق كلىنىكىلىق دورا ئالدىن پەرەز قىلىشنىڭ توغرىلىقىنى ئىلگىرى كۆرۈلمىگەن سەۋىيىگە يەتكۈزەلەيدۇ.
قان ئايلىنىش مېخانىكىلىق سىگناللىرى سىناق نەيچىسىدە يۈرەك مىيوسىت فۇنكسىيەسىنى ساقلاشتا مۇھىم رول ئوينايدۇ 22،23،24. بۇ قول يازمىدا، بىز چوڭلارنىڭ يۈرەك مۇھىتىنى تەقلىد قىلالايدىغان CTCM (1a-رەسىم) نى ئىجاد قىلدۇق، بۇ CTCM فىزىئولوگىيىلىك چاستوتا (1.2 Hz، مىنۇتىغا 72 قېتىم ئۇرۇش) بىلەن ئېلېكتر ۋە مېخانىكىلىق غىدىقلاشنى قوزغىتىدۇ. دىئاستولا مەزگىلىدە توقۇلمىلارنىڭ ھەددىدىن زىيادە سوزۇلۇشىنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن، توقۇلمىلارنىڭ چوڭلۇقىنى %25 ئاشۇرۇش ئۈچۈن 3D بېسىش ئۈسكۈنىسى ئىشلىتىلدى (1b-رەسىم). C-PACE سىستېمىسى قوزغىغان ئېلېكتر سۈرئىتى سىستولادىن 100 ms بۇرۇن باشلىنىدىغان ۋاقىتقا تەڭشەلدى، بۇ سانلىق مەلۇمات توپلاش سىستېمىسى ئارقىلىق يۈرەك دەۋرىيلىكىنى تولۇق قايتا ھاسىل قىلىدۇ. توقۇلمىلارنى يېتىشتۈرۈش سىستېمىسى پروگرامما تۈزۈشكە بولىدىغان پنېۋماتىك ھەرىكەتلەندۈرگۈچ (LB Engineering, گېرمانىيە) نى ئىشلىتىپ، ئۈستۈنكى كامېرادىكى يۈرەك پارچىلىرىنىڭ كېڭىيىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغان يۇمشاق سىلىكون پەردىنى دەۋرىيلىك كېڭەيتىدۇ. بۇ سىستېما بېسىم ئۆزگەرتكۈچ ئارقىلىق سىرتقى ھاۋا لىنىيىسىگە ئۇلانغان بولۇپ، بېسىم (± 1 mmHg) ۋە ۋاقىت (± 1 ms) نى توغرا تەڭشەشكە شارائىت ھازىرلىغان (1c-رەسىم).
a توقۇلما بۆلىكىنى ئۈسكۈنىنىڭ كۈلتۈر كامېراسىنىڭ ئىچىدىكى كۆك رەڭدە كۆرسىتىلگەن 7 مىللىمېتىرلىق تىرەك ھالقىسىغا ئۇلاڭ. كۈلتۈر كامېراسى ھاۋا كامېراسىدىن نېپىز يۇمشاق سىلىكون پەردە ئارقىلىق ئايرىلغان. ئېقىپ كېتىشنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن ھەر بىر كامېرانىڭ ئارىسىغا بىر چاپلاق قويۇڭ. ئۈسكۈنىنىڭ قاپقىقىدا ئېلېكترلىك قوزغىتىش بىلەن تەمىنلەيدىغان گرافىت ئېلېكترودلىرى بار. b چوڭ توقۇلما ئۈسكۈنىسى، يېتەكلەش ھالقىسى ۋە تىرەك ھالقىسىنىڭ سىخېماتىك كۆرۈنۈشى. توقۇلما بۆلەكلىرى (قوڭۇر رەڭلىك) چوڭ ئۈسكۈنىگە قويۇلىدۇ، يېتەكلەش ھالقىسى ئۈسكۈنىنىڭ سىرتقى گىرۋىكىدىكى ئويمانلىققا قويۇلىدۇ. يېتەكلەش ئۈسكۈنىسىنى ئىشلىتىپ، توقۇلما ئاكرىل يېلىم بىلەن قاپلانغان تىرەك ھالقىسىنى يۈرەك توقۇلمىسى بۆلىكىنىڭ ئۈستىگە ئېھتىيات بىلەن قويۇڭ. c پروگراممىلىنىدىغان پنېۋماتىك ھەرىكەتلەندۈرگۈچ (PPD) تەرىپىدىن كونترول قىلىنىدىغان ھاۋا كامېراسى بېسىمىنىڭ فۇنكسىيەسى سۈپىتىدە ئېلېكترلىك قوزغىتىش ۋاقتىنى كۆرسىتىدىغان گىرافىك. بېسىم سېنزورى ئارقىلىق ئېلېكترلىك قوزغىتىشنى ماسلاشتۇرۇش ئۈچۈن سانلىق مەلۇمات يىغىش ئۈسكۈنىسى ئىشلىتىلگەن. كۈلتۈر كامېراسىدىكى بېسىم بەلگىلەنگەن چەككە يەتكەندە، ئېلېكترلىك قوزغىتىشنى قوزغىتىش ئۈچۈن C-PACE-EM غا ئىمپۇلس سىگنالى ئەۋەتىلىدۇ. d ئىنكۇباتور قەۋىتىگە قويۇلغان تۆت CTCM نىڭ رەسىمى. تۆت ئۈسكۈنە بىر PPD غا ھاۋا ئۆتكۈزۈش توك يولى ئارقىلىق ئۇلىنىدۇ، بېسىم سېنزورلىرى قان توختىتىش كلاپانىغا كىرگۈزۈلۈپ، ھاۋا ئۆتكۈزۈش توك يولىدىكى بېسىمنى نازارەت قىلىدۇ. ھەر بىر ئۈسكۈنە ئالتە توقۇلما بۆلىكىدىن تەركىب تاپقان.
بىر دانە پنېۋماتىك ھەرىكەتلەندۈرگۈچ ئىشلىتىپ، بىز 4 دانە CTCM ئۈسكۈنىسىنى كونترول قىلالىدۇق، بۇ ئۈسكۈنىلەرنىڭ ھەر بىرى 6 دانە توقۇلما بۆلىكىنى سىغدۇرالايدۇ (1d-رەسىم). CTCM دا، ھاۋا بوشلۇقىدىكى ھاۋا بېسىمى سۇيۇقلۇق بوشلۇقىدىكى سىنخرونلۇق بېسىمغا ئايلاندۇرۇلۇپ، يۈرەك پارچىسىنىڭ فىزىئولوگىيىلىك كېڭىيىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ (2a-رەسىم ۋە قوشۇمچە فىلىم 1). 80 مىللىمېتىر سىماب بېسىمىدا توقۇلما سوزۇلۇشنى باھالاشتا توقۇلما بۆلەكلىرىنىڭ %25 سوزۇلغانلىقى كۆرسىتىلدى (2b-رەسىم). بۇ پىرسەنت سوزۇلۇش نورمال يۈرەك بۆلىكىنىڭ قىسقىرىشچانلىقى ئۈچۈن فىزىئولوگىيىلىك ساركومېر ئۇزۇنلۇقىنىڭ 2.2-2.3 µm غا ماس كېلىدىغانلىقى كۆرسىتىلدى17،19،25. توقۇلما ھەرىكىتى خاس كامېرا تەڭشەكلىرى ئارقىلىق باھالاندى (1-قوشۇمچە رەسىم). توقۇلما ھەرىكىتىنىڭ ئامپلىتۇدىسى ۋە سۈرئىتى (2c، d-رەسىم) يۈرەك دەۋرىيلىكى ۋە سىستولا ۋە دىئاستولا مەزگىلىدىكى سوزۇلۇشقا ماس كەلدى (2b-رەسىم). قىسقىرىش ۋە بوشىشىش جەريانىدا يۈرەك توقۇلمىسىنىڭ سوزۇلۇشى ۋە سۈرئىتى 12 كۈن ئىچىدە مەدەنىيەتتە مۇقىم بولدى (2f-رەسىم). ئېلىكتىرلىق قوزغىتىشنىڭ يېتىشتۈرۈش جەريانىدا قىسقىرىش كۈچىگە بولغان تەسىرىنى باھالاش ئۈچۈن، بىز سايە ئالگورىزىمى ئارقىلىق ئاكتىپ شەكىل ئۆزگىرىشىنى بەلگىلەش ئۇسۇلىنى ئىجاد قىلدۇق (قوشۇمچە رەسىم 2a، b) ۋە ئېلېكترلىق قوزغىتىش بىلەن بولغان ۋە بولمىغان شەكىل ئۆزگىرىشلىرىنى پەرقلەندۈرەلىدۇق. يۈرەكنىڭ ئوخشاش بۆلىكى (رەسىم 2f). كېسىشنىڭ ھەرىكەتچان رايونىدا (R6-9)، ئېلېكترلىق قوزغىتىش جەريانىدا توك بېسىمى ئېلېكترلىق قوزغىتىش بولمىغان ۋاقىتتىكىگە قارىغاندا %20 يۇقىرى بولدى، بۇ ئېلېكترلىق قوزغىتىشنىڭ قىسقىرىش ئىقتىدارىغا قوشقان تۆھپىسىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
ھاۋا بوشلۇقى بېسىمى، سۇيۇقلۇق بوشلۇقى بېسىمى ۋە توقۇلما ھەرىكىتى ئۆلچەشلىرىنىڭ ۋەكىللىك ئىزلىرى، بوشلۇق بېسىمىنىڭ سۇيۇقلۇق بوشلۇقى بېسىمىنى ئۆزگەرتىپ، توقۇلما پارچىسىنىڭ ماس ھالدا ھەرىكەتلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغانلىقىنى جەزملەشتۈرىدۇ. b توقۇلما پارچىلىرىنىڭ سوزۇلۇش نىسبىتىنىڭ ۋەكىللىك ئىزلىرى (كۆك) سوزۇلۇش نىسبىتىگە (قىزىل رەڭ) ماس كېلىدۇ. c يۈرەك پارچىسىنىڭ ئۆلچەنگەن ھەرىكىتى ئۆلچەنگەن ھەرىكەت سۈرئىتىگە ماس كېلىدۇ. (d) يۈرەك پارچىسىدىكى دەۋرىيلىك ھەرىكەت (كۆك سىزىق) ۋە سۈرئەتنىڭ (قىزىل رەڭ چېكىتلىك سىزىق) ۋەكىللىك يولى. e دەۋرىيلىك ۋاقتى (ھەر بىر گۇرۇپپىدا n = 19 پارچە، ھەر خىل چوشقىلاردىن)، قىسقىرىش ۋاقتى (ھەر بىر گۇرۇپپىدا n = 19 پارچە، ھەر خىل چوشقىلاردىن)، بوشاش ۋاقتى (ھەر بىر گۇرۇپپىدا n = 19 پارچە، ھەر خىل چوشقىلاردىن)، توقۇلما ھەرىكىتى (n = 25). پارچە)/ھەر خىل چوشقىلاردىن)، ئەڭ يۇقىرى سىستولىك سۈرئەت (n = 24(D0)، 25(D12) پارچە/توپ) ۋە ئەڭ يۇقىرى بوشاشۇش نىسبىتى (n=24(D0)، 25(D12) پارچە/توپ) نىڭ مىقدارلاشتۇرۇلۇشى. ئىككى قۇيرۇقلۇق ستۇدېنتنىڭ t سىنىقى ھېچقانداق پارامېتىردا مۇھىم پەرقنى كۆرسەتمىدى. f ۋەكىللىك خاراكتېرلىك بېسىم ئانالىزى (قىزىل) ۋە (كۆك) ئېلېكترلىك قوزغىتىش بىلەن توقۇلما بۆلەكلىرىنىڭ ئىزلىرى، ئوخشاش بۆلەكتىن ئېلىنغان توقۇلما بۆلەكلىرىنىڭ ئون رايونلۇق رايونى. ئاستىنقى تاختىلار ئوخشىمىغان بۆلەكلەردىن ئېلىنغان ئون رايوندا ئېلېكترلىك قوزغىتىش بىلەن ۋە قوزغىتىشسىز توقۇلما بۆلەكلىرىدىكى بېسىمنىڭ پىرسەنت پەرقىنىڭ مىقدارلاشتۇرۇلغانلىقىنى كۆرسىتىدۇ. (n = ھەر خىل چوشقا گۆشىدىن 8 پارچە، ئىككى قۇيرۇقلۇق ئوقۇغۇچى t سىنىقى ئېلىپ بېرىلىدۇ؛ ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05). (n = ھەر خىل چوشقا گۆشىدىن 8 پارچە، ئىككى قۇيرۇقلۇق ئوقۇغۇچى t سىنىقى ئېلىپ بېرىلىدۇ؛ ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05). . (n = ھەر خىل چوشقالاردىن 8 بۆلەك/گۇرۇپپا، ئىككى قۇيرۇقلۇق ستۇدېنتنىڭ t-تېستى؛ ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05). （N = 8 片 / 组，来自不同的猪，进行双尾学生 t 检验； **** p <0.0001 ， ** p <0.01 ， * p <0.05 ）。 （N = 8 片 / 组，来自不同的猪，进行双尾学生 t 检验； **** p <0.0001 ， ** p <0.01 ， * p <0.05 ）。 . (n = 8 بۆلەك/گۇرۇپپا، ھەر خىل چوشقالاردىن، ئىككى قۇيرۇقلۇق ستۇدېنتنىڭ t-تېستى؛ ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05).خاتالىق بالداقلىرى ئوتتۇرىچە قىممەت ± ئۆلچەملىك چەتنىشنى بىلدۈرىدۇ.
ئىلگىرىكى ستاتىك بىئومىمېتىك يۈرەك پارچىلىرىنى يېتىشتۈرۈش سىستېمىمىزدا [20، 21]، بىز ئېلېكترلىك غىدىقلاش قوللىنىش ۋە مۇھىت تەركىبىنى ئەلالاشتۇرۇش ئارقىلىق يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ياشاشچانلىقى، ئىقتىدارى ۋە قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى 6 كۈن ساقلىدۇق. قانداقلا بولمىسۇن، 10 كۈندىن كېيىن بۇ سانلىق مەلۇماتلار زور دەرىجىدە تۆۋەنلىدى. بىز ئىلگىرىكى ستاتىك بىئومىمېتىك يېتىشتۈرۈش سىستېمىمىزدا 20، 21 كونترول شارائىتىدا (Ctrl) يېتىشتۈرۈلگەن بۆلەكلەرنى تىلغا ئالىمىز ۋە ئىلگىرى ئەلالاشتۇرۇلغان مۇھىتنى MC شارائىتى ۋە بىرلا ۋاقىتتا مېخانىكىلىق ۋە ئېلېكترلىك غىدىقلاش (CTCM) ئاستىدا يېتىشتۈرۈش سۈپىتىدە ئىشلىتىمىز. دەپ ئاتىلىدۇ. ئالدى بىلەن، بىز ئېلېكترلىك غىدىقلاشسىز مېخانىكىلىق غىدىقلاشنىڭ توقۇلمىلارنىڭ ياشاشچانلىقىنى 6 كۈن ساقلاشقا يېتەرلىك ئەمەسلىكىنى ئېنىقلىدۇق (قوشۇمچە رەسىم 3a، b). قىزىقارلىقى شۇكى، STCM ئارقىلىق فىزىكىلىق-مېخانىكىلىق ۋە ئېلېكترلىك غىدىقلاشنىڭ يولغا قويۇلۇشى بىلەن، 12 كۈنلۈك يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ياشاشچانلىقى MS شارائىتىدا يېڭى يۈرەك پارچىلىرى بىلەن ئوخشاش بولدى، ئەمما MTT ئانالىزىدا كۆرسىتىلگەندەك (1-رەسىم) Ctrl شارائىتىدا ئۇنداق بولمىدى. بۇ، يۈرەك دەۋرىيلىكىنى مېخانىكىلىق غىدىقلاش ۋە سىمۇلياتسىيە قىلىشنىڭ ئىلگىرىكى ستاتىك يېتىشتۈرۈش سىستېمىمىزدا دوكلات قىلىنغاندىن ئىككى ھەسسە ئۇزۇنراق توقۇلمىلارنىڭ ياشاشچانلىقىنى ساقلىيالايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. قانداقلا بولمىسۇن، يۈرەك تروپونىن T ۋە كوننېكسىن 43 نىڭ ئىممۇنىتېت بەلگىسى ئارقىلىق توقۇلما بۆلەكلىرىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى باھالاشتا، 12-كۈنى MC توقۇلمىلىرىدا كوننېكسىن 43 نىڭ ئىپادىلىنىشى ئوخشاش كۈندىكى كونترول گۇرۇپپىسىدىكىلەرگە قارىغاندا كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە يۇقىرى ئىكەنلىكى كۆرسىتىلدى. قانداقلا بولمىسۇن، بىردەك كوننېكسىن 43 ئىپادىلىنىشى ۋە Z-دىسك شەكىللىنىشى تولۇق ساقلىنىپ قالمىدى (3b-رەسىم). بىز توقۇلما قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى مىقدارلاشتۇرۇش ئۈچۈن سۈنئىي ئەقىل (AI) رامكىسىنى ئىشلىتىمىز26، تروپونىن-T ۋە كوننېكسىن رەڭگىگە ئاساسلانغان رەسىمگە ئاساسلانغان چوڭقۇر ئۆگىنىش تۇرۇبا يولى43 ئارقىلىق يۈرەك پارچىلىرىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكى ۋە فلۇئورېسسېنسىيەسىنى يەرلىكلىشىش كۈچى جەھەتتىن ئاپتوماتىك مىقدارلاشتۇرىمىز. بۇ ئۇسۇلدا يۈرەك توقۇلمىسىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى ئاپتوماتىك ۋە بىتەرەپ ئۇسۇلدا ئىشەنچلىك مىقدارلاشتۇرۇش ئۈچۈن ئايلانما نېرۋا تورى (CNN) ۋە چوڭقۇر ئۆگىنىش رامكىسى ئىشلىتىلىدۇ، بۇ پايدىلىنىش ماتېرىيالىدا تەسۋىرلەنگەندەك. 26. MC توقۇلمىسى 0-كۈنىگە قارىغاندا قۇرۇلما ئوخشاشلىقىنىڭ ياخشىلانغانلىقىنى كۆرسەتتى، بۇ ستاتىك كونترول بۆلەكلىرىگە سېلىشتۇرغاندا ياخشىلاندى. بۇنىڭدىن باشقا، ماسسوننىڭ ئۈچ خىل رەڭلىك بوياش نەتىجىسىدە، MS شارائىتىدا فىبروز نىسبىتىنىڭ 12-كۈنىدىكى كونترول شارائىتىغا سېلىشتۇرغاندا كۆرۈنەرلىك تۆۋەن ئىكەنلىكى بايقالدى (3c-رەسىم). CTCM يۈرەك توقۇلمىسىنىڭ 12-كۈنىدىكى ھاياتىي كۈچىنى يېڭى يۈرەك توقۇلمىسى بىلەن ئوخشاش سەۋىيىگە كۆتۈرگەن بولسىمۇ، يۈرەك بۆلەكلىرىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ياخشىلىيالمىدى.
بىر سىزىقلىق دىئاگرامما يېڭى يۈرەك پارچىلىرىنىڭ (D0) ياكى يۈرەك پارچىلىرىنىڭ MTT نىڭ 12 كۈن ئىچىدە ستاتىك مەدەنىيەتتە (D12 Ctrl) ياكى CTCM (D12 MC) مەدەنىيەتتە يېتىشتۈرۈلگەنلىكىنىڭ مىقدارلاشتۇرۇلغانلىقىنى كۆرسىتىدۇ (n = 18 (D0)، 15 (D12 Ctrl)، 12 (D12 MC) ھەر خىل چوشقا پارچىلىرى/گۇرۇپپىسى، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلىدۇ؛ ####p < 0.0001 D0 غا سېلىشتۇرغاندا ۋە **p < 0.01 D12 Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا). بىر سىزىقلىق دىئاگرامما يېڭى يۈرەك پارچىلىرىنىڭ (D0) ياكى يۈرەك پارچىلىرىنىڭ MTT نىڭ 12 كۈن ساقلانغان مەدەنىيەتتە (D12 Ctrl) ياكى CTCM (D12 MC) نىڭ ياشاشچانلىقىنىڭ مىقدارلاشتۇرۇلغانلىقىنى كۆرسىتىدۇ (n = 18 (D0)، 15 (D12 Ctrl)، 12 (D12 MC) ھەر خىل چوشقا پارچىلىرى/گۇرۇپپىسى، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلىدۇ؛ ####p < 0.0001 D0 غا سېلىشتۇرغاندا ۋە **p < 0.01 D12 Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا).گىستوگرامما ھەر خىل چوشقا گۆشىدىن ئېلىنغان MTT يېڭى يۈرەك كېسىشمىسىنىڭ (D0) ياكى يۈرەك كېسىشمىسىنىڭ ياشاشچانلىقىنىڭ مىقدارلاشتۇرۇلغانلىقىنى كۆرسىتىدۇ، بۇنىڭدا 12 كۈن ئىچىدە ستاتىك مەدەنىيەت (D12 كونترول) ياكى CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0)، 15 (D12 كونترول). ))، 12 (D12 MC) كېسىشمىسى/گۇرۇپپىسىدا يېتىشتۈرۈلگەن بولۇپ، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلىدۇ؛#### p <0,0001 по сравнению с D0 и ** p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p < D0 غا سېلىشتۇرغاندا 0.0001 ۋە **p < D12 Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا 0.01). a 条形图显示在静态培养 (D12 Ctrl) 或 CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切片 (D0) 或心脏切片培养 12 天的 MTT 活力的量化) ，来自不同猪的 12 (D12 MC) 切片 / 组，进行单向 ANOVA 测试；与 D0 相比， #### p <0.0001 ，与 D12 ptrl a 条形图显示在静态培养 (D12 Ctrl) 或 CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切片 (D0) ，来自不同猪的 12 (D12 MC) 切片 / 组，进行单向 ANOVA 测试；与 D0 相比， #### p <0.0001 ，与 D12 Ctrl 相比， ** p。)يېڭى يۈرەك كېسىشمىلىرى (D0) ياكى 12 كۈن ستاتىك مەدەنىيەتتە (D12 كونترول) ياكى CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0)، 15 (D12 كونترول))، ھەر خىل چوشقىلاردىن ئېلىنغان 12 (D12 MC) كېسىشمىلەر/گۇرۇپپىلاردا يېتىشتۈرۈلگەن يۈرەك كېسىشمىلىرىدىكى MTT نىڭ ياشاشچانلىقىنى مىقدارلاشتۇرۇشنى كۆرسىتىدىغان گىستوگرامما، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى؛#### p <0,0001 по сравнению с D0, ** p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p < D0 غا سېلىشتۇرغاندا 0.0001، **p < D12 غا سېلىشتۇرغاندا 0.01 Ctrl).b تروپونىن-T (يېشىل)، connexin 43 (قىزىل) ۋە DAPI (كۆك) نى يېڭىدىن ئايرىۋېتىلگەن يۈرەك پارچىلىرى (D0) ياكى يۈرەك پارچىلىرى ئىچىدە 12 كۈن ستاتىك شارائىتتا (Ctrl) ياكى CTCM شارائىتىدا (MC) يېتىشتۈرۈلگەن) ۋەكىللىك ئىممۇنىتېت فلۇئورېسسېنسىيە رەسىملىرى (بوش كۆلەم = 100 µm). يۈرەك توقۇلمىسىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى سۈنئىي ئەقىل بىلەن مىقدارلاشتۇرۇش (n = 7 (D0)، 7 (D12 Ctrl)، ھەر بىرىدىن 5 (D12 MC) پارچە/گۇرۇپپا، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلىدۇ؛ D0 غا سېلىشتۇرغاندا ####p < 0.0001 ۋە D12 Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا ****p < 0.0001). يۈرەك توقۇلمىسىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى سۈنئىي ئەقىل بىلەن مىقدارلاشتۇرۇش (n = 7 (D0)، 7 (D12 Ctrl)، ھەر بىرىدىن 5 (D12 MC) پارچە/گۇرۇپپا، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلىدۇ؛ D0 غا سېلىشتۇرغاندا ####p < 0.0001 ۋە D12 Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا ****p < 0.0001). Количественная оценка структурной целостности сердечной ткани искусственным интеллектом (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) срезов/групп от разных свиней, проводится однофакторный тест ANOVA; ####p < 0,0001 по сравнению с D0 и **** p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). سۈنئىي ئەقىل ئارقىلىق يۈرەك توقۇلمىلىرىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى مىقدارلاشتۇرۇش (n = 7 (D0)، 7 (D12 Ctrl)، 5 (D12 MC) ھەر خىل چوشقا پارچىلىرى/گۇرۇپپىلىرى، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى؛ ####p < 0.0001، D0 ۋە ****p < 0.0001 بولسا D12 Ctrl بىلەن سېلىشتۇرغاندا).人工智能量化心脏组织结构完整性（ n = 7 (D0) ، 7 (D12 Ctrl) ، 5 (D12 MC) ھەر بىر ئوخشىمىغان چوشقا ، گۇرۇپپا تاق ئانوۋا سىنىقى ؛ #### p <0.0001 与 D0 相比， **** p <0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。人工智能量化心脏组织结构完整性（ n = 7 (D0) ، 7 (D12 Ctrl) ، 5 (D12 MC) ھەر خىل توڭگۇزلارنىڭ ھەر بىرى / گۇرۇپپا ، تاق يۆنىلىشلىك ANOVA سىنىقى ؛ #### p <0.0001 与 D0 相比， **** p <0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。 Искусственный интеллект для количественной оенки кинной целостности сердечной ткани (n = 7 (D0) ، 7 (D12 Ctrl) ، 5 сравнения **** p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). يۈرەك توقۇلمىسىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى مىقدارلاشتۇرۇش ئۈچۈن سۈنئىي ئەقىل (n = 7 (D0)، 7 (D12 Ctrl)، 5 (D12 MC) ھەر خىل چوشقىلارنىڭ بۆلەكلىرى/گۇرۇپپىسى، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى؛ ####p<0.0001 vs .D0 سېلىشتۇرۇش ئۈچۈن ****p < 0.0001 D12 Ctrl بىلەن سېلىشتۇرغاندا). c ماسسوننىڭ ئۈچ خىل رەڭلىك بوياق بىلەن بوялغان يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى (سولدا) ۋە مىقدارى (ئوڭدا) (ھەر خىل چوشقا پارچىلىرىدىن n = 10 پارچە/گۇرۇپپا، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى؛ ####p < 0.0001 D0 غا سېلىشتۇرغاندا ۋە ***p < 0.001 D12 Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا). c ماسسوننىڭ ئۈچ خىل رەڭلىك بوياق بىلەن بويالغان يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى (سولدا) ۋە مىقدارى (ئوڭدا) (ھەر خىل چوشقا پارچىلىرىدىن n = 10 پارچە/گۇرۇپپا، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى؛ #### p < 0.0001 D0 غا سېلىشتۇرغاندا ۋە ***p < 0.001 D12 Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا). c Репрезент كاننىي изображения (слева) ۋە количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашенных трихромным красителем Мас муа ANOVA #### p <0,0001 по сравнению с D0 и *** p <0,001 по сравненю с D12 Ctrl) c ماسسوننىڭ ئۈچ خىل رەڭلىك بوياق بىلەن بوялغان يۈرەك كېسىشمىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى (سولدا) ۋە مىقدارى (ئوڭدا) (ھەر خىل چوشقا گۆشىدىن ئېلىنغان n = 10 كېسىشمە، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى؛ #### p < 0 .0001 D0 بىلەن سېلىشتۇرغاندا ۋە ***p < 0.001 D12 Ctrl بىلەن سېلىشتۇرغاندا). c 用 ماسسون 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸尺度 = 500 µm ）（ n = 10 个切片 / 组，每组来自不同的猪，进行单向 ANOVA 测试； #### p <0.0001 与 D0 相比， *** p <0.001 与 D12 Ctrl 相比）。 C 用 ماسسون 相比）。 c Репрезент كاننىيې изображения (слева) ۋە كولېچېستۋېننىي ما (سپراۋا) срезов сердца, окрашенных трихромным красителем Мас мена (بۇя шкала = 500 мкм) однофакторного ди мин чинного мата; ### #p <0,0001 по сравнению с D0, *** p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c ماسسوننىڭ ئۈچ خىل رەڭلىك بوياق بىلەن بوялغان يۈرەك كېسىشمىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى (سولدا) ۋە مىقدارى (ئوڭدا) (بوشلۇق = 500 µm) (n = 10 كېسىشمە/گۇرۇپپا، ھەر بىرى ئوخشىمايدىغان چوشقادىن ئېلىنغان، بىر تەرەپلىمە ئۆزگىرىشچانلىق ئانالىزى ئارقىلىق سىناق قىلىنغان ;### # p < 0.0001 نى D0 غا سېلىشتۇرغاندا، ***p < 0.001 نى D12 Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا).خاتالىق بالداقلىرى ئوتتۇرىچە قىممەت ± ئۆلچەملىك چەتنىشنى بىلدۈرىدۇ.
بىز كىچىك مولېكۇلالارنى ئۆستۈرۈش مۇھىتىغا قوشۇش ئارقىلىق، CTCM ئۆستۈرۈش جەريانىدا كاردىئومىئوسىتنىڭ پۈتۈنلۈكىنى ياخشىلىغىلى ۋە فىبروزنىڭ تەرەققىياتىنى ئازايتقىلى بولىدۇ، دەپ پەرەز قىلدۇق. شۇڭا، ئارىلاشتۇرغۇچى ئامىللارنىڭ سانى ئاز بولغاچقا، بىز ستاتىك كونترول مەدەنىيىتىمىزنى ئىشلىتىپ كىچىك مولېكۇلالارنى تەكشۈردۇق20،21. بۇ تەكشۈرۈش ئۈچۈن دېكسامېتازون (Dex)، تىرىيودتىرونىن (T3) ۋە SB431542 (SB) تاللاندى. بۇ كىچىك مولېكۇلالار ئىلگىرى hiPSC-CM مەدەنىيىتىدە كاردىئومىئوسىتلارنىڭ يېتىلىشىنى قوزغىتىش ئۈچۈن ساركومېر ئۇزۇنلۇقى، T نەيچىسى ۋە ئۆتكۈزۈش سۈرئىتىنى ئاشۇرۇش ئارقىلىق ئىشلىتىلگەن. بۇنىڭدىن باشقا، Dex (بىر خىل گلۇكوكورتىكوئىد) ۋە SB نىڭ ياللۇغنى باستۇرۇش ئىقتىدارى مەلۇم29،30. شۇڭا، بىز بۇ كىچىك مولېكۇلالارنىڭ بىرىنى ياكى بىرىكمىسىنى قوشۇش يۈرەك بۆلەكلىرىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى ياخشىلايدىغان-ياخشىلىمايدىغانلىقىنى سىناق قىلدۇق. دەسلەپكى تەكشۈرۈش ئۈچۈن، ھەر بىر بىرىكمىنىڭ مىقدارى ھۈجەيرە ئۆستۈرۈش مودېللىرىدا كۆپ ئىشلىتىلىدىغان قويۇقلۇققا ئاساسەن تاللاندى (1 μM Dex27، 100 nM T327 ۋە 2.5 μM SB31). 12 كۈنلۈك ئۆستۈرۈشتىن كېيىن، T3 بىلەن Dex نىڭ بىرلەشتۈرۈلۈشى ئەڭ ياخشى كاردىئومىئوسىت قۇرۇلمىسىنىڭ پۈتۈنلۈكىگە ۋە تالالىق قايتا شەكىللىنىشىنىڭ ئەڭ تۆۋەن بولۇشىغا ئېلىپ كەلدى (قوشۇمچە رەسىملەر 4 ۋە 5). بۇنىڭدىن باشقا، بۇ قويۇقلۇقتىكى T3 ۋە Dex نى ئىككى ياكى ئىككى ھەسسە كۆپ ئىشلەتكەندە نورمال قويۇقلۇقتىكىگە سېلىشتۇرغاندا زىيانلىق تەسىرلەر كۆرۈلدى (قوشۇمچە رەسىم 6a، b).
دەسلەپكى تەكشۈرۈشتىن كېيىن، بىز 4 خىل ئۆستۈرۈش شارائىتىنى يۈز تۇرانە سېلىشتۇردۇق (4a-رەسىم): Ctrl: ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەن ستاتىك ئۆستۈرۈشىمىزدە ئەلالاشتۇرۇلغان مۇھىت ئارقىلىق يېتىشتۈرۈلگەن يۈرەك بۆلەكلىرى؛ 20.21 TD: چارشەنبە كۈنى T3 ۋە Ctrl s قوشۇلغان Dex؛ MC: ئىلگىرى ئەلالاشتۇرۇلغان مۇھىت ئارقىلىق CTCM دا يېتىشتۈرۈلگەن يۈرەك بۆلەكلىرى؛ ۋە MT: مۇھىتقا T3 ۋە Dex قوشۇلغان CTCM. 12 كۈنلۈك يېتىشتۈرۈشتىن كېيىن، MS ۋە MT توقۇلمىلىرىنىڭ ياشاشچانلىقى MTT سىنىقى ئارقىلىق باھالانغان يېڭى توقۇلمىلار بىلەن ئوخشاش بولدى (4b-رەسىم). قىزىقارلىقى شۇكى، ترانسۋېل مەدەنىيىتىگە (TD) T3 ۋە Dex قوشۇش Ctrl شارائىتىغا سېلىشتۇرغاندا ياشاشچانلىقىدا كۆرۈنەرلىك ياخشىلىنىشقا ئېرىشەلمىدى، بۇ يۈرەك بۆلەكلىرىنىڭ ياشاشچانلىقىنى ساقلاشتا مېخانىكىلىق قوزغىتىشنىڭ مۇھىم رولىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
مېخانىكىلىق قوزغىتىش ۋە T3/Dex تولۇقلىمىسىنىڭ 12 كۈن ئىچىدە ئوتتۇراھالغا بولغان تەسىرىنى باھالاشتا ئىشلىتىلگەن تۆت خىل ئۆستۈرۈش شارائىتىنى تەسۋىرلەيدىغان تەجرىبە لايىھەلەش دىئاگراممىسى. b سىتول گىرافىكى 4 خىل ئۆستۈرۈش شارائىتىنىڭ ھەممىسىدە (Ctrl, TD, MC ۋە MT) ئۆستۈرۈشتىن كېيىنكى 12 كۈندىن كېيىنكى ياشاشچانلىقىنىڭ مىقدارلاشتۇرۇلغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ سانلىق مەلۇمات ھەر خىل چوشقا گۆشىدىن ئېلىنغان يېڭى يۈرەك پارچىلىرى (D0) بىلەن سېلىشتۇرۇلغان (n = 18 (D0)، 15 (D12 Ctrl, D12 TD ۋە D12 MT)، 12 (D12 MC) پارچىلار/گۇرۇپپا، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلىدۇ؛ ####p < 0.0001، ###p < 0.001 D0 بىلەن سېلىشتۇرۇلغان ۋە **p < 0.01 D12 Ctrl بىلەن سېلىشتۇرۇلغان). b سىتول گىرافىكى 4 خىل ئۆستۈرۈش شارائىتىنىڭ ھەممىسىدە (Ctrl, TD, MC ۋە MT) ئۆستۈرۈشتىن كېيىنكى 12 كۈندىن كېيىنكى ياشاشچانلىقىنىڭ مىقدارلاشتۇرۇلغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ سانلىق مەلۇماتتا ھەر خىل چوشقا گۆشىدىن ئېلىنغان يېڭى يۈرەك پارچىلىرى (D0) بىلەن سېلىشتۇرۇلغان (n = 18 (D0)، 15 (D12 Ctrl, D12 TD ۋە D12 MT)، 12 (D12 MC) پارچىلىرى/گۇرۇپپىلار ئىشلىتىلگەن، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلغان؛ ####p < 0.0001، ###p < D0 غا سېلىشتۇرغاندا 0.001 ۋە **p < 0.01 D12 ctrl غا سېلىشتۇرغاندا). ب D12 TD ۋە D12 MT) ، 12 b سىتول گىرافىكى 4 خىل ئۆستۈرۈش شارائىتىنىڭ ھەممىسىدە (كونترول، TD، MC ۋە MT) ئۆستۈرۈشتىن كېيىنكى 12 كۈندىكى ياشاشچانلىقىنىڭ مىقدارلاشتۇرۇلۇشىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ، بۇ نىسبەت يېڭى يۈرەك كېسىشمىلىرى (D0) بىلەن سېلىشتۇرۇلغان (n = 18 (D0)، 15 (D12 Ctrl، D12 TD ۋە D12 MT)، 12 (D12 MC) ھەر خىل چوشقا كېسىشمىلىرى/گۇرۇپپىسى، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى؛ ####p < 0.0001، ###p < 0.001 گە سېلىشتۇرغاندا D0 ۋە **p < 0.01 گە سېلىشتۇرغاندا D12 Ctrl بىلەن سېلىشتۇرغاندا). b 条形图显示所有 4 种培养条件（ Ctrl 、 TD 、 MC 和 MT ）与新鲜心脏切片 (D0) (n = 18 (D0) 、 15 (D12 Ctrl 、 D12 TD 和 D12 MT) ，来自不同猪的 12 (D12 MC) 切片 / 组，进行单向 ANOVA 测试； #### p <0.0001 ， ### p <0.001 与b 4 12 (D12 MC) b Гистограмma, показывающая все 4 условия маттивировanya (كان ، TD ، MC ۋە MT) по сравнению со свежим срезами сердца (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ۋە D12 MT), от разных односторонний ту ANOVA b گىستوگرامما 4 خىل ئۆستۈرۈش شارائىتىنىڭ ھەممىسىنى (كونترول، TD، MC ۋە MT) يېڭى يۈرەك كېسىشمىسى (D0) بىلەن سېلىشتۇرىدۇ (n = 18 (D0)، 15 (D12 Ctrl، D12 TD ۋە D12 MT)، ھەر خىل چوشقا 12 (D12 MC) كېسىشمىسى/گۇرۇپپىسى، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى؛ ####p<0.0001، ###p<0.001 D0 غا سېلىشتۇرغاندا، **p<0.01 كونترول D12 غا سېلىشتۇرغاندا). c سىتول گىرافىكى 4 خىل ئۆستۈرۈش شارائىتىنىڭ ھەممىسىدە (Ctrl، TD، MC ۋە MT) يېڭى يۈرەك پارچىلىرى (D0) بىلەن سېلىشتۇرۇلغان 12 كۈندىن كېيىنكى گلۇكوزا ئېقىمىنىڭ مىقدارلاشتۇرۇلۇشىنى كۆرسىتىدۇ (n = ھەر خىل چوشقا گۆشىدىن ئېلىنغان 6 پارچە/گۇرۇپپا، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلىدۇ؛ ###p < 0.001، D0 بىلەن سېلىشتۇرۇلغان ۋە ***p < 0.001، D12 Ctrl بىلەن سېلىشتۇرۇلغان). c سىتول گىرافىكى 4 خىل ئۆستۈرۈش شارائىتىنىڭ ھەممىسىدە (Ctrl، TD، MC ۋە MT) يېڭى يۈرەك پارچىلىرى (D0) بىلەن سېلىشتۇرۇلغان 12 كۈندىن كېيىنكى گلۇكوزا ئېقىمىنىڭ مىقدارلاشتۇرۇلۇشىنى كۆرسىتىدۇ (n = ھەر خىل چوشقا گۆشىدىن ئېلىنغان 6 پارچە/گۇرۇپپا، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلىدۇ؛ ###p < 0.001، D0 بىلەن سېلىشتۇرۇلغان ۋە ***p < 0.001، D12 Ctrl بىلەن سېلىشتۇرۇلغان). س свиней, односторонний Выполняется ту ANOVA ### p <0,001 по сравнению с D0 и *** p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl); c گىستوگراممىدا 4 خىل ئۆستۈرۈش شارائىتىنىڭ ھەممىسىدە (كونترول، TD، MC ۋە MT) يېڭى يۈرەك كېسىشمىسى (D0) بىلەن سېلىشتۇرۇلغان 12 كۈندىن كېيىنكى گلۇكوزا ئېقىمىنىڭ مىقدارلاشتۇرۇلغانلىقى كۆرسىتىلگەن (n = ھەر خىل چوشقا گۆشىدىن ئېلىنغان 6 كېسىشمە، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلغان؛ ###p < D0 غا سېلىشتۇرغاندا 0.001 ۋە ***p < D12 Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا 0.001). c 条形图显示所有 4 种培养条件（ Ctrl 、 TD 、 MC 和 MT ）与新鲜心脏切片 (D0) 相比，培养后 12 天的葡萄糖通量定量（ n = 6 片 / 组，来自不同猪，单向执行 ANOVA 测试； ### p <0.001 ，与 D0 相比， *** p <0.001 与 D12 Ctrl 相比）。 C 条形图 显示 所有 4 种 条件 （（ ctrl 、 td 、 mc 和 mt） 新鲜 心脏 切片 切片 切片 相比 ， 后 后 天 = n = 6 片 / 组 ， 来自 猪 ， ， 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 <0.001 与 D12 Ctrl 相比）。 س разных свиней, односторонний Были проведены сы ANOVA ### p <0,001 по сравнению с D0, *** p c گىستوگرامما 4 خىل ئۆستۈرۈش شارائىتىنىڭ ھەممىسىدە (كونترول، TD، MC ۋە MT) يېڭى يۈرەك كېسىشمىسى (D0) بىلەن سېلىشتۇرۇلغان 12 كۈندىن كېيىنكى گلۇكوزا ئېقىمىنىڭ مىقدارلاشتۇرۇلغانلىقىنى كۆرسىتىدۇ (n = 6 كېسىشمە ھەر بىر گۇرۇپپا، ھەر خىل چوشقالاردىن، بىر تەرەپلىمە. ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى، ###p < 0.001 D0 غا سېلىشتۇرغاندا، ***p < 0.001 D12 گە سېلىشتۇرغاندا (كونترول).d ئون رايونلۇق توقۇلما كېسىش نۇقتىسىدىكى يېڭى (كۆك)، 12-كۈنلۈك MC (يېشىل) ۋە 12-كۈنلۈك MT (قىزىل) توقۇلمىلارنىڭ شتام ئانالىزى سىزمىسى (n = 4 پارچە/گۇرۇپپا، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى؛ گۇرۇپپىلار ئارىسىدا مۇھىم پەرق يوق). e ۋولقان سىزمىسى يېڭى يۈرەك كېسىشمىلىرىدىكى (D0) 10-12 كۈن ئىچىدە ستاتىك شارائىتتا (Ctrl) ياكى MT شارائىتىدا (MT) يېتىشتۈرۈلگەن يۈرەك كېسىشمىلىرى بىلەن سېلىشتۇرغاندا پەرقلىق ئىپادىلەنگەن گېنلارنى كۆرسىتىدۇ. f ھەر بىر يېتىشتۈرۈش شارائىتىدا يېتىشتۈرۈلگەن يۈرەك كېسىشمىلىرى ئۈچۈن ساركومېر گېنلىرىنىڭ ئىسسىقلىق خەرىتىسى. خاتالىق بالداقلىرى ئوتتۇرىچە ± ئۆلچەملىك چەتنىشنى بىلدۈرىدۇ.
ماي كىسلاتاسىنىڭ ئوكسىدلىنىشىدىن گلىكولىزغا ئۆتۈشتىكى ماددا ئالمىشىشقا تايىنىش كاردىئومىئوسىتنىڭ دېففىرېنسىيەلىنىشىنىڭ بىر ئالاھىدىلىكى. يېتىلمىگەن كاردىئومىئوسىتلار ئاساسلىقى ATP ئىشلەپچىقىرىش ئۈچۈن گلىكوزا ئىشلىتىدۇ ۋە ئاز ساندىكى كىرىستا بىلەن گىپوپلاستىك مىتوخوندىرىيەگە ئىگە 5،32. گلىكوزا ئىشلىتىش ئانالىزى شۇنى كۆرسەتتىكى، MC ۋە MT شارائىتىدا، گلىكوزا ئىشلىتىش 0-كۈنىدىكى توقۇلمىلارغا ئوخشاش بولغان (4c-رەسىم). قانداقلا بولمىسۇن، Ctrl ئەۋرىشكىلىرىدە يېڭى توقۇلمىلارغا سېلىشتۇرغاندا گلىكوزا ئىشلىتىش مىقدارى كۆرۈنەرلىك ئاشقان. بۇ CTCM ۋە T3/Dex نىڭ بىرلەشتۈرۈلۈشى توقۇلمىلارنىڭ ھاياتىي كۈچىنى ئاشۇرىدىغانلىقىنى ۋە 12 كۈنلۈك يېتىشتۈرۈلگەن يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ماددا ئالمىشىش فېنوتىپىنى ساقلايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. بۇنىڭدىن باشقا، سورت ئانالىزى شۇنى كۆرسەتتىكى، MT ۋە MS شارائىتىدا 12 كۈن ئىچىدە سورت مىقدارى يېڭى يۈرەك توقۇلمىلىرىدىكى بىلەن ئوخشاش ساقلانغان (4d-رەسىم).
CTCM ۋە T3/Dex نىڭ يۈرەك پارچىلىرى توقۇلمىسىنىڭ دۇنياۋى ترانسكرىپسىيە مەنزىرىسىگە بولغان ئومۇمىي تەسىرىنى تەھلىل قىلىش ئۈچۈن، بىز تۆت خىل يېتىشتۈرۈش شارائىتىدىكى يۈرەك پارچىلىرىغا RNAseq ئېلىپ باردۇق (قوشۇمچە سانلىق مەلۇمات 1). قىزىقارلىقى شۇكى، MT پارچىلىرى يېڭى يۈرەك توقۇلمىسىغا يۇقىرى ترانسكرىپسىيە ئوخشاشلىقىنى كۆرسەتتى، 13642 گېننىڭ ئىچىدە پەقەت 16 گېن پەرقلىق ئىپادىلەندى. قانداقلا بولمىسۇن، ئىلگىرى كۆرسەتكەندەك، Ctrl پارچىلىرى 10-12 كۈندىن كېيىن يېتىشتۈرۈلگەندىن كېيىن 1229 پەرقلىق ئىپادىلەنگەن گېننى كۆرسەتتى (4e-رەسىم). بۇ سانلىق مەلۇماتلار يۈرەك ۋە فىبروبلاست گېنلىرىنىڭ qRT-PCR ئارقىلىق دەلىللەندى (قوشۇمچە رەسىم 7a-c). قىزىقارلىقى شۇكى، Ctrl پارچىلىرى يۈرەك ۋە ھۈجەيرە دەۋرىيلىكى گېنلىرىنىڭ تۆۋەنلىشى ۋە ياللۇغلىنىش گېنى پروگراممىلىرىنىڭ ئاكتىپلىنىشىنى كۆرسەتتى. بۇ سانلىق مەلۇماتلار ئادەتتە ئۇزۇن مۇددەتلىك يېتىشتۈرۈشتىن كېيىن يۈز بېرىدىغان پەرقلىقلىشىشنىڭ MT شارائىتىدا پۈتۈنلەي ئاجىزلىشىدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ (قوشۇمچە رەسىم 8a، b). ساركومېر گېنلىرىنى ئەستايىدىل تەتقىق قىلىش نەتىجىسىدە، پەقەت MT شارائىتىدىلا ساركومېرنى كودلايدىغان گېنلارنىڭ (4f-رەسىم) ۋە ئىئون قانىلىنى (قوشۇمچە 9-رەسىم) ساقلاپ قالىدىغانلىقى، بۇ ئۇلارنىڭ Ctrl، TD ۋە MC شارائىتى ئاستىدا باستۇرۇلۇشىدىن ساقلايدىغانلىقى كۆرسىتىلدى. بۇ سانلىق مەلۇماتلار مېخانىكىلىق ۋە گۇمورال غىدىقلىنىش (T3/Dex) نىڭ بىرىكمىسى ئارقىلىق، يۈرەك پارچىسىنىڭ ترانسكرىپتومىسىنىڭ 12 كۈندىن كېيىنمۇ يېڭى يۈرەك پارچىلىرىغا ئوخشاش بولۇپ قالالايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
بۇ ترانسكرىپسىيە نەتىجىلىرى يۈرەك كېسىشمىلىرىدىكى يۈرەك مىيوسىتلىرىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنىڭ MT شارائىتىدا 12 كۈن ساقلىنىدىغانلىقى بىلەن قوللىنىدۇ، بۇ پۈتۈن ۋە يەرلىك كوننېكسىن 43 (5a-رەسىم) دىن كۆرۈۋېلىشقا بولىدۇ. بۇنىڭدىن باشقا، MT شارائىتىدا يۈرەك كېسىشمىلىرىدىكى فىبروز Ctrl بىلەن سېلىشتۇرغاندا كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە تۆۋەنلىگەن ۋە يېڭى يۈرەك كېسىشمىلىرىگە ئوخشاش (5b-رەسىم). بۇ سانلىق مەلۇماتلار مېخانىكىلىق قوزغىتىش ۋە T3/Dex داۋالاشنىڭ بىرلەشتۈرۈلۈشىنىڭ يۈرەك كېسىشمىلىرىدىكى يۈرەك قۇرۇلمىسىنى ئۈنۈملۈك ساقلايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
يېڭى ئايرىۋېتىلگەن يۈرەك پارچىلىرى (D0) دىكى ياكى تۆت يۈرەك پارچىسى يېتىشتۈرۈش شارائىتىنىڭ ھەممىسىدە 12 كۈن يېتىشتۈرۈلگەن تروپونىن-T (يېشىل)، كوننېكسىن 43 (قىزىل) ۋە DAPI (كۆك) نىڭ ۋەكىللىك ئىممۇنوفلۇئورېسسېنسىيە رەسىملىرى (مىقياس بالداق = 100 µm). يۈرەك توقۇلمىسىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى سۈنئىي ئەقىل بىلەن مىقدارلاشتۇرۇش (n = 7 (D0 ۋە D12 Ctrl)، ھەر خىل چوشقالاردىن 5 پارچە (D12 TD، D12 MC ۋە D12 MT)، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى؛ ####p < 0.0001 نى D0 ۋە *p < 0.05 بىلەن سېلىشتۇرغاندا، ياكى ****p < 0.0001 نى D12 Ctrl بىلەن سېلىشتۇرغاندا). يۈرەك توقۇلمىسىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى سۈنئىي ئەقىل بىلەن مىقدارلاشتۇرۇش (n = 7 (D0 ۋە D12 Ctrl)، ھەر خىل چوشقالاردىن 5 پارچە (D12 TD، D12 MC ۋە D12 MT)، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى؛ #### p < 0.0001 نى D0 ۋە *p < 0.05 بىلەن سېلىشتۇرغاندا، ياكى ****p < 0.0001 نى D12 Ctrl بىلەن سېلىشتۇرغاندا). Количественная оценка структурной целостности ткани сердца с помощью искусственного интеллекта (n = 7 (D0 и D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC и D12 MT) срезов/группу от разных свиней, проведен однофакторный тест ANOVA; #### p < 0,0001 по сравнению с D0 и * p <0,05 или **** p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). سۈنئىي ئەقىل (n = 7 (D0 ۋە D12 Ctrl)، 5 (D12 TD، D12 MC ۋە D12 MT) ھەر خىل چوشقا پارچىلىرى/گۇرۇپپىسى ئارقىلىق يۈرەك توقۇلمىلىرىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى مىقدارلاشتۇرۇش، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى؛ #### D0 غا سېلىشتۇرغاندا p < 0.0001 ۋە *p < 0.05 ياكى D12 Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا ****p < 0.0001).对不同猪的心脏组织结构完整性（ n = 7 （D0 和 D12 Ctrl ）、 5 （D12 TD 、 D12 MC 和 D12 MT ）切片 / 组）进行人工智能量化，进行单向 ANOVA 测试； #### p <0.0001 与 D0 和 * p <0.05 相比，或 **** p <0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。对 不同 猪 的 心脏 结构 完整性 （n = 7 （d0 和 d12 ctrl） （5 （d12 td 、 d12 mc 和 d12 mt） 组） 人工 化 进行 进行 单向 单向 测试 # ########## p <0.0001 与Ctrl 相比）。بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئارقىلىق ھەر خىل چوشقالاردا (n = 7 (D0 ۋە D12 Ctrl)، 5 (D12 TD، D12 MC ۋە D12 MT) بۆلەك/گۇرۇپپا) سۈنئىي ئەقىل ئارقىلىق يۈرەك توقۇلمىلىرىنىڭ قۇرۇلما پۈتۈنلۈكىنى مىقدارلاشتۇرۇش؛#### p <0,0001 по сравнению с D0 и * p <0,05 или **** p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). #### p < 0.0001 نى D0 غا سېلىشتۇرغاندا، *p < 0.05 ياكى ****p < 0.0001 نى D12 Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا). b ماسسوننىڭ ئۈچ خىل رەڭلىك بوياق بىلەن بوялغان يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى ۋە مىقدارى (Scale بالداق = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ۋە D12 MC)، ھەر خىل چوشقا پارچىلىرىدىن ئېلىنغان 9 (D12 MT) پارچى/گۇرۇپپا، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى؛ ####p < 0.0001 D0 ۋە ***p < 0.001 بىلەن سېلىشتۇرغاندا، ياكى ****p < 0.0001 D12 Ctrl بىلەن سېلىشتۇرغاندا). b ماسسوننىڭ ئۈچ خىل رەڭلىك بوياق بىلەن بوялغان يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى ۋە مىقدارى (Scale بالداق = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ۋە D12 MC)، ھەر خىل چوشقا پارچىلىرىدىن ئېلىنغان 9 (D12 MT) پارچى/گۇرۇپپا، بىر تەرەپلىمە ANOVA سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى؛ ####p < 0.0001 D0 ۋە ***p < 0.001 بىلەن سېلىشتۇرغاندا، ياكى ****p < 0.0001 D12 Ctrl بىلەن سېلىشتۇرغاندا). b Репрезент كاننىيې изображения и количественная оенка срезов сердца, окрашенных трихромным красителем Мас ина выполняется односторонний ту ANOVA #### p <0,0001 по сравнению с D0 и *** p <0,001 или **** p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl); b ماسسوننىڭ ئۈچ خىل رەڭلىك بوياق ئۇسۇلى بىلەن بويالغان يۈرەك كېسىشمىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى ۋە مىقدارى (ماسسا سىزىقى = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ۋە D12 MC)، ھەر خىل چوشقالاردىن ئېلىنغان 9 (D12 MT) كېسىشمە/گۇرۇپپا، بىر تەرەپلىمە ANOVA ئۇسۇلى بىلەن ئېلىپ بېرىلغان؛ ####p < 0.0001 D0 ۋە ***p < 0.001 ياكى ****p < 0.0001 D12 Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا). b 用 Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺 = 500 µm ）（ n = 10 （D0 、 D12 Ctrl 、 D12 TD 和 D12 MC ），来自不同猪的 9 个（ D12 MT ）切片 / 组，进行单因素方差分析； #### p <0.0001 与 D0 相比， *** p <0.001 ，或 **** p <0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。 b 用 masson 三 色 染料 的 心脏 切片 的 和 = 500 µm） （n = 10 （d0 、 d12 ctrl 、 d12 td 和 d12 mc） 来自 不同 的 个 个 切片 切片 切片 切片 / 组，进行单因素方差分析； #### p <0.0001 与 D0 相比， *** p <0.001 ，或 **** p <0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。 b Репрезент كاننىيې изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромом Масона (шнаяяейей = 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ۋە D12 MC) ANOVA #### p <0,0001 по сравнению с D0, *** p <0,001 или **** p <0,0001 по сравненю с D12 Ctrl) b ماسسوننىڭ ئۈچ خىل رەڭلىك رەسىمى (ماسسا سىزىقى = 500 µm) بىلەن بويالغان يۈرەك كېسىشمىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى ۋە مىقدارى (n = 10 (D0، D12 Ctrl، D12 TD ۋە D12 MC)، ھەر خىل چوشقا/گۇرۇپپىدىن ئېلىنغان 9 (D12 MT) كېسىشمە، بىر ANOVA ئۇسۇلى؛ ####p < 0.0001 D0 غا سېلىشتۇرغاندا، ***p < 0.001 ياكى ****p < 0.0001 D12 Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا).خاتالىق بالداقلىرى ئوتتۇرىچە قىممەت ± ئۆلچەملىك چەتنىشنى بىلدۈرىدۇ.
ئاخىرىدا، CTCM نىڭ يۈرەك گىپېرتروفىيىسىنى تەقلىد قىلىش ئىقتىدارى يۈرەك توقۇلمىلىرىنىڭ سوزۇلۇشىنى ئاشۇرۇش ئارقىلىق باھالاندى. CTCM دا، ئەڭ يۇقىرى ھاۋا بوشلۇقى بېسىمى 80 mmHg دىن 80 mmHg غىچە ئۆرلىدى. (نورمال سوزۇلۇش) 140 mmHg غىچە (6a-رەسىم). بۇ سوزۇلۇشنىڭ %32 ئېشىشىغا ماس كېلىدۇ (6b-رەسىم)، بۇ ئىلگىرى يۈرەك كېسىشمىلىرىنىڭ گىپېرتروفىيىدە كۆرۈلگەنگە ئوخشاش ساركومېر ئۇزۇنلۇقىغا ئېرىشىشى ئۈچۈن تەلەپ قىلىنىدىغان ماس كېلىدىغان پىرسەنت سوزۇلۇش دەپ كۆرسىتىلگەن. قىسقىرىش ۋە بوشىشىش جەريانىدا يۈرەك توقۇلمىلىرىنىڭ سوزۇلۇشى ۋە سۈرئىتى ئالتە كۈن يېتىشتۈرۈش جەريانىدا مۇقىم بولدى (6c-رەسىم). MT شارائىتىدىكى يۈرەك توقۇلمىلىرى ئالتە كۈن نورمال سوزۇلۇش (MT (نورمال)) ياكى ئارتۇق سوزۇلۇش (MT (OS)) شارائىتىغا دۇچ كەلدى. تۆت كۈن يېتىشتۈرۈشتىن كېيىن، MT (OS) شارائىتىدىكى مۇھىتتا گىپېرتروفىيىك بىئوماركېر NT-ProBNP نورمال شارائىتقا سېلىشتۇرغاندا كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە يۇقىرى بولدى (7a-رەسىم). بۇنىڭدىن باشقا، ئالتە كۈن يېتىشتۈرۈشتىن كېيىن، MT (OS) دىكى ھۈجەيرە چوڭلۇقى (7b-رەسىم) MT يۈرەك قىسىملىرىغا سېلىشتۇرغاندا كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشتى (نورمال). بۇنىڭدىن باشقا، NFATC4 يادرو يۆتكىلىشى ئارتۇق سوزۇلغان توقۇلمىلاردا كۆرۈنەرلىك دەرىجىدە ئاشتى (7c-رەسىم). بۇ نەتىجىلەر ئارتۇق سوزۇلغاندىن كېيىن پاتولوگىيەلىك قايتا شەكىللىنىشنىڭ ئىلگىرىلەش تەرەققىياتىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ ھەمدە CTCM ئۈسكۈنىسىنىڭ سوزۇلۇش سەۋەبىدىن يۈرەك گىپېرتروفىيەسى سىگنالىنى تەتقىق قىلىش سۇپىسى سۈپىتىدە ئىشلىتىلىشى مۇمكىن دېگەن قاراشنى قوللايدۇ.
ھاۋا كامېراسى بېسىمى، سۇيۇقلۇق كامېراسى بېسىمى ۋە توقۇلما ھەرىكىتى ئۆلچەشلىرىنىڭ ۋەكىللىك ئىزلىرى كامېرا بېسىمىنىڭ سۇيۇقلۇق كامېراسى بېسىمىنى ئۆزگەرتىپ، توقۇلما پارچىسىنىڭ ماس ھالدا ھەرىكەتلىنىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدىغانلىقىنى جەزملەشتۈرىدۇ. b نورمال سوزۇلغان (ئاپېلسىن رەڭلىك) ۋە ئارتۇق سوزۇلغان (كۆك رەڭلىك) توقۇلما بۆلەكلىرىنىڭ ۋەكىللىك سوزۇلۇش نىسبىتى ۋە سوزۇلۇش سۈرئىتى ئەگرى سىزىقلىرى. c دەۋرىيلىك ۋاقتىنى (ھەر بىر گۇرۇپپىدا n = 19 پارچە، ھەر خىل چوشقىلاردىن)، قىسقىرىش ۋاقتىنى (ھەر بىر گۇرۇپپىدا n = 18-19 پارچە، ھەر خىل چوشقىلاردىن)، بوشاشۇش ۋاقتىنى (ھەر بىر گۇرۇپپىدا n = 19 پارچە، ھەر خىل چوشقىلاردىن)، توقۇلما ھەرىكىتىنىڭ ئامپلىتۇدىسىنى (ھەر بىر گۇرۇپپىدا n = 14 پارچە، ھەر خىل چوشقىلاردىن)، ئەڭ يۇقىرى سىستولىك سۈرئەتنى (ھەر بىر گۇرۇپپىدا n = 14 پارچە، ھەر خىل چوشقىلاردىن) ۋە ئەڭ يۇقىرى بوشاشۇش سۈرئىتىنى (ھەر خىل چوشقىلاردىن n = 14 (D0)، 15 (D6)) بۆلەكلەر/گۇرۇپپىلار) كۆرسىتىدىغان بالداق گىرافىك، ئىككى قۇيرۇقلۇق ستۇدېنتنىڭ t-سىناق نەتىجىسىدە ھېچقانداق پارامېتىردا مۇھىم پەرق كۆرۈلمىدى، بۇ بۇ پارامېتىرلارنىڭ 6 كۈن ئىچىدە ئېشىپ كېتىش جەريانىدا مۇقىم ساقلانغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. خاتالىق بالداقلىرى ئوتتۇرىچە ± ئۆلچەملىك چەتنىشنى كۆرسىتىدۇ.
MT نورمال سوزۇلۇش (نورمال) ياكى ئارتۇق سوزۇلۇش (OS) شارائىتىدا (n = 4 (D2 MTNorm)، 3 (D2 MTOS، D4 MTNorm ۋە D4 MTOS) ھەر خىل چوشقا پارچىلىرى/گۇرۇپپىسى ئاستىدا يېتىشتۈرۈلگەن يۈرەك پارچىلىرىدىن ئېلىنغان مەدەنىيەت مۇھىتىدىكى NT-ProBNP قويۇقلۇقىنىڭ سىتونىك گىرافىك مىقدارىنى ئۆلچەش، ئىككى تەرەپلىك ANOVA ئېلىپ بېرىلىدۇ؛ **n نورمال سوزۇلۇش بىلەن سېلىشتۇرغاندا p < 0.01). MT نورمال سوزۇلۇش (Norm) ياكى ئارتۇق سوزۇلۇش (OS) شارائىتىدا (n = 4 (D2 MTNorm)، 3 (D2 MTOS، D4 MTNorm ۋە D4 MTOS) ھەر خىل چوشقا پارچىلىرى/گۇرۇپپىسى ئاستىدا يېتىشتۈرۈلگەن يۈرەك پارچىلىرىدىن ئېلىنغان مەدەنىيەت مۇھىتىدىكى NT-ProBNP قويۇقلۇقىنىڭ مىقدارلاشتۇرۇلغان سىزىقلىق گىرافىكى، ئىككى تەرەپلىك ANOVA ئېلىپ بېرىلىدۇ؛ **normal سوزۇلۇش بىلەن سېلىشتۇرغاندا p < 0.01).نورمال MT سوزۇلۇش (نورمال) ياكى ئارتۇق سوزۇلۇش (OS) (n = 4 (D2 MTNorm)، 3 (D2 MTOS، D4 MTNorm ۋە D4).MTOS) پارچىلىرى / گۇرۇپپىلىرى شارائىتىدا يېتىشتۈرۈلگەن يۈرەك پارچىلىرىدىن ئېلىنغان مەدەنىيەت مۇھىتىدىكى NT-ProBNP قويۇقلۇقىنىڭ مىقدارلىق گىستوگراممىسى، ئىككى ئامىللىق ئۆزگىرىشچانلىق ئانالىزى ئېلىپ بېرىلدى؛** پ **نورمال سوزۇلۇش بىلەن سېلىشتۇرغاندا p < 0.01). a 在 MT Norm (Norm) 或过度拉伸 (OS) 条件下培养的心脏切片培养基中 NT-ProBNP 浓度的条形图量化（ n = 4 (D2 MTNorm) 、 3 （D2 MTOS 、 D4 MTNorm 和 D4 MTOS ）来自不同猪的切片 / 组，进行双向方差分析； ** 与正常拉伸相比， p <0.01 ）。 MT نورمال سوزۇلۇش (Norm) ياكى چەكتىن ئېشىپ كېتىش (OS) شارائىتىدا (n = 4 (D2 MTNorm) ، 3 (D2 MTOS ، D4 MTNorm 和 D4 MTOS) دىن ياسالغان يۈرەك كېسىلىدىكى NT-ProBNP قويۇقلۇقىنىڭ مىقدارى نورمال سوزۇلۇشقا سېلىشتۇرغاندا ، p <0.01).گىستوگرامما نورمال MT سوزۇلۇش (نورمال) ياكى ئارتۇق سوزۇلۇش (OS) (n = 4 (D2 MTNorm)، 3 (D2 MTOS، D4 MTNorm) ۋە D4 MTOS) ھەر خىل چوشقا پارچىلىرى/گۇرۇپپىسى شارائىتىدا يېتىشتۈرۈلگەن يۈرەك پارچىلىرىدىكى NT-ProBNP قويۇقلۇقىنىڭ مىقدارلاشتۇرۇلۇشى، ئىككى تەرەپلىك ئۆزگىرىشچانلىق ئانالىزى؛** پ **نورمال سوزۇلۇش بىلەن سېلىشتۇرغاندا p < 0.01). b تروپونىن-T ۋە WGA بىلەن بويالغان يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى (سول تەرەپتە) ۋە ھۈجەيرە چوڭلۇقىنىڭ مىقدارى (ئوڭ تەرەپتە) (n = 330 (D6 MTOS)، ھەر خىل چوشقالارنىڭ 10 خىل پارچىسىدىن ئېلىنغان 369 (D6 MTNorm) ھۈجەيرە/گۇرۇپپا، ئىككى قۇيرۇقلۇق ئوقۇغۇچى t سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى؛ نورمال سوزۇلۇش بىلەن سېلىشتۇرغاندا ****p < 0.0001). b تروپونىن-T ۋە WGA بىلەن بويالغان يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى (سول تەرەپتە) ۋە ھۈجەيرە چوڭلۇقىنىڭ مىقدارى (ئوڭ تەرەپتە) (n = 330 (D6 MTOS)، ھەر خىل چوشقالارنىڭ 10 خىل پارچىسىدىن ئېلىنغان 369 (D6 MTNorm) ھۈجەيرە/گۇرۇپپا، ئىككى قۇيرۇقلۇق ئوقۇغۇچى t سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى؛ نورمال سوزۇلۇش بىلەن سېلىشتۇرغاندا ****p < 0.0001). b Репрезент كاننىي изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) ۋە количественного определения размера клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), рк рот рк рк свиней, два- проитится хвостовой t-критерий Стьюдента; **** p b تروپونىن-T ۋە AZP بىلەن بويالغان يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى (سول تەرەپتە) ۋە ھۈجەيرە چوڭلۇقىنىڭ مىقدارى (ئوڭ تەرەپتە) (n = 330 (D6 MTOS)، ھەر خىل چوشقالارنىڭ 10 خىل پارچىسىدىن 369 (D6 MTNorm) ھۈجەيرە/گۇرۇپپا، ئىككى قۇيرۇقلۇق ستۇدېنتنىڭ t سىنىقى ئېلىپ بېرىلدى؛ نورمال تۈرگە سېلىشتۇرغاندا ****p < 0.0001). b 用肌钙蛋白 -T 和 WGA （左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代表性图像（ n = 330 （D6 MTOS ），来自不同猪的 10 个不同切片的 369 （D6 MTNorm ）细胞 / 组，两进行有尾学生 t 检验；与正常拉伸相比， **** p <0.0001 ）。 b كالكارېئىن-T ۋە WGA بىلەن بويالغان يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى (سول تەرەپتە) ۋە ھۈجەيرە چوڭلۇقى (ئوڭ تەرەپتە) (n = 330 (D6 MTOS)، 10 خىل پارچىدىن 369 (D6 MTNorm)) ھۈجەيرىلەر/组，两方法有尾学生lot سىنىقى؛ نورمال سوزۇلۇش بىلەن سېلىشتۇرغاندا，****p < 0.0001). b Репрезент كاننىيې изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) ۋە количественная оценка размера клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 рсчовч дву зононние критерий Стьюдента; **** p b تروپونىن-T ۋە AZP بىلەن بويالغان يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى (سول تەرەپتە) ۋە ھۈجەيرە چوڭلۇقىنىڭ مىقدارى (ئوڭ تەرەپتە) (n = 330 (D6 MTOS)، 369 (D6 MTNorm) ھەر خىل چوشقالارنىڭ 10 خىل پارچىسىدىن) ھۈجەيرە/گۇرۇپپا، ئىككى قۇيرۇقلۇق ئۆلچەم ستۇدېنتنىڭ t؛ نورمال سورتقا سېلىشتۇرغاندا ****p < 0.0001). c 0-كۈن ۋە 6-كۈندىكى MTOS يۈرەك پارچىلىرىنىڭ تروپونىن-T ۋە NFATC4 ئۈچۈن ئىممۇنىتېت بەلگىسى قويۇلغان ۋە NFATC4 نىڭ CM لارنىڭ يادروسىغا يۆتكىلىشىنىڭ مىقدارىنى ئۆلچەيدىغان ۋەكىللىك رەسىملەر (n = 4 (D0)، ھەر خىل چوشقالاردىن 3 (D6 MTOS) پارچى/گۇرۇپپا، ئىككى قۇيرۇقلۇق ئوقۇغۇچى t-سىناق ئېلىپ بېرىلدى؛ *p < 0.05). c 0-كۈن ۋە 6-كۈندىكى MTOS يۈرەك پارچىلىرىنىڭ تروپونىن-T ۋە NFATC4 ئۈچۈن ئىممۇنىتېت بەلگىسى قويۇلغان ۋە NFATC4 نىڭ CM لارنىڭ يادروسىغا يۆتكىلىشىنىڭ مىقدارىنى ئۆلچەيدىغان ۋەكىللىك رەسىملەر (n = 4 (D0)، ھەر خىل چوشقالاردىن 3 (D6 MTOS) پارچىسى/گۇرۇپپىسى، ئىككى قۇيرۇقلۇق ئوقۇغۇچى t-سىناق ئېلىپ بېرىلدى؛ *p < 0.05). س разных свиней, виполняется дву сононний t-критерий Стьюдента * p <0,05); c 0 ۋە 6-كۈنلىرىدىكى MTOS دىكى يۈرەك كېسىشمىلىرىنىڭ ۋەكىللىك رەسىملىرى، تروپونىن-T ۋە NFATC4 ئۈچۈن ئىممۇنىتېت بەلگىسى قويۇلغان، ھەمدە كاۋېرنوز ھۈجەيرىلىرىنىڭ يادروسىدىكى NFATC4 يۆتكىلىشىنىڭ مىقدارىنى ئۆلچەش (n = 4 (D0)، ھەر خىل چوشقالاردىن 3 (D6 MTOS) پارچىسى/گۇرۇپپىسى) ئىككى قۇيرۇقلۇق ستۇدېنت t سىنىقى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلغان؛ *p < 0.05). c 用于肌钙蛋白 -T 和 NFATC4 免疫标记的第 0 天和第 6 天 MTOS 心脏切片的代表性图像，以及来自不同猪的 NFATC4 易位至 CM 细胞核的量化（ n = 4 (D0) 、 3 (D6 MTOS) 切片 / 组, 进行双尾学生 t 检验； * p <0.05)。 c كالكاننىن- T ۋە NFATC4 ئىممۇنىتېتلاشنىڭ ۋەكىللىك رەسىمى 第 0 天和第 6 天 MTOS يۈرەك پارچىلىرى ۋە NFATC4 ئوخشىمىغان NFATC4 易位至 CM ھۈجەيرە يادروسى 的 مىقدارى n (n = 4 (D0) ، 3 (D6 MTOS) 切礼 / 组, 时间双尾学生 et 电影； * p <0.05). س хвостатый t-критерий Стьюдента; * p <0,05); c 0- ۋە 6- كۈندىكى MTOS يۈرەك پارچىلىرىنىڭ تروپونىن-T ۋە NFATC4 ئىممۇنىتېت بەلگىسى ۋە ھەر خىل چوشقالارنىڭ CM يادروسىدىكى NFATC4 يۆتكىلىشىنىڭ مىقدارىنى باھالاشتىكى ۋەكىللىك رەسىملىرى (n = 4 (D0)، 3 (D6 MTOS) پارچىسى/گۇرۇپپىسى، ئىككى قۇيرۇقلۇق t-ئۆلچەملىك ئوقۇغۇچىلارنىڭ ئۆلچىمى؛ *p < 0.05).خاتالىق بالداقلىرى ئوتتۇرىچە قىممەت ± ئۆلچەملىك چەتنىشنى بىلدۈرىدۇ.
يۈرەك-قان تومۇر تەتقىقاتى يۈرەك مۇھىتىنى توغرا قايتا ھاسىل قىلىدىغان ھۈجەيرە مودېللىرىنى تەلەپ قىلىدۇ. بۇ تەتقىقاتتا، يۈرەكنىڭ ئىنتايىن نېپىز بۆلەكلىرىنى قوزغىتالايدىغان CTCM ئۈسكۈنىسى ئىجاد قىلىندى ۋە خاراكتېرلەندى. CTCM سىستېمىسى فىزىئولوگىيىلىك جەھەتتىن ماسلاشتۇرۇلغان ئېلېكترومېخانىكىلىق قوزغىتىش ۋە T3 ۋە Dex سۇيۇقلۇقىنى موللاشتۇرۇشنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ. چوشقا يۈرەك بۆلەكلىرى بۇ ئامىللارغا دۇچ كەلگەندە، ئۇلارنىڭ ھاياتىي كۈچى، قۇرۇلما پۈتۈنلۈكى، ماددا ئالمىشىش پائالىيىتى ۋە ترانسكرىپسىيە ئىپادىسى 12 كۈنلۈك يېتىشتۈرۈشتىن كېيىن يېڭى يۈرەك توقۇلمىسىدىكىدەك ساقلانغان. بۇنىڭدىن باشقا، يۈرەك توقۇلمىسىنىڭ ھەددىدىن زىيادە سوزۇلۇشى يۈرەكنىڭ ھەددىدىن زىيادە سوزۇلۇشى سەۋەبىدىن كېلىپ چىققان گىپېرتروفىيەسىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىشى مۇمكىن. ئومۇمەن قىلىپ ئېيتقاندا، بۇ نەتىجىلەر فىزىئولوگىيىلىك يېتىشتۈرۈش شارائىتىنىڭ نورمال يۈرەك فېنوتىپىنى ساقلاشتىكى مۇھىم رولىنى قوللايدۇ ۋە دورا تەكشۈرۈش ئۈچۈن سۇپا بىلەن تەمىنلەيدۇ.
نۇرغۇن ئامىللار يۈرەك مۇسكۇل ھۈجەيرىلىرىنىڭ ئىقتىدارى ۋە ياشىشى ئۈچۈن ئەڭ ياخشى مۇھىت يارىتىشقا تۆھپە قوشىدۇ. بۇ ئامىللارنىڭ ئىچىدە ئەڭ روشەنلىرى (1) ھۈجەيرىلەر ئارا ئۆز-ئارا تەسىر، (2) ئېلېكترومېخانىكىلىق غىدىقلىنىش، (3) گۇمورال ئامىل ۋە (4) ماددا ئالمىشىش سۇبستراتلىرى بىلەن مۇناسىۋەتلىك. فىزىئولوگىيىلىك ھۈجەيرىلەر ئارا ئۆز-ئارا تەسىر ھۈجەيرە سىرتىدىكى ماترىتسا تەرىپىدىن قوللايدىغان كۆپ خىل ھۈجەيرە تىپىدىكى مۇرەككەپ ئۈچ ئۆلچەملىك تورلارنى تەلەپ قىلىدۇ. بۇنداق مۇرەككەپ ھۈجەيرە ئۆز-ئارا تەسىرنى يەككە ھۈجەيرە تىپىنى بىرلىكتە يېتىشتۈرۈش ئارقىلىق سىناق نەيچىسىدە قايتا قۇرۇش تەس، ئەمما يۈرەك بۆلەكلىرىنىڭ ئورگانوتىپ تەبىئىتى ئارقىلىق ئاسانلا ئەمەلگە ئاشۇرغىلى بولىدۇ.
يۈرەك مىيوسىتلىرىنىڭ مېخانىكىلىق سوزۇلۇش ۋە ئېلېكترلىك غىدىقلىنىشى يۈرەك فېنوتىپىنى ساقلاشتا ئىنتايىن مۇھىم رول ئوينايدۇ33،34،35. مېخانىكىلىق غىدىقلاش hiPSC-CM ھالىتىنى ساقلاش ۋە يېتىلىش ئۈچۈن كەڭ قوللىنىلغان بولسىمۇ، يېقىندا بىر قانچە نەپىس تەتقىقاتلاردا يۈرەك پارچىلىرىنى بىر ئوقلۇق يۈكلەش ئارقىلىق مېخانىكىلىق غىدىقلاش سىناق قىلىندى. بۇ تەتقىقاتلار شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، ئىككى ئۆلچەملىك بىر ئوقلۇق مېخانىكىلىق يۈكلەش ئۆستۈرۈش جەريانىدا يۈرەكنىڭ فېنوتىپىغا ئاكتىپ تەسىر كۆرسىتىدۇ. بۇ تەتقىقاتلاردا، يۈرەكنىڭ بۆلەكلىرى ئىزومېتىرىك تارتىش كۈچى17، سىزىقلىق ئاۋكسوتونىك يۈكلەش18 بىلەن يۈكلەنگەن ياكى يۈرەك دەۋرىيلىكى كۈچ ئۆزگەرتكۈچ ئىنكاسى ۋە تارتىش قوزغاتقۇچلىرى ئارقىلىق قايتا ياسالغان. قانداقلا بولمىسۇن، بۇ ئۇسۇللار مۇھىتنى ئەلالاشتۇرماي بىر ئوقلۇق توقۇلمىلارنى سوزۇش ئۇسۇلىنى قوللىنىدۇ، بۇنىڭ نەتىجىسىدە نۇرغۇن يۈرەك گېنلىرى باستۇرۇلىدۇ ياكى نورمالسىز سوزۇلۇش ئىنكاسى بىلەن مۇناسىۋەتلىك گېنلارنىڭ ئارتۇقچە ئىپادىلىنىشى كۆرۈلىدۇ. بۇ يەردە تەسۋىرلەنگەن CTCM دەۋرىيلىك ۋاقتى ۋە فىزىئولوگىيىلىك سوزۇلۇش (%25 سوزۇلۇش،%40 سىستولا،%60 دىئاستولا ۋە مىنۇتىغا 72 قېتىم سوقۇش) جەھەتتىن تەبىئىي يۈرەك دەۋرىيلىكىنى تەقلىد قىلىدىغان ئۈچ ئۆلچەملىك ئېلېكترومېخانىكىلىق غىدىقلاش بىلەن تەمىنلەيدۇ. بۇ ئۈچ ئۆلچەملىك مېخانىكىلىق غىدىقلاشنىڭ ئۆزىلا توقۇلمىلارنىڭ پۈتۈنلۈكىنى ساقلاشقا يېتەرلىك بولمىسىمۇ، توقۇلمىلارنىڭ ھاياتىي كۈچى، ئىقتىدارى ۋە پۈتۈنلۈكىنى يېتەرلىك ساقلاش ئۈچۈن T3/Dex ئارقىلىق گۇمورال ۋە مېخانىكىلىق غىدىقلاشنى بىرلەشتۈرۈش تەلەپ قىلىنىدۇ.
خۇمورال ئامىللىرى چوڭلارنىڭ يۈرەك فېنوتىپىنى تەڭشەشتە مۇھىم رول ئوينايدۇ. بۇ، ھۈجەيرە پىشىپ يېتىلىشىنى تېزلىتىش ئۈچۈن مەدەنىيەت مۇھىتىغا T3 ۋە Dex قوشۇلغان HiPS-CM تەتقىقاتىدا گەۋدىلەندۈرۈلگەن. T3 ئامىنو كىسلاتاسى، شېكەر ۋە كالتسىينىڭ ھۈجەيرە پەردىسى ئارقىلىق توشۇلىشىغا تەسىر كۆرسىتىشى مۇمكىن36. بۇنىڭدىن باشقا، T3 MHC-α ئىپادىسىنى ۋە MHC-β نىڭ تۆۋەنلىشىنى ئىلگىرى سۈرۈپ، يېتىلگەن يۈرەك مىيوفىبرىللىرىنىڭ تېز تارتىشىشىنى ئىلگىرى سۈرۈپ، ھامىلە CM دىكى ئاستا تارتىشىش مىيوفىبرىللىرىغا سېلىشتۇرغاندا، يېتىلگەن يۈرەك مىيوفىبرىللىرىنىڭ شەكىللىنىشىنى ئىلگىرى سۈرىدۇ. گىپوتىروئىد كېسىلى بىمارلىرىدا T3 كەمچىللىكى مىيوفىبرىللار بەلبېغىنىڭ يوقىلىشى ۋە ئاۋازنىڭ تەرەققىي قىلىش سۈرئىتىنىڭ تۆۋەنلىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ37. Dex گلۇكوكورتىكوئىد رېتسېپتورلىرىغا تەسىر كۆرسىتىدۇ ۋە ئايرىم قان بىلەن تەمىنلەنگەن يۈرەكلەردە مىيوفىدنىڭ قىسقىرىشچانلىقىنى ئاشۇرىدىغانلىقى ئىسپاتلانغان؛38 بۇ ياخشىلىنىشنىڭ كالتسىي چۆكمىسىگە قارىتىلغان كىرىش (SOCE) غا بولغان تەسىرى بىلەن مۇناسىۋەتلىك دەپ قارىلىدۇ39،40. بۇنىڭدىن باشقا، Dex ئۆزىنىڭ رېتسېپتورلىرىغا باغلىنىپ، ئىممۇنىتېت ئىقتىدارى ۋە ياللۇغلىنىشنى باستۇرىدىغان كەڭ دائىرىلىك ھۈجەيرە ئىچىدىكى ئىنكاسنى پەيدا قىلىدۇ30.
بىزنىڭ نەتىجىلىرىمىز شۇنى كۆرسىتىپ بېرىدۇكى، فىزىكىلىق مېخانىكىلىق قوزغىتىش (MS) Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا ئومۇمىي ئۆستۈرۈش ئىقتىدارىنى ياخشىلىغان، ئەمما 12 كۈن ئىچىدە ئۆستۈرۈش جەريانىدا ياشاشچانلىقى، قۇرۇلما پۈتۈنلۈكى ۋە يۈرەك ئىپادىسىنى ساقلىيالمىغان. Ctrl غا سېلىشتۇرغاندا، CTCM (MT) مەدەنىيىتىگە T3 ۋە Dex قوشۇش ياشاشچانلىقىنى ياخشىلىغان ۋە 12 كۈن ئىچىدە يېڭى يۈرەك توقۇلمىسى بىلەن ئوخشاش ترانسكرىپسىيە پروفىلى، قۇرۇلما پۈتۈنلۈكى ۋە ماددا ئالمىشىش پائالىيىتىنى ساقلىغان. بۇنىڭدىن باشقا، توقۇلمىنىڭ سوزۇلۇش دەرىجىسىنى كونترول قىلىش ئارقىلىق، STCM ئارقىلىق گىپېركېستىنسىيە كەلتۈرۈپ چىقارغان يۈرەك گىپېرتروفىيە مودېلى يارىتىلغان بولۇپ، بۇ STCM سىستېمىسىنىڭ كۆپ ئىقتىدارلىقلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ. شۇنى ئەسكەرتىش كېرەككى، يۈرەكنىڭ قايتا شەكىللىنىشى ۋە فىبروز ئادەتتە قان ئايلىنىۋاتقان ھۈجەيرىلىرى مۇۋاپىق سىتوكىنلارنى، شۇنداقلا فاگوسىتوز ۋە باشقا قايتا شەكىللىنىش ئامىللىرىنى تەمىنلىيەلەيدىغان پۈتۈن ئەزالارنى ئۆز ئىچىگە ئالسىمۇ، يۈرەكنىڭ بۆلەكلىرى يەنىلا بېسىم ۋە زەخمىگە جاۋابەن فىبروز جەريانىنى تەقلىد قىلالايدۇ. مىيوفىبروبلاستلارغا. بۇ ئىلگىرى بۇ يۈرەك پارچىسى مودېلىدا باھالانغان. شۇنى ئەسكەرتىش كېرەككى، CTCM پارامېتىرلىرىنى بېسىم/ئېلېكتر ئامپلىتۇدىسى ۋە چاستوتاسىنى ئۆزگەرتىپ، تاخىكاردىيە، برادىكاردىيە ۋە مېخانىكىلىق قان ئايلىنىشنى قوللاش (مېخانىكىلىق يۈكسىز يۈرەك) قاتارلىق نۇرغۇن ئەھۋاللارنى تەقلىد قىلغىلى بولىدۇ. بۇ سىستېمىنى دورا سىنىقى ئۈچۈن ئوتتۇراھال ئىشلەپچىقىرىش ئىقتىدارىغا ئىگە قىلىدۇ. CTCM نىڭ ئارتۇقچە جىددىيلىكتىن كېلىپ چىققان يۈرەك گىپېرتروفىيىسىنى مودېللاشتۇرۇش ئىقتىدارى بۇ سىستېمىنى شەخسىي داۋالاش ئۈچۈن سىناق قىلىشنىڭ يولىنى ئاچتى. خۇلاسە قىلىپ ئېيتقاندا، بۇ تەتقىقات مېخانىكىلىق سوزۇلۇش ۋە گۇمورال غىدىقلىنىشنىڭ يۈرەك توقۇلمىسىنىڭ كېسىشمىسىنى ساقلاپ قېلىشتا مۇھىم رول ئوينايدىغانلىقىنى كۆرسىتىپ بېرىدۇ.
بۇ يەردە كۆرسىتىلگەن سانلىق مەلۇماتلار CTCM نىڭ پۈتۈن مىئوكاردنى مودېللاشتۇرۇش ئۈچۈن ناھايىتى ئۈمىدۋار سۇپا ئىكەنلىكىنى كۆرسىتىپ بەرسىمۇ، بۇ خىل مەدەنىيەت ئۇسۇلىنىڭ بەزى چەكلىمىلىرى بار. CTCM مەدەنىيەتىنىڭ ئاساسلىق چەكلىمىلىكى شۇكى، ئۇ پارچىلارغا ئۈزلۈكسىز دىنامىك مېخانىكىلىق بېسىملارنى پەيدا قىلىدۇ، بۇ ھەر بىر دەۋردە يۈرەك پارچىلىرىنىڭ قىسقىرىشىنى ئاكتىپ نازارەت قىلىش ئىقتىدارىنى چەكلەيدۇ. بۇنىڭدىن باشقا، يۈرەك پارچىلىرىنىڭ كىچىكلىكى (7 مىللىمېتىر) سەۋەبىدىن، ئەنئەنىۋى كۈچ سېنزورى ئارقىلىق مەدەنىيەت سىستېمىسى سىرتىدا سىستولىك ئىقتىدارنى باھالاش ئىقتىدارى چەكلىك. بۇ قول يازمىدا، بىز ئوپتىكىلىق توك بېسىمىنى قىسقىرىشىنىڭ كۆرسەتكۈچى سۈپىتىدە باھالاش ئارقىلىق بۇ چەكلىمىنى قىسمەن يېڭىپ ئۆتتۇق. قانداقلا بولمىسۇن، بۇ چەكلىمە تېخىمۇ كۆپ خىزمەتلەرنى تەلەپ قىلىدۇ ۋە كەلگۈسىدە كالتسىي ۋە توك بېسىمىغا سەزگۈر بوياقلارنى ئىشلىتىپ ئوپتىكىلىق خەرىتە ياساش قاتارلىق مەدەنىيەتتە يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ئىقتىدارىنى ئوپتىكىلىق نازارەت قىلىش ئۇسۇللىرىنى كىرگۈزۈش ئارقىلىق ھەل قىلىنىشى مۇمكىن. CTCM نىڭ يەنە بىر چەكلىمىلىكى شۇكى، خىزمەت مودېلى فىزىئولوگىيىلىك بېسىمنى (ئالدىن يۈكلەش ۋە كېيىنكى يۈكلەش) باشقۇرمايدۇ. CTCM دا، بېسىم قارشى يۆنىلىشتە قوزغىتىلىپ، ناھايىتى چوڭ توقۇلمىلاردا دىئاستولا (تولۇق سوزۇلۇش) ۋە سىستولا (ئېلېكتر قوزغىتىش جەريانىدا قىسقىرىشىش ئۇزۇنلۇقى) دا %25 فىزىئولوگىيىلىك سوزۇلۇشنى قايتا ھاسىل قىلدى. بۇ چەكلىمە كەلگۈسىدىكى CTCM لايىھەلىرىدە يۈرەك توقۇلمىلىرىغا ئىككى تەرەپتىن يېتەرلىك بېسىم بېرىش ۋە يۈرەك بوشلۇقىدا يۈز بېرىدىغان بېسىم-ھەجىم مۇناسىۋىتىنى دەل قوللىنىش ئارقىلىق چىقىرىۋېتىلىشى كېرەك.
بۇ قول يازمىدا بايان قىلىنغان ئارتۇق سوزۇلۇش كەلتۈرۈپ چىقارغان قايتا قۇرۇش پەقەت گىپېرتروفىك گىپېرتروفىك سىگناللارنى تەقلىد قىلىش بىلەنلا چەكلىنىدۇ. شۇڭا، بۇ مودېل ھۇمۇر ياكى نېرۋا ئامىللىرىغا (بۇ سىستېمىدا مەۋجۇت ئەمەس) ئېھتىياجسىز سوزۇلۇش كەلتۈرۈپ چىقارغان گىپېرتروفىك سىگنالنى تەتقىق قىلىشقا ياردەم بېرەلەيدۇ. CTCM نىڭ كۆپ خىللىقىنى ئاشۇرۇش ئۈچۈن تېخىمۇ كۆپ تەتقىقاتلار ئېلىپ بېرىشقا توغرا كېلىدۇ، مەسىلەن، ئىممۇنىتېت ھۈجەيرىلىرى، قان ئايلىنىۋاتقان پلازما ھۇمۇر ئامىللىرى ۋە نېرۋا ھۈجەيرىلىرى بىلەن بىرلىكتە يېتىشتۈرۈلگەندە ئىننېرۋاتسىيە قىلىش CTCM بىلەن كېسەللىك مودېلىنى قۇرۇش ئىمكانىيىتىنى ياخشىلايدۇ.
بۇ تەتقىقاتتا ئون ئۈچ چوشقا ئىشلىتىلگەن. بارلىق ھايۋانلارغا قارىتىلغان داۋالاش ئۇسۇللىرى ئورگان يېتەكچىلىكىگە ئاساسەن ئېلىپ بېرىلغان بولۇپ، لۇئىسۋىللې ئۇنىۋېرسىتېتى ئورگان ھايۋاناتلارنى بېقىش ۋە ئىشلىتىش كومىتېتى تەرىپىدىن تەستىقلانغان. ئاورتا قوۋۇقى قىسىلىپ، يۈرەككە 1 لىتىر ستېرىل يۈرەك ياللۇغى (110 مىللىلىتىر NaCl، 1.2 مىللىلىتىر CaCl2، 16 مىللىلىتىر KCl، 16 مىللىلىتىر MgCl2، 10 مىللىلىتىر NaHCO3، 5 U/mL گېپارىن، pH قىممىتى 7.4 كە قەدەر) قۇيۇلغان؛ يۈرەكلەر مۇزدەك سوغۇق يۈرەك-ئۆپكە ئېرىتمىسىدە ساقلىنىپ، مۇز ئۈستىدە تەجرىبىخانىغا يەتكۈزۈلدى، بۇ ئادەتتە 10 مىنۇتتىن ئاز ۋاقىتنى ئالىدۇ. يۈرەكلەر مۇزدەك سوغۇق يۈرەك-ئۆپكە ئېرىتمىسىدە ساقلىنىپ، مۇز ئۈستىدە تەجرىبىخانىغا يەتكۈزۈلدى، بۇ ئادەتتە 10 مىنۇتتىن ئاز ۋاقىتنى ئالىدۇ. сердца хранили в ледяном кардиоп огическом растворе до зировировки в лабораторию на льду, что обикно занимает <10 min. يۈرەكلەر مۇز ئۈستىدىكى تەجرىبىخانىغا يەتكۈزۈلگۈچە مۇزدەك سوغۇق يۈرەك-ئۆپكە ئېرىتمىسىدە ساقلاندى، ئادەتتە بۇ ئادەتتە 10 مىنۇتتىن ئاز ۋاقىت ئالىدۇ.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常 <10 分钟。将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常 <10 分钟。 Держите сердца в ледяной кардиоп угии до зировировки в лабораторию на льду, обикно <10 مىن. يۈرەك كېسىلىنى مۇز ئۈستىدە تەجرىبىخانىغا ئېلىپ بېرىشتىن بۇرۇن، ئادەتتە 10 مىنۇتتىن ئاز ۋاقىت ئىچىدە يۈرەكنى مۇز ئۈستىدە ساقلاڭ.
CTCM ئۈسكۈنىسى SolidWorks كومپيۇتېر ياردەملىك لايىھەلەش (CAD) يۇمشاق دېتالىدا ئىجاد قىلىنغان. مەدەنىيەت كامېراسى، بۆلگۈچ ۋە ھاۋا كامېراسى CNC سۈزۈك ئاكرىل پلاستىكتىن ياسالغان. دىئامېتىرى 7 مىللىمېتىر كېلىدىغان زاپاس ھالقىسى ئوتتۇرىسى يۇقىرى زىچلىقتىكى پولىئېتىلېن (HDPE) دىن ياسالغان بولۇپ، ئاستىدىكى مۇھىتنى پېچەتلەشتە ئىشلىتىلىدىغان سىلىكون O-ھالقىنى سىغدۇرۇش ئۈچۈن O-ھالقىلىق ئويما بار. نېپىز سىلىكون پەردە مەدەنىيەت كامېراسىنى ئايرىش تاختىسىدىن ئايرىيدۇ. سىلىكون پەردە 0.02 دىيۇملۇق قېلىنلىقتىكى سىلىكون قەۋىتىدىن لازېر بىلەن كېسىلگەن بولۇپ، قاتتىقلىقى 35A. ئاستى ۋە ئۈستى سىلىكون چاپلاقلىرى 1/16 دىيۇملۇق قېلىنلىقتىكى سىلىكون قەۋىتىدىن لازېر بىلەن كېسىلگەن بولۇپ، قاتتىقلىقى 50A. 316L داتلاشماس پولات بۇراما ۋە قانات ياڭاقلىرى بۆلەكنى چىڭىتىش ۋە ھاۋا ئۆتمەيدىغان پېچەتلەش ئۈچۈن ئىشلىتىلىدۇ.
C-PACE-EM سىستېمىسى بىلەن بىرلەشتۈرۈلىدىغان مەخسۇس بېسىلغان توك يولى تاختىسى (PCB) لايىھەلەنگەن. PCB دىكى شىۋېتسارىيە ماشىنىسى ئۇلىغۇچلىرى كۈمۈش يالىتىلغان مىس سىملار ۋە ئېلېكترودلارغا بۇرالغان مىس 0-60 ۋىنتلار ئارقىلىق گرافىت ئېلېكترودلىرىغا ئۇلىنىدۇ. بېسىلغان توك يولى تاختىسى 3D پرىنتېرنىڭ قاپقىقىغا قويۇلىدۇ.
CTCM ئۈسكۈنىسى يۈرەك دەۋرىيلىكىگە ئوخشاش كونترول قىلىنىدىغان قان ئايلىنىش بېسىمىنى ھاسىل قىلىدىغان پروگراممالاشتۇرغىلى بولىدىغان پنېۋماتىك ھەرىكەتلەندۈرگۈچ (PPD) تەرىپىدىن كونترول قىلىنىدۇ. ھاۋا كامېراسىنىڭ ئىچىدىكى بېسىم ئاشقاندا، يۇمشاق سىلىكون پەردە يۇقىرىغا قاراپ كېڭىيىپ، مۇھىتنى توقۇلما ئورنىنىڭ ئاستىغا قىستايدۇ. ئاندىن توقۇلما رايونى بۇ سۇيۇقلۇقنىڭ چىقىرىلىشى بىلەن سوزۇلىدۇ، بۇ دىئاستولا مەزگىلىدە يۈرەكنىڭ فىزىئولوگىيىلىك كېڭىيىشىگە تەقلىد قىلىدۇ. بوشىشىشنىڭ ئەڭ يۇقىرى پەللىسىدە، گرافىت ئېلېكترودلىرى ئارقىلىق ئېلېكتر غىدىقلاش قوللىنىلىپ، ھاۋا كامېراسىدىكى بېسىمنى تۆۋەنلىتىپ، توقۇلما بۆلەكلىرىنىڭ قىسقىرىشىنى كەلتۈرۈپ چىقىرىدۇ. تۇرۇبا ئىچىدە ھاۋا سىستېمىسىدىكى بېسىمنى بايقاش ئۈچۈن بېسىم سېنزورى بار قان توختىتىش كلاپان بار. بېسىم سېنزورى سېزگەن بېسىم نۇتبۇكقا ئۇلانغان سانلىق مەلۇمات توپلىغۇچىغا ئىشلىتىلىدۇ. بۇ گاز كامېراسىنىڭ ئىچىدىكى بېسىمنى ئۈزلۈكسىز نازارەت قىلىشقا يول قويىدۇ. ئەڭ چوڭ كامېرا بېسىمىغا يەتكەندە (ئۆلچەملىك 80 mmHg، 140 mmHg OS)، سانلىق مەلۇمات يىغىش ئۈسكۈنىسىگە C-PACE-EM سىستېمىسىغا سىگنال ئەۋەتىپ، 2 ms ئىككى باسقۇچلۇق توك بېسىمى سىگنالىنى ھاسىل قىلىشقا بۇيرۇلدى، بۇ سىگنال 4 V غا تەڭشەلدى.
يۈرەك پارچىلىرى ئېلىندى ۋە 6 قۇدۇقتا تۆۋەندىكىدەك يېتىشتۈرۈش شارائىتى ئېلىپ بېرىلدى: يىغىۋېلىنغان يۈرەكلەرنى يۆتكەش قاچىسىدىن سوغۇق (4 سېلسىيە گرادۇس) يۈرەك كېسىلى ساقلانغان تەخسىگە يۆتكەڭ. سول قورساقچە ستېرىل پىچاق بىلەن ئايرىۋېلىندى ۋە 1-2 سانتىمېتىر چوڭلۇقتىكى پارچىلارغا كېسىلدى. بۇ توقۇلما بۆلەكلىرى توقۇلما يېلىم بىلەن توقۇلما تىرەكلىرىگە چاپلىنىپ، تىرود ئېرىتمىسى قاچىلانغان تىترەيدىغان مىكروتوم توقۇلما مۇنچىسىغا قويۇلدى ۋە ئۈزلۈكسىز ئوكسىگېن بىلەن تەمىنلەندى (3 g/L 2,3-بۇتانېدىئون مونوئوكسىم (BDM)، 140 mM NaCl (8.18 g) )، 6 mM KCl (0.447 g)، 10 mM D-گلۇكوزا (1.86 g)، 10 mM HEPES (2.38 g)، 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M ئېرىتمىسى)، 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml 1 M ئېرىتمىسى)، 1 L ddH2O غىچە). تىترەيدىغان مىكروتوم 80 گېرتس چاستوتا، گورىزونتال تىترەش ئامپلىتۇدىسى 2 مىللىمېتىر ۋە ئىلگىرىلەش سۈرئىتى 0.03 مىللىمېتىر/سېكۇنت بولغان 300 µm قېلىنلىقتىكى پارچىلارنى كېسىشكە تەڭشەلدى. ئېرىتمىنى سوغۇق ساقلاش ئۈچۈن توقۇلما مۇنچىسى مۇز بىلەن ئورالغان ۋە تېمپېراتۇرا 4 سېلسىيە گرادۇستا ساقلانغان. مىكروتوم مۇنچىسىدىكى توقۇلما پارچىلىرىنى بىر مەدەنىيەت تاختىسىغا يېتەرلىك پارچىلار ئېلىنغۇچە مۇز ئۈستىدە ئۈزلۈكسىز ئوكسىگېنلىق تىرود ئېرىتمىسى بار ئىنكۇباتسىيە مۇنچىسىغا يۆتكەڭ. ترانسۋېل مەدەنىيەتلىرى ئۈچۈن، توقۇلما پارچىلىرى ستېرىللانغان 6 مىللىمېتىر كەڭلىكتىكى پولىئۇرېتان تىرەكلىرىگە چاپلىنىپ، 6 مىللىلىتىر ئەلالاشتۇرۇلغان ئوتتۇرا (199 ئوتتۇرا، 1x ITS قوشۇمچە ماددىسى، 10% FBS، 5 ng/ml VEGF، 10 ng/ml FGF-ئىشكارىلىق ۋە 2X ئانتىبىئوتىك-زەمبۇرۇغقا قارشى دورى) ئىچىگە قويۇلغان. C-Pace ئارقىلىق توقۇلما پارچىلىرىغا ئېلېكتر غىدىقلاش (10 V، چاستوتا 1.2 گېرتس) قوللىنىلغان. TD شارائىتىدا، ھەر بىر ئوتتۇرا ئالماشتۇرۇشتا 100 nM ۋە 1 μM دا يېڭى T3 ۋە Dex قوشۇلدى. ئوتتۇرا ئالماشتۇرۇشتىن بۇرۇن كۈنىگە 3 قېتىم ئوكسىگېن بىلەن تويۇندۇرۇلىدۇ. توقۇلما پارچىلىرى 37 سېلسىيە گرادۇسلۇق ۋە %5 CO2 لىق ئىنكۇباتوردا يېتىشتۈرۈلدى.
CTCM كۈلتۈرىسى ئۈچۈن، توقۇلما پارچىلىرى ئۆزگەرتىلگەن تىرود ئېرىتمىسى قاچىلانغان پېترى قاچىسىدىكى خاسلاشتۇرۇلغان 3D پرىنتېرغا قويۇلدى. بۇ ئۈسكۈنە يۈرەك پارچىسىنىڭ چوڭلۇقىنى تىرەك ھالقىسىنىڭ كۆلىمىنىڭ %25 گىچە ئاشۇرۇش ئۈچۈن لايىھەلەنگەن. بۇ، تىرود ئېرىتمىسىدىن مۇھىتقا يۆتكەلگەندىن كېيىن ۋە دىئاستولا جەريانىدا يۈرەك پارچىلىرىنىڭ سوزۇلۇپ كەتمەسلىكى ئۈچۈن قىلىنىدۇ. گىستوئاكرىل يېلىمى ئىشلىتىپ، دىئامېتىرى 7 مىللىمېتىر كېلىدىغان تىرەك ھالقىسىغا 300 مىكرومېتىر قېلىنلىقتىكى پارچىلار بېكىتىلدى. توقۇلما پارچىلىرىنى تىرەك ھالقىسىغا ئۇلىغاندىن كېيىن، ئارتۇق توقۇلما پارچىلىرىنى كېسىپ ئېلىۋېتىپ، ئۇلانغان توقۇلما پارچىلىرىنى بىر ئۈسكۈنە ئۈچۈن يېتەرلىك پارچىلار تەييارلانغۇچە مۇز ئۈستىدىكى (4°C) تىرود ئېرىتمىسى بىلەن قايتا سۇغا سېلىڭ. بارلىق ئۈسكۈنىلەرنىڭ ئومۇمىي بىر تەرەپ قىلىش ۋاقتى 2 سائەتتىن ئېشىپ كەتمەسلىكى كېرەك. 6 توقۇلما پارچىسى تىرەك ھالقىسىغا ئۇلانغاندىن كېيىن، CTCM ئۈسكۈنىسى يىغىۋېلىندى. CTCM كۈلتۈر كامېراسى ئالدىن 21 مىللىلىتىر ئوكسىگېنلاشتۇرۇلغان مۇھىت بىلەن تولدۇرۇلدى. توقۇلما پارچىلىرىنى كۈلتۈر كامېراسىغا يۆتكەڭ ۋە ھاۋا كۆپۈكچىلىرىنى پىپېتكا بىلەن ئېھتىيات بىلەن چىقىرىۋېتىڭ. ئاندىن توقۇلما قىسمى تۆشۈككە يېتەكلىنىپ، ئاستا-ئاستا ئورنىغا بېسىلىدۇ. ئاخىرىدا، ئېلېكترود قاپقىقىنى ئۈسكۈنىگە قويۇپ، ئۈسكۈنىنى ئىنكۇباتورغا يۆتكەڭ. ئاندىن CTCM نى ھاۋا تۇرۇبىسى ۋە C-PACE-EM سىستېمىسىغا ئۇلاڭ. ھاۋا قوزغاتقۇچ ئېچىلىدۇ ۋە ھاۋا كلاپان CTCM نى ئاچىدۇ. C-PACE-EM سىستېمىسى ئىككى باسقۇچلۇق سۈرئەتنى تەڭشەش جەريانىدا 2 ms ۋاقىت ئىچىدە 1.2 Hz دا 4 V توك بىلەن تەمىنلەشكە ماسلاشتۇرۇلغان. ئېلېكترودلاردا گرافىتنىڭ يىغىلىپ قېلىشىنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن، ئورتا كۈنىگە ئىككى قېتىم، ئېلېكترودلار كۈنىگە بىر قېتىم ئالماشتۇرۇلىدۇ. زۆرۈر تېپىلغاندا، ئاستىغا چۈشۈپ قالغان ھاۋا كۆپۈكچىلىرىنى چىقىرىۋېتىش ئۈچۈن، توقۇلما قىسىملىرىنى ئۇلارنىڭ مەدەنىيەت ئۆڭكۈرلىرىدىن ئېلىۋېتىشكە بولىدۇ. MT بىر تەرەپ قىلىش شارائىتى ئۈچۈن، ھەر بىر ئورتا ئالماشتۇرۇلغاندا T3/Dex 100 nM T3 ۋە 1 μM Dex بىلەن يېڭى قوشۇلىدۇ. CTCM ئۈسكۈنىلىرى 37°C ۋە %5 CO2 دىكى ئىنكۇباتوردا يېتىشتۈرۈلىدۇ.
يۈرەك پارچىلىرىنىڭ سوزۇلغان يۆنىلىشىنى قولغا كەلتۈرۈش ئۈچۈن، ئالاھىدە كامېرا سىستېمىسى ئىجاد قىلىندى. Navitar Zoom 7000 18-108mm ماكرو ئوبيېكتىۋى (Navitar، سان فىرانسىسكو، كالىفورنىيە) بىلەن بىر SLR كامېرا (Canon Rebel T7i، Canon، توكيو، ياپونىيە) ئىشلىتىلدى. يېڭى تاراتقۇ بىلەن ئالماشتۇرۇلغاندىن كېيىن، كۆرۈنۈشلۈك ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا ئېلىپ بېرىلدى. كامېرا 51° بۇلۇڭدا ئورۇنلاشتۇرۇلىدۇ ۋە سىن سېكۇنتىغا 30 كادىردا خاتىرىلىنىدۇ. ئالدى بىلەن، يۈرەك پارچىلىرىنىڭ ھەرىكىتىنى مىقدارلاشتۇرۇش ئۈچۈن Image-J بىلەن ئوچۇق كودلۇق يۇمشاق دېتال (MUSCLEMOTION43) ئىشلىتىلدى. ماسكا MATLAB (MathWorks، Natick، MA، ئامېرىكا) ئارقىلىق ياسىلىپ، شاۋقۇندىن ساقلىنىش ئۈچۈن يۈرەك پارچىلىرىنىڭ قىزىقىش رايونلىرىنى بەلگىلىدى. قولدا بۆلۈنگەن ماسكىلار رامكا تەرتىپىدىكى بارلىق رەسىملەرگە قوللىنىلىدۇ ۋە ئاندىن MUSCLEMOTION قىستۇرمىسىغا يوللىنىدۇ. Muscle Motion ھەر بىر رامكىدىكى پىكسېللارنىڭ ئوتتۇرىچە كۈچلۈكلۈكىنى ئىشلىتىپ، ئۇنىڭ ھەرىكەتچانلىقىنى پايدىلىنىش رامكىسىغا نىسبەتەن مىقدارلاشتۇرىدۇ. سانلىق مەلۇماتلار خاتىرىلەنگەن، سۈزۈلگەن ۋە يۈرەك دەۋرىيلىكىدىكى ۋاقىتنى مىقدارلاشتۇرۇش ۋە توقۇلمىلارنىڭ سوزۇلۇشىنى باھالاشقا ئىشلىتىلگەن. خاتىرىلەنگەن سىن بىرىنچى دەرىجىلىك نۆل باسقۇچلۇق رەقەملىك سۈزگۈچ ئارقىلىق كېيىن بىر تەرەپ قىلىنغان. توقۇلمىلارنىڭ سوزۇلۇشىنى (چوققا-چوققا) مىقدارلاشتۇرۇش ئۈچۈن، خاتىرىلەنگەن سىگنالدىكى چوققا ۋە تۆۋەن نۇقتىلارنى پەرقلەندۈرۈش ئۈچۈن چوققا-چوققا ئانالىزى ئېلىپ بېرىلغان. بۇنىڭدىن باشقا، سىگنالنىڭ يۆتكىلىشىنى يوقىتىش ئۈچۈن 6-دەرىجىلىك كۆپ ئەزا ئارقىلىق يۈزلىنىشنى يوقىتىش ئېلىپ بېرىلغان. MATLAB دا دۇنياۋى توقۇلمىلارنىڭ ھەرىكىتى، دەۋرىيلىك ۋاقتى، بوشىشىش ۋاقتى ۋە قىسقىرىشى ۋاقتىنى بەلگىلەش ئۈچۈن پروگرامما كودى ئىجاد قىلىنغان (قوشۇمچە پروگرامما كودى 44).
بېسىم ئانالىزى ئۈچۈن، مېخانىكىلىق سوزۇلۇشنى باھالاش ئۈچۈن ياسالغان ئوخشاش سىنلارنى ئىشلىتىپ، ئالدى بىلەن MUSCLEMOTION يۇمشاق دېتالىغا ئاساسەن ھەرىكەت چوققىلىرىنى (ئەڭ يۇقىرى (ئۈستۈنكى) ۋە ئەڭ تۆۋەن (تۆۋەنكى) ھەرىكەت نۇقتىلىرى) ئىپادىلەيدىغان ئىككى رەسىمنى ئىز قوغلىدۇق. ئاندىن توقۇلما رايونلىرىنى بۆلەكلەرگە ئايرىدۇق ۋە بۆلەكلەرگە ئايرىلغان توقۇلمىغا بىر خىل سايە ئالگورىزىمىنى قوللاندۇق (قوشۇمچە رەسىم 2a). بۆلەكلەرگە ئايرىلغان توقۇلما ئاندىن ئون يەر ئاستىغا بۆلۈندى، ھەر بىر يۈزدىكى بېسىم تۆۋەندىكى تەڭلىمە ئارقىلىق ھېسابلىنىدۇ: بېسىم = (ئۆسۈپ-ئۆسۈپ)/ئۆسۈپ، بۇ يەردە ئۆسۈپ ۋە ئۆسۈپ شەكىلنىڭ رەختنىڭ ئۈستۈنكى ۋە ئاستىنقى سايىسىدىن بولغان ئارىلىقى (قوشۇمچە رەسىم 2b).
يۈرەك پارچىلىرى %4 پارافورمالدېھىدتا 48 سائەت مۇقىملاشتۇرۇلدى. مۇقىملاشتۇرۇلغان توقۇلمىلار %10 ۋە %20 ساخاروزادا 1 سائەت قۇرۇتۇلدى، ئاندىن %30 ساخاروزادا بىر كېچە تۇرغۇزۇلدى. ئاندىن پارچىلار ئەڭ ياخشى كېسىش تېمپېراتۇرىسى بىرىكمىسىگە (OCT بىرىكمىسى) سېلىندى ۋە ئىزوپېنتان/قۇرۇق مۇز سۇيۇقلۇقىدا ئاستا-ئاستا توڭلىتىلدى. OCT قىستۇرۇش بۆلەكلىرىنى ئايرىۋەتكۈچە -80 سېلسىيە گرادۇستا ساقلاڭ. سىيرىلمىلار 8 مىكرومېتىر قېلىنلىقتىكى پارچىلار شەكلىدە تەييارلاندى.
يۈرەك پارچىلىرىدىن OCT نى ئېلىۋېتىش ئۈچۈن، سىيرىلمىلارنى قىزىتىش تاختىسىدا 95 سېلسىيە گرادۇستا 5 مىنۇت قىزىتىڭ. ھەر بىر سىيرىلمىغا 1 مىللىلىتىر PBS قوشۇپ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 30 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ، ئاندىن PBS دا 0.1% Triton-X نى قويۇپ، بۆلەكلەرگە سىڭدۈرۈپ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 15 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ. ئالاھىدە بولمىغان ئانتىتېلانىڭ ئەۋرىشكە بىلەن باغلىنىشىنىڭ ئالدىنى ئېلىش ئۈچۈن، سىيرىلمىلارغا 1 مىللىلىتىر 3% BSA ئېرىتمىسى قوشۇپ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 1 سائەت تۇرغۇزۇڭ. ئاندىن BSA ئېلىۋېتىلدى ۋە سىيرىلمىلار PBS بىلەن يۇيۇلدى. ھەر بىر ئەۋرىشكە قەلەم بىلەن بەلگە قويۇڭ. بىرىنچى دەرىجىلىك ئانتىتېلا (1% BSA دا 1:200 سۇيۇلدۇرۇلغان) (connexin 43 (Abcam; #AB11370)، NFATC4 (Abcam; #AB99431) ۋە تروپونىن-T (Thermo Scientific; #MA5-12960) 90 مىنۇت ئىچىدە قوشۇلدى، ئاندىن ئىككىنچى دەرىجىلىك ئانتىتېلا (1% BSA دا 1:200 سۇيۇلدۇرۇلغان) چاشقان Alexa Fluor 488 (Thermo Scientific; #A16079) غا، قۇيان Alexa Fluor 594 (Thermo Scientific; #T6391) غا قارشى يەنە 90 مىنۇت قوشۇلدى. نىشان رەڭگىنى ئارقا كۆرۈنۈشتىن پەرقلەندۈرۈش ئۈچۈن، بىز پەقەت ئىككىنچى دەرىجىلىك ئانتىتېلانى كونترول سۈپىتىدە ئىشلەتتۇق. ئاخىرىدا، DAPI يادرو رەڭگى قوشۇلدى ۋە سىيرىلمىلار vectashield (Vector Laboratories) غا قويۇلۇپ، تىرناق بوياق بىلەن پېچەتلەندى. -x چوڭايتىش) ۋە 40x چوڭايتىش بىلەن Keyence مىكروسكوپى بىلەن پېچەتلەندى.
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) نىڭ PBS دىكى 5 μg/ml لىق مىقدارى WGA بوياش ئۈچۈن ئىشلىتىلىپ، ئۆي تېمپېراتۇرىسىدا 30 مىنۇت بەلگىلەنگەن بۆلەكلەرگە سۈرۈلدى. ئاندىن سىيرىلمىلار PBS بىلەن يۇيۇلدى ۋە ھەر بىر سىيرىلمىغا سۇدان قارا رەڭ قوشۇلۇپ 30 مىنۇت تۇرغۇزۇلدى. ئاندىن سىيرىلمىلار PBS بىلەن يۇيۇلدى ۋە vectashield نىڭ كىرگۈزۈش سۇيۇقلۇقى قوشۇلدى. سىيرىلمىلار Keyence مىكروسكوپىدا 40 ھەسسە چوڭايتىش ئارقىلىق كۆرسىتىلدى.
يۇقىرىدا دېيىلگەندەك، ئەۋرىشكىلەردىن OCT ئېلىۋېتىلدى. OCT ئېلىۋېتىلگەندىن كېيىن، سىيرىلمىلارنى بىر كېچە Bouin ئېرىتمىسىگە چىلاپ قويۇڭ. ئاندىن سىيرىلمىلار 1 سائەت قاينىتىلغان سۇ بىلەن چايقالدى، ئاندىن Bibrich ئالوئې كىسلاتاسى فۇشسىن ئېرىتمىسىگە 10 مىنۇت سېلىندى. ئاندىن سىيرىلمىلار قاينىتىلغان سۇ بىلەن يۇيۇلۇپ، %5 فوسفورمولىبدېن / %5 فوسفوتۋولفستىك كىسلاتا ئېرىتمىسىگە 10 مىنۇت سېلىندى. چايقاپ قويماي، سىيرىلمىلارنى بىۋاسىتە ئانىلىن كۆك ئېرىتمىسىگە 15 مىنۇت سېلىڭ. ئاندىن سىيرىلمىلار قاينىتىلغان سۇ بىلەن يۇيۇلۇپ، %1 ئاتسېتاتىك كىسلاتا ئېرىتمىسىگە 2 مىنۇت سېلىندى. سىيرىلمىلار 200 N ئېتانولدا قۇرۇتۇلۇپ، كسىلېنغا يۆتكىلدى. بوялغان سىيرىلمىلار 10x ئوبيېكتىپلىق Keyence مىكروسكوپى ئارقىلىق كۆرسىتىلدى. فىبروز كۆلىمىنىڭ نىسبىتى Keyence ئانالىزاتورى يۇمشاق دېتالى ئارقىلىق مىقدارلاشتۇرۇلدى.
CyQUANT™ MTT ھۈجەيرە ھاياتىي كۈچىنى تەكشۈرۈش (Invitrogen, Carlsbad, CA)، كاتالوگ نومۇرى V13154، ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ قائىدىسىگە ئاساسەن، بەزى ئۆزگەرتىشلەر كىرگۈزۈلگەن. بولۇپمۇ، MTT ئانالىزى جەريانىدا توقۇلما چوڭلۇقىنىڭ بىردەكلىكىگە كاپالەتلىك قىلىش ئۈچۈن، دىئامېتىرى 6 مىللىمېتىر كېلىدىغان جىددىي مۇشتلاش ئۇسۇلى قوللىنىلدى. ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ قائىدىسىگە ئاساسەن، توقۇلمىلار MTT ئاساسى بار 12 قۇدۇقلۇق تاختاينىڭ قۇدۇقلىرىغا ئايرىم-ئايرىم ھالدا چاپلاندى. بۇ بۆلەكلەر 37 سېلسىيە گرادۇستا 3 سائەت ئىنكۇباتسىيە قىلىنىدۇ، تىرىك توقۇلما MTT ئاساسىنى مېتابولىزم قىلىپ، بىنەپشە رەڭلىك فورمازان بىرىكمىسىنى ھاسىل قىلىدۇ. MTT ئېرىتمىسىنى 1 مىللىلىتىر DMSO بىلەن ئالماشتۇرۇپ، يۈرەك بۆلەكلىرىدىن بىنەپشە رەڭلىك فورمازاننى ئېلىش ئۈچۈن 37 سېلسىيە گرادۇستا 15 مىنۇت ئىنكۇباتسىيە قىلىنىدۇ. ئەۋرىشكىلەر 96 قۇدۇقلۇق سۈزۈك ئاستى تاختىلاردا DMSO دا 1:10 نىسبەتتە سۇيۇلدۇرۇلدى ۋە Cytation تاختاي ئوقۇغۇچ (BioTek) ئارقىلىق 570 نانومېتىردا بىنەپشە رەڭنىڭ كۈچلۈكلۈكى ئۆلچەندى. ئوقۇشلار يۈرەكنىڭ ھەر بىر پارچىسىنىڭ ئېغىرلىقىغا ئاساسەن نورماللاشتۇرۇلدى.
يۈرەك پارچىسى ئوزۇقلۇقلىرى ئىلگىرى تەسۋىرلەنگەندەك گىليۇكوزا ئىشلىتىش سىنىقى ئۈچۈن 1 μCi/ml [5-3H]-گىليۇكوزا (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) تەركىبىدىكى ئوزۇقلۇقلار بىلەن ئالماشتۇرۇلدى. 4 سائەتلىك ئىنكۇباتسىيەدىن كېيىن، 100 µl 0.2 N HCl تەركىبىدىكى ئوچۇق مىكرو مەركەزدىن قاچۇرۇش نەيچىسىگە 100 µl ئوزۇقلۇق قوشۇلدى. ئاندىن نەيچە 500 µl dH2O تەركىبىدىكى سىكرىنتلاش نەيچىسىگە قويۇلۇپ، 37°C تېمپېراتۇرىدا 72 سائەت [3H]2O پارغا ئايلاندۇرۇلدى. ئاندىن مىكرو مەركەزدىن قاچۇرۇش نەيچىسىنى سىكرىنتلاش نەيچىسىدىن ئېلىۋېتىپ، 10 مىللىلىتىر سىكرىنتلاش سۇيۇقلۇقى قوشۇلدى. سىكرىنتلاش سانى Tri-Carb 2900TR سۇيۇق سىكرىنتلاش ئانالىزاتورى (Packard Bioscience شىركىتى، Meriden، CT، USA) ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. ئاندىن گىليۇكوزا ئىشلىتىش مىقدارى [5-3H]-گىليۇكوزاغا خاس پائالىيەت، تولۇقسىز تەڭپۇڭلۇق ۋە ئارقا كۆرۈنۈش، [5-3H]-نى بەلگە قويۇلمىغان گىليۇكوزاغا سۇيۇلدۇرۇش ۋە سىنتىللىياسىيە قارشى تۇرۇش ئۈنۈمىنى ئويلىشىپ ھېسابلاندى. سانلىق مەلۇماتلار يۈرەك قىسىملىرىنىڭ ماسسىسىغا نورماللاشتۇرۇلدى.
Trizol دا توقۇلمىلارنى بىر خىل ھالەتكە كەلتۈرگەندىن كېيىن، ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ قائىدىسىگە ئاساسەن Qiagen miRNeasy Micro Kit #210874 ئارقىلىق يۈرەك قىسىملىرىدىن RNA ئايرىۋېلىندى. RNAsec كۈتۈپخانىسىنى تەييارلاش، تەرتىپلەش ۋە سانلىق مەلۇمات ئانالىزى تۆۋەندىكىدەك ئېلىپ بېرىلدى:
ھەر بىر ئەۋرىشكە 1 μg RNA باشلانغۇچ ماتېرىيال سۈپىتىدە RNA كۈتۈپخانىسىنى تەييارلاش ئۈچۈن ئىشلىتىلدى. تەرتىپ كۈتۈپخانىلىرى ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ تەۋسىيەسىگە ئاساسەن NEBNext UltraTM RNA كۈتۈپخانىسى تەييارلاش قورالى (NEB، ئامېرىكا) ئارقىلىق ئىشلەپچىقىرىلدى، ھەمدە ھەر بىر ئەۋرىشكە ئۈچۈن خاسلىق تەرتىپلىرىگە كۆرسەتكۈچ كودلىرى قوشۇلدى. قىسقىسى، mRNA كۆپ-T ئولىگونۇكلېئوتىدلار بىلەن باغلانغان ماگنىتلىق مارجانلار ئارقىلىق ئومۇمىي RNA دىن تازىلاندى. پارچىلاش NEBNext بىرىنچى تالالىق سىنتېز رېئاكسىيە بۇففېرىدا (5X) يۇقىرى تېمپېراتۇرىدا ئىككى ۋالېنتلىق كاتىئونلار ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. بىرىنچى تالالىق cDNA تاسادىپىي گېكسامېر باشلىغۇچىلىرى ۋە M-MuLV تەتۈر ترانسكرىپتازا (RNase H-) ئارقىلىق سىنتېز قىلىندى. ئاندىن ئىككىنچى تالالىق cDNA DNA پولىمېرازا I ۋە RNase H ئارقىلىق سىنتېزلىنىدۇ. قالغان ھالقىلار ئېكسونۇكلېئازا/پولىمېرازا پائالىيىتى ئارقىلىق ئۇچسىز ئۇچلارغا ئايلاندۇرۇلىدۇ. DNA پارچىسىنىڭ 3' ئۇچى ئادېنىللانغاندىن كېيىن، ئۇنىڭغا چاچلىق ھالقىسىمان قۇرۇلمىغا ئىگە NEBNext ئاداپتېرى ئۇلىنىپ، ئۇنى گىبرىدلاشتۇرۇشقا تەييارلىنىدۇ. 150-200 bp ئۇزۇنلۇقتىكى cDNA پارچىلىرىنى تاللاش ئۈچۈن، كۈتۈپخانا پارچىلىرى AMPure XP سىستېمىسى (Beckman Coulter, Beverly, USA) ئارقىلىق تازىلاندى. ئاندىن، PCR دىن بۇرۇن، چوڭلۇقى تاللانغان cDNA بىلەن 3 μl USER Enzyme (NEB, USA) 37°C تېمپېراتۇرىدا 15 مىنۇت، ئاندىن 95°C تېمپېراتۇرىدا 5 مىنۇت ئىشلىتىلدى. ئاندىن PCR Phusion High-Fidelity DNA پولىمېرازا، ئۇنىۋېرسال PCR باشلىغۇچىلىرى ۋە Index (X) باشلىغۇچىلىرى ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. ئاخىرىدا، PCR مەھسۇلاتلىرى تازىلاندى (AMPure XP سىستېمىسى) ۋە كۈتۈپخانا سۈپىتى Agilent Bioanalyzer 2100 سىستېمىسىدا باھالاندى. ئاندىن cDNA كۈتۈپخانىسى Novaseq تەرتىپلەش ئۈسكۈنىسى ئارقىلىق تەرتىپلەندى. Illumina دىن ئېلىنغان خام رەسىم ھۆججەتلىرى CASAVA Base Calling ئارقىلىق خام ئوقۇشقا ئايلاندۇرۇلدى. خام سانلىق مەلۇماتلار ئوقۇش تەرتىپلىرى ۋە ماس كېلىدىغان ئاساسىي سۈپەتلەرنى ئۆز ئىچىگە ئالغان FASTQ(fq) فورماتلىق ھۆججەتلەردە ساقلىنىدۇ. سۈزۈلگەن تەرتىپ ئوقۇشلىرىنى Sscrofa11.1 پايدىلىنىش گېنومى بىلەن ماسلاشتۇرۇش ئۈچۈن HISAT2 نى تاللاڭ. ئادەتتە، HISAT2 4 مىليارد ئاساستىن چوڭ گېنوملارنى ئۆز ئىچىگە ئالغان ھەر قانداق چوڭلۇقتىكى گېنوملارنى قوللايدۇ، ھەمدە كۆپىنچە پارامېتىرلار ئۈچۈن ئۆزلۈكىدىن بېكىتىلگەن قىممەتلەر بار. RNA تەرتىپ سانلىق مەلۇماتلىرىدىن ئۇلىنىش ئوقۇشلىرىنى ھازىر بار بولغان ئەڭ تېز سىستېما HISAT2 ئارقىلىق ئۈنۈملۈك ماسلاشتۇرغىلى بولىدۇ، باشقا ھەر قانداق ئۇسۇل بىلەن ئوخشاش ياكى ئۇنىڭدىنمۇ ياخشى توغرىلىق بىلەن.
ترانسكرىپتلارنىڭ موللۇقى گېننىڭ ئىپادىلىنىش سەۋىيەسىنى بىۋاسىتە ئەكس ئەتتۈرىدۇ. گېننىڭ ئىپادىلىنىش سەۋىيەسى گېنوم ياكى ئېكسونلار بىلەن مۇناسىۋەتلىك ترانسكرىپتلارنىڭ موللۇقى (تەرتىپ سانى) ئارقىلىق باھالىنىدۇ. ئوقۇش سانى گېننىڭ ئىپادىلىنىش سەۋىيەسى، گېن ئۇزۇنلۇقى ۋە تەرتىپ چوڭقۇرلۇقى بىلەن ماس كېلىدۇ. FPKM (مىليون ئاساسىي جۈپكە تەرتىپلەنگەن ترانسكرىپتنىڭ مىڭ ئاساسىي جۈپلىرىگە توغرا كېلىدىغان پارچىلار) ھېسابلىنىپ، DESeq2 بوغچىسى ئارقىلىق پەرقلىق ئىپادىلىنىشنىڭ P-قىممىتى بېكىتىلدى. ئاندىن بىز ئىچكى R-فۇنكسىيەسى «p.adjust» غا ئاساسەن Benjamini-Hochberg ئۇسۇلى9 ئارقىلىق ھەر بىر P قىممىتى ئۈچۈن يالغان بايقاش نىسبىتىنى (FDR) ھېسابلىدۇق.
يۈرەك پارچىلىرىدىن ئايرىۋېلىنغان RNA، Thermo نىڭ SuperScript IV Vilo Master ئارىلاشمىسى (Thermo, cat. no. 11756050) ئارقىلىق 200 ng/μl قويۇقلۇقتا cDNA غا ئايلاندۇرۇلدى. مىقدارلىق RT-PCR Applied Biosystems Endura Plate Microamp 384-ئۆڭكۈر سۈزۈك رېئاكسىيە تاختىسى (Thermo, cat. no. 4483319) ۋە مىكروئامپېر ئوپتىكىلىق يېلىم (Thermo, cat. no. 4311971) ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. رېئاكسىيە ئارىلاشمىسى 5 µl Taqman Fast Advanced Master ئارىلاشمىسى (Thermo, cat. # 4444557)، 0.5 µl Taqman Primer ۋە ھەر بىر ئۆڭكۈرگە ئارىلاشتۇرۇلغان 3.5 µl H2O دىن تەركىب تاپقان. ئۆلچەملىك qPCR دەۋرىيلىكى ئىجرا قىلىندى ۋە CT قىممەتلىرى Applied Biosystems Quantstudio 5 ھەقىقىي ۋاقىتلىق PCR قورالى (384-ئۆڭكۈر مودۇلى؛ مەھسۇلات # A28135) ئارقىلىق ئۆلچەندى. Taqman پرايمېرلىرى Thermo (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss06868890_m1), ACTN1 (Ss01009508_mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss04245588_m1) دىن سېتىۋېلىندى. بارلىق ئەۋرىشكىلەرنىڭ CT قىممىتى GAPDH ئۆي ​​ئىشلىرى گېنىغا نورماللاشتۇرۇلدى.
NT-ProBNP نىڭ ئاخبارات ئېلان قىلىنىشى ئىشلەپچىقارغۇچىنىڭ قائىدىسىگە ئاساسەن NT-ProBNP قورالى (چوشقا) (كاتېگورىيە نومۇرى MBS2086979، MyBioSource) ئارقىلىق باھالاندى. قىسقىسى، ھەر بىر قۇدۇققا ھەر بىر ئەۋرىشكە ۋە ئۆلچەمدىن 250 µl قوشۇلدى. ئەۋرىشكە قوشۇلغاندىن كېيىن دەرھال ھەر بىر قۇدۇققا 50 µl سىناق رېئاگېنتى A قوشۇڭ. تاختىنى ئاستا سىلكىپ، سىر بىلەن پېچەتلەڭ. ئاندىن تاختايلار 37°C دا 1 سائەت ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. ئاندىن ئېرىتمىنى سۈمۈرۈپ، قۇدۇقلارنى 350 µl 1X يۇيۇش ئېرىتمىسى بىلەن 4 قېتىم يۇيۇڭ، ھەر قېتىمدا 1-2 مىنۇت ئىنكۇباتسىيە قىلىڭ. ئاندىن ھەر بىر قۇدۇققا 100 µl سىناق رېئاگېنتى B قوشۇپ، تاختا سىر بىلەن پېچەتلەڭ. تاختاي ئاستا سىلكىپ، 37°C دا 30 مىنۇت ئىنكۇباتسىيە قىلىندى. ئېرىتمىنى سۈمۈرۈپ، قۇدۇقلارنى 350 µl 1X يۇيۇش ئېرىتمىسى بىلەن 5 قېتىم يۇيۇڭ. ھەر بىر قۇدۇققا 90 µl سۇبسترات ئېرىتمىسى قوشۇپ، تاختىنى پېچەتلەڭ. تاختىنى 37 سېلسىيە گرادۇستا 10-20 مىنۇت تۇرغۇزۇڭ. ھەر بىر قۇدۇققا 50 µl توختىتىش ئېرىتمىسى قوشۇڭ. تاختى دەرھال 450 nm غا ئورنىتىلغان Cytation (BioTek) تاختا ئوقۇغۇچ ئارقىلىق ئۆلچەندى.
پارامېتىردىكى 10% لىك ئابسولۇت ئۆزگىرىشنى بايقاش ئۈچۈن %80 تىن يۇقىرى قۇۋۋەت بىلەن تەمىنلەيدىغان ۋە %5 I تىپلىق خاتالىق نىسبىتىگە ئىگە گۇرۇپپا چوڭلۇقىنى تاللاش ئۈچۈن قۇۋۋەت ئانالىزى ئېلىپ بېرىلدى. پارامېتىردىكى 10% لىك ئابسولۇت ئۆزگىرىشنى بايقاش ئۈچۈن %80 تىن يۇقىرى قۇۋۋەت بىلەن تەمىنلەيدىغان ۋە %5 I تىپلىق خاتالىق نىسبىتىگە ئىگە گۇرۇپپا چوڭلۇقىنى تاللاش ئۈچۈن قۇۋۋەت ئانالىزى ئېلىپ بېرىلدى. ئاناس موسنوستي بيل выполнен для выбора размеров группа, кот че обеспечат> 80% موشنости для обнаружения 10% абсолтного изменения Параметра с 5% частотой чибобок чипа I. %10 لىك ئابسولۇت پارامېتىر ئۆزگىرىشىنى بايقاش ئۈچۈن %80 تىن يۇقىرى قۇۋۋەت بىلەن تەمىنلەيدىغان ۋە %5 I تىپلىق خاتالىق نىسبىتىگە ئىگە گۇرۇپپا چوڭلۇقىنى تاللاش ئۈچۈن قۇۋۋەت ئانالىزى ئېلىپ بېرىلدى.进行功效分析以选择将提供> 80 ％功效以检测参数中 10 ％绝对变化和 5 ％ I 型错误率的组大小。进行功效分析以选择将提供> 80 ％功效以检测参数中 10 ％绝对变化和 5 ％ I 型错误率的组大小。 Был проведен ما мощности для выбора размера группы, котorый обеспечил бы> 80% موشنости для обнаружения 10% абсолтного изменения Параметров ۋە 5% частоты зибокока I. %10 مۇتلەق پارامېتىر ئۆزگىرىشى ۋە %5 I تىپلىق خاتالىق نىسبىتىنى بايقاش ئۈچۈن %80 تىن يۇقىرى قۇۋۋەت بىلەن تەمىنلەيدىغان گۇرۇپپا چوڭلۇقىنى تاللاش ئۈچۈن قۇۋۋەت ئانالىزى ئېلىپ بېرىلدى.تەجرىبە قىلىشتىن بۇرۇن توقۇلما پارچىلىرى تاسادىپىي تاللانغان. بارلىق ئانالىزلار شەرتسىز ئېلىپ بېرىلغان بولۇپ، ئەۋرىشكىلەر پەقەت بارلىق سانلىق مەلۇماتلار تەھلىل قىلىنغاندىن كېيىنلا يېشىۋېتىلگەن. بارلىق ستاتىستىكىلىق ئانالىزلارنى ئېلىپ بېرىش ئۈچۈن GraphPad Prism يۇمشاق دېتالى (سان دىياگو، كالىفورنىيە) ئىشلىتىلگەن. بارلىق ستاتىستىكىلارغا قارىغاندا، p-قىممەتلىرى <0.05 قىممەتتە مۇھىم دەپ قارالدى. بارلىق ستاتىستىكا ئۈچۈن، p-قىممەتلىرى <0.05 قىممەتتە مۇھىم دەپ قارالدى. Для всей стати пи-значения считались значимыми при значениях <0,05. بارلىق ستاتىستىكا ئۈچۈن، p-قىممەتلىرى <0.05 قىممەتتە مۇھىم دەپ قارالدى.对于所有统计数据， p 值在值 <0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据， p 值在值 <0.05 时被认为是显着的。 Для всей стати пи-значения считались значимыми при значениях <0,05. بارلىق ستاتىستىكا ئۈچۈن، p-قىممەتلىرى <0.05 قىممەتتە مۇھىم دەپ قارالدى.ئىككى تەرەپلىك ئوقۇغۇچىلارنىڭ t-سىناسى سانلىق مەلۇماتلارغا پەقەت ئىككى سېلىشتۇرۇش ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلدى. كۆپ گۇرۇپپىلار ئارىسىدىكى مۇھىملىقنى بېكىتىش ئۈچۈن بىر تەرەپلىك ياكى ئىككى تەرەپلىك ANOVA ئىشلىتىلدى. كېيىنكى سىناقلارنى ئېلىپ بارغاندا، كۆپ خىل سېلىشتۇرۇشلارنى ھېسابلاش ئۈچۈن Tukey نىڭ تۈزىتىشى قوللىنىلدى. RNAsec سانلىق مەلۇماتلىرى FDR ۋە p.adjust نى ھېسابلاشتا «ئۇسۇللار» بۆلىكىدە بايان قىلىنغاندەك ئالاھىدە ستاتىستىكىلىق ئامىللارغا ئىگە.
تەتقىقات لايىھىسى ھەققىدە تېخىمۇ كۆپ ئۇچۇرغا ئېرىشىش ئۈچۈن، بۇ ماقالىگە باغلىنىشلىق «تەبىئەت تەتقىقات دوكلاتى» نىڭ قىسقىچە مەزمۇنىغا قاراڭ.