Nature.com گهمڻ لاءِ توهان جي مهرباني.برائوزر جو نسخو توهان استعمال ڪري رهيا آهيو محدود CSS سپورٽ آهي.بهترين تجربي لاءِ، اسان سفارش ڪريون ٿا ته توهان هڪ اپڊيٽ ٿيل برائوزر استعمال ڪريو (يا انٽرنيٽ ايڪسپلورر ۾ مطابقت واري موڊ کي بند ڪريو).ساڳئي وقت ۾، مسلسل حمايت کي يقيني بڻائڻ لاء، اسان سائيٽ کي بغير اسٽائل ۽ جاوا اسڪرپٽ پيش ڪنداسين.
هڪ قابل اعتماد ان ويٽرو سسٽم جي ضرورت آهي جيڪا دوا جي جانچ لاءِ دل جي جسماني ماحول کي صحيح طور تي ٻيهر پيدا ڪري سگهي.انساني دل جي ٽشو ڪلچر سسٽم جي محدود دستيابي سبب دل جي دوا جي اثرن جي غلط تشريح ڪئي وئي آهي.هتي، اسان هڪ ڪارڊيڪ ٽشو ڪلچر ماڊل (CTCM) تيار ڪيو آهي جيڪو اليڪٽروميڪيڪل طور دل جي سلائسن کي متحرڪ ڪري ٿو ۽ دل جي چڪر جي سسٽولڪ ۽ ڊيسٽولڪ مرحلن دوران جسماني اسٽريچ مان گذري ٿو.ڪلچر جي 12 ڏينهن کان پوء، هن طريقي سان جزوي طور تي دل جي حصن جي استحڪام کي بهتر ڪيو، پر انهن جي تعميراتي سالميت کي مڪمل طور تي محفوظ نه ڪيو.تنهن ڪري، ننڍي ماليڪيول اسڪريننگ کان پوءِ، اسان ڏٺو ته اسان جي وچ ۾ 100 nM triiodothyronine (T3) ۽ 1 μM dexamethasone (Dex) جو اضافو 12 ڏينهن تائين حصن جي مائڪرو اسٽريچر کي برقرار رکيو.T3/Dex علاج سان گڏ، CTCM سسٽم 12 ڏينهن تائين تازي دل جي ٽشو وانگر ساڳئي سطح تي ٽرانسپشن پروفائلز، قابل عمل، ميٽابولڪ سرگرمي، ۽ ساخت جي سالميت کي برقرار رکيو.ان کان علاوه، ڪلچر ۾ دل جي بافتن جو گهڻو وڌائڻ هائپر ٽرافيڪ ڪارڊ سگنلنگ کي وڌايو، CTCM جي صلاحيت لاء ثبوت مهيا ڪري ٿو ته هائيپر ٽرافيڪ حالتن کي نقل ڪرڻ لاء دل جي اسٽريچ ذريعي.نتيجي ۾، CTCM ڊگهي عرصي دوران ڪلچر ۾ دل جي جسمانيات ۽ پيٿوفائيولوجي کي ماڊل ڪري سگهي ٿو، قابل اعتماد دوا جي اسڪريننگ کي چالو ڪري ٿو.
ڪلينڪل تحقيق کان اڳ، ويٽرو سسٽم ۾ قابل اعتماد گهربل آهي جيڪي انساني دل جي جسماني ماحول کي صحيح طور تي ٻيهر پيدا ڪري سگھن ٿا.اهڙين سسٽم کي تبديل ٿيل ميخانياتي ڇڪڻ، دل جي شرح، ۽ اليڪٽررو فزيولوجيڪل ملڪيت کي نقل ڪرڻ گهرجي.جانورن جا ماڊل عام طور تي استعمال ڪيا ويندا آهن هڪ اسڪريننگ پليٽ فارم جي طور تي ڪارڊ فزيولوجيجي لاءِ محدود اعتبار سان انساني دل ۾ دوائن جي اثرن کي ظاهر ڪرڻ ۾ 1,2.آخرڪار، Ideal Cardiac Tissue Culture Experimental Model (CTCM) ھڪڙو نمونو آھي جيڪو انتهائي حساس ۽ مخصوص آھي مختلف علاج ۽ دواسازي جي مداخلتن لاءِ، صحيح طور تي انساني دل جي فزيالوجي ۽ پيٿوفزيالوجي کي ٻيهر پيدا ڪري ٿو.اهڙي سسٽم جي غير موجودگي دل جي ناڪامي لاء نئين علاج جي دريافت کي محدود ڪري ٿي 4,5 ۽ مارڪيٽ مان نڪرڻ جو هڪ وڏو سبب دوا جي ڪارڊيوٽوڪسائيٽي جو سبب بڻيو آهي.
گذريل ڏهاڪي دوران، اٺ غير دل جي دوائن کي ڪلينڪل استعمال کان واپس ورتو ويو آهي ڇاڪاڻ ته اهي QT وقفي جي طويل سبب ventricular arrhythmias ۽ اوچتو موت 7 سبب آهن.اهڙيء طرح، قابل اعتماد preclinical اسڪريننگ حڪمت عملي جي وڌندڙ ضرورت آهي ته دل جي اثرائتي ۽ زهر جو جائزو وٺڻ لاء.انساني-حوصلہ افزائي pluripotent اسٽيم سيل مان نڪتل cardiomyocytes (hiPS-CM) جو تازو استعمال منشيات جي اسڪريننگ ۽ زهر جي جاچ ۾ هن مسئلي جو هڪ جزوي حل مهيا ڪري ٿو.جڏهن ته، hiPS-CMs جي غير معمولي نوعيت ۽ دل جي بافتن جي multicellular پيچيدگي جي کوٽ هن طريقي جي وڏي حدون آهن.تازيون اڀياس ڏيکاريا آهن ته هن حد کي جزوي طور تي ختم ڪري سگهجي ٿو شروعاتي hiPS-CM استعمال ڪندي دل جي ٽشو هائيڊروجيلز ٺاهڻ لاءِ جلدي جلدي جلدي ختم ٿيڻ جي شروعات کان پوءِ ۽ آهستي آهستي وقت سان گڏ برقي محرڪ وڌائيندي.بهرحال، اهي hiPS-CM مائڪروٽيسس بالغن جي ميوڪارڊيم جي بالغ الیکٹرو فزيولوجيڪل ۽ ڪانٽريڪٽيل ملڪيتن جي کوٽ آهي.ان کان علاوه، انساني دل جي بافتو هڪ وڌيڪ پيچيده جوڙجڪ آهي، جنهن ۾ مختلف سيلن جي مختلف قسمن جو هڪ متفاوت مرکب شامل آهي، جنهن ۾ اينڊوٿيليل سيلز، نيورون، ۽ اسٽرومل فائبروبلاسٽ شامل آهن، خاص سيٽن جي اضافي سيل ميٽرڪس پروٽينن سان ڳنڍيل آهن.11,12,13 غير ڪارڊيومائوسائيٽ جي آباديءَ جو هي تفاوت بالغ ٿلهي جي دل ۾ هڪ وڏي رڪاوٽ آهي ڪارڊيڪ ٽشوز کي ماڊل ڪرڻ ۾ انفرادي سيل جي قسمن کي استعمال ڪندي.اهي وڏيون حدون جسماني ۽ نفسياتي حالتن جي تحت برقرار مايوڪارڊيل ٽشو کي ڪلچر ڪرڻ لاء طريقا ترقي ڪرڻ جي اهميت تي زور ڏين ٿيون.
انساني دل جا ڪلچر ٿيل پتلي (300 µm) حصا برقرار انساني ميروڪارڊيم جو هڪ شاندار نمونو ثابت ٿيا آهن.اهو طريقو انساني دل جي بافتن وانگر هڪ مڪمل 3D ملٽي سيلولر سسٽم تائين رسائي فراهم ڪري ٿو.جڏهن ته، 2019 تائين، ثقافتي دل جي حصن جو استعمال مختصر (24 ايڇ) ثقافت جي بقا تائين محدود هو.اهو ڪيترن ئي عنصرن جي ڪري آهي جنهن ۾ جسماني-مڪينيڪل اسٽريچ جي کوٽ، ايئر مائع انٽرفيس، ۽ سادي ميڊيا جو استعمال جيڪي دل جي ٽشو جي ضرورتن کي سپورٽ نٿا ڪن.2019 ۾، ڪيترن ئي ريسرچ گروپن اهو ظاهر ڪيو ته ميخانياتي عنصر کي دل جي ٽشو ڪلچر سسٽم ۾ شامل ڪرڻ سان ڪلچر جي زندگي کي وڌائي سگھي ٿو، دل جي اظهار کي بهتر بڻائي، ۽ دل جي پيٽولوجي کي نقل ڪري سگھي ٿو.ٻه خوبصورت مطالعو 17 ۽ 18 ڏيکاري ٿو ته غير محوري ميخانياتي لوڊشيڊنگ ڪلچر دوران ڪارڊ فينوٽائپ تي مثبت اثر آهي.تنهن هوندي، انهن مطالعي ۾ ڪارڊ چڪر جي متحرڪ ٽي-dimensional جسماني-ميخانياتي لوڊشيڊنگ کي استعمال نه ڪيو ويو، ڇو ته دل جا حصا يا ته isometric tensile فورسز 17 يا لڪير آڪسوٽونڪ لوڊنگ 18 سان لوڊ ڪيا ويا.ٽشو وڌائڻ جا اهي طريقا ڪيترن ئي دل جي جين کي دٻائڻ جي نتيجي ۾ يا غير معمولي اسٽريچ جوابن سان لاڳاپيل جين جي اوور ايڪسپريشن جي نتيجي ۾.خاص طور تي، Pitoulis et al.19 هڪ متحرڪ دل جي سلائس ڪلچر حمام ٺاهيا ڪارڊ سائيڪل جي بحاليءَ لاءِ فورس ٽرانسڊيوسر موٽ ۽ ٽينشن ڊرائيو استعمال ڪندي.جيتوڻيڪ هي سسٽم ويٽرو ڪارڊيڪ سائيڪل ماڊلنگ ۾ وڌيڪ صحيح ڪرڻ جي اجازت ڏئي ٿو، طريقي جي پيچيدگي ۽ گهٽ throughput هن سسٽم جي ايپليڪيشن کي محدود ڪري ٿو.اسان جي ليبارٽري تازو ئي 6 ڏينهن تائين پورڪين ۽ انساني دل جي بافتن جي عملداري کي برقرار رکڻ لاءِ برقي محرڪ ۽ هڪ بهتر ميڊيم استعمال ڪندي هڪ آسان ڪلچر سسٽم تيار ڪيو آهي.
موجوده نسخي ۾، اسان هڪ دل جي ٽشو ڪلچر ماڊل (CTCM) جي وضاحت ڪريون ٿا پورڪين دل جي حصن کي استعمال ڪندي جنهن ۾ دل جي چڪر دوران ٽي-dimensional ڪارڊ فزيولوجيشن ۽ پيٿوفزيولوجيڪل تفاوت کي ٻيهر ترتيب ڏيڻ لاءِ مزاحيه اشارو شامل ڪيو ويو آهي.هي CTCM اڳ-ڪلينڪل دوائن جي اڳڪٿي جي درستگي کي وڌائي سگھي ٿو ان سطح تائين جيڪو اڳي ڪڏهن به حاصل نه ڪيو ويو هڪ قيمتي اثرائتي، وچولي ذريعي ڪارڊ سسٽم فراهم ڪندي جيڪو اڳ-ڪلينڪل دوا جي جاچ لاءِ ممالين جي دل جي فزيولوجي/پيٿوفائيولوجيجي کي نقل ڪري ٿو.
هيموڊينامڪ ميڪيڪل سگنل ويٽرو 22,23,24 ۾ cardiomyocyte فنڪشن کي برقرار رکڻ ۾ اهم ڪردار ادا ڪن ٿا.موجوده نسخي ۾، اسان هڪ CTCM (شڪل 1a) تيار ڪيو آهي جيڪو جسماني تعدد (1.2 هز، 72 بيٽس في منٽ) تي برقي ۽ ميخانياتي محرڪ ٻنهي کي شامل ڪندي بالغن جي دل جي ماحول کي نقل ڪري سگهي ٿو.ڊاءِسٽول دوران ٽشوز جي گھڻائي کان بچڻ لاءِ، ٽشو جي سائيز کي 25 سيڪڙو وڌائڻ لاءِ 3D پرنٽنگ ڊيوائس استعمال ڪئي وئي (تصوير 1b).C-PACE سسٽم پاران اليڪٽريڪل پيسنگ کي شروع ڪرڻ جو وقت مقرر ڪيو ويو 100 ms اڳ شروع ڪرڻ لاءِ سسٽول ڊيٽا حاصل ڪرڻ وارو نظام استعمال ڪندي مڪمل طور تي دل جي چڪر کي ٻيهر پيدا ڪرڻ لاءِ.ٽشو ڪلچر سسٽم هڪ پروگراميبل نيوميٽڪ ايڪٽيوٽر (LB انجنيئرنگ، جرمني) استعمال ڪري ٿو ته جيئن مٿي واري چيمبر ۾ دل جي سلائسن کي وڌائڻ لاءِ هڪ لچڪدار سلڪون جھلي کي سائيڪل طور تي وڌايو وڃي.سسٽم هڪ خارجي ايئر لائن سان هڪ پريشر ٽرانسڊيوسر جي ذريعي ڳنڍيو ويو، جنهن اهو ممڪن ڪيو ته صحيح طور تي دٻاء (± 1 mmHg) ۽ وقت (± 1 ms) (تصوير 1c).
a ٽشو سيڪشن کي 7 ملي ايم سپورٽ رنگ سان ڳنڍيو، نيري ۾ ڏيکاريل، ڊوائيس جي ڪلچر چيمبر اندر.ڪلچر چيمبر کي ايئر چيمبر کان ٿلهي لچڪدار سلڪون جھلي ذريعي الڳ ڪيو ويو آهي.هر چيمبر جي وچ ۾ هڪ گيسڪيٽ رکو ته ليڪ کي روڪڻ لاء.ڊوائيس جي لٺ ۾ گريفائٽ اليڪٽرروڊ شامل آهن جيڪي برقي محرک فراهم ڪن ٿا.ب وڏي ٽشو ڊيوائس جي اسڪيمي نمائندگي، گائيڊ انگ ۽ سپورٽ انگوزي.ٽشو سيڪشن (ناسي) وڏي ڊيوائس تي رکيل آهن گائيڊ انگوزي سان ڊوائيس جي ٻاهرئين ڪنڊ تي گروو ۾ رکيل آهن.گائيڊ کي استعمال ڪندي، دل جي ٽشو جي سيڪشن تي ٽشو ايڪريلڪ چپپڻ سان ليپ ٿيل سپورٽ رنگ کي احتياط سان رکو.c گراف هڪ پروگرامبل نيوميٽڪ ايڪٽيوٽر (PPD) پاران ڪنٽرول ٿيل ايئر چيمبر پريشر جي فنڪشن جي طور تي برقي محرڪ جو وقت ڏيکاري ٿو.هڪ ڊيٽا حاصل ڪرڻ واري ڊوائيس کي استعمال ڪيو ويو برقي محرک کي هم وقت سازي ڪرڻ لاءِ پريشر سينسر استعمال ڪندي.جڏهن ڪلچر چيمبر ۾ دٻاءُ مقرر حد تائين پهچندو آهي، هڪ نبض سگنل C-PACE-EM ڏانهن موڪليو ويندو آهي برقي محرڪ کي متحرڪ ڪرڻ لاءِ.d هڪ انڪيوبيٽر شيلف تي رکيل چار CTCMs جي تصوير.چار ڊوائيس ھڪڙي پي پي ڊي سان ھڪڙي نمونياتي سرڪٽ جي ذريعي ڳنڍيل آھن، ۽ پريشر سينسر ھيموسٽڪ والو ۾ داخل ڪيا ويا آھن نيوميٽڪ سرڪٽ ۾ دٻاء جي نگراني ڪرڻ لاء.هر ڊيوائس ۾ ڇهه ٽشو سيڪشن شامل آهن.
هڪ واحد نيوميٽڪ ايڪٽيوٽر استعمال ڪندي، اسان 4 CTCM ڊوائيسز کي ڪنٽرول ڪرڻ جي قابل هئاسين، جن مان هر هڪ 6 ٽشو سيڪشن (تصوير 1d) رکي سگهي ٿو.CTCM ۾، هوائي چيمبر ۾ هوا جو دٻاء سيال چيمبر ۾ هم وقت سازي دٻاء ۾ تبديل ڪيو ويو آهي ۽ دل جي سلائس جي جسماني توسيع کي وڌايو (شڪل 2a ۽ ضمني فلم 1).80 mm Hg تي ٽشو اسٽريچ جو جائزو.فن.25٪ (Fig. 2b).ھي فيصد وڌائي ڏيکاريو ويو آھي ھڪڙي جسماني سارڪوميري ڊگھائي 2.2-2.3 µm جي عام دل جي سيڪشن جي ڪانٽريڪٽ لاءِ 17,19,25.ٽشو تحريڪ جو جائزو ورتو ويو ڪسٽم ڪئميرا سيٽنگون استعمال ڪندي (ضمني شڪل 1).ٽشو جي حرڪت جو طول و عرض ۽ رفتار (تصوير 2c، ڊي) دل جي چڪر دوران وڌائڻ ۽ سسٽول ۽ ڊائسٽول (تصوير 2b) دوران وقت سان مطابقت رکي ٿي.ڇڪڻ ۽ آرام جي دوران دل جي بافتن جي اسٽريچ ۽ رفتار ڪلچر ۾ 12 ڏينهن تائين مسلسل رهي (تصوير 2f).ڪلچر دوران ڪانٽريڪٽ تي برقي محرڪ جي اثر جو جائزو وٺڻ لاءِ، اسان هڪ شيڊنگ الگورٿم (ضمني تصوير 2a،b) استعمال ڪندي فعال خرابي کي طئي ڪرڻ لاءِ هڪ طريقو تيار ڪيو آهي ۽ برقي محرڪ سان ۽ بغير خرابين جي وچ ۾ فرق ڪرڻ جي قابل هئاسين.دل جو ساڳيو حصو (تصوير 2f).ڪٽ جي متحرڪ علائقي ۾ (R6-9)، برقي محرک جي دوران وولٹیج 20٪ وڌيڪ هئي اليڪٽرڪ محرک جي غير موجودگي جي ڀيٽ ۾، جيڪو اشارو ڪري ٿو ته برقي محرک جي ڪنٽريڪٽيل فنڪشن ۾ حصو.
ايئر چيمبر پريشر، فلوئڊ چيمبر پريشر، ۽ ٽشو حرڪت جي ماپ جا نمائندا نشان تصديق ڪن ٿا ته چيمبر جو پريشر فلوئڊ چيمبر پريشر کي تبديل ڪري ٿو، جنهن ڪري ٽشو سلائس جي هڪ جهڙي حرڪت ڪري ٿي.b ٽشو سيڪشن جي فيصد اسٽريچ (نيري) جا نمايان نشان جيڪي سيڪڙو اسٽريچ (نارنگي) سان ملندڙ جلندڙ آهن.c دل جي ٽڪڙي جي ماپيل رفتار حرڪت جي ماپيل رفتار سان مطابقت رکي ٿي.(d) دل جي هڪ ٽڪري ۾ چڪر واري حرڪت (نيري لڪير) ۽ رفتار (نارنگي ڊاٽ ٿيل لڪير) جي نمائندگي ڪندڙ پيچرا.e چڪر جي وقت جي مقدار (n = 19 سلائسس في گروپ، مختلف سورن مان)، تڪرار جو وقت (n = 19 سلائسس في گروپ)، آرام جو وقت (n = 19 سلائس في گروپ، مختلف سورن مان)، ٽشو حرڪت (n = 25).سلائسون)/گروپ مختلف سورن مان، چوٽي سسٽولڪ رفتار (n = 24 (D0)، 25 (D12) سلائسون/ گروپ مختلف سورن مان) ۽ چوٽي آرام جي شرح (n = 24 (D0)، 25 (D12) سلائسون/ گروپ مختلف سورن مان).شاگردن جي ٽ-ٽيسٽ جي ٻن-مطالعن ڪنهن به پيٽرول ۾ ڪو خاص فرق نه ڏيکاريو.f (لال) ۽ بغير (نيرو) برقي محرڪ سان ٽشو سيڪشن جا نمائندا strain تجزيا نشان، ساڳي حصي مان ٽشو سيڪشن جا ڏهه علائقائي علائقا.هيٺيون پينل مختلف حصن مان ڏهن علائقن ۾ برقي محرک سان ۽ بغير ٽشو سيڪشن ۾ دٻاء ۾ سيڪڙو فرق جي مقدار کي ڏيکاري ٿو. (n = 8 سلائسس/گروپ مختلف سورن مان، ٻه-دم شاگردن جي ٽي-ٽيسٽ ڪئي وئي آهي؛ ****p <0.0001، **p <0.01، *p <0.05). (n = 8 سلائسس/گروپ مختلف سورن مان، ٻه-دم شاگردن جي ٽي-ٽيسٽ ڪئي وئي آهي؛ ****p <0.0001، **p <0.01، *p <0.05). (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента؛ ****p<0,0001, **p<0,01, *p<0,00,*p<0,001). (n = 8 سيڪشن/گروپ مختلف سورن مان، ٻه-ٽيل شاگردن جي ٽي-ٽيسٽ؛ ****p<0.0001، **p <0.01، *p <0.05). n = 8 片/组، 来自不同的猪،进行双尾学生t 检验；**p <0.0001,**p <0.01,*p <0.05）. n = 8 片/组، 来自不同的猪،进行双尾学生t 检验；**p <0.0001,**p <0.01,*p <0.05）. (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента؛ ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05). (n = 8 سيڪشن/گروپ، مختلف سورن مان، ٻه-ٽيل شاگردن جي ٽي-ٽيسٽ؛ ****p <0.0001، **p <0.01، *p <0.05).نقص بار جي نمائندگي ڪن ٿا مطلب ± معياري انحراف.
اسان جي پوئين جامد بايوميميٽڪ دل جي سلائس ڪلچر سسٽم ۾ [20, 21]، اسان 6 ڏينهن تائين دل جي سلائسن جي عملداري، ڪارڪردگي ۽ ساخت جي سالميت کي برقي محرک کي لاڳو ڪرڻ ۽ وچولي ساخت کي بهتر ڪرڻ سان برقرار رکيو.بهرحال، 10 ڏينهن کان پوء، اهي انگ اکر تيزيء سان گهٽجي ويا.اسان اسان جي پوئين جامد بائيوميميٽڪ ڪلچر سسٽم 20، 21 ڪنٽرول حالتن (Ctrl) ۾ ڪلچر ڪيل سيڪشنز جو حوالو ڏينداسين ۽ اسان استعمال ڪنداسين اسان جي اڳئين بهتر ڪيل ميڊيم کي MC حالتن ۽ ڪلچر کي هڪ ئي وقت ۾ ميڪيڪل ۽ برقي محرڪ (CTCM) تحت.سڏيو.پهرين، اسان اهو طئي ڪيو ته برقي محرک کان سواءِ مشيني محرڪ 6 ڏينهن تائين بافتن جي استحڪام کي برقرار رکڻ لاءِ ڪافي نه هو (ضمني تصوير 3a،b).دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، STCM استعمال ڪندي فزيو-مڪينيڪل ۽ برقي محرڪ جي تعارف سان، 12 ڏينهن جي دل جي حصن جي قابليت ساڳي رهي جيئن دل جي تازي حصن ۾ MS حالتن ۾، پر Ctrl جي حالتن هيٺ نه، جيئن MTT تجزيي (تصوير 1) ۾ ڏيکاريل آهي.3a).اهو مشورو ڏئي ٿو ته مشيني محرڪ ۽ دل جي چڪر جي تخليق ٽشو سيڪشن کي ٻه ڀيرا قابل عمل رکي سگهي ٿو جيترو اسان جي پوئين جامد ڪلچر سسٽم ۾ ٻڌايو ويو آهي.بهرحال، ٽشو سيڪشن جي ڍانچي جي سالميت جو تشخيص ڪارڊيڪ ٽراپونن T ۽ ڪنڪسين 43 جي امونولبلنگ ذريعي ڏيکاريو ويو آهي ته ڪنڪسين 43 ايڪسپريشن ايم سي ٽشوز ۾ 12 ڏينهن تي ساڳئي ڏينهن ڪنٽرولن جي ڀيٽ ۾ خاص طور تي وڌيڪ هئي.بهرحال، يونيفارم ڪنيڪسين 43 اظهار ۽ Z-ڊسڪ ٺهڻ مڪمل طور تي برقرار نه هئا (Fig. 3b).اسان هڪ مصنوعي ذهانت (AI) فريم ورڪ استعمال ڪريون ٿا ٽشو جي ڍانچي جي سالميت کي مقدار ڏيڻ لاءِ، هڪ تصوير تي ٻڌل ڊيپ لرننگ پائيپ لائين troponin-T ۽ connexin staining43 جي بنياد تي خود بخود ساخت جي سالميت ۽ دل جي سلائسن جي فلوروسينس کي مقامي ڪرڻ جي طاقت جي لحاظ کان.اهو طريقو استعمال ڪري ٿو هڪ Convolutional Neural Network (CNN) ۽ هڪ گہرے سکيا واري فريم ورڪ کي معتبر طور تي دل جي بافتن جي ساخت جي سالميت کي هڪ خودڪار ۽ غير جانبدار انداز ۾، جيئن حوالن ۾ بيان ڪيو ويو آهي.26. MC ٽائيسو ڏيکاريو بهتر ساختي هڪجهڙائي کي ڏينهن 0 جي ڀيٽ ۾ جامد ڪنٽرول حصن جي مقابلي ۾.ان کان علاوه، ميسن جي ٽرڪوم داغ ظاهر ڪيو MS جي حالتن هيٺ فبروسس جو هڪ خاص طور تي گهٽ سيڪڙو ڪلچر جي ڏينهن 12 تي ڪنٽرول حالتن جي مقابلي ۾ (تصوير 3c).جڏهن ته CTCM 12 ڏينهن تي دل جي بافتن جي سيڪشن جي استحڪام کي تازو دل جي بافتن جي برابر سطح تائين وڌايو، اهو خاص طور تي دل جي حصن جي ساخت جي سالميت کي بهتر نه ڪيو.
هڪ بار گراف ڏيکاري ٿو MTT وابستگي جي تازي دل جي سلائسز (D0) يا دل جي سلائس ڪلچر جي 12 ڏينهن لاءِ يا ته جامد ڪلچر ۾ (D12 Ctrl) يا CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0) ۾ (n = 18 (D0)، 15 (D12 Ctrl)، 12 (D12 Ctrl)، 12 (D12 Ctrl)، 12 (D12 / D12) ٽيسٽ مختلف طريقن سان انجام ڏنو ويو آهي. ##p <0.0001 D0 جي مقابلي ۾ ۽ **p <0.01 جي مقابلي ۾ D12 Ctrl). هڪ بار گراف ڏيکاري ٿو MTT وابستگي جي تازي دل جي سلائسن (D0) يا دل جي سلائس ڪلچر جي 12 ڏينهن لاءِ يا ته جامد ڪلچر ۾ (D12 Ctrl) يا CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0) ۾ (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 Ctrl)، 12 (D12) مختلف طريقن سان پرفارم ڪيو ويو آهي. ###p <0.0001 D0 جي مقابلي ۾ ۽ **p <0.01 جي مقابلي ۾ D12 Ctrl).هسٽوگرام ڏيکاري ٿو MTT تازي دل جي حصن (D0) يا دل جي حصن جي ڪلچر جي 12 ڏينهن تائين جامد ڪلچر (D12 ڪنٽرول) يا CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0) (n = 18 (D0)، 15 (D12 ڪنٽرول).####p <0,0001 по сравнению с D0 ۽ **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 D0 جي مقابلي ۾ ۽ **p <0.01 جي مقابلي ۾ D12 Ctrl). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切片或切片12 ايم ٽي ٽي ايل 相比، **p <0.01). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心的 中新鲜心脏切片12 MC) 切片/组، 进行单向ANOVA 测试；与D0 相比,####p <0.0001,与D12 Ctrl 相比,**p.)هسٽوگرام تازو دل جي سيڪشن (D0) ۾ MTT جي قابليت جي مقدار کي ڏيکاريندي يا دل جي حصن ۾ 12 ڏينهن تائين جامد ڪلچر (D12 ڪنٽرول) يا CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0)، 15 (D12 ڪنٽرول))، 12 (D12 MC) سيڪشن/گروپ مختلف قسم جي ٽيسٽ، اي اين او-اي-گروپ کان مختلف####p <0,0001 по сравнению с D0، **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 D0 جي مقابلي ۾، **p <0.01 جي مقابلي ۾ D12 Ctrl).b Troponin-T (سائي)، connexin 43 (ڳاڙهو) ۽ DAPI (نيرو) تازو الڳ ٿيل دل جي حصن ۾ (D0) يا دل جا حصا جامد حالتن (Ctrl) يا CTCM حالتن (MC) تحت 12 ڏينهن تائين) نمائندن جي امونو فلوروسينس تصويرون (خالي پيماني = 100 µm). دل جي بافتن جي ساخت جي سالميت (n = 7 (D0)، 7 (D12 Ctrl)، 5 (D12 MC) سلائسس/گروپ هر هڪ مختلف سور مان مصنوعي ذهانت جي مقدار، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ ڪئي وئي آهي؛ ####p <0.0001 D0 ۽ D0r ***0p جي مقابلي ۾ <0.0001 <0. دل جي بافتن جي ساخت جي سالميت (n = 7 (D0)، 7 (D12 Ctrl)، 5 (D12 MC) سلائسس/گروپ هر هڪ مختلف سورن مان مصنوعي ذهانت جي مقدار، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ ڪئي وئي آهي؛ ####p <0.0001 D0 ۽ D0r ***0p جي مقابلي ۾ <0.0001 <0. ڪوليچسٽ ويننايا اوزانڪا اسٽرڪچرن جي سيٽلائيٽ ٽيڪني искусственным интеллектом (n = 7 (D0)، 7 (D12 Ctrl)، 5 / 12 ايم سي آر ڊي х свиней, проводится однофакторный тест انووا؛ ####p < 0,0001 по сравнению с D0 и ****p < 0,0001 по сравнению сrl12). مصنوعي ذهانت (n = 7 (D0)، 7 (D12 Ctrl)، 5 (D12 MC) سيڪشن/گروپ مختلف سورن جي ذريعي، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ ڪئي وئي؛ ####p <0.0001 بمقابله D0t001***** D0t01 سان D0.0001 جي مقابلي ۾.人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0)، 7 (D12 Ctrl)، 5 (D12 MC) سلائسون/گروپ هر هڪ مختلف سور، هڪ طرفو ANOVA ٽيسٽ比,****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）.人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0)، 7 (D12 Ctrl)، 5 (D12 MC) سلائسون/گروپ هر هڪ مختلف سور، هڪ طرفو ANOVA.0###0p0 <##丛D0.比,****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）. искусственный интеллект для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (n = 7 (D0)، 7 (D12 Ctrl/D05)، й из разных свиней, односторонний тест ANOVA؛ ####p <0,0001 vs. D0 Для сравнения ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). آرٽيفيشل انٽيليجنس ڪارڊيڪ ٽشوز (n = 7 (D0)، 7 (D12 Ctrl)، 5 (D12 MC) سيڪشن/گروپ هر هڪ مختلف سور، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ؛ ####p<0.0001 بمقابله .D0 .D0 جي مقابلي لاءِ. c نمائندي تصويرون (کاٻي) ۽ مقدار (ساڄي) دل جي سلائسن لاءِ جيڪي ميسن جي ٽرائڪروم داغ سان داغدار آهن (اسڪيل بيئر = 500 µm) (n = 10 سلائسون/گروپ هر هڪ مختلف سور مان، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ ڪئي وئي آهي؛ ####p <1. ***1 <0 جي مقابلي ۾ ڊي 0 ۽ ڊي 0 جي مقابلي ۾ ####p <0. rl). c نمائندي تصويرون (کاٻي) ۽ مقدار (ساڄي) دل جي سلائسن لاءِ جيڪي ميسن جي ٽرائڪروم داغ سان داغدار آهن (اسڪيل بيئر = 500 µm) (n = 10 سلائسس/گروپ هر هڪ مختلف سورن مان، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ ڪئي وئي آهي؛ #### p. 0 <1 <1 <0 d ***1 جي مقابلي ۾ C *** 1 <0. rl). c Репрезентативные изображения (слева) и количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашенных трихромным красибатеных трихромным тия = 500 мкм) (n = 10 срезов/группу от разных свиней, выполняется односторонний тест ANOVA؛ #### p < 0,0001 D0001 пои, *** D12 Ctrl سان لاڳاپيل). c نمائندي تصويرون (کاٻي) ۽ مقدار (ساڄي) دل جي حصن جي داغ سان ميسن جي ٽرڪوم داغ سان داغ (اڻ ڪوئٽ ٿيل اسڪيل = 500 µm) (n = 10 سيڪشن/گروپ مختلف سورن مان، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ ڪئي وئي؛ #### p < 0 .0001 جي مقابلي ۾ ڊي ڊي 0.0001 جي مقابلي ۾ C ***1. c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右））（裸尺度=0¼n0m0片/组، 每组来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p <0.0001 与D0 相比,***p <0.001 丛1 Ct. سي 用 ماسسن 三 色 染料 的 心脏 切片 的代表性 （左 左） 量化 右） 度度度度带裸尺度裸帰500 µm） （n = 10 个 切片 组 每 组 来自 不同 猪، 进行 单向 单向 单向 单向 انووا 测试） ***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）. c Репрезентативные изображения (слева) и количественный анализ срезов сердца км) (n = 10 срезов/группа, каждый от другой свиньи, протестировано с помощью однофакторного дисперсионного дисперсионного дисперсионного , #10p0 нию с D0، *** p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c نمائندي تصويرون (کاٻي) ۽ مقدار (ساڄي) دل جي حصن جي داغ سان ميسن جي ٽريڪروم داغ (خالي = 500 µm) (n = 10 سيڪشن/گروپ، هر هڪ مختلف سور مان، ويرينس جي هڪ طرفي تجزيي ذريعي آزمائي ڪئي وئي؛ ### # p. 0 <1. *** 1 <1 جي مقابلي ۾ ڊي 0. *** 1 <0. rl).نقص بار جي نمائندگي ڪن ٿا مطلب ± معياري انحراف.
اسان اهو سمجهيو ته ثقافت وچولي ۾ ننڍڙن انوولز کي شامل ڪندي، ڪارڊيومائوسائيٽ جي سالميت بهتر ٿي سگهي ٿي ۽ CTCM ڪلچر دوران فيبروسس جي ترقي گهٽجي ٿي.تنهن ڪري اسان ننڍين ماليڪيولز لاءِ اسڪريننگ ڪئي اسان جي جامد ڪنٽرول ڪلچرز 20,21 استعمال ڪندي الجھائيندڙ عنصرن جي ننڍڙي تعداد جي ڪري.Dexamethasone (Dex)، triiodothyronine (T3)، ۽ SB431542 (SB) ھن اسڪرين لاءِ چونڊيو ويو.اهي ننڍڙا ماليڪيول اڳ ۾ hiPSC-CM ثقافتن ۾ استعمال ڪيا ويا آهن ته جيئن sarcomere ڊگھائي، T-tubeles، ۽ conduction velocity وڌائيندي cardiomyocytes جي maturation کي وڌايو وڃي.ان کان علاوه، ٻئي ڊيڪس (هڪ گلوڪوڪوٽيڪائڊ) ۽ ايس بي 29,30 سوزش کي دٻائڻ لاء سڃاتل آهن.تنهن ڪري، اسان جاچ ڪئي ته ڇا انهن ننڍڙن ماليڪيولن جو هڪ يا هڪ ميلاپ دل جي حصن جي ساخت جي سالميت کي بهتر بڻائي سگهندو.ابتدائي اسڪريننگ لاء، هر مرڪب جو دوز چونڊيو ويو ته عام طور تي سيل ڪلچر ماڊلز ۾ استعمال ٿيل ڪنسنٽريشن جي بنياد تي (1 μM Dex27، 100 nM T327، ۽ 2.5 μM SB31).ڪلچر جي 12 ڏينهن کان پوء، T3 ۽ ڊيڪس جي ميلاپ جي نتيجي ۾ بهترين ڪارڊيومائوسائيٽ ساخت جي سالميت ۽ گهٽ ۾ گهٽ فائبرس ريموڊلنگ (ضمني انگ اکر 4 ۽ 5).ان کان علاوه، T3 ۽ Dex جي انهن ڪنسنٽريشن کي ٻيڻو يا ٻيڻو استعمال ڪرڻ سان عام ڪنسنٽريشن جي مقابلي ۾ نقصانڪار اثر پيدا ٿيا (ضمني تصوير 6a،b).
شروعاتي اسڪريننگ کان پوءِ، اسان 4 ڪلچر جي حالتن جو سر کان سر مقابلو ڪيو (شڪل 4a): Ctrl: دل جا حصا اسان جي اڳئين بيان ڪيل جامد ڪلچر ۾ ڪلچر ڪيا ويا اسان جي بهتر وچولي استعمال ڪندي؛20.21 TD: T3 ۽ Ctrl شامل ٿيل ڊيڪس اربع تي؛MC: دل جا حصا CTCM ۾ ڪلچر ڪيا ويا اسان جي اڳئين بهتر ڪيل وچولي استعمال ڪندي؛۽ MT: CTCM سان T3 ۽ ڊيڪس وچولي ۾ شامل ڪيو ويو.12 ڏينهن جي پوکيءَ کان پوءِ، MS ۽ MT ٽشوز جي قابليت ساڳي ئي رهي، جيئن تازي ٽشوز ۾ MTT assay (تصوير 4b) ذريعي اندازو لڳايو ويو آهي.دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، T3 ۽ ڊيڪس کي ٽرانس ويل ڪلچرز (TD) ۾ شامل ڪرڻ جو نتيجو Ctrl جي حالتن جي مقابلي ۾ قابل عمل ۾ اهم سڌارو نه آيو، دل جي حصن جي استحڪام کي برقرار رکڻ ۾ ميڪيڪل محرک جو اهم ڪردار ظاهر ڪري ٿو.
هڪ تجرباتي ڊيزائن ڊراگرام جنهن ۾ چار ڪلچر جي حالتن کي ظاهر ڪيو ويو آهي جنهن ۾ استعمال ٿيندڙ ميڪانياتي محرڪ ۽ T3/Dex سپليمينٽيشن جي اثرن جو جائزو وٺڻ لاءِ وچولي تي 12 ڏينهن تائين. b بار گراف ڏيکاري ٿو 12 ڏينهن پوسٽ ڪلچر ۾ 4 ڪلچر جي حالتن (Ctrl، TD، MC، ۽ MT) جي مقابلي ۾ تازي دل جي سلائسن جي مقابلي ۾ (D0) (n = 18 (D0)، 15 (D12 Ctrl، D12 TD ۽ D12 MT)، 12 (D12 TD ۽ D12 MT)، 12 (D12 pigs، مختلف A-MCVA کان مختلف ٽيسٽ آهي. ##p <0.0001، ###p <0.001 D0 جي مقابلي ۾ ۽ **p <0.01 جي مقابلي ۾ D12 Ctrl). b بار گراف ڏيکاري ٿو 12 ڏينهن پوسٽ ڪلچر ۾ 4 ڪلچر جي حالتن (Ctrl، TD، MC، ۽ MT) جي مقابلي ۾ تازي دل جي سلائسن جي مقابلي ۾ (D0) (n = 18 (D0)، 15 (D12 Ctrl، D12 TD ۽ D12 MT)، 12 (D12 TD ۽ D12 MT)، 12 (D12 pigs، مختلف A-MCVA کان مختلف ٽيسٽ آهي. ##p <0.0001، ###p <0.001 جي مقابلي ۾ D0 ۽ **p <0.01 جي مقابلي ۾ D12 ctrl). b Гистограмма показывает количественную оценку жизнеспособности через 12 дней после культивирования TD. й, проводится односторонний тест انووا؛ ####p <0,0001, ###p <0,001 по сравнению с D0 и **p <0,01 по сравнению сrl1). b بار گراف ڏيکاري ٿو 12 ڏينهن پوسٽ ڪلچر تي 4 ڪلچر جي حالتن ۾ (ڪنٽرول، TD، MC، ۽ MT) تازن دل جي حصن (D0) (n = 18 (D0)، 15 (D12 Ctrl، D12 TD، ۽ D12 MT)، 12 (D12 Ctrl، D12 TD، ۽ D12 MT)، 12 (D12 MT) 0.0001، ###p <0.001 بمقابله D0 ۽ **p <0.01 جي مقابلي ۾ D12 Ctrl). b 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片、D0) (n = 18 (D0)18 (D0)和D12 MT)، 来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；####p <0.0001,###p <0.0D12 <0.0D0** 2 控制).b 4 12 (D12 MC) b Гистограма, показывающая все 4 условия культивирования (ڪونٽرول، TD، MC и MT) по сравнению (со свежими со свежими со свежими (срезами) 2 Ctrl، D12 TD ۽ D12 MT)، от разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односторонний тест ANOVA؛ ####p <0,0001, ###p <0,0001, ###p <0,0,00,00** по сравнению с CONTROLEM D12). b هسٽوگرام ڏيکاريندي سڀ 4 ڪلچر جون حالتون (ڪنٽرول، TD، MC ۽ MT) جي مقابلي ۾ تازي دل جي سيڪشن (D0) (n = 18 (D0) جي مقابلي ۾، 15 (D12 Ctrl، D12 TD ۽ D12 MT)، مختلف سورن مان 12 (D12 MC) سيڪشن/گروپ، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ؛ #0#0p<#0p<##0p<#0p.<##0p. 0، **p <0.01 بمقابلہ ڪنٽرول D12). c بار گراف ڏيکاري ٿو گلوڪوز فلوڪس جي مقدار 12 ڏينهن پوسٽ ڪلچر ۾ سڀني 4 ڪلچر جي حالتن (Ctrl، TD، MC، ۽ MT) جي مقابلي ۾ تازي دل جي سلائسن جي مقابلي ۾ (D0) (n = 6 سلائسس/گروپ مختلف سورن مان، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ ڪئي وئي آهي؛ ###p <0.001 جي مقابلي ۾ C ***1 <0.00 ۽ D0001 ***1. ). c بار گراف ڏيکاري ٿو گلوڪوز فلوڪس جي مقدار 12 ڏينهن پوسٽ ڪلچر ۾ سڀني 4 ڪلچر جي حالتن (Ctrl، TD، MC، ۽ MT) جي مقابلي ۾ تازي دل جي سلائسن جي مقابلي ۾ (D0) (n = 6 سلائسس/گروپ مختلف سورن مان، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ ڪئي وئي آهي؛ ###p <0.001 جي مقابلي ۾ C ***1 <0.00 ۽ D0001 ***1. ). c Гистограмма показывает количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивирования во всех 4 усех, усех 4 усенку MC и MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группу от разных свиней, односторонний свиней, односторонний со свежими срезами сердца (D0) по сравнению с D0 ۽ ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c هسٽوگرام ڏيکاري ٿو گلوڪوز فلوڪس جي مقدار 12 ڏينهن پوسٽ ڪلچر تحت 4 ڪلچر جي حالتن (ڪنٽرول، TD، MC ۽ MT) جي مقابلي ۾ تازو دل جي سيڪشن (D0) جي مقابلي ۾ (n = 6 سيڪشن/گروپ مختلف سورن مان، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ ڪئي وئي؛ ###p <0.001 D0 ۽ D0r جي مقابلي ۾ C ***1 <0.001 جي مقابلي ۾ D0). سي 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片 (D0) 相比养切 2）通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试；###p <0.001, 与D0 相比 <0.001، 与D0 相比 0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.0.* ). سي 条形图 显示 所有 4 种 条件 （（ctrl 、 td 、 mc 和 mt） 新鲜 心脏 切片切片心脏切片切片12. 0 相比، ***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）. c Гистограмма, показывающая количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивирования для всественную, для всественную TD. 0,001 по сравнению с D0، ***p < 0,001 по сравнению с D12 (controll). c هسٽوگرام ڏيکاريندي گلوڪوز جي وهڪري جي مقدار کي 12 ڏينهن پوسٽ ڪلچر لاءِ 4 ڪلچر جي حالتن (ڪنٽرول، TD، MC، ۽ MT) جي مقابلي ۾ تازو دل جي سيڪشن (D0) جي مقابلي ۾ (n = 6 سيڪشن/گروپ، مختلف سورن مان، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ ڪيا ويا، ###p <0.0. ***1 جي مقابلي ۾ D00، ***1 p <0.0. ***1).d تازي (نيرو)، ڏينهن 12 MC (سائي) ۽ ڏينهن 12 MT (لال) ٽشوز جا اسٽريٽ تجزياتي پلاٽ ڏهه علائقائي ٽشو سيڪشن پوائنٽس تي (n = 4 سلائسس/گروپ، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ؛ گروپن جي وچ ۾ ڪو خاص فرق نه هو).e Volcano پلاٽ، دل جي سيڪشنز جي مقابلي ۾ تازو دل جي حصن (D0) ۾ مختلف طور تي ظاهر ڪيل جين کي ڏيکاري ٿو جامد حالتن (Ctrl) يا MT حالتن (MT) تحت 10-12 ڏينهن لاءِ.f sarcomere جين جو هيٽ ميپ دل جي حصن لاءِ هر هڪ ڪلچر جي حالتن هيٺ ڪلچر ڪيو ويو آهي.نقص بار جي نمائندگي ڪن ٿا مطلب ± معياري انحراف.
ميٽابولڪ انحصار فيٽي ايسڊ آڪسائيڊشن کان گلائڪوليسس تائين سوئچ تي ڪارڊيومائوسائيٽ جي فرق جي نشاني آهي.ناپائيدار ڪارڊيومائوسائيٽس بنيادي طور تي ATP جي پيداوار لاءِ گلوڪوز استعمال ڪن ٿا ۽ ڪجھ ڪرسٽا 5,32 سان گڏ هائيپوپلاسٽڪ مائيٽوڪونڊريا آهن.گلوڪوز جي استعمال جي تجزين مان ظاهر ٿئي ٿو ته MC ۽ MT جي حالتن ۾، گلوڪوز جو استعمال ساڳيو ئي هو جيئن ڏينهن 0 ٽشوز ۾ (شڪل 4c).بهرحال، Ctrl نموني ڏيکاريا هڪ اهم اضافو گلوڪوز استعمال ۾ تازو ٽشو جي مقابلي ۾.اهو ظاهر ڪري ٿو ته CTCM ۽ T3/Dex جو ميلاپ ٽشو جي قابليت کي وڌائي ٿو ۽ 12-ڏينهن ڪلچرل دل جي حصن جي ميٽابولڪ فينوٽائپ کي محفوظ ڪري ٿو.ان کان علاوه، دٻاء جي تجزيي ڏيکاري ٿي ته 12 ڏينهن تائين MT ۽ MS جي حالتن (تصوير 4d) جي تحت 12 ڏينهن تائين تازي دل جي ٽشو ۾ دٻاء جي سطح ساڳي رهي.
CTCM ۽ T3/Dex جي مجموعي اثر جو تجزيو ڪرڻ لاءِ ڪارڊيڪ سلائس ٽائيسو جي عالمي ٽرانسپشن واري منظرنامي تي، اسان RNAseq کي چار مختلف ڪلچر جي حالتن (ضمني ڊيٽا 1) کان دل جي سلائسن تي ڪيو.دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، ايم ٽي سيڪشنز تازي دل جي بافتن سان اعلي نقلي هڪجهڙائي ڏيکاري ٿي، 13,642 جين مان صرف 16 مختلف طور تي ظاهر ڪيا ويا آهن.بهرحال، جيئن اسان اڳ ۾ ڏيکاريو، Ctrl سلائسون ڏيکاريا ويا 1229 مختلف طور تي ظاهر ڪيل جينز ڪلچر ۾ 10-12 ڏينهن کان پوءِ (تصوير 4e).انهن ڊيٽا جي تصديق ڪئي وئي qRT-PCR دل ۽ فائبروبلاسٽ جينز (ضمني تصوير 7a-c).دلچسپ ڳالهه اها آهي ته، Ctrl سيڪشن ڏيکاريا ويا ضابطي جي دل ۽ سيل چڪر جينز ۽ سوزش جين پروگرامن جي چالو ڪرڻ.انهن انگن اکرن مان معلوم ٿئي ٿو ته فرق، جيڪو عام طور تي ڊگهي مدت جي ڪلچرنگ کان پوء ٿئي ٿو، مڪمل طور تي ايم ٽي جي حالتن ۾ گهٽجي ويندو آهي (ضمني تصوير 8a،b).sarcomere جين جي محتاط مطالعي مان معلوم ٿئي ٿو ته صرف MT حالتن ۾ جينز سرڪومير (Fig. 4f) ۽ آئن چينل (Supplementary Fig. 9) کي انڪوڊنگ ڪن ٿا، انهن کي Ctrl، TD، ۽ MC حالتن هيٺ دٻائڻ کان بچائي ٿو.اهي ڊيٽا ظاهر ڪن ٿا ته ميخانياتي ۽ مزاحيه محرک (T3/Dex) جي ميلاپ سان، دل جو ٽڪرو ٽرانسڪروم ڪلچر ۾ 12 ڏينهن کان پوءِ دل جي تازي سلائسن وانگر رهي سگهي ٿو.
اهي ٽرانسڪرپشن جي نتيجن جي حمايت ڪئي وئي آهي ته دل جي حصن ۾ ڪارڊيومائوسائٽس جي ساخت جي سالميت 12 ڏينهن تائين MT حالتن ۾ بهترين طور تي محفوظ آهي، جيئن برقرار ۽ مقامي ڪنيڪسين 43 (Fig. 5a) پاران ڏيکاريل آهي.ان کان علاوه، دل جي حصن ۾ فبروسس MT حالتن جي تحت خاص طور تي Ctrl جي مقابلي ۾ گھٽجي ويو ۽ تازو دل جي حصن وانگر (Fig. 5b).اهي ڊيٽا ظاهر ڪن ٿا ته ميخانياتي محرک ۽ T3/Dex علاج جو ميلاپ مؤثر طريقي سان دل جي حصن ۾ دل جي جوڙجڪ کي ثقافت ۾ محفوظ ڪري ٿو.
ٽروپونين-ٽي (سائي)، ڪنڪسين 43 (لال) ۽ ڊي پي آءِ (نيرو) جون هڪ نمائندي امونوفلوورسينس تصويرون، تازو الڳ ٿيل دل جي حصن ۾ (D0) يا 12 ڏينهن لاءِ ڪلچر ٿيل دل جي چئن سيڪشن ڪلچر جي حالتن ۾ (اسڪيل بار = 100 µm).). دل جي بافتن جي ساخت جي سالميت جي مصنوعي ذهانت جي مقدار (n = 7 (D0 ۽ D12 Ctrl)، 5 (D12 TD، D12 MC ۽ D12 MT) سلائسون/گروپ مختلف سورن مان، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ ڪئي وئي آهي؛ ####p <0.000 ۽ ***1 <*p <*0.000 ۽ <*0.5 جي مقابلي ۾. 01 D12 Ctrl جي مقابلي ۾). دل جي بافتن جي ساخت جي سالميت جي مصنوعي ذهانت جي مقدار (n = 7 (D0 ۽ D12 Ctrl)، 5 (D12 TD، D12 MC ۽ D12 MT) سلائسون/گروپ مختلف سورن مان، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ ڪئي وئي آهي؛ #### p <0.000 ۽ ***1 <*p <0.000 ۽ <*0.5 جي مقابلي ۾. 01 D12 Ctrl جي مقابلي ۾). ڪوليچسٽ ويننايا اوزانڪا اسٽريڪٽ ٽيڪني سيرڊزا کان پوءِ انٽليڪٽا (اين = 7 (D0 ۽ D12) DMCTD12 (DMC12)، ڊي ايم سي ٽي ڊي 12 резов/группу от разных свиней, проведен однофакторный тест انووا؛ #### p < 0,0001 по сравнению с D0 и *p <0,05 D0*p <0,05 D*001 2 Ctrl). مصنوعي ذهانت (n = 7 (D0 ۽ D12 Ctrl)، 5 (D12 TD، D12 MC ۽ D12 MT) سيڪشن/گروپ استعمال ڪندي دل جي بافتن جي ڍانچي جي سالميت جي مقدار مختلف سورن مان، هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ ڪئي وئي؛ #### p <0.0001.***p <0.00015 جي مقابلي ۾. D12 Ctrl جي مقابلي ۾).对不同猪的心脏组织结构完整性（n = 7（D0 和D12 Ctrl）、5（D12 TD、D12 MC工智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 和*p <0.05 相比, 或****p <0.0001 سي ڊي ايل 2对 不同 猪 的 心脏 结构 完整性 （n = 7 （d0 和 d12 ctrl） ） （5 （d12 td 、 d12 mc 12 mc智能量 化 进行 单向 单向 单向 测试 ； ######### p < 0.0001 与D0 和*p <0.05 相毕相比).هڪ طرفي ANOVA ٽيسٽ سان مختلف سورن (n = 7 (D0 ۽ D12 Ctrl)، 5 (D12 TD، D12 MC ۽ D12 MT) سيڪشن/گروپ) ۾ مصنوعي ذهانت استعمال ڪندي دل جي بافتن جي ساخت جي سالميت جي مقدار؛#### p <0,0001 по сравнению с D0 ۽ *p <0,05 يا ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). #### p <0.0001 D0 جي مقابلي ۾ ۽ *p <0.05 يا ****p <0.0001 D12 Ctrl جي مقابلي ۾). b نمائندي تصويرون ۽ دل جي سلائسن لاءِ مقدار جو داغ ميسن جي ٽرڪروم داغ سان لڳل آهي (اسڪيل بار = 500 µm) (n = 10 (D0، D12 Ctrl، D12 TD، ۽ D12 MC)، 9 (D12 MT) سلائسون مختلف آهن Apgs/group. 0001 جي مقابلي ۾ D0 ۽ ***p <0.001، يا ****p <0.0001 جي مقابلي ۾ D12 Ctrl). b نمائندي تصويرون ۽ دل جي سلائسن لاءِ مقدار جو داغ ميسن جي ٽرڪروم داغ سان لڳل آهي (اسڪيل بار = 500 µm) (n = 10 (D0، D12 Ctrl، D12 TD، ۽ D12 MC)، 9 (D12 MT) سلائسون مختلف آهن Apgs/group. 0001 جي مقابلي ۾ D0 ۽ ***p <0.001، يا ****p <0.0001 جي مقابلي ۾ D12 Ctrl). ب ريپريزينٽيٽيوني ايزوبراجينيا ۽ ڪوليچسٽ ويننايا اوزينڪا sрезов сердца, окрашенных трихромным красителем = 00مڪابن (ماسڪانا) #10 D0 ۽ ***p <0,001 يا ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b نمائندي تصويرون ۽ دل جي حصن جي مقدار جو داغ ميسن جي ٽرڪوم داغ سان (اسڪيل بار = 500 µm) (n = 10 (D0، D12 Ctrl، D12 TD ۽ D12 MC)، 9 (D12 MT) سيڪشن/گروپ مختلف سورن مان. 0 ۽ ***p <0.001 يا ****p <0.0001 بمقابلہ D12 Ctrl). b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺= 500 µm）（n = 10D10Dlt2和D12 MC），来自不同猪的9个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分曠素方差分析；####p <0.00*1 <0.00**或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）. b 用 masson 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 和 量化 （比例 尺 尺 尺 尺 尺 尺 = 500 µm） 1d0d 、d12 td 和 d12 mc） 来自不同 的 9个 d12 mt 切片 切片 切片 切片 切片 切片切片ههههههههههههههههههههههههههههههههههههههههههههههه 001،或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）. b REPREZENTATIVNYE изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромом Массона =01Dn (502) Ctrl, D12 TD ۽ D12 MC), 9 (D12 MT) срезов от разных свиней / группы, один-способ ANOVA؛ ####p <0,0001 по <сравиней, ***p <0,0001 по <сравиней, ***p <0,0001 0001 по сравнению с D12 Ctrl). b نمائندي تصويرون ۽ دل جي حصن جي مقدار جو داغ ميسن جي ٽراڪوم (اسڪيل بار = 500 µm) (n = 10 (D0، D12 Ctrl، D12 TD ۽ D12 MC)، 9 (D12 MT) سيڪشن مختلف سورن/گروپ مان سيڪشن؛ <##0p0 <p0 <##0؛ ***1 ###0؛ <###0 <p0 <p0، <##0 ##0 #################### .001 يا ****p <0.0001 جي مقابلي ۾ D12 Ctrl).نقص بار جي نمائندگي ڪن ٿا مطلب ± معياري انحراف.
آخرڪار، CTCM جي صلاحيت دل جي هائيپر ٽرافي کي نقل ڪرڻ جي قابليت جو اندازو لڳايو ويو دل جي ٽائيسو وڌائڻ سان.CTCM ۾، چوٽي ايئر چيمبر جو دٻاء وڌايو ويو 80 mmHg کان 80 mmHg تائين.فن.(عام اسٽريچ) تائين 140 mmHg آرٽ.(تصوير 6a).اهو اسٽريچ ۾ 32 سيڪڙو واڌ سان واسطو رکي ٿو (تصوير 6b)، جنهن کي اڳ ۾ ڏيکاريو ويو هو ته دل جي حصن لاءِ گهربل فيصد اسٽريچ کي هڪ سرڪومير ڊگھائي حاصل ڪرڻ لاءِ جيئن هائپر ٽرافي ۾ ڏٺو ويو آهي.ڇڪڻ ۽ آرام دوران دل جي بافتن جي اسٽريچ ۽ رفتار ڪلچر جي ڇهن ڏينهن دوران مسلسل رهي (تصوير 6c).MT جي حالتن مان دل جي بافتن کي ڇهن ڏينهن تائين عام اسٽريچ (ايم ٽي (نارمل)) يا اوور اسٽريچ حالتن (ايم ٽي (او ايس)) جي تابع ڪيو ويو.اڳ ۾ ئي ڪلچر ۾ چار ڏينهن کان پوء، هائپر ٽروفڪ بائيو مارڪر NT-ProBNP MT (او ايس) حالتن جي وچ ۾ MT (عام) حالتن جي مقابلي ۾ وچولي ۾ بلند ٿي ويو (Fig. 7a).ان کان سواء، ڇهن ڏينهن جي ڪلچر کان پوء، MT (OS) (Fig. 7b) ۾ سيل جي سائيز MT دل جي حصن جي مقابلي ۾ خاص طور تي وڌي وئي (عام).ان کان علاوه، NFATC4 ايٽمي ٽرانسلوڪيشن وڏي پيماني تي وڌيل بافتن ۾ وڌي وئي (Fig. 7c).اهي نتيجا هائپرڊسٽنشن کان پوءِ پيٽولوجيڪل ريموڊنگنگ جي ترقي پسند ترقي کي ظاهر ڪن ٿا ۽ انهي تصور جي حمايت ڪن ٿا ته CTCM ڊوائيس هڪ پليٽ فارم جي طور تي استعمال ڪري سگهجي ٿو اسٽريچ-حوصلہ افزائي ڪارڊ هائپر ٽرافي سگنلنگ جي مطالعي لاءِ.
ايئر چيمبر پريشر، فلوئڊ چيمبر پريشر، ۽ ٽشو حرڪت جي ماپ جا نمائندا نشان تصديق ڪن ٿا ته چيمبر جو پريشر فلوئڊ چيمبر پريشر کي تبديل ڪري ٿو، جنهن ڪري ٽشو سلائس جي هڪ جهڙي حرڪت ڪري ٿي.b عام طور تي وڌيل (نارنگي) ۽ اوور اسٽريچ ٿيل (نيرو) ٽشو سيڪشن لاءِ نمايان اسٽريچ فيصد ۽ اسٽريچ ريٽ وکر.c بار گراف ڏيکاريندڙ چڪر جو وقت (n = 19 سلائس في گروپ، مختلف سورن مان)، ڇڪڻ جو وقت (n = 18-19 سلائسس في گروپ، مختلف سورن مان)، آرام جو وقت (n = 19 سلائس في گروپ، مختلف سورن مان)، ٽشو جي حرڪت جو طول و عرض (n = 14 سلائسس، مختلف سورن مان، sylicity = 14 slices)، مختلف سورن مان. es/group, from different pigs) ۽ چوٽي جي آرام جي شرح (n = 14 (D0)، 15 (D6) ) سيڪشن/گروپ) مختلف سورن مان)، ٻه-ٽيل شاگردن جي ٽي-ٽيسٽ ڪنهن به پيٽرول ۾ ڪو خاص فرق نه ڏيکاريو آهي، اهو ظاهر ڪري ٿو ته اهي پيرا ميٽرز ڪلچر جي 6 ڏينهن دوران اوور وولٽيج سان مسلسل رهيا.نقص بار جي نمائندگي ڪن ٿا مطلب ± معياري انحراف.
MT نارمل اسٽريچ (نارم) يا اوور اسٽريچنگ (OS) حالتن هيٺ ڪلچر ٿيل دل سلائسن مان ڪلچر ميڊيا ۾ NT-ProBNP ڪنسنٽريشن جو بار گراف مقدار (n = 4 (D2 MTNorm)، 3 (D2 MTOS، D4 MTNorm، ۽ D4 MTOS) سلائسن کان مختلف آهي. عام حد تائين). MT نارمل اسٽريچ (نارم) يا اوور اسٽريچنگ (OS) حالتن هيٺ ڪلچر ٿيل دل جي سلائسن مان ڪلچر ميڊيا ۾ NT-ProBNP ڪنسنٽريشن جي بار گراف جي مقدار (n = 4 (D2 MTNorm)، 3 (D2 MTOS، D4 MTNorm، ۽ D4 MTOS) سلائسن کان مختلف آهن. عام اسٽريچ جي مقابلي ۾).ڪلچر وچ ۾ NT-ProBNP ڪنسنٽريشن جو مقداري هسٽوگرام دل جي سلائسن مان ڪلچر ڪيو ويو عام MT اسٽريچ (نارم) يا اوور اسٽريچ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm) جي حالتن هيٺ، 3 (D2 MTOS، D4 MTNorm، ۽ D4). MTOS) سلائسن مان ٻه مختلف قسم جي پرفارمنس / گروپن کان مختلف آهن.**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p <0.01 جي مقابلي ۾ عام اسٽريچ). a 在 MT 正常拉伸 (Norm) 或过度拉伸 (OS) 条件下培养的心脏切片培养基中NT-ProBNP 浓度離 4 MTNorm) 、3（D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS）来自不同猪的切片/组，进行双向方差分析＋減中0p0. ). دل جي سلائسن ۾ NT-ProBNP ڪنسنٽريشن جو مقدار MT نارمل اسٽريچ (نارم) يا اوور اسٽريچ (OS) حالتن هيٺ ڪلچر ڪيو ويو آهي (n = 4 (D2 MTNorm)، 3 (D2 MTOS، D4 MTNorm 和D4 MTOS) مختلف 猪的切片湄湄切片猪的切片片发发动؛ **عام اسٽريچنگ جي مقابلي ۾، p <0.01).هسٽوگرام دل جي سلائسن ۾ NT-ProBNP ڪنسنٽريشن جي مقدار کي عام MT اسٽريچ (نارم) يا اوور اسٽريچ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm)، 3 (D2 MTOS، D4 MTNorm) ۽ D4 MTOS) سلائسون/گروپ/گروپ جي مختلف سورن کان مختلف قسم جي سورن جي ٻن طريقن سان؛**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p <0.01 جي مقابلي ۾ عام اسٽريچ). b دل جي سلائسن لاءِ نمائندي تصويرون جيڪي ٽروپونين-T ۽ WGA (بائیں) سان داغدار آهن ۽ سيل جي سائيز جي مقدار (ساڄي) (n = 330 (D6 MTOS)، 369 (D6 MTNorm) سيلز/گروپ مختلف سورن مان 10 مختلف سلائسن مان، ٻه-ٽيڊ اسٽوڊنٽ پرفارمنس t-t-0 کان وڌيڪ. b دل جي سلائسن لاءِ نمائندن جون تصويرون troponin-T ۽ WGA (بائیں) ۽ سيل جي سائيز جي مقدار (ساڄي) (n = 330 (D6 MTOS)، 369 (D6 MTNorm) سيلز/گروپ مختلف سورن مان 10 مختلف سلائسن مان، ٻه- دم ٿيل شاگرد جي مقابلي ۾. b REPREZENTATIVNые изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) и количественного определения MTOS), 369 (D6 MTNorm) клеток/группу из 10 разных срезов от разных свиней, два- проводится хвостовой хвостовой t-критерий*, *** ению с нормальным растяжением). b دل جي حصن جي نمائندن جون تصويرون troponin-T ۽ AZP (بائیں) ۽ سيل جي سائيز جي مقدار (ساڄي) (n = 330 (D6 MTOS)، 369 (D6 MTNorm) سيلز/گروپ 10 مختلف حصن مان مختلف سورن سان داغدار، ٻه-ٽيل شاگردن جي مقابلي ۾ ڪئي وئي. b 用肌钙蛋白-T 和WGA（左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片）（3）（DOS）（6）来自不同猪的10 个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组，两进行有尾学生t ** 01). b دل جي سلائسن جون نمايان تصويرون Calcarein-T ۽ WGA (بائیں) ۽ سيل جي سائيز (ساڄي) (n = 330 (D6 MTOS)، 369 مان 10 مختلف سلائسن مان (D6 MTNorm)) سيلز/组，两方法有甼 معمول جي ٽيسٽنگ سان. p <0.0001). b REPREZентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) и colichественная оценка размера (D30MT)، 369 (D6 MTNorm) из 10 различных срезов от разных свиней Клетки/группа, двусторонние критерий Стьюдента؛ ****p <0,0,0,000 стяжением). b دل جي حصن جا نمائندا تصويرون ٽروپونين-T ۽ AZP (بائیں) سان داغدار آهن ۽ سيل جي ماپ جي مقدار (ساڄي) (n = 330 (D6 MTOS)، 369 (D6 MTNorm) مختلف سورن مان 10 مختلف حصن مان) سيلز/گروپ، ٻه-ٽيل ٽي اسٽوڊنٽ معيار؛****p <0.0001 جي مقابلي ۾ عام دٻاءُ). c نمائندي تصويرون ڏينهن 0 ۽ ڏينهن 6 MTOS دل جي سلائسن لاءِ امونولبلبل ٽراپونين-T ۽ NFATC4 لاءِ ۽ NFATC4 جي نقلن جي مقدار کي CMs (n = 4 (D0)، 3 (D6 MTOS) سلائسز/گروپ جي نچلي ڏانهن منتقل ڪرڻ جي مقدار کي مختلف سورن مان ڪيو ويو آهي. c نمائندي تصويرون ڏينهن 0 ۽ ڏينهن 6 MTOS دل جي سلائسن لاءِ امونولبل ٿيل ٽراپونن-T ۽ NFATC4 لاءِ ۽ NFATC4 جي منتقلي جي مقدار کي CMs (n = 4 (D0)، 3 (D6 MTOS) سلائسز/گروپ/گروپ کان CMs (n = 4 (D0) slices/group. سي ريپريزنٽيٽيونٽيز изображения для срезов сердца 0 и 6 дней MTOS , иммуномеченых для тропонина-Т и NFATC4 , и несображения срезов сердца 0 ۽ 6 ڏينهن MTOS FATC4 ۾ ядра кавернозных клеток (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срезов/группу от разных свиней , выполняется двусторонных свиней ; c نمائندي تصويرون دل جي حصن لاءِ 0 ۽ 6 ڏينهن MTOS تي، ٽراپونن-T ۽ NFATC4 لاءِ امونول ليبل ٿيل، ۽ NFATC4 ٽرانسلوڪيشن جي مقدار کي غار جي خلين جي مرڪزن ۾ (n = 4 (D0)، 3 (D6 MTOS) سلائسون/گروپ ٻن مختلف سورن مان پرفارم ڪيو ويو شاگردن کان؛*p <0.05). c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4易位至CM 细胞核的量化（n = 4 (D0) 、3 (D6 MTOS) 切片/组، 进行双尾学生t 检验；*p <0.5) c نمائندو تصويرون calcanin-T ۽ NFATC4 immunolabeling 第0天和第6天MTOS دل جي سلائسن، ۽ NFATC4 کان مختلف NFATC4 易位至CM سيل نيوڪليس 的 مقدار 化 (n = 4 (D0) 化 (n = 4 (D0) 滶MT/礄礄 (D0) 化间双尾学生et 电影；*p <0.05). c Репрезентативные изображения срезов сердца MTOS на 0 и 6 день для иммуномаркировки тропонином-Т и NFATC4 и конличацов сердца MTOS ядра CM от разных свиней (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срез/группа, два- хвостатый t-критерий Стьюдента؛ *p <0,05). c نمائندن جون تصويرون MTOS دل جي سلائسن جي ڏينهن 0 ۽ 6 تي ٽرپونين-T ۽ NFATC4 امونولبلنگ لاءِ ۽ NFATC4 ٽرانسلوڪيشن جي مقدار کي سي ايم جي نيوڪليس ۾ مختلف سورن مان (n = 4 (D0)، 3 (D6 MTOS) سلائسس/گروپ، ٻه-pcriter0؛ شاگرد.نقص بار جي نمائندگي ڪن ٿا مطلب ± معياري انحراف.
ترجمي جي دل جي تحقيق جي ضرورت آهي سيلولر ماڊل جيڪي صحيح طور تي دل جي ماحول کي ٻيهر پيدا ڪن.هن مطالعي ۾، هڪ CTCM ڊيوائس ٺاهي وئي ۽ خاصيت ڪئي وئي جيڪا دل جي الٽراٿن حصن کي متحرڪ ڪري سگهي ٿي.CTCM سسٽم ۾ شامل آهي جسماني طور تي هم وقت سازي واري برقياتي محرڪ ۽ T3 ۽ ڊيڪس فلوڊ افزودگي.جڏهن پورڪين دل جا حصا انهن عنصرن کي بي نقاب ڪيا ويا، انهن جي استحڪام، ساخت جي سالميت، ميٽابولڪ سرگرمي، ۽ ٽرانسپشن جو اظهار ساڳيو ئي رهيو جيئن 12 ڏينهن جي ڪلچر کان پوء تازو دل جي ٽشو ۾.ان کان علاوه، دل جي بافتن جي گھڻي ڇڪڻ سبب ٿي سگھي ٿو دل جي هائپر ٽرافي جو سبب بڻيل هائپر ايڪسٽينشن.مجموعي طور تي، اهي نتيجا فزيولوجيڪل ڪلچر جي حالتن جي نازڪ ڪردار کي سپورٽ ڪن ٿا عام ڪارڊ فينوٽائپ کي برقرار رکڻ ۽ دوا جي اسڪريننگ لاء پليٽ فارم مهيا ڪن ٿا.
ڪيترائي عنصر ڪارڪردگي ۽ ڪارڪردگي لاء هڪ بهترين ماحول پيدا ڪرڻ ۾ مدد ڪن ٿا cardiomyocytes جي بقا.انهن عنصرن مان سڀ کان وڌيڪ واضح طور تي لاڳاپيل آهن (1) باضابطه رابطي، (2) برقياتي محرڪ، (3) مزاحيه عنصر، ۽ (4) ميٽابولڪ ذيلي ذخيرو.جسماني سيل کان سيل جي وچ ۾ رابطي جي ضرورت آهي پيچيده ٽي-dimensional نيٽ ورڪ ڪيترن ئي سيل قسمن جي هڪ extracellular matrix جي مدد سان.اهڙا پيچيده سيلولر تعاملات انفرادي سيل جي قسمن جي گڏيل ڪلچر ذريعي ويٽرو ۾ ٻيهر تعمير ڪرڻ مشڪل آهن، پر دل جي حصن جي آرگنائيائپڪ فطرت کي استعمال ڪندي آساني سان حاصل ڪري سگهجي ٿو.
مشيني اسٽريچ ۽ ڪارڊيومائوسائٽس جي برقي محرک ڪارڊيڪ فينوٽائپ 33,34,35 کي برقرار رکڻ لاءِ اهم آهن.جڏهن ته ميخانياتي محرڪ وڏي پيماني تي استعمال ڪيو ويو آهي hiPSC-CM ڪنڊيشننگ ۽ پختگي لاءِ، ڪيترن ئي خوبصورت مطالعي ۾ تازو ئي ڪوشش ڪئي وئي آهي ته ڪلچر ۾ دل جي سلائسن جي ميڪانياتي محرڪ uniaxial لوڊشيڊنگ استعمال ڪندي.انهن مطالعي مان اهو ظاهر ٿئي ٿو ته 2D uniaxial ميڪيڪل لوڊ ڪندي ڪلچر دوران دل جي فينوٽائپ تي مثبت اثر آهي.انهن مطالعي ۾، دل جا حصا يا ته isometric tensile Forces 17، linear auxotonic loading18 سان ڀريا ويا هئا، يا دل جي چڪر کي ٻيهر ٺاهي وئي هئي قوت ٽرانسڊيڪر موٽ ۽ ٽينشن ڊرائيو استعمال ڪندي.بهرحال، اهي طريقا استعمال ڪن ٿا uniaxial tissue stretch بغير ماحولياتي اصلاح جي، نتيجي ۾ ڪيترن ئي دل جي جين کي دٻايو وڃي ٿو يا غير معمولي اسٽريچ جوابن سان جڙيل جين جي اوور ايڪسپريشن.هتي بيان ڪيل CTCM هڪ 3D اليڪٽروميڪانيڪل محرک فراهم ڪري ٿو جيڪو چڪر جي وقت ۽ جسماني اسٽريچ (25٪ اسٽريچ، 40٪ سيسٽول، 60٪ ڊيسٽول، ۽ 72 بيٽس في منٽ) جي لحاظ کان قدرتي دل جي چڪر کي نقل ڪري ٿو.جيتوڻيڪ هي ٽي-dimensional ميڪانياتي محرک اڪيلو ٽشو جي سالميت کي برقرار رکڻ لاءِ ڪافي ناهي، T3/Dex استعمال ڪندي مزاحيه ۽ ميخانياتي محرک جو هڪ ميلاپ ضروري آهي ته مناسب طور تي ٽشو جي استحڪام، ڪم ۽ سالميت کي برقرار رکڻ لاءِ.
مزاحيه عنصر بالغن جي دل جي فينوٽائپ کي تبديل ڪرڻ ۾ اهم ڪردار ادا ڪن ٿا.اهو نمايان ڪيو ويو HiPS-CM مطالعي ۾ جنهن ۾ T3 ۽ ڊيڪس شامل ڪيا ويا ڪلچر ميڊيا ۾ سيل ميٽيريشن کي تيز ڪرڻ لاءِ.T3 سيل جھلين ۾ امينو اسيد، شگر ۽ ڪلسيم جي نقل و حمل تي اثر انداز ٿي سگھي ٿو.ان کان علاوه، T3 MHC-α ايڪسپريشن ۽ MHC-β ڊائون ريگيوليشن کي فروغ ڏئي ٿو، جنين سي ايم ۾ سست ٽويچ ميوفائبرلز جي مقابلي ۾ بالغ ڪارڊيومائوسائيٽس ۾ تيز ٽوچ ميوفائبرلز جي ٺهڻ کي وڌايو.هايپوتايرائڊ مريضن ۾ T3 جي گھٽتائي جي نتيجي ۾ myofibrillar bands جي نقصان ۽ سر جي ترقي جي گھٽتائي جي شرح 37.ڊيڪس گلوڪوڪوورٽيڪائڊ ريڪٽرز تي ڪم ڪري ٿو ۽ ڏيکاريو ويو آهي ته اڪيلائي واري خوشبوءِ واري دلين ۾ ميروڪارڊيل ڪانٽريڪٽيٽي کي وڌائڻ؛38 هن سڌاري کي ڪلسيم جمع ڪرڻ واري انٽري (SOCE) 39,40 تي اثر سان لاڳاپيل سمجهيو وڃي ٿو.ان کان علاوه، ڊيڪس ان جي ريڪٽرز سان ڳنڍيل آهي، هڪ وسيع intracellular ردعمل جو سبب بنائي ٿو جيڪو مدافعتي فنڪشن ۽ سوزش کي دٻائي ٿو.
اسان جا نتيجا ظاهر ڪن ٿا ته جسماني ميخانياتي محرک (MS) Ctrl جي مقابلي ۾ مجموعي ڪلچر جي ڪارڪردگي بهتر ڪئي، پر 12 ڏينهن کان ڪلچر ۾ ڪارڪردگي، ساخت جي سالميت، ۽ دل جي اظهار کي برقرار رکڻ ۾ ناڪام ٿي.Ctrl جي مقابلي ۾، T3 ۽ ڊيڪس کي CTCM (MT) ثقافتن ۾ اضافو ڪرڻ جي صلاحيت بهتر ٿي ۽ ساڳئي ٽرانسپشن پروفائلز، ساخت جي سالميت، ۽ ميٽابولڪ سرگرمي کي 12 ڏينهن تائين تازو دل جي ٽشو سان برقرار رکيو.ان کان علاوه، ٽائيسو جي درجي کي ڪنٽرول ڪندي، هڪ هائپر ايڪسٽينشن-حوصلہ افزائي ڪارڊ هائپر ٽرافي ماڊل ٺاهي وئي STCM استعمال ڪندي، STCM سسٽم جي استحڪام کي بيان ڪندي.اهو ياد رکڻ گهرجي ته جيتوڻيڪ دل جي ريموڊلنگ ۽ فبروسس عام طور تي برقرار عضون شامل آهن جن جي گردش ڪندڙ سيلز مناسب سيٽوڪائنز مهيا ڪري سگھن ٿا ۽ گڏوگڏ phagocytosis ۽ ٻين ريموڊلنگ عوامل، دل جا حصا اڃا تائين دٻاء ۽ صدمي جي جواب ۾ فيبروٽڪ عمل کي نقل ڪري سگهن ٿا.myofibroblasts ۾.اهو اڳ ۾ تشخيص ڪيو ويو آهي هن ڪارڊ سلائس ماڊل ۾.اهو ياد رکڻ گهرجي ته CTCM پيٽرولر کي تبديل ڪري سگهجي ٿو دٻاء / بجليء جي طول و عرض ۽ تعدد کي تبديل ڪرڻ لاء ڪيترن ئي حالتن جهڙوڪ tachycardia، bradycardia، ۽ ميخانياتي گردش سپورٽ (مڪينيڪل ان لوڊ ٿيل دل).هي سسٽم کي دوا جي جاچ لاءِ وچولي ذريعي فراهم ڪري ٿو.CTCM جي صلاحيت اوور ايڪسائيزيشن-حوصلہ افزائي ڪارڊيڪ هائپر ٽرافي کي ماڊل ڪرڻ جي صلاحيت هن سسٽم کي ذاتي ٿيل علاج لاء ٽيسٽ ڪرڻ جو رستو ٺاهي ٿو.نتيجي ۾، موجوده مطالعي مان اهو ظاهر ٿئي ٿو ته ميخانياتي ڇڪڻ ۽ مزاحيه محرک دل جي ٽشو حصن جي ثقافت کي برقرار رکڻ لاء اهم آهن.
جيتوڻيڪ هتي پيش ڪيل ڊيٽا اهو ٻڌائي ٿو ته CTCM برقرار مايوڪارڊيم جي ماڊلنگ لاءِ هڪ تمام پرجوش پليٽ فارم آهي، هن ڪلچر جي طريقي ۾ ڪجهه حدون آهن.CTCM ڪلچر جي بنيادي حد اها آهي ته اهو سلائسن تي مسلسل متحرڪ ميڪاني دٻاء کي لاڳو ڪري ٿو، جيڪو هر چڪر دوران فعال طور تي ڪارڊ سلائس جي ڀڃڪڙي جي نگراني ڪرڻ جي صلاحيت کي روڪي ٿو.ان کان علاوه، دل جي حصن جي ننڍڙي سائيز جي ڪري (7 ملي ايم)، روايتي قوت سينسر استعمال ڪندي ڪلچر سسٽم کان ٻاهر سسٽولڪ فنڪشن جو جائزو وٺڻ جي صلاحيت محدود آهي.موجوده نسخي ۾، اسان جزوي طور تي هن حد کي ختم ڪريون ٿا نظرياتي وولٹیج جو جائزو وٺڻ سان هڪ اشاري جي طور تي ٺيڪيدار فنڪشن.بهرحال، هن حد کي وڌيڪ ڪم جي ضرورت پوندي ۽ مستقبل ۾ ڪلچر ۾ دل جي سلائسن جي فنڪشن جي نظرياتي مانيٽرنگ لاء طريقا متعارف ڪرائڻ جي ذريعي خطاب ڪيو ويندو، جهڙوڪ ڪلسيم ۽ وولٽيج-حساس رنگن کي استعمال ڪندي آپٽيڪل ميپنگ.CTCM جي هڪ ٻي حد اها آهي ته ڪم ڪندڙ ماڊل جسماني دٻاء (پري لوڊ ۽ بعد ۾ لوڊ) کي هٿي نه ڏئي.CTCM ۾، دٻاء کي مخالف طرفن ۾ 25٪ جسماني اسٽريچ ڊاءسٽول (مڪمل اسٽريچ) ۽ سسٽول (بجلي جي محرک دوران ٺهڪندڙ ڊگھائي) ۾ تمام وڏي بافتن ۾ ٻيهر پيدا ڪرڻ لاءِ وڌايو ويو.هن حد کي مستقبل جي CTCM ڊيزائن ۾ ٻنهي پاسن کان دل جي بافتن تي مناسب دٻاءَ ذريعي ۽ دل جي چيمبرن ۾ موجود درست دٻاءُ جي مقدار جي لاڳاپن کي لاڳو ڪرڻ سان ختم ڪيو وڃي.
هن نسخي ۾ ٻڌايو ويو اوور اسٽريچ-حوصله افزائي ريموڊلنگ هائپر ٽروفڪ هائپر اسٽريچ سگنلن جي نقل ڪرڻ تائين محدود آهي.اهڙيء طرح، هي ماڊل مدد ڪري سگهي ٿو ڊگهي-حوصلہ افزائي هائپر ٽروفڪ سگنلنگ جي مطالعي ۾ بغير ڪنهن انساني يا اعصابي عنصر جي ضرورت کان سواء (جيڪي هن سسٽم ۾ موجود نه آهن).وڌيڪ مطالعي جي ضرورت آهي CTCM جي گهڻائي کي وڌائڻ لاء، مثال طور، مدافعتي سيلن سان گڏ ثقافت، گردش پلازما مزاحيه عنصر، ۽ جدت جڏهن نيورونل سيلز سان گڏ ثقافت CTCM سان بيماري ماڊلنگ جي امڪانن کي بهتر بڻائي سگهندي.
هن مطالعي ۾ تيرهن سور استعمال ڪيا ويا.سڀني جانورن جي طريقيڪار کي ادارتي هدايتن جي مطابق ڪيو ويو ۽ لوئس ويلي يونيورسٽي جي اداري جانورن جي سنڀال ۽ استعمال ڪميٽي پاران منظور ڪيو ويو.aortic محراب کي بند ڪيو ويو ۽ دل کي 1 L sterile cardioplegia (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL هيپرين, pH تائين) سان خوشبو ڪئي وئي. دلين کي برفاني سرد ​​ڪارڊيوپلجڪ حل ۾ محفوظ ڪيو ويو جيستائين برف تي ليبارٽري ڏانهن منتقل ڪيو وڃي جيڪو عام طور تي <10 منٽ آهي. دلين کي برفاني سرد ​​ڪارڊيوپلجڪ حل ۾ محفوظ ڪيو ويو جيستائين برف تي ليبارٽري ڏانهن منتقل ڪيو وڃي جيڪو عام طور تي <10 منٽ آهي. сердца хранили в ледяном кардиоплегическом растворе до транспортировки в лабораторию на льду, что обычно занимает <10 мин. دل کي برفاني سرد ​​ڪارڊيوپلجڪ حل ۾ محفوظ ڪيو ويو جيستائين برف تي ليبارٽري ڏانهن ٽرانسپورٽ، جنهن ۾ عام طور تي <10 منٽ لڳن ٿا.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中,直到冰上运送到实验室،通常<10分钟.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中,直到冰上运送到实验室،通常<10分钟. Держите сердца в ледяной кардиоплегии до транспортировки в лабораторию на льду, обычно <10 min. دل کي برفاني ڪارڊيوپلجيا تي رکو جيستائين برف تي ليبارٽري ڏانهن ٽرانسپورٽ، عام طور تي <10 منٽ.
CTCM ڊوائيس SolidWorks ڪمپيوٽر-ايڊڊ ڊيزائن (CAD) سافٽ ويئر ۾ ترقي ڪئي وئي.ڪلچر چيمبر، ورهائيندڙ ۽ ايئر چيمبرز CNC صاف ايڪريل پلاسٽڪ مان ٺهيل آهن.7mm قطر جي بيڪ اپ انگوزي مرڪز ۾ اعلي کثافت پوليٿيلين (HDPE) مان ٺهيل آهي ۽ هيٺان ميڊيا کي سيل ڪرڻ لاء استعمال ٿيل سلڪون او-رنگ کي گڏ ڪرڻ لاء هڪ او-رنگ گروو آهي.هڪ پتلي سليڪا جھلي ڪلچر چيمبر کي الڳ ڪرڻ واري پليٽ کان الڳ ڪري ٿي.سلڪون جھلي 0.02 انچ ٿلهي سلڪون شيٽ مان ليزر ڪٽيل آھي ۽ 35A جي سختي آھي.هيٺيون ۽ مٿيون سلڪون گيسڪٽس 1/16 انچ ٿلهي سلڪون شيٽ مان ليزر ڪٽيل آهن ۽ 50A جي سختي آهي.316L اسٽينلیس سٹیل اسڪرو ۽ ونگ نٽ استعمال ڪيا ويندا آهن بلاڪ کي مضبوط ڪرڻ ۽ ايئر ٽائيٽ مهر ٺاهڻ لاءِ.
هڪ وقف ٿيل پرنٽ ٿيل سرڪٽ بورڊ (PCB) ٺهيل آهي C-PACE-EM سسٽم سان ضم ٿيڻ لاءِ.پي سي بي تي سوئس مشين جي ڪنيڪٽر ساکٽ گريفائٽ اليڪٽرروڊس سان سلور پلاٽ ٿيل ٽامي جي تارن ۽ برونز 0-60 اسڪرو ذريعي اليڪٽروڊس ۾ جڙيل آهن.ڇپيل سرڪٽ بورڊ 3D پرنٽر جي ڍڪ ۾ رکيل آهي.
CTCM ڊيوائس هڪ پروگراميبل نيوميٽڪ ايڪٽيوٽر (PPD) جي ذريعي ڪنٽرول ڪيو ويندو آهي جيڪو هڪ ڪنٽرول ٿيل گردشي دٻاءُ ٺاهيندو آهي جيڪو دل جي چڪر وانگر آهي.جيئن ته هوا جي چيمبر جي اندر دٻاء وڌندو آهي، لچڪدار سلڪون جھلي مٿي وڌائي ٿي، ٽشو سائيٽ جي هيٺان وچولي کي مجبور ڪري ٿو.ان کان پوءِ ٽشو جو علائقو ڊگھو ڪيو ويندو رطوبت جي ان اخراج سان، ڊيسٽول دوران دل جي جسماني توسيع کي نقل ڪندي.آرام جي چوٽي تي، برقي محرڪ گريفائٽ اليڪٽرروڊس ذريعي لاڳو ڪيو ويو، جنهن هوا جي چيمبر ۾ دٻاء گهٽايو ۽ ٽشو سيڪشن جي ڀڃڪڙي جو سبب بڻيو.پائپ جي اندر هڪ هيموسٽيٽڪ والو آهي جيڪو پريشر سينسر سان هوائي سسٽم ۾ دٻاء کي ڳولڻ لاء.پريشر سينسر پاران محسوس ڪيل دٻاء ليپ ٽاپ سان ڳنڍيل ڊيٽا ڪليڪٽر تي لاڳو ٿئي ٿو.هي گئس چيمبر اندر دٻاء جي مسلسل نگراني جي اجازت ڏئي ٿو.جڏهن وڌ ۾ وڌ چيمبر پريشر پهچي ويو (معياري 80 mmHg، 140 mmHg OS)، ڊيٽا حاصل ڪرڻ واري ڊيوائس کي حڪم ڏنو ويو ته C-PACE-EM سسٽم ڏانهن سگنل موڪلڻ لاءِ 2 ms لاءِ بائيفاسڪ وولٽيج سگنل ٺاهي، 4 V تي مقرر ڪيو وڃي.
دل جا حصا حاصل ڪيا ويا ۽ 6 کوهن ۾ ڪلچر جون حالتون هن ريت ڪيون ويون: هارايل دلين کي منتقلي برتن مان هڪ ٽري ۾ منتقل ڪيو ويو جنهن ۾ ٿڌي (4 ° C.) ڪارڊيوپلجيا شامل آهن.کاٻي وينٽريڪل کي جراثيم کان پاڪ بليڊ سان ڌار ڪيو ويو ۽ 1-2 سينٽي ميٽرن جي ٽڪرن ۾ ڪٽيو ويو.اهي ٽشو بلاڪ ٽشو جي سپورٽ سان ڳنڍيا ويا هئا ٽائيسو چپڪندڙ سان ۽ ٽائروڊ جو حل ۽ مسلسل آڪسيجن ٿيل (3 g/L 2,3-butanedione monooxime (BDM)، 140 mM NaCl (8.18 g)، m10M4 (m.18 g)، m.10M4 (m.6.4)، m.6. لوڪوز (1.86 g)، 10 mM HEPES (2.38 g)، 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M محلول)، 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml 1 M محلول)، 1 L ddH2O تائين.وائبريٽنگ مائڪروٽوم کي 80 Hz جي فريڪوئنسي تي 300 µm ٿلهي سلائسن کي ڪٽڻ لاءِ مقرر ڪيو ويو، 2 mm جي افقي وائبريشن طول و عرض، ۽ 0.03 mm/s جي اڳواٽ شرح.حل کي ٿڌو رکڻ لاءِ ٽشو غسل کي برف سان گھرايو ويو ۽ گرمي پد 4 ڊگري سينٽي گريڊ تي رکيو ويو.مائيڪروٽوم باٿ مان ٽشو سيڪشن کي انڪيوبيشن باٿ ۾ منتقل ڪريو جنهن ۾ برف تي لڳاتار آڪسيجن ٿيل ٽائروڊ محلول هجي جيستائين هڪ ڪلچر پليٽ لاءِ ڪافي حصا حاصل نه ٿين.ٽرانس ويل ڪلچرز لاءِ، ٽشو سيڪشن کي sterile 6 mm وائڊ polyurethane سپورٽ سان ڳنڍيو ويو ۽ 6 ml optimized medium (199 ميڊيم، 1x ITS سپليمينٽ، 10% FBS، 5 ng/ml VEGF، 10 ng/ml FGF-alkaline and-2) رکيو ويو.برقي محرڪ (10 V، فریکوئنسي 1.2 Hz) سي-پيس ذريعي ٽشو سيڪشن تي لاڳو ڪيو ويو.TD جي حالتن لاء، تازو T3 ۽ ڊيڪس شامل ڪيا ويا 100 nM ۽ 1 μM هر وچولي تبديلي تي.ميڊيم کي آڪسيجن سان ڀريو ويندو آهي متبادل کان اڳ 3 ڀيرا هڪ ڏينهن.ٽشو سيڪشن کي انڪيوبيٽر ۾ 37 ° C ۽ 5٪ CO2 تي ڪلچر ڪيو ويو.
CTCM ڪلچرن لاءِ، ٽائيسو سيڪشن کي پيٽري ڊش ۾ ڪسٽم ميڊ 3D پرنٽر تي رکيا ويا جن ۾ تبديل ٿيل ٽائروڊ جو حل شامل آهي.ڊوائيس ٺهيل آهي ته دل جي سلائس جي سائيز کي سپورٽ انگوزي جي علائقي جو 25٪ وڌائي.اهو ان ڪري ڪيو ويو آهي ته دل جا حصا ٽائروڊ جي محلول کان وچولي ۾ منتقل ٿيڻ کان پوءِ ۽ ڊاءِسٽول دوران ڊگھا نه ٿين.histoacrylic گلو استعمال ڪندي، سيڪشن 300 µm ٿلها هڪ سپورٽ انگوزي تي 7 ملي ميٽر قطر تي مقرر ڪيا ويا.ٽشو سيڪشن کي سپورٽ رنگ سان ڳنڍڻ کان پوء، اضافي ٽشو سيڪشن کي ڪٽي ڇڏيو ۽ ڳنڍيل ٽائيشو سيڪشن کي واپس ٽائيروڊ محلول جي غسل ۾ برف (4°C) تي رکو جيستائين ڪافي سيڪشن ھڪڙي ڊوائيس لاء تيار ڪيا وڃن.سڀني ڊوائيسز لاء ڪل پروسيسنگ وقت 2 ڪلاڪن کان وڌيڪ نه هجڻ گهرجي.6 ٽشو سيڪشن کان پوءِ انهن جي سپورٽ جي انگن سان ڳنڍيل هئا، CTCM ڊوائيس گڏ ڪيو ويو.CTCM ڪلچر چيمبر 21 ml پري آڪسيجن ٿيل وچولي سان اڳ ۾ ڀريل آهي.ٽشو سيڪشن کي ڪلچر چيمبر ۾ منتقل ڪريو ۽ احتياط سان پائيپٽ سان هوائي بلبلن کي هٽايو.پوءِ ٽشو سيڪشن کي سوراخ ۾ ھدايت ڪئي ويندي آھي ۽ ھلڪي جاءِ تي دٻايو ويندو آھي.آخرڪار، ڊوائيس تي اليڪٽرروڊ ڪيپ رکو ۽ ڊوائيس کي انڪيوبيٽر ڏانهن منتقل ڪريو.پوءِ CTCM کي ايئر ٽيوب ۽ C-PACE-EM سسٽم سان ڳنڍيو.نيوميٽڪ ايڪٽيوٽر کلي ٿو ۽ ايئر والو CTCM کي کولي ٿو.C-PACE-EM سسٽم کي 4 V پهچائڻ لاءِ ترتيب ڏنو ويو هو 1.2 Hz تي biphasic pacing دوران 2 ms.وچولي کي ڏينهن ۾ ٻه ڀيرا تبديل ڪيو ويو ۽ اليڪٽرروڊز کي ڏينهن ۾ هڪ ڀيرو تبديل ڪيو ويو ته جيئن اليڪٽرروڊس تي گرافائٽ جي جمع ٿيڻ کان بچڻ لاء.جيڪڏهن ضروري هجي ته، ٽشو سيڪشن کي انهن جي ڪلچر جي کوهن مان هٽائي سگهجي ٿو ته ڪنهن به هوائي بلبلن کي ڪڍڻ لاء جيڪي شايد انهن جي هيٺان ڪري سگھن ٿا.MT علاج جي حالتن لاء، T3 / Dex تازو شامل ڪيو ويو هر وچولي تبديلي سان 100 nM T3 ۽ 1 μM ڊيڪس سان.CTCM ڊوائيسز کي 37 ° C ۽ 5٪ CO2 تي انڪيوبيٽر ۾ ڪلچر ڪيو ويو.
دل جي سلائسن جي وڌايل پيچرن کي حاصل ڪرڻ لاء، هڪ خاص ڪئميرا سسٽم ٺاهي وئي.هڪ SLR ڪئميرا (ڪينن ريبل T7i، ڪينن، ٽوڪيو، جاپان) استعمال ڪيو ويو نيويٽر زوم 7000 18-108mm ميڪرو لينس (Navitar، San Francisco، CA).نظارو ڪمري جي حرارت تي ڪيو ويو وچولي کي تازو وچولي سان تبديل ڪرڻ کان پوءِ.ڪئميرا 51° زاويه تي رکيل آهي ۽ وڊيو 30 فريم في سيڪنڊ تي رڪارڊ ڪئي وئي آهي.پهريون، اوپن سورس سافٽ ويئر (MUSCLEMOTION43) استعمال ڪيو ويو تصوير-J سان دل جي سلائسن جي حرڪت کي مقدار ڏيڻ لاءِ.ماسڪ MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) استعمال ڪندي ٺاھيو ويو آھي دلچسپي جي علائقن جي وضاحت ڪرڻ لاءِ دل جي سلائسن کي ڌڪڻ لاءِ شور کان بچڻ لاءِ.دستي طور تي ورهايل ماسڪ سڀني تصويرن تي فريم جي ترتيب ۾ لاڳو ڪيا ويندا آهن ۽ پوءِ MUSCLEMOTION پلگ ان ڏانهن منتقل ڪيا ويندا آهن.عضلاتي موشن هر فريم ۾ پکسلز جي اوسط شدت کي استعمال ڪري ٿو ان جي حرڪت کي ريفرنس فريم جي نسبت سان.ڊيٽا کي رڪارڊ ڪيو ويو، فلٽر ڪيو ويو ۽ استعمال ڪيو ويو چڪر جي وقت جي مقدار کي طئي ڪرڻ ۽ دل جي چڪر دوران ٽائيسو اسٽريچ جو جائزو وٺڻ.رڪارڊ ٿيل وڊيو پوسٽ پروسيس ڪئي وئي پهرين آرڊر صفر فيز ڊجيٽل فلٽر استعمال ڪندي.ٽشو اسٽريچ کي مقدار ڏيڻ لاءِ (چوٽي کان چوٽي)، رڪارڊ ٿيل سگنل ۾ چوٽي ۽ گرت جي وچ ۾ فرق ڪرڻ لاءِ چوٽي کان چوٽي جو تجزيو ڪيو ويو.ان کان علاوه، ڊيٽرنڊنگ کي 6th آرڊر پولينوميل استعمال ڪندي سگنل ڊرفٽ کي ختم ڪرڻ لاءِ ڪيو ويندو آهي.پروگرام ڪوڊ MATLAB ۾ ترقي ڪئي وئي عالمي ٽشو موشن، چڪر جو وقت، آرام جو وقت، ۽ تڪرار وقت (ضمني پروگرام ڪوڊ 44).
تناؤ جي تجزيي لاءِ، ميڪيڪل اسٽريچ اسيسمينٽ لاءِ ٺاهيل ساڳين وڊيوز کي استعمال ڪندي، اسان پهريون ڀيرو ٻن تصويرن جو پتو لڳايو جيڪو موشن جي چوٽي (مٿين (مٿين) ۽ سڀ کان گھٽ (هيٺيون) موشن جي پوائنٽن جي نمائندگي ڪري ٿو MUSCLEMOTION سافٽ ويئر جي مطابق.اسان پوءِ ٽشو وارن علائقن کي ورهايو ۽ سيگمينٽ ٿيل ٽشو تي شيڊنگ الگورٿم جو فارم لاڳو ڪيو (ضمني تصوير 2a).ورهايل ٽشو کي پوءِ ڏهن ذيلي سطحن ۾ ورهايو ويو، ۽ هر مٿاڇري تي دٻاءُ هيٺ ڏنل مساوات کي استعمال ڪندي ڳڻيو ويو: Strain = (Sup-Sdown)/Sdown، جتي Sup ۽ Sdown شڪل جا فاصلا آهن ڪپڙي جي مٿين ۽ هيٺان پاڇي کان، ترتيب سان (ضمني شڪل. .2b).
دل جا حصا 4٪ paraformaldehyde ۾ 48 ڪلاڪن تائين مقرر ڪيا ويا.مقرر ٿيل ٽشوز کي 10٪ ۽ 20٪ sucrose ۾ 1 ڪلاڪ لاءِ ڊيهائيڊريٽ ڪيو ويو، پوءِ 30٪ sucrose ۾ رات جو.سيڪشن کي پوءِ وڌ ۾ وڌ ڪٽڻ واري درجه حرارت جي مرڪب (OCT مرڪب) ۾ شامل ڪيو ويو ۽ آهستي آهستي هڪ آئسوپينٽين / خشڪ برفاني غسل ۾ منجمد ڪيو ويو.OCT ايمبيڊنگ بلاڪ کي اسٽور ڪريو -80 °C تي جدا ٿيڻ تائين.سلائڊ تيار ڪيا ويا سيڪشن طور 8 μm جي ٿلهي سان.
دل جي حصن مان OCT کي هٽائڻ لاءِ، 5 منٽ لاءِ 95 °C تي هيٽنگ بلاڪ تي سلائيڊس کي گرم ڪريو.هر سلائيڊ ۾ 1 ml PBS شامل ڪريو ۽ ڪمري جي حرارت تي 30 منٽن لاءِ انڪيوبيٽ ڪريو، پوءِ ڪمري جي گرمي پد تي 15 منٽن لاءِ PBS ۾ 0.1% Triton-X سيٽ ڪري سيڪشنز کي پريم ڪريو.غير مخصوص اينٽي باڊيز کي نموني سان پابند ٿيڻ کان روڪڻ لاءِ، 1 ml جو 3% BSA حل سلائيڊ ۾ شامل ڪريو ۽ ڪمري جي حرارت تي 1 ڪلاڪ لاءِ سيپ ڪريو.BSA وري هٽايو ويو ۽ سلائڊ PBS سان ڌوئي ويا.هر نموني کي پنسل سان نشان لڳايو.پرائمري اينٽي باڊيز (دليل 1:200 ۾ 1٪ BSA) (connexin 43 (Abcam؛ #AB11370)، NFATC4 (Abcam؛ #AB99431) ۽ ٽراپونين-T (Thermo Scientific؛ #MA5-12960) شامل ڪيا ويا 90 منٽن کان وڌيڪ، پوءِ ايڪس اينٽي باڊيز ۾ 1٪ BSA استعمال ڪيو ويو. فلور 488 (Thermo Scientific؛ #A16079)، خرگوش جي خلاف Alexa Fluor 594 (Thermo Scientific؛ #T6391) اضافي 90 منٽن لاءِ پي بي ايس سان 3 ڀيرا ڌويو ويو پس منظر کان ٽارگيٽ جي داغ کي ڌار ڪرڻ لاءِ، اسان صرف ثانوي اينٽي باڊي استعمال ڪيو جيئن ڪنٽرول جي طور تي. ليبارٽريز) ۽ نيل پالش سان بند ٿيل. -x ميگنيفڪيشن) ۽ ڪينس مائڪرو اسڪوپ 40x ميگنيفڪيشن سان.
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific؛ #W32464) PBS ۾ 5 μg/ml تي WGA داغ لاءِ استعمال ڪيو ويو ۽ 30 منٽن لاءِ ڪمري جي حرارت تي مقرر حصن تي لاڳو ڪيو ويو.سلائڊن کي پوءِ پي بي ايس سان ڌويو ويو ۽ سوڊان ڪارو هر سلائڊ ۾ شامل ڪيو ويو ۽ 30 منٽن لاءِ انڪيوب ڪيو ويو.سلائڊ وري PBS سان ڌوئي ويا ۽ وڪٽشيلڊ ايمبيڊنگ وچولي شامل ڪئي وئي.سلائڊ کي 40x ميگنيفڪيشن تي ڪيئنس خوردبيني تي ويجھو ڪيو ويو.
مٿي بيان ڪيل نموني مان OCT هٽايو ويو.او سي ٽي کي هٽائڻ کان پوء، بوئن جي حل ۾ سلائڊ کي رات جو وجھو.ان کان پوءِ سلائڊن کي 1 ڪلاڪ لاءِ ڊسٽل پاڻيءَ سان ڌوئي ڇڏيو ۽ پوءِ 10 منٽن لاءِ بيبرچ الو ايسڊ فوڪسن جي محلول ۾ رکيا ويا.ان کان پوءِ سلائڊن کي ڊسٽيل پاڻي سان ڌويو ويو ۽ 10 منٽن لاءِ 5% phosphomolybdenum/5% phosphotungstic acid جي محلول ۾ رکيو ويو.بغير ڌوئڻ جي، 15 منٽن لاء سڌو سنئون اينلين نيري حل ۾ سلائڊ منتقل ڪريو.ان کان پوءِ سلائڊن کي ڊسٽيل پاڻي سان ڌويو ويو ۽ 2 منٽن لاءِ 1٪ ايڪٽڪ ايسڊ محلول ۾ رکيو ويو.سلائڊ 200 اين ايٿانول ۾ خشڪ ڪيا ويا ۽ xylene ڏانهن منتقل ڪيا ويا.10x مقصد سان ڪيئنس خوردبيني استعمال ڪندي داغ ٿيل سلائڊ کي تصور ڪيو ويو.فبروسس ايريا فيصد ڪيئنس اينالائيزر سافٽ ويئر استعمال ڪندي مقدار جي حساب سان ڪئي وئي.
CyQUANT™ MTT Cell Viability Assay (Invitrogen, Carlsbad, CA)، ڪيٽلاگ نمبر V13154، ٺاهيندڙ جي پروٽوڪول جي مطابق ڪجھ تبديلين سان.خاص طور تي، ايم ٽي ٽي تجزيي دوران يونيفارم ٽشو سائيز کي يقيني بڻائڻ لاء 6 ملي ميٽر جي قطر سان هڪ جراحي پنچ استعمال ڪيو ويو.ٽشوز کي انفرادي طور تي 12-ويل پليٽ جي کوهن ۾ پلاٽ ڪيو ويو جنهن ۾ ٺاهيندڙ جي پروٽوڪول موجب MTT سبسٽرٽ شامل آهي.حصن کي 37 ° C. تي 3 ڪلاڪن لاءِ سينگاريو ويندو آهي ۽ جاندار ٽشو MTT سبسٽريٽ کي ميٽابولائيز ڪري ٿو ته جيئن جامني فارمازان مرڪب بڻجي وڃي.MTT محلول کي 1 ml DMSO سان مٽايو ۽ 37 ° C تي 15 منٽن لاءِ انڪيبيٽ ڪريو ته جيئن دل جي حصن مان پرپل فارمازان ڪڍي سگهجي.نمونا 1:10 DMSO ۾ 96-چڱي طرح صاف ھيٺين پليٽن ۾ ۽ جامني رنگ جي شدت ماپ ڪئي وئي 570 nm تي ھڪڙي Cytation پليٽ ريڊر (BioTek) استعمال ڪندي.پڙهڻ کي دل جي هر سلائس جي وزن تي معمول ڪيو ويو.
دل جي سلائس ميڊيا کي ميڊيا سان تبديل ڪيو ويو جنهن ۾ 1 μCi/ml [5-3H]-گلوڪوز (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) گلوڪوز جي استعمال جي جائزي لاءِ جيئن اڳ بيان ڪيو ويو آهي.انڪيوبيشن جي 4 ڪلاڪن کان پوءِ، 100 µl ميڊيم کي هڪ کليل مائڪرو سينٽريفيوج ٽيوب ۾ شامل ڪريو جنهن ۾ 100 µl 0.2 N HCl شامل آهي.پوءِ ان ٽيوب کي 37 ڊگري سينٽي گريڊ تي 72 ڪلاڪن لاءِ [3H]2O جي بخار ٿيڻ لاءِ 500 μl dH2O تي مشتمل هڪ سينٽيليشن ٽيوب ۾ رکيو ويو.ان کان پوءِ مائڪرو سينٽريفيوج ٽيوب کي سينٽيليشن ٽيوب مان هٽايو ۽ 10 ملي ليٽر اسڪينٽيليشن فلوئڊ شامل ڪريو.ٽري-ڪارب 2900TR مائع اسڪينٽيليشن اينالائيزر (پيڪارڊ بايوسائنس ڪمپني، ميريڊن، سي ٽي، يو ايس اي) استعمال ڪندي اسڪائنٽيليشن شمار ڪيا ويا.گلوڪوز جي استعمال کي پوءِ حساب ۾ ورتو ويو [5-3H] - گلوڪوز جي مخصوص سرگرمي، نامڪمل توازن ۽ پس منظر، [5-3H] جي گھٽتائي - غير ليبل ٿيل گلوڪوز، ۽ اسڪينٽيليشن انسداد ڪارڪردگي.ڊيٽا کي عام ڪيو ويو آهي دل جي حصن جي ڪاميٽي تائين.
ٽريزول ۾ ٽشو هوموجنائيزيشن کان پوءِ، ٺاهيندڙ جي پروٽوڪول مطابق، Qiagen miRNeasy Micro Kit #210874 استعمال ڪندي RNA کي دل جي حصن مان الڳ ڪيو ويو.RNAsec لائبريري تيار ڪرڻ، ترتيب ڏيڻ ۽ ڊيٽا جي تجزيي کي هيٺين ريت ڪيو ويو:
1 μg آر اين اي في نموني استعمال ڪيو ويو آر اين اي لائبريري جي تياري لاءِ شروعاتي مواد طور.NEBNext UltraTM RNA Library Preparation Kit for Illumina (NEB, USA) استعمال ڪندي ترتيب وار لائبريريون ٺاھيون ويون ٺاھيندڙ جي سفارشن تي عمل ڪندي، ۽ انڊيڪس ڪوڊ شامل ڪيا ويا ھر نموني لاءِ خصوصيت جي ترتيبن ۾.مختصر طور تي، ايم آر اين اي کي ڪل آر اين اي مان پاڪ ڪيو ويو مقناطيسي موتي استعمال ڪندي پولي-ٽي oligonucleotides سان ڳنڍيل.NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer (5X) ۾ اعليٰ درجه حرارت تي divalent cations استعمال ڪندي فريگمينٽيشن ڪيو ويندو آهي.فرسٽ اسٽينڊ سي ڊي اين اي بي ترتيب هيڪسامر پرائمر ۽ M-MuLV ريورس ٽرانسڪرپٽ (RNase H-) استعمال ڪندي ٺهيل هئي.ٻئي اسٽرينڊ سي ڊي اين اي کي پوءِ ڊي اين اي پوليمريز I ۽ RNase H استعمال ڪندي ٺهڪندڙ ڪيو ويندو آهي. باقي اوور هينگز Exonuclease/polymerase سرگرمي ذريعي بلنٽ سرن ۾ تبديل ٿي ويندا آهن.ڊي اين اي فريگمينٽ جي 3′ پڇاڙيءَ جي adenylation کان پوءِ، هڪ NEBNext اڊاپٽر جنهن ۾ هيئرپن لوپ ڍانچي سان ڳنڍيو ويندو آهي ان کي هائبرڊائيزيشن لاءِ تيار ڪرڻ لاءِ.ترجيحي ڊگھائي 150-200 bp جي cDNA ٽڪرن جي چونڊ لاءِ.AMPure XP سسٽم (Beckman Coulter, Beverly, USA) استعمال ڪندي لائبريري جا ٽڪرا صاف ڪيا ويا.پوءِ، 3 μl USER Enzyme (NEB, USA) 15 منٽ لاءِ 37 ° C تي ۽ پوءِ PCR کان اڳ 5 منٽن لاءِ 95 ° C تي 15 منٽ لاءِ استعمال ڪيو ويو سائيز جي چونڊيل cDNA سان گڏ.پي سي آر ان کان پوءِ فيوزن هاءِ-فيڊيلٽي ڊي اين اي پوليميرس، يونيورسل پي سي آر پرائمر، ۽ انڊيڪس (X) پرائمر استعمال ڪندي ڪيو ويو.آخرڪار، پي سي آر پروڊڪٽس صاف ڪيا ويا (AMPure XP سسٽم) ۽ لائبريري جي معيار جو جائزو ورتو ويو Agilent Bioanalyzer 2100 سسٽم تي.سي ڊي اين اي لئبريري کي پوءِ نوواسق سيڪوئنسر استعمال ڪندي ترتيب ڏني وئي.Illumina کان خام تصويرون فائلن کي CASAVA بيس ڪالنگ استعمال ڪندي خام ريڊز ۾ تبديل ڪيو ويو.خام ڊيٽا FASTQ (fq) فارميٽ فائلن ۾ ذخيرو ٿيل آهي جنهن ۾ پڙهڻ جي ترتيب ۽ لاڳاپيل بنيادي خوبيون شامل آهن.Sscrofa11.1 ريفرنس جينوم کي فلٽر ٿيل ترتيب واري ريڊز سان ملائڻ لاءِ HISAT2 چونڊيو.عام طور تي، HISAT2 ڪنهن به سائيز جي جينوم کي سپورٽ ڪري ٿو، جن ۾ 4 بلين بيس کان وڏي جينوم شامل آهن، ۽ ڊفالٽ قدر اڪثر پيٽرولر لاء مقرر ڪيا ويا آهن.RNA Seq ڊيٽا مان اسپلائنگ پڙهڻ کي HISAT2 استعمال ڪندي موثر طريقي سان ترتيب ڏئي سگهجي ٿو، هن وقت موجود تيز ترين سسٽم، ڪنهن ٻئي طريقي جي ڀيٽ ۾ ساڳي يا بهتر درستگي سان.
نقلن جي گهڻائي سڌي طرح جين اظهار جي سطح کي ظاهر ڪري ٿي.جيني اظهار جي سطحن جو اندازو لڳايو ويو آهي ٽرانسڪرپٽس جي گھڻائي (ترتيب جي ڳڻپ) جينوم يا خارجي سان لاڳاپيل.پڙهڻ جو تعداد جين اظهار جي سطح، جين جي ڊيگهه، ۽ ترتيب جي کوٽائي جي تناسب آهي.FPKM (ٽڪرا في هزار بنيادي جوڑوں جي ٽرانسڪرپٽ جي ترتيب في ملين بيس جوڑوں تي) حساب ڪيو ويو ۽ DESeq2 پيڪيج استعمال ڪندي فرق جي اظهار جا P-قدر مقرر ڪيا ويا.اسان پوءِ حساب ڪيو غلط دريافت جي شرح (FDR) هر P قدر لاءِ استعمال ڪندي بينجمني-هوڪبرگ ميٿڊ9 جي بنياد تي بلٽ ان R-فنڪشن ”p.adjust“.
Thermo (Thermo, cat. no. 11756050) کان سپر اسڪرپٽ IV Vilo ماسٽر ميڪس استعمال ڪندي 200 ng/μl جي ڪنسنٽريشن تي دل جي حصن مان ڌار ڪيل آر اين اي کي سي ڊي اين اي ۾ تبديل ڪيو ويو.مقداري RT-PCR استعمال ڪيو ويو اپلائيڊ بايو سسٽم اينڊورا پليٽ مائڪرومپ 384- چڱيءَ طرح شفاف رد عمل پليٽ (Thermo, cat. no. 4483319) ۽ microamp optical Adhesive (Thermo, cat. no. 4311971).رد عمل جو مرکب شامل هو 5 µl Taqman Fast Advanced Master mix (Thermo, cat # 4444557), 0.5 µl Taqman Primer ۽ 3.5 µl H2O في چڱيءَ طرح ملايو ويو.معياري qPCR سائيڪلون هلايون ويون ۽ CT قدر ماپ ڪيا ويا اپلائيڊ بايو سسٽم Quantstudio 5 ريئل ٽائيم پي سي آر اوزار (384-ويل ماڊل؛ پراڊڪٽ # A28135).Taqman پرائمر خريد ڪيا ويا Thermo (GAPDH (Ss03375629_u1)، PARP12 (Ss06908795_m1)، PKDCC (Ss06903874_m1)، CYGB (Ss06900188_m1)، RGL1 (Ss08188_m1)، RGL1 (Ss08109_ACT) 8_mH)، GATA4 (Ss03383805_u1)، GJA1 (Ss03374839_u1)، COL1A2 (Ss03375009_u1)، COL3A1 (Ss04323794_m1)، ACTA2 (Ss042415) گھر جي سڀني نمونن کي عام ڪيو ويو. اي GAPDH.
NT-ProBNP جي ميڊيا رليز جو اندازو لڳايو ويو NT-ProBNP کٽ (سور) (Cat. No. MBS2086979, MyBioSource) ٺاهيندڙ جي پروٽوڪول مطابق.مختصر طور، 250 µl هر نموني ۽ معيار کي نقل ۾ شامل ڪيو ويو هر کوهه ۾.فوري طور تي نموني شامل ڪرڻ کان پوء، 50 µl Assay Reagent A کي شامل ڪريو.آسانيء سان پليٽ کي ڇڪيو ۽ سيلٽ سان مهر ڪريو.ان کان پوء ٽيبلٽس 37 ° C تي 1 ڪلاڪ لاء incubated ويا.ان کان پوءِ ان محلول کي اسپيريٽ ڪريو ۽ 350 µl 1X واش محلول سان 4 ڀيرا ڌوئو، هر دفعي 1-2 منٽن لاءِ ڌوئيندڙ حل کي سينگاريو.پوءِ 100 µl Assay Reagent B في چڱيءَ طرح شامل ڪريو ۽ پليٽ سيلنٽ سان سيل ڪريو.ٽيبليٽ کي 37 ° سي تي 30 منٽن لاءِ نرميءَ سان ڌڪيو ويو.حل کي اسپيريٽ ڪريو ۽ 350 µl 1X واش محلول سان 5 ڀيرا ڌوئو.هر کوهه ۾ 90 µl سبسٽرٽ حل شامل ڪريو ۽ پليٽ کي سيل ڪريو.پليٽ کي 37 ° C تي 10-20 منٽن تائين رکو.شامل ڪريو 50 µl اسٽاپ حل هر کوهه ۾.پليٽ کي فوري طور تي ماپ ڪيو ويو Cytation (BioTek) پليٽ ريڊر 450 nm تي سيٽ استعمال ڪندي.
گروپ جي سائز کي چونڊڻ لاءِ پاور تجزيا ڪيا ويا جيڪي 10٪ ٽائپ I غلطي جي شرح سان پيراميٽر ۾ 10٪ مطلق تبديلي کي ڳولڻ لاءِ> 80٪ پاور مهيا ڪندا. گروپ جي سائز کي چونڊڻ لاءِ پاور تجزيا ڪيا ويا جيڪي 10٪ ٽائپ I غلطي جي شرح سان پيراميٽر ۾ 10٪ مطلق تبديلي کي ڳولڻ لاءِ> 80٪ پاور مهيا ڪندا. اناليز مائنس برگيڊ 10٪ с 5٪ частотой ошибок типа I. پاور تجزيو گروپ جي سائز کي چونڊڻ لاءِ ڪيو ويو جيڪو 10٪ مطلق پيٽرولر تبديلي کي 5٪ ٽائپ I جي غلطي جي شرح سان ڳولڻ لاءِ> 80٪ پاور مهيا ڪندو.进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％对变化和5％将提供>进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％对变化和5％将提供> Был проведен анализ мощности для выбора размера группы, который обеспечил бы > 80% мощности для обнаружения 10% етров и 5% частоты ошибок типа I. ھڪڙي طاقت جو تجزيو ھڪڙي گروپ جي سائيز کي چونڊڻ لاءِ ڪيو ويو جيڪو 10٪ مطلق پيٽرولر تبديلي ۽ 5٪ قسم I غلطي جي شرح کي ڳولڻ لاءِ> 80٪ پاور مهيا ڪندو.ٽشو سيڪشن کي بي ترتيب طور تي تجربي کان اڳ چونڊيو ويو.سڀئي تجزيا انڌا هئا ۽ نمونا ڊيڪوڊ ڪيا ويا صرف سڀني ڊيٽا جي تجزيو ٿيڻ کان پوءِ.گراف پيڊ پرزم سافٽ ويئر (سان ڊيوگو، CA) استعمال ڪيو ويو سڀني شمارياتي تجزيي کي انجام ڏيڻ لاء. سڀني انگن اکرن لاء، p-values ​​قدرن تي اھم سمجھيا ويا <0.05. سڀني انگن اکرن لاء، p-values ​​قدرن تي اهم سمجهيا ويا <0.05. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. سڀني انگن اکرن لاء، p-values ​​قدرن تي اهم سمجهيا ويا <0.05.对于所有统计数据،p 值在值<0.05 时被认为是显着的.对于所有统计数据،p 值在值<0.05 时被认为是显着的. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. سڀني انگن اکرن لاء، p-values ​​قدرن تي اهم سمجهيا ويا <0.05.صرف 2 موازن سان گڏ ڊيٽا تي ٻه-دم شاگردن جي ٽي-ٽيسٽ ڪئي وئي.هڪ طرفي يا ٻه طرفي ANOVA ڪيترن ئي گروهن جي وچ ۾ اهميت جو تعين ڪرڻ لاءِ استعمال ڪيو ويو.جڏهن پوسٽ هاڪ ٽيسٽ کي انجام ڏيڻ، ٽوڪي جي اصلاح کي ڪيترن ئي مقابلي جي حساب سان لاڳو ڪيو ويو.RNAsec ڊيٽا کي خاص شمارياتي غور ڪيو ويو آهي جڏهن حساب ڪيو ويو FDR ۽ p.adjust جيئن طريقن جي سيڪشن ۾ بيان ڪيو ويو آهي.
مطالعي جي ڊيزائن تي وڌيڪ معلومات لاء، ڏسو فطرت ريسرچ رپورٽ خلاصو هن مضمون سان ڳنڍيل آهي.