Waad ku mahadsan tahay booqashada Nature.com. Nooca biraawsarka aad isticmaaleyso wuxuu leeyahay taageero CSS oo xaddidan. Waayo-aragnimada ugu fiican, waxaan kugula talineynaa inaad isticmaasho biraawsar la cusbooneysiiyay (ama aad joojiso Habka La-qabsiga ee Internet Explorer). Dhanka kale, si loo hubiyo taageerada joogtada ah, waxaan soo bandhigi doonnaa goobta iyada oo aan lahayn qaabab iyo JavaScript.
Waxaa loo baahan yahay nidaam lagu kalsoonaan karo oo ku jira vitro kaas oo si sax ah u soo saari kara jawiga jir ahaaneed ee wadnaha si loogu sameeyo baaritaanka daroogada. Helitaanka xaddidan ee nidaamyada dhaqanka unugyada wadnaha ee aadanaha ayaa horseeday fasiraad aan sax ahayn oo ku saabsan saameynta daawada wadnaha. Halkan, waxaan ku soo saarnay qaab dhaqameed unugyada wadnaha (CTCM) kaas oo si elektaroonik ah u kiciya xalalka wadnaha isla markaana mara fiditaanka jir ahaaneed inta lagu jiro marxaladaha systolic iyo diastolic ee wareegga wadnaha. Ka dib 12 maalmood oo dhaqan ah, habkani wuxuu qayb ahaan hagaajiyay jiritaanka qaybaha wadnaha, laakiin si buuxda uma uusan ilaalin daacadnimadooda qaabdhismeedka. Sidaa darteed, ka dib markii la baaray molecule yar, waxaan ogaanay in ku darista 100 nM triiodothyronine (T3) iyo 1 μM dexamethasone (Dex) ee dhexdhexaadkayaga ay ilaalisay qaab-dhismeedka yar ee qaybaha muddo 12 maalmood ah. Iyada oo lagu daray daaweynta T3/Dex, nidaamka CTCM wuxuu ilaaliyay astaamaha qoraalka, jiritaanka, dhaqdhaqaaqa dheef-shiid kiimikaadka, iyo daacadnimada qaab-dhismeedka isla heerka unugyada wadnaha cusub muddo 12 maalmood ah. Intaa waxaa dheer, fidinta xad dhaafka ah ee unugyada wadnaha ee dhaqanka waxay kicisaa calaamadaynta wadnaha ee hypertrophic, taasoo caddayn u ah awoodda CTCM ay u leedahay inay ku dayato xaaladaha hypertrophic ee ay keento fiditaanka wadnaha. Gunaanadkii, CTCM waxay tusaale u noqon kartaa fiisiyoolajiyadda iyo cudurka wadnaha ee dhaqanka muddo dheer, taasoo suurtogalinaysa baaritaanka daawada ee la isku halleyn karo.
Kahor cilmi-baarista caafimaad, waxaa loo baahan yahay nidaamyo lagu kalsoonaan karo oo ku jira vitro kuwaas oo si sax ah u soo saari kara jawiga jir ahaaneed ee wadnaha aadanaha. Nidaamyada noocan oo kale ah waa inay ku daydaan fidinta farsamada ee isbeddelay, garaaca wadnaha, iyo sifooyinka elektiroonigga ah. Moodooyinka xayawaanka waxaa badanaa loo isticmaalaa goob baaritaan oo loogu talagalay fiisiyoolajiyadda wadnaha oo leh isku hallayn xaddidan oo muujinaysa saameynta daawooyinka ee wadnaha aadanaha1,2. Ugu dambeyntii, Qaabka Tijaabada Dhaqanka Wadnaha ee Ku Habboon (CTCM) waa qaab aad u xasaasi ah oo gaar u ah faragelinta daaweynta iyo daawooyinka kala duwan, oo si sax ah u soo saaraya fiisiyoolajiyadda iyo cudurada wadnaha aadanaha3. Maqnaanshaha nidaamka noocaas ah wuxuu xaddidayaa helitaanka daaweyn cusub oo loogu talagalay wadne xanuunka4,5 wuxuuna horseeday sunta wadnaha ee daroogada oo ah sabab weyn oo looga baxo suuqa6.
Tobankii sano ee la soo dhaafay, siddeed daawo oo aan ahayn kuwa wadnaha iyo xididdada dhiigga ayaa laga saaray isticmaalka kiliinikada sababtoo ah waxay sababaan muddo dheer oo QT ah taasoo horseedaysa garaaca wadnaha iyo dhimashada degdega ah7. Sidaa darteed, waxaa sii kordheysa baahida loo qabo istaraatiijiyado baaritaan oo horudhac ah oo la isku halleyn karo si loo qiimeeyo waxtarka wadnaha iyo sunta. Adeegsiga dhawaan ee unugyada wadnaha ee laga helo unugyada dhiigga ee pluripotent (hiPS-CM) ee ay dadku sababaan baaritaanka daawada iyo baaritaanka sunta ayaa bixiya xal qayb ah dhibaatadan. Si kastaba ha ahaatee, dabeecadda aan qaan gaarin ee hiPS-CMs iyo la'aanta kakanaanta unugyada badan ee unugyada wadnaha ayaa ah xaddidaadyo waaweyn oo habkan ah. Daraasado dhowaan la sameeyay ayaa muujiyay in xaddidaaddan qayb ahaan looga gudbi karo iyadoo la isticmaalayo hiPS-CM hore si loo sameeyo hydrogels unugyada wadnaha wax yar ka dib marka ay bilaabmaan foosha iskeed ah iyo si tartiib tartiib ah u kordheysa kicinta korantada waqti ka dib. Si kastaba ha ahaatee, unugyadan yaryar ee hiPS-CM waxay ka maqan yihiin sifooyinka elektrofisiolojiga iyo qanjidhada ee qaangaarka ah ee myocardium-ka. Intaa waxaa dheer, unugyada wadnaha ee aadanuhu waxay leeyihiin qaab-dhismeed aad u adag, oo ka kooban isku-darka kala duwan ee noocyada unugyada kala duwan, oo ay ku jiraan unugyada endothelial, neurons, iyo fibroblasts stromal, oo ay isku xiran yihiin qaybo gaar ah oo borotiinno matrix extracellular ah. Kala duwanaanshaha tirada unugyada aan wadnaha ahayn11,12,13 ee wadnaha naasleyda qaangaarka ah waa caqabad weyn oo ku wajahan qaabaynta unugyada wadnaha iyadoo la adeegsanayo noocyada unugyada shaqsiga ah. Xaddidaadahan waaweyn waxay xoojinayaan muhiimadda ay leedahay horumarinta hababka lagu kobciyo unugyada wadnaha ee aan shaqaynayn xaaladaha jireed iyo kuwa cudur.
Qaybaha khafiifka ah ee la beeray (300 µm) ee wadnaha aadanaha ayaa la xaqiijiyay inay yihiin qaab rajo leh oo ah myocardium-ka aadanaha oo dhammaystiran. Habkani wuxuu bixiyaa marin u helidda nidaam dhammaystiran oo unugyo badan leh oo 3D ah oo la mid ah unugyada wadnaha aadanaha. Si kastaba ha ahaatee, ilaa 2019, isticmaalka qaybaha wadnaha ee la beeray waxaa xaddiday badbaadada dhaqanka ee gaaban (24 saacadood). Tani waxay sabab u tahay dhowr arrimood oo ay ku jiraan la'aanta fidinta jireed-farsamo, isku-xirka hawada-dareere, iyo isticmaalka warbaahinta fudud ee aan taageerin baahiyaha unugyada wadnaha. Sannadkii 2019, kooxo cilmi-baaris oo dhowr ah ayaa muujiyay in ku-darka arrimaha farsamada ee nidaamyada dhaqanka unugyada wadnaha ay kordhin karto nolosha dhaqanka, hagaajin karto muujinta wadnaha, iyo ku dayan karto cudurka wadnaha. Laba daraasadood oo qurux badan 17 iyo 18 ayaa muujinaya in rarista farsamada hal-geeska ah ay saameyn togan ku leedahay nooca wadnaha inta lagu jiro dhaqanka. Si kastaba ha ahaatee, daraasadahani ma aysan isticmaalin rarista firfircoon ee saddex-geesoodka ah ee wareegga wadnaha, maadaama qaybaha wadnaha lagu raray mid ka mid ah awoodaha isometric tensile 17 ama rarista toosan ee auxotonic 18. Hababkaan fidinta unugyada waxay keeneen in la xakameeyo hiddo-sideyaal badan oo wadnaha ah ama muujinta xad-dhaafka ah ee hiddo-sideyaasha la xiriira jawaabaha fidinta aan caadiga ahayn. Si gaar ah, Pitoulis et al. 19 waxay sameeyeen qubeys dhaqameed oo firfircoon oo loogu talagalay dib-u-dhiska wareegga wadnaha iyadoo la adeegsanayo jawaab celinta qalabka gudbinta xoogga iyo kicinta xiisadda. Inkasta oo nidaamkani uu u oggolaanayo qaabaynta wareegga wadnaha ee in vitro sax ah, kakanaanta iyo wax-soo-saarka hooseeya ee habka ayaa xaddidaya isticmaalka nidaamkan. Shaybaadhkayagu wuxuu dhawaan sameeyay nidaam dhaqameed oo fudud oo isticmaalaya kicinta korantada iyo dhexdhexaad la hagaajiyay si loo ilaaliyo jiritaanka qaybaha hilibka doofaarka iyo unugyada wadnaha aadanaha ilaa 6 maalmood20,21.
Qoraalka hadda jira, waxaan ku sharraxaynaa qaabka dhaqanka unugyada wadnaha (CTCM) iyadoo la adeegsanayo qaybo ka mid ah wadnaha doofaarka oo ku daraya tilmaamo qosol leh si loo soo celiyo fiisiyoolajiyada wadnaha ee saddex-geesoodka ah iyo kala-goysyada cudurada inta lagu jiro wareegga wadnaha. CTCM-kani wuxuu kordhin karaa saxnaanta saadaasha daawada kahor-kiliinikada ilaa heer aan hore loo gaarin iyadoo la bixinayo nidaam wadne oo kharash-ool ah, oo dhexdhexaad ah kaas oo ku dayanaya fiisiyoolajiyada/cudurka wadnaha ee naasleyda si loogu sameeyo baaritaanka daawada kahor-kiliinikada.
Calaamadaha farsamada ee hemodynamic waxay door muhiim ah ka ciyaaraan ilaalinta shaqada wadnaha iyo xididdada dhiigga ee ku jira vitro 22,23,24. Qoraalka hadda jira, waxaan soo saarnay CTCM (Jaantuska 1a) kaas oo ku dayan kara jawiga wadnaha ee dadka waaweyn isagoo kicinaya kicinta korontada iyo farsamada labadaba ee mawjadaha jir ahaaneed (1.2 Hz, 72 garaac daqiiqaddii). Si looga fogaado fidinta unugyada xad-dhaafka ah inta lagu jiro diastole, qalab daabacan oo 3D ah ayaa loo isticmaalay in lagu kordhiyo cabbirka unugyada 25% (Jaantuska 1b). Xawaaraha korantada ee uu kiciyay nidaamka C-PACE waxaa loo qabtay inuu bilaabo 100 ms ka hor systole iyadoo la adeegsanayo nidaam xog ururin ah si uu si buuxda u soo saaro wareegga wadnaha. Nidaamka dhaqanka unugyada wuxuu isticmaalaa hawl-wadeen pneumatic ah oo la barnaamijin karo (LB Engineering, Jarmalka) si uu si wareeg ah ugu ballaariyo xuub silikoon dabacsan si uu u keeno ballaarinta qaybaha wadnaha ee qolka sare. Nidaamka waxaa lagu xiray khad hawo oo dibadda ah iyada oo loo marayo qalab gudbiye cadaadis, kaas oo suurtogal ka dhigay in si sax ah loo hagaajiyo cadaadiska (± 1 mmHg) iyo waqtiga (± 1 ms) (Jaantuska 1c).
a Ku dheji qaybta unugyada giraanta taageerada 7 mm, oo lagu muujiyay buluug, gudaha qolka dhaqanka ee qalabka. Qolka dhaqanka waxaa laga soocaa qolka hawada xuub silikoon khafiif ah oo dabacsan. Dhig gasket qol kasta si looga hortago daadashada. Daboolka qalabka waxaa ku jira elektroodhada garaafka ee bixiya kicinta korantada. b Matalaad sawireed oo qalabka unugyada waaweyn, giraanta hagaha iyo giraanta taageerada. Qaybaha unugyada (bunni) waxaa la dhigaa qalabka weyn iyadoo giraanta hagaha la dhigay godka geeska dibadda ee qalabka. Adigoo isticmaalaya hagaha, si taxaddar leh u dhig giraanta taageerada ee lagu dahaadhay dhejis acrylic ah qaybta unugyada wadnaha. c Garaaf muujinaya wakhtiga kicinta korontada oo ah shaqo cadaadis qolka hawada ah oo uu xakameeyo hawl-wadeenka pneumatic-ka ee la barnaamijin karo (PPD). Qalab xog ururin ah ayaa loo isticmaalay in lagu waafajiyo kicinta korontada iyadoo la adeegsanayo dareemayaasha cadaadiska. Marka cadaadiska qolka dhaqanka uu gaaro heerka la dejiyay, calaamad garaaca wadnaha ayaa loo diraa C-PACE-EM si loo kiciyo kicinta korontada. d Sawirka afar CTCM oo la dhigay shelf-ka incubator-ka. Afar qalab ayaa ku xiran hal PPD iyada oo loo marayo wareegga neef-mareenka, dareemayaasha cadaadiskana waxaa la geliyaa waalka hemostatic si loola socdo cadaadiska wareegga neef-mareenka. Qalab kastaa wuxuu ka kooban yahay lix qaybood oo unugyo ah.
Annagoo adeegsanayna hal hawl-wadeen oo neef-mareenka ah, waxaan awoodnay inaan xakameyno 4 qalab CTCM ah, mid walbana wuxuu qaadi karaa 6 qaybood oo unugyo ah (Jaantuska 1d). CTCM, cadaadiska hawada ee qolka hawada ayaa loo beddelaa cadaadis isku mid ah oo ku jira qolka dareeraha wuxuuna kiciyaa ballaarinta jir ahaaneed ee jeexka wadnaha (Jaantuska 2a iyo Filimka Dheeraadka ah 1). Qiimaynta fidinta unugyada ee 80 mm Hg. Farshaxanka. wuxuu muujiyay fidinta qaybaha unugyada 25% (Jaantuska 2b). Kala fidinta boqolkiiba waxaa la muujiyay inay u dhiganto dhererka sarcomere-ka jirka ee 2.2–2.3 µm si loogu helo kala-goysyada caadiga ah ee qaybta wadnaha17,19,25. Dhaqdhaqaaqa unugyada waxaa lagu qiimeeyay iyadoo la adeegsanayo dejimaha kamaradaha gaarka ah (Jaantuska Dheeraadka ah 1). Ballaca iyo xawaaraha dhaqdhaqaaqa unugyada (Jaantuska 2c, d) waxay u dhigantay fidinta inta lagu jiro wareegga wadnaha iyo waqtiga inta lagu jiro systole iyo diastole (Jaantuska 2b). Kala-goynta iyo xawaaraha unugyada wadnaha inta lagu jiro isku-soo-ururinta iyo nasashada waxay ahaayeen kuwo joogto ah 12 maalmood oo ku jira dhaqanka (Jaantuska 2f). Si loo qiimeeyo saameynta kicinta korontadu ku leedahay isku-dhafka inta lagu jiro dhaqanka, waxaan soo saarnay hab lagu go'aaminayo isku-dhafka firfircoon iyadoo la adeegsanayo algorithm hadh ah (Jaantuska Dheeraadka ah 2a, b) waxaana awoodnay inaan kala saarno isku-dhafka leh kicinta korontada iyo iyada oo aan lahayn. Qaybta isku midka ah ee wadnaha (Jaantuska 2f). Gobolka dhaqaaqa ee la jaray (R6-9), danabku inta lagu jiro kicinta korontada wuxuu ahaa 20% ka sarreeya marka loo eego maqnaanshaha kicinta korontada, taas oo muujinaysa ka qayb qaadashada kicinta korontada ee shaqada isku-dhafka ah.
Raad-raacyo matalaya cadaadiska qolka hawada, cadaadiska qolka dareeraha, iyo cabbiraadaha dhaqdhaqaaqa unugyada ayaa xaqiijinaya in cadaadiska qolku uu beddelo cadaadiska qolka dareeraha, taasoo keenta dhaqdhaqaaq u dhigma oo ah jeexka unugyada. b Raad-raacyo matalaya boqolkiiba fidinta (buluug) ee qaybaha unugyada oo u dhigma boqolkiiba fidinta (liimi). c Dhaqdhaqaaqa la cabbiray ee jeexka wadnaha wuxuu la jaan qaadayaa xawaaraha dhaqdhaqaaqa la cabbiray. (d) Raad-raacyada matalaadda dhaqdhaqaaqa wareegga (xariiqda buluugga ah) iyo xawaaraha (xariiqda dhibcaha oranji) ee jeex wadnaha ah. e Tirada wakhtiga wareegga (n = 19 xaleef koox kasta, laga bilaabo doofaarro kala duwan), waqtiga foosha (n = 19 xaleef koox kasta), waqtiga nasashada (n = 19 xaleef koox kasta, laga bilaabo doofaarro kala duwan), dhaqdhaqaaqa unugyada (n = 25). xaleefyo)/koox ka timid doofaarro kala duwan), xawaaraha ugu sarreeya ee systolic (n = 24(D0), xaleefyo 25(D12)/koox ka timid doofaarro kala duwan) iyo heerka nasashada ugu sarreysa (n = 24(D0), xaleefyo 25(D12)/koox ka timid doofaarro kala duwan). Imtixaanka t-ga ee Ardayga laba-dabo leh ma muujin farqi weyn oo ku yimid halbeeg kasta. f Raad-raaca falanqaynta cadaadiska ee qaybaha unugyada oo leh (casaan) iyo aan lahayn kicinta korontada (buluug), toban meelood oo goboleed oo qaybaha unugyada ah oo ka socda isla qaybtaas. Guddiyada hoose waxay muujinayaan qiyaasta farqiga boqolleyda ee cadaadiska qaybaha unugyada oo leh kicinta korontada iyo aan lahayn toban meelood oo ka socda qaybo kala duwan. (n = 8 xaleef/koox oo ka yimid doofaarro kala duwan, Tijaabada t-ga ee Ardayga Laba-dabo leh ayaa la sameeyaa; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05). (n = 8 xaleef/koox oo ka yimid doofaarro kala duwan, Tijaabada t-ga ee Ardayga Laba-dabo leh ayaa la sameeyaa; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05). (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; ****p<0,0001, **p<0,01). (n = 8 qaybood/koox oo ka kala yimid doofaarro kala duwan, imtixaanka t-ga ee ardayga oo laba-dabo leh; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05). (n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验： (n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验： (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05). (n = 8 qaybood/koox, oo ka yimid doofaarro kala duwan, imtixaanka t-ga ee ardayga oo laba-dabo leh; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05).Baararka khaladaadka waxay matalaan celceliska ± heerka leexashada.
Nidaamkii hore ee dhaqanka biomimetic-ga wadnaha ee aan caadiga ahayn [20, 21], waxaan ilaalinay jiritaanka, shaqada, iyo hufnaanta qaab-dhismeedka qaybaha wadnaha muddo 6 maalmood ah annagoo adeegsanayna kicinta korantada iyo hagaajinta isku-dhafka dhexdhexaadka ah. Si kastaba ha ahaatee, ka dib 10 maalmood, tirooyinkani si weyn ayay hoos ugu dhaceen. Waxaan tixraaci doonnaa qaybaha lagu beeray nidaamkii hore ee dhaqanka biomimetic-ga ee aan caadiga ahayn 20, 21 xaaladaha xakamaynta (Ctrl) waxaanan u isticmaali doonnaa dhexdhexaadkayagii hore ee la hagaajiyay sida xaaladaha MC iyo dhaqanka iyadoo la adeegsanayo kicinta farsamada iyo korontada isku mar (CTCM). oo la yiraahdo . Marka hore, waxaan go'aansannay in kicinta farsamada iyada oo aan lahayn kicinta korontada aysan ku filnayn inay ilaaliso jiritaanka unugyada muddo 6 maalmood ah (Jaantuska Dheeraadka ah 3a, b). Waxaa xiiso leh, iyadoo la soo bandhigay kicinta fiisiyo-farsamo iyo koronto iyadoo la adeegsanayo STCM, jiritaanka qaybaha wadnaha ee 12-maalmood ah waxay ahayd sidii qaybaha wadnaha cusub ee xaaladaha MS, laakiin ma aha xaaladaha Ctrl, sida lagu muujiyay falanqaynta MTT (Jaantuska 1). 3a). Tani waxay soo jeedinaysaa in kicinta farsamada iyo jilitaanka wareegga wadnaha ay qaybaha unugyada ka dhigi karaan kuwo shaqeynaya laba jeer inta lagu sheegay nidaamkii hore ee dhaqanka aan caadiga ahayn. Si kastaba ha ahaatee, qiimeynta daacadnimada qaabdhismeedka qaybaha unugyada iyadoo la adeegsanayo calaamadaynta difaaca jirka ee troponin wadnaha T iyo connexin 43 waxay muujisay in muujinta connexin 43 ay si weyn uga sarreeyeen unugyada MC maalintii 12aad marka loo eego xakamaynta isla maalintaas. Si kastaba ha ahaatee, muujinta isku midka ah ee connexin 43 iyo sameynta Z-disc si buuxda looma ilaalin (Jaantuska 3b). Waxaan isticmaalnaa qaab-dhismeed sirdoon macmal ah (AI) si loo cabbiro daacadnimada qaab-dhismeedka unugyada26, dhuumaha barashada qoto dheer ee ku salaysan sawirka oo ku salaysan troponin-T iyo connexin staining43 si toos ah loogu cabbiro daacadnimada qaab-dhismeedka iyo iftiinka qaybaha wadnaha marka loo eego xoogga deegaanka. Habkani wuxuu adeegsadaa Shabakadda Neural Network Convolutional (CNN) iyo qaab-dhismeed waxbarasho oo qoto dheer si loogu kalsoonaan karo in lagu qiyaaso daacadnimada qaab-dhismeedka unugyada wadnaha si otomaatig ah oo aan eex lahayn, sida lagu sharaxay tixraaca. 26. Unugyada MC waxay muujiyeen isku ekaanshaha qaab-dhismeedka oo la hagaajiyay maalinta 0aad marka la barbar dhigo qaybaha xakamaynta ee taagan. Intaa waxaa dheer, rinjiga trichrome-ka ee Masson wuxuu muujiyay boqolkiiba fibrosis aad uga hooseeya xaaladaha MS marka la barbar dhigo xaaladaha xakamaynta maalinta 12aad ee dhaqanka (Jaantuska 3c). In kasta oo CTCM ay kordhisay jiritaanka qaybaha unugyada wadnaha maalintii 12aad ilaa heer la mid ah kan unugyada wadnaha ee cusub, haddana si weyn uma aysan horumarin qaab-dhismeedka qaybaha wadnaha.
Shaxda Bar waxay muujinaysaa qiyaasta jiritaanka MTT ee xaleefyada wadnaha cusub (D0) ama dhaqanka xaleefyada wadnaha muddo 12 maalmood ah mid ahaan dhaqanka taagan (D12 Ctrl) ama CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), xaleefyada 12 (D12 MC) ee ka yimid doofaarro kala duwan, hal dariiqo oo lagu sameeyo baaritaanka ANOVA; ####p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo **p < 0.01 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). Shaxda Bar waxay muujinaysaa qiyaasta jiritaanka MTT ee xaleefyada wadnaha cusub (D0) ama dhaqanka xaleefyada wadnaha muddo 12 maalmood ah mid ahaan dhaqanka taagan (D12 Ctrl) ama CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), xaleefyada 12 (D12 MC) ee ka yimid doofaarro kala duwan, hal dariiqo oo lagu sameeyo baaritaanka ANOVA; ####p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo **p < 0.01 marka la barbar dhigo D12 Ctrl).Histogram-ku wuxuu muujinayaa qiyaasta jiritaanka qaybaha wadnaha cusub ee MTT (D0) ama dhaqanka qaybaha wadnaha muddo 12 maalmood ah oo ku jira dhaqanka joogtada ah (xakamaynta D12) ama CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (xakamaynta D12). ) ), 12 (D12 MC) qaybaha/kooxaha ka yimid doofaarro kala duwan, tijaabo hal-dhinac ah oo ANOVA ah ayaa la sameeyaa;####p <0,0001 по сравнению с D0 и **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo **p < 0.01 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切片(D0)或心脏切片培养12 天的MTT 活力的量化)，来自不同猪的12 (D12 MC)相比，####p <0.0001，与D12 Ctrl 相比，**p <0.01) a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切片(D0) ，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 相比。histogram-ka oo muujinaya qiyaasta jiritaanka MTT ee qaybaha wadnaha cusub (D0) ama qaybaha wadnaha ee lagu beeray muddo 12 maalmood ah dhaqanka joogtada ah (xakamaynta D12) ama CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (xakamaynta D12)), 12 (D12 MC) qaybaha/kooxaha laga soo bilaabo doofaarro kala duwan, baaritaanka hal-dhinac ee ANOVA;####p <0,0001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0, **p < 0.01 marka la barbar dhigo D12 Ctrl).b Troponin-T (cagaar), connexin 43 (casaan) iyo DAPI (buluug) qaybaha wadnaha ee cusub ee go'doonsan (D0) ama qaybaha wadnaha ee lagu beeray xaalado aan joogto ahayn (Ctrl) ama xaaladaha CTCM (MC) muddo 12 maalmood ah) oo ah sawirro matalaya immunofluorescence (miisaanka madhan = 100 µm). Cabbiraadda sirdoonka macmal ah ee qaab-dhismeedka unugyada wadnaha (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) oo xaleef/koox ah midkiiba laga soo bilaabo doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA ayaa la sameeyaa; ####p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). Cabbiraadda sirdoonka macmal ah ee qaab-dhismeedka unugyada wadnaha (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) oo xaleef/koox ah midkiiba laga soo bilaabo doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA ayaa la sameeyaa; ####p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). Количественная оценка структурной целостности сердечной ткани искусственным интеллектом (n = 7 (D0), 7 (D15), 7 (D12) срезов/групп от разных свиней, проводится однофакторный тест ANOVA; ####p <0,0001 p D12 Ctrl). Tirinta qaab-dhismeedka unugyada wadnaha iyadoo loo marayo sirdoonka macmalka ah (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) qaybo/kooxo ka yimid doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ah ee ANOVA ayaa la sameeyay; ####p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl).人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) xabbado/koox kasta oo doofaarro kala duwan ah, hal-way imtixaan ANOVA;#0#0#0相比，****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) xabbado/koox kasta oo doofaarro kala duwan ah, hal-way imtixaan ANOVA;#0##0与D0相比，****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比）。 Искусственный интеллект для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (n) срезов/группу каждой из разных свиней, односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001 vs. D0 Для сравнения ****p <0,2 Ctrl). Sirdoonka macmalka ah si loo qiyaaso daacadnimada qaabdhismeedka unugyada wadnaha (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) qaybo/koox mid kasta oo ka mid ah doofaarrada kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA; ####p<0.0001 vs .D0 Isbarbardhigga ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). c Sawiro matalaad ah (bidix) iyo cabbir (midig) oo loogu talagalay xaleefyada wadnaha ee lagu rinjiyeeyay wasakhda saddex-geesoodka ah ee Masson (Miisaanka bareega ah = 500 µm) (n = 10 xaleef/koox midkiiba oo ka yimid doofaar kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA ayaa la sameeyaa; ####p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo ***p < 0.001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). c Sawiro matalaad ah (bidix) iyo cabbir (midig) oo loogu talagalay xaleefyada wadnaha ee lagu rinjiyeeyay wasakhda saddex-geesoodka ah ee Masson (Miisaanka bareeraha = 500 µm) (n = 10 xaleef/koox midkiiba oo ka yimid doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA ayaa la sameeyaa; #### p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo ***p < 0.001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). c Репрезентативные изображения Массона (масштаб без покрытия = 500 мкм) (n = 10 срезов/группу от разных свиней, выполняется # pодностор 0,0001 по сравнению с D0 и ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c Sawirrada matalaadda (bidix) iyo cabbirka (midig) ee qaybaha wadnaha oo lagu rinjiyeeyay wasakhda saddex-geesoodka ah ee Masson (cabirka aan dahaarka lahayn = 500 µm) (n = 10 qaybood/koox oo ka yimid doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA ayaa la sameeyay; #### p < 0 .0001 marka la barbar dhigo D0 iyo ***p < 0.001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸尺度（（右）（裸尺度） = 50.个切片/组，每组来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p <0.0001相比) C 用 masson 三 色 染料裸尺度 = 500 µm） （n = 10 个 切片 组 每 组 来自 不同 猪 ， 进行 单向 单向 Anova#p. 0.0001 与D0 相比，***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）。 c Репрезентативные изображения Массона ( чистая шкала = 500 мкм ) (n = 10 срезов/группа однофакторного дисперсионного анализа ;### #p <0,0001 по сравнению с D0, ***p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c Sawirrada matalaadda (bidix) iyo tirada (midig) ee qaybaha wadnaha oo lagu rinjiyeeyay wasakhda saddex-geesoodka ah ee Masson (madhan = 500 µm) (n = 10 qaybood/koox, mid walba oo ka yimid doofaar kala duwan, oo lagu tijaabiyay falanqayn hal dhinac ah oo kala duwanaanshaha ah;### # p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0, ***p < 0.001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl).Baararka khaladaadka waxay matalaan celceliska ± heerka leexashada.
Waxaan qiyaasnay ​​in iyadoo lagu darayo molecules yaryar bartamaha dhaqanka, hufnaanta wadnaha iyo xididdada dhiigga ayaa la hagaajin karaa, horumarka fibrosis-kana la dhimi karaa inta lagu jiro dhaqanka CTCM. Sidaa darteed, waxaan baarnay molecules yaryar iyadoo la adeegsanayo dhaqamadeenna xakamaynta joogtada ah20,21 sababtoo ah tirada yar ee arrimaha wareerka leh. Dexamethasone (Dex), triiodothyronine (T3), iyo SB431542 (SB) ayaa loo doortay shaashaddan. Molecules-kan yaryar ayaa hore loogu isticmaalay dhaqamada hiPSC-CM si loo kiciyo bislaanshaha unugyada wadnaha iyadoo la kordhinayo dhererka sarcomere, T-tubules, iyo xawaaraha gudbinta. Intaa waxaa dheer, Dex (glucocorticoid) iyo SB labadaba waxaa loo yaqaanaa inay xakameeyaan caabuqa29,30. Sidaa darteed, waxaan tijaabinay in ku darista mid ama isku darka molecules-kan yaryar ay hagaajin doonto hufnaanta qaabdhismeedka qaybaha wadnaha. Baaritaanka bilowga ah, qiyaasta isku-darka kasta waxaa lagu xushay iyadoo lagu saleynayo uruurinta inta badan loo isticmaalo moodooyinka dhaqanka unugyada (1 μM Dex27, 100 nM T327, iyo 2.5 μM SB31). Ka dib 12 maalmood oo la beeray, isku-darka T3 iyo Dex wuxuu keenay hufnaan qaab-dhismeedka wadnaha iyo xididdada dhiigga oo wanaagsan iyo dib-u-habeyn yar oo ku dhaca xuubka (Jaantusyada Dheeraadka ah 4 iyo 5). Intaa waxaa dheer, isticmaalka labanlaab ama labanlaab tiradan ee T3 iyo Dex waxay soo saartay saameyn xun marka loo eego tirada caadiga ah (Jaantuska Dheeraadka ah 6a, b).
Ka dib markii aan baaritaan bilow ah sameynay, waxaan sameynay isbarbardhig madax-ilaa-madax ah oo ku saabsan 4 xaaladood oo dhaqan (Jaantuska 4a): Ctrl: qaybaha wadnaha ee lagu beeray dhaqankeenna aan hore u sharraxnay iyadoo la adeegsanayo habkayaga la hagaajiyay; 20.21 TD: T3 iyo Ctrl s oo lagu daray Dex Arbacadii; MC: qaybaha wadnaha ee lagu beeray CTCM iyadoo la isticmaalayo habkayaga hore loo hagaajiyay; iyo MT: CTCM oo leh T3 iyo Dex oo lagu daray habka. Ka dib 12 maalmood oo beerista ah, jiritaanka unugyada MS iyo MT waxay ahaayeen sidii unugyada cusub ee lagu qiimeeyay baaritaanka MTT (Jaantuska 4b). Waxaa xiiso leh, ku darista T3 iyo Dex ee dhaqamada transwell (TD) ma aysan keenin horumar weyn oo ku yimaada jiritaanka marka la barbar dhigo xaaladaha Ctrl, taasoo muujinaysa door muhiim ah oo kicinta farsamada ah ee ilaalinta jiritaanka qaybaha wadnaha.
Jaantuska naqshadeynta tijaabada ah ee muujinaya afarta xaaladood ee dhaqanka ee loo isticmaalo in lagu qiimeeyo saameynta kicinta farsamada iyo kaabista T3/Dex ee dhexdhexaadka ah muddo 12 maalmood ah. b Shaxda bar waxay muujinaysaa qiyaasta jiritaanka 12 maalmood ka dib dhaqanka dhammaan 4ta xaaladood ee dhaqanka (Ctrl, TD, MC, iyo MT) marka la barbar dhigo xaleefyada wadnaha cusub (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MT), xaleefyada 12 (D12 MC) ee ka yimid doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ah ee ANOVA ayaa la sameeyaa; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 marka la barbar dhigo D0 iyo **p < 0.01 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). b Jaantuska b wuxuu muujinayaa qiyaasta jiritaanka 12 maalmood ka dib dhaqanka dhammaan 4ta xaaladood ee dhaqanka (Ctrl, TD, MC, iyo MT) marka la barbar dhigo xaleefyada wadnaha cusub (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MT), xaleefyada 12 (D12 MC) ee ka yimid doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ah ee ANOVA ayaa la sameeyaa; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 marka la barbar dhigo D0 iyo **p < 0.01 marka la barbar dhigo D12 ctrl). b Гистограмма показывает количественную оценку песни: культивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со сравнению MC) срезов/группу от разных свиней, проводится односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001, ###p <0,001 по сравнению с D0 и **p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl). b Shaxda bar waxay muujinaysaa qiyaasta noolaanshaha 12 maalmood ka dib dhaqanka dhammaan 4ta xaaladood ee dhaqanka (xakamaynta, TD, MC, iyo MT) marka la barbar dhigo qaybaha wadnaha cusub (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, iyo D12 MT), 12 (D12 MC) qaybaha/kooxaha laga soo bilaabo doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 vs. D0 iyo **p < 0.01 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). b 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) (n = 18 (D0)和D12 MT)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 0.01 与D12控制）b 4 12 (D12 MC) b Гистограмма, показывающая все 4 условия культивирования (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MT), от разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односто роронтый тест ANOVA; <0,001 по сравнению с D0, **p <0,01 по сравнению с контролем D12). b Histogram oo muujinaya dhammaan 4ta xaaladood ee dhaqanka (xakamaynta, TD, MC iyo MT) marka la barbar dhigo qaybaha wadnaha cusub (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MT), laga bilaabo doofaarro kala duwan 12 (D12 MC) qaybaha/kooxaha, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA; ####p<0.0001, ###p<0.001 vs. D0, **p<0.01 vs. xakamaynta D12). c Shaxda bar waxay muujinaysaa qiyaasta qulqulka gulukooska 12 maalmood ka dib dhaqanka dhammaan 4ta xaaladood ee dhaqanka (Ctrl, TD, MC, iyo MT) marka la barbar dhigo xaleefyada wadnaha ee cusub (D0) (n = 6 xaleef/koox ka timid doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA ayaa la sameeyaa; ###p < 0.001, marka la barbar dhigo D0 iyo ***p < 0.001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). c Shaxda bar waxay muujinaysaa qiyaasta qulqulka gulukooska 12 maalmood ka dib dhaqanka dhammaan 4ta xaaladood ee dhaqanka (Ctrl, TD, MC, iyo MT) marka la barbar dhigo xaleefyada wadnaha ee cusub (D0) (n = 6 xaleef/koox ka timid doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA ayaa la sameeyaa; ###p < 0.001, marka la barbar dhigo D0 iyo ***p < 0.001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). c Гистограмма показывает количественую оценку потока глюкозы через 12 культивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению односторонний Выполняется тест ANOVA; c Histogram wuxuu muujinayaa qiyaasta qulqulka gulukooska 12 maalmood kadib dhaqanka iyadoo la raacayo dhammaan 4ta xaaladood ee dhaqanka (xakamaynta, TD, MC iyo MT) marka la barbar dhigo qaybaha wadnaha cusub (D0) (n = 6 qaybood/koox oo ka yimid doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA ayaa la sameeyay; ###p < 0.001 marka la barbar dhigo D0 iyo ***p < 0.001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). c.天的葡萄糖通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测行ANOVA 0.001 与D12 Ctrl 相比） C 条形图 显示 所有 4 种 条件 （（ctrl 、 td 、 mc培养 后 12 天 的 通量 定量 （n = 6测试；###p <0.001，与D0 相比，***p <0.001 与D12 Ctrl 相比）。 c Гистограмма, показывающая количественную оценку условий культивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению свиней, односторонний Были проведены тесты ANOVA; D12 (qashin). c Histogram muujinaya qiyaasta qulqulka gulukooska 12 maalmood kadib dhaqanka dhammaan 4ta xaaladood ee dhaqanka (xakamaynta, TD, MC, iyo MT) marka la barbar dhigo qaybaha wadnaha cusub (D0) (n = 6 qaybood/koox, laga soo bilaabo doofaarro kala duwan, hal dhinac. Tijaabooyinka ANOVA ayaa la sameeyay, ###p < 0.001 marka la barbar dhigo D0, ***p < 0.001 marka la barbar dhigo D12 (xakamaynta).d Saadaasha falanqaynta cadaadiska ee unugyada cusub (buluug), maalinta 12aad MC (cagaar), iyo maalinta 12aad MT (casaan) ee toban dhibcood oo ah qaybaha unugyada gobolka (n = 4 xaleef/koox, baaritaanka hal-dhinac ANOVA; ma jirin farqi weyn oo u dhexeeya kooxaha). e Saadaasha foolkaanada oo muujinaysa hiddo-sideyaal si kala duwan u muujiyay qaybaha wadnaha cusub (D0) marka la barbar dhigo qaybaha wadnaha ee lagu beeray xaaladaha taagan (Ctrl) ama xaaladaha MT (MT) muddo 10-12 maalmood ah. f Khariidadda kulaylka ee hiddo-sideyaasha sarcomere ee qaybaha wadnaha ee lagu beeray xaaladaha dhaqanka mid kasta. Baararka khaladaadka waxay matalaan celceliska ± heerka leexashada.
Ku tiirsanaanta dheef-shiid kiimikaadka ee beddelka oksaydhka aashitada dufanka leh una gudubta glycolysis waa astaan ​​​​u ah kala duwanaanshaha wadnaha iyo xididdada dhiigga. Unugyada wadnaha ee aan qaan gaarin waxay inta badan isticmaalaan gulukooska wax soo saarka ATP waxayna leeyihiin mitochondria hypoplastic oo leh cristae yar5,32. Falanqaynta isticmaalka gulukooska waxay muujisay in xaaladaha MC iyo MT, isticmaalka gulukoosku uu la mid yahay kan unugyada maalinta 0 (Jaantuska 4c). Si kastaba ha ahaatee, muunadaha Ctrl waxay muujiyeen koror weyn oo ku yimid isticmaalka gulukooska marka loo eego unugyada cusub. Tani waxay muujinaysaa in isku-darka CTCM iyo T3/Dex uu kor u qaado jiritaanka unugyada wuxuuna ilaaliyaa nooca dheef-shiid kiimikaadka ee qaybaha wadnaha ee 12-maalmood lagu beeray. Intaa waxaa dheer, falanqaynta cadaadiska waxay muujisay in heerarka cadaadiska ay la mid ahaayeen unugyada wadnaha ee cusub muddo 12 maalmood ah xaaladaha MT iyo MS (Jaantuska 4d).
Si loo falanqeeyo saameynta guud ee CTCM iyo T3/Dex ee muuqaalka qoraalka caalamiga ah ee unugyada xabadaha wadnaha, waxaan ku sameynay RNAseq xaleefyada wadnaha ee ka yimid dhammaan afarta xaaladood ee dhaqanka kala duwan (Xogta Dheeraadka ah 1). Waxaa xiiso leh, qaybaha MT waxay muujiyeen isku ekaanshaha qoraalka sare ee unugyada wadnaha cusub, iyadoo 16 oo keliya ay si kala duwan u muujiyeen 13,642 hiddo-side. Si kastaba ha ahaatee, sida aan horay u tusnay, xaleefyada Ctrl waxay muujiyeen 1229 hiddo-sideyaal oo si kala duwan loo muujiyay ka dib 10-12 maalmood oo dhaqanka ah (Jaantuska 4e). Xogtan waxaa xaqiijiyay qRT-PCR ee hiddo-sideyaasha wadnaha iyo fibroblast (Jaantuska Dheeraadka ah 7a-c). Waxaa xiiso leh, qaybaha Ctrl waxay muujiyeen hoos u dhaca hiddo-sideyaasha wareegga wadnaha iyo unugyada iyo kicinta barnaamijyada hiddo-sideyaasha bararka. Xogtani waxay soo jeedinaysaa in kala-soocidda, oo caadiyan dhacda ka dib koritaanka muddada dheer, si buuxda loo yareeyo xaaladaha MT (Jaantuska Dheeraadka ah 8a,b). Daraasad taxaddar leh oo lagu sameeyay hiddo-sidayaasha sarcomere ayaa muujisay in xaaladaha MT oo keliya ay hiddo-sidayaasha ku jira sarcomere-ka (Jaantuska 4f) iyo kanaalka ion-ka (Jaantuska Dheeraadka ah ee 9) la ilaaliyo, iyagoo ka ilaalinaya xakamaynta xaaladaha Ctrl, TD, iyo MC. Xogtani waxay muujinaysaa in isku-darka kicinta farsamada iyo humoral (T3/Dex), qoraalka wadnaha ee la jarjaray wuxuu sii ahaan karaa mid la mid ah xaleefyada wadnaha cusub ka dib 12 maalmood oo dhaqanka ah.
Natiijooyinkan qoraalka ah waxaa taageeraya xaqiiqda ah in daacadnimada qaabdhismeedka unugyada wadnaha ee qaybaha wadnaha si fiican loogu ilaaliyo xaaladaha MT muddo 12 maalmood ah, sida lagu muujiyay isku-xidhka 43 ee aan cillad lahayn iyo kan maxalliga ah (Jaantuska 5a). Intaa waxaa dheer, fibrosis-ka qaybaha wadnaha ee xaaladaha MT ayaa si weyn hoos loogu dhigay marka la barbar dhigo Ctrl iyo kuwa la mid ah qaybaha wadnaha ee cusub (Jaantuska 5b). Xogtani waxay muujinaysaa in isku-darka kicinta farsamada iyo daaweynta T3/Dex ay si wax ku ool ah u ilaaliso qaab-dhismeedka wadnaha ee qaybaha wadnaha ee dhaqanka.
Sawirrada difaaca jirka ee matalaya troponin-T (cagaar), connexin 43 (casaan), iyo DAPI (buluug) qaybaha wadnaha ee cusub ee go'doonsan (D0) ama lagu beeray 12 maalmood dhammaan xaaladaha dhaqanka qaybta wadnaha ee afarta ah (cabirka cabbirka = 100 µm). Cabbiraadda sirdoonka macmal ah ee qaab-dhismeedka unugyada wadnaha (n = 7 (D0 iyo D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC iyo D12 MT) oo laga soo qaaday doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA ayaa la sameeyaa; ####p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo *p < 0.05, ama ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). Cabbiraadda sirdoonka macmal ah ee qaab-dhismeedka unugyada wadnaha (n = 7 (D0 iyo D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC iyo D12 MT) oo laga soo qaaday doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA ayaa la sameeyaa; #### p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo *p < 0.05, ama ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). Количественная оценка структурной целостности ткани сердца с помощью D12 MC и D12 MT) срезов/группу от разных свиней, проведен однофакторный тест ANOVA; или ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). Tirinta qaab-dhismeedka unugyada wadnaha iyadoo la adeegsanayo sirdoonka macmalka ah (n = 7 (D0 iyo D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC iyo D12 MT) qaybaha/kooxaha doofaarrada kala duwan, tijaabada hal-dhinac ah ee ANOVA ayaa la sameeyay; #### p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo *p < 0.05 ama ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl).对不同猪的心脏组织结构完整性（n=7（D0 MT）切片/组）行人工智能量化，进行单向ANOVA 测试；### p <0.0001 世****D0 和*p <0.05 0.05与D12 Ctrl 相比）对 不同智能量 化 进行 单向 单向 单向 测试 ； ######## p <0.0001 与D0 和*p <0.05 相比1 Ctrl 相比)Tirinta isku-dhafka qaab-dhismeedka unugyada wadnaha iyadoo la adeegsanayo sirdoonka macmalka ah ee doofaarro kala duwan (n = 7 (D0 iyo D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC iyo D12 MT) qaybaha/kooxaha) iyadoo la adeegsanayo baaritaanka hal-dhinac ah ee ANOVA;#### p <0,0001 по сравнению с D0 и *p <0,05 или ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). #### p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo *p < 0.05 ama ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). b Sawirro matalaya iyo cabbiraadda xaleefyada wadnaha ee lagu rinjiyeeyay wasakhda saddex-geesoodka ah ee Masson (Miisaanka baarka = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, iyo D12 MC), xaleefyo/koox 9 (D12 MT) oo ka yimid doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA ayaa la sameeyaa; ####p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo ***p < 0.001, ama ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). b Sawirro matalaya iyo cabbiraadda xaleefyada wadnaha ee lagu rinjiyeeyay wasakhda saddex-geesoodka ah ee Masson (Miisaanka baarka = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, iyo D12 MC), xaleefyo/koox 9 (D12 MT) oo ka yimid doofaarro kala duwan, tijaabada hal-dhinac ee ANOVA ayaa la sameeyaa; ####p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0 iyo ***p < 0.001, ama ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl). b Репрезентативные линейка = 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MC), 9 (D12 MT) ANOVA; ####p <0,0001 по сравнению с D0 и ***p <0,001 (D12 Ctrl). b Sawirro matalaya iyo cabbiraadda qaybaha wadnaha oo lagu rinjiyeeyay wasakhda saddex-geesoodka ah ee Masson (bar cabbirka = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MC), qaybaha/kooxaha 9 (D12 MT) ee doofaarro kala duwan, oo lagu sameeyay hal-dhinac ANOVA; ####p < 0.0001 vs. D0 iyo ***p < 0.001 ama ****p < 0.0001 vs. D12 Ctrl). b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺= 500 µm）（n = 10 TD 和D12 MC），来自不同猪的9 个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分析；####p <0 0.0.相比，***p <0.001，或****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比） b 用 masson 三 色 染料 的 心脏 切片ctrl 、 d12 td 和 d12 mc） 来自 不同 的 9 个 d12 mt 切片 切片 切片切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片/组，进行单因素方差分析；*####p <0.0001 0.001,或****p <0.0001 与D12 Ctrl 相比） b Репрезентативные 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MC), 9 (D12 MT) сравнению с D0, ***p <0,001 ama ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b Sawirro matalaya iyo cabbiraadda qaybaha wadnaha oo lagu rinjiyeeyay saddex-xagalka Masson (bar cabbirka = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD iyo D12 MC), 9 qaybood (D12 MT) oo ka yimid doofaarro/kooxo kala duwan, hal hab oo ANOVA ah; ####p < 0.0001 marka la barbar dhigo D0, ***p < 0.001 ama ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo D12 Ctrl).Baararka khaladaadka waxay matalaan celceliska ± heerka leexashada.
Ugu dambeyntii, awoodda CTCM ee ay ku dayato dhiigkarka wadnaha ayaa lagu qiimeeyay iyadoo la kordhinayo fidinta unugyada wadnaha. CTCM, cadaadiska qolka hawada ugu sarreeya ayaa ka kordhay 80 mmHg ilaa 80 mmHg. Farshaxan (fidinta caadiga ah) ilaa 140 mmHg Farshaxan. (Sawirka 6a). Tani waxay u dhigantaa koror 32% ah oo fidin ah (Sawirka 6b), kaas oo hore loo muujiyay inuu yahay boqolleyda fidinta u dhiganta ee loo baahan yahay qaybaha wadnaha si loo gaaro dhererka sarcomere oo la mid ah kan lagu arkay dhiigkarka. Fidinta iyo xawaaraha unugyada wadnaha inta lagu jiro foosha iyo nasashada ayaa ahaa mid joogto ah lix maalmood oo dhaqan ah (Sawirka 6c). Unugyada wadnaha ee ka yimid xaaladaha MT waxaa la saaray fiditaan caadi ah (MT (Normal)) ama xaalado fidsanaan xad dhaaf ah (MT (OS)) muddo lix maalmood ah. Ka dib afar maalmood oo dhaqan ah, calaamadeeyaha hypertrophic NT-ProBNP ayaa si weyn kor ugu kacay dhexdhexaadka xaaladaha MT (OS) marka la barbar dhigo xaaladaha MT (caadiga ah) (Sawirka 7a). Intaa waxaa dheer, ka dib lix maalmood oo la beeray, cabbirka unugyada ee MT (OS) (Jaantuska 7b) si weyn ayuu u kordhay marka loo eego qaybaha wadnaha MT (caadi). Intaa waxaa dheer, wareejinta nukliyeerka NFATC4 ayaa si weyn u korodhay unugyada aadka u fidsan (Jaantuska 7c). Natiijooyinkani waxay muujinayaan horumarka sii socda ee dib-u-habaynta cudurrada ka dib marka la joojiyo dhiigga waxayna taageerayaan fikradda ah in qalabka CTCM loo isticmaali karo madal lagu barto calaamadaha dhiig-karka wadnaha ee fidsan.
Raad-raacyo matalaya cadaadiska qolka hawada, cadaadiska qolka dareeraha, iyo cabbiraadaha dhaqdhaqaaqa unugyada ayaa xaqiijinaya in cadaadiska qolku uu beddelo cadaadiska qolka dareeraha, taasoo keenta dhaqdhaqaaq u dhigma oo ah jeexa unugyada. b Boqolleyda fidinta matalaadda iyo qaloocyada heerka fidinta ee qaybaha unugyada ee caadiga ah ee fidsan (liinta) iyo kuwa aadka u fidsan (buluug). c Shaxanka baarka oo muujinaya wakhtiga wareegga (n = 19 xaleef koox kasta, laga bilaabo doofaarro kala duwan), waqtiga foosha (n = 18-19 xaleef koox kasta, laga bilaabo doofaarro kala duwan), wakhtiga nasashada (n = 19 xaleef koox kasta, laga bilaabo doofaarro kala duwan)), baaxadda dhaqdhaqaaqa unugyada (n = 14 xaleef/koox, laga bilaabo doofaarro kala duwan), xawaaraha ugu sarreeya ee systolic (n = 14 xaleef/koox, laga bilaabo doofaarro kala duwan) iyo heerka nasashada ugu sarreysa (n = 14 (D0), 15 (D6) ) qaybaha/kooxaha) laga bilaabo doofaarro kala duwan), imtixaanka t-ga ee ardayga ee laba-dabo leh ma muujin farqi weyn oo ku yimid halbeeg kasta, taasoo muujinaysa in xuduudahani ay ahaayeen kuwo joogto ah intii lagu jiray 6 maalmood oo dhaqan ah oo leh danab xad dhaaf ah. Baararka khaladaadka waxay matalaan celceliska ± leexashada heerka caadiga ah.
a Cabbirka garaafka ee fiirsashada NT-ProBNP ee warbaahinta dhaqanka laga bilaabo xaleefyada wadnaha ee lagu beeray xaaladaha fidinta caadiga ah ee MT (Caadi ahaan) ama fidinta xad dhaafka ah (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, iyo D4 MTOS) xaleefyo/kooxeed oo ka yimid doofaarro kala duwan, ANOVA laba-geesood ah ayaa la sameeyaa; **p < 0.01 marka la barbar dhigo fidinta caadiga ah). a Cabbirka garaafka ee fiirsashada NT-ProBNP ee warbaahinta dhaqanka laga bilaabo xaleefyada wadnaha ee lagu beeray xaaladaha fidinta caadiga ah ee MT (Caadi ahaan) ama fidinta xad dhaafka ah (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, iyo D4 MTOS) xaleefyo/kooxeed oo ka yimid doofaarro kala duwan, ANOVA laba-geesood ah ayaa la sameeyaa; **p < 0.01 marka la barbar dhigo fidinta caadiga ah).Histogram-ka tirada ee fiirsashada NT-ProBNP ee dhexdhexaadka dhaqanka laga bilaabo xaleefyada wadnaha ee lagu beeray xaaladaha fidinta MT ee caadiga ah (caadiga ah) ama fidinta xad-dhaafka ah (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, iyo D4).MTOS) xaleefyada /kooxaha ka yimid doofaarro kala duwan, falanqaynta laba-arrimood ee kala duwanaanshaha ayaa la sameeyaa;**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p < 0.01 marka la barbar dhigo fidinta caadiga ah). a 在MT 正常拉伸(Norm) 或过度拉伸(OS) 条件下培养的心脏切片培养基中NT-ProBNP (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm 和D4) MTOS）来自不同猪的切片/组，进行双向方差分析；**与正常拉伸相比，p <0.01）。 Qaddarinta NT-ProBNP ee jeexjeexyada wadnaha ee hoos yimaada MT-ga caadiga ah (Norm) ama xaaladaha dheeraadka ah (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS)猪的切片/组，可以双向方方发发动 **marka la barbar dhigo iskala-bixinta caadiga ah, p <0.01).histogram-ka Tirada fiirsashada NT-ProBNP ee xaleefyada wadnaha ee lagu beeray xaaladaha fidinta MT ee caadiga ah (caadiga ah) ama fidinta xad-dhaafka ah (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) iyo D4 MTOS) xaleefyo/kooxeed ka yimid doofaarro kala duwan, falanqaynta laba-geesoodka ah ee kala duwanaanshaha;**p <0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p < 0.01 marka la barbar dhigo fidinta caadiga ah). b Sawirrada matalaadda ee xaleefyada wadnaha ee lagu rinjiyeeyay troponin-T iyo WGA (bidix) iyo cabbirka cabbirka unugyada (midig) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) unugyo/koox laga soo bilaabo 10 xaleef oo kala duwan oo ka yimid doofaarro kala duwan, Tijaabada t-ga ee Ardayga Laba-dabo leh ayaa la sameeyaa; ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo fidinta caadiga ah). b Sawirrada matalaadda ee xaleefyada wadnaha ee lagu rinjiyeeyay troponin-T iyo WGA (bidix) iyo cabbirka cabbirka unugyada (midig) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) unugyo/koox laga soo bilaabo 10 xaleef oo kala duwan oo ka yimid doofaarro kala duwan, Tijaabada t-ga Ardayga ee laba-dabo leh ayaa la sameeyaa; ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo fidinta caadiga ah). b Репрезентативные клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) кеток t-критерий Стьюдента; ****p <0,0001 по сравнению с нормальным растяжением). b Sawiro matalaya qaybaha wadnaha oo lagu rinjiyeeyay troponin-T iyo AZP (bidix) iyo cabbirka cabbirka unugyada (midig) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) unugyo/koox ka timid 10 qaybood oo kala duwan oo ka yimid doofaarro kala duwan, baaritaanka t-ga ardayga oo laba-dabo leh ayaa la sameeyay; ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo culeyska caadiga ah). b 用肌钙蛋白-T 和WGA（左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代表）性3： MTOS））来自不同猪的10检验；与正常拉伸相比，****p < 0.0001). b Sawirrada matalaya xaleefyada wadnaha oo lagu rinjiyeeyay calcarein-T iyo WGA (bidix) iyo cabbirka unugga (midig) (n = 330 (D6 MTOS), 369 laga bilaabo 10 xaleef oo kala duwan (D6 MTNorm)) Tijaabada Unugyada/Tijaabada Tijaabada Unugyada； marka la barbar dhigo fidinta caadiga ah，****p < 0.0001). b Репрезентативные (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 различных Стьюдента; ****p <0,0001 по сравнению b Sawiro matalaya qaybaha wadnaha oo lagu rinjiyeeyay troponin-T iyo AZP (bidix) iyo qiyaasta cabbirka unugyada (midig) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) laga bilaabo 10 qaybood oo kala duwan oo ka yimid doofaarro kala duwan) Unugyada/koox, shuruud laba-dabo leh Ardayga t; ****p < 0.0001 marka la barbar dhigo culeyska caadiga ah). c Sawirrada matalaadda ee maalinta 0 iyo maalinta 6. Xabadaha wadnaha MTOS ee lagu calaamadeeyay troponin-T iyo NFATC4 iyo cabbirka wareejinta NFATC4 ee xudunta CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) xabag/koox ka timid doofaarro kala duwan, Imtixaanka t-ga ee Ardayga Laba-dabo leh ayaa la sameeyaa; *p < 0.05). c Sawirrada matalaadda ee maalinta 0 iyo maalinta 6. Gooyooyinka wadnaha MTOS ee lagu calaamadeeyay troponin-T iyo NFATC4 iyo cabbirka wareejinta NFATC4 ee xudunta CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) gooyooyinka/kooxaha doofaarrada kala duwan, Imtixaanka t-ga ee Ardayga Laba-dabo leh ayaa la sameeyaa; *p < 0.05). c Репрезентативные изображения для срезов сердца 0 и 6 дней MTOS, оценка транслокации NFATC4 в ядра кавернозных кеток (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) двусторонний t-критерий Стьюдента; c Sawiro matalaya qaybaha wadnaha ee 0 iyo 6 maalmood MTOS, oo lagu calaamadeeyay difaaca jirka ee troponin-T iyo NFATC4, iyo qiyaasta wareejinta NFATC4 ee xudunta unugyada godadka (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) xaleef/koox ka timid doofaarro kala duwan) ayaa sameeyay tijaabada t-ga ee Ardayga oo laba-dabo leh; *p < 0.05). C 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4 免疫标记的第0 天和第6 天MTOS心脏切片的代表性图像，以及来自不同猪的NFATC4 易位至CM进行双尾学生t 检验；*p <0.05). c Sawirada matalayaasha calcanin-T iyo NFATC4 immunolabeling 第0天和第6天MTOS jeexjeexyada wadnaha, iyo NFATC4 ee NFATC4 kala duwan时间双尾学生et 电影；*p <0.05). c Репрезентативные NFATC4 в ядра CM от разных свиней (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срез/группа, два- хвостатый t-крите; 0,05). c Sawiro matalaya qaybaha wadnaha MTOS maalinta 0 iyo 6 ee loogu talagalay troponin-T iyo NFATC4 ee difaaca jirka iyo cabbirka wareejinta NFATC4 ee xudunta CM ee doofaarro kala duwan (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) xaleef/koox, laba-dabo leh oo t-criterion ah Ardayda; *p < 0.05).Baararka khaladaadka waxay matalaan celceliska ± heerka leexashada.
Cilmi-baarista wadnaha iyo xididdada dhiigga ee turjumaadda waxay u baahan tahay qaabab unugyo ah oo si sax ah u soo saara jawiga wadnaha. Daraasaddan, qalab CTCM ah ayaa la sameeyay oo lagu sifeeyay inuu kicin karo qaybo aad u khafiif ah oo wadnaha ah. Nidaamka CTCM waxaa ka mid ah kicinta elektrolojiga ee isku-dhafan ee jirka iyo kobcinta dareeraha T3 iyo Dex. Markii qaybaha wadnaha doofaarka la soo gudboonaaday arrimahan, jiritaankooda, daacadnimada qaab-dhismeedka, dhaqdhaqaaqa dheef-shiid kiimikaadka, iyo muujinta qoraalka ayaa la mid ahaa unugyada wadnaha cusub ka dib 12 maalmood oo dhaqan ah. Intaa waxaa dheer, fidinta xad-dhaafka ah ee unugyada wadnaha waxay sababi kartaa hypertrophy wadnaha oo ay keento hyperextension. Guud ahaan, natiijooyinkani waxay taageeraan doorka muhiimka ah ee xaaladaha dhaqanka jir ahaaneed ee ilaalinta phenotype wadnaha caadiga ah waxayna bixiyaan goob loogu talagalay baaritaanka daroogada.
Waxyaabo badan ayaa gacan ka geysta abuurista jawi ku habboon shaqada iyo badbaadada unugyada wadnaha. Kuwa ugu cad arrimahan waxay la xiriiraan (1) isdhexgalka unugyada dhexdooda, (2) kicinta elektromekaanikada, (3) arrimaha humoral, iyo (4) substrates-ka dheef-shiid kiimikaadka. Isdhexgalka unugyada-ilaa-unugyada jir ahaaneed waxay u baahan yihiin shabakado saddex-geesood ah oo isku dhafan oo noocyo badan oo unugyo ah oo ay taageerayaan matrix ka baxsan unugyada. Isdhexgalka unugyada ee noocaas ah ee adag way adag tahay in dib loo dhiso in vitro iyadoo la adeegsanayo dhaqanka wadajirka ah ee noocyada unugyada shaqsiga ah, laakiin si fudud ayaa loo gaari karaa iyadoo la adeegsanayo dabeecadda organotypic ee qaybaha wadnaha.
Fidinta farsamada iyo kicinta korantada ee unugyada wadnaha ayaa muhiim u ah ilaalinta phenotype-ka wadnaha33,34,35. Iyadoo kicinta farsamada si weyn loogu isticmaalay xaaladda iyo bislaanshaha hiPSC-CM, dhowr daraasadood oo qurux badan ayaa dhawaan isku dayay kicinta farsamada ee xaleefyada wadnaha ee dhaqanka iyadoo la adeegsanayo rarida hal-geeska ah. Daraasadahani waxay muujinayaan in rarida farsamada 2D uniaxial ay saameyn togan ku leedahay phenotype-ka wadnaha inta lagu jiro dhaqanka. Daraasadahaan, qaybaha wadnaha waxaa lagu raray xoogagga isometric tensile17, rarida toosan ee auxotonic18, ama wareegga wadnaha ayaa la abuuray iyadoo la adeegsanayo jawaab celinta qalabka gudbinta xoogga iyo darawallada xiisadda. Si kastaba ha ahaatee, hababkani waxay isticmaalaan fidinta unugyada hal-geeska ah iyada oo aan la hagaajin deegaanka, taasoo keentay in la xakameeyo hiddo-sideyaal badan oo wadnaha ah ama muujinta xad-dhaafka ah ee hiddo-sideyaasha la xiriira jawaabaha fidinta aan caadiga ahayn. CTCM-ga halkan lagu sharraxay wuxuu bixiyaa kicinta elektaroonigga ah ee 3D kaas oo ku dayanaya wareegga wadnaha ee dabiiciga ah marka loo eego waqtiga wareegga iyo fidinta jirka (25% fidsan, 40% systole, 60% diastole, iyo 72 garaac daqiiqaddii). In kasta oo kicintan farsamo ee saddex-geesoodka ah oo keliya aysan ku filnayn ilaalinta daacadnimada unugyada, haddana isku-darka kicinta humoral iyo farsamada iyadoo la adeegsanayo T3/Dex ayaa loo baahan yahay si si ku filan loogu ilaaliyo jiritaanka unugyada, shaqada, iyo daacadnimada.
Arrimaha humoral-ka ayaa door muhiim ah ka ciyaara hagaajinta nooca wadnaha ee dadka waaweyn. Tan waxaa lagu iftiimiyay daraasadaha HiPS-CM halkaas oo T3 iyo Dex lagu daray warbaahinta dhaqanka si loo dedejiyo bislaanshaha unugyada. T3 waxay saameyn kartaa gaadiidka amino acids, sonkorta iyo kalsiyum ee xuubka unugyada36. Intaa waxaa dheer, T3 waxay kor u qaaddaa muujinta MHC-α iyo hoos u dhaca MHC-β, taasoo kor u qaadaysa sameynta myofibrils-ka degdega ah ee unugyada wadnaha ee bislaaday marka la barbar dhigo myofibrils-ka gaabiska ah ee CM-ga uurjiifka. Yaraanta T3 ee bukaanada hypothyroid waxay keentaa luminta xargaha myofibrillar iyo hoos u dhaca heerka koritaanka codka37. Dex waxay ku shaqeysaa soo-dhoweeyayaasha glucocorticoid waxaana la muujiyay inay kordhiso isku-dhafka wadnaha ee wadnaha ee go'doonsan ee perfused; 38 horumarintan waxaa loo maleynayaa inay la xiriirto saameynta gelitaanka kalsiyum-ku-wado kaydka (SOCE) 39,40. Intaa waxaa dheer, Dex waxay ku xidhaa soo-dhoweeyayaasheeda, taasoo keenta jawaab celin ballaaran oo gudaha ah oo joojisa shaqada difaaca jirka iyo bararka30.
Natiijooyinkayagu waxay muujinayaan in kicinta farsamada jirka (MS) ay wanaajisay waxqabadka dhaqanka guud marka loo eego Ctrl, laakiin waxay ku guuldareysatay inay ilaaliso jiritaanka, daacadnimada qaabdhismeedka, iyo muujinta wadnaha muddo 12 maalmood ah oo dhaqanka ah. Marka la barbardhigo Ctrl, ku darista T3 iyo Dex dhaqamada CTCM (MT) waxay wanaajisay jiritaanka waxayna ilaalisay astaamaha qoraalka ee la midka ah, daacadnimada qaabdhismeedka, iyo dhaqdhaqaaqa dheef-shiid kiimikaadka iyadoo la adeegsanayo unugyada wadnaha cusub muddo 12 maalmood ah. Intaa waxaa dheer, iyadoo la xakameynayo heerka fidinta unugyada, qaab wadne oo kacsan oo ay keento hyperextension ayaa la sameeyay iyadoo la adeegsanayo STCM, taasoo muujinaysa kala duwanaanta nidaamka STCM. Waa in la ogaadaa in inkastoo dib-u-habaynta wadnaha iyo fibrosis ay badanaa ku lug leeyihiin xubno aan isbeddelin oo unugyadooda wareegaya ay bixin karaan cytokines ku habboon iyo sidoo kale phagocytosis iyo arrimo kale oo dib-u-habeyn ah, qaybaha wadnaha ayaa wali ku dayan kara habka fibrotic iyadoo laga jawaabayo walbahaarka iyo dhaawaca. galay myofibroblasts. Tan waxaa hore loogu qiimeeyay qaabkan jeexan wadnaha. Waa in la ogaadaa in xuduudaha CTCM lagu beddeli karo iyadoo la beddelayo cadaadiska/ballaadhka korantada iyo soo noqnoqoshada si loogu daydo xaalado badan sida tachycardia, bradycardia, iyo taageerada wareegga dhiigga farsamada (wadnaha aan la saarin farsamada). Tani waxay ka dhigaysaa nidaamka mid dhexdhexaad ah oo loogu talagalay baaritaanka daroogada. Awoodda CTCM ee lagu daydo dhiig-karka wadnaha ee uu keeno jimicsiga xad-dhaafka ah ayaa wadada u xaareysa tijaabinta nidaamkan daaweynta shaqsiyeed. Gunaanadkii, daraasadda hadda jirta waxay muujinaysaa in fidinta farsamada iyo kicinta humoral ay muhiim u yihiin ilaalinta dhaqanka qaybaha unugyada wadnaha.
In kasta oo xogta halkan lagu soo bandhigay ay soo jeedinayso in CTCM ay tahay madal aad u rajo leh oo lagu qaabeeyo myocardium-ka oo aan cillad lahayn, haddana habkan dhaqanka wuxuu leeyahay xaddidaadyo. Xaddidaadda ugu weyn ee dhaqanka CTCM ayaa ah inay cadaadis farsamo oo joogto ah ku saarto xalalka, taas oo ka hor istaagaysa awoodda lagu kormeerayo foosha qaybaha wadnaha inta lagu jiro wareeg kasta. Intaa waxaa dheer, sababtoo ah cabbirka yar ee qaybaha wadnaha (7 mm), awoodda lagu qiimeeyo shaqada systolic ee ka baxsan nidaamyada dhaqanka iyadoo la adeegsanayo dareemayaasha xoogga dhaqameed waa xaddidan tahay. Qoraalka hadda jira, waxaan qayb ahaan ka gudubnay xaddidaaddan annagoo qiimeynayna danabka indhaha oo ah tilmaame shaqada foosha. Si kastaba ha ahaatee, xaddidaaddani waxay u baahan doontaa shaqo dheeraad ah waxaana laga yaabaa in wax laga qabto mustaqbalka iyadoo la soo bandhigayo habab loogu talagalay la socodka indhaha ee shaqada qaybaha wadnaha ee dhaqanka, sida khariidaynta indhaha iyadoo la adeegsanayo midabyo kalsiyum iyo kuwa xasaasiga u ah danabka. Xaddidaad kale oo CTCM ah ayaa ah in qaabka shaqadu uusan wax ka qabanayn walbahaarka jir ahaaneed (kahor rarista iyo rarista ka dib). CTCM, cadaadiska waxaa lagu kiciyay jihooyin ka soo horjeeda si loo soo saaro 25% fidinta jir ahaaneed ee diastole (fidinta buuxda) iyo systole (dhererka foosha inta lagu jiro kicinta korontada) ee unugyada aadka u waaweyn. Xaddidaaddan waa in laga saaraa naqshadaha CTCM ee mustaqbalka iyadoo cadaadis ku filan la saarayo unugyada wadnaha ee labada dhinac iyo iyadoo la adeegsanayo xiriirka saxda ah ee cadaadiska-mugga ee ka dhaca qolalka wadnaha.
Dib-u-habaynta xad-dhaafka ah ee lagu soo sheegay qoraalkan waxa ay ku kooban tahay ku dayashada calaamadaha hypertrophic hyperstretch. Sidaa darteed, qaabkani wuxuu kaa caawin karaa daraasadda calaamadaha hypertrophic-ga ee fiditaanka keena iyada oo aan loo baahnayn arrimo humoral ama neerfayaasha ah (kuwaas oo aan ku jirin nidaamkan). Daraasado dheeraad ah ayaa loo baahan yahay si loo kordhiyo tirada badan ee CTCM, tusaale ahaan, la-kobcinta unugyada difaaca jirka, arrimaha humoral-ka ee plasma-ga ee wareegaya, iyo innervation marka la-kobcinayo unugyada neuronal-ka waxay hagaajin doontaa suurtagalnimada qaabaynta cudurka CTCM.
Saddex iyo toban doofaar ayaa loo isticmaalay daraasaddan. Dhammaan hababka xayawaanka waxaa lagu sameeyay iyadoo la raacayo tilmaamaha hay'adaha waxaana ansixiyay Guddiga Daryeelka iyo Isticmaalka Xayawaanka ee Machadka Jaamacadda Louisville. Qaanso wadnaha ah ayaa la xiray waxaana wadnaha lagu shubay 1 L oo ah wadnaha oo nadiif ah (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL heparin, pH ilaa 7.4); quluubta waxaa lagu keydiyay dareere wadnaha oo qabow ilaa loo qaado shaybaarka iyadoo baraf lagu shubayo taasoo badanaa ah <10 daqiiqo. quluubta waxaa lagu keydiyay dareere wadnaha oo qabow ilaa loo qaado shaybaarka iyadoo baraf lagu shubayo taasoo badanaa ah <10 daqiiqo. сердца хранили в ледяном кардиоплегическом растворе. quluubta waxaa lagu kaydiyay xal wadnaha oo qabow ilaa loo qaado shaybaarka barafka, kaas oo badanaa qaata wax ka yar 10 daqiiqo.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。 Держите сердца в ледяной кардиоплегии до транспортировки в лабораторию на льду, обычно <10 мин. Wadnaha ku hay wadnaha barafka ilaa inta loo qaadayo shaybaarka barafka saaran, badanaa wax ka yar 10 daqiiqo.
Qalabka CTCM waxaa lagu sameeyay barnaamijka SolidWorks ee naqshadeynta kombiyuutarka (CAD). Qolalka dhaqanka, qaybaha iyo qolalka hawada waxaa laga sameeyay balaastiig acrylic cad oo CNC ah. Giraanta gadaal u taagan ee dhexroorkeedu yahay 7mm waxaa laga sameeyay polyethylene cufnaanta sare leh (HDPE) oo ku taal bartamaha waxayna leedahay god o-ring ah si ay u dejiso giraanta o-ring-ka ee loo isticmaalo in lagu xiro warbaahinta hoose. Xuub silica khafiif ah ayaa ka soocaya qolka dhaqanka iyo saxanka kala-soocidda. Xuubka silica waxaa laga soo gooyay laysarka warqad silicoon ah oo 0.02″ qaro weyn leh waxayna leedahay adkaansho 35A ah. Gasket-yada silicoon ee hoose iyo kuwa sare waxaa laga soo gooyay laysarka warqad silicoon ah oo 1/16″ qaro weyn leh waxayna leeyihiin adkaansho 50A ah. 316L oo ah boolal bir ah oo aan miridh lahayn iyo lawska baalasha ayaa loo isticmaalaa in lagu xidho baloogga iyo abuurista shaabad hawo-mareen ah.
Guddi wareeg oo daabacan oo gaar ah (PCB) ayaa loogu talagalay in lagu dhex daro nidaamka C-PACE-EM. Godadka isku xirka mashiinka swiss ee ku yaal PCB-ga waxaa ku xiran elektroodhada garaafka iyadoo la adeegsanayo fiilooyin naxaas ah oo lacag lagu dahaadhay iyo boolal naxaas ah oo 0-60 ah oo lagu dhejiyay elektroodhada. Guddiga wareegga ee daabacan waxaa la dhigayaa daboolka daabacaha 3D.
Qalabka CTCM waxaa maamula hawl-wadeennada neef-mareenka ee la barnaamijin karo (PPD) kaas oo abuura cadaadis wareeg ah oo la xakameeyey oo la mid ah wareegga wadnaha. Marka cadaadiska gudaha qolka hawada uu kordho, xuubka silikoon ee dabacsan ayaa kor u fida, taasoo ku qasbaysa dhexdhexaadka inuu hoos u dhaco goobta unugyada. Meesha unugyada ayaa markaa la fidin doonaa iyadoo la saarayo dareeraha, taasoo ku dayata ballaarinta jir ahaaneed ee wadnaha inta lagu jiro diastole. Markii ugu sarreysay nasashada, kicinta korantada ayaa lagu dabaqay elektroodhada graphite, taas oo yareysay cadaadiska qolka hawada waxayna sababtay isku-soo-ururinta qaybaha unugyada. Gudaha tuubada waxaa ku yaal waalka hemostatic oo leh dareemaha cadaadiska si loo ogaado cadaadiska nidaamka hawada. Cadaadiska uu dareemo dareemaha cadaadiska waxaa lagu dabaqaa ururiyaha xogta ee ku xiran laptop-ka. Tani waxay u oggolaanaysaa la socodka joogtada ah ee cadaadiska gudaha qolka gaaska. Markii la gaaray cadaadiska qolka ugu badan (heerka 80 mmHg, 140 mmHg OS), qalabka helitaanka xogta waxaa la amray inuu u diro calaamad nidaamka C-PACE-EM si loo soo saaro calaamad danab laba-geesood ah 2 ms, oo loo dejiyay 4 V.
Qaybaha wadnaha ayaa la helay xaaladaha lagu beero 6 ceel ayaa la sameeyay sidan soo socota: Wadnaha la goostay waxaa laga soo wareejiyaa weelka wareejinta una wareeji saxaarad ay ku jirto wadne qabaw (4° C.). Ventricle-ka bidix waxaa lagu go'doomiyay daab nadiif ah waxaana loo jaray qaybo 1-2 cm3 ah. Baloogyadan unugyada ah waxaa lagu dhejiyay taageerooyin unugyo ah iyadoo la isticmaalayo dhejis unugyo ah waxaana la dhigay qubeys unug microtome ah oo gariiraya oo ay ku jirto xalka Tyrode waxaana si joogto ah loogu shubay oksijiin (3 g/L 2,3-butanedione monooxime (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g). ), 6 mM KCl (0.447 g), 10 mM D-glucose (1.86 g), 10 mM HEPES (2.38 g), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M xal), 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml 1 M xal), ilaa 1 L ddH2O). Microtome-ka gariiraya waxaa loo dejiyay inuu jaro xaleefyo dhumucdoodu tahay 300 µm oo ah inta jeer ee 80 Hz, baaxadda gariirka toosan ee 2 mm, iyo heerka hore ee 0.03 mm/s. Qubeyska unugyada waxaa ku wareegsanaa baraf si xalka loo qaboojiyo heerkulkana waxaa lagu hayay 4°C. Qaybaha unugyada ka wareeji qubeyska microtome una wareeji qubeyska ku-meel-gaarka ah oo ay ku jiraan xal Tyrode oo si joogto ah ogsijiin leh oo ku dul yaal baraf ilaa qaybo ku filan laga helo hal saxan oo dhaqan. Dhaqamada transwell, qaybaha unugyada waxaa lagu dhejiyay taageerooyin polyurethane oo nadiif ah oo 6 mm ballaaran ah waxaana lagu dhejiyay 6 ml oo dhexdhexaad ah oo la hagaajiyay (199 dhexdhexaad ah, 1x kaabista ITS, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-alkaline iyo 2X antibiyootiko-antifungal). Kicinta korontada (10 V, soo noqnoqoshada 1.2 Hz) ayaa lagu dabaqay qaybaha unugyada iyada oo loo marayo C-Pace. Xaaladaha TD, T3 iyo Dex cusub ayaa lagu daray 100 nM iyo 1 μM isbeddel kasta oo dhexdhexaad ah. Qalabka waxaa lagu buuxiyaa oksijiin ka hor inta aan la beddelin 3 jeer maalintii. Qaybaha unugyada waxaa lagu beeray weel lagu kululeeyo heerkul ah 37°C iyo 5% CO2.
Dhaqamada CTCM, qaybaha unugyada waxaa la saaray daabace 3D ah oo si gaar ah loo sameeyay oo ku jira saxan Petri ah oo ay ku jiraan xalka Tyrode ee wax laga beddelay. Qalabka waxaa loogu talagalay inuu kordhiyo cabbirka xabadda wadnaha 25% aagga giraanta taageerada. Tan waxaa loo sameeyaa si qaybaha wadnaha aysan u fidin ka dib marka laga wareejiyo xalka Tyrode una wareejiyo bartamaha iyo inta lagu jiro diastole. Iyada oo la adeegsanayo koollo histoacrylic ah, qaybaha 300 µm dhumucdiisuna waxaa lagu dhejiyay giraan taageero ah oo dhexroorkeedu yahay 7 mm. Ka dib markii qaybaha unugyada lagu dhejiyo giraanta taageerada, jar qaybaha unugyada dheeraadka ah oo dib ugu celi qaybaha unugyada ku lifaaqan qubeyska xalka Tyrode ee barafka (4°C) ilaa qaybo ku filan loo diyaariyo hal qalab. Wadarta wakhtiga wax lagu farsameeyo ee dhammaan aaladaha waa inaysan ka badnaan 2 saacadood. Ka dib markii 6 qaybood oo unugyo ah lagu dhejiyay giraangirahooda taageerada, qalabka CTCM ayaa la isku keenay. Qolka dhaqanka CTCM waxaa horay loogu buuxiyay 21 ml oo ah dhexdhexaad hore u oksijiin leh. Qaybaha unugyada u wareeji qolka dhaqanka oo si taxaddar leh uga saar xumbo hawo leh oo leh tuubo. Qaybta unugyada ayaa markaa loo hagaa godka oo si tartiib ah loogu riixaa meesheeda. Ugu dambeyntii, dhig daboolka elektiroonigga qalabka oo qalabka u wareeji qalabka. Kadib ku xidh CTCM tuubada hawada iyo nidaamka C-PACE-EM. Furaha neef-mareenka ayaa furmaya, waalka hawaduna wuxuu furayaa CTCM. Nidaamka C-PACE-EM waxaa loo habeeyay inuu keeno 4 V 1.2 Hz inta lagu jiro xawaaraha laba-geesoodka ah muddo 2 ms ah. Dhexdhexaadka ayaa la beddelay laba jeer maalintii, elektirooniggana waxaa la beddelay hal mar maalintii si looga fogaado ururinta garaafitka elektiroonigga. Haddii loo baahdo, qaybaha unugyada waxaa laga saari karaa ceelasha dhaqanka si looga saaro wax kasta oo xumbo hawo ah oo hoostooda ku dhacay. Xaaladaha daaweynta MT, T3/Dex waxaa lagu daray cusub iyadoo isbeddel dhexdhexaad ah lagu sameeyay 100 nM T3 iyo 1 μM Dex. Qalabka CTCM waxaa lagu beeray qalab kuleyliye heerkulkiisu yahay 37°C iyo 5% CO2.
Si loo helo raadad fidsan oo ah xaleefyada wadnaha, nidaam kamarad gaar ah ayaa la sameeyay. Kamarad SLR ah (Canon Rebel T7i, Canon, Tokyo, Japan) ayaa la isticmaalay iyadoo la adeegsanayo muraayad macro ah oo Navitar Zoom 7000 18-108mm ah (Navitar, San Francisco, CA). Muuqaal ahaan waxaa lagu sameeyay heerkulka qolka ka dib markii lagu beddelay dhexdhexaadka mid cusub. Kamaraddu waxay ku taallaa xagal 51° ah muuqaalkana waxaa lagu duubay 30 qaab ilbiriqsikiiba. Marka hore, software-ka isha furan (MUSCLEMOTION43) ayaa loo isticmaalay Image-J si loo cabbiro dhaqdhaqaaqa xaleefyada wadnaha. Maaskarada waxaa la sameeyay iyadoo la adeegsanayo MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) si loo qeexo meelaha xiisaha leh ee garaaca xaleefyada wadnaha si looga fogaado buuqa. Maaskaro gacanta lagu kala qaybiyay ayaa lagu dabaqaa dhammaan sawirrada taxane qaab ah ka dibna waxaa loo gudbiyaa ku-xidhka MUSCLEMOTION. Dhaqdhaqaaqa Muruqyadu wuxuu adeegsadaa celceliska xoogga pixel-ka ee qaab kasta si loo cabbiro dhaqdhaqaaqiisa marka loo eego qaab-dhismeedka tixraaca. Xogta waa la duubay, la sifeeyay oo loo isticmaalay in lagu cabbiro waqtiga wareegga iyo in lagu qiimeeyo fidinta unugyada inta lagu jiro wareegga wadnaha. Muuqaalka la duubay waxaa dib loo farsameeyay iyadoo la adeegsanayo shaandho dijitaal ah oo eber-marxalad ah oo heerka koowaad ah. Si loo qiyaaso fidinta unugyada (ugu sarreysa ilaa meesha ugu sarreysa), falanqaynta ugu sarreysa ilaa meesha ugu sarreysa ayaa la sameeyay si loo kala saaro meelaha ugu sarreeya iyo meelaha ku yaal calaamadda la duubay. Intaa waxaa dheer, detrending waxaa lagu sameeyaa iyadoo la adeegsanayo polynomial-ka heerka 6aad si loo baabi'iyo isbeddelka calaamadda. Koodhka barnaamijka waxaa lagu sameeyay MATLAB si loo go'aamiyo dhaqdhaqaaqa unugyada adduunka, waqtiga wareegga, waqtiga nasashada, iyo waqtiga foosha (Koodhka Barnaamijka Dheeraadka ah 44).
Falanqaynta cadaadiska, iyadoo la adeegsanayo isla fiidiyowyada loo sameeyay qiimaynta fidinta farsamada, waxaan marka hore raadraacnay laba sawir oo matalaya meelaha ugu sarreeya dhaqdhaqaaqa (meelaha ugu sarreeya (sare) iyo kuwa ugu hooseeya (hoose) dhaqdhaqaaqa sida waafaqsan barnaamijka MUSCLEMOTION. Kadib waxaan kala qaybinay gobollada unugyada waxaanan ku dabaqnay qaab algorithm hadh ah unugyada la kala qaybiyay (Sawirka Dheeraadka ah 2a). Unugyada la kala qaybiyay ayaa markaa loo qaybiyay toban dusha hoose, cadaadiska dusha kastana waxaa lagu xisaabiyay iyadoo la adeegsanayo isle'egta soo socota: Cadaadis = (Sup-Sdown)/Sdown, halkaas oo Sup iyo Sdown ay yihiin masaafada qaabka laga bilaabo hooska sare iyo kan hoose ee dharka, siday u kala horreeyaan (Sawirka Dheeraadka ah .2b).
Qaybaha wadnaha waxaa lagu hagaajiyay 4% paraformaldehyde muddo 48 saacadood ah. Unugyada go'an ayaa lagu qalajiyay 10% iyo 20% sucrose muddo 1 saac ah, ka dibna 30% sucrose habeenkii. Qaybaha waxaa lagu dhex geliyay isku-darka heerkulka goynta ugu fiican (isku-darka OCT) ka dibna si tartiib tartiib ah ayaa loogu qaboojiyay qubeys baraf ah oo isopentane/qalalan. Ku kaydi baloogyada OCT ee ku jira -80 °C ilaa laga kala saaro. Sawirrada waxaa loo diyaariyey qaybo dhumucdoodu tahay 8 μm.
Si aad OCT uga saarto qaybaha wadnaha, ku kululee boodhadhka kululaynta heerkul ah 95 °C muddo 5 daqiiqo ah. Ku dar 1 ml PBS boodhadhka kasta oo ku rid 30 daqiiqo heerkulka qolka, ka dibna ku dhex geli qaybaha adigoo dejinaya 0.1% Triton-X gudaha PBS muddo 15 daqiiqo ah heerkulka qolka. Si looga hortago in unugyada difaaca jirka ee aan gaarka ahayn ay ku xidhmaan muunadda, ku dar 1 ml oo ah xalka 3% BSA boodhadhka oo ku rid 1 saac heerkulka qolka. Kadib BSA waa la saaray boodhadhkana waxaa lagu dhaqay PBS. Calaamadee muunad kasta qalin. Unugyada difaaca jirka ee aasaasiga ah (lagu qasi jiray 1:200 oo ku jirta 1% BSA) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) iyo troponin-T (Thermo Scientific; #MA5-12960) ayaa lagu daray in ka badan 90 daqiiqo, ka dibna unugyada difaaca jirka ee labaad (lagu qasi jiray 1:200 oo ku jirta 1% BSA) ka dhanka ah jiirka Alexa Fluor 488 (Thermo Scientific; #A16079), ka dhanka ah bakaylaha Alexa Fluor 594 (Thermo Scientific; #T6391) 90 daqiiqo oo dheeraad ah. 3 jeer ayaa lagu dhaqay PBS Si loo kala saaro wasakhda bartilmaameedka laga soo bilaabo asalka, waxaan isticmaalnay oo keliya unugyada difaaca jirka ee labaad sidii xakameyn. Ugu dambeyntii, wasakhda nukliyeerka ee DAPI ayaa lagu daray bogagga waxaana la geliyay vectasheld (Vector Laboratories) waxaana lagu shaabadeeyay rinji ciddiyaha. -x weyneyn) iyo mikroskoobka Keyence oo leh 40x weyneyn.
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) oo ah 5 μg/ml oo PBS ah ayaa loo isticmaalay rinjiyeynta WGA waxaana lagu mariyey qaybo go'an muddo 30 daqiiqo ah heerkulka qolka. Sawirrada waxaa lagu dhaqay PBS ka dibna madowga Sudan ayaa lagu daray sawir kasta waxaana lagu kululeeyay 30 daqiiqo. Sawirrada waxaa lagu dhaqay PBS ka dibna waxaa lagu daray qalabka lagu dhejiyo vectasheld. Sawirrada waxaa lagu sawiray mikroskoob Keyence oo leh 40x weyneyn.
OCT ayaa laga soo saaray muunadaha sida kor ku xusan. Ka dib marka aad ka saarto OCT, ku dhex geli biyaha Bouin's xalka habeenkii. Kadib waxaa lagu raaciyay biyo la sifeeyay muddo 1 saac ah ka dibna waxaa lagu riday xal Bibrich aloe aloe fuchsin ah muddo 10 daqiiqo ah. Kadibna waxaa lagu dhaqay biyo la sifeeyay waxaana lagu riday xal 5% phosphomolybdenum/5% phosphotungstic acid ah muddo 10 daqiiqo ah. Iyada oo aan la raacin, si toos ah ugu wareeji biyaha aniline blue xalka 15 daqiiqo. Kadibna sawirada waxaa lagu dhaqay biyo la sifeeyay waxaana lagu riday xal 1% acetic acid ah muddo 2 daqiiqo ah. Sawirada waxaa lagu qalajiyay 200 N ethanol waxaana loo wareejiyay xylene. Sawirada la sifeeyay waxaa lagu sawiray iyadoo la isticmaalayo mikroskoob Keyence oo leh ujeedo 10x ah. Boqolleyda aagga Fibrosis waxaa lagu cabiray iyadoo la adeegsanayo software Keyence Analyzer.
Baaritaanka Hirgelinta Unugyada CyQUANT™ MTT (Invitrogen, Carlsbad, CA), lambarka buugga V13154, sida ku cad hab-raaca soo saaraha oo leh wax ka beddel qaar. Gaar ahaan, feer qalliin oo dhexroorkiisu yahay 6 mm ayaa la isticmaalay si loo hubiyo cabbirka unugyada isku midka ah inta lagu jiro falanqaynta MTT. Unugyada ayaa si gaar ah loogu dahaadhay ceelasha saxan 12-god ah oo ka kooban substrate MTT sida ku cad hab-raaca soo saaraha. Qaybaha waxaa lagu dahaadhay heerkul ah 37° C. muddo 3 saacadood ah unugyada noolna waxay dheefshiidaan substrate-ka MTT si ay u sameeyaan isku-darka formazan guduudan. Ku beddel xalka MTT 1 ml DMSO oo ku dahaadhay heerkul ah 37°C muddo 15 daqiiqo ah si aad uga soo saarto formazan guduudan qaybaha wadnaha. Muunadaha waxaa lagu qasi jiray 1:10 DMSO saxanno hoose oo cad oo 96-god ah iyo xoojinta midabka guduudan oo lagu qiyaasay 570 nm iyadoo la adeegsanayo akhristaha saxanka Cytation (BioTek). Akhriska waxaa loo beddelay miisaanka gabal kasta oo wadnaha ah.
Qalabka wadnaha ee la jarjaray waxaa lagu beddelay qalab ay ku jiraan 1 μCi/ml [5-3H]-glucose (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) si loogu sameeyo baaritaanka isticmaalka gulukooska sida hore loogu sharraxay. Ka dib 4 saacadood oo la geliyo, ku dar 100 µl oo dhexdhexaad ah tuubo microcentrifuge furan oo ka kooban 100 µl oo ah 0.2 N HCl. Kadibna tuubada waxaa la geliyay tuubo scintillation ah oo ka kooban 500 μl oo dH2O ah si uumi baxo [3H]2O muddo 72 saacadood ah heerkul ah 37°C. Kadibna tuubada microcentrifuge ka saar tuubada scintillation oo ku dar 10 ml oo dareere scintillation ah. Tirinta scintillation waxaa lagu sameeyay iyadoo la isticmaalayo falanqeeye Tri-Carb 2900TR oo dareere scintillation ah (Packard Bioscience Company, Meriden, CT, USA). Isticmaalka gulukooska ayaa markaa la xisaabiyay iyadoo la tixgelinayo [5-3H] - dhaqdhaqaaqa gaarka ah ee gulukooska, dheelitirka aan dhammaystirnayn iyo asalka, kala-goynta [5-3H] - gulukooska aan calaamadda lahayn, iyo hufnaanta ka-hortagga xoqidda. Xogta waxaa loo habeeyaa cufka qaybaha wadnaha.
Ka dib markii unugyada Trizol lagu sameeyay isku-dhafka unugyada, RNA-ga waxaa laga soocay qaybaha wadnaha iyadoo la adeegsanayo Qiagen miRNeasy Micro Kit #210874 sida ku cad hab-raaca soo saaraha. Diyaarinta maktabadda RNAsec, isku xigxiga iyo falanqaynta xogta ayaa loo sameeyay sidan soo socota:
1 μg oo RNA ah muunad kasta ayaa loo isticmaalay sidii agab bilow ah oo loogu talagalay diyaarinta maktabadda RNA. Maktabadaha taxanaha ah waxaa lagu sameeyay iyadoo la adeegsanayo Qalabka Diyaarinta Maktabadda NEBNext UltraTM RNA ee Illumina (NEB, USA) iyadoo la raacayo talooyinka soo saaraha, lambarrada tusmadana waxaa lagu daray taxanaha sifada muunad kasta. Si kooban, mRNA waxaa laga nadiifiyay RNA-ga guud iyadoo la isticmaalayo kuul birlab ah oo ku xiran oligonucleotides-ka poly-T. Kala-goynta waxaa lagu sameeyaa iyadoo la adeegsanayo cations divalent heerkulka sare ee NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer (5X). CDNA-ga koowaad waxaa lagu sameeyay iyadoo la isticmaalayo primers hexamer random iyo M-MuLV reverse transcriptase (RNase H-). CDNA-ga labaad ee xarigga ayaa markaa lagu sameeyay iyadoo la adeegsanayo DNA polymerase I iyo RNase H. Dul-gooyooyinka haray waxaa loo beddelaa darafyo aan la taaban karin iyadoo la adeegsanayo exonuclease/polymerase. Ka dib marka la adoonsado dhammaadka 3′ ee jajabka DNA-da, Adaptor NEBNext oo leh qaab-dhismeedka looxa timaha ayaa lagu dhejiyay si loogu diyaariyo isku-dhafka. Xulashooyinka jajabyada cDNA ee dhererka la doorbiday 150-200 bp. jajabyada maktabadda ayaa la nadiifiyay iyadoo la adeegsanayo nidaamka AMPure XP (Beckman Coulter, Beverly, USA). Kadib, 3 μl USER Enzyme (NEB, USA) oo leh cDNA cabbir ahaan loo xushay oo lagu dhejiyay adapter ayaa la isticmaalay 15 daqiiqo heerkul ah 37°C ka dibna 5 daqiiqo heerkul ah 95°C ka hor PCR. Kadib PCR waxaa la sameeyay iyadoo la isticmaalayo polymerase-ka DNA-da ee Phusion High-Fidelity, primers-ka PCR ee caalamiga ah, iyo primers-ka Index (X). Ugu dambeyntii, alaabada PCR waa la nadiifiyay (nidaamka AMPure XP) waxaana lagu qiimeeyay tayada maktabadda nidaamka Agilent Bioanalyzer 2100. Maktabadda cDNA waxaa markaa lagu taxay iyadoo la adeegsanayo sequencer Novaseq. Faylasha sawirka cayriin ee Illumina waxaa loo beddelay akhris cayriin iyadoo la adeegsanayo CASAVA Base Calling. Xogta cayriin waxaa lagu kaydiyaa faylasha qaabka FASTQ(fq) oo ka kooban taxanaha akhriska iyo tayada saldhigga ee u dhiganta. Dooro HISAT2 si aad ugu dhigto akhrinta taxanaha la sifeeyay genome-ka tixraaca Sscrofa11.1. Guud ahaan, HISAT2 wuxuu taageeraa genome-yada cabbir kasta leh, oo ay ku jiraan genome-yada ka weyn 4 bilyan oo saldhig, qiimayaasha caadiga ahna waxaa loo dejiyay inta badan xuduudaha. Akhrinta isku-xidhka xogta RNA Seq waxaa si hufan loogu waafajin karaa iyadoo la adeegsanayo HISAT2, oo ah nidaamka ugu dhaqsaha badan ee hadda la heli karo, oo leh saxnaan la mid ah ama ka wanaagsan hab kasta oo kale.
Tirada qoraallada ayaa si toos ah u muujinaysa heerka muujinta hidda-wadaha. Heerarka muujinta hidda-wadaha waxaa lagu qiimeeyaa tirada qoraallada (tirada taxanaha) ee la xidhiidha hidda-wadaha ama exons-ka. Tirada akhrintu waxay u dhigantaa heerarka muujinta hidda-wadaha, dhererka hidda-wadaha, iyo qoto-dheeraanta taxanaha. FPKM (jajabyada kunkii lammaane saldhig ee qoraalka isku xigxiga ee hal milyan oo lammaane saldhig ah) ayaa la xisaabiyay waxaana qiimayaasha P ee muujinta kala duwan lagu go'aamiyay iyadoo la adeegsanayo xirmada DESeq2. Kadib waxaan xisaabinay heerka daahfurka beenta ah (FDR) ee qiime kasta oo P ah annagoo adeegsanayna habka Benjamini-Hochberg9 oo ku salaysan shaqada R-ga ee ku dhex jirta "p.adjust".
RNA-ga laga soocay qaybaha wadnaha ayaa loo beddelay cDNA iyadoo la adeegsanayo isku-darka SuperScript IV Vilo Master ee Thermo (Thermo, bisad. no. 11756050). RT-PCR-ga tirada leh waxaa lagu sameeyay iyadoo la adeegsanayo saxan falgal hufan oo lagu magacaabo Applied Biosystems Endura Plate Microamp 384-well (Thermo, bisad. no. 4483319) iyo dhejis indhaha ah oo microamp ah (Thermo, bisad. no. 4311971). Isku-darka falgalka wuxuu ka koobnaa isku-darka 5 µl Taqman Fast Advanced Master (Thermo, bisad # 4444557), 0.5 µl Taqman Primer iyo 3.5 µl H2O oo lagu qasay ceelkiiba. Wareegyada caadiga ah ee qPCR ayaa la socodsiiyay qiimayaasha CT-na waxaa lagu cabbiray iyadoo la adeegsanayo qalab PCR oo waqtiga-dhabta ah oo lagu magacaabo Applied Biosystems Quantstudio 5 (module 384-well; badeecad # A28135). Taqman primers waxaa laga soo iibsaday Thermo (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss06868890_m1), ACTN1 (Ss01009508_mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss04245588_m1) Qiimaha CT ee dhammaan muunadaha ayaa caadi looga dhigay hidda-wadaha guriga lagu hayo ee GAPDH.
Siideynta warbaahinta ee NT-ProBNP waxaa lagu qiimeeyay qalabka NT-ProBNP (doofaarka) (Tirada Bisadda. MBS2086979, MyBioSource) sida waafaqsan hab-raaca soo saaraha. Si kooban, 250 µl oo muunad kasta iyo heerka ayaa lagu daray laba jeer ceel kasta. Isla markiiba ka dib marka lagu daro muunadda, ku dar 50 µl oo ah Assay Reagent A ceel kasta. Si tartiib ah u rux saxanka oo ku shaabad shaabad. Kadib kiniiniyada waxaa lagu kululeeyay 37°C muddo 1 saac ah. Kadib ku shub xalka oo ku dhaq ceelasha 4 jeer 350 µl oo ah 1X xalka dhaqidda, adigoo ku shubaya xalka dhaqidda 1-2 daqiiqo mar kasta. Kadibna ku dar 100 µl oo Assay Reagent B ceelkiiba oo ku shaabad shaabad saxan. Kiniinka si tartiib ah ayaa loo ruxay oo lagu kululeeyay 37°C muddo 30 daqiiqo ah. Ku shub dareeraha oo ku dhaq ceelasha 5 jeer adigoo isticmaalaya 350 µl oo ah 1X xal dhaqid. Ku dar 90 µl oo xal substrate ah ceel kasta oo ku xidh saxanka. Ku shid saxanka heerkulkiisu yahay 37°C 10-20 daqiiqo. Ku dar 50 µl Xalka Joojinta ceel kasta. Saxanka waxaa isla markiiba lagu cabbiray iyadoo la isticmaalayo akhristaha saxanka Cytation (BioTek) oo lagu rakibay 450 nm.
Falanqaynta awoodda ayaa la sameeyay si loo doorto cabbirka kooxda kaas oo bixin doona awood ka badan 80% si loo ogaado isbeddel buuxa oo 10% ah oo ku yimid halbeegga iyadoo heerka qaladka Nooca I uu yahay 5%. Falanqaynta awoodda ayaa la sameeyay si loo doorto cabbirrada kooxda taasoo bixin doonta awood ka badan 80% si loo ogaado isbeddel buuxa oo 10% ah oo ku yimid halbeegga iyadoo heerka qaladka Nooca I uu yahay 5%. Анализ мощности был выполнен для выбора размеров групп, которые обеспечат > 80% изменения параметра с 5% частотой ошибок типа I. Falanqaynta awoodda ayaa la sameeyay si loo doorto cabbirrada kooxda oo bixin doona awood ka badan 80% si loo ogaado 10% isbeddelka xuduudaha oo dhammaystiran iyadoo la adeegsanayo heerka qaladka Nooca I ee 5%.进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I变化和5％I变匔和5％I型给。进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I变化和5％I变匔和5％I型给。 Был проведен анализ мощности для выбора размера группы, который обеспечил бы > 80% мощности для% абсолютного изменения параметров и 5% частоты ошибок типа I. Falanqaynta awoodda ayaa la sameeyay si loo doorto cabbirka kooxda kaas oo bixin doona awood ka badan 80% si loo ogaado isbeddelka xuduudaha 10% iyo heerka qaladka nooca I ee 5%.Qaybaha unugyada si aan kala sooc lahayn ayaa loo doortay ka hor tijaabada. Dhammaan falanqaynta waxay ahaayeen kuwo aan xaalad lahayn, muunado-na waxaa la furfuray oo keliya ka dib markii dhammaan xogta la falanqeeyay. Barnaamijka GraphPad Prism (San Diego, CA) ayaa loo isticmaalay in lagu sameeyo dhammaan falanqaynta tirakoobka. Dhammaan tirakoobyada, qiimaha p waxaa loo arkay mid muhiim ah marka la eego qiimayaasha <0.05. Dhammaan tirakoobyada, qiimaha p waxaa loo tixgeliyey mid muhiim ah qiimayaasha <0.05. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Dhammaan tirakoobyada, qiimaha p waxaa loo tixgeliyey mid muhiim ah qiimayaasha <0.05.对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据，p 值在值<0.05 时被认为是显着的。 Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Dhammaan tirakoobyada, qiimaha p waxaa loo tixgeliyey mid muhiim ah qiimayaasha <0.05.Imtixaanka t-ga ee Ardayga Laba-dabo leh waxaa lagu sameeyay xogta iyadoo la barbar dhigayo 2 isbarbardhig oo keliya. ANOVA hal-dhinac ah ama laba-dhinac ah ayaa loo isticmaalay in lagu go'aamiyo muhiimadda u dhaxaysa kooxo badan. Markii la sameynayay imtixaanada hoc ka dib, sixitaanka Tukey waxaa loo adeegsaday si loogu xisaabiyo isbarbardhigyo badan. Xogta RNAsec waxay leedahay tixgelinno tirakoob oo gaar ah marka la xisaabinayo FDR iyo p.hagaajinta sida lagu sharaxay qaybta Hababka.
Wixii macluumaad dheeraad ah oo ku saabsan naqshadeynta daraasadda, fiiri qoraalka Warbixinta Cilmi-baarista Dabeecadda ee ku xiran maqaalkan.