Nature.com ପରିଦର୍ଶନ କରିବା ପାଇଁ ଆପଣଙ୍କୁ ଧନ୍ୟବାଦ। ଆପଣ ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା ବ୍ରାଉଜର ସଂସ୍କରଣରେ ସୀମିତ CSS ସମର୍ଥନ ଅଛି। ସର୍ବୋତ୍ତମ ଅଭିଜ୍ଞତା ପାଇଁ, ଆମେ ଆପଣଙ୍କୁ ଏକ ଅପଡେଟ୍ ବ୍ରାଉଜର୍ ବ୍ୟବହାର କରିବାକୁ ସୁପାରିଶ କରୁଛୁ (କିମ୍ବା ଇଣ୍ଟରନେଟ୍ ଏକ୍ସପ୍ଲୋରରରେ ସୁସଙ୍ଗତତା ମୋଡ୍ ଅକ୍ଷମ କରନ୍ତୁ)। ଏହି ସମୟ ମଧ୍ୟରେ, ନିରନ୍ତର ସମର୍ଥନ ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ସାଇଟ୍‌କୁ ଷ୍ଟାଇଲ୍ ଏବଂ JavaScript ବିନା ରେଣ୍ଡର କରିବୁ।
ଔଷଧ ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ ହୃଦୟର ଶାରୀରିକ ପରିବେଶକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ପୁନଃଉତ୍ପାଦନ କରିପାରିବ ବୋଲି ଏକ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ଇନ ଭିଟ୍ରୋ ସିଷ୍ଟମର ଆବଶ୍ୟକତା ରହିଛି। ମାନବ ହୃଦୟ ଟିସୁ କଲଚର ସିଷ୍ଟମର ସୀମିତ ଉପଲବ୍ଧତା ହୃଦରୋଗ ଔଷଧ ପ୍ରଭାବର ଭୁଲ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରିଛି। ଏଠାରେ, ଆମେ ଏକ କାର୍ଡିଆକ୍ ଟିସୁ କଲଚର ମଡେଲ୍ (CTCM) ବିକଶିତ କରିଛୁ ଯାହା ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋମେକାନିକାଲ୍ ଭାବରେ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସଗୁଡ଼ିକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରେ ଏବଂ ହୃଦରୋଗ ଚକ୍ରର ସିଷ୍ଟୋଲିକ୍ ଏବଂ ଡାଏଷ୍ଟୋଲିକ୍ ପର୍ଯ୍ୟାୟ ସମୟରେ ଶାରୀରିକ ପ୍ରସାରଣ କରେ। 12 ଦିନର ସଂସ୍କୃତି ପରେ, ଏହି ପଦ୍ଧତି ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାକୁ ଆଂଶିକ ଭାବରେ ଉନ୍ନତ କରିଥିଲା, କିନ୍ତୁ ସେମାନଙ୍କର ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରିନଥିଲା। ତେଣୁ, କ୍ଷୁଦ୍ର ଅଣୁ ସ୍କ୍ରିନିଂ ପରେ, ଆମେ ଜାଣିଲୁ ଯେ ଆମର ମାଧ୍ୟମରେ 100 nM ଟ୍ରାଇଓଡୋଥାଇରୋନିନ୍ (T3) ଏବଂ 1 μM ଡେକ୍ସାମେଥାସୋନ୍ (Dex) ଯୋଡିବା 12 ଦିନ ପାଇଁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ମାଇକ୍ରୋଷ୍ଟ୍ରକ୍ଚରକୁ ବଜାୟ ରଖିଥିଲା। T3/Dex ଚିକିତ୍ସା ସହିତ ମିଶ୍ରଣରେ, CTCM ସିଷ୍ଟମ 12 ଦିନ ପାଇଁ ତାଜା ହୃଦୟ ଟିସୁ ସହିତ ସମାନ ସ୍ତରରେ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନାଲ୍ ପ୍ରୋଫାଇଲ୍, କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା, ମେଟାବୋଲିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ବଜାୟ ରଖିଥିଲା। ଏହା ସହିତ, ସଂସ୍କୃତିରେ ହୃଦ୍‌ପିଣ୍ଡ ଟିସୁର ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରସାରଣ ହାଇପରଟ୍ରୋଫିକ୍ କାର୍ଡିଆକ୍ ସିଗନାଲିଂକୁ ପ୍ରେରଣା ଦିଏ, ଯାହା ହୃଦ୍‌ପିଣ୍ଡ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରେରିତ ହାଇପରଟ୍ରୋଫିକ୍ ଅବସ୍ଥାର ଅନୁକରଣ କରିବା ପାଇଁ CTCM ର କ୍ଷମତାର ପ୍ରମାଣ ପ୍ରଦାନ କରେ। ଶେଷରେ, CTCM ଦୀର୍ଘ ସମୟ ଧରି ସଂସ୍କୃତିରେ ହୃଦୟର ଶରୀର ବିଜ୍ଞାନ ଏବଂ ପାଥୋଫିଜିଓଲୋଜିକୁ ମଡେଲ୍ କରିପାରିବ, ଯାହା ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ଔଷଧ ସ୍କ୍ରିନିଂକୁ ସକ୍ଷମ କରିଥାଏ।
କ୍ଲିନିକାଲ୍ ଗବେଷଣା ପୂର୍ବରୁ, ବିଶ୍ୱସନୀୟ ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ ସିଷ୍ଟମ୍ ଆବଶ୍ୟକ ଯାହା ମାନବ ହୃଦୟର ଶାରୀରିକ ପରିବେଶକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ପୁନଃଉତ୍ପାଦନ କରିପାରିବ। ଏପରି ସିଷ୍ଟମ୍ ପରିବର୍ତ୍ତିତ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍, ହୃଦସ୍ପନ୍ଦନ ଏବଂ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫିଜିଓଲୋଜିକାଲ୍ ଗୁଣଗୁଡ଼ିକୁ ଅନୁକରଣ କରିବା ଉଚିତ। ପ୍ରାଣୀ ମଡେଲ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ ସାଧାରଣତଃ ହୃଦ୍‌ପିଣ୍ଡରେ ଔଷଧର ପ୍ରଭାବକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରିବାରେ ସୀମିତ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟତା ସହିତ ହୃଦ୍‌ପିଣ୍ଡ ଶରୀର ବିଜ୍ଞାନ ପାଇଁ ଏକ ସ୍କ୍ରିନିଂ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ1,2। ଶେଷରେ, ଆଦର୍ଶ କାର୍ଡିଆକ୍ ଟିସୁ କଲଚର୍ ଏକ୍ସପେରିମେଣ୍ଟାଲ୍ ମଡେଲ୍ (CTCM) ଏକ ମଡେଲ୍ ଯାହା ବିଭିନ୍ନ ଚିକିତ୍ସା ଏବଂ ଔଷଧୀୟ ହସ୍ତକ୍ଷେପ ପାଇଁ ଅତ୍ୟନ୍ତ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ, ମାନବ ହୃଦୟର ଶରୀର ବିଜ୍ଞାନ ଏବଂ ପାଥୋଫିଜିଓଲୋଜିକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ପୁନଃଉତ୍ପାଦନ କରେ3। ଏପରି ସିଷ୍ଟମର ଅନୁପସ୍ଥିତି ହୃଦ୍‌ପିଣ୍ଡ ବିଫଳତା ପାଇଁ ନୂତନ ଚିକିତ୍ସାର ଆବିଷ୍କାରକୁ ସୀମିତ କରେ4,5 ଏବଂ ବଜାରରୁ ବାହାରିବାର ଏକ ପ୍ରମୁଖ କାରଣ ଭାବରେ ଔଷଧ କାର୍ଡିୟୋଟକ୍ସିସିଟିକୁ ନେଇଛି6।
ଗତ ଦଶନ୍ଧି ମଧ୍ୟରେ, ଆଠଟି ଅଣ-ହୃଦୟସ୍କୁଲାର ଔଷଧକୁ କ୍ଲିନିକାଲ୍ ବ୍ୟବହାରରୁ ପ୍ରତ୍ୟାହାର କରାଯାଇଛି କାରଣ ଏହା QT ବ୍ୟବଧାନକୁ ଦୀର୍ଘ କରିଥାଏ ଯାହା ଭେଣ୍ଟ୍ରିକୁଲାର ଆରିଥମିଆ ଏବଂ ହଠାତ୍ ମୃତ୍ୟୁର କାରଣ ହୋଇଥାଏ। ତେଣୁ, ହୃଦ୍‌ରୋଗ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଏବଂ ବିଷାକ୍ତତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ପ୍ରିକ୍ଲିନିକାଲ୍ ସ୍କ୍ରିନିଂ ରଣନୀତିର ଆବଶ୍ୟକତା ବୃଦ୍ଧି ପାଉଛି। ଔଷଧ ସ୍କ୍ରିନିଂ ଏବଂ ବିଷାକ୍ତତା ପରୀକ୍ଷାରେ ମାନବ-ପ୍ରେରିତ ପ୍ଲୁରିପୋଟେଣ୍ଟ ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍-ଡିରାଇଭଡ୍ କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟ୍ସ (hiPS-CM) ର ସାମ୍ପ୍ରତିକ ବ୍ୟବହାର ଏହି ସମସ୍ୟାର ଏକ ଆଂଶିକ ସମାଧାନ ପ୍ରଦାନ କରେ। ତଥାପି, hiPS-CM ର ଅପରିପକ୍ୱ ପ୍ରକୃତି ଏବଂ ହୃଦ୍‌ ଟିସୁର ବହୁକୋଷୀୟ ଜଟିଳତାର ଅଭାବ ଏହି ପଦ୍ଧତିର ପ୍ରମୁଖ ସୀମାବଦ୍ଧତା। ସାମ୍ପ୍ରତିକ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ସ୍ୱତଃସ୍ଫୂର୍ତ୍ତ ସଂକୋଚନ ଆରମ୍ଭ ହେବାର କିଛି ସମୟ ପରେ ହୃଦ୍‌ ଟିସୁ ହାଇଡ୍ରୋଜେଲ୍ ଗଠନ କରିବା ପାଇଁ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ hiPS-CM ବ୍ୟବହାର କରି ଏବଂ ସମୟ ସହିତ ଧୀରେ ଧୀରେ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ବୃଦ୍ଧି କରି ଏହି ସୀମାକୁ ଆଂଶିକ ଭାବରେ ଦୂର କରାଯାଇପାରିବ। ତଥାପି, ଏହି hiPS-CM ମାଇକ୍ରୋଟିସୁଗୁଡ଼ିକରେ ବୟସ୍କ ମାୟୋକାର୍ଡିୟମ୍ ର ପରିପକ୍ୱ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫିଜିଓଲୋଜିକାଲ୍ ଏବଂ ସଂକୋଚନଶୀଳ ଗୁଣର ଅଭାବ ରହିଛି। ଏହା ସହିତ, ମାନବ ହୃଦସ୍ପନ୍ଦନ ଟିସୁର ଏକ ଅଧିକ ଜଟିଳ ଗଠନ ଅଛି, ଯେଉଁଥିରେ ବିଭିନ୍ନ ପ୍ରକାରର କୋଷର ଏକ ବିବିଧ ମିଶ୍ରଣ ଥାଏ, ଯେଉଁଥିରେ ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ କୋଷ, ନ୍ୟୁରନ୍ ଏବଂ ଷ୍ଟ୍ରୋମାଲ ଫାଇବ୍ରୋବ୍ଲାଷ୍ଟ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ, ଯାହା ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ବାହ୍ୟକୋଷୀୟ ମାଟ୍ରିକ୍ସ ପ୍ରୋଟିନ ସେଟ୍ ଦ୍ୱାରା ପରସ୍ପର ସହିତ ଜଡିତ। ପ୍ରାପ୍ତବୟସ୍କ ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ ହୃଦୟରେ ଅଣ-କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟ୍ ଜନସଂଖ୍ୟା 11,12,13 ର ଏହି ବିବିଧତା ବ୍ୟକ୍ତିଗତ କୋଷ ପ୍ରକାର ବ୍ୟବହାର କରି ହୃଦସ୍ପନ୍ଦନ ଟିସୁର ମଡେଲିଂ ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ପ୍ରତିବନ୍ଧକ। ଏହି ପ୍ରମୁଖ ସୀମାଗୁଡ଼ିକ ଶାରୀରିକ ଏବଂ ରୋଗଗତ ପରିସ୍ଥିତିରେ ଅକ୍ଷତ ମାୟୋକାର୍ଡିଆଲ୍ ଟିସୁକୁ ସଂସ୍କୃତି ଦେବା ପାଇଁ ପଦ୍ଧତି ବିକାଶର ଗୁରୁତ୍ୱକୁ ଗୁରୁତ୍ୱ ଦିଏ।
ମାନବ ହୃଦୟର ସଂସ୍କୃତ ପତଳା (300 µm) ଅଂଶଗୁଡ଼ିକ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ମାନବ ମାୟୋକାର୍ଡିୟମର ଏକ ପ୍ରତିଶ୍ରୁତିପୂର୍ଣ୍ଣ ମଡେଲ୍ ବୋଲି ପ୍ରମାଣିତ ହୋଇଛି। ଏହି ପଦ୍ଧତି ମାନବ ହୃଦୟ ଟିସୁ ପରି ଏକ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ 3D ବହୁକୋଷୀୟ ପ୍ରଣାଳୀକୁ ପ୍ରବେଶ ପ୍ରଦାନ କରେ। ତଥାପି, 2019 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ, ସଂସ୍କୃତ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ବ୍ୟବହାର କ୍ଷୁଦ୍ର (24 ଘଣ୍ଟା) ସଂସ୍କୃତି ବଞ୍ଚିବା ଦ୍ୱାରା ସୀମିତ ଥିଲା। ଏହା ଭୌତିକ-ଯାନ୍ତ୍ରିକ ପ୍ରସାରଣର ଅଭାବ, ବାୟୁ-ତରଳ ଇଣ୍ଟରଫେସ୍ ଏବଂ ହୃଦ୍ ଟିସୁର ଆବଶ୍ୟକତାକୁ ସମର୍ଥନ କରୁନଥିବା ସରଳ ଗଣମାଧ୍ୟମର ବ୍ୟବହାର ସମେତ ଅନେକ କାରଣ ଯୋଗୁଁ ହୋଇଛି। 2019 ରେ, ଅନେକ ଗବେଷଣା ଗୋଷ୍ଠୀ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲେ ଯେ ହୃଦ୍ ଟିସୁ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରଣାଳୀରେ ଯାନ୍ତ୍ରିକ କାରକଗୁଡ଼ିକୁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରିବା ଦ୍ୱାରା ସଂସ୍କୃତି ଜୀବନ ବୃଦ୍ଧି ପାଇପାରେ, ହୃଦ୍ ପ୍ରକାଶନ ଉନ୍ନତ ହୋଇପାରେ ଏବଂ ହୃଦ୍ ରୋଗ ନିରୂପଣ ହୋଇପାରେ। ଦୁଇଟି ସୁନ୍ଦର ଅଧ୍ୟୟନ 17 ଏବଂ 18 ଦର୍ଶାଏ ଯେ ସଂସ୍କୃତି ସମୟରେ ଏକଅକ୍ଷୀୟ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଲୋଡିଂ ହୃଦ୍ ପିନୋଟାଇପ୍ ଉପରେ ସକାରାତ୍ମକ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ। ତଥାପି, ଏହି ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡ଼ିକ ହୃଦ୍ ଚକ୍ରର ଗତିଶୀଳ ତ୍ରି-ପରିମାଣୀୟ ଭୌତିକ-ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଲୋଡିଂ ବ୍ୟବହାର କରି ନଥିଲେ, କାରଣ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକ ଆଇସୋମେଟ୍ରିକ୍ ଟେନସାଇଲ୍ ଫୋର୍ସ 17 କିମ୍ବା ରେଖୀୟ ଅକ୍ସୋଟୋନିକ୍ ଲୋଡିଂ 18 ସହିତ ଲୋଡ୍ ହୋଇଥିଲା। ଟିସୁ ଷ୍ଟ୍ରେଚିଂର ଏହି ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକ ଅନେକ ହୃଦ୍‌ଜୀବ ଜିନ୍‌ର ଦମନ କିମ୍ବା ଅସ୍ୱାଭାବିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚିଂ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସହିତ ଜଡିତ ଜିନ୍‌ର ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରକାଶନର ପରିଣାମ ସ୍ୱରୂପ ହୋଇଥିଲା। ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଯେ, ପିଟୋଲିସ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନେ ଫୋର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସଡ୍ୟୁସର୍ ଫିଡବ୍ୟାକ୍ ଏବଂ ଟେନ୍ସନ୍ ଡ୍ରାଇଭ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ହୃଦ୍‌ଚକ୍ର ପୁନଃନିର୍ମାଣ ପାଇଁ ଏକ ଗତିଶୀଳ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ କଲଚର୍ ବାଥ୍ ବିକଶିତ କରିଥିଲେ। ଯଦିଓ ଏହି ସିଷ୍ଟମ୍ ଅଧିକ ସଠିକ୍ ଇନ୍ ଭିଟ୍ରୋ କାର୍ଡିଆକ୍ ସାଇକେଲ୍ ମଡେଲିଂ ପାଇଁ ଅନୁମତି ଦିଏ, ପଦ୍ଧତିର ଜଟିଳତା ଏବଂ କମ୍ ଥ୍ରୁପୁଟ୍ ଏହି ସିଷ୍ଟମର ପ୍ରୟୋଗକୁ ସୀମିତ କରିଥାଏ। ଆମର ପରୀକ୍ଷାଗାର ସମ୍ପ୍ରତି ବିଦ୍ୟୁତ୍ ଉତ୍ତେଜନା ଏବଂ ଏକ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ମାଧ୍ୟମ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ସରଳୀକୃତ ସଂସ୍କୃତି ସିଷ୍ଟମ୍ ବିକଶିତ କରିଛି ଯାହା ଦ୍ୱାରା ପୋର୍ସିନ୍ ଏବଂ ମାନବ ହୃଦୟ ଟିସୁର ଅଂଶଗୁଡ଼ିକର 6 ଦିନ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ବଜାୟ ରଖାଯାଇପାରିବ।20,21।
ବର୍ତ୍ତମାନର ପାଣ୍ଡୁଲିପିରେ, ଆମେ ପୋର୍ସିନ ହୃଦୟର ଅଂଶ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ କାର୍ଡିଆକ୍ ଟିସୁ କଲଚର୍ ମଡେଲ୍ (CTCM) ବର୍ଣ୍ଣନା କରୁଛୁ ଯାହା ହୃଦ୍ ଚକ୍ର ସମୟରେ ତ୍ରି-ପରିମାଣୀୟ କାର୍ଡିଆକ୍ ଫିଜିଓଲୋଜିକାଲ୍ ଏବଂ ପାଥୋଫିଜିଓଲୋଜିକାଲ୍ ଡିଷ୍ଟେନସନ୍ ପୁନରାବୃତ୍ତି କରିବା ପାଇଁ ହ୍ୟୁମୋରାଲ୍ ସଙ୍କେତଗୁଡ଼ିକୁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରେ। ଏହି CTCM ପ୍ରି-କ୍ଲିନିକାଲ୍ ଔଷଧ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ ହୃଦୟର ଶରୀର ବିଜ୍ଞାନ/ପାଥୋଫିଜିଓଲୋଜିକୁ ଅନୁକରଣ କରୁଥିବା ଏକ ମୂଲ୍ୟ-ପ୍ରଭାବଶାଳୀ, ମଧ୍ୟ-ଥ୍ରୁପୁଟ୍ କାର୍ଡିଆକ୍ ସିଷ୍ଟମ୍ ପ୍ରଦାନ କରି ପୂର୍ବ-କ୍ଲିନିକାଲ୍ ଔଷଧ ପୂର୍ବାନୁମାନର ସଠିକତାକୁ ପୂର୍ବରୁ କେବେ ହାସଲ ହୋଇନଥିବା ସ୍ତରକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିପାରିବ।
ଭିଟ୍ରୋ 22,23,24 ରେ କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟ୍ କାର୍ଯ୍ୟକୁ ବଜାୟ ରଖିବାରେ ହେମୋଡାଇନାମିକ୍ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ସଙ୍କେତ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରେ। ବର୍ତ୍ତମାନର ପାଣ୍ଡୁଲିପିରେ, ଆମେ ଏକ CTCM (ଚିତ୍ର 1a) ବିକଶିତ କରିଛୁ ଯାହା ଶାରୀରିକ ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି (1.2 Hz, ପ୍ରତି ମିନିଟରେ 72 ବିଟ୍ସ) ରେ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଏବଂ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନାକୁ ପ୍ରେରିତ କରି ବୟସ୍କ ହୃଦସ୍ପନ୍ଦନ ପରିବେଶକୁ ଅନୁକରଣ କରିପାରିବ। ଡାଏଷ୍ଟୋଲ୍ ସମୟରେ ଅତ୍ୟଧିକ ଟିସୁ ପ୍ରସାରଣକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ, ଟିସୁ ଆକାରକୁ 25% ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ ଏକ 3D ପ୍ରିଣ୍ଟିଂ ଡିଭାଇସ୍ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 1b)। ହୃଦସ୍ପନ୍ଦନ ଚକ୍ରକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ପୁନଃଉତ୍ପାଦନ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଡାଟା ଅଧିଗ୍ରହଣ ସିଷ୍ଟମ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସିଷ୍ଟୋଲ୍ ପୂର୍ବରୁ 100 ms ଆରମ୍ଭ କରିବାକୁ C-PACE ସିଷ୍ଟମ୍ ଦ୍ୱାରା ପ୍ରେରିତ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଗତି ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା। ଉପର ଚାମ୍ବରରେ ହୃଦୟର ସ୍ଲାଇସ୍ ବିସ୍ତାର କରିବା ପାଇଁ ଏକ ନମନୀୟ ସିଲିକନ୍ ଝିଲ୍ଲୀକୁ ଚକ୍ରୀ ଭାବରେ ବିସ୍ତାର କରିବା ପାଇଁ ଟିସୁ କଲଚର୍ ସିଷ୍ଟମ୍ ଏକ ପ୍ରୋଗ୍ରାମେବଲ୍ ନ୍ୟୁମେଟିକ୍ ଆକ୍ଟୁଏଟର୍ (LB ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ, ଜର୍ମାନୀ) ବ୍ୟବହାର କରେ। ସିଷ୍ଟମ୍ ଏକ ଚାପ ଟ୍ରାନ୍ସଡ୍ୟୁସର ମାଧ୍ୟମରେ ଏକ ବାହ୍ୟ ବାୟୁ ରେଖା ସହିତ ସଂଯୁକ୍ତ ଥିଲା, ଯାହା ଚାପ (± 1 mmHg) ଏବଂ ସମୟ (± 1 ms) (ଚିତ୍ର 1c) କୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବା ସମ୍ଭବ କରିଥିଲା।
a ଡିଭାଇସର କଲଚର ଚାମ୍ବର ଭିତରେ ନୀଳ ରଙ୍ଗରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା 7 mm ସପୋର୍ଟ ରିଙ୍ଗରେ ଟିସୁ ସେକ୍ସନକୁ ସଂଲଗ୍ନ କରନ୍ତୁ। କଲଚର ଚାମ୍ବରକୁ ଏକ ପତଳା ନମନୀୟ ସିଲିକନ୍ ପରଦା ଦ୍ୱାରା ଏୟାର ଚାମ୍ବରରୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଛି। ଲିକ୍ ରୋକିବା ପାଇଁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚାମ୍ବର ମଧ୍ୟରେ ଏକ ଗାସ୍କେଟ ରଖନ୍ତୁ। ଡିଭାଇସର ଢାଙ୍କଣରେ ଗ୍ରାଫାଇଟ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡ୍ ଥାଏ ଯାହା ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ପ୍ରଦାନ କରେ। b ବଡ଼ ଟିସୁ ଡିଭାଇସ୍, ଗାଇଡ୍ ରିଙ୍ଗ ଏବଂ ସପୋର୍ଟ ରିଙ୍ଗର ଯୋଜନାବଦ୍ଧ ଉପସ୍ଥାପନ। ଉପକରଣର ବାହାର ଧାରରେ ଥିବା ଖାଲ ଭିତରେ ଗାଇଡ୍ ରିଙ୍ଗ ସହିତ ଟିସୁ ସେକ୍ସନ (ବାଦାମୀ) ରଖାଯାଇଥାଏ। ଗାଇଡ୍ ବ୍ୟବହାର କରି, କାର୍ଡିଆକ୍ ଟିସୁ ସେକ୍ସନ ଉପରେ ଟିସୁ ଆକ୍ରିଲିକ୍ ଆଡେସିଭ୍ ସହିତ ଆବୃତ ସପୋର୍ଟ ରିଙ୍ଗକୁ ସାବଧାନତାର ସହିତ ରଖନ୍ତୁ। c ପ୍ରୋଗ୍ରାମେବଲ୍ ନ୍ୟୁମେଟିକ୍ ଆକ୍ଚୁଏଟର (PPD) ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ବାୟୁ ଚାମ୍ବର ଚାପର କାର୍ଯ୍ୟ ଭାବରେ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନାର ସମୟକୁ ଦର୍ଶାଉଥିବା ଗ୍ରାଫ୍। ଚାପ ସେନ୍ସର ବ୍ୟବହାର କରି ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନାକୁ ସିଙ୍କ୍ରୋନାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଡାଟା ଅଧିଗ୍ରହଣ ଡିଭାଇସ୍ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଯେତେବେଳେ କଲଚର ଚାମ୍ବରରେ ଚାପ ସେଟ୍ ସୀମାରେ ପହଞ୍ଚିଥାଏ, ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନାକୁ ଟ୍ରିଗର କରିବା ପାଇଁ C-PACE-EM କୁ ଏକ ପଲ୍ସ ସିଗନାଲ୍ ପଠାଯାଏ। d ଏକ ଇନକ୍ୟୁବେଟର ସେଲ୍ଫରେ ରଖାଯାଇଥିବା ଚାରୋଟି CTCM ର ଚିତ୍ର। ଚାରୋଟି ଉପକରଣ ଏକ PPD ସହିତ ଏକ ନ୍ୟୁମେଟିକ୍ ସର୍କିଟ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ସଂଯୁକ୍ତ ହୋଇଥାଏ, ଏବଂ ନ୍ୟୁମେଟିକ୍ ସର୍କିଟ୍‌ରେ ଚାପ ନିରୀକ୍ଷଣ କରିବା ପାଇଁ ହେମୋଷ୍ଟାଟିକ୍ ଭଲଭ୍‌ରେ ଚାପ ସେନ୍ସର ଭର୍ତି କରାଯାଏ। ପ୍ରତ୍ୟେକ ଉପକରଣରେ ଛଅଟି ଟିସୁ ସେକ୍ସନ୍ ଥାଏ।
ଗୋଟିଏ ନ୍ୟୁମେଟିକ୍ ଆକ୍ଚୁଏଟର ବ୍ୟବହାର କରି, ଆମେ 4ଟି CTCM ଡିଭାଇସ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିପାରିଲୁ, ଯାହା ମଧ୍ୟରୁ ପ୍ରତ୍ୟେକ 6ଟି ଟିସୁ ସେକ୍ସନ୍ ଧରିପାରିବ (ଚିତ୍ର 1d)। CTCM ରେ, ବାୟୁ ଚାମ୍ବରରେ ବାୟୁ ଚାମ୍ବରକୁ ତରଳ ଚାମ୍ବରରେ ସମକାଳୀନ ଚାପରେ ପରିଣତ କରାଯାଏ ଏବଂ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସର ଶାରୀରିକ ପ୍ରସାରଣକୁ ପ୍ରେରଣା ଦିଏ (ଚିତ୍ର 2a ଏବଂ ପରିପୂରକ ଚଳଚ୍ଚିତ୍ର 1)। 80 mm Hg ରେ ଟିସୁ ସେକ୍ସନ୍ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ। କଳା। ଟିସୁ ସେକ୍ସନ୍ ଗୁଡ଼ିକର 25% ଦ୍ୱାରା ପ୍ରସାରଣ ଦେଖାଯାଇଛି (ଚିତ୍ର 2b)। ଏହି ପ୍ରତିଶତ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ସାଧାରଣ ହୃଦକ ଅଂଶ ସଂକୋଚନ ପାଇଁ 2.2–2.3 µm ର ଏକ ଶାରୀରିକ ସାର୍କୋମେର ଲମ୍ବ ସହିତ ସମାନ ବୋଲି ଦେଖାଯାଇଛି 17,19,25। କଷ୍ଟମ୍ କ୍ୟାମେରା ସେଟିଂସ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଟିସୁ ଗତି ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 1)। ଟିସୁ ଗତିର ପରିପୂର୍ଣ୍ଣତା ଏବଂ ବେଗ (ଚିତ୍ର 2c, d) ହୃଦ୍ ଚକ୍ର ସମୟରେ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଏବଂ ସିଷ୍ଟୋଲ୍ ଏବଂ ଡାଏଷ୍ଟୋଲ୍ ସମୟରେ ସମୟ ସହିତ ସମାନ ଥିଲା (ଚିତ୍ର 2b)। ସଂକୋଚନ ଏବଂ ବିଶ୍ରାମ ସମୟରେ ହୃଦ୍ ଟିସୁର ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଏବଂ ବେଗ ସଂସ୍କୃତିରେ 12 ଦିନ ପାଇଁ ସ୍ଥିର ରହିଥିଲା ​​(ଚିତ୍ର 2f)। କଲଚର ସମୟରେ ସଙ୍କୋଚନ ଉପରେ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନାର ପ୍ରଭାବ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ଏକ ଛାଇ ଆଲଗୋରିଦମ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 2a,b) ବ୍ୟବହାର କରି ସକ୍ରିୟ ବିକୃତି ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ପଦ୍ଧତି ବିକଶିତ କରିଥିଲୁ ଏବଂ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ସହିତ ଏବଂ ବିନା ବିକୃତି ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ କରିପାରିଥିଲୁ। ହୃଦୟର ସମାନ ଅଂଶ (ଚିତ୍ର 2f)। କଟର ଗତିଶୀଳ ଅଞ୍ଚଳରେ (R6-9), ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ସମୟରେ ଭୋଲଟେଜ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନାର ଅନୁପସ୍ଥିତି ତୁଳନାରେ 20% ଅଧିକ ଥିଲା, ଯାହା ସଂକୋଚନ କାର୍ଯ୍ୟରେ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନାର ଅବଦାନକୁ ସୂଚିତ କରେ।
ବାୟୁ ଚାମ୍ବର ଚାପ, ତରଳ ଚାମ୍ବର ଚାପ, ଏବଂ ଟିସୁ ଗତି ମାପର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱକାରୀ ଚିହ୍ନ ନିଶ୍ଚିତ କରେ ଯେ ଚାମ୍ବର ଚାପ ତରଳ ଚାମ୍ବର ଚାପକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରେ, ଯାହା ଟିସୁ ସ୍ଲାଇସର ଅନୁରୂପ ଗତି ସୃଷ୍ଟି କରେ। b ପ୍ରତିଶତ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (କମଳା) ସହିତ ଅନୁରୂପ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତିଶତ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (ନୀଳ) ର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱକାରୀ ଚିହ୍ନ। c ହୃଦସ୍ରାବର ମାପ ଗତି ମାପ ଗତିର ଗତି ସହିତ ସୁସଙ୍ଗତ। (d) ହୃଦୟର ଏକ ଖଣ୍ଡରେ ଚକ୍ରୀୟ ଗତି (ନୀଳ ରେଖା) ଏବଂ ବେଗ (କମଳା ବିନ୍ଦୁ ରେଖା) ର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱକାରୀ ପଥ। e ଚକ୍ର ସମୟର ପରିମାଣ (n = ପ୍ରତି ଗୋଷ୍ଠୀ ପ୍ରତି 19 ସ୍ଲାଇସ୍, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ), ସଂକୋଚନ ସମୟ (n = ପ୍ରତି ଗୋଷ୍ଠୀ ପ୍ରତି 19 ସ୍ଲାଇସ୍), ବିଶ୍ରାମ ସମୟ (n = ପ୍ରତି ଗୋଷ୍ଠୀ ପ୍ରତି 19 ସ୍ଲାଇସ୍, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ), ଟିସୁ ଗତି (n = 25 )। ସ୍ଲାଇସ୍)/ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ଗୋଷ୍ଠୀ), ସର୍ବାଧିକ ସିଷ୍ଟୋଲିକ୍ ବେଗ (n = 24(D0), 25(D12) ସ୍ଲାଇସ୍/ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ଗୋଷ୍ଠୀ) ଏବଂ ସର୍ବାଧିକ ବିଶ୍ରାମ ହାର (n=24(D0), 25(D12) ସ୍ଲାଇସ୍/ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ଗୋଷ୍ଠୀ)। ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି-ପରୀକ୍ଷା କୌଣସି ପାରାମିଟରରେ କୌଣସି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ଦେଖାଇଲା ନାହିଁ। f ପ୍ରତିନିଧି ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ (ଲାଲ) ଏବଂ (ନୀଳ) ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ବିନା ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ଟ୍ରେସ୍, ସମାନ ବିଭାଗରୁ ଟିସୁ ବିଭାଗର ଦଶଟି ଆଞ୍ଚଳିକ କ୍ଷେତ୍ର। ତଳ ପ୍ୟାନେଲ୍ ଗୁଡିକ ବିଭିନ୍ନ ବିଭାଗରୁ ଦଶଟି କ୍ଷେତ୍ରରେ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ସହିତ ଏବଂ ବିନା ଟିସୁ ବିଭାଗରେ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ରେ ଶତକଡ଼ା ପାର୍ଥକ୍ୟ ପରିମାଣିକତା ଦର୍ଶାଏ। (n = ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ 8 ଖଣ୍ଡ/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ଛାତ୍ର ଟି-ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05)। (n = ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ 8 ଖଣ୍ଡ/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ଛାତ୍ର ଟି-ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ****p < 0.0001, **p < 0.01, *p < 0.05)। । (n = ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ 8ଟି ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି-ପରୀକ୍ଷା; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05)। （N = 8 片 / 组，来自不同的猪，进行双尾学生 t 检验； **** p <0.0001 ， ** p <0.01 ， * p <0.05 ）。 （N = 8 片 / 组，来自不同的猪，进行双尾学生 t 检验； **** p <0.0001 ， ** p <0.01 ， * p <0.05 ）。 (n = 8 срезов / группу, от разных свиней, дву зононний критерий Стьюдента; **** p <0,0001, ** p <0,01, * p <0,05) (n = 8ଟି ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି-ପରୀକ୍ଷା; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05)।ତ୍ରୁଟି ବାର୍ ଗୁଡିକ ମଧ୍ୟମ ± ମାନକ ବିଚ୍ୟୁତିକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରନ୍ତି।
ଆମର ପୂର୍ବ ସ୍ଥିର ବାୟୋମିମେଟିକ୍ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରଣାଳୀ [20, 21] ରେ, ଆମେ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ପ୍ରୟୋଗ କରି ଏବଂ ମଧ୍ୟମ ଗଠନକୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରି 6 ଦିନ ପାଇଁ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍‌ର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା, କାର୍ଯ୍ୟ ଏବଂ ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତା ବଜାୟ ରଖିଥିଲୁ। ତଥାପି, 10 ଦିନ ପରେ, ଏହି ସଂଖ୍ୟାଗୁଡ଼ିକ ତୀବ୍ର ଭାବରେ ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା। ଆମେ ଆମର ପୂର୍ବ ସ୍ଥିର ବାୟୋମିମେଟିକ୍ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରଣାଳୀ 20, 21 ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଅବସ୍ଥା (Ctrl) ରେ ସଂସ୍କୃତ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ ଉଲ୍ଲେଖ କରିବୁ ଏବଂ ଆମେ ଆମର ପୂର୍ବ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ମାଧ୍ୟମକୁ ଏକକାଳୀନ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଏବଂ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା (CTCM) ଅଧୀନରେ MC ଅବସ୍ଥା ଏବଂ ସଂସ୍କୃତି ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିବୁ। କୁହାଯାଏ। ପ୍ରଥମେ, ଆମେ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିଥିଲୁ ଯେ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ବିନା ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା 6 ଦିନ ପାଇଁ ଟିସୁ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ବଜାୟ ରଖିବା ପାଇଁ ଅପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଥିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 3a,b)। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, STCM ବ୍ୟବହାର କରି ଫିଜିଓ-ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଏବଂ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ପ୍ରଚଳନ ସହିତ, 12-ଦିନ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା MS ପରିସ୍ଥିତିରେ ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ ପରି ରହିଲା, କିନ୍ତୁ Ctrl ପରିସ୍ଥିତିରେ ନୁହେଁ, ଯେପରି MTT ବିଶ୍ଳେଷଣ (ଚିତ୍ର 1) ଦ୍ୱାରା ଦର୍ଶାଯାଇଛି। 3a)। ଏହା ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ କାର୍ଡିଆକ୍ ଚକ୍ରର ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା ଏବଂ ସିମୁଲେସନ୍ ଆମର ପୂର୍ବ ସ୍ଥିର ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରଣାଳୀରେ ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଥିବା ତୁଳନାରେ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ ଦୁଇଗୁଣ ସମୟ ପାଇଁ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ ରଖିପାରେ। ତଥାପି, କାର୍ଡିଆକ୍ ଟ୍ରୋପୋନିନ୍ T ଏବଂ କନେକ୍ସିନ 43 ର ଇମ୍ୟୁନୋଲେବିଂ ଦ୍ୱାରା ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତାର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ଦର୍ଶାଇଛି ଯେ ସମାନ ଦିନର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଅପେକ୍ଷା 12 ତମ ଦିନରେ MC ଟିସୁରେ କନେକ୍ସିନ 43 ପ୍ରକାଶନ ଯଥେଷ୍ଟ ଅଧିକ ଥିଲା। ତଥାପି, ସମାନ କନେକ୍ସିନ 43 ପ୍ରକାଶନ ଏବଂ Z-ଡିସ୍କ ଗଠନ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ବଜାୟ ରହିନଥିଲା (ଚିତ୍ର 3b)। ଆମେ ଟିସୁ ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତା ପରିମାଣ କରିବା ପାଇଁ ଏକ କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧିମତ୍ତା (AI) ଫ୍ରେମୱାର୍କ ବ୍ୟବହାର କରୁ, ଟ୍ରୋପୋନିନ୍-T ଏବଂ କନେକ୍ସିନ ଷ୍ଟେନିଂ 43 ଉପରେ ଆଧାରିତ ଏକ ପ୍ରତିଛବି-ଆଧାରିତ ଗଭୀର ଶିକ୍ଷା ପାଇପଲାଇନ୍ ଯାହା ସ୍ଥାନୀୟକରଣ ଶକ୍ତି ଦୃଷ୍ଟିରୁ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସର ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତା ଏବଂ ପ୍ରତିରକ୍ଷାକୁ ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ଭାବରେ ପରିମାଣିତ କରେ। ଏହି ପଦ୍ଧତି ଏକ କନଭୋଲ୍ୟୁସନାଲ୍ ନ୍ୟୁରାଲ୍ ନେଟୱାର୍କ (CNN) ଏବଂ ଏକ ଗଭୀର ଶିକ୍ଷା ଫ୍ରେମୱାର୍କ ବ୍ୟବହାର କରେ ଯାହା ହୃଦ୍ ଟିସୁର ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ବିଶ୍ୱସନୀୟ ଭାବରେ ପରିମାଣିତ କରେ, ଯେପରି ସନ୍ଦର୍ଭରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ହୋଇଛି। 26. ସ୍ଥିର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ବିଭାଗ ତୁଳନାରେ MC ଟିସୁ ଦିନ 0 ସହିତ ଉନ୍ନତ ଗଠନାତ୍ମକ ସମାନତା ଦେଖାଇଲା। ଏହା ସହିତ, ମାସନଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ ଷ୍ଟେନିଂ MS ପରିସ୍ଥିତିରେ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ର ପ୍ରତିଶତକୁ ସଂସ୍କୃତିର 12 ତମ ଦିନରେ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଅବସ୍ଥା ତୁଳନାରେ ଯଥେଷ୍ଟ କମ୍ ଦର୍ଶାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 3c)। ଯଦିଓ CTCM 12 ତମ ଦିନରେ ହୃଦୟ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାକୁ ତାଜା ହୃଦୟ ଟିସୁ ସହିତ ସମାନ ସ୍ତରକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିଥିଲା, ଏହା ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ଉନ୍ନତ କରିନଥିଲା।
ଏକ ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ସ୍ଥିର ସଂସ୍କୃତି (D12 Ctrl) କିମ୍ବା CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ଖଣ୍ଡ/ଗୋଷ୍ଠୀରେ 12 ଦିନ ପାଇଁ ତାଜା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ (D0) କିମ୍ବା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ କଲଚରର MTT କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାର ପରିମାଣ ଦର୍ଶାଏ, ଗୋଟିଏ ଉପାୟରେ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ####p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ **p < 0.01 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)। ଏକ ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ସ୍ଥିର ସଂସ୍କୃତି (D12 Ctrl) କିମ୍ବା CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ଖଣ୍ଡ/ଗୋଷ୍ଠୀରେ 12 ଦିନ ପାଇଁ ତାଜା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ (D0) କିମ୍ବା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ କଲଚରର MTT କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାର ପରିମାଣ ଦର୍ଶାଏ, ଗୋଟିଏ ଉପାୟରେ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ####p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ **p < 0.01 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)।ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମଟି MTT ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) ର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା କିମ୍ବା ହୃଦ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ସଂସ୍କୃତିର ପରିମାଣକୁ 12 ଦିନ ପାଇଁ ସ୍ଥିର ସଂସ୍କୃତି (D12 ନିୟନ୍ତ୍ରଣ) କିମ୍ବା CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 ନିୟନ୍ତ୍ରଣ) ରେ ଦର୍ଶାଏ। ) ), 12 (D12 MC) ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ, ଏକ-ପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ;#### p <0,0001 по сравнению с D0 и ** p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl) | ####p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ **p < 0.01 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)। a 条形图显示在静态培养 (D12 Ctrl) 或 CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切片 (D0) 或心脏切片培养 12 天的 MTT 活力的量化) ，来自不同猪的 12 (D12 MC) 切片 / 组，进行单向 ANOVA 测试；与 D0 相比， #### p < 0.0001 ，与 D12 Ctrl 相比， ** p <0.01)。 a 条形图显示在静态培养 (D12 Ctrl) 或 CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切片 (D0) ，来自不同猪的 12 (D12 MC) 切片 / 组，进行单向 ANOVA 测试；与 D0 相比， #### p <0.0001 ，与 D12 Ctrl 相比， ** p。)ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ସତେଜ ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) କିମ୍ବା ସ୍ଥିର ସଂସ୍କୃତି (D12 ନିୟନ୍ତ୍ରଣ) କିମ୍ବା CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 ନିୟନ୍ତ୍ରଣ)) ରେ 12 ଦିନ ପାଇଁ କଲଚର୍ଡ କରାଯାଇଥିବା ହୃଦୟ ବିଭାଗରେ MTT କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାର ପରିମାଣ ଦର୍ଶାଉଥିବା ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମ, ଏକତରଫା ANOVA ପରୀକ୍ଷା;#### p <0,0001 по сравнению с D0, ** p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl) | ####p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0, **p < 0.01 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)।b ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ ଇମ୍ୟୁନୋଫ୍ଲୋରେସେନ୍ସ ପ୍ରତିଛବି (ଖାଲି ସ୍କେଲ୍ = 100 µm) ର ସଦ୍ୟ ପୃଥକ ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) କିମ୍ବା ସ୍ଥିର ଅବସ୍ଥା (Ctrl) କିମ୍ବା CTCM ଅବସ୍ଥା (MC) ରେ 12 ଦିନ ପାଇଁ କଲଚର୍ଡ ହୋଇଥିବା ହୃଦୟ ବିଭାଗରେ ଟ୍ରୋପୋନିନ୍-ଟି (ସବୁଜ), କନେକ୍ସିନ୍ 43 (ଲାଲ) ଏବଂ DAPI (ନୀଳ)। ହୃଦୟ ଟିସୁ ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାର କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧିମତା ପରିମାଣୀକରଣ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଖଣ୍ଡ/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ####p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ ****p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)। ହୃଦୟ ଟିସୁ ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାର କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧିମତା ପରିମାଣୀକରଣ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଖଣ୍ଡ/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ####p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ ****p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)। Оличчвееееннааяярруайуррнਗ сцтрри сисаи сисаи иинин аниным م 5 и 7 7 ( с еззов / г иных отиных отиных опиных опакт anoный тпакт ଅନା? #### p <0,0001 по по по по по со со со со со со со d0 لи **** p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl) | କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧିମତ୍ତା ଦ୍ୱାରା ହୃଦ୍‌ ଟିସୁର ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତାର ପରିମାଣ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା; ####p < 0.0001 ବନାମ D0 ଏବଂ ****p < 0.0001 ସହିତ D12 Ctrl ତୁଳନାରେ)।人工智能量化心脏组织结构完整性（ n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗ୍ରୁପ୍ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା; #### p <0.0001 与 D0 相比， **** p <0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。人工智能量化心脏组织结构完整性（ n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିର କଟା / ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା; #### p <0.0001 与 D0 相比， **** p <0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。 Искусственный интеллект для количественной оценки адной целостности сердечной ткани (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) срезов / группу каждой из разных свиней, односторний сравнения **** p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl) | ହୃଦ୍‌ ଟିସୁର ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତା ମାପ କରିବା ପାଇଁ କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧିମତା (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ ପ୍ରତ୍ୟେକ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା; ####p<0.0001 vs .D0 ତୁଳନା ପାଇଁ ****p < 0.0001 D12 Ctrl ତୁଳନା)। c ମାସସନଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ ସ୍ଟେନ୍ ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ହୃଦୟ ଖଣ୍ଡ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିତ୍ର (ବାମ) ଏବଂ ପରିମାଣୀକରଣ (ଡାହାଣ) (ସ୍କେଲ୍ ବେୟାର = 500 µm) (n = ଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଖଣ୍ଡ ପାଇଁ 10 ଖଣ୍ଡ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ####p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ ***p < 0.001 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)। c ମାସସନଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ ସ୍ଟେନ୍ ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ହୃଦୟ ଖଣ୍ଡ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିତ୍ର (ବାମ) ଏବଂ ପରିମାଣୀକରଣ (ଡାହାଣ) (ସ୍କେଲ୍ ବେୟାର = 500 µm) (n = ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଖଣ୍ଡ ପାଇଁ 10 ଖଣ୍ଡ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; #### p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ ***p < 0.001 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)। c Репрезент Кансные изображения (слева) һәм количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашенных трихромным красителем Мас муса (кс покрития = 500 мкм) ANOVA #### p <0,0001 по сравнению с D0 и *** p <0,001 по; сравнению с D12 Ctrl) | c ମାସସନଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ ସ୍ଟେନ୍ (ଅନକୋଟେଡ୍ ସ୍କେଲ୍ = 500 µm) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ହୃଦୟ ଅଂଶଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିତ୍ର (ବାମ) ଏବଂ ପରିମାଣୀକରଣ (ଡାହାଣ) (n = ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ 10 ଅଂଶ/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଛି; #### p < 0 .0001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ ***p < 0.001 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)। c 用 ମାସନ୍ 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸尺度 = 500 µm ）（ n = 10 个切片 / 组，每组来自不同的猪，进行单向 ANOVA 测试； #### p <0.0001 与 D0 相比， *** p <0.001 与 D12 Ctrl 相比）。 C 用 masson 三 色 染料 的 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 相比， *** p <0.001 与 D12 Ctrl 相比）。 c Репрезент киные изображения (слева) һәм количественный мат (справа) срезов сердца, окрашенных трихромным красителем Мас адоа (чяя шкала = 500 мкм) однофакторного ди горингого мата; ### #p <0,0001 по сравнению с D0, *** p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl) | c ମାସସନଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ ସ୍ଟେନ୍ (ଖାଲି = 500 µm) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ହୃଦୟ ଅଂଶଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ ପ୍ରତିଛବି (ବାମ) ଏବଂ ପରିମାଣ (ଡାହାଣ) (n = 10 ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ, ପ୍ରତ୍ୟେକଟି ଏକ ଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ, ଭିନ୍ନତାର ଏକ-ପାଖ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦ୍ୱାରା ପରୀକ୍ଷିତ;### # p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0, ***p < 0.001 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)।ତ୍ରୁଟି ବାର୍ ଗୁଡିକ ମଧ୍ୟମ ± ମାନକ ବିଚ୍ୟୁତିକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରନ୍ତି।
ଆମେ ଅନୁମାନ କରିଥିଲୁ ଯେ କଲଚର ମାଧ୍ୟମରେ ଛୋଟ ଅଣୁ ଯୋଡିବା ଦ୍ୱାରା, କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟ୍ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ଉନ୍ନତ କରାଯାଇପାରିବ ଏବଂ CTCM କଲଚର ସମୟରେ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ବିକାଶ ହ୍ରାସ କରାଯାଇପାରିବ। ତେଣୁ ଆମେ ଆମର ସ୍ଥିର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କଲଚର 20,21 ବ୍ୟବହାର କରି ଛୋଟ ଅଣୁ ପାଇଁ ସ୍କ୍ରିନିଂ କରିଥିଲୁ କାରଣ କମ୍ ସଂଖ୍ୟକ ଦ୍ୱନ୍ଦ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ କାରକ। ଏହି ସ୍କ୍ରିନ ପାଇଁ ଡେକ୍ସାମେଥାସୋନ୍ (ଡେକ୍ସ), ଟ୍ରାଇଓଡୋଥାଇରୋନିନ୍ (T3), ଏବଂ SB431542 (SB) କୁ ବାଛି ଦିଆଯାଇଥିଲା। ଏହି ଛୋଟ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକୁ ପୂର୍ବରୁ hiPSC-CM କଲଚରରେ ସାର୍କୋମେର ଲମ୍ବ, T-ଟ୍ୟୁବ୍ୟୁଲ୍ସ ଏବଂ ପରିବହନ ବେଗ ବୃଦ୍ଧି କରି କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟ୍ସର ପରିପକ୍ୱତାକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଛି। ଏହା ସହିତ, ଡେକ୍ସ (ଏକ ଗ୍ଲୁକୋକର୍ଟିକୋଇଡ୍) ଏବଂ SB ଉଭୟ ପ୍ରଦାହକୁ ଦମନ କରିବା ପାଇଁ ଜଣାଶୁଣା 29,30। ତେଣୁ, ଆମେ ପରୀକ୍ଷା କରିଥିଲୁ ଯେ ଏହି ଛୋଟ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ଗୋଟିଏ କିମ୍ବା ମିଶ୍ରଣକୁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରିବା ଦ୍ୱାରା ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତା ଉନ୍ନତ ହେବ କି ନାହିଁ। ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ସ୍କ୍ରିନିଂ ପାଇଁ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ଯୌଗିକର ଡୋଜ୍ ସାଧାରଣତଃ କୋଷ କଲଚର ମଡେଲରେ ବ୍ୟବହୃତ ସାନ୍ଦ୍ରତା (1 μM Dex27, 100 nM T327, ଏବଂ 2.5 μM SB31) ଉପରେ ଆଧାର କରି ଚୟନ କରାଯାଇଥିଲା। ୧୨ ଦିନର ସଂସ୍କୃତି ପରେ, T3 ଏବଂ Dex ର ମିଶ୍ରଣ ଫଳରେ ସର୍ବୋତ୍ତମ କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟ୍ ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତା ଏବଂ ସର୍ବନିମ୍ନ ତନ୍ତୁମୟ ପୁନଃନିର୍ମାଣ ହୋଇପାରିଲା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 4 ଏବଂ 5)। ଏହା ସହିତ, T3 ଏବଂ Dex ର ଏହି ସାନ୍ଦ୍ରତାର ଦ୍ୱିଗୁଣିତ କିମ୍ବା ଦ୍ୱିଗୁଣିତ ବ୍ୟବହାର ସାଧାରଣ ସାନ୍ଦ୍ରତା ତୁଳନାରେ କ୍ଷତିକାରକ ପ୍ରଭାବ ସୃଷ୍ଟି କରିଥିଲା ​​(ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 6a,b)।
ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ସ୍କ୍ରିନିଂ ପରେ, ଆମେ 4 ଟି କଲଚର ଅବସ୍ଥାର ଏକ ମୁଣ୍ଡ-ଟୁ-ହେଡ୍ ତୁଳନା କରିଥିଲୁ (ଚିତ୍ର 4a): Ctrl: ଆମର ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ଡ ମାଧ୍ୟମ ବ୍ୟବହାର କରି ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ସ୍ଥିର ସଂସ୍କୃତିରେ କଲଚର କରାଯାଇଥିବା ହୃଦୟ ବିଭାଗ; 20.21 TD: T3 ଏବଂ Ctrl ବୁଧବାର ଦିନ Dex ଯୋଡାଗଲା; MC: ଆମର ପୂର୍ବ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ଡ ମାଧ୍ୟମ ବ୍ୟବହାର କରି CTCM ରେ କଲଚର କରାଯାଇଥିବା ହୃଦୟ ବିଭାଗ; ଏବଂ MT: T3 ଏବଂ Dex ସହିତ CTCM ଯୋଡାଗଲା। ଚାଷର 12 ଦିନ ପରେ, MS ଏବଂ MT ଟିସୁର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା MTT ପରୀକ୍ଷା ଦ୍ୱାରା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କିତ ତାଜା ଟିସୁର ପରି ସମାନ ରହିଲା (ଚିତ୍ର 4b)। ଆକର୍ଷଣୀୟ ଭାବରେ, ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ୍ କଲଚର (TD) ରେ T3 ଏବଂ Dex ଯୋଡାଯିବା ଦ୍ୱାରା Ctrl ଅବସ୍ଥା ତୁଳନାରେ କାର୍ଯ୍ୟକାରୀତାରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଉନ୍ନତି ଆସିଲା ନାହିଁ, ଯାହା ହୃଦ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟକାରୀତା ବଜାୟ ରଖିବାରେ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନାର ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ସୂଚାଇଥାଏ।
୧୨ ଦିନ ପାଇଁ ମାଧ୍ୟମ ଉପରେ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା ଏବଂ T3/Dex ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟେସନ୍‌ର ପ୍ରଭାବ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ଚାରୋଟି ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାକୁ ଚିତ୍ରଣ କରୁଥିବା ଏକ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଡିଜାଇନ୍ ଚିତ୍ର। b ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ସମସ୍ତ 4ଟି କଲଚର ପରିସ୍ଥିତିରେ (Ctrl, TD, MC, ଏବଂ MT) ସଂସ୍କୃତି ପରେ 12 ଦିନର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାର ପରିମାଣକୁ ଦର୍ଶାଏ ଯାହା ତାଜା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MT), 12 (D12 MC) ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ **p < 0.01 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)। b ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ସମସ୍ତ 4ଟି କଲଚର ପରିସ୍ଥିତିରେ (Ctrl, TD, MC, ଏବଂ MT) ସଂସ୍କୃତି ପରେ 12 ଦିନର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାର ପରିମାଣକୁ ଦର୍ଶାଉଛି ଯାହା ତାଜା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MT), 12 (D12 MC) ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ **p < 0.01 ତୁଳନାରେ D12 ctrl)। ب D12 TD ଏବଂ D12 MT), 12 (D12 MC) срезов / группу от разных свиней, про анитится односторонний тест ANOVA; #### p <0,0001, ### p <0,001 по сравнению с D0 и ** p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl) | b ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ସମସ୍ତ 4ଟି କଲଚର ପରିସ୍ଥିତି (ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, TD, MC, ଏବଂ MT) ରେ କଲଚର ପରେ 12 ଦିନ ପରେ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାର ପରିମାଣକୁ ଦର୍ଶାଏ ଯାହା ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, ଏବଂ D12 MT), 12 (D12 MC) ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ, ଏକତରଫା ANOVA ପରୀକ୍ଷା; ####p < 0.0001, ###p < 0.001 ବନାମ D0 ଏବଂ **p < 0.01 D12 Ctrl ତୁଳନାରେ) ତୁଳନାରେ ଦେଖାଏ। b 条形图显示所有 4 种培养条件（ Ctrl 、 TD 、 MC 和 MT ）与新鲜心脏切片 (D0) (n = 18 (D0) 、 15 (D12 Ctrl 、 D12 TD 和 D12 MT) ，来自不同猪的 12 (D12 MC) 切片 / 组，进行单向 ANOVA 测试； #### p <0.0001 ， ### p <0.001 与 D0 相比， 12 D12 控制）。ଖ ୪ ୧୨ (ଡି୧୨ ଏମ୍ସି) ଖ односторонний ту ANOVA; #### p <0,0001, ### p <0,001 по сравнению с D0, ** p <0,01 по сравнению; (କଣ୍ଟ୍ରୋଲେମ୍ D12 ସହିତ)। b ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀ 12 (D12 MC) ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକ-ପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷାରୁ, ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MT) ତୁଳନାରେ ସମସ୍ତ 4 କଲଚର ଅବସ୍ଥା (ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, TD, MC ଏବଂ MT) ଦେଖାଉଥିବା ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମ; ####p<0.0001, ###p<0.001 vs. D0, **p<0.01 vs. control D12)। c ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ସମସ୍ତ 4ଟି କଲଚର ପରିସ୍ଥିତିରେ (Ctrl, TD, MC, ଏବଂ MT) ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ଫ୍ଲକ୍ସର ପରିମାଣକୁ 12 ଦିନ ପରେ କଲଚରର ପରିମାଣ ଦର୍ଶାଏ ଯାହା ତାଜା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ (D0) ତୁଳନାରେ (n = 6 ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ###p < 0.001, D0 ତୁଳନାରେ ଏବଂ ***p < 0.001 D12 Ctrl ତୁଳନାରେ)। c ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ସମସ୍ତ 4ଟି କଲଚର ପରିସ୍ଥିତିରେ (Ctrl, TD, MC, ଏବଂ MT) ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ଫ୍ଲକ୍ସର ପରିମାଣକୁ 12 ଦିନ ପରେ କଲଚରର ପରିମାଣ ଦର୍ଶାଏ ଯାହା ତାଜା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ (D0) ତୁଳନାରେ (n = 6 ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ###p < 0.001, D0 ତୁଳନାରେ ଏବଂ ***p < 0.001 D12 Ctrl ତୁଳନାରେ)। c Гистограмма показывает количественную озенку потока глюкозы через 12 дней после митингированя восех 4 условиях митиривированя (кар, TD, MC и MT) по сравнению со свежим срезами срезовы свиней, односторонний Выполняется те ANOVA ### p <0,001 по сравнению с; D0 и *** p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl) | c ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମରେ ସମସ୍ତ 4ଟି କଲଚର ଅବସ୍ଥା (ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, TD, MC ଏବଂ MT) ରେ 12 ଦିନ ପରେ ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ଫ୍ଲକ୍ସର ପରିମାଣୀକରଣ ଦର୍ଶାଯାଇଛି ଯାହା ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) ତୁଳନାରେ (n = 6 ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ, ଏକତରଫା ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଛି; ###p < 0.001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ ***p < 0.001 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl ତୁଳନାରେ)। c 条形图显示所有 4 种培养条件（ Ctrl 、 TD 、 MC 和 MT ）与新鲜心脏切片 (D0) 相比，培养后 12 天的葡萄糖通量定量（ n = 6 片 / 组，来自不同猪，单向执行 ANOVA 测试； ### p <0.001 ，与 D0 相比， *** p <0.001 与 D12 Ctrl 相比）。 C 条形图 显示 所有 4 种 t ctrl 、 td 、 mc 和 mt） 新鲜 后 后 后 后 后 后 后 = n = 6 片 / 组 ， （， 0.00 猪单向执行 OV OV 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 相比， *** p <0.001 与 D12 Ctrl 相比）。 c Гистограмма, показывающая количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после мгитерированя для всех 4 условий митеривированя (ис, TD, MC и MT) по сравнению со свеж с ср сәм разных свиней, односторонний Были проведены Тисты ANOVA; сравнению с D0, *** p <0,001 по сравнению с D12 (କାନ) | c ସମସ୍ତ 4ଟି କଲଚର ଅବସ୍ଥା (ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, TD, MC, ଏବଂ MT) ପାଇଁ 12 ଦିନ ପରେ ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ଫ୍ଲକ୍ସର ପରିମାଣୀକରଣ ଦେଖାଉଥିବା ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମ ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) ତୁଳନାରେ (n = 6 ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା, ###p < 0.001 ତୁଳନାରେ D0, ***p < 0.001 ତୁଳନାରେ D12 (ନିୟନ୍ତ୍ରଣ)।d ଦଶଟି ଆଞ୍ଚଳିକ ଟିସୁ ସେକ୍ସନ ପଏଣ୍ଟରେ ତାଜା (ନୀଳ), ଦିନ 12 MC (ସବୁଜ), ଏବଂ ଦିନ 12 MT (ଲାଲ) ଟିସୁର ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପ୍ଲଟ୍ (n = 4 ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକ-ପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା; ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ କୌଣସି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ନଥିଲା)। e ଜ୍ୱାଳାମୁଖୀ ପ୍ଲଟ୍ ସ୍ଥିର ଅବସ୍ଥା (Ctrl) କିମ୍ବା MT ଅବସ୍ଥା (MT) ଅଧୀନରେ 10-12 ଦିନ ପାଇଁ କଲଚର ହୋଇଥିବା ହୃଦୟ ବିଭାଗ ତୁଳନାରେ ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) ରେ ଭିନ୍ନ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶିତ ଜିନ୍ ଦେଖାଉଛି। f ପ୍ରତ୍ୟେକ କଲଚର ଅବସ୍ଥା ଅଧୀନରେ କଲଚର ହୋଇଥିବା ହୃଦୟ ବିଭାଗ ପାଇଁ ସାର୍କୋମେର୍ ଜିନ୍‌ର ହିଟମ୍ୟାପ୍। ତ୍ରୁଟି ବାର୍ ମାନକ ± ମାନକ ବିଚ୍ୟୁତିକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ।
ଫ୍ୟାଟି ଏସିଡ୍ ଅକ୍ସିଡେସନରୁ ଗ୍ଲାଇକୋଲିସିସ୍ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସ୍ୱିଚ୍ ଉପରେ ମେଟାବୋଲିକ୍ ନିର୍ଭରଶୀଳତା ହେଉଛି କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟ୍ ଡିଫିଫରେନସିଏସନ୍‌ର ଏକ ପ୍ରମୁଖ ଚିହ୍ନ। ଅପରିପକ୍ୱ କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକ ମୁଖ୍ୟତଃ ATP ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି ଏବଂ କିଛି କ୍ରିଷ୍ଟା ସହିତ ହାଇପୋପ୍ଲାଷ୍ଟିକ୍ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ ଥାଏ5,32। ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ବ୍ୟବହାର ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦେଖାଇଛି ଯେ MC ଏବଂ MT ପରିସ୍ଥିତିରେ, ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ବ୍ୟବହାର ଦିନ 0 ଟିସୁ ସହିତ ସମାନ ଥିଲା (ଚିତ୍ର 4c)। ତଥାପି, Ctrl ନମୁନାଗୁଡିକ ତାଜା ଟିସୁ ତୁଳନାରେ ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ବ୍ୟବହାରରେ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବୃଦ୍ଧି ଦେଖାଇଛି। ଏହା ସୂଚିତ କରେ ଯେ CTCM ଏବଂ T3/Dex ର ମିଶ୍ରଣ ଟିସୁ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାକୁ ବୃଦ୍ଧି କରେ ଏବଂ 12-ଦିନର କଲଚର୍ଡ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ମେଟାବୋଲିକ୍ ଫେନୋଟାଇପ୍ ସଂରକ୍ଷଣ କରେ। ଏହା ସହିତ, ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦେଖାଇଛି ଯେ MT ଏବଂ MS ପରିସ୍ଥିତିରେ 12 ଦିନ ପାଇଁ ତାଜା ହୃଦୟ ଟିସୁ ସହିତ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ସ୍ତର ସମାନ ରହିଛି (ଚିତ୍ର 4d)।
କାର୍ଡିଆକ୍ ସ୍ଲାଇସ୍ ଟିସୁର ବିଶ୍ୱ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନାଲ୍ ଭୂଦୃଶ୍ୟ ଉପରେ CTCM ଏବଂ T3/Dex ର ସାମଗ୍ରିକ ପ୍ରଭାବ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ ଚାରୋଟି ଭିନ୍ନ ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାରୁ କାର୍ଡିଆକ୍ ସ୍ଲାଇସ୍ ଉପରେ RNAseq ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲୁ (ପରିପୂରକ ତଥ୍ୟ 1)। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, MT ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକ ତାଜା ହୃଦୟ ଟିସୁ ସହିତ ଉଚ୍ଚ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନାଲ୍ ସମାନତା ଦେଖାଇଥିଲା, 13,642 ଜିନ୍ ମଧ୍ୟରୁ କେବଳ 16 ଟି ଭିନ୍ନ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶିତ ହୋଇଥିଲା। ତଥାପି, ଆମେ ପୂର୍ବରୁ ଦେଖାଇଥିଲୁ, Ctrl ସ୍ଲାଇସ୍ 10-12 ଦିନ ସଂସ୍କୃତିରେ ରହିବା ପରେ 1229 ଭିନ୍ନ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶିତ ଜିନ୍ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା ​​(ଚିତ୍ର 4e)। ଏହି ତଥ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ହୃଦୟ ଏବଂ ଫାଇବ୍ରୋବ୍ଲାଷ୍ଟ ଜିନ୍ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 7a-c) ର qRT-PCR ଦ୍ୱାରା ନିଶ୍ଚିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଆଶ୍ଚର୍ଯ୍ୟଜନକ ଭାବରେ, Ctrl ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକ ହୃଦ୍ ଏବଂ କୋଷ ଚକ୍ର ଜିନ୍ ର ନିମ୍ନଗାମୀତା ଏବଂ ପ୍ରଦାହଜନକ ଜିନ୍ ପ୍ରୋଗ୍ରାମଗୁଡ଼ିକର ସକ୍ରିୟତା ଦେଖାଇଥିଲା। ଏହି ତଥ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ ଦୀର୍ଘକାଳୀନ କଲଚରିଂ ପରେ ସାଧାରଣତଃ ଘଟୁଥିବା ଡିଫିଡେରେନ୍ସିଏସନ୍ MT ଅବସ୍ଥା ଅଧୀନରେ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ହ୍ରାସ ପାଇଥାଏ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 8a,b)। ସାର୍କୋମେର ଜିନ୍‌ର ଯତ୍ନର ସହିତ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ କେବଳ MT ପରିସ୍ଥିତିରେ ସାର୍କୋମେର (ଚିତ୍ର 4f) ଏବଂ ଆୟନ୍ ଚ୍ୟାନେଲ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 9) ଏନକୋଡିଂ କରୁଥିବା ଜିନ୍ ସଂରକ୍ଷିତ, Ctrl, TD, ଏବଂ MC ପରିସ୍ଥିତିରେ ଦମନରୁ ସେମାନଙ୍କୁ ସୁରକ୍ଷା ଦେଇଥାଏ। ଏହି ତଥ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଏବଂ ହ୍ୟୁମୋରାଲ୍ ଉତ୍ତେଜନା (T3/Dex) ର ମିଶ୍ରଣ ସହିତ, ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟୋମ୍ ସଂସ୍କୃତିରେ 12 ଦିନ ପରେ ତାଜା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ପରି ରହିପାରିବ।
ଏହି ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନାଲ୍ ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ଏହି ସତ୍ୟ ଦ୍ୱାରା ସମର୍ଥିତ ଯେ ହୃଦ୍ ବିଭାଗରେ କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟଗୁଡ଼ିକର ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତା MT ପରିସ୍ଥିତିରେ 12 ଦିନ ପାଇଁ ସର୍ବୋତ୍ତମ ଭାବରେ ସଂରକ୍ଷିତ ରହିଥାଏ, ଯେପରି ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ଏବଂ ସ୍ଥାନୀୟ କନେକ୍ସିନ 43 (ଚିତ୍ର 5a) ଦ୍ୱାରା ଦର୍ଶାଯାଇଛି। ଏହା ସହିତ, MT ପରିସ୍ଥିତିରେ ହୃଦ୍ ବିଭାଗରେ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ Ctrl ତୁଳନାରେ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ ପାଇଥିଲା ଏବଂ ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ ସହିତ ସମାନ ଥିଲା (ଚିତ୍ର 5b)। ଏହି ତଥ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା ଏବଂ T3/Dex ଚିକିତ୍ସାର ମିଶ୍ରଣ ସଂସ୍କୃତିରେ ହୃଦୟ ବିଭାଗରେ ହୃଦ୍ ଗଠନକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରେ।
ଏକ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱକାରୀ ଇମ୍ୟୁନୋଫ୍ଲୋରେସେନ୍ସ ପ୍ରତିଛବି ଯାହା ଟ୍ରୋପୋନିନ୍-ଟି (ସବୁଜ), କନେକ୍ସିନ୍ 43 (ଲାଲ), ଏବଂ DAPI (ନୀଳ) ର ସଦ୍ୟ ପୃଥକ ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) ରେ କିମ୍ବା ଚାରୋଟି ହୃଦୟ ବିଭାଗ ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାରେ 12 ଦିନ ପାଇଁ କଲଚର କରାଯାଇଛି (ସ୍କେଲ ବାର୍ = 100 µm)। ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ହୃତପିଣ୍ଡ ଟିସୁ ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତା (n = 7 (D0 ଏବଂ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ଏବଂ D12 MT) ଖଣ୍ଡ/ଗୋଷ୍ଠୀର କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧିମତା ପରିମାଣୀକରଣ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ####p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ *p < 0.05, କିମ୍ବା ****p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)। ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ହୃଦୟ ଟିସୁ ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତା (n = 7 (D0 ଏବଂ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ଏବଂ D12 MT) ଖଣ୍ଡ/ଗୋଷ୍ଠୀର କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧିମତା ପରିମାଣୀକରଣ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; #### p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ *p < 0.05, କିମ୍ବା ****p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)। Количчвеннаяццранкццуанакттани пелеани сомощью ипрцани помощью ипрцани помощью ипрцани помощью ипрщьюани помощью ипкщьюани помощью ипрцани ппощью ипрщьюани помощью ипрщьюани помощью ипкщьюани D12 mc и d12 mt) сриных ориных орин ыхднофактный ттект tot; #### p <0,0001 сравнению с D0 и * p <0,05 или **** p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl) | ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧିମତା (n = 7 (D0 ଏବଂ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ଏବଂ D12 MT) ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ ବ୍ୟବହାର କରି ହୃଦୟ ଟିସୁର ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାର ପରିମାଣ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା; #### p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ *p < 0.05 କିମ୍ବା ****p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)।对不同猪的心脏组织结构完整性（ n = 7 （D0 和 D12 Ctrl ）、 5 （D12 TD 、 D12 MC 和 D12 MT ）切片 / 组）进行人工智能量化，进行单向 ANOVA 测试； #### p <0.0001 与 D0 和 * p <0.05 相比，或 **** p <0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。对 不同 猪 心脏 心脏 完整性 = n = 7 （d0 和 d12 ctrl） （5 （d12 td 、 d12 mc 和 d12 mt） 组） 人工 化 # # # # ########## p <0.0001 与 D0 Ctrl 相比）。ଏକ-ପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା ସହିତ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀ (n = 7 (D0 ଏବଂ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ଏବଂ D12 MT) ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ) ରେ କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧିମତା ବ୍ୟବହାର କରି ହୃଦ୍‌ ଟିସୁର ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତାର ପରିମାଣ;#### p <0,0001 по сравнению с D0 и * p <0,05 или **** p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl) | #### D0 ତୁଳନାରେ p < 0.0001 ଏବଂ D12 Ctrl ତୁଳନାରେ *p < 0.05 କିମ୍ବା ****p < 0.0001)। b ମାସସନଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ ସ୍ଟେନ୍ (ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 500 µm) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରତିଛବି ଏବଂ ପରିମାଣୀକରଣ (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ଏବଂ D12 MC), ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ 9 (D12 MT) ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ####p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ ***p < 0.001, କିମ୍ବା ****p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)। b ମାସସନଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ ସ୍ଟେନ୍ (ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 500 µm) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରତିଛବି ଏବଂ ପରିମାଣୀକରଣ (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, ଏବଂ D12 MC), ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ 9 (D12 MT) ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକ-ପାଖ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ####p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ ***p < 0.001, କିମ୍ବା ****p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)। b Репрезент киные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромным красителем Мас агаа (чинная серейка = 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MC) ср выполняется односторонний тест ANOVA #### p <0,0001 по сравнению с D0 и *** p <; 0,001 или **** p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl) | b ମାସନଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ ସ୍ଟେନ୍ (ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 500 µm) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ ପ୍ରତିଛବି ଏବଂ ପରିମାଣୀକରଣ (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MC), ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ 9 (D12 MT) ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକ-ପାଖିଆ ANOVA ପ୍ରଦର୍ଶନ; ####p < 0.0001 ବନାମ D0 ଏବଂ ***p < 0.001 କିମ୍ବା ****p < 0.0001 ବନାମ D12 Ctrl)। b 用 ମାସନ୍ 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺 = 500 µm ）（ n = 10 （D0 、 D12 Ctrl 、 D12 TD 和 D12 MC ），来自不同猪的 9 个（ D12 MT ）切片 / 组，进行单因素方差分析； #### p <0.0001 与 D0 相比， *** p <0.001 ，或 **** p < 0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。 ଖ 切片 切片 切片 切片 切片 切片 组，进行单因素方差分析； / 组，进行单因素方差分析； #### p <0.0001 与 D0 相比， *** p <0.001 ，或 **** p <0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。 b Репрезент киные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромом Мас агаа (чинная чейейка = 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MC), 9 (D12 MT) ANOVA; #### p <0,0001 по сравнению с D0, *** p <0,001 или **** p <0,0001; по сравнению с D12 Ctrl) | b ମାସନଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ (ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 500 µm) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରତିଛବି ଏବଂ ପରିମାଣୀକରଣ (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MC), ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀ/ଗୋଷ୍ଠୀରୁ 9 (D12 MT) ବିଭାଗ, ଗୋଟିଏ ANOVA ପଦ୍ଧତି; ####p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D0, ***p < 0.001 କିମ୍ବା ****p < 0.0001 ତୁଳନାରେ D12 Ctrl)।ତ୍ରୁଟି ବାର୍ ଗୁଡିକ ମଧ୍ୟମ ± ମାନକ ବିଚ୍ୟୁତିକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରନ୍ତି।
ଶେଷରେ, କାର୍ଡିଆକ୍ ଟିସୁ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ବୃଦ୍ଧି କରି CTCM ର କାର୍ଡିଆକ୍ ହାଇପରଟ୍ରୋଫି ଅନୁକରଣ କରିବାର କ୍ଷମତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। CTCM ରେ, ପିକ୍ ଏୟାର ଚାମ୍ବର ଚାପ 80 mmHg ରୁ 80 mmHg କୁ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା। Art. (ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍) 140 mmHg ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ Art. (ଚିତ୍ର 6a)। ଏହା ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ରେ 32% ବୃଦ୍ଧି ସହିତ ସମାନ (ଚିତ୍ର 6b), ଯାହାକୁ ପୂର୍ବରୁ ହାଇପରଟ୍ରୋଫିରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି ଏକ ସାର୍କୋମେର ଲମ୍ବ ହାସଲ କରିବା ପାଇଁ ହୃଦସ୍ପନ୍ଦନ ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ଅନୁରୂପ ପ୍ରତିଶତ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଭାବରେ ଦର୍ଶାଯାଇଥିଲା। ସଂକୋଚନ ଏବଂ ବିଶ୍ରାମ ସମୟରେ କାର୍ଡିଆକ୍ ଟିସୁର ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଏବଂ ବେଗ ଛଅ ଦିନ ପାଇଁ କଲଚର (ଚିତ୍ର 6c) ସମୟରେ ସ୍ଥିର ରହିଥିଲା। MT ଅବସ୍ଥାରୁ କାର୍ଡିଆକ୍ ଟିସୁକୁ ଛଅ ଦିନ ପାଇଁ ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (MT (ସାଧାରଣ)) କିମ୍ବା ଅଧିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଅବସ୍ଥା (MT (OS)) ର ଶିକାର କରାଯାଇଥିଲା। ଚାରି ଦିନ କଲଚର ପରେ, ହାଇପରଟ୍ରୋଫିକ୍ ବାୟୋମାର୍କର୍ NT-ProBNP MT (ସାଧାରଣ) ଅବସ୍ଥା (ଚିତ୍ର 7a) ତୁଳନାରେ MT (OS) ଅବସ୍ଥାରେ ମଧ୍ୟମରେ ଉଲ୍ଲେଖନୀୟ ଭାବରେ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଥିଲା। ଏହା ସହିତ, ଛଅ ଦିନର କଲଚରିଂ ପରେ, MT (OS) (ଚିତ୍ର 7b) ରେ କୋଷ ଆକାର MT ହୃଦୟର ଅଂଶ (ସାଧାରଣ) ତୁଳନାରେ ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଛି। ଏହା ସହିତ, NFATC4 ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର ଟ୍ରାନ୍ସଲୋକେସନ୍ ଅଧିକ ପ୍ରସାରିତ ଟିସୁ (ଚିତ୍ର 7c) ରେ ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଛି। ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ହାଇପରଡିଷ୍ଟେନସନ୍ ପରେ ପାଥୋଲୋଜିକାଲ ପୁନଃନିର୍ମାଣର ପ୍ରଗତିଶୀଳ ବିକାଶ ଦର୍ଶାଏ ଏବଂ ଏହି ଧାରଣାକୁ ସମର୍ଥନ କରେ ଯେ CTCM ଡିଭାଇସକୁ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍-ପ୍ରେରିତ କାର୍ଡିଆକ୍ ହାଇପରଟ୍ରୋଫି ସିଗନାଲିଂ ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ ଏକ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ।
ବାୟୁ ଚାମ୍ବର ଚାପ, ତରଳ ଚାମ୍ବର ଚାପ, ଏବଂ ଟିସୁ ଗତି ମାପର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱକାରୀ ଚିହ୍ନ ନିଶ୍ଚିତ କରେ ଯେ ଚାମ୍ବର ଚାପ ତରଳ ଚାମ୍ବର ଚାପକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରେ, ଯାହା ଟିସୁ ସ୍ଲାଇସର ଅନୁରୂପ ଗତି ସୃଷ୍ଟି କରେ। b ସାଧାରଣତଃ ବିସ୍ତାରିତ (କମଳା) ଏବଂ ଅଧିକ ବିସ୍ତାରିତ (ନୀଳ) ଟିସୁ ବିଭାଗ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱକାରୀ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ପ୍ରତିଶତ ଏବଂ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ହାର ବକ୍ର। c ଚକ୍ର ସମୟ (n = ପ୍ରତି ଗୋଷ୍ଠୀରେ 19 ସ୍ଲାଇସ୍, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ), ସଂକୋଚନ ସମୟ (n = ପ୍ରତି ଗୋଷ୍ଠୀରେ 18-19 ସ୍ଲାଇସ୍, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ), ବିଶ୍ରାମ ସମୟ (n = ପ୍ରତି ଗୋଷ୍ଠୀରେ 19 ସ୍ଲାଇସ୍, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ) ଦର୍ଶାଉଥିବା ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ), ଟିସୁ ଗତିର ପରିପ୍ରକାଶ (n = 14 ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀ, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ), ଶିଖର ସିଷ୍ଟୋଲିକ୍ ବେଗ (n = 14 ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀ, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ) ଏବଂ ଶିଖର ବିଶ୍ରାମ ହାର (n = 14 (D0), 15 (D6) ) ବିଭାଗ/ଗୋଷ୍ଠୀ) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ), ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି-ପରୀକ୍ଷଣ କୌଣସି ପାରାମିଟରରେ କୌଣସି ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପାର୍ଥକ୍ୟ ଦେଖାଇ ନାହିଁ, ଯାହା ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ଏହି ପାରାମିଟରଗୁଡ଼ିକ ଓଭରଭୋଲ୍ଟେଜ ସହିତ 6 ଦିନର ସଂସ୍କୃତି ସମୟରେ ସ୍ଥିର ରହିଥିଲା। ତ୍ରୁଟି ବାର୍ଗୁଡ଼ିକ ହାରାହାରି ± ମାନକ ବିଚ୍ୟୁତିକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ।
ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ MT ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (Norm) କିମ୍ବା ଅଧିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (OS) ଅବସ୍ଥା (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ଏବଂ D4 MTOS) ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀରେ କଲଚର୍ କରାଯାଇଥିବା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ରୁ କଲଚର୍ ମିଡିଆରେ NT-ProBNP ସାନ୍ଦ୍ରତାର ଏକ ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ପରିମାଣୀକରଣ, ଦୁଇ-ପାଖ ANOVA କରାଯାଏ; **p < 0.01 ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ତୁଳନାରେ)। ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ MT ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (Norm) କିମ୍ବା ଅଧିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (OS) ଅବସ୍ଥା (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ଏବଂ D4 MTOS) ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀରେ କଲଚର୍ କରାଯାଇଥିବା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ରୁ କଲଚର୍ ମିଡିଆରେ NT-ProBNP ସାନ୍ଦ୍ରତାର ଏକ ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ପରିମାଣୀକରଣ, ଦୁଇ-ପାଖ ANOVA କରାଯାଏ; **p < 0.01 ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ତୁଳନାରେ)।ସାଧାରଣ MT ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (ସାଧାରଣ) କିମ୍ବା ଅଧିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ଏବଂ D4).MTOS) ସ୍ଲାଇସ୍ / ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ଗୋଷ୍ଠୀର ପରିସ୍ଥିତିରେ କଲଚର୍ କରାଯାଇଥିବା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ରୁ କଲଚର୍ ମାଧ୍ୟମରେ NT-ProBNP ସାନ୍ଦ୍ରତାର ପରିମାଣାତ୍ମକ ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମ, ଭିନ୍ନତାର ଦୁଇ-କାରକ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଏ;** p <0,01 по сравнению с кәканным раст адененем) **ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ତୁଳନାରେ p < 0.01)। a 在 MT Norm (ସାଧାରଣ) OS (OS) 条件下培养的心脏切片培养基中 NT-ProBNP 浓度的条形图量化（ n = 4 (D2 MTNorm) 、 3 （D2 MTOS 、 D4 MTNorm 和 D4 MTOS ）来自不同猪的切片 / 组，进行双向方差分析； ** 与正常拉伸相比， p < ୦.୦୧)। MT ସ୍ normal ାଭାବିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (ନର୍ମ) କିମ୍ବା ଓଭରଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (OS) ଅବସ୍ଥାରେ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm 和 D4 MTOS) ରେ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସରେ NT-ProBNP ଏକାଗ୍ରତାର ଏକ ପରିମାଣ, ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ତୁଳନାରେ, p <0.01) |ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ସାଧାରଣ MT ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (ସାଧାରଣ) କିମ୍ବା ଅଧିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) ଏବଂ D4 MTOS) ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀର ପରିସ୍ଥିତିରେ କଲଚର୍ଡ ହୋଇଥିବା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍‌ରେ NT-ProBNP ସାନ୍ଦ୍ରତାର ପରିମାଣ, ଭିନ୍ନତାର ଦ୍ୱି-ପାଖ ବିଶ୍ଳେଷଣ;** p <0,01 по сравнению с кәканным раст адененем) **ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ତୁଳନାରେ p < 0.01)। b ଟ୍ରୋପୋନିନ୍-T ଏବଂ WGA (ବାମ) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ଏବଂ କୋଷ ଆକାର ପରିମାଣ (ଡାହାଣ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) କୋଷ/ଗୋଷ୍ଠୀ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିତ୍ରଗୁଡ଼ିକ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ 10ଟି ଭିନ୍ନ ସ୍ଲାଇସ୍ରୁ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ଛାତ୍ର ଟି-ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ****p < 0.0001 ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ତୁଳନାରେ)। b ଟ୍ରୋପୋନିନ୍-T ଏବଂ WGA (ବାମ) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ଏବଂ କୋଷ ଆକାର ପରିମାଣ (ଡାହାଣ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) କୋଷ/ଗୋଷ୍ଠୀ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିତ୍ରଗୁଡ଼ିକ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ 10ଟି ଭିନ୍ନ ସ୍ଲାଇସ୍ରୁ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ଛାତ୍ର ଟି-ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; ****p < 0.0001 ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ତୁଳନାରେ)। b Репрезент киные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) һәм количественного определения размера клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm с к рот свиней, два- проитится хвостовой т-критерий Стьюдента **** p <0,0001 по сравнению с; كانни каныным раст зирением)। b ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ 10ଟି ଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ ଅଂଶରୁ ଟ୍ରୋପୋନିନ୍-T ଏବଂ AZP (ବାମ) ଏବଂ କୋଷ ଆକାର ପରିମାଣ (ଡାହାଣ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) କୋଷ/ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ହୃଦୟ ଅଂଶର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିତ୍ର, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ବିଶିଷ୍ଟ ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି-ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା; ****p < 0.0001 ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ତୁଳନାରେ)। b 用肌钙蛋白 -T 和 WGA （左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代表性图像（ n = 330 （D6 MTOS ），来自不同猪的 10 个不同切片的 369 （D6 MTNorm ）细胞 / 组，两进行有尾学生 t 检验；与正常拉伸相比， **** p <0.0001 ）。 b କାଲକେରିନ୍-ଟି ଏବଂ WGA (ବାମ) ଏବଂ କୋଷ ଆକାର (ଡାହାଣ) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ରତିଛବି (n = 330 (D6 MTOS), 10 ଟି ଭିନ୍ନ ସ୍ଲାଇସ୍ (D6 MTNorm) ରୁ 369) କୋଷ/ବିବରଣୀ, ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚିଂ ସହିତ ତୁଳନା କରାଯାଇଥିବା ； ****p < 0.0001)। b Репрезент киные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) һәм количественная оценка размера клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 скрчич дву зононние критерий Стьюдента; (ସ୍ଥାପନ)। b ଟ୍ରୋପୋନିନ୍-ଟି ଏବଂ AZP (ବାମ) ସହିତ ରଙ୍ଗିତ ହୃଦୟ ଅଂଶଗୁଡ଼ିକର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିତ୍ର ଏବଂ କୋଷ ଆକାରର ପରିମାଣ (ଡାହାଣ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ 10ଟି ଭିନ୍ନ ଅଂଶରୁ) କୋଷ/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ମାନଦଣ୍ଡ ଛାତ୍ରଙ୍କ t; ****p < ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ତୁଳନାରେ 0.0001)। c ଦିନ ୦ ଏବଂ ଦିନ ଷଷ୍ଠ MTOS ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧି ଚିତ୍ର, ଟ୍ରୋପୋନିନ୍-T ଏବଂ NFATC4 ପାଇଁ ଇମ୍ୟୁନୋଲେବଲ୍ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ସ୍ଲାଇସ/ଗୋଷ୍ଠୀର ନ୍ୟୁକ୍ଲିଅସକୁ NFATC4 ର ସ୍ଥାନାନ୍ତରଣର ପରିମାଣ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ଛାତ୍ର ଟି-ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; *p < 0.05)। c ଦିନ 0 ଏବଂ ଦିନ 6 ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧି ଚିତ୍ର MTOS ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସଗୁଡ଼ିକୁ ଟ୍ରୋପୋନିନ୍-T ଏବଂ NFATC4 ପାଇଁ ଇମ୍ୟୁନୋଲେବଲ୍ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ସ୍ଲାଇସ/ଗୋଷ୍ଠୀର ନ୍ୟୁକ୍ଲିଏସ୍ ରେ NFATC4 ର ସ୍ଥାନାନ୍ତରଣର ପରିମାଣ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ଛାତ୍ର ଟି-ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; *p < 0.05)। c Репрезент чанные изображения для срезов сердца 0 и 6 дней MTOS, им эсомомеченых для тропонина-Т и NFATC4, и количественная оценка кинлоккации NFATC4 в ядра кавернозных клеток (n = 4) разных свиней, виполняется дву зононний т-критерий Стьюдента * p <0,05); c 0 ଏବଂ 6 ଦିନ MTOS ରେ ହୃଦସ୍ପନ୍ଦନ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିତ୍ର, ଟ୍ରୋପୋନିନ୍-T ଏବଂ NFATC4 ପାଇଁ ଇମ୍ୟୁନୋଲେବଲ୍, ଏବଂ ଗୁମ୍ଫା କୋଷର ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟସ୍ ରେ NFATC4 ସ୍ଥାନାନ୍ତରଣର ପରିମାଣ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀ) ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି-ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା; *p < 0.05)। c 用于肌钙蛋白 -T 和 NFATC4 免疫标记的第 0 天和第 6 天 MTOS 心脏切片的代表性图像，以及来自不同猪的 NFATC4 易位至 CM 细胞核的量化（ n = 4 (D0) 、 3 (D6 MTOS) 切片 / 组, 进行双尾学生 t 检验； * p <0.05)。 c କାଲକାନିନ୍-ଟି ଏବଂ NFATC4 ଇମ୍ୟୁନୋଲାବେଲିଂର ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିତ୍ର 第 0 天和第 6 天 MTOS ହୃଦୟ କଟା, ଏବଂ NFATC4 ବିଭିନ୍ନ NFATC4 易位至 CM ସେଲ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟସ୍ 的 ପରିମାଣ 化 (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) 切礼 / 组, 时间双尾学生 et 电影； * p <0.05) | c Репрезент каныные изображения срезов сердца MTOS на 0 и 6 день для им исомомарировки тропонином-Т и NFATC4 и количественная осенка чилоккации NFATC4 в ядра CM от разных свиней (n = 4 (D0)) хвостатый t-критерий Стьюдента * p <0,05); c ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ସ୍ଲାଇସ୍/ଗୋଷ୍ଠୀ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ t-ମାପଦଣ୍ଡ ଛାତ୍ରଙ୍କ; *p < 0.05) ରୁ CM ର ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟସ୍ ରେ NFATC4 ଟ୍ରାନ୍ସଲୋକେସନର ଟ୍ରୋପୋନିନ୍-T ଏବଂ NFATC4 ଇମ୍ୟୁନୋଲେବିଲିଂ ଏବଂ ପରିମାଣୀକରଣ ପାଇଁ ଦିନ 0 ଏବଂ 6 ରେ MTOS ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍‌ର ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଚିତ୍ର।ତ୍ରୁଟି ବାର୍ ଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟମ ± ମାନକ ବିଚ୍ୟୁତିକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ।
ଟ୍ରାନ୍ସଲେସନାଲ୍ ହୃଦ୍‌ରୋଗ ଗବେଷଣା ପାଇଁ ସେଲ୍ୟୁଲାର୍ ମଡେଲ୍ ଆବଶ୍ୟକ ଯାହା ହୃଦ୍‌ ପରିବେଶକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ପୁନଃଉତ୍ପାଦନ କରେ। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଏକ CTCM ଡିଭାଇସ୍ ବିକଶିତ ଏବଂ ବର୍ଣ୍ଣିତ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ହୃଦୟର ଅଲ୍ଟ୍ରାଥିନ୍ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ ଉତ୍ତେଜିତ କରିପାରିବ। CTCM ସିଷ୍ଟମରେ ଶାରୀରିକ ଭାବରେ ସିଙ୍କ୍ରୋନାଇଜ୍ ହୋଇଥିବା ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋମେକାନିକାଲ୍ ଉତ୍ତେଜନା ଏବଂ T3 ଏବଂ ଡେକ୍ସ ତରଳ ସମୃଦ୍ଧି ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ। ଯେତେବେଳେ ପୋର୍ସିନ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ ଏହି କାରକଗୁଡ଼ିକର ସାମ୍ନା କରିବାକୁ ପଡ଼ିଥିଲା, ସେମାନଙ୍କର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା, ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତା, ମେଟାବୋଲିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନାଲ୍ ପ୍ରକାଶନ 12 ଦିନର ସଂସ୍କୃତି ପରେ ତାଜା ହୃଦୟ ଟିସୁ ପରି ସମାନ ରହିଥିଲା। ଏହା ସହିତ, ହୃଦ୍‌ ଟିସୁର ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରସାରଣ ହାଇପରଏକ୍ସଟେନସନ୍ ଯୋଗୁଁ ହୃଦ୍‌ର ହାଇପରଟ୍ରୋଫି ସୃଷ୍ଟି କରିପାରେ। ସାମଗ୍ରିକ ଭାବରେ, ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡ଼ିକ ଏକ ସାଧାରଣ ହୃଦ୍‌ ଫିନୋଟାଇପ୍ ବଜାୟ ରଖିବାରେ ଶାରୀରିକ ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାର ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକାକୁ ସମର୍ଥନ କରେ ଏବଂ ଔଷଧ ସ୍କ୍ରିନିଂ ପାଇଁ ଏକ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ପ୍ରଦାନ କରେ।
କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟସ୍‌ର କାର୍ଯ୍ୟ ଏବଂ ବଞ୍ଚିବା ପାଇଁ ଏକ ଅନୁକୂଳ ପରିବେଶ ସୃଷ୍ଟି କରିବାରେ ଅନେକ କାରଣ ଅବଦାନ ରଖେ। ଏହି କାରଣଗୁଡ଼ିକ ମଧ୍ୟରୁ ସବୁଠାରୁ ସ୍ପଷ୍ଟ ହେଉଛି (1) ଆନ୍ତଃକୋଷୀୟ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା, (2) ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋମେକାନିକାଲ୍ ଉତ୍ତେଜନା, (3) ହ୍ୟୁମୋରାଲ୍ କାରକ ଏବଂ (4) ମେଟାବୋଲିକ୍ ସବ୍‌ଷ୍ଟ୍ରେଟ୍‌ ସହିତ ଜଡିତ। ଶାରୀରିକ କୋଷ-ରୁ-କୋଷୀୟ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ପାଇଁ ଏକ ବାହ୍ୟକୋଷୀୟ ମାଟ୍ରିକ୍ସ ଦ୍ୱାରା ସମର୍ଥିତ ଏକାଧିକ କୋଷ ପ୍ରକାରର ଜଟିଳ ତ୍ରି-ପରିମାଣ ନେଟୱାର୍କ ଆବଶ୍ୟକ। ଏହିପରି ଜଟିଳ କୋଷୀୟ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା ବ୍ୟକ୍ତିଗତ କୋଷ ପ୍ରକାରର ସହ-ସଂସ୍କୃତି ଦ୍ୱାରା ଇନ ଭିଟ୍ରୋରେ ପୁନଃନିର୍ମାଣ କରିବା କଷ୍ଟକର, କିନ୍ତୁ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ଅର୍ଗାନୋଟାଇପିକ୍ ପ୍ରକୃତି ବ୍ୟବହାର କରି ସହଜରେ ହାସଲ କରାଯାଇପାରିବ।
କାର୍ଡିଆକ୍ ଫେନୋଟାଇପ୍ ବଜାୟ ରଖିବା ପାଇଁ କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟ୍ସର ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଏବଂ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ। ଯଦିଓ hiPSC-CM କଣ୍ଡିସନିଂ ଏବଂ ପରିପକ୍ୱତା ପାଇଁ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନାକୁ ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ କରାଯାଇଛି, ଅନେକ ସୁନ୍ଦର ଅଧ୍ୟୟନ ସମ୍ପ୍ରତି ଏକ ଅକ୍ଷୀୟ ଲୋଡିଂ ବ୍ୟବହାର କରି ସଂସ୍କୃତିରେ ହୃଦୟର ସ୍ଲାଇସଗୁଡ଼ିକର ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନାକୁ ଚେଷ୍ଟା କରିଛନ୍ତି। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡ଼ିକ ଦର୍ଶାନ୍ତି ଯେ 2D ଏକ ଅକ୍ଷୀୟ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଲୋଡିଂ ସଂସ୍କୃତି ସମୟରେ ହୃଦୟର ଫେନୋଟାଇପ୍ ଉପରେ ଏକ ସକାରାତ୍ମକ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ। ଏହି ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡ଼ିକରେ, ହୃଦୟର ଅଂଶଗୁଡ଼ିକୁ ଆଇସୋମେଟ୍ରିକ୍ ଟେନ୍ସାଇଲ୍ ଫୋର୍ସ17, ରେଖୀୟ ଅକ୍ସୋଟୋନିକ୍ ଲୋଡିଂ18 ସହିତ ଲୋଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା, କିମ୍ବା ଫୋର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସଡ୍ୟୁସର ଫିଡବ୍ୟାକ୍ ଏବଂ ଟେନସନ୍ ଡ୍ରାଇଭ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ହୃଦଚକ୍ର ପୁନଃନିର୍ମାଣ କରାଯାଇଥିଲା। ତଥାପି, ଏହି ପଦ୍ଧତିଗୁଡ଼ିକ ପରିବେଶଗତ ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ ବିନା ଏକ ଅକ୍ଷୀୟ ଟିସୁ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି, ଯାହା ଫଳରେ ଅନେକ କାର୍ଡିଆକ୍ ଜିନ୍ ଦମନ ହୁଏ କିମ୍ବା ଅସ୍ୱାଭାବିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସହିତ ଜଡିତ ଜିନ୍‌ର ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରକାଶନ ହୁଏ। ଏଠାରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ CTCM ଏକ 3D ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋମେକାନିକାଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ପ୍ରଦାନ କରେ ଯାହା ଚକ୍ର ସମୟ ଏବଂ ଶାରୀରିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (25% ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍, 40% ସିଷ୍ଟୋଲ୍, 60% ଡାଏଷ୍ଟୋଲ୍, ଏବଂ 72 ବିଟ୍ ପ୍ରତି ମିନିଟ୍) ଦୃଷ୍ଟିରୁ ପ୍ରାକୃତିକ ହୃଦକ୍ରିୟା ଚକ୍ରକୁ ଅନୁକରଣ କରେ। ଯଦିଓ ଏହି ତ୍ରି-ପରିମାଣୀୟ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା କେବଳ ଟିସୁ ଅଖଣ୍ଡତା ବଜାୟ ରଖିବା ପାଇଁ ଯଥେଷ୍ଟ ନୁହେଁ, ଟିସୁ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା, କାର୍ଯ୍ୟ ଏବଂ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଭାବରେ ବଜାୟ ରଖିବା ପାଇଁ T3/Dex ବ୍ୟବହାର କରି ହ୍ୟୁମୋରାଲ ଏବଂ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନାର ମିଶ୍ରଣ ଆବଶ୍ୟକ।
ବୟସ୍କ ହୃଦୟର ଫେନୋଟାଇପ୍ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବାରେ ହାସ୍ୟାତ୍ମକ କାରଣଗୁଡ଼ିକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରନ୍ତି। ଏହାକୁ HiPS-CM ଅଧ୍ୟୟନରେ ଆଲୋକିତ କରାଯାଇଥିଲା ଯେଉଁଥିରେ କୋଷ ପରିପକ୍ୱତାକୁ ତ୍ୱରାନ୍ୱିତ କରିବା ପାଇଁ କଲଚର ମିଡିଆରେ T3 ଏବଂ Dex ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। T3 କୋଷ ଝିଲ୍ଲୀ 36 ମଧ୍ୟରେ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍, ଶର୍କରା ଏବଂ କ୍ୟାଲସିୟମର ପରିବହନକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରେ। ଏହା ସହିତ, T3 MHC-α ପ୍ରକାଶନ ଏବଂ MHC-β ଡାଉନରେଗୁଲେସନକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ, ଭ୍ରୁଣ CM ରେ ଧୀର ଟ୍ୱିଚ୍ ମାୟୋଫିବ୍ରିଲ୍ ତୁଳନାରେ ପରିପକ୍ୱ କାର୍ଡିଓମାୟୋସାଇଟରେ ଦ୍ରୁତ ଟ୍ୱିଚ୍ ମାୟୋଫିବ୍ରିଲ୍ ଗଠନକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ। ହାଇପୋଥାଇରଏଡ୍ ରୋଗୀଙ୍କ ମଧ୍ୟରେ T3 ଅଭାବ ମାୟୋଫିବ୍ରିଲାର ବ୍ୟାଣ୍ଡର କ୍ଷତି ଏବଂ ସ୍ୱର ବିକାଶର ହ୍ରାସ ହାରରେ ପରିଣତ ହୁଏ 37। ଡେକ୍ସ ଗ୍ଲୁକୋକର୍ଟିକଏଡ୍ ରିସେପ୍ଟର ଉପରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ ଏବଂ ପୃଥକ ପର୍ଫ୍ୟୁଜ୍ଡ ହୃଦୟରେ ମାୟୋକାର୍ଡିଆଲ୍ ସଂକୋଚନକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିବା ଦେଖାଯାଇଛି; 38 ଏହି ଉନ୍ନତି କ୍ୟାଲସିୟମ୍ ଜମା-ଚାଳିତ ପ୍ରବେଶ (SOCE) 39,40 ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ସହିତ ଜଡିତ ବୋଲି ମନେ କରାଯାଏ। ଏହା ସହିତ, ଡେକ୍ସ ଏହାର ରିସେପ୍ଟର ସହିତ ବାନ୍ଧି ହୁଏ, ଏକ ବ୍ୟାପକ କୋଷକୋଷୀୟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସୃଷ୍ଟି କରେ ଯାହା ପ୍ରତିରକ୍ଷା କାର୍ଯ୍ୟ ଏବଂ ପ୍ରଦାହକୁ ଦମନ କରେ 30।
ଆମର ଫଳାଫଳ ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ Ctrl ତୁଳନାରେ ଭୌତିକ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା (MS) ସାମଗ୍ରିକ ସଂସ୍କୃତି କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିଛି, କିନ୍ତୁ ସଂସ୍କୃତିରେ 12 ଦିନ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା, ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତା ଏବଂ ହୃଦସ୍ପନ୍ଦନ ବଜାୟ ରଖିବାରେ ବିଫଳ ହୋଇଛି। Ctrl ତୁଳନାରେ, CTCM (MT) ସଂସ୍କୃତିରେ T3 ଏବଂ Dex ଯୋଗ କରିବା କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିଛି ଏବଂ 12 ଦିନ ପାଇଁ ତାଜା ହୃଦୟ ଟିସୁ ସହିତ ସମାନ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ ପ୍ରୋଫାଇଲ୍, ଗଠନାତ୍ମକ ଅଖଣ୍ଡତା ଏବଂ ମେଟାବୋଲିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବଜାୟ ରଖିଛି। ଏହା ସହିତ, ଟିସୁ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଡିଗ୍ରୀକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରି, STCM ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ହାଇପରଏକ୍ସଟେନସନ୍-ପ୍ରେରିତ କାର୍ଡିଆକ୍ ହାଇପରଟ୍ରୋଫି ମଡେଲ୍ ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା STCM ସିଷ୍ଟମର ବହୁମୁଖୀତାକୁ ଦର୍ଶାଏ। ଏହା ଉଲ୍ଲେଖ କରାଯିବା ଉଚିତ ଯେ ଯଦିଓ କାର୍ଡିଆକ୍ ରିମୋଡେଲିଂ ଏବଂ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ସାଧାରଣତଃ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ଅଙ୍ଗଗୁଡ଼ିକୁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରେ ଯାହାର ପରିଚଳନ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଉପଯୁକ୍ତ ସାଇଟୋକାଇନ୍ ସହିତ ଫାଗୋସାଇଟୋସିସ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ପୁନଃନିର୍ମାଣ କାରକ ପ୍ରଦାନ କରିପାରିବେ, ତଥାପି ହୃଦସ୍ପନ୍ଦନର ଅଂଶଗୁଡ଼ିକ ଚାପ ଏବଂ ଆଘାତର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଫାଇବ୍ରୋଟିକ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ମାୟୋଫାଇବ୍ରୋବ୍ଲାଷ୍ଟରେ ଅନୁକରଣ କରିପାରିବ। ଏହା ପୂର୍ବରୁ ଏହି କାର୍ଡିଆକ୍ ସ୍ଲାଇସ୍ ମଡେଲରେ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଛି। ଏହା ଉଲ୍ଲେଖ କରାଯିବା ଉଚିତ ଯେ CTCM ପାରାମିଟରଗୁଡ଼ିକୁ ଟାଚକାର୍ଡିଆ, ବ୍ରାଡିକାର୍ଡିଆ ଏବଂ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ସଂଚାଳନ ସମର୍ଥନ (ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଅନଲୋଡେଡ୍ ହୃଦୟ) ଭଳି ଅନେକ ଅବସ୍ଥାକୁ ଅନୁକରଣ କରିବା ପାଇଁ ଚାପ/ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଆମ୍ପ୍ଲିଚ୍ୟୁଡ୍ ଏବଂ ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସିକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରି ମଡ୍ୟୁଲେଟ୍ କରାଯାଇପାରିବ। ଏହା ସିଷ୍ଟମକୁ ଔଷଧ ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ ଏକ ମଧ୍ୟମ ଥ୍ରୁପୁଟ୍ କରିଥାଏ। ଅତ୍ୟଧିକ ପରିଶ୍ରମ-ପ୍ରେରିତ କାର୍ଡିଆକ୍ ହାଇପରଟ୍ରୋଫି ମଡେଲ୍ କରିବା ପାଇଁ CTCM ର କ୍ଷମତା ବ୍ୟକ୍ତିଗତ ଚିକିତ୍ସା ପାଇଁ ଏହି ସିଷ୍ଟମର ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ପଥ ପ୍ରଶସ୍ତ କରିଥାଏ। ଶେଷରେ, ବର୍ତ୍ତମାନର ଅଧ୍ୟୟନ ଦର୍ଶାଉଛି ଯେ କାର୍ଡିଆକ୍ ଟିସୁ ସେକ୍ସନର ସଂସ୍କୃତି ବଜାୟ ରଖିବା ପାଇଁ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଏବଂ ହ୍ୟୁମୋରାଲ୍ ଉତ୍ତେଜନା ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ।
ଯଦିଓ ଏଠାରେ ଉପସ୍ଥାପିତ ତଥ୍ୟ ସୂଚାଇ ଦିଏ ଯେ CTCM ହେଉଛି ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ମାୟୋକାର୍ଡିୟମ୍ ମଡେଲିଂ ପାଇଁ ଏକ ଅତ୍ୟନ୍ତ ପ୍ରତିଶ୍ରୁତିପୂର୍ଣ୍ଣ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ, ଏହି କଲଚର ପଦ୍ଧତିର କିଛି ସୀମା ଅଛି। CTCM ସଂସ୍କୃତିର ମୁଖ୍ୟ ସୀମା ହେଉଛି ଏହା ସ୍ଲାଇସ୍ ଉପରେ ନିରନ୍ତର ଗତିଶୀଳ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଚାପ ଲଦିଥାଏ, ଯାହା ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚକ୍ର ସମୟରେ ହୃଦସ୍ପନ୍ଦନକୁ ସକ୍ରିୟ ଭାବରେ ନିରୀକ୍ଷଣ କରିବାର କ୍ଷମତାକୁ ବାଧା ଦିଏ। ଏହା ସହିତ, ହୃଦସ୍ପନ୍ଦନଗୁଡ଼ିକର ଛୋଟ ଆକାର (7 ମିମି) ଯୋଗୁଁ, ପାରମ୍ପରିକ ବଳ ସେନ୍ସର ବ୍ୟବହାର କରି କଲଚର ସିଷ୍ଟମ ବାହାରେ ସିଷ୍ଟୋଲିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବାର କ୍ଷମତା ସୀମିତ। ବର୍ତ୍ତମାନର ପାଣ୍ଡୁଲିପିରେ, ଆମେ ସଂକୋଚନାତ୍ମକ କାର୍ଯ୍ୟର ସୂଚକ ଭାବରେ ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ଭୋଲଟେଜ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରି ଏହି ସୀମାକୁ ଆଂଶିକ ଭାବରେ ଅତିକ୍ରମ କରିଛୁ। ତଥାପି, ଏହି ସୀମା ପାଇଁ ଆହୁରି କାର୍ଯ୍ୟ ଆବଶ୍ୟକ ହେବ ଏବଂ ଭବିଷ୍ୟତରେ କଲଚରରେ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍‌ର କାର୍ଯ୍ୟର ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ମନିଟରିଂ ପାଇଁ ପଦ୍ଧତି ପ୍ରଚଳନ କରି ଏହାକୁ ସମାଧାନ କରାଯାଇପାରିବ, ଯେପରିକି କ୍ୟାଲସିୟମ୍ ଏବଂ ଭୋଲଟେଜ-ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ରଙ୍ଗ ବ୍ୟବହାର କରି ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ମ୍ୟାପିଂ। CTCMର ଆଉ ଏକ ସୀମା ହେଉଛି ଯେ କାର୍ଯ୍ୟ କରୁଥିବା ମଡେଲ୍ ଶାରୀରିକ ଚାପ (ପ୍ରିଲୋଡ୍ ଏବଂ ଆଫ୍ଟରଲୋଡ୍) କୁ ପରିଚାଳନା କରେ ନାହିଁ। CTCM ରେ, ବହୁତ ବଡ଼ ଟିସୁରେ ଡାଏଷ୍ଟୋଲ୍ (ପୂର୍ଣ୍ଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍) ଏବଂ ସିଷ୍ଟୋଲ୍ (ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ସମୟରେ ସଂକୋଚନର ଲମ୍ବ) ରେ 25% ଶାରୀରିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ପୁନଃଉତ୍ପାଦନ କରିବା ପାଇଁ ବିପରୀତ ଦିଗରେ ଚାପ ପ୍ରବର୍ତ୍ତିତ ହୋଇଥିଲା। ଭବିଷ୍ୟତର CTCM ଡିଜାଇନରେ ଉଭୟ ପାର୍ଶ୍ୱରୁ ହୃଦ୍‌ପିଣ୍ଡ ଟିସୁ ଉପରେ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଚାପ ପକାଇ ଏବଂ ହୃଦୟର କୋଠରୀରେ ଘଟୁଥିବା ସଠିକ୍ ଚାପ-ଆଲୋକ ସମ୍ପର୍କ ପ୍ରୟୋଗ କରି ଏହି ସୀମାକୁ ଦୂର କରାଯିବା ଉଚିତ।
ଏହି ପାଣ୍ଡୁଲିପିରେ ରିପୋର୍ଟ କରାଯାଇଥିବା ଓଭରଷ୍ଟ୍ରେଚ୍-ଇଣ୍ଡ୍ୟୁସଡ୍ ରିମୋଡେଲିଂ ହାଇପରଟ୍ରୋଫିକ୍ ହାଇପରଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ସିଗନାଲଗୁଡ଼ିକର ଅନୁକରଣ କରିବାରେ ସୀମିତ। ତେଣୁ, ଏହି ମଡେଲ୍ ହ୍ୟୁମୋରାଲ୍ କିମ୍ବା ନ୍ୟୁରାଲ୍ ଫ୍ୟାକ୍ଟର (ଯାହା ଏହି ସିଷ୍ଟମରେ ନାହିଁ) ବିନା ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍-ଇଣ୍ଡ୍ୟୁସଡ୍ ହାଇପରଟ୍ରୋଫିକ୍ ସିଗନାଲିଂର ଅଧ୍ୟୟନରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିପାରିବ। CTCM ର ବହୁଳତା ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ ଆହୁରି ଅଧ୍ୟୟନ ଆବଶ୍ୟକ, ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ପ୍ରତିରକ୍ଷା କୋଷ ସହିତ ସହ-ସଂସ୍କୃତି, ପ୍ଲାଜ୍ମା ହ୍ୟୁମୋରାଲ୍ ଫ୍ୟାକ୍ଟର ସଞ୍ଚାଳନ, ଏବଂ ନ୍ୟୁରୋନାଲ୍ କୋଷ ସହିତ ସହ-ସଂସ୍କୃତି ସମୟରେ ଇନର୍ଭେସନ୍ CTCM ସହିତ ରୋଗ ମଡେଲିଂର ସମ୍ଭାବନାକୁ ଉନ୍ନତ କରିବ।
ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ ତେରଟି ଘୁଷୁରୀ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ସମସ୍ତ ପ୍ରାଣୀ ପ୍ରକ୍ରିୟା ସଂସ୍ଥାଗତ ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ ଅନୁଯାୟୀ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଲୁଇସଭିଲ୍ ବିଶ୍ୱବିଦ୍ୟାଳୟର ପ୍ରତିଷ୍ଠାନ ପଶୁ ଯତ୍ନ ଏବଂ ବ୍ୟବହାର କମିଟି ଦ୍ୱାରା ଅନୁମୋଦିତ ହୋଇଥିଲା। ମହାଧମନୀ ଆର୍ଚକୁ କ୍ଲାମ୍ପ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ହୃଦୟକୁ 1 ଲିଟର ଷ୍ଟରାଇଲ କାର୍ଡିଓପ୍ଲେଜିଆ (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL ହେପାରିନ୍, 7.4 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ pH) ସହିତ ପର୍ଫ୍ୟୁଜ କରାଯାଇଥିଲା; ହୃତପିଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ବରଫ-ଥଣ୍ଡା କାର୍ଡିଓପ୍ଲେଜିକ୍ ଦ୍ରବଣରେ ସଂରକ୍ଷିତ ରଖାଯାଇଥିଲା ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଏହାକୁ ବରଫ ଉପରେ ପରୀକ୍ଷାଗାରକୁ ପଠାଯାଇ ନଥାଏ, ଯାହା ସାଧାରଣତଃ <10 ମିନିଟ୍ ହୋଇଥାଏ। ହୃତପିଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ବରଫ-ଥଣ୍ଡା କାର୍ଡିଓପ୍ଲେଜିକ୍ ଦ୍ରବଣରେ ସଂରକ୍ଷିତ ରଖାଯାଇଥିଲା ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଏହାକୁ ବରଫ ଉପରେ ପରୀକ୍ଷାଗାରକୁ ପଠାଯାଇ ନଥାଏ, ଯାହା ସାଧାରଣତଃ <10 ମିନିଟ୍ ହୋଇଥାଏ। сердца хранили в ледяном кардиоп огиическом растворе до сировировки в лабораторию на льду, что обикно занимает <10 ମିନି। ହୃତପିଣ୍ଡକୁ ବରଫ-ଥଣ୍ଡା କାର୍ଡିଓପ୍ଲେଜିକ୍ ଦ୍ରବଣରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ବରଫ ଉପରେ ପରୀକ୍ଷାଗାରକୁ ପରିବହନ କରାଯାଇ ନଥାଏ, ଯାହା ସାଧାରଣତଃ <10 ମିନିଟ୍ ସମୟ ନେଇଥାଏ।将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常 <10 分钟。将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常 <10 分钟。 Держите сердца в ледяной кардиоп огии до аировировки в лаборатораторю на льду, обикно <10 ମିନି। ସାଧାରଣତଃ <10 ମିନିଟ୍ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ, ବରଫ ଉପରେ ପରୀକ୍ଷାଗାରକୁ ପରିବହନ ନହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ହୃଦୟକୁ ବରଫ କାର୍ଡିଓପ୍ଲେଜିଆ ଉପରେ ରଖନ୍ତୁ।
CTCM ଡିଭାଇସ୍ ସଲିଡ୍‌ୱାର୍କସ୍‌ କମ୍ପ୍ୟୁଟର-ଏଡେଡ୍ ଡିଜାଇନ୍ (CAD) ସଫ୍ଟୱେର୍‌ରେ ବିକଶିତ ହୋଇଥିଲା। କଲଚର ଚାମ୍ବର, ଡିଭାଇଡର୍ ଏବଂ ଏୟାର ଚାମ୍ବରଗୁଡ଼ିକ CNC ସ୍ପଷ୍ଟ ଆକ୍ରିଲିକ୍ ପ୍ଲାଷ୍ଟିକ୍‌ରେ ତିଆରି। 7mm ବ୍ୟାସର ବ୍ୟାକ୍-ଅପ୍ ରିଙ୍ଗ୍ କେନ୍ଦ୍ରରେ ଉଚ୍ଚ ଘନତା ପଲିଥିଲିନ୍ (HDPE) ରେ ତିଆରି ଏବଂ ତଳେ ମିଡିଆକୁ ସିଲ୍ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ସିଲିକନ୍ ଓ-ରିଙ୍ଗ୍‌କୁ ସମାୟୋଜିତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ o-ରିଙ୍ଗ୍ ଗ୍ରୁଭ୍ ଅଛି। ଏକ ପତଳା ସିଲିକା ପରଦା କଲଚର ଚାମ୍ବରକୁ ପୃଥକ କରେ ପୃଥକୀକରଣ ପ୍ଲେଟ୍‌ରୁ। ସିଲିକନ୍ ପରଦା 0.02″ ଘନ ସିଲିକନ୍ ସିଟ୍‌ରୁ ଲେଜର୍‌ କଟା ହୋଇଥାଏ ଏବଂ ଏହାର କଠିନତା 35A ହୋଇଥାଏ। ତଳ ଏବଂ ଉପର ସିଲିକନ୍ ଗାସ୍କେଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକ 1/16″ ଘନ ସିଲିକନ୍ ସିଟ୍‌ରୁ ଲେଜର୍‌ କଟା ହୋଇଥାଏ ଏବଂ ଏହାର କଠିନତା 50A ହୋଇଥାଏ। ବ୍ଲକ୍‌କୁ ବନ୍ଧନ କରିବା ଏବଂ ଏକ ଏୟାରଟାଇଟ୍ ସିଲ୍‌ ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ 316L ଷ୍ଟେନଲେସ୍ ଷ୍ଟିଲ୍‌ ସ୍କ୍ରୁ ଏବଂ ୱିଙ୍ଗ୍ ନଟ୍‌ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଏ।
C-PACE-EM ସିଷ୍ଟମ ସହିତ ସଂଯୁକ୍ତ ହେବା ପାଇଁ ଏକ ଉତ୍ସର୍ଗୀକୃତ ମୁଦ୍ରିତ ସର୍କିଟ୍ ବୋର୍ଡ (PCB) ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇଛି। PCBରେ ଥିବା ସ୍ୱିସ୍ ମେସିନ୍ କନେକ୍ଟର ସକେଟଗୁଡ଼ିକ ରୂପା-ପ୍ଲେଟେଡ୍ ତମ୍ବା ତାର ଏବଂ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡରେ 0-60 ସ୍କ୍ରୁ ବ୍ରୋଞ୍ଜ ଦ୍ୱାରା ଗ୍ରାଫାଇଟ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡ୍ ସହିତ ସଂଯୁକ୍ତ। ମୁଦ୍ରିତ ସର୍କିଟ୍ ବୋର୍ଡକୁ 3D ପ୍ରିଣ୍ଟରର କଭରରେ ରଖାଯାଇଛି।
CTCM ଡିଭାଇସ୍ ଏକ ପ୍ରୋଗ୍ରାମେବଲ୍ ନ୍ୟୁମେଟିକ୍ ଆକ୍ଚୁଏଟର୍ (PPD) ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହୁଏ ଯାହା ହୃଦ୍‌ଚକ୍ର ପରି ଏକ ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ରକ୍ତଚାପ ସୃଷ୍ଟି କରେ। ବାୟୁ ଚାମ୍ବର ଭିତରେ ଚାପ ବୃଦ୍ଧି ପାଇବା ସହିତ, ନମନୀୟ ସିଲିକନ୍ ପରଦା ଉପରକୁ ବିସ୍ତାରିତ ହୁଏ, ଯାହା ଟିସୁ ସ୍ଥାନ ତଳେ ମଧ୍ୟମକୁ ବାଧ୍ୟ କରେ। ଡାଏଷ୍ଟୋଲ୍ ସମୟରେ ହୃଦୟର ଶାରୀରିକ ପ୍ରସାରଣକୁ ଅନୁକରଣ କରି, ତରଳ ପଦାର୍ଥର ଏହି ନିର୍ଗମନ ଦ୍ୱାରା ଟିସୁର କ୍ଷେତ୍ରକୁ ବିସ୍ତାରିତ କରାଯିବ। ବିଶ୍ରାମର ଶିଖରରେ, ଗ୍ରାଫାଇଟ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ବାୟୁ ଚାମ୍ବରରେ ଚାପ ହ୍ରାସ କରିଥିଲା ​​ଏବଂ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ସଂକୋଚନ ସୃଷ୍ଟି କରିଥିଲା। ପାଇପ୍ ଭିତରେ ବାୟୁ ପ୍ରଣାଳୀରେ ଚାପ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଚାପ ସେନ୍ସର ସହିତ ଏକ ହେମୋଷ୍ଟାଟିକ୍ ଭଲଭ୍ ଅଛି। ଚାପ ସେନ୍ସର ଦ୍ୱାରା ଅନୁଭବିତ ଚାପ ଲାପଟପ୍ ସହିତ ସଂଯୁକ୍ତ ଏକ ଡାଟା ସଂଗ୍ରହକରେ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଏ। ଏହା ଗ୍ୟାସ୍ ଚାମ୍ବର ଭିତରେ ଚାପର ନିରନ୍ତର ନିରୀକ୍ଷଣ କରିବାକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ। ଯେତେବେଳେ ସର୍ବାଧିକ ଚାମ୍ବର ଚାପ (ମାନକ 80 mmHg, 140 mmHg OS) ପହଞ୍ଚିଗଲା, ଡାଟା ଅଧିଗ୍ରହଣ ଡିଭାଇସ୍ କୁ 2 ms ପାଇଁ ଏକ ବାଇଫାସିକ୍ ଭୋଲଟେଜ୍ ସିଗନାଲ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିବା ପାଇଁ C-PACE-EM ସିଷ୍ଟମକୁ ଏକ ସିଗନାଲ୍ ପଠାଇବାକୁ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଦିଆଯାଇଥିଲା, ଯାହା 4 V ରେ ସେଟ୍ କରାଯାଇଛି।
ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରାପ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 6ଟି କୂପରେ କଲଚର ଅବସ୍ଥା ନିମ୍ନଲିଖିତ ଭାବରେ କରାଯାଇଥିଲା: ସ୍ଥାନାନ୍ତର ପାତ୍ରରୁ ଅମଳ କରାଯାଇଥିବା ହୃଦୟକୁ ଥଣ୍ଡା (4° ସେ.) କାର୍ଡିଓପ୍ଲେଜିଆ ଥିବା ଏକ ଟ୍ରେକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ। ବାମ ଭେଣ୍ଟ୍ରିକାଲକୁ ଏକ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ ବ୍ଲେଡ୍ ସାହାଯ୍ୟରେ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 1-2 cm3 ଖଣ୍ଡରେ କାଟି ଦିଆଯାଇଥିଲା। ଏହି ଟିସୁ ବ୍ଲକଗୁଡ଼ିକୁ ଟିସୁ ଆଡେସିଭ୍ ସହିତ ଟିସୁ ସପୋର୍ଟ ସହିତ ସଂଲଗ୍ନ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଟାଇରୋଡ୍‌ର ଦ୍ରବଣ ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ କମ୍ପନଶୀଳ ମାଇକ୍ରୋଟୋମ୍ ଟିସୁ ବାଥରେ ରଖାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ନିରନ୍ତର ଅମ୍ଳଜାନଯୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା (3 g/L 2,3-ବ୍ୟୁଟାନେଡିଓନ୍ ମୋନୋଅକ୍ସିମ୍ (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g)। ), 6 mM KCl (0.447 g), 10 mM D-ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ (1.86 g), 10 mM HEPES (2.38 g), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M ଦ୍ରବଣ), 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml 1 M ଦ୍ରବଣ), 1 L ddH2O ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ। କମ୍ପନଶୀଳ ମାଇକ୍ରୋଟୋମକୁ 80 Hz ଆବୃତ୍ତିରେ 300 µm ଘନ ସ୍ଲାଇସ କାଟିବା ପାଇଁ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହାର ଆନୁଭୂମିିକ କମ୍ପନ ଆମ୍ପ୍ଲିଚ୍ୟୁଡ୍ 2 mm ଏବଂ ଅଗ୍ରିମ ହାର 0.03 mm/s ଥିଲା। ଦ୍ରବଣକୁ ଥଣ୍ଡା ରଖିବା ପାଇଁ ଟିସୁ ବାଥକୁ ବରଫ ଦ୍ୱାରା ଘେରି ରଖାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତାପମାତ୍ରା 4°C ରେ ବଜାୟ ରଖାଯାଇଥିଲା। ଗୋଟିଏ କଲଚର ପ୍ଲେଟ୍ ପାଇଁ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ଅଂଶ ପ୍ରାପ୍ତ ନହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ମାଇକ୍ରୋଟୋମ ବାଥରୁ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ ବରଫ ଉପରେ ନିରନ୍ତର ଅମ୍ଳଜାନଯୁକ୍ତ ଟାଇରୋଡ୍ ଦ୍ରବଣ ଧାରଣ କରୁଥିବା ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ବାଥକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ। ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ୍ କଲଚର ପାଇଁ, ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ ଜୀବାଣୁମୁକ୍ତ 6 mm ଚଉଡା ପଲିୟୁରେଥାନ୍ ସପୋର୍ଟ ସହିତ ସଂଲଗ୍ନ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ 6 ml ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ଡ ମାଧ୍ୟମ (199 ମାଧ୍ୟମ, 1x ITS ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟ, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-ଆଲକାଲାଇନ୍ ଏବଂ 2X ଆଣ୍ଟିବାୟୋଟିକ୍-ଆଣ୍ଟିଫଙ୍ଗାଲ୍) ରେ ରଖାଯାଇଥିଲା। C-Pace ମାଧ୍ୟମରେ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକରେ ବୈଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା (10 V, ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି 1.2 Hz) ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା। TD ଅବସ୍ଥା ପାଇଁ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ମାଧ୍ୟମ ପରିବର୍ତ୍ତନରେ 100 nM ଏବଂ 1 μM ରେ ତାଜା T3 ଏବଂ Dex ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। ଦିନକୁ 3 ଥର ପରିବର୍ତ୍ତନ ପୂର୍ବରୁ ମାଧ୍ୟମ ଅମ୍ଳଜାନରେ ପରିପୂର୍ଣ୍ଣ ହୋଇଥାଏ। 37°C ଏବଂ 5% CO2 ରେ ଏକ ଇନକ୍ୟୁବେଟରରେ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ କଲଚର କରାଯାଇଥିଲା।
CTCM କଲଚର ପାଇଁ, ପରିବର୍ତ୍ତିତ ଟାଇରୋଡର ଦ୍ରବଣ ଥିବା ଏକ ପେଟ୍ରି ଡିସରେ ଏକ କଷ୍ଟମ-ତୈଳ 3D ପ୍ରିଣ୍ଟରରେ ଟିସୁ ସେକ୍ସନ ରଖାଯାଇଥିଲା। ଏହି ଡିଭାଇସକୁ ସପୋର୍ଟ ରିଙ୍ଗର କ୍ଷେତ୍ରଫଳର 25% ଦ୍ୱାରା ହୃଦୟର ସ୍ଲାଇସର ଆକାର ବୃଦ୍ଧି କରିବା ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇଛି। ଏହା ଏପରି କରାଯାଏ ଯେ ଟାଇରୋଡର ଦ୍ରବଣରୁ ମାଧ୍ୟମକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହେବା ପରେ ଏବଂ ଡାଏଷ୍ଟୋଲ୍ ସମୟରେ ହୃଦୟର ସେକ୍ସନଗୁଡ଼ିକ ପ୍ରସାରିତ ନହୁଏ। ହିଷ୍ଟୋଆକ୍ରିଲିକ୍ ଗ୍ଲୁ ବ୍ୟବହାର କରି, 300 µm ଘନ ଅଂଶଗୁଡ଼ିକୁ 7 ମିମି ବ୍ୟାସର ଏକ ସପୋର୍ଟ ରିଙ୍ଗରେ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା। ସପୋର୍ଟ ରିଙ୍ଗରେ ଟିସୁ ସେକ୍ସନଗୁଡ଼ିକୁ ସଂଲଗ୍ନ କରିବା ପରେ, ଅତିରିକ୍ତ ଟିସୁ ସେକ୍ସନଗୁଡ଼ିକୁ କାଟି ଦିଅନ୍ତୁ ଏବଂ ସଂଲଗ୍ନ ଟିସୁ ସେକ୍ସନଗୁଡ଼ିକୁ ପୁଣି ବରଫ (4°C) ଉପରେ ଟାଇରୋଡର ଦ୍ରବଣର ବାଥରେ ରଖନ୍ତୁ ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଗୋଟିଏ ଡିଭାଇସ ପାଇଁ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ସେକ୍ସନ ପ୍ରସ୍ତୁତ ହୋଇନଥାଏ। ସମସ୍ତ ଡିଭାଇସ ପାଇଁ ମୋଟ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ସମୟ 2 ଘଣ୍ଟାରୁ ଅଧିକ ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ। 6 ଟି ଟିସୁ ସେକ୍ସନଗୁଡ଼ିକୁ ସେମାନଙ୍କ ସପୋର୍ଟ ରିଙ୍ଗ ସହିତ ସଂଲଗ୍ନ କରାଯିବା ପରେ, CTCM ଡିଭାଇସକୁ ଏକତ୍ରିତ କରାଯାଇଥିଲା। CTCM କଲଚର ଚାମ୍ବର 21 ମିଲି ପ୍ରି-ଅକ୍ସିଜେନେଟେଡ୍ ମାଧ୍ୟମ ସହିତ ପୂର୍ବରୁ ପୂର୍ଣ୍ଣ ହୋଇଥାଏ। ଟିସୁ ସେକ୍ସନଗୁଡ଼ିକୁ କଲଚର ଚାମ୍ବରକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ ଏବଂ ଏକ ପିପେଟ୍ ସହିତ ଯେକୌଣସି ବାୟୁ ବବୁଲ୍ ସାବଧାନତାର ସହିତ ବାହାର କରନ୍ତୁ। ତା'ପରେ ଟିସୁ ସେକ୍ସନକୁ ଗାତ ଭିତରକୁ ନେଇ ଧୀରେ ଧୀରେ ଚାପି ଦିଆଯାଏ। ଶେଷରେ, ଡିଭାଇସରେ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡ୍ କ୍ୟାପ୍ ରଖନ୍ତୁ ଏବଂ ଡିଭାଇସକୁ ଇନକ୍ୟୁବେଟରକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ। ତା'ପରେ CTCM କୁ ଏୟାର ଟ୍ୟୁବ୍ ଏବଂ C-PACE-EM ସିଷ୍ଟମ ସହିତ ସଂଯୋଗ କରନ୍ତୁ। ନ୍ୟୁମେଟିକ୍ ଆକ୍ଟୁଏଟର ଖୋଲିଥାଏ ଏବଂ ଏୟାର ଭାଲଭ CTCM ଖୋଲିଥାଏ। C-PACE-EM ସିଷ୍ଟମକୁ 2 ms ପାଇଁ ବାଇଫାସିକ୍ ପେସିଂ ସମୟରେ 1.2 Hz ରେ 4 V ପ୍ରଦାନ କରିବା ପାଇଁ ବିନ୍ୟାସିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡରେ ଗ୍ରାଫାଇଟ୍ ଜମା ନ ହେବା ପାଇଁ ମଧ୍ୟମକୁ ଦିନକୁ ଦୁଇଥର ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡଗୁଡ଼ିକୁ ଦିନକୁ ଥରେ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯାଇଥିଲା। ଆବଶ୍ୟକ ହେଲେ, ସେମାନଙ୍କ ତଳେ ପଡ଼ିଥିବା ଯେକୌଣସି ବାୟୁ ବବୁଲ୍ ବାହାର କରିବା ପାଇଁ ଟିସୁ ସେକ୍ସନଗୁଡ଼ିକୁ ସେମାନଙ୍କ କଲଚର କୂପରୁ ବାହାର କରାଯାଇପାରିବ। MT ଚିକିତ୍ସା ପରିସ୍ଥିତି ପାଇଁ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ମାଧ୍ୟମ ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ 100 nM T3 ଏବଂ 1 μM ଡେକ୍ସ ସହିତ T3/Dex ସତେଜ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। CTCM ଡିଭାଇସଗୁଡ଼ିକୁ 37°C ଏବଂ 5% CO2 ରେ ଏକ ଇନକ୍ୟୁବେଟରରେ କଲଚର କରାଯାଇଥିଲା।
ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସର ବିସ୍ତାରିତ ପଥ ପ୍ରାପ୍ତ କରିବା ପାଇଁ, ଏକ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର କ୍ୟାମେରା ସିଷ୍ଟମ ବିକଶିତ ହୋଇଥିଲା। ଏକ SLR କ୍ୟାମେରା (Canon Rebel T7i, Canon, Tokyo, Japan) ଏକ Navitar Zoom 7000 18-108mm ମାକ୍ରୋ ଲେନ୍ସ (Navitar, San Francisco, CA) ସହିତ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ମାଧ୍ୟମକୁ ତାଜା ମାଧ୍ୟମ ସହିତ ବଦଳାଇବା ପରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଭିଜୁଆଲାଇଜେସନ୍ କରାଯାଇଥିଲା। କ୍ୟାମେରାଟି 51° କୋଣରେ ଅବସ୍ଥିତ ଏବଂ ଭିଡିଓ ପ୍ରତି ସେକେଣ୍ଡରେ 30 ଫ୍ରେମ୍ ରେ ରେକର୍ଡ କରାଯାଇଛି। ପ୍ରଥମେ, ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସର ଗତି ପରିମାଣ କରିବା ପାଇଁ Image-J ସହିତ ଖୋଲା ଉତ୍ସ ସଫ୍ଟୱେର୍ (MUSCLEMOTION43) ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ଶବ୍ଦ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସକୁ ସ୍ପନ୍ଦନ କରିବା ପାଇଁ ଆଗ୍ରହର ଅଞ୍ଚଳଗୁଡ଼ିକୁ ପରିଭାଷିତ କରିବା ପାଇଁ MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) ବ୍ୟବହାର କରି ମାସ୍କଟି ତିଆରି କରାଯାଇଥିଲା। ମାନୁଆଲି ଭାବରେ ଖଣ୍ଡିତ ମାସ୍କଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ ଫ୍ରେମ୍ କ୍ରମରେ ସମସ୍ତ ପ୍ରତିଛବିରେ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଏ ଏବଂ ତାପରେ MUSCLEMOTION ପ୍ଲଗ-ଇନକୁ ପଠାଯାଏ। ମାଂସପେଶୀ ଗତି ପ୍ରତ୍ୟେକ ଫ୍ରେମରେ ପିକ୍ସେଲର ହାରାହାରି ତୀବ୍ରତା ବ୍ୟବହାର କରି ରେଫରେନ୍ସ ଫ୍ରେମ୍ ତୁଳନାରେ ଏହାର ଗତି ପରିମାଣ କରିଥାଏ। ତଥ୍ୟ ରେକର୍ଡ, ଫିଲ୍ଟର ଏବଂ ଚକ୍ର ସମୟ ପରିମାଣ ଏବଂ ହୃଦଚକ୍ର ସମୟରେ ଟିସୁ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ରେକର୍ଡ ହୋଇଥିବା ଭିଡିଓଟି ପ୍ରଥମ-କ୍ରମ ଶୂନ୍ୟ-ଫେଜ୍ ଡିଜିଟାଲ୍ ଫିଲ୍ଟର ବ୍ୟବହାର କରି ପରବର୍ତ୍ତୀ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଟିସୁ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (ପିକ୍-ଟୁ-ପିକ୍) ପରିମାଣ କରିବା ପାଇଁ, ରେକର୍ଡ ହୋଇଥିବା ସିଗନାଲରେ ଶିଖର ଏବଂ ଟ୍ରଫ୍ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ କରିବା ପାଇଁ ଶିଖର-ଟୁ-ପିକ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା। ଏହା ସହିତ, ସିଗନାଲ ଡ୍ରିଫ୍ଟକୁ ଦୂର କରିବା ପାଇଁ ଷଷ୍ଠ କ୍ରମ ବହୁପଦୀୟ ବ୍ୟବହାର କରି ଡିଟ୍ରେଣ୍ଡିଂ କରାଯାଏ। ବିଶ୍ୱ ଟିସୁ ଗତି, ଚକ୍ର ସମୟ, ବିଶ୍ରାମ ସମୟ ଏବଂ ସଂକୋଚନ ସମୟ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ MATLAB ରେ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ କୋଡ୍ ବିକଶିତ କରାଯାଇଥିଲା (ପରିପୂରକ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ କୋଡ୍ 44)।
ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପାଇଁ, ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ମୂଲ୍ୟାୟନ ପାଇଁ ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ସମାନ ଭିଡିଓ ବ୍ୟବହାର କରି, ଆମେ ପ୍ରଥମେ MUSCLEMOTION ସଫ୍ଟୱେର୍ ଅନୁଯାୟୀ ଗତି ଶିଖର (ସର୍ବୋଚ୍ଚ (ଉପର) ଏବଂ ସର୍ବନିମ୍ନ (ନିମ୍ନ) ଗତି ବିନ୍ଦୁ) ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରୁଥିବା ଦୁଇଟି ପ୍ରତିଛବି ଚିହ୍ନଟ କରିଥିଲୁ। ତାପରେ ଆମେ ଟିସୁ କ୍ଷେତ୍ରଗୁଡ଼ିକୁ ବିଭାଜିତ କରିଥିଲୁ ଏବଂ ସେଗ୍ମେଣ୍ଟେଡ୍ ଟିସୁରେ ଏକ ପ୍ରକାର ଛାଇ ଆଲଗୋରିଦମ୍ ପ୍ରୟୋଗ କରିଥିଲୁ (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 2a)। ସେଗ୍ମେଣ୍ଟେଡ୍ ଟିସୁକୁ ତାପରେ ଦଶଟି ଉପପୃଷ୍ଠରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପୃଷ୍ଠରେ ଚାପ ନିମ୍ନଲିଖିତ ସମୀକରଣ ବ୍ୟବହାର କରି ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା: ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ = (Sup-Sdown)/Sdown, ଯେଉଁଠାରେ Sup ଏବଂ Sdown ଯଥାକ୍ରମେ କପଡ଼ାର ଉପର ଏବଂ ତଳ ଛାୟାରୁ ଆକୃତିର ଦୂରତା (ପରିପୂରକ ଚିତ୍ର 2b)।
ହୃଦସ୍ପନ୍ଦନଗୁଡ଼ିକୁ 4% ପାରାଫର୍ମାଲ୍ଡିହାଇଡ୍‌ରେ 48 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା। ସ୍ଥିର ଟିସୁଗୁଡ଼ିକୁ 10% ଏବଂ 20% ସୁକ୍ରୋଜ୍‌ରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ନିର୍ଜଳ କରାଯାଇଥିଲା, ତା'ପରେ ରାତାରାତି 30% ସୁକ୍ରୋଜ୍‌ରେ। ତା'ପରେ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ ସର୍ବୋତ୍ତମ କଟିଂ ତାପମାତ୍ରା ଯୌଗିକ (OCT ଯୌଗିକ) ରେ ସ୍ଥାପିତ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଧୀରେ ଧୀରେ ଏକ ଆଇସୋପେଣ୍ଟାନ୍ / ଶୁଷ୍କ ବରଫ ବାଥରେ ଫ୍ରିଜ୍ କରାଯାଇଥିଲା। OCT ଏମ୍ବେଡିଂ ବ୍ଲକଗୁଡ଼ିକୁ -80 °C ରେ ପୃଥକୀକରଣ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସଂରକ୍ଷଣ କରନ୍ତୁ। 8 μm ଘନତା ସହିତ ସ୍ଲାଇଡ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ ବିଭାଗ ଭାବରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା।
ହୃଦୟ ଅଂଶରୁ OCT ବାହାର କରିବା ପାଇଁ, ସ୍ଲାଇଡଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ ହିଟିଂ ବ୍ଲକରେ 95 °C ରେ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଗରମ କରନ୍ତୁ। ପ୍ରତ୍ୟେକ ସ୍ଲାଇଡରେ 1 ମିଲି PBS ଯୋଡନ୍ତୁ ଏବଂ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ, ତାପରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ PBS ରେ 0.1% ଟ୍ରାଇଟନ୍-X ସେଟ୍ କରି ସେକ୍ସନଗୁଡ଼ିକୁ ପରିପୂର୍ଣ୍ଣ କରନ୍ତୁ। ନମୁନା ସହିତ ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆଣ୍ଟିବଡିଗୁଡ଼ିକୁ ବାନ୍ଧିବାରୁ ରୋକିବା ପାଇଁ, ସ୍ଲାଇଡରେ 1 ମିଲି 3% BSA ଦ୍ରବଣ ଯୋଡନ୍ତୁ ଏବଂ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ। ତାପରେ BSA ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସ୍ଲାଇଡଗୁଡ଼ିକୁ PBS ସହିତ ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନାକୁ ଏକ ପେନସିଲ୍ ସହିତ ଚିହ୍ନିତ କରନ୍ତୁ। ପ୍ରାଥମିକ ଆଣ୍ଟିବଡି (୧% BSA ରେ ୧:୨୦୦ ଡିଲିଉଟ୍) (କନେକ୍ସିନ୍ ୪୩ (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) ଏବଂ ଟ୍ରୋପୋନିନ୍-ଟି (ଥର୍ମୋ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍; #MA5-12960) 90 ମିନିଟ୍ ମଧ୍ୟରେ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା, ତା’ପରେ ଦ୍ୱିତୀୟ ଆଣ୍ଟିବଡି (୧% BSA ରେ ୧:୨୦୦ ଡିଲିଉଟ୍) ମୂଷା Alexa Fluor 488 (ଥର୍ମୋ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍; #A16079), ଖରଗୋଶ Alexa Fluor 594 (ଥର୍ମୋ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍; #T6391) ବିରୁଦ୍ଧରେ ଅତିରିକ୍ତ 90 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। PBS ସହିତ 3 ଥର ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା। ପୃଷ୍ଠଭୂମିରୁ ଟାର୍ଗେଟ୍ ସ୍ଟେନିଂକୁ ପୃଥକ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ କେବଳ ଦ୍ୱିତୀୟ ଆଣ୍ଟିବଡିକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିଥିଲୁ। ଶେଷରେ, DAPI ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟର ସ୍ଟେନ୍ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସ୍ଲାଇଡ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ ଭେକ୍ଟସିଲ୍ଡ (ଭେକ୍ଟର ଲାବୋରେଟୋରୀ) ରେ ରଖାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ନେଲ୍ ପଲିସ୍ ସହିତ ସିଲ୍ କରାଯାଇଥିଲା। -x ମ୍ୟାଗ୍ନିଫିକେସନ୍) ଏବଂ 40x ମ୍ୟାଗ୍ନିଫିକେସନ୍ ସହିତ କିଏନ୍ସ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍।
WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) 5 μg/ml PBS ରେ WGA ରଙ୍ଗ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସ୍ଥିର ବିଭାଗରେ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ସ୍ଲାଇଡଗୁଡ଼ିକୁ PBS ସହିତ ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ସ୍ଲାଇଡରେ ସୁଡାନ ବ୍ଲାକ୍ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା ଏବଂ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ସ୍ଲାଇଡଗୁଡ଼ିକୁ PBS ସହିତ ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଭେକ୍ଟାସହିଲ୍ଡ ଏମ୍ବେଡିଂ ମାଧ୍ୟମ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। 40x ବର୍ଦ୍ଧନରେ କୀନ୍ସ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପରେ ସ୍ଲାଇଡଗୁଡ଼ିକୁ ଦୃଶ୍ୟମାନ କରାଯାଇଥିଲା।
ଉପରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକରୁ OCT କୁ ବାହାର କରାଯାଇଥିଲା। OCT କୁ ବାହାର କରିବା ପରେ, ସ୍ଲାଇଡଗୁଡ଼ିକୁ ରାତାରାତି ବୋଇନ୍ସ ଦ୍ରବଣରେ ବୁଡ଼ାଇ ରଖନ୍ତୁ। ତା'ପରେ ସ୍ଲାଇଡଗୁଡ଼ିକୁ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଡିଷ୍ଟିଲଡ୍ ପାଣିରେ ଧୋଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ତା'ପରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ବିବ୍ରିଚ୍ ଆଲୋ ଏସିଡ୍ ଫୁସିନ୍ ଦ୍ରବଣରେ ରଖାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ସ୍ଲାଇଡଗୁଡ଼ିକୁ ଡିଷ୍ଟିଲଡ୍ ପାଣିରେ ଧୋଇ 5% ଫସଫୋମୋଲାଇବ୍ଡେନମ୍ / 5% ଫସଫୋଟଙ୍ଗଷ୍ଟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଦ୍ରବଣରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ରଖାଯାଇଥିଲା। ଧୋଇ ନ ଦେଇ, ସ୍ଲାଇଡଗୁଡ଼ିକୁ 15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସିଧାସଳଖ ଆନିଲାଇନ୍ ନୀଳ ଦ୍ରବଣରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ। ତା'ପରେ ସ୍ଲାଇଡଗୁଡ଼ିକୁ ଡିଷ୍ଟିଲଡ୍ ପାଣିରେ ଧୋଇ 1% ଆସେଟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଦ୍ରବଣରେ 2 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ରଖାଯାଇଥିଲା। ସ୍ଲାଇଡଗୁଡ଼ିକୁ 200 N ଇଥାନଲରେ ଶୁଖାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଜାଇଲିନ୍ କୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରାଯାଇଥିଲା। 10x ଅବଜେକ୍ଟିଭ୍ ସହିତ କୀଏନ୍ସ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ରଙ୍ଗୀନ ସ୍ଲାଇଡଗୁଡ଼ିକୁ ଦୃଶ୍ୟମାନ କରାଯାଇଥିଲା। କୀଏନ୍ସ ଆନାଲାଇଜର ସଫ୍ଟୱେର୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ କ୍ଷେତ୍ର ପ୍ରତିଶତ ପରିମାଣ କରାଯାଇଥିଲା।
CyQUANT™ MTT କୋଷ ଭାୟାବିଲିଟି ଆସ (ଇନଭିଟ୍ରୋଜେନ୍, କାର୍ଲସବାଡ୍, CA), କ୍ୟାଟାଲଗ୍ ନମ୍ବର V13154, ନିର୍ମାତାଙ୍କ ପ୍ରୋଟୋକଲ ଅନୁଯାୟୀ କିଛି ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ। ବିଶେଷକରି, MTT ବିଶ୍ଳେଷଣ ସମୟରେ ସମାନ ଟିସୁ ଆକାର ସୁନିଶ୍ଚିତ କରିବା ପାଇଁ 6 ମିମି ବ୍ୟାସ ବିଶିଷ୍ଟ ଏକ ସର୍ଜିକାଲ୍ ପଞ୍ଚ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ନିର୍ମାତାଙ୍କ ପ୍ରୋଟୋକଲ ଅନୁଯାୟୀ ଟିସୁଗୁଡ଼ିକୁ MTT ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଥିବା 12-କୂପ ପ୍ଲେଟ୍‌ର କୂପଗୁଡ଼ିକରେ ପୃଥକ ଭାବରେ ପ୍ଲେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ 3 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 37° ସେଲସିୟସ୍ ରେ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟେଡ୍ କରାଯାଏ ଏବଂ ଜୀବନ୍ତ ଟିସୁ MTT ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍‌କୁ ମେଟାବୋଲିଜେସନ୍ କରି ଏକ ବାଇଗଣୀ ଫର୍ମାଜାନ୍ ଯୌଗିକ ଗଠନ କରେ। MTT ଦ୍ରବଣକୁ 1 ମିଲି DMSO ସହିତ ବଦଳାନ୍ତୁ ଏବଂ ହୃଦୟ ବିଭାଗରୁ ବାଇଗଣୀ ଫର୍ମାଜାନ୍ ବାହାର କରିବା ପାଇଁ 15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 37° ସେଲସିୟସ୍ ରେ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ। ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ 96-କୂପ ସ୍ପଷ୍ଟ ତଳ ପ୍ଲେଟ୍‌ରେ DMSO ରେ 1:10 ରେ ମିଳାଇ ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସାଇଟେସନ୍ ପ୍ଲେଟ୍ ରିଡର (ବାୟୋଟେକ୍) ବ୍ୟବହାର କରି ବାଇଗଣୀ ରଙ୍ଗର ତୀବ୍ରତା 570 nm ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ହୃଦୟର ପ୍ରତ୍ୟେକ ସ୍ଲାଇସ୍‌ର ଓଜନ ଅନୁସାରେ ପାଠନଗୁଡ଼ିକୁ ସ୍ୱାଭାବିକ କରାଯାଇଥିଲା।
ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ପରି ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ବ୍ୟବହାର ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ ହାର୍ଟ ସ୍ଲାଇସ୍ ମିଡିଆକୁ 1 μCi/ml [5-3H]-ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ (ମୋରାଭେକ୍ ବାୟୋକେମିକାଲ୍ସ, ବ୍ରେଆ, CA, USA) ଯୁକ୍ତ ମିଡିଆ ସହିତ ବଦଳାଯାଇଥିଲା। 4 ଘଣ୍ଟା ଇନକ୍ୟୁବେସନ୍ ପରେ, 0.2 N HCl ର 100 μl ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ଖୋଲା ମାଇକ୍ରୋସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଜ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ରେ 100 μl ମଧ୍ୟମ ଯୋଡନ୍ତୁ। ତା'ପରେ ଟ୍ୟୁବ୍ କୁ 500 μl dH2O ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ସିଣ୍ଟିଲେସନ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ରେ ରଖାଯାଇଥିଲା ଯାହା 37°C ତାପମାତ୍ରାରେ 72 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ [3H]2O ବାଷ୍ପୀଭୂତ ହୋଇଯାଏ। ତା'ପରେ ସିଣ୍ଟିଲେସନ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ ରୁ ମାଇକ୍ରୋସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଜ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ କୁ ବାହାର କରନ୍ତୁ ଏବଂ 10 ml ସିଣ୍ଟିଲେସନ୍ ତରଳ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ। ଟ୍ରାଇ-କାର୍ବ 2900TR ତରଳ ସିଣ୍ଟିଲେସନ୍ ବିଶ୍ଳେଷକ (ପ୍ୟାକାର୍ଡ ବାୟୋସାଇନ୍ସ କମ୍ପାନୀ, ମେରିଡେନ୍, CT, USA) ବ୍ୟବହାର କରି ସିଣ୍ଟିଲେସନ୍ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ବ୍ୟବହାରକୁ [5-3H]-ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ, ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସନ୍ତୁଳନ ଏବଂ ପୃଷ୍ଠଭୂମି, [5-3H]-କୁ ଲେବଲ୍ ହୋଇନଥିବା ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ରେ ହ୍ରାସ ଏବଂ ସିଣ୍ଟିଲେସନ୍ କାଉଣ୍ଟର ଦକ୍ଷତାକୁ ବିଚାରକୁ ନେଇ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା। ତଥ୍ୟକୁ ହୃଦୟର ଅଂଶଗୁଡ଼ିକର ପରିମାଣ ସହିତ ସାଧାରଣ କରାଯାଇଛି।
ଟ୍ରାଇଜୋଲରେ ଟିସୁ ସମନ୍ୱୟକରଣ ପରେ, ନିର୍ମାତାଙ୍କ ପ୍ରୋଟୋକଲ ଅନୁସାରେ କ୍ୱାଜେନ୍ miRNeasy ମାଇକ୍ରୋ କିଟ୍ #210874 ବ୍ୟବହାର କରି ହୃଦୟ ବିଭାଗରୁ RNA ପୃଥକ କରାଯାଇଥିଲା। RNAsec ଲାଇବ୍ରେରୀ ପ୍ରସ୍ତୁତି, କ୍ରମ ଏବଂ ତଥ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣ ନିମ୍ନଲିଖିତ ଭାବରେ କରାଯାଇଥିଲା:
RNA ଲାଇବ୍ରେରୀ ପ୍ରସ୍ତୁତି ପାଇଁ ପ୍ରତି ନମୁନାରେ 1 μg RNA ଆରମ୍ଭ ସାମଗ୍ରୀ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ନିର୍ମାତାଙ୍କ ସୁପାରିଶ ଅନୁସରଣ କରି NEBNext UltraTM RNA ଲାଇବ୍ରେରୀ ପ୍ରସ୍ତୁତି କିଟ୍ for Illumina (NEB, USA) ବ୍ୟବହାର କରି କ୍ରମିକ ଲାଇବ୍ରେରୀ ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନା ପାଇଁ ଗୁଣବତ୍ତା କ୍ରମରେ ଇଣ୍ଡେକ୍ସ କୋଡ୍ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, ପଲି-T ଅଲିଗୋନୁକ୍ଲିଓଟାଇଡ୍ସ ସହିତ ସଂଲଗ୍ନ ଚୁମ୍ବକୀୟ ବିଡ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ମୋଟ RNA ରୁ mRNA ବିଶୁଦ୍ଧ କରାଯାଇଥିଲା। NEBNext ପ୍ରଥମ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ ସଂଶ୍ଳେଷଣ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ବଫର (5X) ରେ ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାରେ ଦ୍ୱିଭାଲେଣ୍ଟ କାଟାସନ ବ୍ୟବହାର କରି ଖଣ୍ଡୀକରଣ କରାଯାଏ। ପ୍ରଥମ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ cDNA କୁ ରାଣ୍ଡମ୍ ହେକ୍ସାମର୍ ପ୍ରାଇମର ଏବଂ M-MuLV ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟେଜ୍ (RNase H-) ବ୍ୟବହାର କରି ସଂଶ୍ଳେଷିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଦ୍ୱିତୀୟ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ cDNA କୁ DNA ପଲିମରେଜ୍ I ଏବଂ RNase H ବ୍ୟବହାର କରି ସଂଶ୍ଳେଷିତ କରାଯାଏ। ଅବଶିଷ୍ଟ ଓଭରହ୍ୟାଙ୍ଗଗୁଡ଼ିକୁ ଏକ୍ସୋନ୍ୟୁକ୍ଲିଜ୍ / ପଲିମରେଜ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଦ୍ୱାରା ବ୍ଲଣ୍ଟ ଏଣ୍ଡରେ ରୂପାନ୍ତରିତ କରାଯାଏ। DNA ଖଣ୍ଡର 3′ ଶେଷର ଆଡେନାଇଲେସନ୍ ପରେ, ଏକ ହେୟାରପିନ୍ ଲୁପ୍ ଗଠନ ସହିତ ଏକ NEBNext ଆଡାପ୍ଟର ଏହାକୁ ହାଇବ୍ରିଡାଇଜେସନ୍ ପାଇଁ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ପାଇଁ ଏଥିରେ ସଂଯୁକ୍ତ କରାଯାଏ। ୧୫୦-୨୦୦ bp ର ପସନ୍ଦିତ ଲମ୍ବ ବିଶିଷ୍ଟ cDNA ଖଣ୍ଡ ଚୟନ ପାଇଁ AMPure XP ସିଷ୍ଟମ (Beckman Coulter, Beverly, USA) ବ୍ୟବହାର କରି ଲାଇବ୍ରେରୀ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ବିଶୋଧିତ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ, 3 μl USER ଏନଜାଇମ (NEB, USA) ଆଡାପ୍ଟର ସହିତ ଆକାର-ନିର୍ବାଚିତ cDNA ସହିତ ଲିଗେଟେଡ୍ ହୋଇ ୩୭°C ରେ ୧୫ ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଏବଂ ତା'ପରେ PCR ପୂର୍ବରୁ ୯୫°C ରେ ୫ ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ PCR କୁ Prusion High-Fidelity DNA ପଲିମରେଜ୍, ୟୁନିଭର୍ସାଲ୍ PCR ପ୍ରାଇମର ଏବଂ ଇଣ୍ଡେକ୍ସ (X) ପ୍ରାଇମର ବ୍ୟବହାର କରି କରାଯାଇଥିଲା। ଶେଷରେ, PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡ଼ିକୁ ବିଶୋଧିତ କରାଯାଇଥିଲା (AMPure XP ସିଷ୍ଟମ) ଏବଂ ଏକ Agilent Bioanalyzer 2100 ସିଷ୍ଟମରେ ଲାଇବ୍ରେରୀ ଗୁଣବତ୍ତା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ cDNA ଲାଇବ୍ରେରୀକୁ Novaseq sequencer ବ୍ୟବହାର କରି କ୍ରମବଦ୍ଧ କରାଯାଇଥିଲା। Illumina ରୁ କଞ୍ଚା ପ୍ରତିଛବି ଫାଇଲଗୁଡ଼ିକୁ CASAVA ବେସ୍ କଲିଂ ବ୍ୟବହାର କରି କଞ୍ଚା ପଠନରେ ରୂପାନ୍ତରିତ କରାଯାଇଥିଲା। କଞ୍ଚା ତଥ୍ୟ FASTQ(fq) ଫର୍ମାଟ୍ ଫାଇଲଗୁଡ଼ିକରେ ସଂରକ୍ଷିତ ହୋଇଥାଏ ଯେଉଁଥିରେ ପଠିତ କ୍ରମ ଏବଂ ଅନୁରୂପ ମୂଳ ଗୁଣବତ୍ତା ଥାଏ। Sscrofa11.1 ରେଫରେନ୍ସ ଜିନୋମ ସହିତ ଫିଲ୍ଟର କରାଯାଇଥିବା କ୍ରମ ପଠନଗୁଡ଼ିକୁ ମେଳ କରିବା ପାଇଁ HISAT2 ଚୟନ କରନ୍ତୁ। ସାଧାରଣତଃ, HISAT2 ଯେକୌଣସି ଆକାରର ଜିନୋମକୁ ସମର୍ଥନ କରେ, ଯେଉଁଥିରେ 4 ବିଲିୟନ ବେସ୍ ରୁ ବଡ଼ ଜିନୋମ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ, ଏବଂ ଅଧିକାଂଶ ପାରାମିଟର ପାଇଁ ଡିଫଲ୍ଟ ମୂଲ୍ୟ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଛି। RNA Seq ଡାଟାରୁ ସ୍ପ୍ଲାଇସିଂ ରିଡ୍ HISAT2 ବ୍ୟବହାର କରି ଦକ୍ଷତାର ସହିତ ସଂଯୁକ୍ତ କରାଯାଇପାରିବ, ଯାହା ବର୍ତ୍ତମାନ ଉପଲବ୍ଧ ସବୁଠାରୁ ଦ୍ରୁତତମ ସିଷ୍ଟମ୍, ଅନ୍ୟ ଯେକୌଣସି ପଦ୍ଧତି ତୁଳନାରେ ସମାନ କିମ୍ବା ଭଲ ସଠିକତା ସହିତ।
ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟର ପ୍ରଚୁରତା ସିଧାସଳଖ ଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନର ସ୍ତରକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରେ। ଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନର ସ୍ତର ଜିନୋମ୍ କିମ୍ବା ଏକ୍ସନ୍ ସହିତ ଜଡିତ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟର ପ୍ରଚୁରତା (କ୍ରମିକ ଗଣନା) ଦ୍ୱାରା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଏ। ପଠନର ସଂଖ୍ୟା ଜିନ୍ ପ୍ରକାଶନର ସ୍ତର, ଜିନ୍ ଲମ୍ବ ଏବଂ କ୍ରମିକ ଗଭୀରତା ସହିତ ସମାନୁପାତିକ। FPKM (ପ୍ରତି ମିଲିୟନ ବେସ୍ ଯୋଡ଼ିରେ ପ୍ରତି ହଜାର ବେସ୍ ଯୋଡ଼ି ଅନୁକ୍ରମିତ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପ୍ଟର ଖଣ୍ଡ) ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ DESeq2 ପ୍ୟାକେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଡିଫରେନ୍ସିଆଲ୍ ପ୍ରକାଶନର P-ମୂଲ୍ୟ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ଆମେ ବିଲ୍ଟ-ଇନ୍ R-ଫଙ୍କସନ୍ "p.adjust" ଉପରେ ଆଧାରିତ ବେଞ୍ଜାମିନି-ହୋଚବର୍ଗ ପଦ୍ଧତି9 ବ୍ୟବହାର କରି ପ୍ରତ୍ୟେକ P ମୂଲ୍ୟ ପାଇଁ ମିଥ୍ୟା ଆବିଷ୍କାର ହାର (FDR) ଗଣନା କରିଥିଲୁ।
ଥର୍ମୋ (ଥର୍ମୋ, କ୍ୟାଟ୍. ନମ୍ବର. ୧୧୭୫୬୦୫୦) ରୁ ସୁପରସ୍କ୍ରିପ୍ଟ IV ଭିଲୋ ମାଷ୍ଟର ମିଶ୍ରଣ ବ୍ୟବହାର କରି ହୃଦୟ ବିଭାଗରୁ ପୃଥକ କରାଯାଇଥିବା RNA କୁ ୨୦୦ ng/μl ସାନ୍ଦ୍ରତାରେ cDNA ରେ ରୂପାନ୍ତରିତ କରାଯାଇଥିଲା। ଏକ ଆପ୍ଲାଏଡ୍ ବାୟୋସିଷ୍ଟମ୍ସ ଏଣ୍ଡୁରା ପ୍ଲେଟ୍ ମାଇକ୍ରୋଆମ୍ପ ୩୮୪-ୱେଲ୍ ଟ୍ରାନ୍ସପରେଣ୍ଟ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ଲେଟ୍ (ଥର୍ମୋ, କ୍ୟାଟ୍. ନମ୍ବର. ୪୪୮୩୩୧୯) ଏବଂ ମାଇକ୍ରୋଆମ୍ପ ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ଆଡେସିଭ୍ (ଥର୍ମୋ, କ୍ୟାଟ୍. ନମ୍ବର. ୪୩୧୧୯୭୧) ବ୍ୟବହାର କରି ପରିମାଣାତ୍ମକ RT-PCR କରାଯାଇଥିଲା। ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମିଶ୍ରଣରେ ପ୍ରତି କୂଅରେ ୫ µl ଟାକମ୍ୟାନ୍ ଫାଷ୍ଟ ଆଡଭାନ୍ସଡ୍ ମାଷ୍ଟର ମିଶ୍ରଣ (ଥର୍ମୋ, କ୍ୟାଟ୍ # ୪୪୪୪୫୫୭), ୦.୫ µl ଟାକମ୍ୟାନ୍ ପ୍ରାଇମର ଏବଂ ୩.୫ µl H2O ମିଶ୍ରିତ ଥିଲା। ମାନକ qPCR ଚକ୍ରଗୁଡ଼ିକ ଚାଳନ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଏକ ଆପ୍ଲାଏଡ୍ ବାୟୋସିଷ୍ଟମ୍ସ କ୍ୱାଣ୍ଟଷ୍ଟୁଡିଓ ୫ ରିଅଲ୍-ଟାଇମ୍ PCR ଉପକରଣ (୩୮୪-ୱେଲ୍ ମଡ୍ୟୁଲ୍; ଉତ୍ପାଦ # A28135) ବ୍ୟବହାର କରି CT ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା। ଟାକମାନ ପ୍ରାଇମରଗୁଡ଼ିକ ଥର୍ମୋ (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss06868890_m1), ACTN1 (Ss01009508_mH), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss04245588_m1) ରୁ କିଣାଯାଇଥିଲା। ସମସ୍ତ ନମୁନାର CT ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ ହାଉସକିପିଂ ଜିନ୍ GAPDH ସହିତ ସାଧାରଣ କରାଯାଇଥିଲା।
ନିର୍ମାତାଙ୍କ ପ୍ରୋଟୋକଲ ଅନୁଯାୟୀ NT-ProBNP କିଟ୍ (ଘୁଷୁରୀ) (ବିଲେଇ ନଂ. MBS2086979, MyBioSource) ବ୍ୟବହାର କରି NT-ProBNPର ମିଡିଆ ରିଲିଜ୍ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା। ସଂକ୍ଷେପରେ, ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନା ଏବଂ ମାନକର 250 μl ଡୁପ୍ଲିକେଟ୍ ଭାବରେ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା। ନମୁନା ଯୋଡ଼ିବା ପରେ ତୁରନ୍ତ, ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 50 μl Assay Reagent A ଯୋଡାନ୍ତୁ। ପ୍ଲେଟ୍‌କୁ ଧୀରେ ହଲାନ୍ତୁ ଏବଂ ସିଲେଣ୍ଟ ସହିତ ସିଲ୍ କରନ୍ତୁ। ତା'ପରେ ଟାବଲେଟ୍‌ଗୁଡ଼ିକୁ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 37°C ରେ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ତା'ପରେ ଦ୍ରବଣକୁ ଆସ୍ପିରେଟ୍ କରନ୍ତୁ ଏବଂ କୂଅଗୁଡ଼ିକୁ 350 μl 1X ୱାଶ୍ ଦ୍ରବଣ ସହିତ 4 ଥର ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ଥର 1-2 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ୱାଶ୍ ଦ୍ରବଣକୁ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ। ତା'ପରେ ପ୍ରତି କୂଅରେ 100 μl Assay Reagent B ଯୋଡାନ୍ତୁ ଏବଂ ପ୍ଲେଟ୍ ସିଲେଣ୍ଟ ସହିତ ସିଲ୍ କରନ୍ତୁ। ଟାବଲେଟ୍‌କୁ ଧୀରେ ହଲାନ୍ତୁ ଏବଂ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 37°C ରେ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ଦ୍ରବଣକୁ ଆସ୍ପିରେଟ୍ କରନ୍ତୁ ଏବଂ କୂପଗୁଡ଼ିକୁ 350 µl 1X ୱାଶ୍ ଦ୍ରବଣ ସହିତ 5 ଥର ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ। ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂପରେ 90 µl ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଦ୍ରବଣ ଯୋଡନ୍ତୁ ଏବଂ ପ୍ଲେଟ୍ ସିଲ୍ କରନ୍ତୁ। ପ୍ଲେଟ୍‌କୁ 10-20 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 37°C ରେ ଇନ୍କ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ। ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂପରେ 50 µl ଷ୍ଟପ୍ ଦ୍ରବଣ ଯୋଡନ୍ତୁ। ପ୍ଲେଟ୍‌କୁ ତୁରନ୍ତ 450 nm ରେ ସେଟ୍ ହୋଇଥିବା ସାଇଟେସନ୍ (ବାୟୋଟେକ୍) ପ୍ଲେଟ୍ ରିଡର ବ୍ୟବହାର କରି ମାପ କରାଯାଇଥିଲା।
ପାୱାର ବିଶ୍ଳେଷଣ ଗୋଷ୍ଠୀ ଆକାର ବାଛିବା ପାଇଁ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା 5% ପ୍ରକାର I ତ୍ରୁଟି ହାର ସହିତ ପାରାମିଟରରେ 10% ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ 80% ଠାରୁ ଅଧିକ ଶକ୍ତି ପ୍ରଦାନ କରିବ। ପାୱାର ବିଶ୍ଳେଷଣଗୁଡ଼ିକ ଗୋଷ୍ଠୀ ଆକାର ବାଛିବା ପାଇଁ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା 5% ପ୍ରକାର I ତ୍ରୁଟି ହାର ସହିତ ପାରାମିଟରରେ 10% ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ 80% ଠାରୁ ଅଧିକ ଶକ୍ତି ପ୍ରଦାନ କରିବ। Аназ мощности был выполнен для выбора размеров группасы, кот че обеспечат> 80% мощности для обнаружения 10% абсолтного изменения Параметра с 5% частотой сибибок чипа I. 5% ପ୍ରକାର I ତ୍ରୁଟି ହାର ସହିତ 10% ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ପାରାମିଟର ପରିବର୍ତ୍ତନ ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ 80% ଠାରୁ ଅଧିକ ଶକ୍ତି ପ୍ରଦାନ କରୁଥିବା ଗୋଷ୍ଠୀ ଆକାର ଚୟନ କରିବା ପାଇଁ ଶକ୍ତି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।进行功效分析以选择将提供> 80 ％功效以检测参数中 10 ％绝对变化和 5 ％ I 型错误率的组大小。进行功效分析以选择将提供> 80 ％功效以检测参数中 10 ％绝对变化和 5 ％ I 型错误率的组大小。 Был проведен Ма мощности для выбора размера группы, который обеспечил бы> 80% мощности для обнаружения 10% абсолтного изменения Параметров һәм 5% частоты акибок чипа I. 10% ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ପାରାମିଟର ପରିବର୍ତ୍ତନ ଏବଂ 5% ପ୍ରକାର I ତ୍ରୁଟି ହାର ଚିହ୍ନଟ କରିବା ପାଇଁ 80% ଠାରୁ ଅଧିକ ଶକ୍ତି ପ୍ରଦାନ କରୁଥିବା ଏକ ଗୋଷ୍ଠୀ ଆକାର ଚୟନ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଶକ୍ତି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା।ପରୀକ୍ଷଣ ପୂର୍ବରୁ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ ଅନିୟମିତ ଭାବରେ ଚୟନ କରାଯାଇଥିଲା। ସମସ୍ତ ବିଶ୍ଳେଷଣକୁ କଣ୍ଡିସନ୍ ବ୍ଲାଇଣ୍ଡ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ସମସ୍ତ ତଥ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣ ପରେ ହିଁ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକୁ ଡିକୋଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା। ସମସ୍ତ ପରିସଂଖ୍ୟାନ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବା ପାଇଁ ଗ୍ରାଫପ୍ୟାଡ୍ ପ୍ରିଜମ୍ ସଫ୍ଟୱେର୍ (ସାନ ଡିଏଗୋ, CA) ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ସମସ୍ତ ପରିସଂଖ୍ୟାନ ପାଇଁ, p-ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ <0.05 ମୂଲ୍ୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବୋଲି ବିବେଚନା କରାଯାଇଥିଲା। ସମସ୍ତ ପରିସଂଖ୍ୟାନ ପାଇଁ, p-ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ <0.05 ମୂଲ୍ୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବୋଲି ବିବେଚନା କରାଯାଇଥିଲା। Для всей стати пи-значения считались значимыми при значениях <0,05 ସମସ୍ତ ପରିସଂଖ୍ୟାନ ପାଇଁ, p-ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ <0.05 ମୂଲ୍ୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବୋଲି ବିବେଚନା କରାଯାଇଥିଲା।对于所有统计数据， p 值在值 <0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据， p 值在值 <0.05 时被认为是显着的。 Для всей стати пи-значения считались значимыми при значениях <0,05 ସମସ୍ତ ପରିସଂଖ୍ୟାନ ପାଇଁ, p-ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକୁ <0.05 ମୂଲ୍ୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବୋଲି ବିବେଚନା କରାଯାଇଥିଲା।କେବଳ 2ଟି ତୁଳନା ସହିତ ତଥ୍ୟ ଉପରେ ଦୁଇ-ପାଖିଆ ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି-ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା। ଏକାଧିକ ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଏକ-ପାଖିଆ କିମ୍ବା ଦୁଇ-ପାଖିଆ ANOVA ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା। ପୋଷ୍ଟ ହକ୍ ପରୀକ୍ଷା କରିବା ସମୟରେ, ଟୁକିଙ୍କ ସଂଶୋଧନକୁ ଏକାଧିକ ତୁଳନା ପାଇଁ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା। ପଦ୍ଧତି ବିଭାଗରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ FDR ଏବଂ p.adjust ଗଣନା କରିବା ସମୟରେ RNAsec ତଥ୍ୟର ବିଶେଷ ପରିସଂଖ୍ୟାନଗତ ବିଚାର ରହିଛି।
ଅଧ୍ୟୟନ ଡିଜାଇନ୍ ବିଷୟରେ ଅଧିକ ସୂଚନା ପାଇଁ, ଏହି ଆର୍ଟିକିଲ୍ ସହିତ ଲିଙ୍କ୍ ହୋଇଥିବା ପ୍ରକୃତି ଗବେଷଣା ରିପୋର୍ଟ ସାରାଂଶ ଦେଖନ୍ତୁ।