Nature.com ପରିଦର୍ଶନ କରିଥିବାରୁ ଧନ୍ୟବାଦ |ଆପଣ ବ୍ୟବହାର କରୁଥିବା ବ୍ରାଉଜର୍ ସଂସ୍କରଣରେ ସୀମିତ CSS ସମର୍ଥନ ଅଛି |ସର୍ବୋତ୍ତମ ଅଭିଜ୍ଞତା ପାଇଁ, ଆମେ ପରାମର୍ଶ ଦେଉଛୁ ଯେ ଆପଣ ଏକ ଅପଡେଟ୍ ବ୍ରାଉଜର୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତୁ (କିମ୍ବା ଇଣ୍ଟରନେଟ୍ ଏକ୍ସପ୍ଲୋରରରେ ସୁସଙ୍ଗତତା ମୋଡ୍ ଅକ୍ଷମ କରନ୍ତୁ) |ମ meantime ିରେ ମ continued ିରେ, ନିରନ୍ତର ସମର୍ଥନ ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ, ଆମେ ଶ yles ଳୀ ଏବଂ ଜାଭାସ୍କ୍ରିପ୍ଟ ବିନା ସାଇଟ୍ ଉପସ୍ଥାପନ କରିବୁ |
ଏକ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ଭିଟ୍ରୋ ସିଷ୍ଟମର ଆବଶ୍ୟକତା ଅଛି ଯାହା drug ଷଧ ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ ହୃଦୟର ଶାରୀରିକ ପରିବେଶକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ପୁନ oduc ଉତ୍ପାଦନ କରିପାରିବ |ମାନବ ହୃଦୟ ଟିସୁ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରଣାଳୀର ସୀମିତ ଉପଲବ୍ଧତା ହୃଦ୍‌ରୋଗର drug ଷଧ ପ୍ରଭାବର ଭୁଲ ବ୍ୟାଖ୍ୟାକୁ ଆଗେଇ ନେଇଛି |ଏଠାରେ, ଆମେ ଏକ ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଟିସୁ ସଂସ୍କୃତି ମଡେଲ (CTCM) ବିକଶିତ କରିଛୁ ଯାହା ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋମେକାନିକାଲ୍ ହୃଦୟର କଟାକୁ ଉତ୍ସାହିତ କରିଥାଏ ଏବଂ ହୃଦ୍ ଚକ୍ରର ସିଷ୍ଟୋଲିକ୍ ଏବଂ ଡାଇଷ୍ଟୋଲିକ୍ ପର୍ଯ୍ୟାୟରେ ଶାରୀରିକ ସ୍ତରରେ ପ୍ରସାରିତ ହୁଏ |12 ଦିନର ସଂସ୍କୃତି ପରେ, ଏହି ପଦ୍ଧତି ହୃଦୟ ବିଭାଗର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାକୁ ଆଂଶିକ ଉନ୍ନତ କଲା, କିନ୍ତୁ ସେମାନଙ୍କର ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣରୂପେ ସଂରକ୍ଷଣ କରିପାରିଲା ନାହିଁ |ତେଣୁ, ଛୋଟ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକ ସ୍କ୍ରିନିଂ ପରେ, ଆମେ ଜାଣିଲୁ ଯେ ଆମ ମାଧ୍ୟମରେ 100 nM ଟ୍ରାଇଓଡୋଥାଇରୋନାଇନ୍ (T3) ଏବଂ 1 μM ଡେକ୍ସାମେଥାସୋନ୍ (ଡେକ୍ସ) ର ଯୋଗ 12 ଦିନ ପାଇଁ ବିଭାଗର ମାଇକ୍ରୋସ୍ଟ୍ରଷ୍ଟ୍ରକଚର ବଜାୟ ରଖିଲା |T3 / Dex ଚିକିତ୍ସା ସହିତ ମିଶି, CTCM ସିଷ୍ଟମ୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରୋଫାଇଲ୍, କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା, ମେଟାବୋଲିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ଏବଂ ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ 12 ଦିନ ପାଇଁ ସତେଜ ହୃଦୟ ଟିସୁ ସହିତ ସମାନ ସ୍ତରରେ ବଜାୟ ରଖିଲା |ଏଥିସହ, ସଂସ୍କୃତିରେ ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରସାରଣ ହାଇପର୍ଟ୍ରୋଫିକ୍ କାର୍ଡିଆକ୍ ସିଗନାଲ୍ ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଏ, ଯାହା ହୃଦ୍‌ରୋଗର ପ୍ରସାର ଦ୍ୱାରା ହାଇପରଟ୍ରୋଫିକ୍ ସ୍ଥିତିକୁ ଅନୁକରଣ କରିବାର CTCM ର କ୍ଷମତା ପାଇଁ ପ୍ରମାଣ ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ |ପରିଶେଷରେ, CTCM ଦୀର୍ଘ ସମୟ ଧରି ସଂସ୍କୃତିରେ ହୃଦୟର ଫିଜିଓଲୋଜି ଏବଂ ପାଥୋଫିଜିଓଲୋଜି ମଡେଲ କରିପାରିବ, ଯାହା ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ drug ଷଧ ସ୍କ୍ରିନିଂକୁ ସକ୍ଷମ କରିଥାଏ |
କ୍ଲିନିକାଲ୍ ଗବେଷଣା ପୂର୍ବରୁ, ଭିଟ୍ରୋ ସିଷ୍ଟମରେ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ଆବଶ୍ୟକ ଯାହା ମାନବ ହୃଦୟର ଶାରୀରିକ ପରିବେଶକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ପୁନ oduc ଉତ୍ପାଦନ କରିପାରିବ |ଏହିପରି ପ୍ରଣାଳୀଗୁଡ଼ିକ ପରିବର୍ତ୍ତିତ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍, ହୃଦସ୍ପନ୍ଦନ ଏବଂ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫାଇଜୋଲୋଜିକାଲ୍ ଗୁଣଗୁଡିକର ଅନୁକରଣ କରିବା ଉଚିତ୍ |ମନୁଷ୍ୟର ହୃଦୟରେ drugs ଷଧର ପ୍ରଭାବକୁ ପ୍ରତିଫଳିତ କରିବାରେ ସୀମିତ ବିଶ୍ୱସନୀୟତା ସହିତ କାର୍ଡିଆକ୍ ଫିଜିଓଲୋଜି ପାଇଁ ସ୍କ୍ରିନିଂ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ଭାବରେ ପଶୁ ମଡେଲଗୁଡିକ ସାଧାରଣତ used ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |ପରିଶେଷରେ, ଆଇଡିଆଲ୍ କାର୍ଡିଆକ୍ ଟିସୁ ସଂସ୍କୃତି ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ମଡେଲ୍ (CTCM) ହେଉଛି ଏକ ମଡେଲ୍ ଯାହା ବିଭିନ୍ନ ଥେରାପିଟିଭ୍ ଏବଂ ଫାର୍ମାକୋଲୋଜିକାଲ୍ ହସ୍ତକ୍ଷେପ ପାଇଁ ଅତ୍ୟନ୍ତ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ଏବଂ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ, ମାନବ ହୃଦୟର ଫିଜିଓଲୋଜି ଏବଂ ପାଥୋଫିଜିଓଲୋଜିର ସଠିକ୍ ଭାବରେ ପୁନ oduc ପ୍ରକାଶିତ |ଏହିପରି ସିଷ୍ଟମର ଅନୁପସ୍ଥିତି ହୃଦଘାତ ପାଇଁ ନୂତନ ଚିକିତ୍ସାର ଆବିଷ୍କାରକୁ ସୀମିତ କରେ 4,5 ଏବଂ ବଜାରରୁ ବାହାରିବାର ଏକ ପ୍ରମୁଖ କାରଣ ଭାବରେ ଡ୍ରଗ୍ କାର୍ଡିଓଟକ୍ସାଇସିଟି ସୃଷ୍ଟି କରିଛି |
ବିଗତ ଏକ ଦଶନ୍ଧି ମଧ୍ୟରେ, ଆଠଟି ଅଣ-ହୃଦ୍‌ରୋଗକୁ drugs ଷଧ କ୍ଲିନିକାଲ ବ୍ୟବହାରରୁ ପ୍ରତ୍ୟାହାର କରି ନିଆଯାଇଛି କାରଣ ସେମାନେ QT ବ୍ୟବଧାନ ବ olong ଼ାଇ ଭେଣ୍ଟ୍ରିକୁଲାର ଆରିଥମିଆ ଏବଂ ହଠାତ୍ ମୃତ୍ୟୁ ଘଟାନ୍ତି |ତେଣୁ, ହୃଦ୍‌ରୋଗର ପ୍ରଭାବ ଏବଂ ବିଷାକ୍ତତାକୁ ଆକଳନ କରିବା ପାଇଁ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ପ୍ରିକ୍ଲିନିକାଲ୍ ସ୍କ୍ରିନିଂ କ ies ଶଳର ଏକ ବୃଦ୍ଧି ଆବଶ୍ୟକତା ଅଛି |ଡ୍ରଗ୍ ସ୍କ୍ରିନିଂ ଏବଂ ବିଷାକ୍ତତା ପରୀକ୍ଷଣରେ ମାନବ-ପ୍ରେରିତ ପ୍ଲୁରିପୋଟେଣ୍ଟ୍ ଷ୍ଟେମ୍ ସେଲ୍-ଉତ୍ପାଦିତ କାର୍ଡିଓମାଇସାଇଟ୍ସ (ହାଇପିଏସ୍-ସିଏମ୍) ର ବ୍ୟବହାର ଏହି ସମସ୍ୟାର ଆଂଶିକ ସମାଧାନ ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ |ତଥାପି, hiPS-CM ର ଅପରିପକ୍ୱ ପ୍ରକୃତି ଏବଂ ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଟିସୁର ବହୁମୁଖୀ ଜଟିଳତାର ଅଭାବ ଏହି ପଦ୍ଧତିର ପ୍ରମୁଖ ସୀମାବଦ୍ଧତା |ସାମ୍ପ୍ରତିକ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ ସ୍ h ତ aneous ସ୍ପୃତ ସଂକୋଚନ ଆରମ୍ଭ ହେବାର କିଛି ସମୟ ପରେ ଏବଂ ଧୀରେ ଧୀରେ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ବୃଦ୍ଧି ହେତୁ ଶୀଘ୍ର ହାଇପ୍ସ-ସିଏମ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ହୃଦ୍‌ରୋଗ ଟିସୁ ହାଇଡ୍ରୋଜେଲ ଗଠନ କରି ଏହି ସୀମା ଆଂଶିକ ଦୂର ହୋଇପାରିବ |ଅବଶ୍ୟ, ଏହି ହାଇପିଏସ୍-ସିଏମ୍ ମାଇକ୍ରୋଟିସ୍ୟୁସରେ ବୟସ୍କ ମାୟୋକାର୍ଡିଆମ୍ ର ପରିପକ୍ୱ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଫାଇଜୋଲୋଜିକାଲ୍ ଏବଂ ଚୁକ୍ତିଭିତ୍ତିକ ଗୁଣର ଅଭାବ ରହିଛି |ଏଥିସହ, ମାନବ କାର୍ଡିଆକ୍ ଟିସୁରେ ଏକ ଜଟିଳ ଗଠନ ଅଛି, ଯାହା ବିଭିନ୍ନ କୋଷ ପ୍ରକାରର ଏକ ହେଟେରୋଜିନସ୍ ମିଶ୍ରଣକୁ ନେଇ ଗଠିତ, ଏଣ୍ଡୋଥେଲିଆଲ୍ କୋଷ, ନ୍ୟୁରନ୍, ଏବଂ ଷ୍ଟ୍ରୋମାଲ୍ ଫାଇବ୍ରୋବ୍ଲାଷ୍ଟ, ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ ପ୍ରୋଟିନର ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ସେଟ୍ ଦ୍ୱାରା ପରସ୍ପର ସହିତ ସଂଯୁକ୍ତ |ବୟସ୍କ ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ ହୃଦୟରେ ଅଣ-କାର୍ଡିଓମାଇସାଇଟ୍ ଜନସଂଖ୍ୟା 11,12,13 ର ଏହି ହେଟେରୋଜେନିଟି ବ୍ୟକ୍ତିଗତ କୋଷ ପ୍ରକାର ବ୍ୟବହାର କରି ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଟିସୁ ମଡେଲିଂ କରିବାରେ ଏକ ପ୍ରମୁଖ ପ୍ରତିବନ୍ଧକ |ଏହି ପ୍ରମୁଖ ସୀମାବଦ୍ଧତା ଶାରୀରିକ ଏବଂ ପାଥୋଲୋଜିକାଲ୍ ଅବସ୍ଥାରେ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ମାୟୋକାର୍ଡିଆଲ୍ ଟିସୁ ସଂସ୍କୃତି ପାଇଁ ପଦ୍ଧତି ବିକାଶର ଗୁରୁତ୍ୱକୁ ଗୁରୁତ୍ୱ ଦେଇଥାଏ |
ମାନବ ହୃଦୟର ସଂସ୍କୃତ ପତଳା (300 µm) ବିଭାଗଗୁଡିକ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ମାନବ ମାୟୋକାର୍ଡିଆମର ଏକ ପ୍ରତିଜ୍ଞାକାରୀ ମଡେଲ୍ ବୋଲି ପ୍ରମାଣିତ ହୋଇଛି |ଏହି ପଦ୍ଧତି ମାନବ ହୃଦୟ ଟିସୁ ପରି ଏକ ସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ 3D ମଲ୍ଟି ସେଲୁଲାର୍ ସିଷ୍ଟମକୁ ପ୍ରବେଶ ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ |ତଥାପି, 2019 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ, ସଂସ୍କୃତ ହୃଦୟ ବିଭାଗର ବ୍ୟବହାର ସ୍ୱଳ୍ପ (24 ଘଣ୍ଟା) ସଂସ୍କୃତି ବଞ୍ଚିବା ଦ୍ୱାରା ସୀମିତ ରହିଲା |ଶାରୀରିକ-ଯାନ୍ତ୍ରିକ ବିସ୍ତାରର ଅଭାବ, ବାୟୁ-ତରଳ ଇଣ୍ଟରଫେସ୍ ଏବଂ ସରଳ ମିଡିଆର ବ୍ୟବହାର ସହିତ ଅନେକ କାରଣ ହେତୁ ଏହା ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଆବଶ୍ୟକତାକୁ ସମର୍ଥନ କରେ ନାହିଁ |2019 ରେ, ଅନେକ ଗବେଷଣା ଗୋଷ୍ଠୀ ଦର୍ଶାଇଛନ୍ତି ଯେ ଯାନ୍ତ୍ରିକ କାରକକୁ କାର୍ଡିଆକ୍ ଟିସୁ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରଣାଳୀରେ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରିବା ଦ୍ୱାରା ସଂସ୍କୃତି ଜୀବନ ବ extend ିପାରେ, ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ଏବଂ ହୃଦ୍‌ରୋଗର ପାଥୋଲୋଜି ଅନୁକରଣ କରାଯାଇପାରେ |ଦୁଇଟି ଚମତ୍କାର ଅଧ୍ୟୟନ 17 ଏବଂ 18 ଦର୍ଶାଏ ଯେ ସଂସ୍କୃତି ସମୟରେ ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଫେନୋଟାଇପ୍‌ ଉପରେ ଅନାକ୍ସିଆଲ୍ ମେକାନିକାଲ୍ ଲୋଡିଙ୍ଗ୍ ଏକ ସକରାତ୍ମକ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ |ଅବଶ୍ୟ, ଏହି ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡ଼ିକ ହୃଦ୍ ଚକ୍ରର ଗତିଶୀଳ ତିନି-ଡାଇମେନ୍ସନାଲ୍ ଫିଜିକୋ-ମେକାନିକାଲ୍ ଲୋଡିଂ ବ୍ୟବହାର କରିନଥିଲେ, ଯେହେତୁ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକ ଆଇସୋମେଟ୍ରିକ୍ ଟେନସାଇଲ୍ ଫୋର୍ସ 17 କିମ୍ବା ର line ଖ୍ୟ ଆକ୍ସୋଟୋନିକ୍ ଲୋଡିଂ 18 ସହିତ ଧାରଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଟିସୁ ଷ୍ଟ୍ରେଚିଂର ଏହି ପଦ୍ଧତିଗୁଡିକ ଅନେକ ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଦମନକୁ କିମ୍ବା ଅସ୍ୱାଭାବିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସହିତ ଜଡିତ ଜିନ୍ଗୁଡ଼ିକର ଅତ୍ୟଧିକ ସଙ୍କୋଚନକୁ ପରିଣତ କଲା |ଉଲ୍ଲେଖଯୋଗ୍ୟ, ପିଟୁଲିସ୍ ଏବଂ ଅନ୍ୟମାନେ |ଫୋର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସଡୁସର ଫିଡବ୍ୟାକ୍ ଏବଂ ଟେନ୍ସନ୍ ଡ୍ରାଇଭ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ହୃଦ୍ ଚକ୍ର ପୁନ struction ନିର୍ମାଣ ପାଇଁ ଏକ ଗତିଶୀଳ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ସଂସ୍କୃତି ସ୍ନାନ ବିକଶିତ କଲା |ଯଦିଓ ଏହି ସିଷ୍ଟମ୍ ଭିଟ୍ରୋ କାର୍ଡିଆକ୍ ଚକ୍ର ମଡେଲିଂରେ ଅଧିକ ସଠିକ୍ ପାଇଁ ଅନୁମତି ଦିଏ, ପଦ୍ଧତିର ଜଟିଳତା ଏବଂ ନିମ୍ନ ଥ୍ରୋପପୁଟ୍ ଏହି ସିଷ୍ଟମର ପ୍ରୟୋଗକୁ ସୀମିତ କରେ |ଆମର ଲାବୋରେଟୋରୀ ନିକଟରେ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ଏବଂ ଏକ ଅପ୍ଟିମାଇଜଡ୍ ମାଧ୍ୟମ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ସରଳୀକୃତ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରଣାଳୀ ବିକଶିତ କରିଛି ଯାହାକି 6 ଦିନ 20,21 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପର୍ସିନ୍ ଏବଂ ମାନବ ହୃଦୟ ଟିସୁର ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ବଜାୟ ରଖିବ |
ସାମ୍ପ୍ରତିକ ପାଣ୍ଡୁଲିପିରେ, ଆମେ ପର୍ସିନ୍ ହୃଦୟର ବିଭାଗଗୁଡିକ ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ହୃଦ୍‌ରୋଗ ଟିସୁ ସଂସ୍କୃତି ମଡେଲ୍ (CTCM) ବର୍ଣ୍ଣନା କରୁ ଯାହା ହୃଦ୍ ଚକ୍ରରେ ତ୍ରି-ଡାଇମେନ୍ସନାଲ୍ କାର୍ଡିଆକ୍ ଫିଜିଓଲୋଜି ଏବଂ ପାଥୋଫିଜୋଲୋଜିକାଲ୍ ବିସ୍ତାରକୁ ପୁନ ap ଅନୁକରଣ କରିବା ପାଇଁ ହାସ୍ୟରସ ସୂତ୍ରଗୁଡ଼ିକୁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରେ |ଏହି CTCM ପ୍ରାକ୍-କ୍ଲିନିକାଲ୍ drug ଷଧ ଭବିଷ୍ୟବାଣୀର ସଠିକତାକୁ ଏକ ସ୍ତରକୁ ବୃଦ୍ଧି କରିପାରିବ ଯାହା ପୂର୍ବରୁ ଏକ ବ୍ୟୟ-ପ୍ରଭାବଶାଳୀ, ମିଡ୍-ଥ୍ରୋପଟ୍ କାର୍ଡିଆକ୍ ସିଷ୍ଟମ୍ ଯୋଗାଇଥାଏ ଯାହା ପ୍ରି-କ୍ଲିନିକାଲ୍ drug ଷଧ ପରୀକ୍ଷଣ ପାଇଁ ସ୍ତନ୍ୟପାୟୀ ହୃଦୟର ଫିଜିଓଲୋଜି / ପାଥୋଫିଜିଓଲୋଜିର ଅନୁକରଣ କରିଥାଏ |
ଭିଟ୍ରୋ 22,23,24 ରେ କାର୍ଡିଓମାଇସାଇଟ୍ କାର୍ଯ୍ୟ ବଜାୟ ରଖିବାରେ ହେମୋଡାଇନାମିକ୍ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ସଙ୍କେତ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରିଥାଏ |ସାମ୍ପ୍ରତିକ ପାଣ୍ଡୁଲିପିରେ, ଆମେ ଏକ CTCM (ଚିତ୍ର 1a) ବିକଶିତ କରିଛୁ ଯାହା ଶାରୀରିକ ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସିରେ ଉଭୟ ବ electrical ଦ୍ୟୁତିକ ଏବଂ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା ସୃଷ୍ଟି କରି ବୟସ୍କଙ୍କ ହୃଦ୍ ପରିବେଶକୁ ଅନୁକରଣ କରିପାରିବ (ପ୍ରତି ମିନିଟ୍ରେ 1.2 Hz, 72 ବିଟ୍) |ଡାଇଷ୍ଟୋଲ୍ ସମୟରେ ଅତ୍ୟଧିକ ଟିସୁ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଏଡାଇବାକୁ, ଟିସୁ ଆକାରକୁ 25% ବୃଦ୍ଧି କରିବାକୁ ଏକ 3D ପ୍ରିଣ୍ଟିଙ୍ଗ୍ ଉପକରଣ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା (ଚିତ୍ର 1 ବି) |C-PACE ସିଷ୍ଟମ୍ ଦ୍ uc ାରା ପ୍ରବର୍ତ୍ତିତ ବ Elect ଦ୍ୟୁତିକ ପେସ୍ କାର୍ଡିଆକ୍ ଚକ୍ରକୁ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ପୁନ oduc ଉତ୍ପାଦନ କରିବା ପାଇଁ ଡାଟା ଅଧିଗ୍ରହଣ ସିଷ୍ଟମ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସିଷ୍ଟୋଲ୍ ପୂର୍ବରୁ 100 ମି।ଟିସୁ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରଣାଳୀ ଏକ ପ୍ରୋଗ୍ରାମେବଲ୍ ବ ne ଜ୍ଞାନିକ ଆକ୍ଟୁଏଟର୍ (LB ଇଞ୍ଜିନିୟରିଂ, ଜର୍ମାନୀ) ବ୍ୟବହାର କରେ ଯାହା ଉପର ଚାମ୍ବରରେ ହୃତପିଣ୍ଡର ସ୍ଲାଇସର ବିସ୍ତାର ପାଇଁ ଏକ ନମନୀୟ ସିଲିକନ୍ ମେମ୍ବ୍ରାନକୁ ଚକ୍ରବର୍ତ୍ତୀ ଭାବରେ ବିସ୍ତାର କରିଥାଏ |ସିଷ୍ଟମ୍ ଏକ ପ୍ରେସର ଟ୍ରାନ୍ସଡୁସର ମାଧ୍ୟମରେ ଏକ ବାହ୍ୟ ବାୟୁ ଲାଇନ ସହିତ ସଂଯୁକ୍ତ ଥିଲା, ଯାହା ଚାପ (± 1 mmHg) ଏବଂ ସମୟ (± 1 ମିସ) (ଚିତ୍ର 1c) କୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ସଜାଡ଼ିବା ସମ୍ଭବ କରିଥିଲା ​​|
ଉପକରଣର ସଂସ୍କୃତି ଚାମ୍ବର ଭିତରେ ନୀଳ ରଙ୍ଗରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା 7 ମିମି ସପୋର୍ଟ ରିଙ୍ଗରେ ଟିସୁ ବିଭାଗକୁ ସଂଲଗ୍ନ କରନ୍ତୁ |ସଂସ୍କୃତି ଚାମ୍ବରଟି ଏକ ପତଳା ନମନୀୟ ସିଲିକନ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ଦ୍ୱାରା ବାୟୁ ଚାମ୍ବରରୁ ଅଲଗା |ଲିକ୍ ରୋକିବା ପାଇଁ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚାମ୍ବର ମଧ୍ୟରେ ଏକ ଗ୍ୟାସ୍କେଟ୍ ରଖନ୍ତୁ |ଡିଭାଇସର lid ାଙ୍କୁଣୀରେ ଗ୍ରାଫାଇଟ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡ୍ ଥାଏ ଯାହା ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ସାହ ପ୍ରଦାନ କରିଥାଏ |b ବୃହତ ଟିସୁ ଉପକରଣ, ଗାଇଡ୍ ରିଙ୍ଗ୍ ଏବଂ ସପୋର୍ଟ ରିଙ୍ଗର ସ୍କିଜେଟିକ୍ ଉପସ୍ଥାପନା |ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡିକ (ବାଦାମୀ) ଡିଭାଇସର ବାହ୍ୟ ଧାରରେ ଥିବା ଗ୍ରୀଭରେ ରଖାଯାଇଥିବା ଗାଇଡ୍ ରିଙ୍ଗ ସହିତ ଓଭରସିଜ୍ ଡିଭାଇସରେ ରଖାଯାଇଛି |ଗାଇଡ୍ ବ୍ୟବହାର କରି, ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଟିସୁ ବିଭାଗ ଉପରେ ଟିସୁ ଆକ୍ରିଲିକ୍ ଆଡେସିଭ୍ ସହିତ ଆବୃତ ସପୋର୍ଟ ରିଙ୍ଗକୁ ଯତ୍ନର ସହିତ ରଖନ୍ତୁ |c ଗ୍ରାଫ୍ ଏକ ପ୍ରୋଗ୍ରାମେବଲ୍ ନିମୋନେଟିକ୍ ଆକ୍ଟୁଏଟର୍ (PPD) ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ବାୟୁ ଚାମ୍ବର ଚାପର କାର୍ଯ୍ୟ ଭାବରେ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ସାହର ସମୟ ଦର୍ଶାଉଛି |ଚାପ ସେନସର ବ୍ୟବହାର କରି ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନାକୁ ସିଙ୍କ୍ରୋନାଇଜ୍ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଡାଟା ଅଧିଗ୍ରହଣ ଉପକରଣ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା |ଯେତେବେଳେ ସଂସ୍କୃତି ଚାମ୍ବରରେ ଚାପ ନିର୍ଦ୍ଧାରିତ ସୀମା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପହଞ୍ଚେ, ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ସୃଷ୍ଟି କରିବାକୁ C-PACE-EM କୁ ଏକ ନାଡ ସଙ୍କେତ ପଠାଯାଏ |d ଏକ ଇନକ୍ୟୁବେଟର ସେଲରେ ରଖାଯାଇଥିବା ଚାରୋଟି CTCM ର ଚିତ୍ର |ଚାରିଟି ଡିଭାଇସ୍ ଗୋଟିଏ ନିମୋନିଆ ସର୍କିଟ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ଗୋଟିଏ PPD ସହିତ ସଂଯୁକ୍ତ, ଏବଂ ନିମୋନେଟିକ୍ ସର୍କିଟରେ ଥିବା ଚାପ ଉପରେ ନଜର ରଖିବା ପାଇଁ ହେମୋଷ୍ଟାଟିକ୍ ଭଲଭରେ ପ୍ରେସର ସେନ୍ସର ଭର୍ତ୍ତି କରାଯାଇଥାଏ |ପ୍ରତ୍ୟେକ ଉପକରଣରେ six ଟି ଟିସୁ ବିଭାଗ ଅଛି |
ଗୋଟିଏ ନିମୋନେଟିକ୍ ଆକ୍ଟୁଏଟର୍ ବ୍ୟବହାର କରି, ଆମେ 4 ଟି CTCM ଉପକରଣକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରିବାରେ ସକ୍ଷମ ହୋଇଥିଲୁ, ଯାହାର ପ୍ରତ୍ୟେକଟି 6 ଟି ଟିସୁ ବିଭାଗ ଧାରଣ କରିପାରିବ (ଚିତ୍ର 1d) |CTCM ରେ, ବାୟୁ ଚାମ୍ବରରେ ଥିବା ବାୟୁ ଚାପକୁ ତରଳ ଚାମ୍ବରରେ ସନ୍ତୁଳିତ ଚାପରେ ପରିଣତ କରାଯାଏ ଏବଂ ହାର୍ଟ ସ୍ଲାଇସର ଶାରୀରିକ ବିସ୍ତାରକୁ ପ୍ରବର୍ତ୍ତାଏ (ଚିତ୍ର 2a ଏବଂ ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଚଳଚ୍ଚିତ୍ର 1) |80 ମିମି Hg ରେ ଟିସୁ ବିସ୍ତାରର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ |କଳାଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡିକର 25% ପ୍ରସାରଣ ଦେଖାଇଲା (ଚିତ୍ର 2 ବି) |ଏହି ଶତକଡ଼ା ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ସାଧାରଣ ହୃଦ୍ ବିଭାଗ ଚୁକ୍ତିନାମା ପାଇଁ 17,19,25 ପାଇଁ ଏକ ଶାରୀରିକ ସାର୍କୋମେର୍ ଲମ୍ବ 2.2-2.3 µm ସହିତ ଅନୁରୂପ ବୋଲି ଦର୍ଶାଯାଇଛି |କଷ୍ଟମ୍ କ୍ୟାମେରା ସେଟିଂସମୂହ (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଚିତ୍ର 1) ବ୍ୟବହାର କରି ଟିସୁ ଗତିବିଧିକୁ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା |ଟିସୁ ଗତିର ପ୍ରଶସ୍ତତା ଏବଂ ବେଗ (ଚିତ୍ର 2c, d) ହୃଦ୍ ଚକ୍ର ସମୟରେ ଏବଂ ସିଷ୍ଟୋଲ୍ ଏବଂ ଡାଇଷ୍ଟୋଲ୍ (ଚିତ୍ର 2 ବି) ସମୟରେ ପ୍ରସାର ସହିତ ଅନୁରୂପ ଥିଲା |ସଂକୋଚନ ଏବଂ ଆରାମ ସମୟରେ ହୃଦ୍‌ରୋଗର ପ୍ରସାର ଏବଂ ବେଗ 12 ଦିନ ସଂସ୍କୃତିରେ ସ୍ଥିର ରହିଲା (ଚିତ୍ର 2f) |ସଂସ୍କୃତି ସମୟରେ ଚୁକ୍ତିଭିତ୍ତିକତା ଉପରେ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ସାହର ପ୍ରଭାବକୁ ଆକଳନ କରିବାକୁ, ଆମେ ଏକ ଛାୟା ଆଲଗୋରିଦମ (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଚିତ୍ର 2a, b) ବ୍ୟବହାର କରି ସକ୍ରିୟ ବିକଳାଙ୍ଗତା ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ପଦ୍ଧତି ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିଥିଲୁ ଏବଂ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ସହିତ ଏବଂ ବିନା ବିକୃତି ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ କରିବାରେ ସକ୍ଷମ ହୋଇଥିଲୁ |ହୃଦୟର ସମାନ ବିଭାଗ (ଚିତ୍ର 2f) |କଟର ଚଳନଶୀଳ ଅଞ୍ଚଳରେ (R6-9), ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ସମୟରେ ଭୋଲ୍ଟେଜ୍ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ସାହର ଅନୁପସ୍ଥିତି ତୁଳନାରେ 20% ଅଧିକ ଥିଲା, ଯାହା ଚୁକ୍ତିଭିତ୍ତିକ କାର୍ଯ୍ୟରେ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ସାହର ଅବଦାନକୁ ସୂଚିତ କରେ |
ବାୟୁ ଚାମ୍ବର ଚାପ, ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ଚାମ୍ବର ଚାପ, ଏବଂ ଟିସୁ ଗତି ମାପର ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିହ୍ନଗୁଡିକ ନିଶ୍ଚିତ କରେ ଯେ ଚାମ୍ବର ଚାପ ତରଳ ଚାମ୍ବର ଚାପକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିଥାଏ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ଟିସୁ ସ୍ଲାଇସର ଅନୁରୂପ ଗତି ହୋଇଥାଏ |b ଶତକଡା ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (କମଳା) ସହିତ ଟିସୁ ବିଭାଗର ଶତକଡ଼ା ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (ନୀଳ) ର ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିହ୍ନ |c କାର୍ଡିଆକ୍ ସ୍ଲାଇସର ମାପ ହୋଇଥିବା ଗତି ଗତିର ମାପ ଗତି ସହିତ ସମାନ ଅଟେ |(ଘ) ହୃଦୟର ଏକ ଖଣ୍ଡରେ ସାଇକ୍ଲିକ୍ ଗତି (ନୀଳ ରେଖା) ଏବଂ ବେଗ (କମଳା ବିନ୍ଦୁ ରେଖା) ର ପ୍ରତିନିଧୀ ଟ୍ରାଜେକ୍ଟୋରୀ |e ଚକ୍ର ସମୟର ପରିମାଣ (ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ଗୋଷ୍ଠୀ ପ୍ରତି n = 19 ଖଣ୍ଡ), ସଂକୋଚନ ସମୟ (ଗୋଷ୍ଠୀ ପ୍ରତି n = 19 ଖଣ୍ଡ), ଆରାମ ସମୟ (ଗୋଷ୍ଠୀ ପ୍ରତି n = 19 ଖଣ୍ଡ, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ), ଟିସୁ ଗତିବିଧି (n = 25) |ସ୍ଲାଇସ୍) / ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ ଗୋଷ୍ଠୀ), ଶିଖର ସିଷ୍ଟୋଲିକ୍ ବେଗ (n = 24 (D0), 25 (D12) ସ୍ଲାଇସ୍ / ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ଗୋଷ୍ଠୀ) ଏବଂ ଶିଖର ଆରାମ ହାର (n = 24 (D0), 25 (D12) ସ୍ଲାଇସ୍ / ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ ଗୋଷ୍ଠୀ) |ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜର ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି-ଟେଷ୍ଟ କ any ଣସି ପାରାମିଟରରେ କ significant ଣସି ବିଶେଷ ପାର୍ଥକ୍ୟ ଦେଖାଇଲା ନାହିଁ |f (ଲାଲ୍) ଏବଂ ବିନା (ନୀଳ) ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ସହିତ ଟିସୁ ବିଭାଗର ପ୍ରତିନିଧୀ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ଆନାଲିସିସ୍ ଚିହ୍ନ, ସମାନ ବିଭାଗରୁ ଟିସୁ ବିଭାଗର ଦଶଟି ଆଞ୍ଚଳିକ କ୍ଷେତ୍ର |ନିମ୍ନ ପ୍ୟାନେଲଗୁଡିକ ବିଭିନ୍ନ ବିଭାଗରୁ ଦଶଟି କ୍ଷେତ୍ରରେ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ସହିତ ଏବଂ ଟିସୁ ବିଭାଗରେ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ରେ ଶତକଡ଼ା ପାର୍ଥକ୍ୟର ପରିମାଣ ଦର୍ଶାଏ | (n = ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ 8 ଟି ଖଣ୍ଡ / ଗୋଷ୍ଠୀ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ବିଶିଷ୍ଟ ଛାତ୍ର ଟି-ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; **** p <0.0001, ** p <0.01, * p <0.05) | (n = ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ 8 ଟି ଖଣ୍ଡ / ଗୋଷ୍ଠୀ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ବିଶିଷ୍ଟ ଛାତ୍ର ଟି-ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ; **** p <0.0001, ** p <0.01, * p <0.05) | । (n = 8 ବିଭାଗ / ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ ଗୋଷ୍ଠୀ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜର ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି-ପରୀକ୍ଷା; **** p <0.0001, ** p <0.01, * p <0.05) | （N = 8 片 / 组 ， 来自 ** 学生 ** ** **** p <0.0001 ， ** p <0.01 ， * p <0.05）。 （N = 8 片 / 组 ， 来自 ** 学生 ** ** **** p <0.0001 ， ** p <0.01 ， * p <0.05）。 (n = 8 срезов / группу, от разных свиней, дву зононний критерий Стьюдента; **** p <0,0001, ** p <0,01, * p <0,05) (n = 8 ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ, ଦୁଇ ଲାଞ୍ଜ ବିଶିଷ୍ଟ ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି-ପରୀକ୍ଷା; **** p <0.0001, ** p <0.01, * p <0.05) |ତ୍ରୁଟି ଦଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ହାରାହାରି ± ମାନକ ବିଘ୍ନକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ |
ଆମର ପୂର୍ବ ଷ୍ଟାଟିକ୍ ବାୟୋମାଇମେଟିକ୍ ହାର୍ଟ ସ୍ଲାଇସ୍ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରଣାଳୀରେ [20, 21], ଆମେ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ପ୍ରୟୋଗ କରି ମଧ୍ୟମ ରଚନାକୁ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ କରି 6 ଦିନ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା, କାର୍ଯ୍ୟ, ଏବଂ ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତା ବଜାୟ ରଖିଥିଲୁ |ତେବେ, 10 ଦିନ ପରେ, ଏହି ସଂଖ୍ୟାଗୁଡିକ ତୀବ୍ର ହ୍ରାସ ପାଇଲା |ଆମେ ଆମର ପୂର୍ବ ଷ୍ଟାଟିକ୍ ବାୟୋମାଇମେଟିକ୍ ସଂସ୍କୃତି ସିଷ୍ଟମ୍ 20, 21 କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ କଣ୍ଡିସନ୍ (Ctrl) ରେ ସଂସ୍କୃତ ବିଭାଗଗୁଡିକୁ ରେଫର୍ କରିବୁ ଏବଂ ଏକକାଳୀନ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଏବଂ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା (CTCM) ଅଧୀନରେ ଆମେ ଆମର ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ମାଧ୍ୟମକୁ MC ଅବସ୍ଥା ଏବଂ ସଂସ୍କୃତି ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରିବୁ |ଡାକିଲେ |ପ୍ରଥମେ, ଆମେ ସ୍ଥିର କଲୁ ଯେ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ବିନା ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା 6 ଦିନ ପାଇଁ ଟିସୁ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ବଜାୟ ରଖିବା ପାଇଁ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ନୁହେଁ (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଚିତ୍ର 3a, b) |କ Interest ତୁହଳର ବିଷୟ, STCM ବ୍ୟବହାର କରି ଫିଜିଓ-ମେକାନିକାଲ୍ ଏବଂ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ସାହର ପ୍ରବର୍ତ୍ତନ ସହିତ, 12 ଦିନିଆ ହୃଦୟ ବିଭାଗର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା MS ଅବସ୍ଥାରେ ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ ପରି ସମାନ ରହିଲା, କିନ୍ତୁ MTT ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦ୍ shown ାରା ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି Ctrl ଅବସ୍ଥାରେ ନୁହେଁ (ଚିତ୍ର 1) |3a)ଏହା ସୂଚିତ କରେ ଯେ ଆମର ପୂର୍ବ ସ୍ଥିର ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରଣାଳୀରେ ରିପୋର୍ଟ ହୋଇଥିବା ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା ଏବଂ ହୃଦ୍ ଚକ୍ରର ଅନୁକରଣ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ ଦୁଇଗୁଣ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମ କରିପାରେ |ଅବଶ୍ୟ, କାର୍ଡିଆକ୍ ଟ୍ରପୋନିନ୍ ଟି ଏବଂ କନେକ୍ସିନ୍ 43 ର ଇମ୍ୟୁନୋଲାବେଲିଂ ଦ୍ୱାରା ଟିସୁ ବିଭାଗର ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ ଦର୍ଶାଇଲା ଯେ ସେହି ଦିନ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଅପେକ୍ଷା 12 ଦିନରେ MC ଟିସୁରେ କନକ୍ସିନ 43 ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ଯଥେଷ୍ଟ ଅଧିକ ଥିଲା |ତଥାପି, ୟୁନିଫର୍ମ କନକ୍ସିନ 43 ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ଏବଂ Z- ଡିସ୍କ ଗଠନ ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ରୂପେ ପରିଚାଳିତ ହୋଇନଥିଲା (ଚିତ୍ର 3 ବି) |ଟିସୁ ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ପରିମାଣ କରିବା ପାଇଁ ଆମେ ଏକ କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧିମତା (AI) framework ାଞ୍ଚା ବ୍ୟବହାର କରୁ, ଟ୍ରପୋନିନ୍-ଟି ଉପରେ ଆଧାରିତ ଏକ ପ୍ରତିଛବି-ଆଧାରିତ ଗଭୀର ଶିକ୍ଷା ପାଇପଲାଇନ ଏବଂ ସ୍ଥାନୀୟକରଣର ଶକ୍ତି ଦୃଷ୍ଟିରୁ ହୃଦୟର ସ୍ଲାସର ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତା ଏବଂ ଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସକୁ ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ଭାବରେ ପରିମାଣ କରିବା ପାଇଁ |ରେଫରେନ୍ସରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥିବା ପରି ଏହି ପଦ୍ଧତି ଏକ ସ୍ୱୟଂଚାଳିତ ଏବଂ ନିରପେକ୍ଷ manner ଙ୍ଗରେ କାର୍ଡିଆକ୍ ଟିସୁର ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ନିର୍ଭରଯୋଗ୍ୟ ଭାବରେ ପରିମାଣ କରିବା ପାଇଁ ଏକ କନଭୋଲ୍ୟୁସନ୍ ନ୍ୟୁରାଲ୍ ନେଟୱାର୍କ (CNN) ଏବଂ ଏକ ଗଭୀର ଶିକ୍ଷଣ framework ାଞ୍ଚା ବ୍ୟବହାର କରେ |26. ଷ୍ଟାଟିକ୍ କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ ବିଭାଗ ତୁଳନାରେ MC ଟିସୁ ଦିନ 0 ସହିତ ଉନ୍ନତ ଗଠନମୂଳକ ସମାନତା ଦେଖାଇଲା |ଏହା ସହିତ, ମାସନ୍ଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ୍ ଦାଗ ସଂସ୍କୃତିର 12 ଦିନର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଅବସ୍ଥା ତୁଳନାରେ MS ଅବସ୍ଥାରେ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ର ଯଥେଷ୍ଟ କମ୍ ପ୍ରତିଶତ ପ୍ରକାଶ କରିଥିଲା ​​(ଚିତ୍ର 3c) |ଯେତେବେଳେ CTCM ଦିନ 12 ରେ ହୃଦୟ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାକୁ ତାଜା ହୃଦୟ ଟିସୁ ପରି ସ୍ତରକୁ ବ increased ାଇଲା, ଏହା ହୃଦୟ ବିଭାଗର ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ବିଶେଷ ଉନ୍ନତି କରିନଥିଲା |
ଏକ ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ତାଜା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ (D0) କିମ୍ବା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ସଂସ୍କୃତିର MTT କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାର ପରିମାଣକୁ ଷ୍ଟାଟିକ୍ ସଂସ୍କୃତିରେ (D12 Ctrl) କିମ୍ବା CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗ୍ରୁପ୍ ତୁଳନାରେ ଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ D / D କୁ ତୁଳନା କରେ | l) ଏକ ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ତାଜା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ (D0) କିମ୍ବା ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ସଂସ୍କୃତିର MTT କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାର ପରିମାଣକୁ ଷ୍ଟାଟିକ୍ ସଂସ୍କୃତିରେ (D12 Ctrl) କିମ୍ବା CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗ୍ରୁପ୍ ତୁଳନାରେ ଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ D / D କୁ ତୁଳନା କରେ | l)ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମ୍ ଷ୍ଟାଟିକ୍ ସଂସ୍କୃତି (D12 ନିୟନ୍ତ୍ରଣ) କିମ୍ବା CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 ନିୟନ୍ତ୍ରଣ)।)), 12 (D12 MC) ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀର 12 ଦିନ ପାଇଁ MTT ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) କିମ୍ବା ହୃଦୟ ବିଭାଗର ସଂସ୍କୃତିର ପରିମାଣକୁ ଦର୍ଶାଏ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଏ;#### p <0,0001 по сравнению с D0 и ** p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl) | D0 Ctrl ତୁଳନାରେ #### p <0.0001 ଏବଂ ** p <0.01 ତୁଳନାରେ) | a 条形图 显示 在 培养 (D12 Ctrl) 或 CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中 新鲜 心脏 D (D0) 或 心脏 切片 培养 12 天 的 MTT 活力 的 量化 OV OV OV ， #### p <0.0001 ， 与 D12 Ctrl 相比 ， ** p <0.01)。 a 条形图 显示 在 培养 D (D12 Ctrl) 或 CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中 新鲜 心脏 D (D0) ， 来自 不同 的 12 (D12 MC) 切片 / 组 ， 进行 单向 单向 单向， ** p。)ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମ୍ ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) କିମ୍ବା ହୃଦୟ ବିଭାଗରେ 12 ଦିନ ପାଇଁ ସଂସ୍କୃତି ସଂସ୍କୃତି (D12 ନିୟନ୍ତ୍ରଣ) କିମ୍ବା CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 ନିୟନ୍ତ୍ରଣ)), 12 (D12 MC) ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ ANOVA ପରୀକ୍ଷା;#### p <0,0001 по сравнению с D0, ** p <0,01 по сравнению с D12 Ctrl) | D0 ତୁଳନାରେ #### p <0.0001, ** p <0.01 D12 Ctrl ତୁଳନାରେ) |b ଟ୍ରପୋନିନ୍-ଟି (ସବୁଜ), କନକ୍ସିନ୍ 43 (ଲାଲ୍) ଏବଂ DAPI (ନୀଳ) ନୂତନ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) କିମ୍ବା ହୃଦୟ ବିଭାଗରେ ଷ୍ଟାଟିକ୍ ସ୍ଥିତି (Ctrl) କିମ୍ବା CTCM ଅବସ୍ଥା (MC) 12 ଦିନ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧୀ ଇମ୍ୟୁନୋଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପ୍ରତିଛବିଗୁଡିକ (ଖାଲି ସ୍କେଲ୍ = 100 µm) | ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ହୃଦୟ ଟିସୁ ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତା (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗ୍ରୁପ୍ ର କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧି ପରିମାଣ, D12 Ctrl ତୁଳନାରେ #### p <0.0001) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ ହୃଦୟ ଟିସୁ ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତା (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗ୍ରୁପ୍ ର କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧି ପରିମାଣ, D0 Ctrl ତୁଳନାରେ #### p <0.0001) Количчвеннаяценойеной тенойной целнни сисаи сини сининаиыманеем (n = 7 (d0) срзазззмммкзззммззззм | рпп р пп " କୃତ୍ରିମ ଇଣ୍ଟେଲିଜେନ୍ସ (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ ଦ୍ different ାରା ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା; #### p <0.0001 ବନାମ D0 ଏବଂ **** p <0.0001 ସହିତ D12 Ctrl) |人工智能 量化 心脏 组织 完整性 （n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀର ଏକ ଖଣ୍ଡ / ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା; #### p <0.0001 与 D0 相比 ， **** p <0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。。人工智能 量化 心脏 组织 完整性 = n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିର ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା; #### p <0.0001 与 D0 相比 ， **** p <0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。。 Искусственный интеллект для количественной оценки адной целостности сердечной ткани (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) срезов / группу kaждой из разных свей, односторонйй свей | <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl) | ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତା (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରି, ଗୋଟିଏପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା; #### p <0.0001 ବନାମ .D0 ତୁଳନା ପାଇଁ **** p <0.0001 D12 Ctrl ତୁଳନାରେ | c ମାସନ୍ଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ୍ ଦାଗ (ସ୍କେଲ ଖାଲି = 500 µm) (n = 10 ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗ୍ରୁପ୍ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ଦାଗିତ ହାର୍ଟ ସ୍ଲାଇସ୍ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିତ୍ର (ବାମ) ଏବଂ ପରିମାଣ (ଡାହାଣ) D0 Ctrl ତୁଳନାରେ #### p <0.0001) | c ମାସନ୍ଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ୍ ଦାଗ (ସ୍କେଲ ଖାଲି = 500 µm) (n = 10 ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗୋଷ୍ଠୀ) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ ଦାଗଯୁକ୍ତ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିତ୍ର (ବାମ) ଏବଂ ପରିମାଣ (ଡାହାଣ) D0 Ctrl ତୁଳନାରେ #### p <0.0001) | c Репрезент киные изображения (слева) һәм количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашенных трихромным красителем Массона (кс покрятия = 500 мкм) ### p <0,0001 по сравнению с D0 и *** p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl) | c ମାସନ୍ଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ୍ ଦାଗ (ଅନାବୃତ ସ୍କେଲ୍ = 500 µm) (n = 10 ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଇଥିଲା; D12 Ctrl ତୁଳନାରେ #### p <0 .0001) ସହିତ ହୃଦୟ ବିଭାଗର ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିତ୍ର (ବାମ) ଏବଂ ପରିମାଣ (ଡାହାଣ) | c 用 ମାସନ୍ 三 色 染料 染色 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 ）。 C 用 masson 三 色 染料 的 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 trl 相比）。 c Репрезент киные изображения (слева) һәм количественный мат (справа) срезов сердца, окрашенных трихромным красителем Мас адоа (чя шкала = 500 мкм) с كانнного мата; ### #p <0,0001 по сравнению с D0, *** p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl) | c ମାସନ୍ଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ୍ ଦାଗ (ଖାଲି = 500 µ ମି) (n = 10 ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ ଦାଗିତ ହୃଦୟ ବିଭାଗର ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିତ୍ର (ବାମ) ଏବଂ ପରିମାଣ (ଡାହାଣ) D0, *** p <0.001 ତୁଳନାରେ D12, *** p <0.001) |ତ୍ରୁଟି ଦଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ହାରାହାରି ± ମାନକ ବିଘ୍ନକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ |
ଆମେ ଅନୁମାନ କରିଛୁ ଯେ ସଂସ୍କୃତି ମାଧ୍ୟମରେ ଛୋଟ ଅଣୁଗୁଡିକ ଯୋଗ କରି କାର୍ଡିଓମାଇସାଇଟ୍ ଅଖଣ୍ଡତା ଉନ୍ନତ ହୋଇପାରିବ ଏବଂ CTCM ସଂସ୍କୃତି ସମୟରେ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ବିକାଶ ହ୍ରାସ ହୋଇପାରେ |ତେଣୁ ଅଳ୍ପ ସଂଖ୍ୟକ ଦ୍ୱନ୍ଦ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ କାରଣ ହେତୁ ଆମର ଷ୍ଟାଟିକ୍ କଣ୍ଟ୍ରୋଲ୍ କଲଚର୍ସ 20,21 ବ୍ୟବହାର କରି ଆମେ ଛୋଟ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକ ପାଇଁ ସ୍କ୍ରିନ କରିଥିଲୁ |ଏହି ପରଦା ପାଇଁ ଡେକ୍ସାମେଥାସୋନ (ଡେକ୍ସ), ଟ୍ରାଇଓଡୋଥାଇରୋନାଇନ୍ (T3), ଏବଂ SB431542 (SB) ଚୟନ କରାଯାଇଥିଲା |ଏହି ଛୋଟ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକ ପୂର୍ବରୁ hiPSC-CM ସଂସ୍କୃତିରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇ ସାର୍କୋମେର ଲମ୍ବ, ଟି-ଟ୍ୟୁବଲ୍ ଏବଂ ଚାଳନା ବେଗ ବ by ାଇ କାର୍ଡିଓମାଇସାଇଟ୍ ର ପରିପକ୍ .ତା ସୃଷ୍ଟି କରିଥିଲେ |ଏହା ସହିତ, ଉଭୟ ଡେକ୍ସ (ଏକ ଗ୍ଲୁକୋକୋର୍ଟିକଏଡ୍) ଏବଂ SB ପ୍ରଦାହକୁ ଦମନ କରିବା ପାଇଁ ଜଣାଶୁଣା 29,30 |ତେଣୁ, ଆମେ ପରୀକ୍ଷା କରିଛୁ କି ଏହି ଛୋଟ ଅଣୁଗୁଡ଼ିକର ମିଶ୍ରଣ ହୃଦୟ ବିଭାଗର ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିବ କି?ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ସ୍କ୍ରିନିଂ ପାଇଁ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ଯ ound ଗିକର ମାତ୍ରା ସାଧାରଣତ cell କୋଷ ସଂସ୍କୃତି ମଡେଲଗୁଡିକରେ ବ୍ୟବହୃତ ଏକାଗ୍ରତା ଉପରେ ଆଧାର କରି ଚୟନ କରାଯାଇଥିଲା (1 μM Dex27, 100 nM T327, ଏବଂ 2.5 μM SB31) |12 ଦିନର ସଂସ୍କୃତି ପରେ, T3 ଏବଂ ଡେକ୍ସର ମିଶ୍ରଣରେ ଉତ୍କୃଷ୍ଟ କାର୍ଡିଓମାଇସାଇଟ୍ ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତା ଏବଂ ସର୍ବନିମ୍ନ ଫାଇବ୍ରସ୍ ରିମୋଡେଲିଂ (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଫିଗର୍ସ 4 ଏବଂ 5) ଫଳାଫଳ ହେଲା |ଏହା ସହିତ, T3 ଏବଂ ଡେକ୍ସର ଏହି ଏକାଗ୍ରତାକୁ ଦୁଇଗୁଣ କିମ୍ବା ଦୁଇଗୁଣ ବ୍ୟବହାର ସାଧାରଣ ଏକାଗ୍ରତା ତୁଳନାରେ ବିଲୋପକାରୀ ପ୍ରଭାବ ସୃଷ୍ଟି କଲା (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଚିତ୍ର 6a, b) |
ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ସ୍କ୍ରିନିଂ ପରେ, ଆମେ 4 ଟି ସଂସ୍କୃତି ସ୍ଥିତିର ଏକ ମୁଣ୍ଡ-ମୁଣ୍ଡ ତୁଳନା ତୁଳନା କରିଥିଲୁ (ଚିତ୍ର 4a): Ctrl: ଆମର ଅପ୍ଟିମାଇଜଡ୍ ମାଧ୍ୟମ ବ୍ୟବହାର କରି ଆମର ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ସ୍ଥିର ସଂସ୍କୃତିରେ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡିକ ସଂସ୍କୃତ;20.21 TD: T3 ଏବଂ Ctrl s ବୁଧବାର ଦିନ ଯୋଡି ହୋଇଛି;MC: ଆମର ପୂର୍ବ ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ମାଧ୍ୟମ ବ୍ୟବହାର କରି CTCM ରେ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡିକ ସଂସ୍କୃତ;ଏବଂ MT: T3 ଏବଂ Dex ସହିତ CTCM ମଧ୍ୟମ ସହିତ ଯୋଡି ହେଲା |12 ଦିନର ଚାଷ ପରେ, MST ଏବଂ MT ଟିସୁଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା MTT ଆସେସ୍ (ଚିତ୍ର 4b) ଦ୍ୱାରା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କିତ ତାଜା ଟିସୁ ପରି ସମାନ ରହିଲା |କ Interest ତୁହଳର ବିଷୟ, ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ସଂସ୍କୃତି (TD) ରେ T3 ଏବଂ ଡେକ୍ସର ଯୋଗ, Ctrl ଅବସ୍ଥା ତୁଳନାରେ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାରେ ବିଶେଷ ଉନ୍ନତି ଆଣିଲା ନାହିଁ, ଯାହା ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ବଜାୟ ରଖିବାରେ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ସାହର ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ସୂଚାଇଥାଏ |
12 ଦିନ ପାଇଁ ମଧ୍ୟମ ଉପରେ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା ଏବଂ T3 / Dex ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟେସନ୍ ର ପ୍ରଭାବ ଆକଳନ କରିବାକୁ ବ୍ୟବହୃତ ଚାରୋଟି ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାକୁ ଚିତ୍ରଣ କରୁଥିବା ଏକ ପରୀକ୍ଷାମୂଳକ ଡିଜାଇନ୍ ଚିତ୍ର | b ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ତାଜା ହୃଦୟ କଟା (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MT), 12 (D12 MC) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗ୍ରୁପ୍ ତୁଳନାରେ ବିଭିନ୍ନ 4 ଟି ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାରେ (Ctrl, TD, MC, ଏବଂ MT) 12 ଦିନର ପୋଷ୍ଟ ସଂସ୍କୃତିର ପରିମାଣ ଦେଖାଏ, ଏକ ପ୍ରକାର ANOVA ପରୀକ୍ଷା # p # 0 D12 Ctrl କୁ) b ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ତାଜା ହୃଦୟ କଟା (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MT), 12 (D12 MC) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗ୍ରୁପ୍ ତୁଳନାରେ ବିଭିନ୍ନ 4 ଟି ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାରେ (Ctrl, TD, MC, ଏବଂ MT) 12 ଦିନର ପୋଷ୍ଟ ସଂସ୍କୃତିର ପରିମାଣ ଦେଖାଏ, ଏକ ପ୍ରକାର ANOVA ପରୀକ୍ଷା # p # 0 ରୁ D12 ctrl) | ب MT), 12 b ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ସତେଜ ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, ଏବଂ D12 MT), 12 (D12 MC) ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ ତୁଳନାରେ 12 ଟି ପୋଷ୍ଟ ସଂସ୍କୃତିରେ 12 ଦିନର ପୋଷ୍ଟ ସଂସ୍କୃତିରେ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାର ପରିମାଣ ଦର୍ଶାଏ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା 0 # 0.001 # p rl) b 条形图 显示 所有 4 种 培养 条件 t Ctrl 、 TD 、 MC 和 MT） 与 新鲜 切片 D (D0) 0.001 与 D0 相比 ， ** p <0.01 与 D12 控制）。b 4 12 (D12 MC) 4 OVA; ## # b ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MT) ତୁଳନାରେ ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମ୍ ସମସ୍ତ 4 ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥା (ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, TD, MC ଏବଂ MT) ଦର୍ଶାଉଛି, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରି 12 (D12 MC) ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା; c ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ସତେଜ ହୃଦୟ କଟା (D0) ତୁଳନାରେ ସମସ୍ତ 4 ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାରେ (Ctrl, TD, MC, ଏବଂ MT) ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ଫ୍ଲକ୍ସର 12 ଦିନ ପୋଷ୍ଟ ସଂସ୍କୃତିର ପରିମାଣ ଦର୍ଶାଏ (D = Ctrl ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ *** p <0.001 ତୁଳନାରେ ### p <0.001) | c ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ସତେଜ ହୃଦୟ କଟା (D0) ତୁଳନାରେ ସମସ୍ତ 4 ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାରେ (Ctrl, TD, MC, ଏବଂ MT) ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ଫ୍ଲକ୍ସର 12 ଦିନ ପୋଷ୍ଟ ସଂସ୍କୃତିର ପରିମାଣ ଦର୍ଶାଏ (D = Ctrl ତୁଳନାରେ D0 ଏବଂ *** p <0.001 ତୁଳନାରେ ### p <0.001) | с оронний Выполняется то ANOVA; ### p <0,001 по сравнению с D0 и *** p <0,001 по сравнению с D12 Ctrl) c ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମ୍ ସତେଜ ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) ତୁଳନାରେ ବିଭିନ୍ନ 4 ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାରେ (ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, TD, MC ଏବଂ MT) ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ଫ୍ଲକ୍ସର 12 ଦିନ ପରବର୍ତ୍ତୀ ସଂସ୍କୃତିର ପରିମାଣ ଦେଖାଏ (n = 6 ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା; D12 Ctrl ତୁଳନାରେ ### p <0.001) c 条形图 显示 所有 4 种 培养 （Ctrl 、 TD 、 MC 和 MT） 与 新鲜 D (D0) 相比 ， 后 后 = n = 6 片 / 组 ， 来自 不同 OV OV 执行 OV OV OV OV OV OV OV OV OV OV l 相比）。 C 条形图 显示 所有 4 种 条件 t ctrl 、 td 、 mc 和 mt） 新鲜 后 后 后 后 后 后 = = n = 6 片 / 组 （0.00 0.00 A A A A A A A A A 0 相比 ， *** p <0.001 与 D12 Ctrl 相比）。 c Гистограмма, показывающая количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после мгитерированя для всех 4 условий митеривированя (ис, TD, MC и MT) по сравнению со свеж ср с с ср с , односторонний Былы проведены тесты ANOVA; ### p <0,001 по сравнению с D0, *** p <0,001 по сравнению с D12 (କାରି) | c ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମ୍ ସତେଜ ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) (n = 6 ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ) ତୁଳନାରେ ସମସ୍ତ 4 ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥା (ନିୟନ୍ତ୍ରଣ, ଟିଡି, ଏମସି, ଏବଂ MT) ପାଇଁ 12 ଦିନ ପରବର୍ତ୍ତୀ ସଂସ୍କୃତିରେ ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ଫ୍ଲକ୍ସର ପରିମାଣ ଦର୍ଶାଉଛି, D12 (ନିୟନ୍ତ୍ରଣ) ତୁଳନାରେ ### p <0.001, # p # 0.001 ତୁଳନାରେ |d ତାଜା (ନୀଳ), ଦିନ 12 MC (ସବୁଜ), ଏବଂ ଦଶଟି ଆଞ୍ଚଳିକ ଟିସୁ ସେକ୍ସନ୍ ପଏଣ୍ଟରେ ଦିନ 12 MT (ନାଲି) ଟିସୁର ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ଆନାଲିସିସ୍ ପ୍ଲଟ୍ (n = 4 ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗ୍ରୁପ୍, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା; ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ କ significant ଣସି ବିଶେଷ ପାର୍ଥକ୍ୟ ନଥିଲା) |ଇ ଆଗ୍ନେୟଗିରି ପ୍ଲଟ୍ 10-12 ଦିନ ପାଇଁ ସ୍ଥିର ଅବସ୍ଥାରେ (Ctrl) କିମ୍ବା MT ଅବସ୍ଥାରେ (MT) ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରାପ୍ତ ହୃଦୟ ବିଭାଗ ତୁଳନାରେ ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ (D0) ରେ ଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶିତ ଜିନ୍ ଦେଖାଏ |f ପ୍ରତ୍ୟେକ ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାରେ ସଂସ୍କୃତ ହୃଦୟ ବିଭାଗ ପାଇଁ ସାର୍କୋମେର ଜିନ୍ ର ଉତ୍ତାପ |ତ୍ରୁଟି ଦଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ହାରାହାରି ± ମାନକ ବିଘ୍ନକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ |
ଫ୍ୟାଟି ଏସିଡ୍ ଅକ୍ସିଡେସନ୍ ରୁ ଗ୍ଲାଇକୋଲିସିସ୍ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସୁଇଚ୍ ଉପରେ ମେଟାବୋଲିକ୍ ନିର୍ଭରଶୀଳତା ହେଉଛି କାର୍ଡିଓମାଇସାଇଟ୍ ଡିଫେରେଣ୍ଟିଫିକେସନ୍ ର ଏକ ଚିହ୍ନ |ଅପରିପକ୍ୱ କାର୍ଡିଓମାଇସାଇଟ୍ ଗୁଡିକ ମୁଖ୍ୟତ AT ATP ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି ଏବଂ ଅଳ୍ପ କ୍ରିଷ୍ଟା 5,32 ସହିତ ହାଇପୋପ୍ଲାଷ୍ଟିକ୍ ମାଇଟୋକଣ୍ଡ୍ରିଆ ଥାଏ |ଗ୍ଲୁକୋଜ ବ୍ୟବହାର ବିଶ୍ଳେଷଣ ଦର୍ଶାଇଲା ଯେ MC ଏବଂ MT ଅବସ୍ଥାରେ, ଗ୍ଲୁକୋଜର ବ୍ୟବହାର ଦିନ 0 ଟିସୁରେ ସମାନ ଥିଲା (ଚିତ୍ର 4c) |ଅବଶ୍ୟ, Ctrl ନମୁନାଗୁଡ଼ିକ ତାଜା ଟିସୁ ତୁଳନାରେ ଗ୍ଲୁକୋଜ ବ୍ୟବହାରରେ ଏକ ମହତ୍ତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବୃଦ୍ଧି ଦେଖାଇଲା |ଏହା ସୂଚିତ କରେ ଯେ CTCM ଏବଂ T3 / Dex ର ମିଶ୍ରଣ ଟିସୁ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତାକୁ ବ ances ାଇଥାଏ ଏବଂ 12 ଦିନିଆ ସାଂସ୍କୃତିକ ହୃଦୟ ବିଭାଗର ମେଟାବୋଲିକ୍ ଫେନୋଟାଇପ୍ ସଂରକ୍ଷଣ କରିଥାଏ |ଏଥିସହ, ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ବିଶ୍ଳେଷଣରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ MT ଏବଂ MS ଅବସ୍ଥାରେ 12 ଦିନ ପାଇଁ ତାଜା ହୃଦୟ ଟିସୁ ପରି ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ସ୍ତର ସମାନ ରହିଲା (ଚିତ୍ର 4d) |
କାର୍ଡିଆକ୍ ସ୍ଲାଇସ୍ ଟିସୁର ବିଶ୍ global ସ୍ତରୀୟ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଲ୍ୟାଣ୍ଡସ୍କେପ ଉପରେ CTCM ଏବଂ T3 / Dex ର ସାମଗ୍ରିକ ପ୍ରଭାବ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବାକୁ, ଆମେ ଚାରୋଟି ଭିନ୍ନ ସଂସ୍କୃତି ସ୍ଥିତିରୁ ହୃଦ୍‌ରୋଗରେ RNAseq ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲୁ (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଡାଟା 1) |କ Interest ତୁହଳର ବିଷୟ, MT ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକ ତାଜା ହୃଦୟ ଟିସୁ ସହିତ ଉଚ୍ଚ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ସମାନତା ଦେଖାଇଲେ, 13,642 ଜିନ୍ ମଧ୍ୟରୁ କେବଳ 16 ଟି ଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶ ପାଇଲା |ତଥାପି, ଯେପରି ଆମେ ପୂର୍ବରୁ ଦେଖାଇଥିଲୁ, Ctrl ସ୍ଲାଇସ୍ ସଂସ୍କୃତିରେ 10-12 ଦିନ ପରେ 1229 ଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ ଭାବରେ ପ୍ରକାଶିତ ଜିନ୍ ପ୍ରଦର୍ଶନ କରିଥିଲା ​​(ଚିତ୍ର 4e) |ଏହି ତଥ୍ୟଗୁଡିକ ହୃଦୟ ଏବଂ ଫାଇବ୍ରୋବ୍ଲାଷ୍ଟ ଜିନ୍ (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଚିତ୍ର 7a-c) ର qRT-PCR ଦ୍ୱାରା ନିଶ୍ଚିତ କରାଯାଇଥିଲା |କ Interest ତୁହଳର ବିଷୟ, Ctrl ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକ ହୃଦ୍‌ରୋଗ ଏବଂ କୋଷ ଚକ୍ର ଜିନ୍ଗୁଡ଼ିକର ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଏବଂ ପ୍ରଦାହକାରୀ ଜିନ୍ ପ୍ରୋଗ୍ରାମଗୁଡ଼ିକର ସକ୍ରିୟତା ଦେଖାଇଲେ |ଏହି ତଥ୍ୟଗୁଡିକ ସୂଚିତ କରେ ଯେ ଡିଫେରେଣ୍ଟିଫେସନ୍, ଯାହା ସାଧାରଣତ long ଦୀର୍ଘମିଆଦୀ ସଂସ୍କୃତି ପରେ ଘଟିଥାଏ, MT ଅବସ୍ଥାରେ ସମ୍ପୁର୍ଣ୍ଣ ଭାବରେ ଆଘାତପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥାଏ (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଚିତ୍ର 8a, b) |ସାର୍କୋମେର ଜିନଗୁଡିକର ଯତ୍ନର ସହ ଅଧ୍ୟୟନରୁ ଜଣାପଡିଛି ଯେ କେବଳ MT ଅବସ୍ଥାରେ ଜିନ୍ ଗୁଡିକ ସାର୍କୋମେର (ଚିତ୍ର 4f) ଏବଂ ଆୟନ ଚ୍ୟାନେଲ (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଚିତ୍ର 9) ସଂରକ୍ଷିତ, Ctrl, TD, ଏବଂ MC ଅବସ୍ଥାରେ ଦମନରୁ ରକ୍ଷା କରିଥାଏ |ଏହି ତଥ୍ୟଗୁଡିକ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଏବଂ ହାସ୍ୟରସ ଉତ୍ସାହ (T3 / Dex) ର ମିଶ୍ରଣ ସହିତ, ହାର୍ଟ ସ୍ଲାଇସ୍ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟୋମ୍ ସଂସ୍କୃତିରେ 12 ଦିନ ପରେ ତାଜା ହୃଦୟ କଟା ଭଳି ରହିପାରେ |
ଏହି ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନାଲ ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡିକରେ ଥିବା କାର୍ଡିଓମାଇସାଇଟ୍ସର ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତା 12 ଦିନ ପାଇଁ MT ଅବସ୍ଥାରେ ସର୍ବୋତ୍ତମ ଭାବରେ ସଂରକ୍ଷିତ ହୋଇ ରହିଥାଏ, ଯେପରି ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ଏବଂ ଲୋକାଲ୍ କନେକ୍ସିନ୍ 43 (ଚିତ୍ର 5a) ଦ୍ୱାରା ଦର୍ଶାଯାଇଛି |ଏଥିସହ, MT ଅବସ୍ଥାରେ ହୃଦୟ ବିଭାଗରେ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ Ctrl ତୁଳନାରେ ଯଥେଷ୍ଟ ହ୍ରାସ ପାଇଲା ଏବଂ ତାଜା ହୃଦୟ ବିଭାଗ (ଚିତ୍ର 5b) ସହିତ ସମାନ |ଏହି ତଥ୍ୟଗୁଡିକ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା ଏବଂ T3 / ଡେକ୍ସ ଚିକିତ୍ସାର ମିଶ୍ରଣ ସଂସ୍କୃତିର ହୃଦୟ ବିଭାଗରେ ହୃଦ୍‌ରୋଗକୁ ପ୍ରଭାବଶାଳୀ ଭାବରେ ସଂରକ୍ଷଣ କରିଥାଏ |
ଟ୍ରପୋନିନ୍-ଟି (ସବୁଜ), କନକ୍ସିନ୍ 43 (ଲାଲ୍), ଏବଂ DAPI (ନୀଳ) ର ଏକ ପ୍ରତିନିଧୀ ଇମ୍ୟୁନୋଫ୍ଲୋରୋସେନ୍ସ ପ୍ରତିଛବିଗୁଡିକ ନୂତନ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ହୃଦୟ ବିଭାଗରେ (D0) କିମ୍ବା ଚାରିଟି ହୃଦୟ ବିଭାଗ ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥାରେ (ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 100 µm) 12 ଦିନ ପାଇଁ ସଂସ୍କୃତ |) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ ହୃଦୟ ଟିସୁ ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତା (n = 7 (D0 ଏବଂ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ଏବଂ D12 MT) ର କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧି ପରିମାଣ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଏ; D0 ଏବଂ * p <0.05, କିମ୍ବା **** p <0.0001) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ ହୃଦୟ ଟିସୁ ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତା (n = 7 (D0 ଏବଂ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ଏବଂ D12 MT) ର କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧି ପରିମାଣ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷଣ କରାଯାଏ; D0 ଏବଂ * p <0.05, କିମ୍ବା **** p <0.0001) Киченнаяценой целораной целосной целосной целоани помощью ипрца с помощью ипкцани сомощью искцани сомощью искщьюцааааааа (D0 и mD, d12 mc) | и D12 MT) с иных ориных о овекдеен ыхти со по ио о о о о о со со со со со со со со со со равне нию с D12 Ctrl) | କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧିମତା (n = 7 (D0 ଏବଂ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ଏବଂ D12 MT) ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ ବ୍ୟବହାର କରି ହୃଦୟ ଟିସୁର ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାର ପରିମାଣ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା କରାଯାଇଥିଲା; D0 Ctrl ତୁଳନାରେ #### p <0.0001)对 不同 猪 心脏 组织 结构 完整性 = n = 7 （D0 和 D12 Ctrl） 、 5 （D12 TD 、 D12 MC 和 D12 MT） 切片 / 组 进行 人工智能 人工智能 量化 单向 ANOVA 测试 ； #### p <0.0001 与 D0 和相比）。对 不同 猪 心脏 结构 完整性 = n = 7 （d0 和 d12 ctrl） （5 （d12 td 、 d12 mc 和 d12 mt） 组） 量 # # # # # # # # # # # # Ctrl 相比）。ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରି (n = 7 (D0 ଏବଂ D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC ଏବଂ D12 MT) ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ) ରେ କୃତ୍ରିମ ବୁଦ୍ଧି ବ୍ୟବହାର କରି ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତାର ପରିମାଣ ଏକପାଖିଆ ANOVA ପରୀକ୍ଷା ସହିତ |#### p <0,0001 по сравнению с D0 и * p <0,05 или **** p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl) | D0 Ctrl ତୁଳନାରେ #### p <0.0001 ଏବଂ * p <0.05 କିମ୍ବା **** p <0.0001) ତୁଳନାରେ | ବି ଶିକ୍ଷାର୍ଥୀ ଚିତ୍ର ଏବଂ ଇସଲର ଟ୍ରିଚ୍ରୋମ୍ ଦାଗ (D0, AWARVA ପରୀକ୍ଷା) (n = 10 (d0) d0 ଏବଂ *** p <0.0001 କମ୍ପନ ସହିତ କରାଯାଇଛି; #### d12 Ctrl) ବି ଶିକ୍ଷାର୍ଥୀ ଚିତ୍ର ଏବଂ ଇସଲର ଟ୍ରିଚ୍ରୋମ୍ ଦାଗ (D0, AWARVA ପରୀକ୍ଷା) (n = 10 (d0) d0 ଏବଂ *** p <0.0001 କମ୍ପନ ସହିତ କରାଯାଇଛି; #### d12 Ctrl) b Репрезент киные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромным красителем Мас ана (чинная серейка = 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MC) я односторонний тест ANOVA; #### p <0,0001 по сравнению с D0 и *** p <0,001 или **** p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl) | b ମାସନ୍ଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ୍ ଦାଗ (ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MC), 9 (D12 MT) ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀର ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିତ୍ର ଏବଂ ହୃଦୟ ବିଭାଗର ପରିମାଣ, ଏକପାଖିଆ ANOVA ପ୍ରଦର୍ଶନ କଲା; #### p <0.0001 ବନାମ D0 ଏବଂ *** p <0.001 କିମ୍ବା **** b 用 Masson 三 色 染料 染色 500 500 500 500 = 500 µm） （n = 10 （D0 、 D12 Ctrl 、 D12 TD 和 D12 MC） 来自 不同 猪 个 个 12 12 组 组 组 组 组， *** p <0.001 ， 或 **** p <0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。 b 用 masson 三 色 染料 的 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500 500组 ， 进行 # # # #### p <0.0001 与 D0 相比 ， *** p <0.001 ， 或 **** p <0.0001 与 D12 Ctrl 相比）。 b Репрезент киные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромом Мас агаа (чинная чейейка = 500 мкм) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MC), 9 (D12 MT р) ## p <0,0001 по сравнению с D0, *** p <0,001 или **** p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl) | b ମାସନ୍ଙ୍କ ଟ୍ରାଇକ୍ରୋମ୍ (ସ୍କେଲ୍ ବାର୍ = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD ଏବଂ D12 MC), ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରି / ଗୋଷ୍ଠୀରୁ 9 (D12 MT) ବିଭାଗ, ଗୋଟିଏ ANOVA ପଦ୍ଧତି;ତ୍ରୁଟି ଦଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ହାରାହାରି ± ମାନକ ବିଘ୍ନକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ |
ଶେଷରେ, ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଉଚ୍ଚ ରକ୍ତଚାପକୁ ଅନୁକରଣ କରିବା ପାଇଁ CTCM ର କ୍ଷମତାକୁ ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଟିସୁ ବିସ୍ତାର ଦ୍ୱାରା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା |CTCM ରେ, ଶିଖର ବାୟୁ ଚାମ୍ବର ଚାପ 80 mmHg ରୁ 80 mmHg କୁ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା |କଳା(ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍) 140 mmHg ଆର୍ଟ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ |(ଚିତ୍ର 6a)ଏହା ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ର 32% ବୃଦ୍ଧି ସହିତ ଅନୁରୂପ ଅଟେ (ଚିତ୍ର 6 ବି), ଯାହା ପୂର୍ବରୁ ହାଇପର୍ଟ୍ରୋଫିରେ ଦେଖାଯାଇଥିବା ପରି ସାର୍କୋମେର ଲମ୍ବ ହାସଲ କରିବା ପାଇଁ ହୃଦୟ ବିଭାଗ ପାଇଁ ଆବଶ୍ୟକ ଅନୁରୂପ ଶତକଡା ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଭାବରେ ଦର୍ଶାଯାଇଥିଲା |ସଂକୋଚନ ଏବଂ ଆରାମ ସମୟରେ ହୃଦ୍‌ରୋଗର ପ୍ରସାର ଏବଂ ବେଗ ସଂସ୍କୃତିର ଛଅ ଦିନ ମଧ୍ୟରେ ସ୍ଥିର ରହିଲା (ଚିତ୍ର 6c) |MT ଅବସ୍ଥାରୁ କାର୍ଡିଆକ୍ ଟିସୁ ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (MT (ସାଧାରଣ)) କିମ୍ବା ଓଭରଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଅବସ୍ଥା (MT (OS)) ଅଧୀନରେ ରହିଲା |ସଂସ୍କୃତିରେ ଚାରି ଦିନ ପରେ, ହାଇପରଟ୍ରୋଫିକ୍ ବାୟୋମାର୍କର NT-ProBNP MT (OS) ଅବସ୍ଥାରେ MT (ସାଧାରଣ) ଅବସ୍ଥା (ଚିତ୍ର 7a) ତୁଳନାରେ ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା |ଏଥିସହ, ଛଅ ଦିନର ସଂସ୍କୃତି ପରେ, MT ହୃଦୟର (ସାଧାରଣ) ବିଭାଗ ତୁଳନାରେ MT (OS) (ଚିତ୍ର 7 ବି) ରେ କୋଷର ଆକାର ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା |ଏଥିସହ, NFATC4 ଆଣବିକ ଟ୍ରାନ୍ସକୋଲେସନ୍ ଅତ୍ୟଧିକ ବିସ୍ତାରିତ ଟିସୁରେ ଯଥେଷ୍ଟ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଲା (ଚିତ୍ର 7c) |ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ଉଚ୍ଚ ରକ୍ତଚାପ ପରେ ପାଥୋଲୋଜିକାଲ୍ ରିମୋଡେଲିଂର ପ୍ରଗତିଶୀଳ ବିକାଶକୁ ଦର୍ଶାଏ ଏବଂ ଏହି ଧାରଣାକୁ ସମର୍ଥନ କରେ ଯେ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍-ପ୍ରେରିତ କାର୍ଡିଆକ୍ ହାଇପର୍ଟ୍ରୋଫି ସିଗନାଲ୍ ଅଧ୍ୟୟନ ପାଇଁ CTCM ଉପକରଣକୁ ଏକ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇପାରିବ |
ବାୟୁ ଚାମ୍ବର ଚାପ, ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ଚାମ୍ବର ଚାପ, ଏବଂ ଟିସୁ ଗତି ମାପର ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିହ୍ନଗୁଡିକ ନିଶ୍ଚିତ କରେ ଯେ ଚାମ୍ବର ଚାପ ତରଳ ଚାମ୍ବର ଚାପକୁ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିଥାଏ, ଯାହାଦ୍ୱାରା ଟିସୁ ସ୍ଲାଇସର ଅନୁରୂପ ଗତି ହୋଇଥାଏ |b ସାଧାରଣତ stret ପ୍ରସାରିତ (କମଳା) ଏବଂ ଅତ୍ୟଧିକ ବିସ୍ତାରିତ (ନୀଳ) ଟିସୁ ବିଭାଗ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧୀ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଶତକଡା ଏବଂ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ରେଟ୍ ବକ୍ରଗୁଡିକ |c ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ଚକ୍ର ସମୟ (n = 19 ସ୍ଲାଇସ୍, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ), ସଂକୋଚନ ସମୟ (ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ ଗୋଷ୍ଠୀ ପ୍ରତି n = 18-19 ସ୍ଲାଇସ୍), ଆରାମ ସମୟ (ଗୋଷ୍ଠୀ ପ୍ରତି n = 19 ଖଣ୍ଡ, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ), ଟିସୁ ଗତିର ପ୍ରଶସ୍ତତା (n = 14 ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗୋଷ୍ଠୀ, ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀ) (n = 14 ଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀ) ) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ ବିଭାଗ / ଗୋଷ୍ଠୀ), ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜର ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି-ଟେଷ୍ଟ କ any ଣସି ପାରାମିଟରରେ କ significant ଣସି ବିଶେଷ ପାର୍ଥକ୍ୟ ଦେଖାଇଲା ନାହିଁ, ସୂଚାଇଥାଏ ଯେ ଏହି ପାରାମିଟରଗୁଡିକ 6 ଦିନର ସଂସ୍କୃତିରେ ଓଭରଭୋଲଟେଜ୍ ସହିତ ସ୍ଥିର ରହିଲା |ତ୍ରୁଟି ଦଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ହାରାହାରି ± ମାନକ ବିଘ୍ନକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ |
MT ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (ନର୍ମ) କିମ୍ବା ଓଭରଷ୍ଟ୍ରେଚିଂ (OS) ଅବସ୍ଥାରେ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ଏବଂ D4 MTOS) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗୋଷ୍ଠୀ ସଂସ୍କୃତି ସଂସ୍କୃତିରେ NT-ProBNP ଏକାଗ୍ରତାର ଏକ ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ପରିମାଣ, ସାଧାରଣ ଘୁଷୁରୀ ତୁଳନାରେ ** p <0.01; MT ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (ନର୍ମ) କିମ୍ବା ଓଭରଷ୍ଟ୍ରେଚିଂ (OS) ଅବସ୍ଥାରେ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ଏବଂ D4 MTOS) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗୋଷ୍ଠୀ ସଂସ୍କୃତି ସଂସ୍କୃତିରେ NT-ProBNP ଏକାଗ୍ରତାର ଏକ ବାର୍ ଗ୍ରାଫ୍ ପରିମାଣ, ସାଧାରଣ ଘୁଷୁରୀ ତୁଳନାରେ ** p <0.01;ସାଧାରଣ MT ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (ଆଦର୍ଶ) କିମ୍ବା ଓଭରଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, ଏବଂ D4) .MTOS) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗୋଷ୍ଠୀ ସଂସ୍କୃତି ସଂସ୍କୃତିରେ NT-ProBNP ଏକାଗ୍ରତାର ପରିମାଣିକ ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମ୍ |** p <0,01 по сравнению с кәканным раст адененем) ** p <0.01 ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ତୁଳନାରେ) | a 在 MT 正常 Norm (ସାଧାରଣ) 或 过度 OS (OS) 条件 下 培养 中 中 中 NT-ProBNP 浓度 的 条形图 （n = 4 (D2 MTNorm) 、 3 （D2 MTOS 、 D4 MTNorm 和 4 ； ； ； ； ； ； ； p <0.01）。 MT ସ୍ normal ାଭାବିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (ନର୍ମ) କିମ୍ବା ଓଭରଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (OS) ଅବସ୍ଥାରେ (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm 和 D4 MTOS) ଠାରୁ ଭିନ୍ନ 猪 的 切片 / 组 ， 可以 双向 p 发ହିଷ୍ଟୋଗ୍ରାମ୍ ସାଧାରଣ MT ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (ନର୍ମା) କିମ୍ବା ଓଭରଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) ଏବଂ D4 MTOS) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗୋଷ୍ଠୀର ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସରେ NT-ProBNP ଏକାଗ୍ରତାର ପରିମାଣ, ଭିନ୍ନ ଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀର ବିଶ୍ଳେଷଣ;** p <0,01 по сравнению с кәканным раст адененем) ** p <0.01 ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ତୁଳନାରେ) | b ଟ୍ରପୋନିନ୍-ଟି ଏବଂ ଡବ୍ଲୁଜିଏ (ବାମ) ଏବଂ କୋଷ ଆକାର ପରିମାଣ (ଡାହାଣ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) କୋଷ / ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ 10 ଟି ବିଭିନ୍ନ ସ୍ଲାଇସ୍, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜର ଛାତ୍ର ଟି-ଟେଷ୍ଟ କରାଯାଏ; ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ତୁଳନାରେ **** p <0.0001) | b ଟ୍ରପୋନିନ୍-ଟି ଏବଂ ଡବ୍ଲୁଜିଏ (ବାମ) ଏବଂ କୋଷ ଆକାର ପରିମାଣ (ଡାହାଣ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) କୋଷ / ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀରୁ 10 ଟି ବିଭିନ୍ନ ସ୍ଲାଇସ୍, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜର ଛାତ୍ର ଟି-ଟେଷ୍ଟ କରାଯାଏ; ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ତୁଳନାରେ **** p <0.0001) | b Репрезент киные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) һәм количественного определения размера клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 водится хвостовой т-критерий Стьюдента; **** p <0,0001 по сравнению с чанныны раст ченением)। b ଟ୍ରପୋନିନ୍-ଟି ଏବଂ AZP (ବାମ) ଏବଂ ସେଲ୍ ଆକାର ପରିମାଣ (ଡାହାଣ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) କୋଷ / ଗୋଷ୍ଠୀ ସହିତ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିର 10 ଟି ବିଭାଗରୁ ଦାଗଯୁକ୍ତ ହୃଦୟ ବିଭାଗର ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିତ୍ର କରାଯାଇଥିଲା, ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ତୁଳନାରେ **** p <0.0001) | b 用 肌钙蛋白 -T 和 WGA （左） = = = = = 330 （D6 MTOS） ， 不同 9 的 10 个 6 的 6 6 6 ， ， ** p <0.0001）。 b କାଲକେରିନ୍-ଟି ଏବଂ ଡବ୍ଲୁଜିଏ (ବାମ) ଏବଂ କୋଷ ଆକାର (ଡାହାଣ) (n = 330 (D6 MTOS)), 10 ଟି ବିଭିନ୍ନ ସ୍ଲାଇସ୍ (D6 MTNorm) ରୁ 369 ହୃତପିଣ୍ଡ ସ୍ଲାଇସର ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିତ୍ର ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେଚିଂ ତୁଳନାରେ ， **** p <0.0001) | b Репрезент киные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) һәм количественная оценка размера клеток (справа) (n = 330 (D6 MTOS), 369 ни критерий Стьюдента; **** p <0,0001 по сравнению с канныным раст ченением)। b ଟ୍ରପୋନିନ୍-ଟି ଏବଂ AZP (ବାମ) ଏବଂ ସେଲ୍ ଆକାରର ପରିମାଣ (ଡାହାଣ) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରୀର 10 ଟି ବିଭାଗରୁ କକ୍ଷ / ଗୋଷ୍ଠୀ, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜ ମାନଦଣ୍ଡ ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି;**** p <0.0001 ସାଧାରଣ ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ତୁଳନାରେ) | c ଦିନ 0 ଏବଂ ଦିନ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧୀ ପ୍ରତିଛବିଗୁଡିକ ଟ୍ରପୋନିନ୍-ଟି ଏବଂ NFATC4 ପାଇଁ ଇମ୍ୟୁନୋଲାବେଲଡ୍ ଏବଂ NFATC4 ର ଟ୍ରାନ୍ସକୋଲେସନ୍ ର CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗ୍ରୁପ୍ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରି, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜର ଛାତ୍ର ଟି-ଟେଷ୍ଟ) କରାଯାଏ; c ଦିନ 0 ଏବଂ ଦିନ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧୀ ପ୍ରତିଛବିଗୁଡିକ ଟ୍ରପୋନିନ୍-ଟି ଏବଂ NFATC4 ପାଇଁ ଇମ୍ୟୁନୋଲାବେଲଡ୍ ଏବଂ NFATC4 ର ଟ୍ରାନ୍ସକୋଲେସନ୍ ର CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗ୍ରୁପ୍ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରି, ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜର ଛାତ୍ର ଟି-ଟେଷ୍ଟ) କରାଯାଏ; c Репрезент кәннее изображения для срезов сердца 0 и 6 дней MTOS, им эсомомеченых для тропонина-Т и NFATC4, и количественная оценка кинлоккации NFATC4 в ядра кавернозных клеток (n = 4) выполняется дву саронний t-критерий Стьюдента; * p <0,05) c 0 ଏବଂ 6 ଦିନରେ ହୃଦୟ ବିଭାଗ ପାଇଁ ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିତ୍ର MTOS, ଟ୍ରପୋନିନ୍-ଟି ଏବଂ NFATC4 ପାଇଁ ପ୍ରତିରୋପଣ, ଏବଂ ଗୁମ୍ଫା କୋଷଗୁଡ଼ିକର ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟସରେ NFATC4 ଟ୍ରାନ୍ସକୋଲେସନ୍ ପରିମାଣ (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗୋଷ୍ଠୀ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିର ଟି-ଟେଷ୍ଟ୍ କରିଥିଲେ;* p <0.05) | c 用于 肌钙蛋白 -T 和 NFATC4 免疫 标记 的 天和 0 天和 第 6 天 MTOS 心脏 切片 的 的 的 NFATC4 易位 至 CM 细胞核 的 （n = 4 (D0) 、 3 (D6 MTOS) 切片 / 组, 学生 t 0.05 c କାଲକାନିନ୍-ଟି ଏବଂ NFATC4 ଇମ୍ୟୁନୋଲାବେଲିଂର ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିତ୍ର 第 0 天和 第 6 天 MTOS ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସ୍, ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ NFATC4 易位 至 CM ସେଲ୍ ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟସ୍ 的 ପରିମାଣ NF (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) 切 礼 / 组, 时间 双 学生 学生) c Репрезент киные изображения срезов сердца MTOS на 0 и 6 день для им асомаркировки тропонином-Т и NFATC4 и количественная осенка чилоккации NFATC4 в ядра CM от разных свей (n = 4) ерий Стьюдента; * p <0,05) | c ଟ୍ରୋପୋନିନ୍-ଟି ଏବଂ NFATC4 ଇମ୍ୟୁନୋଲାବେଲିଂ ଏବଂ ବିଭିନ୍ନ ଘୁଷୁରିରୁ CM ର ନ୍ୟୁକ୍ଲିୟସରେ NFATC4 ଟ୍ରାନ୍ସକୋଲେସନ୍ ପାଇଁ MTOS ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସର ପ୍ରତିନିଧୀ ଚିତ୍ର (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) ସ୍ଲାଇସ୍ / ଗ୍ରୁପ୍, ଦୁଇ ଲାଞ୍ଜ ବିଶିଷ୍ଟ ଟି-କ୍ରାଇଟେରିଅନ୍ ଛାତ୍ର * * p <0.05);ତ୍ରୁଟି ଦଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକ ଅର୍ଥ ± ମାନକ ବିଘ୍ନକୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ୱ କରେ |
ଆଞ୍ଚଳିକ ହୃଦ୍‌ରୋଗକୁ ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିବା ପାଇଁ ସେଲୁଲାର୍ ମଡେଲ୍ ଆବଶ୍ୟକ ଯାହାକି ହୃଦ୍ ପରିବେଶକୁ ସଠିକ୍ ଭାବରେ ପୁନ oduc ପ୍ରକାଶିତ କରେ |ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ, ଏକ CTCM ଉପକରଣ ବିକଶିତ ଏବଂ ବର୍ଣ୍ଣିତ ହୋଇଥିଲା ଯାହା ହୃଦୟର ଅଲଟ୍ରାଥିନ ବିଭାଗକୁ ଉତ୍ସାହିତ କରିପାରିବ |CTCM ସିଷ୍ଟମରେ ଫିଜୋଲୋଜିକାଲ୍ ସିଙ୍କ୍ରୋନାଇଜଡ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋମେକାନିକାଲ୍ ଉତ୍ତେଜନା ଏବଂ T3 ଏବଂ ଡେକ୍ସ ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ସମୃଦ୍ଧତା ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ |ଯେତେବେଳେ ପର୍ସିନ୍ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡିକ ଏହି କାରଣଗୁଡିକର ସମ୍ମୁଖୀନ ହୋଇଥିଲେ, ସେମାନଙ୍କର କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା, ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତା, ମେଟାବୋଲିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ, ଏବଂ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି 12 ଦିନର ସଂସ୍କୃତି ପରେ ତାଜା ହୃଦୟ ଟିସୁ ପରି ସମାନ ରହିଲା |ଏଥିସହ, ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଅତ୍ୟଧିକ ପ୍ରସାରିତ ହେବା ଦ୍ୱାରା ହାଇପରଟେକ୍ସନ୍ ଦ୍ୱାରା ହୃଦୟର ହାଇପରଟ୍ରୋଫି ହୋଇପାରେ |ସାମଗ୍ରିକ ଭାବରେ, ଏହି ଫଳାଫଳଗୁଡିକ ସାଧାରଣ କାର୍ଡିଆକ୍ ଫେନୋଟାଇପ୍ ବଜାୟ ରଖିବାରେ ଶାରୀରିକ ସଂସ୍କୃତି ସ୍ଥିତିର ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକାକୁ ସମର୍ଥନ କରେ ଏବଂ ଡ୍ରଗ୍ ସ୍କ୍ରିନିଂ ପାଇଁ ଏକ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ ପ୍ରଦାନ କରେ |
କାର୍ଡିଓମାଇସାଇଟ୍ସର କାର୍ଯ୍ୟ ଏବଂ ବଞ୍ଚିବା ପାଇଁ ଏକ ଉତ୍କୃଷ୍ଟ ପରିବେଶ ସୃଷ୍ଟି କରିବାରେ ଅନେକ କାରଣ ସହାୟକ ହୁଏ |ଏହି କାରଣଗୁଡିକ ମଧ୍ୟରୁ ସବୁଠାରୁ ସ୍ପଷ୍ଟ ହେଉଛି (1) ଆନ୍ତ inter ସେଲ୍ୟୁଲାର୍ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା, (2) ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋମେକାନିକାଲ୍ ଉତ୍ତେଜନା, (3) ହାସ୍ୟରସ କାରଣ ଏବଂ (4) ମେଟାବୋଲିକ୍ ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ |ଫିଜିଓଲୋଜିକାଲ୍ ସେଲ୍-ଟୁ-ସେଲ୍ ଇଣ୍ଟରାକେସନ୍ ଏକ ଏକ୍ସଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ମ୍ୟାଟ୍ରିକ୍ସ ଦ୍ୱାରା ସମର୍ଥିତ ଏକାଧିକ ସେଲ୍ ପ୍ରକାରର ଜଟିଳ ତ୍ରି-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ନେଟୱାର୍କ ଆବଶ୍ୟକ କରେ |ବ୍ୟକ୍ତିଗତ କୋଷ ପ୍ରକାରର ସହ-ସଂସ୍କୃତି ଦ୍ୱାରା ଭିଟ୍ରୋରେ ପୁନ complex ନିର୍ମାଣ କରିବା ଏହିପରି ଜଟିଳ ସେଲୁଲାର୍ ପାରସ୍ପରିକ କ୍ରିୟା କଷ୍ଟକର, କିନ୍ତୁ ହୃଦୟ ବିଭାଗର ଅର୍ଗାନୋଟାଇପିକ୍ ପ୍ରକୃତି ବ୍ୟବହାର କରି ସହଜରେ ହାସଲ କରାଯାଇପାରେ |
ହୃଦ୍‌ରୋଗ ଫେନୋଟାଇପ୍ 33,34,35 ରକ୍ଷଣାବେକ୍ଷଣ ପାଇଁ କାର୍ଡିଓମାଇସାଇଟ୍ସର ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଏବଂ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |HiPSC-CM କଣ୍ଡିସନର ଏବଂ ପରିପକ୍ .ତା ପାଇଁ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା ବହୁଳ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିବାବେଳେ, ଅନେକ ଚମତ୍କାର ଅଧ୍ୟୟନ ୟୁନିଅକ୍ସିଆଲ୍ ଲୋଡିଂ ବ୍ୟବହାର କରି ସଂସ୍କୃତିରେ ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସର ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା ପାଇଁ ଚେଷ୍ଟା କରିଛି |ଏହି ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡିକ ଦର୍ଶାଏ ଯେ 2D ୟୁନିଅକ୍ସିଆଲ୍ ମେକାନିକାଲ୍ ଲୋଡିଂ ସଂସ୍କୃତି ସମୟରେ ହୃଦୟର ଫେନୋଟାଇପ୍ ଉପରେ ଏକ ସକରାତ୍ମକ ପ୍ରଭାବ ପକାଇଥାଏ |ଏହି ଅଧ୍ୟୟନଗୁଡ଼ିକରେ, ହୃତପିଣ୍ଡର ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକ ଆଇସୋମେଟ୍ରିକ୍ ଟେନସାଇଲ୍ ଫୋର୍ସ 17, ର line ଖ୍ୟ ଆକ୍ସୋଟୋନିକ୍ ଲୋଡିଂ 18 ସହିତ ଧାରଣ କରାଯାଇଥିଲା, କିମ୍ବା ଫୋର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସଡୁସର ଫିଡବ୍ୟାକ୍ ଏବଂ ଟେନ୍ସନ୍ ଡ୍ରାଇଭ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ହୃଦ୍ ଚକ୍ର ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା |ଅବଶ୍ୟ, ଏହି ପଦ୍ଧତିଗୁଡିକ ପରିବେଶ ଅପ୍ଟିମାଇଜେସନ୍ ବିନା ୟୁନିଅକ୍ସିଆଲ୍ ଟିସୁ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ବ୍ୟବହାର କରନ୍ତି, ଫଳସ୍ୱରୂପ ଅନେକ ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଦମନ କିମ୍ବା ଅସ୍ୱାଭାବିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସହିତ ଜଡିତ ଜିନ୍ଗୁଡ଼ିକର ଅତ୍ୟଧିକ ସଙ୍କୋଚନ |ଏଠାରେ ବର୍ଣ୍ଣିତ CTCM ଏକ 3D ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋମେକାନିକାଲ୍ ଉତ୍ସାହ ପ୍ରଦାନ କରେ ଯାହା ଚକ୍ର ସମୟ ଏବଂ ଶାରୀରିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (25% ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍, 40% ସିଷ୍ଟୋଲ୍, 60% ଡାଇଷ୍ଟୋଲ୍ ଏବଂ ମିନିଟ୍ରେ 72 ବିଟ୍) ଦୃଷ୍ଟିରୁ ପ୍ରାକୃତିକ ହୃଦ୍ ଚକ୍ରକୁ ଅନୁକରଣ କରିଥାଏ |ଯଦିଓ ଏହି ତ୍ରି-ଆଂଶିକ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା କେବଳ ଟିସୁ ଅଖଣ୍ଡତା ବଜାୟ ରଖିବା ପାଇଁ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ନୁହେଁ, ଟିସୁ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା, କାର୍ଯ୍ୟ, ଏବଂ ଅଖଣ୍ଡତାକୁ ଯଥେଷ୍ଟ ବଜାୟ ରଖିବା ପାଇଁ T3 / Dex ବ୍ୟବହାର କରି ହାସ୍ୟରସ ଏବଂ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ସାହର ଏକ ମିଶ୍ରଣ ଆବଶ୍ୟକ |
ବୟସ୍କ ହୃଦୟ ଫେନୋଟାଇପ୍ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରିବାରେ ହାସ୍ୟରସ କାରକ ଏକ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ଭୂମିକା ଗ୍ରହଣ କରିଥାଏ |HiPS-CM ଅଧ୍ୟୟନରେ ଏହା ହାଇଲାଇଟ୍ କରାଯାଇଥିଲା ଯେଉଁଥିରେ T3 ଏବଂ Dex କୋଷ ପରିପକ୍ୱତାକୁ ତ୍ୱରାନ୍ୱିତ କରିବା ପାଇଁ ସଂସ୍କୃତି ମିଡିଆରେ ଯୋଗ କରାଯାଇଥିଲା |T3 କୋଷ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ଉପରେ ଆମିନୋ ଏସିଡ୍, ଶର୍କରା ଏବଂ କ୍ୟାଲସିୟମ୍ ପରିବହନକୁ ପ୍ରଭାବିତ କରିପାରେ |ଏଥିସହ, T3 MHC-α ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ଏବଂ MHC-β ନିୟନ୍ତ୍ରଣକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ, ଭ୍ରୁଣ CM ରେ ଧୀର ଟ୍ୱିଚ୍ ମାୟୋଫିବ୍ରିଲ୍ ତୁଳନାରେ ପରିପକ୍ୱ କାର୍ଡିଓମାଇସାଇଟ୍ସରେ ଦ୍ରୁତ ଟ୍ୱିଚ୍ ମାଇଫିବ୍ରିଲ୍ ଗଠନକୁ ପ୍ରୋତ୍ସାହିତ କରେ |ହାଇପୋଥାଇରଏଡ ରୋଗୀଙ୍କ T3 ଅଭାବରୁ ମାଇଫିବ୍ରିଲାର ବ୍ୟାଣ୍ଡ ନଷ୍ଟ ହୋଇଯାଏ ଏବଂ ସ୍ୱର ବିକାଶର ହାର କମିଯାଏ |ଡେକ୍ସ ଗ୍ଲୁକୋକୋର୍ଟିକଏଡ ରିସେପ୍ଟର ଉପରେ କାର୍ଯ୍ୟ କରେ ଏବଂ ପୃଥକ ସୁଗନ୍ଧିତ ହୃଦୟରେ ମାୟୋକାର୍ଡିଆଲ୍ ଚୁକ୍ତିନାମା ବୃଦ୍ଧି କରିବାକୁ ଦର୍ଶାଯାଇଛି;38 ଏହି ଉନ୍ନତି କ୍ୟାଲସିୟମ ଜମା ଚାଳିତ ପ୍ରବେଶ (SOCE) 39,40 ଉପରେ ପ୍ରଭାବ ସହିତ ଜଡିତ ବୋଲି ଚିନ୍ତା କରାଯାଏ |ଏହା ସହିତ, ଡେକ୍ସ ଏହାର ରିସେପ୍ଟର ସହିତ ବାନ୍ଧେ, ଏକ ବ୍ୟାପକ ଇଣ୍ଟ୍ରାସେଲୁଲାର୍ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ସୃଷ୍ଟି କରେ ଯାହା ପ୍ରତିରକ୍ଷା କାର୍ଯ୍ୟ ଏବଂ ପ୍ରଦାହକୁ ଦମନ କରିଥାଏ |
ଆମର ଫଳାଫଳ ସୂଚିତ କରେ ଯେ ଶାରୀରିକ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଉତ୍ତେଜନା (MS) Ctrl ତୁଳନାରେ ସାମଗ୍ରିକ ସଂସ୍କୃତି କାର୍ଯ୍ୟଦକ୍ଷତାକୁ ଉନ୍ନତ କରିଥିଲା, କିନ୍ତୁ ସଂସ୍କୃତିରେ 12 ଦିନ ମଧ୍ୟରେ କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା, ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତା ଏବଂ ହୃଦ୍‌ରୋଗ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ବଜାୟ ରଖିବାରେ ବିଫଳ ହୋଇଥିଲା |Ctrl ତୁଳନାରେ, CTCM (MT) ସଂସ୍କୃତିରେ T3 ଏବଂ ଡେକ୍ସର ଯୋଗ ଦ୍ୱାରା କାର୍ଯ୍ୟକ୍ଷମତା ଉନ୍ନତ ହେଲା ଏବଂ 12 ଦିନ ପାଇଁ ତାଜା ହୃଦୟ ଟିସୁ ସହିତ ସମାନ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରୋଫାଇଲ୍, ଗଠନମୂଳକ ଅଖଣ୍ଡତା ଏବଂ ମେଟାବୋଲିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ ବଜାୟ ରହିଲା |ଏହା ସହିତ, ଟିସୁ ଷ୍ଟ୍ରେଚର ଡିଗ୍ରୀକୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରି, STCM ସିଷ୍ଟମର ବହୁମୁଖୀତାକୁ ଦର୍ଶାଇ STCM ବ୍ୟବହାର କରି ଏକ ହାଇପରଟେକ୍ସନ୍-ପ୍ରେରିତ କାର୍ଡିଆକ୍ ହାଇପର୍ଟ୍ରୋଫି ମଡେଲ୍ ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା |ଏହା ମନେ ରଖିବା ଉଚିତ ଯେ ଯଦିଓ ହୃଦ୍‌ର ପୁନ od ନିର୍ମାଣ ଏବଂ ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ ସାଧାରଣତ int ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ଅଙ୍ଗ ସହିତ ଜଡିତ, ଯାହାର ସଞ୍ଚାରକାରୀ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ଉପଯୁକ୍ତ ସାଇଟୋକାଇନ୍ ପ୍ରଦାନ କରିବା ସହିତ ଫାଗୋସାଇଟିସ ଏବଂ ଅନ୍ୟାନ୍ୟ ପୁନ od ନିର୍ମାଣ କାରକ ମଧ୍ୟ ପ୍ରଦାନ କରିପାରନ୍ତି, ହୃଦୟର ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକ ଚାପ ଏବଂ ଆଘାତର ପ୍ରତିକ୍ରିୟାରେ ଫାଇବ୍ରୋଟିକ୍ ପ୍ରକ୍ରିୟାକୁ ଅନୁକରଣ କରିପାରନ୍ତି |ମାଇଫିବ୍ରୋବ୍ଲାଷ୍ଟରେ |ଏହା ପୂର୍ବରୁ ଏହି କାର୍ଡିଆକ୍ ସ୍ଲାଇସ୍ ମଡେଲରେ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଛି |ଏହା ମନେ ରଖିବା ଉଚିତ ଯେ ଚାପ / ବ electrical ଦୁତିକ ପ୍ରଶସ୍ତତା ଏବଂ ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି ପରିବର୍ତ୍ତନ କରି CTCM ପାରାମିଟରଗୁଡିକ ମଡ୍ୟୁଲେଟ୍ ହୋଇପାରିବ, ଯେପରିକି ଟାଚାଇକାର୍ଡିଆ, ବ୍ରାଡିକାର୍ଡିଆ, ଏବଂ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ରକ୍ତ ସଞ୍ଚାଳନ ସହାୟତା (ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଅନଲୋଡ୍ ହୃଦୟ) |Drug ଷଧ ପରୀକ୍ଷା ପାଇଁ ଏହା ସିଷ୍ଟମକୁ ଏକ ମଧ୍ୟମ ଥ୍ରୋପପୁଟ କରିଥାଏ |ଓଭରକ୍ସର୍ସନ୍-ପ୍ରେରିତ କାର୍ଡିଆକ୍ ହାଇପର୍ଟ୍ରୋଫି ମଡେଲ କରିବାର CTCM ର କ୍ଷମତା ବ୍ୟକ୍ତିଗତ ଥେରାପି ପାଇଁ ଏହି ସିଷ୍ଟମକୁ ପରୀକ୍ଷା କରିବା ପାଇଁ ବାଟ ଖୋଲିଥାଏ |ପରିଶେଷରେ, ବର୍ତ୍ତମାନର ଅଧ୍ୟୟନ ଦର୍ଶାଏ ଯେ ହୃଦ୍‌ରୋଗର ଟିସୁ ବିଭାଗର ସଂସ୍କୃତି ବଜାୟ ରଖିବା ପାଇଁ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଏବଂ ହାସ୍ୟରସ ଉତ୍ସାହ ଅତ୍ୟନ୍ତ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ |
ଯଦିଓ ଏଠାରେ ଉପସ୍ଥାପିତ ତଥ୍ୟ ସୂଚିତ କରେ ଯେ ଅକ୍ଷୁର୍ଣ୍ଣ ମାୟୋକାର୍ଡିଆମ୍ ମଡେଲିଂ ପାଇଁ CTCM ଏକ ଅତ୍ୟନ୍ତ ପ୍ରତିଜ୍ଞାକାରୀ ପ୍ଲାଟଫର୍ମ, ଏହି ସଂସ୍କୃତି ପଦ୍ଧତିର କିଛି ସୀମା ଅଛି |CTCM ସଂସ୍କୃତିର ମୁଖ୍ୟ ସୀମା ହେଉଛି ଏହା ସ୍ଲାଇସ୍ ଉପରେ କ୍ରମାଗତ ଗତିଶୀଳ ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଚାପ ଧାରଣ କରିଥାଏ, ଯାହା ପ୍ରତ୍ୟେକ ଚକ୍ରରେ ହୃଦ୍‌ର ସ୍ଲାଇସ୍ ସଂକୋଚନକୁ ସକ୍ରିୟ ଭାବରେ ନୀରିକ୍ଷଣ କରିବାର କ୍ଷମତାକୁ ରୋକିଥାଏ |ଏଥିସହ, ହୃଦ୍ ବିଭାଗର ଛୋଟ ଆକାର (7 ମିଲିମିଟର) ହେତୁ ପାରମ୍ପାରିକ ଫୋର୍ସ ସେନ୍ସର ବ୍ୟବହାର କରି ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରଣାଳୀ ବାହାରେ ସିଷ୍ଟୋଲିକ୍ କାର୍ଯ୍ୟର ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରିବାର କ୍ଷମତା ସୀମିତ ଅଟେ |ସାମ୍ପ୍ରତିକ ପାଣ୍ଡୁଲିପିରେ, ଆମେ ଚୁକ୍ତିଭିତ୍ତିକ କାର୍ଯ୍ୟର ସୂଚକ ଭାବରେ ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ଭୋଲଟେଜ୍ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରି ଏହି ସୀମିତତାକୁ ଆଂଶିକ ଅତିକ୍ରମ କରିଥାଉ |ଅବଶ୍ୟ, ଏହି ସୀମିତତା ପାଇଁ ଅଧିକ କାର୍ଯ୍ୟ ଆବଶ୍ୟକ ହେବ ଏବଂ ଭବିଷ୍ୟତରେ ହୃଦୟରେ ସ୍ଲାଇସର କାର୍ଯ୍ୟର ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ମନିଟରିଂ ପାଇଁ ପଦ୍ଧତି ପ୍ରବର୍ତ୍ତନ କରି ସମାଧାନ ହୋଇପାରିବ, ଯେପରିକି କ୍ୟାଲସିୟମ୍ ଏବଂ ଭୋଲଟେଜ୍ ସମ୍ବେଦନଶୀଳ ରଙ୍ଗ ବ୍ୟବହାର କରି ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ମ୍ୟାପିଙ୍ଗ୍ |CTCM ର ଅନ୍ୟ ଏକ ସୀମା ହେଉଛି କାର୍ଯ୍ୟରତ ମଡେଲ ଶାରୀରିକ ଚାପ (ପ୍ରିଲୋଡ୍ ଏବଂ ପରେଲୋଡ୍) କୁ ନିୟନ୍ତ୍ରଣ କରେ ନାହିଁ |CTCM ରେ, ଡାଇଷ୍ଟୋଲ୍ (ଫୁଲ୍ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍) ଏବଂ ସିଷ୍ଟୋଲ୍ (ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ସମୟରେ ସଂକୋଚନ ଲମ୍ବ) ରେ 25% ଶାରୀରିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ପୁନ repr ଉତ୍ପାଦନ ପାଇଁ ବିପରୀତ ଦିଗରେ ଚାପ ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା |ଭବିଷ୍ୟତରେ CTCM ଡିଜାଇନ୍ରେ ଉଭୟ ପାର୍ଶ୍ୱରୁ ହୃଦ୍‌ରୋଗ ଉପରେ ଯଥେଷ୍ଟ ଚାପ ଏବଂ ହୃଦୟର ଚାମ୍ବରରେ ଘଟୁଥିବା ସଠିକ୍ ଚାପ-ଭଲ୍ୟୁମ୍ ସମ୍ପର୍କକୁ ପ୍ରୟୋଗ କରି ଏହି ସୀମାକୁ ହଟାଇବା ଉଚିତ |
ଏହି ପାଣ୍ଡୁଲିପିରେ ରିପୋର୍ଟ ହୋଇଥିବା ଓଭରଷ୍ଟ୍ରେଚ୍-ପ୍ରେରିତ ରିମୋଡେଲିଂ ହାଇପରଟ୍ରୋଫିକ୍ ହାଇପରଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ସିଗ୍ନାଲ୍ ଅନୁକରଣରେ ସୀମିତ |ଏହିପରି, ଏହି ମଡେଲ୍ ହାସ୍ୟରସ କିମ୍ବା ସ୍ନାୟୁଗତ କାରଣଗୁଡ଼ିକର ଆବଶ୍ୟକତା ବିନା ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍-ପ୍ରେରିତ ହାଇପର୍ଟ୍ରୋଫିକ୍ ସିଗନାଲ୍ ଅଧ୍ୟୟନରେ ସାହାଯ୍ୟ କରିପାରିବ (ଯାହା ଏହି ସିଷ୍ଟମରେ ନାହିଁ) |CTCM ର ବହୁଗୁଣ ବୃଦ୍ଧି ପାଇଁ ଅଧିକ ଅଧ୍ୟୟନ ଆବଶ୍ୟକ, ଉଦାହରଣ ସ୍ୱରୂପ, ପ୍ରତିରକ୍ଷା କୋଷଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ସହ-ସଂସ୍କୃତି, ପ୍ଲାଜମା ହ୍ୟୁମରାଲ୍ ଫ୍ୟାକ୍ଟର୍, ଏବଂ ସ୍ନାୟୁଗତ କୋଷଗୁଡ଼ିକ ସହିତ ସହ-ସଂସ୍କୃତି CTCM ସହିତ ରୋଗ ମଡେଲିଂର ସମ୍ଭାବନାକୁ ଉନ୍ନତ କରିବ |
ଏହି ଅଧ୍ୟୟନରେ ତେରଟି ଘୁଷୁରି ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା |ସମସ୍ତ ପଶୁ ପ୍ରଣାଳୀ ଅନୁଷ୍ଠାନିକ ନିର୍ଦ୍ଦେଶାବଳୀ ଅନୁଯାୟୀ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଲୁଇସଭିଲ୍ ବିଶ୍ୱବିଦ୍ୟାଳୟର ଅନୁଷ୍ଠାନିକ ପଶୁ ଚିକିତ୍ସା ଏବଂ ବ୍ୟବହାର କମିଟି ଦ୍ୱାରା ଅନୁମୋଦିତ ହୋଇଥିଲା |ଆର୍ଟିକ୍ ଆର୍ଚକୁ ଚାପି ଦିଆଯାଇଥିଲା ଏବଂ ହୃଦୟକୁ 1 L ଷ୍ଟେରାଇଲ୍ କାର୍ଡିଓପ୍ଲେଗିଆ (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U / mL heparin, pH 7.4 ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ) ସୁଗନ୍ଧିତ କରାଯାଇଥିଲା; ବରଫ-ଥଣ୍ଡା ହୃଦ୍‌ରୋଗରେ ହୃଦୟକୁ ବରଫ ଉପରେ ଲ୍ୟାବକୁ ପଠାଯିବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସଂରକ୍ଷିତ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ସାଧାରଣତ << 10 ମିନିଟ୍ | ବରଫ-ଥଣ୍ଡା ହୃଦ୍‌ରୋଗରେ ହୃଦୟକୁ ବରଫ ଉପରେ ଲ୍ୟାବକୁ ପଠାଯିବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ସଂରକ୍ଷିତ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହା ସାଧାରଣତ << 10 ମିନିଟ୍ | сердца хранили в ледяном кардиоп огиическом растворе до сировировки в лабораторию на льду, что обикно занимает <10 ମିନି। ବରଫ ଉପରେ ଲାବୋରେଟୋରୀକୁ ପରିବହନ ନହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ହୃଦୟ ବରଫ-ଥଣ୍ଡା କାର୍ଡିଓପ୍ଲେଜିକ୍ ସମାଧାନରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇଥିଲା, ଯାହା ସାଧାରଣତ <<10 ମିନିଟ୍ ନେଇଥାଏ |10 心脏 保存 10 10 10 10 10 10 10 10 1010 心脏 保存 10 10 10 10 10 10 10 10 10 Держите сердца в ледяной кардиоп огии до аировировки в лаборатораторю на льду, обикно <10 ମିନି। ବରଫ ଉପରେ ଲାବୋରେଟୋରୀକୁ ପରିବହନ ନହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ହୃଦୟକୁ ବରଫ କାର୍ଡିଓପ୍ଲେଗିଆରେ ରଖନ୍ତୁ, ସାଧାରଣତ <<10 ମିନିଟ୍ |
ସଲିଡ୍ ୱର୍କସ୍ କମ୍ପ୍ୟୁଟର ସହାୟକ ଡିଜାଇନ୍ (CAD) ସଫ୍ଟୱେର୍ରେ CTCM ଉପକରଣ ବିକଶିତ ହୋଇଥିଲା |ସଂସ୍କୃତି ଚାମ୍ବର, ଡିଭାଇଡର୍ ଏବଂ ଏୟାର ଚାମ୍ବରଗୁଡିକ CNC ସ୍ୱଚ୍ଛ ଆକ୍ରିଲିକ୍ ପ୍ଲାଷ୍ଟିକରେ ନିର୍ମିତ |7 ମିମି ବ୍ୟାସ ବ୍ୟାକ୍ ଅପ୍ ରିଙ୍ଗ କେନ୍ଦ୍ରରେ ଉଚ୍ଚ ସାନ୍ଦ୍ରତା ପଲିଥିନ (HDPE) ରେ ନିର୍ମିତ ଏବଂ ଏହାର ମିଡିଆକୁ ସିଲ୍ କରିବା ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ସିଲିକନ୍ ଓ-ରିଙ୍ଗକୁ ସ୍ଥାନିତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ଓ-ରିଙ୍ଗ ଖୋଲା ଅଛି |ଏକ ପତଳା ସିଲିକା ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ସଂସ୍କୃତି ଚାମ୍ବରକୁ ପୃଥକ ପ୍ଲେଟରୁ ଅଲଗା କରିଥାଏ |ସିଲିକନ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ହେଉଛି 0.02 ″ ମୋଟା ସିଲିକନ୍ ସିଟ୍ ରୁ ଲେଜର କଟା ଏବଂ ଏହାର କଠିନତା 35A |ତଳ ଏବଂ ଉପର ସିଲିକନ୍ ଗ୍ୟାସ୍କେଟ୍ ଗୁଡିକ 1/16 ″ ମୋଟା ସିଲିକନ୍ ସିଟ୍ ରୁ ଲେଜର କଟା ଏବଂ 50A ର କଠିନତା |316L ଷ୍ଟେନଲେସ୍ ଷ୍ଟିଲ୍ ସ୍କ୍ରୁ ଏବଂ ୱିଙ୍ଗ୍ ବାଦାମ ବ୍ଲକ୍ ବାନ୍ଧିବା ଏବଂ ଏକ ଏୟାରଟାଇଟ୍ ସିଲ୍ ତିଆରି ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୁଏ |
ଏକ ଉତ୍ସର୍ଗୀକୃତ ମୁଦ୍ରିତ ସର୍କିଟ୍ ବୋର୍ଡ (PCB) C-PACE-EM ସିଷ୍ଟମ୍ ସହିତ ଏକୀଭୂତ ହେବା ପାଇଁ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇଛି |PCB ରେ ସ୍ୱିସ୍ ମେସିନ୍ ସଂଯୋଜକ ସକେଟ୍ ଗ୍ରାଫାଇଟ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡ୍ ସହିତ ରୂପା ଧାତୁଯୁକ୍ତ ତମ୍ବା ତାର ଏବଂ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡରେ ସ୍କ୍ରୁଡ୍ ହୋଇଥିବା ବ୍ରୋଞ୍ଜ 0-60 ସ୍କ୍ରୁ ଦ୍ୱାରା ସଂଯୁକ୍ତ |ମୁଦ୍ରିତ ସର୍କିଟ ବୋର୍ଡ 3D ପ୍ରିଣ୍ଟରର କଭରରେ ରଖାଯାଇଛି |
CTCM ଡିଭାଇସ୍ ଏକ ପ୍ରୋଗ୍ରାମେବଲ୍ ନିମୋନେଟିକ୍ ଆକ୍ଟୁଏଟର୍ (PPD) ଦ୍ୱାରା ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ହୋଇଥାଏ ଯାହା ହୃଦ୍ ଚକ୍ର ପରି ନିୟନ୍ତ୍ରିତ ରକ୍ତ ସଞ୍ଚାଳନ ଚାପ ସୃଷ୍ଟି କରିଥାଏ |ବାୟୁ ଚାମ୍ବର ଭିତରେ ଚାପ ବ increases ଼ିବା ସହିତ ନମନୀୟ ସିଲିକନ୍ ମେମ୍ବ୍ରେନ୍ ଉପରକୁ ବିସ୍ତାର ହୁଏ, ଯାହା ଟିସୁ ସାଇଟ୍ ତଳେ ମାଧ୍ୟମକୁ ବାଧ୍ୟ କରେ |ତାପରେ ତରଳ ପଦାର୍ଥର ବହିଷ୍କାର ଦ୍ୱାରା ଟିସୁର କ୍ଷେତ୍ର ପ୍ରସାରିତ ହେବ, ଡାଇଷ୍ଟୋଲ ସମୟରେ ହୃଦୟର ଶାରୀରିକ ବିସ୍ତାରକୁ ଅନୁକରଣ କରି |ଆରାମର ଶିଖରରେ, ଗ୍ରାଫାଇଟ୍ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ବ electrical ଦୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା, ଯାହା ବାୟୁ ଚାମ୍ବରରେ ଚାପକୁ ହ୍ରାସ କରି ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକର ସଂକୋଚନ ସୃଷ୍ଟି କରିଥିଲା ​​|ପାଇପ୍ ଭିତରେ ବାୟୁ ସିଷ୍ଟମରେ ଥିବା ଚାପକୁ ଚିହ୍ନିବା ପାଇଁ ଏକ ପ୍ରେସର ସେନସର ସହିତ ଏକ ହେମୋଷ୍ଟାଟିକ୍ ଭାଲଭ୍ ଅଛି |ପ୍ରେସର ସେନସର ଦ୍ୱାରା ଅନୁଭବ କରାଯାଉଥିବା ଚାପ ଲାପଟପ୍ ସହିତ ସଂଯୁକ୍ତ ଡାଟା କଲେକ୍ଟରରେ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଏ |ଏହା ଗ୍ୟାସ୍ ଚାମ୍ବର ଭିତରେ ଥିବା ଚାପର ନିରନ୍ତର ନୀରିକ୍ଷଣକୁ ଅନୁମତି ଦିଏ |ଯେତେବେଳେ ସର୍ବାଧିକ ଚାମ୍ବର ଚାପ ପହଞ୍ଚିଲା (ମାନକ 80 mmHg, 140 mmHg OS), ଡାଟା ଅଧିଗ୍ରହଣ ଉପକରଣକୁ C-PACE-EM ସିଷ୍ଟମକୁ 2 ମିସ ପାଇଁ ଦ୍ୱିପାକ୍ଷିକ ଭୋଲଟେଜ ସିଗନାଲ ସୃଷ୍ଟି କରିବାକୁ 4 ସି ସେଟ କରିବାକୁ ନିର୍ଦ୍ଦେଶ ଦିଆଗଲା |
Heart ଟି କୂଅରେ ହୃଦୟ ବିଭାଗ ପ୍ରାପ୍ତ ହେଲା ଏବଂ ସଂସ୍କୃତି ଅବସ୍ଥା ନିମ୍ନଲିଖିତ ଭାବରେ କରାଯାଇଥିଲା: ଅମଳ ହୋଇଥିବା ହୃଦୟକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର ପାତ୍ରରୁ ଥଣ୍ଡା (4 ° C) କାର୍ଡିଓପ୍ଲେଜିଆ ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ଟ୍ରେକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କର |ବାମ ଭେଣ୍ଟ୍ରିକଲ୍ ଏକ ନିର୍ଜଳ ବ୍ଲେଡ୍ ସହିତ ଅଲଗା ହୋଇ 1-2 ସେମି 3 ଖଣ୍ଡରେ କାଟି ଦିଆଗଲା |ଏହି ଟିସୁ ବ୍ଲକ୍ ଗୁଡିକ ଟିସୁ ଆଡେସିଭ୍ ସହିତ ଟିସୁ ସପୋର୍ଟ ସହିତ ସଂଲଗ୍ନ ହୋଇ ଟାଇରୋଡ୍ର ସଲ୍ୟୁସନ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ କମ୍ପନ ମାଇକ୍ରୋଟୋମ୍ ଟିସୁ ସ୍ନାନରେ ରଖାଯାଇଥିଲା ଏବଂ କ୍ରମାଗତ ଭାବରେ ଅମ୍ଳଜାନଯୁକ୍ତ (3 g / L 2,3-ବଟାନେଡିଅନ୍ ମୋନୋକ୍ସାଇମ୍ (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g)।), 6 mM KCl (0.447 g), 10 mM D-glucose (1.86 g) mM CaCl2 (1.8 ମିଲି 1 M ସମାଧାନ), 1 L ddH2O ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ) |କମ୍ପୁଥିବା ମାଇକ୍ରୋଟୋମ୍ 80 Hz ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସିରେ 300 µm ମୋଟା ସ୍ଲାଇସ୍, 2 ମିଲିମିଟର ଭୂସମାନ୍ତର କମ୍ପନ ପ୍ରଶସ୍ତତା ଏବଂ 0.03 mm / s ର ଅଗ୍ରୀମ ହାରରେ କାଟିବାକୁ ସ୍ଥିର ହୋଇଥିଲା |ସମାଧାନକୁ ଥଣ୍ଡା ରଖିବା ପାଇଁ ଟିସୁ ସ୍ନାନ ବରଫ ଦ୍ୱାରା ଘେରି ରହିଥିଲା ​​ଏବଂ ତାପମାତ୍ରା 4 ° C ରେ ରଖାଯାଇଥିଲା |ମାଇକ୍ରୋଟୋମ୍ ସ୍ନାନରୁ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ ବରଫ ଉପରେ କ୍ରମାଗତ ଅମ୍ଳଜାନଯୁକ୍ତ ଟାଇରୋଡ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ଇନକ୍ୟୁବେସନ ସ୍ନାନକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଗୋଟିଏ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ଲେଟ୍ ପାଇଁ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ବିଭାଗ ନ ମିଳୁଛି |ଟ୍ରାନ୍ସୱେଲ ସଂସ୍କୃତି ପାଇଁ, ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡିକ 6 ମିଲିମିଟର ଚଉଡା ପଲିୟୁରେଥନ୍ ସପୋର୍ଟରେ ସଂଲଗ୍ନ ହୋଇ 6 ମିଲି ମିଟର ଅପ୍ଟିମାଇଜ୍ ମିଡିୟମ୍ (199 ମଧ୍ୟମ, 1x ITS ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟ, 10% FBS, 5 ng / ml VEGF, 10 ng / ml FGF- କ୍ଷାର ଏବଂ 2X ଆଣ୍ଟିବାୟୋଟିକ୍-ଆଣ୍ଟିଫଙ୍ଗାଲ୍) ରେ ରଖାଯାଇଥିଲା |ସି-ପେସ୍ ମାଧ୍ୟମରେ ଟିସୁ ବିଭାଗରେ ବ Elect ଦ୍ୟୁତିକ ଉତ୍ତେଜନା (10 V, ଫ୍ରିକ୍ୱେନ୍ସି 1.2 Hz) ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା |TD ଅବସ୍ଥା ପାଇଁ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ମଧ୍ୟମ ପରିବର୍ତ୍ତନରେ 100 nM ଏବଂ 1 μM ରେ ତାଜା T3 ଏବଂ ଡେକ୍ସ ଯୋଗ କରାଯାଇଥିଲା |ଦିନକୁ times ଥର ବଦଳାଇବା ପୂର୍ବରୁ ଏହି ମାଧ୍ୟମ ଅମ୍ଳଜାନରେ ପରିପୂର୍ଣ୍ଣ |ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡିକ 37 ° C ଏବଂ 5% CO2 ରେ ଏକ ଇନକ୍ୟୁବେଟରରେ ସଂସ୍କୃତି ପ୍ରାପ୍ତ ହୋଇଥିଲା |
CTCM ସଂସ୍କୃତି ପାଇଁ, ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡିକ ଏକ କଷ୍ଟମ-ନିର୍ମିତ 3D ପ୍ରିଣ୍ଟରରେ ଏକ ପେଟ୍ରି ଥାଳିରେ ପରିବର୍ତ୍ତିତ ଟାଇରୋଡ୍ର ସମାଧାନ ଧାରଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଡିଭାଇସ୍ ସପୋର୍ଟ ରିଙ୍ଗର କ୍ଷେତ୍ରର 25% ହୃଦୟର ସ୍ଲାଇସର ଆକାର ବୃଦ୍ଧି କରିବାକୁ ଡିଜାଇନ୍ କରାଯାଇଛି |ଏହା କରାଯାଇଥାଏ ଯାହା ଦ୍ Ty ାରା ଟାଇରୋଡ୍ର ସମାଧାନରୁ ମଧ୍ୟମକୁ ଏବଂ ଡାଇଷ୍ଟୋଲ୍ ସମୟରେ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ ହେବା ପରେ ହୃଦୟର ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକ ବିସ୍ତାର ହୋଇନଥାଏ |ହିଷ୍ଟୋଆକ୍ରିଲିକ୍ ଗ୍ଲୁ ବ୍ୟବହାର କରି ବିଭାଗଗୁଡିକ 300 µm ମୋଟା 7 ମିଲିମିଟର ବ୍ୟାସାର୍ଦ୍ଧ ଏକ ରିଙ୍ଗ ଉପରେ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା |ସପୋର୍ଟ ରିଙ୍ଗରେ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡିକ ସଂଲଗ୍ନ କରିବା ପରେ, ଅତିରିକ୍ତ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ କାଟି ସଂଲଗ୍ନ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ ବରଫରେ ଟାଇରୋଡ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ସ୍ନାନରେ ରଖନ୍ତୁ (4 ° C) ଯେପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଗୋଟିଏ ଉପକରଣ ପାଇଁ ପର୍ଯ୍ୟାପ୍ତ ବିଭାଗ ପ୍ରସ୍ତୁତ ହୋଇନାହିଁ |ସମସ୍ତ ଉପକରଣ ପାଇଁ ସମୁଦାୟ ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ ସମୟ 2 ଘଣ୍ଟାରୁ ଅଧିକ ହେବା ଉଚିତ୍ ନୁହେଁ |6 ଟି ଟିସୁ ବିଭାଗ ସେମାନଙ୍କ ସପୋର୍ଟ ରିଙ୍ଗରେ ସଂଲଗ୍ନ ହେବା ପରେ, CTCM ଉପକରଣ ଏକତ୍ରିତ ହେଲା |CTCM ସଂସ୍କୃତି ଚାମ୍ବର 21 ମିଲି ପ୍ରି-ଅମ୍ଳଜାନଯୁକ୍ତ ମାଧ୍ୟମ ସହିତ ପୂର୍ଣ୍ଣ ହୋଇଛି |ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକୁ ସଂସ୍କୃତି ଚାମ୍ବରକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ ଏବଂ ପାଇପେଟ୍ ସହିତ ଯେକ air ଣସି ବାୟୁ ବୁବୁଲ୍କୁ ଯତ୍ନର ସହିତ ବାହାର କରନ୍ତୁ |ତାପରେ ଟିସୁ ବିଭାଗକୁ ଗର୍ତ୍ତରେ ଗାଇଡ୍ କରାଯାଏ ଏବଂ ଧୀରେ ଧୀରେ ସ୍ଥାନରେ ଚାପି ଦିଆଯାଏ |ଶେଷରେ, ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡ୍ କ୍ୟାପ୍ ଡିଭାଇସରେ ରଖନ୍ତୁ ଏବଂ ଡିଭାଇସକୁ ଇନକ୍ୟୁବେଟରକୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ |ତା’ପରେ CTCM କୁ ଏୟାର ଟ୍ୟୁବ୍ ଏବଂ C-PACE-EM ସିଷ୍ଟମ୍ ସହିତ ସଂଯୋଗ କରନ୍ତୁ |ନିମୋନେଟିକ୍ ଆକ୍ଟୁଏଟର୍ ଖୋଲିବ ଏବଂ ବାୟୁ ଭାଲଭ CTCM ଖୋଲିବ |C-PACE-EM ସିଷ୍ଟମ୍ 2 ମି।ଦିନରେ ଦୁଇଥର ମାଧ୍ୟମ ପରିବର୍ତ୍ତନ କରାଯାଉଥିଲା ଏବଂ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡରେ ଗ୍ରାଫାଇଟ୍ ଜମା ନହେବା ପାଇଁ ଇଲେକ୍ଟ୍ରୋଡ୍ ଦିନକୁ ଥରେ ବଦଳାଗଲା |ଯଦି ଆବଶ୍ୟକ ହୁଏ, ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡିକ ସେମାନଙ୍କ ସଂସ୍କୃତି କୂଅରୁ ଅପସାରଣ କରାଯାଇପାରିବ ଯାହାକି ସେମାନଙ୍କ ତଳେ ପଡିଥିବା କ air ଣସି ବାୟୁ ବବୁଲକୁ ବାହାର କରିଦିଆଯାଏ |MT ଚିକିତ୍ସା ଅବସ୍ଥା ପାଇଁ, 100 nM T3 ଏବଂ 1 μM Dex ସହିତ ପ୍ରତ୍ୟେକ ମଧ୍ୟମ ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ T3 / Dex ସତେଜ ଭାବରେ ଯୋଗ କରାଯାଇଥିଲା |CTCM ଉପକରଣଗୁଡ଼ିକ 37 ° C ଏବଂ 5% CO2 ରେ ଏକ ଇନକ୍ୟୁବେଟରରେ ସଂସ୍କୃତ ହୋଇଥିଲା |
ହୃଦୟ ସ୍ଲାଇସର ପ୍ରସାରିତ ଟ୍ରାଜେକ୍ଟୋରୀ ପାଇବା ପାଇଁ ଏକ ସ୍ୱତନ୍ତ୍ର କ୍ୟାମେରା ସିଷ୍ଟମ ବିକଶିତ ହେଲା |ଏକ SLR କ୍ୟାମେରା (କାନନ୍ ରେବେଲ୍ T7i, କାନନ୍, ଟୋକିଓ, ଜାପାନ) ଏକ ନାଭିଟର୍ ଜୁମ୍ 7000 18-108 ମିମି ମାକ୍ରୋ ଲେନ୍ସ (ନାଭିଟର, ସାନ ଫ୍ରାନ୍ସିସ୍କୋ, CA) ସହିତ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ମାଧ୍ୟମକୁ ତାଜା ମାଧ୍ୟମ ସହିତ ବଦଳାଇବା ପରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ ଭିଜୁଆଲାଇଜେସନ୍ କରାଯାଇଥିଲା |କ୍ୟାମେରା 51 ° କୋଣରେ ଅବସ୍ଥିତ ଏବଂ ପ୍ରତି ସେକେଣ୍ଡରେ 30 ଫ୍ରେମରେ ଭିଡିଓ ରେକର୍ଡ କରାଯାଇଛି |ପ୍ରଥମେ, ହାର୍ଟ ସ୍ଲାଇସର ଗତି ପରିମାଣ କରିବା ପାଇଁ ଇମେଜ୍-ଜେ ସହିତ ଓପନ୍ ସୋର୍ସ ସଫ୍ଟୱେର୍ (MUSCLEMOTION43) ବ୍ୟବହୃତ ହେଲା |ଶବ୍ଦକୁ ଏଡାଇବା ପାଇଁ ହୃତପିଣ୍ଡକୁ ପିଟିବା ପାଇଁ ଆଗ୍ରହର ଅଞ୍ଚଳଗୁଡିକ ବ୍ୟାଖ୍ୟା କରିବାକୁ MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) ବ୍ୟବହାର କରି ମାସ୍କ ତିଆରି କରାଯାଇଥିଲା |ମାନୁଆଲ୍ ସେଗମେଣ୍ଟେଡ୍ ମାସ୍କଗୁଡିକ ଏକ ଫ୍ରେମ୍ କ୍ରମରେ ସମସ୍ତ ପ୍ରତିଛବିରେ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଏ ଏବଂ ତା’ପରେ MUSCLEMOTION ପ୍ଲଗ୍-ଇନ୍ କୁ ପଠାଗଲା |ରେଫରେନ୍ସ ଫ୍ରେମ୍ ସହିତ ଏହାର ଗତିକୁ ପରିମାଣ କରିବା ପାଇଁ ମାଂସପେଶୀ ଗତି ପ୍ରତ୍ୟେକ ଫ୍ରେମରେ ପିକ୍ସେଲର ହାରାହାରି ତୀବ୍ରତା ବ୍ୟବହାର କରେ |ତଥ୍ୟ ରେକର୍ଡ କରାଯାଇଥିଲା, ଫିଲ୍ଟର୍ କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଚକ୍ର ସମୟ ପରିମାଣ ଏବଂ ହୃଦ୍ ଚକ୍ର ସମୟରେ ଟିସୁ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଆକଳନ କରିବାକୁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ରେକର୍ଡ ହୋଇଥିବା ଭିଡିଓଟି ପ୍ରଥମ-ଅର୍ଡର ଶୂନ-ପର୍ଯ୍ୟାୟ ଡିଜିଟାଲ ଫିଲ୍ଟର ବ୍ୟବହାର କରି ପୋଷ୍ଟ-ପ୍ରକ୍ରିୟାକରଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଟିସୁ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ (ପାଇକ୍-ଟୁ-ପିକ୍) ପରିମାଣ କରିବାକୁ, ରେକର୍ଡ ହୋଇଥିବା ସଙ୍କେତରେ ଶିଖର ଏବଂ ଟ୍ରଫ୍ ମଧ୍ୟରେ ପାର୍ଥକ୍ୟ କରିବା ପାଇଁ ଶିଖରରୁ ଶିଖର ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା |ଏଥିସହ, ସିଗନାଲ୍ ଡ୍ରାଇଫ୍ ଦୂର କରିବା ପାଇଁ 6th ଷ୍ଠ ଅର୍ଡର ପଲିନୋମିଆଲ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଡିଟ୍ରେଣ୍ଡିଂ କରାଯାଏ |ଗ୍ଲୋବାଲ୍ ଟିସୁ ଗତି, ଚକ୍ର ସମୟ, ଆରାମ ସମୟ, ଏବଂ ସଂକୋଚନ ସମୟ (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ୍ କୋଡ୍ 44) ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାକୁ MATLAB ରେ ପ୍ରୋଗ୍ରାମ କୋଡ୍ ବିକଶିତ କରାଯାଇଥିଲା |
ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ ଆନାଲିସିସ୍ ପାଇଁ, ଯାନ୍ତ୍ରିକ ଷ୍ଟ୍ରେଚ୍ ଆକଳନ ପାଇଁ ସୃଷ୍ଟି ହୋଇଥିବା ସମାନ ଭିଡିଓ ବ୍ୟବହାର କରି, ଆମେ ପ୍ରଥମେ MUSCLEMOTION ସଫ୍ଟୱେର୍ ଅନୁଯାୟୀ ଗତି ଶିଖର (ସର୍ବୋଚ୍ଚ (ଉପର) ଏବଂ ସର୍ବନିମ୍ନ (ନିମ୍ନ) ଗତି) କୁ ପ୍ରତିନିଧିତ୍ two କରୁଥିବା ଦୁଇଟି ପ୍ରତିଛବି ଅନୁସନ୍ଧାନ କରିଥିଲୁ |ତାପରେ ଆମେ ଟିସୁ ଅଞ୍ଚଳଗୁଡିକୁ ସେଗମେଣ୍ଟ୍ କରି ସେଗମେଣ୍ଟେଡ୍ ଟିସୁରେ ଛାୟା ଆଲଗୋରିଦମର ଏକ ଫର୍ମ ପ୍ରୟୋଗ କଲୁ (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଚିତ୍ର 2a) |ପରେ ସେଗମେଣ୍ଟେଡ୍ ଟିସୁକୁ ଦଶ ଉପସଂଖ୍ୟାରେ ବିଭକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ପୃଷ୍ଠରେ ଥିବା ଚାପକୁ ନିମ୍ନ ସମୀକରଣ ବ୍ୟବହାର କରି ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା: ଷ୍ଟ୍ରେନ୍ = (ସୁପ୍-ଡାଉନ୍) / ସଡାଉନ୍, ଯେଉଁଠାରେ ସପ୍ ଏବଂ ସାଉଡ୍ ଯଥାକ୍ରମେ କପଡ଼ାର ଉପର ଏବଂ ତଳ ଛାୟାରୁ ଆକୃତିର ଦୂରତା ଅଟେ (ସପ୍ଲିମେଣ୍ଟାରୀ ଚିତ୍ର .2b) |
48 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ହୃଦୟ ବିଭାଗଗୁଡିକ 4% ପାରାଫର୍ମାଲଡିହାଇଡରେ ସ୍ଥିର କରାଯାଇଥିଲା |ଫିକ୍ସଡ୍ ଟିସୁଗୁଡିକ 10% ଏବଂ 20% ସୁକ୍ରୋଜରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଡିହାଇଡ୍ରେଡ୍ ହୋଇଥିଲା, ତା’ପରେ ରାତିସାରା 30% ସୁକ୍ରୋଜରେ |ଏହା ପରେ ବିଭାଗଗୁଡ଼ିକ ସର୍ବୋତ୍କୃଷ୍ଟ କଟିଙ୍ଗ୍ ତାପମାତ୍ରା କମ୍ପାଉଣ୍ଡ୍ (OCT କମ୍ପାଉଣ୍ଡ୍) ରେ ଭର୍ତ୍ତି କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ ଧୀରେ ଧୀରେ ଏକ ଆଇସୋପେଣ୍ଟେନ୍ / ଶୁଷ୍କ ବରଫ ସ୍ନାନରେ ଫ୍ରୀଜ୍ ହୋଇଥିଲା |ଅଲଗା ହେବା ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ -80 ° C ରେ OCT ଏମ୍ବେଡିଂ ବ୍ଲକଗୁଡିକ ଗଚ୍ଛିତ କରନ୍ତୁ |ସ୍ଲାଇଡ୍ ଗୁଡିକ 8 μm ମୋଟା ସହିତ ବିଭାଗ ଭାବରେ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରାଯାଇଥିଲା |
ହୃଦୟ ବିଭାଗରୁ OCT କୁ ହଟାଇବା ପାଇଁ, ସ୍ଲାଇଡ୍ ଗୁଡ଼ିକୁ 95 ° C ରେ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଗରମ କରନ୍ତୁ |ପ୍ରତ୍ୟେକ ସ୍ଲାଇଡରେ 1 ମିଲି ପିବିଏସ୍ ଯୋଡନ୍ତୁ ଏବଂ ରୁମ୍ ତାପମାତ୍ରାରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ, ତା’ପରେ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ PBS ରେ 0.1% Triton-X ସେଟ୍ କରି ବିଭାଗଗୁଡିକ ବିସ୍ତାର କରନ୍ତୁ |ଅଣ-ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ ଆଣ୍ଟିବଡିଗୁଡିକ ନମୁନାରେ ବାନ୍ଧିବା ପାଇଁ ରୋକିବା ପାଇଁ, ସ୍ଲାଇଡରେ ml ୦ ମିଲି ମିଟର 3% BSA ସମାଧାନ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |ପରେ BSA କୁ ହଟାଇ ଦିଆଗଲା ଏବଂ ସ୍ଲାଇଡ୍ ଗୁଡିକ PBS ସହିତ ଧୋଇଗଲା |ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନାକୁ ଏକ ପେନ୍ସିଲ ସହିତ ଚିହ୍ନିତ କର |ପ୍ରାଥମିକ ଆଣ୍ଟିବଡି (1% BSA ରେ 1: 200 ମିଶ୍ରିତ) (କନକ୍ସିନ 43 (ଆବକାମ; # AB11370), NFATC4 (ଆବକାମ; # AB99431) ଏବଂ ଟ୍ରପୋନିନ୍-ଟି (ଥର୍ମୋ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍; 594 (ଥର୍ମୋ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍; # T6391) ଅତିରିକ୍ତ 90 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ପିବିଏସ୍ ସହିତ 3 ଥର ଧୋଇ ଦିଆଗଲା, ଟାର୍ଗେଟ୍ ଦାଗକୁ ପୃଷ୍ଠଭୂମିରୁ ପୃଥକ କରିବା ପାଇଁ, ଆମେ କେବଳ ଦ୍ secondary ିତୀୟ ଆଣ୍ଟିବଡି ନିୟନ୍ତ୍ରଣ ଭାବରେ ବ୍ୟବହାର କଲୁ। ଶେଷରେ, DAPI ଆଣବିକ ଦାଗ ଯୋଡାଗଲା ଏବଂ ସ୍ଲାଇଡ୍ ଗୁଡିକ ଏକ ଭେକ୍ଟାଶିଲ୍ଡ (ଭେକ୍ଟର ଲାବୋରେଟୋରୀ) ରେ ରଖାଗଲା ଏବଂ ନେଲ ପଲିସ୍ -x ମ୍ୟାଗ୍ନିଫିକେସନ୍ ସହିତ ସିଲ୍ କରାଗଲା |
WGA- ଆଲେକ୍ସା ଫ୍ଲୋର 555 (ଥର୍ମୋ ସାଇଣ୍ଟିଫିକ୍; # W32464) PBS ରେ 5 μg / ml ରେ WGA ଦାଗ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା ଏବଂ କୋଠରୀ ତାପମାତ୍ରାରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସ୍ଥିର ବିଭାଗରେ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା |ସ୍ଲାଇଡ୍ ଗୁଡିକ ପରେ ପିବିଏସ୍ ସହିତ ଧୋଇ ଦିଆଗଲା ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ସ୍ଲାଇଡ୍ ରେ ସୁଦର୍ଶନ କଳା ଯୋଗ କରାଯାଇ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନ୍କ୍ୟୁବ୍ କରାଯାଇଥିଲା |ସ୍ଲାଇଡ୍ ଗୁଡିକ ପରେ ପିବିଏସ୍ ସହିତ ଧୋଇ ଦିଆଗଲା ଏବଂ ଭେକ୍ଟାଶିଲ୍ଡ ଏମ୍ବେଡିଂ ମାଧ୍ୟମ ଯୋଗ କରାଯାଇଥିଲା |40x ମ୍ୟାଗ୍ନିଫିକେସନ୍ରେ ଏକ କିନ୍ସ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ ଉପରେ ସ୍ଲାଇଡ୍ ଭିଜୁଆଲ୍ କରାଯାଇଥିଲା |
ଉପରୋକ୍ତ ବର୍ଣ୍ଣନା ଅନୁଯାୟୀ ନମୁନାରୁ OCT ଅପସାରିତ ହେଲା |OCT ଅପସାରଣ କରିବା ପରେ, ସ୍ଲାଇଡ୍ ଗୁଡିକୁ ରାତିସାରା ବୋଇନ୍ ର ସମାଧାନରେ ବୁଡ଼ାନ୍ତୁ |ସ୍ଲାଇଡ୍ ଗୁଡିକ ପରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଡିଷ୍ଟିଲ୍ ପାଣିରେ ଧୋଇ ଦିଆଗଲା ଏବଂ ପରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଏକ ବାଇବ୍ରିଚ୍ ଆଲୋଏଡ୍ ଏସିଡ୍ ଫୁସିନ୍ ସମାଧାନରେ ରଖାଗଲା |ତା’ପରେ ସ୍ଲାଇଡ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ଡିଷ୍ଟିଲ୍ ପାଣିରେ ଧୋଇ 5% ଫସଫୋମୋଲିବଡେନମ୍ / 5% ଫସଫୋଟଙ୍ଗଷ୍ଟିକ୍ ଏସିଡ୍ ର ଦ୍ରବଣରେ 10 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ରଖାଗଲା |ଧୋଇବା ବିନା, ସ୍ଲାଇଡ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ସିଧାସଳଖ ଅନିଲାଇନ୍ ବ୍ଲୁ ସଲ୍ୟୁସନ୍ କୁ 15 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ସ୍ଥାନାନ୍ତର କରନ୍ତୁ |ତା’ପରେ ସ୍ଲାଇଡ୍ଗୁଡ଼ିକୁ ଡିଷ୍ଟିଲ୍ ପାଣିରେ ଧୋଇ 2 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ 1% ଏସିଟିକ୍ ଏସିଡ୍ ଦ୍ରବଣରେ ରଖାଗଲା |ସ୍ଲାଇଡ୍ ଗୁଡିକ 200 N ଇଥାନଲରେ ଶୁଖାଯାଇ ଜାଇଲିନ୍ କୁ ସ୍ଥାନାନ୍ତରିତ କରାଯାଇଥିଲା |10x ଉଦ୍ଦେଶ୍ୟ ସହିତ କିନ୍ସ ମାଇକ୍ରୋସ୍କୋପ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଦାଗିତ ସ୍ଲାଇଡ୍ ଗୁଡିକ ଭିଜୁଆଲ୍ କରାଯାଇଥିଲା |କିଏନ୍ସ ଆନାଲିଜର୍ ସଫ୍ଟୱେର୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଫାଇବ୍ରୋସିସ୍ କ୍ଷେତ୍ର ଶତକଡା ପରିମାଣ କରାଯାଇଥିଲା |
କିଛି ପରିବର୍ତ୍ତନ ସହିତ ନିର୍ମାତାଙ୍କ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ଅନୁଯାୟୀ CyQUANT ™ MTT ସେଲ୍ ଭିଆବିଲିଟି ଆସେ (ଇନଭାଇଟ୍ରୋଜେନ୍, କାର୍ଲସବାଡ୍, CA), କାଟାଲଗ୍ ନମ୍ବର V13154 |ବିଶେଷ ଭାବରେ, MTT ବିଶ୍ଳେଷଣ ସମୟରେ ସମାନ ଟିସୁ ଆକାର ନିଶ୍ଚିତ କରିବାକୁ 6 ମିଲିମିଟର ବ୍ୟାସ ବିଶିଷ୍ଟ ଏକ ସର୍ଜିକାଲ୍ ପଞ୍ଚ ବ୍ୟବହାର କରାଯାଇଥିଲା |ଉତ୍ପାଦକଙ୍କ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ଅନୁଯାୟୀ MTT ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ଧାରଣ କରିଥିବା 12-କୂଅ ପ୍ଲେଟର କୂଅରେ ଟିସୁ ପୃଥକ ଭାବରେ ଆବୃତ କରାଯାଇଥିଲା |ବିଭାଗଗୁଡିକ 37 ° C ରେ 3 ​​ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ ଏବଂ ଜୀବନ୍ତ ଟିସୁ ଏକ ବାଇଗଣୀ ଫର୍ମାଜାନ୍ ଯ ound ଗିକ ଗଠନ ପାଇଁ MTT ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍କୁ ମେଟାବୋଲିଜ୍ କରେ |MTT ସମାଧାନକୁ 1 ମି.ଲି.ନମୁନାଗୁଡିକ DMSO ରେ 1:10 କୁ 96-ଭଲ ସ୍ୱଚ୍ଛ ତଳ ପ୍ଲେଟଗୁଡିକରେ ଏବଂ ବାଇଗଣୀ ରଙ୍ଗର ତୀବ୍ରତା ସାଇଟେସନ୍ ପ୍ଲେଟ୍ ରିଡର୍ (ବାୟୋଟେକ୍) ବ୍ୟବହାର କରି 570 nm ରେ ମାପ କରାଯାଇଥିଲା |ହୃଦୟର ପ୍ରତ୍ୟେକ ସ୍ଲାଇସର ଓଜନ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ପ ings ଼ିବା ସ୍ୱାଭାବିକ ହୋଇଥିଲା |
ପୂର୍ବରୁ ବର୍ଣ୍ଣିତ ପରି ଗ୍ଲୁକୋଜ ବ୍ୟବହାର ଅନୁଧ୍ୟାନ ପାଇଁ ହାର୍ଟ ସ୍ଲାଇସ୍ ମିଡିଆକୁ 1 μCi / ml [5-3H] -ଗ୍ଲୁକୋଜ୍ (ମୋରାଭେକ୍ ବାୟୋକେମିକାଲ୍ସ, ବ୍ରେ, CA, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) ଧାରଣ କରିଥିବା ମିଡିଆ ସହିତ ବଦଳାଯାଇଥିଲା |4 ଘଣ୍ଟା ଇନକ୍ୟୁବେସନ ପରେ, 100 µl 0.2 N HCl ଧାରଣ କରିଥିବା ଏକ ଖୋଲା ମାଇକ୍ରୋସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଜ୍ ଟ୍ୟୁବରେ 100 µl ମଧ୍ୟମ ଯୋଗ କରନ୍ତୁ |ତାପରେ ଏହି ଟ୍ୟୁବ୍ କୁ ଏକ ସ୍କିଣ୍ଟିଲେସନ୍ ଟ୍ୟୁବରେ ରଖାଗଲା ଯେଉଁଥିରେ 500 μl dH2O ଧାରଣ କରାଯାଇଥିଲା [3H] 2O କୁ 72 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ 37 ° C ରେ ବାଷ୍ପୀଭୂତ ହୁଏ |ତା’ପରେ ସ୍କିଣ୍ଟିଲେସନ୍ ଟ୍ୟୁବରୁ ମାଇକ୍ରୋସେଣ୍ଟ୍ରିଫ୍ୟୁଜ୍ ଟ୍ୟୁବ୍ କା remove ଼ି 10 ମିଲି ମିଟର ସ୍କିଣ୍ଟିଲେସନ୍ ଫ୍ଲୁଇଡ୍ ମିଶାନ୍ତୁ |ଏକ ଟ୍ରାଇ-କାର୍ବ 2900TR ତରଳ ସ୍କିଣ୍ଟିଲେସନ୍ ଆନାଲିଜର୍ (ପ୍ୟାକର୍ଡ ବାୟୋ ସାଇନ୍ସ କମ୍ପାନୀ, ମେରିଡେନ୍, ସିଟି, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) ବ୍ୟବହାର କରି ସ୍କିଣ୍ଟିଲେସନ୍ ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା |[5-3H] - ଗ୍ଲୁକୋଜ ନିର୍ଦ୍ଦିଷ୍ଟ କାର୍ଯ୍ୟକଳାପ, ଅସମ୍ପୂର୍ଣ୍ଣ ସନ୍ତୁଳନ ଏବଂ ପୃଷ୍ଠଭୂମି, [5-3H] ର ଅବ୍ୟବହୃତ ଗ୍ଲୁକୋଜ ଏବଂ ସ୍କିଣ୍ଟିଲେସନ୍ କାଉଣ୍ଟର ଦକ୍ଷତାକୁ ଧ୍ୟାନରେ ରଖି ଗ୍ଲୁକୋଜର ବ୍ୟବହାର ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା |ତଥ୍ୟ ହୃତପିଣ୍ଡର ବିଭାଗଗୁଡିକ ପାଇଁ ସ୍ ized ାଭାବିକ ହୋଇଛି |
ଟ୍ରାଇଜୋଲରେ ଟିସୁ ହୋମୋଜେନାଇଜେସନ୍ ପରେ, ଉତ୍ପାଦକଙ୍କ ପ୍ରୋଟୋକଲ୍ ଅନୁଯାୟୀ Qiagen miRNeasy ମାଇକ୍ରୋ କିଟ୍ # 210874 ବ୍ୟବହାର କରି RNA ହୃଦୟ ବିଭାଗରୁ ବିଚ୍ଛିନ୍ନ ହୋଇଥିଲା |ନିମ୍ନଲିଖିତ ଭାବରେ RNAsec ଲାଇବ୍ରେରୀ ପ୍ରସ୍ତୁତି, କ୍ରମ ଏବଂ ତଥ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା:
ନମୁନା ପାଇଁ 1 μg RNA RNA ଲାଇବ୍ରେରୀ ପ୍ରସ୍ତୁତି ପାଇଁ ପ୍ରାରମ୍ଭିକ ସାମଗ୍ରୀ ଭାବରେ ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ନିର୍ମାତାଙ୍କ ସୁପାରିଶକୁ ଅନୁସରଣ କରି NEBNext UltraTM RNA ଲାଇବ୍ରେରୀ ପ୍ରସ୍ତୁତି କିଟ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ସିକ୍ୱେନ୍ସିଂ ଲାଇବ୍ରେରୀଗୁଡିକ ସୃଷ୍ଟି କରାଯାଇଥିଲା, ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନା ପାଇଁ ଗୁଣବତ୍ତା କ୍ରମରେ ସୂଚକାଙ୍କ ସଂକେତଗୁଡ଼ିକ ଯୋଗ କରାଯାଇଥିଲା |ସଂକ୍ଷେପରେ, ପଲି-ଟି ଅଲିଗ୍ନୁକ୍ଲାଏଟାଇଡ୍ ସହିତ ସଂଲଗ୍ନ ଚୁମ୍ବକୀୟ ବିଡ୍ ବ୍ୟବହାର କରି mRNA କୁ ମୋଟ RNA ରୁ ଶୁଦ୍ଧ କରାଯାଇଥିଲା |NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer (5X) ରେ ଉଚ୍ଚ ତାପମାତ୍ରାରେ ବିଭାଜିତ କାଟେସନ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଖଣ୍ଡବିଖଣ୍ଡନ କରାଯାଏ |ପ୍ରଥମ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ cDNA ରାଣ୍ଡମ୍ ହେକ୍ସାମେର୍ ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ M-MuLV ରିଭର୍ସ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପଟେଜ୍ (RNase H-) ବ୍ୟବହାର କରି ସିନ୍ଥାଇଜ୍ ହୋଇଥିଲା |ଦ୍ୱିତୀୟ ଷ୍ଟ୍ରାଣ୍ଡ୍ cDNA ତାପରେ DNA ପଲିମେରେଜ୍ I ଏବଂ RNase H. ବ୍ୟବହାର କରି ସିନ୍ଥାଇଜ୍ ହୁଏ |ଡିଏନ୍ଏ ଖଣ୍ଡର ′ ′ ଶେଷର ଆଡେନିଲେସନ୍ ପରେ, ଏହାକୁ ହାଇବ୍ରିଡାଇଜେସନ୍ ପାଇଁ ପ୍ରସ୍ତୁତ କରିବା ପାଇଁ ଏକ ହେୟାରପିନ ଲୁପ୍ ଗଠନ ସହିତ ଏକ NEBNext ଆଡାପ୍ଟର ସଂଲଗ୍ନ ହୋଇଛି |ପସନ୍ଦିତ ଲମ୍ବ 150-200 bp ର cDNA ଖଣ୍ଡଗୁଡିକ ଚୟନ ପାଇଁ |AMPure XP ସିଷ୍ଟମ୍ (ବେକମ୍ୟାନ୍ କୁଲଟର, ବେଭର୍ଲି, ଯୁକ୍ତରାଷ୍ଟ୍ର) ବ୍ୟବହାର କରି ଲାଇବ୍ରେରୀ ଖଣ୍ଡଗୁଡ଼ିକୁ ଶୁଦ୍ଧ କରାଯାଇଥିଲା |ତା’ପରେ, 3 μl USER ଏନଜାଇମ୍ (NEB, USA) ଆକାର-ମନୋନୀତ cDNA ସହିତ ଏକ ଆଡାପ୍ଟର ସହିତ ଲିଗାଡ୍ ହୋଇ 37 ° C ରେ 15 ମିନିଟ୍ ଏବଂ ପରେ PCR ପୂର୍ବରୁ 95 ° C ରେ 5 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ବ୍ୟବହୃତ ହେଲା |PCR ପରେ ଫ୍ୟୁଜନ୍ ହାଇ-ଫିଡେଲିଟି DNA ପଲିମେରେଜ୍, ୟୁନିଭର୍ସାଲ୍ PCR ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ ଇଣ୍ଡେକ୍ସ (X) ପ୍ରାଇମର୍ ବ୍ୟବହାର କରି କାର୍ଯ୍ୟ କରାଯାଇଥିଲା |ଶେଷରେ, PCR ଉତ୍ପାଦଗୁଡିକ ଶୁଦ୍ଧ କରାଯାଇଥିଲା (AMPure XP ସିଷ୍ଟମ୍) ଏବଂ ଲାଇବ୍ରେରୀ ଗୁଣବତ୍ତା ଏକ ଆଜିଲାଣ୍ଟ ବାୟୋନାଲିଜର୍ 2100 ସିଷ୍ଟମରେ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା |ପରେ ନୋଡାସେକ୍ ସିକ୍ୱେନ୍ସର ବ୍ୟବହାର କରି cDNA ଲାଇବ୍ରେରୀ କ୍ରମାନୁସିତ ହେଲା |ଇଲୁମିନା ଠାରୁ କଞ୍ଚା ପ୍ରତିଛବି ଫାଇଲଗୁଡିକ CASAVA ବେସ୍ କଲିଂ ବ୍ୟବହାର କରି କଞ୍ଚା ପଠନକୁ ରୂପାନ୍ତରିତ ହେଲା |କଞ୍ଚା ତଥ୍ୟ FASTQ (fq) ଫର୍ମାଟ୍ ଫାଇଲରେ ଗଚ୍ଛିତ ହୋଇଛି ଯେଉଁଥିରେ ପ read ଼ିବା କ୍ରମ ଏବଂ ଅନୁରୂପ ଆଧାର ଗୁଣ ଅଛି |Sscrofa11.1 ରେଫରେନ୍ସ ଜିନୋମକୁ ଫିଲ୍ଟର ହୋଇଥିବା କ୍ରମ ସହିତ ପ read ଼ିବା ପାଇଁ HISAT2 ଚୟନ କରନ୍ତୁ |ସାଧାରଣତ ,, HISAT2 ଯେକ any ଣସି ଆକାରର ଜେନୋମକୁ ସମର୍ଥନ କରେ, 4 ବିଲିୟନ ବେସରୁ ଅଧିକ ଜେନୋମ ଅନ୍ତର୍ଭୂକ୍ତ କରି, ଏବଂ ଅଧିକାଂଶ ପାରାମିଟର ପାଇଁ ଡିଫଲ୍ଟ ମୂଲ୍ୟ ସେଟ୍ କରାଯାଇଥାଏ |RNA Seq ତଥ୍ୟରୁ ବିଭାଜନ ପଠନ HISAT2 ବ୍ୟବହାର କରି ଦକ୍ଷତାର ସହିତ ଆଲାଇନ୍ ହୋଇପାରିବ, ବର୍ତ୍ତମାନର ଉପଲବ୍ଧ ଦ୍ରୁତତମ ସିଷ୍ଟମ୍, ଅନ୍ୟ ପଦ୍ଧତି ଅପେକ୍ଷା ସମାନ କିମ୍ବା ଉତ୍ତମ ସଠିକତା ସହିତ |
ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ର ପ୍ରଚୁରତା ଜିନ୍ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତିର ସ୍ତରକୁ ସିଧାସଳଖ ପ୍ରତିଫଳିତ କରେ |ଜିନ୍ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତରଗୁଡିକ ଜିନୋମ୍ କିମ୍ବା ଏକ୍ସନ୍ ସହିତ ଜଡିତ ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ (ସିକ୍ୱେନ୍ସିଙ୍ଗ୍ କାଉଣ୍ଟ୍) ଦ୍ୱାରା ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଏ |ପଠନ ସଂଖ୍ୟା ଜିନ୍ ଅଭିବ୍ୟକ୍ତି ସ୍ତର, ଜିନ୍ ଲମ୍ବ, ଏବଂ କ୍ରମର ଗଭୀରତା ସହିତ ଆନୁପାତିକ |FPKM (ହଜାରେ ବେସ୍ ଯୁଗଳ ପ୍ରତି ଟ୍ରାନ୍ସକ୍ରିପସନ୍ ପ୍ରତି ମିଲିୟନ୍ ବେସ୍ ଯୁଗଳ ପ୍ରତି ଖଣ୍ଡ) ଗଣନା କରାଯାଇଥିଲା ଏବଂ DESeq2 ପ୍ୟାକେଜ୍ ବ୍ୟବହାର କରି ଡିଫେରିଏଲ୍ ଏକ୍ସପ୍ରେସନ୍ ର P- ମୂଲ୍ୟ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରାଯାଇଥିଲା |ବିଲ୍ଟ-ଇନ୍-ଫଙ୍କସନ୍ “p.adjust” ଉପରେ ଆଧାର କରି ବେଞ୍ଜାମିନି-ହୋଚବର୍ଗ ପଦ୍ଧତି 9 ବ୍ୟବହାର କରି ଆମେ ପ୍ରତ୍ୟେକ P ମୂଲ୍ୟ ପାଇଁ ମିଥ୍ୟା ଆବିଷ୍କାର ହାର (FDR) ଗଣନା କଲୁ |
ଥର୍ମୋ (ଥର୍ମୋ, କ୍ୟାଟ୍ ନଂ।ପରିମାଣିକ RT-PCR ଏକ ଆପ୍ଲାଏଡ୍ ବାୟୋ ସିଷ୍ଟମ୍ ଏଣ୍ଡୁରା ପ୍ଲେଟ୍ ମାଇକ୍ରୋମ୍ପ 384-ଭଲ ସ୍ୱଚ୍ଛ ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ପ୍ଲେଟ୍ (ଥର୍ମୋ, କ୍ୟାଟ୍ ନଂ 4483319) ଏବଂ ମାଇକ୍ରୋମ୍ପ ଅପ୍ଟିକାଲ୍ ଆଡେସିଭ୍ (ଥର୍ମୋ, କ୍ୟାଟ୍ ନଂ 4311971) ବ୍ୟବହାର କରି କାର୍ଯ୍ୟ କରାଯାଇଥିଲା |ପ୍ରତିକ୍ରିୟା ମିଶ୍ରଣରେ 5 µl ଟାକମାନ ଫାଷ୍ଟ ଆଡଭାନ୍ସଡ ମାଷ୍ଟର ମିଶ୍ରଣ (ଥର୍ମୋ, ବିଲେଇ # 4444557), 0.5 µl ଟାକମାନ ପ୍ରାଇମର୍ ଏବଂ କୂଅରେ 3.5 µl H2O ମିଶ୍ରିତ |ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡ qPCR ଚକ୍ରଗୁଡିକ ଚଲାଗଲା ଏବଂ CT ମୂଲ୍ୟଗୁଡିକ ଏକ ଆପ୍ଲାଏଡ୍ ବାୟୋ ସିଷ୍ଟମ୍ କ୍ୱାଣ୍ଟଷ୍ଟୁଡିଓ 5 ରିଅଲ୍ ଟାଇମ୍ PCR ଯନ୍ତ୍ର (384-ଭଲ ମଡ୍ୟୁଲ୍; ଉତ୍ପାଦ # A28135) ବ୍ୟବହାର କରି ମାପ କରାଯାଇଥିଲା |ଥର୍ମୋ (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss06868890_M1) 3383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss04245588_m1) ସମସ୍ତ ନମୁନାଗୁଡ଼ିକର CT ମୂଲ୍ୟ ଗୃହ ସଂରକ୍ଷଣ ଜିନ୍ GAPD ରେ ସ୍ୱାଭାବିକ ହୋଇଥିଲା |
ନିର୍ମାତାଙ୍କ ପ୍ରୋଟୋକଲ ଅନୁଯାୟୀ NT-ProBNP କିଟ୍ (ଘୁଷୁରି) (କ୍ୟାଟ୍। MBS2086979, MyBioSource) ବ୍ୟବହାର କରି NT-ProBNP ର ମିଡିଆ ପ୍ରକାଶନକୁ ମୂଲ୍ୟାଙ୍କନ କରାଯାଇଥିଲା |ସଂକ୍ଷେପରେ, ପ୍ରତ୍ୟେକ ନମୁନା ଏବଂ ଷ୍ଟାଣ୍ଡାର୍ଡର 250 µl ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ ନକଲରେ ଯୋଡା ଯାଇଥିଲା |ନମୁନା ଯୋଡିବା ପରେ ତୁରନ୍ତ, ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 50 µl ଆସେ ରେଜେଣ୍ଟ୍ A ମିଶାନ୍ତୁ |ପ୍ଲେଟକୁ ଧୀରେ ଧୀରେ ହଲାନ୍ତୁ ଏବଂ ସିଲାଣ୍ଟ ସହିତ ସିଲ୍ କରନ୍ତୁ |ତା’ପରେ ଟ୍ୟାବଲେଟଗୁଡିକ 37 ° C ରେ 1 ଘଣ୍ଟା ପାଇଁ ଅନ୍ତର୍ଭୁକ୍ତ କରାଯାଇଥିଲା |ତା’ପରେ ସମାଧାନକୁ ଆକାଂକ୍ଷା କରନ୍ତୁ ଏବଂ ପ୍ରତ୍ୟେକ ଥର 1-2 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଧୋଇବା ସମାଧାନକୁ 350 µl 1X ୱାଶ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ସହିତ 4 ଥର କୂଅ ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ |ତା’ପରେ କୂଅରେ 100 µl ଆସେ ରିଜେଣ୍ଟ୍ ବି ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ ପ୍ଲେଟ୍ ସିଲାଣ୍ଟ ସହିତ ସିଲ୍ କରନ୍ତୁ |ଟାବଲେଟକୁ ଧୀରେ ଧୀରେ ହଲାଇ 37 ° C ରେ 30 ମିନିଟ୍ ପାଇଁ ଇନ୍କ୍ୟୁବ୍ କରାଯାଇଥିଲା |ସମାଧାନକୁ ଆଶାକରନ୍ତୁ ଏବଂ 1X ଧୋଇବା ଦ୍ରବଣର 350 µl ସହିତ କୂଅକୁ 5 ଥର ଧୋଇ ଦିଅନ୍ତୁ |ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 90 µl ସବଷ୍ଟ୍ରେଟ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ମିଶାନ୍ତୁ ଏବଂ ପ୍ଲେଟକୁ ସିଲ୍ କରନ୍ତୁ |ପ୍ଲେଟକୁ 37 ° C ରେ 10-20 ମିନିଟ୍ ପର୍ଯ୍ୟନ୍ତ ଇନକ୍ୟୁବେଟ୍ କରନ୍ତୁ |ପ୍ରତ୍ୟେକ କୂଅରେ 50 µl ଷ୍ଟପ୍ ସଲ୍ୟୁସନ୍ ଯୋଡନ୍ତୁ |ପ୍ଲେଟ୍ ତୁରନ୍ତ 450 nm ରେ ଏକ ସାଇଟେସନ୍ (ବାୟୋଟେକ୍) ପ୍ଲେଟ୍ ରିଡର୍ ବ୍ୟବହାର କରି ମାପ କରାଯାଇଥିଲା |
ଗୋଷ୍ଠୀ ଆକାର ବାଛିବା ପାଇଁ ଶକ୍ତି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହାକି 5% ପ୍ରକାର I ତ୍ରୁଟି ହାର ସହିତ ପାରାମିଟରରେ 10% ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଚିହ୍ନଟ କରିବାକୁ> 80% ଶକ୍ତି ପ୍ରଦାନ କରିବ | ଗୋଷ୍ଠୀ ଆକାର ବାଛିବା ପାଇଁ ଶକ୍ତି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହାକି 5% ପ୍ରକାର I ତ୍ରୁଟି ହାର ସହିତ ପାରାମିଟରରେ 10% ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପରିବର୍ତ୍ତନ ଚିହ୍ନଟ କରିବାକୁ> 80% ଶକ୍ତି ପ୍ରଦାନ କରିବ | Аназ мощности был выполнен для выбора размеров группасы, кот че обеспечат> 80% мощности для обнаружения 10% абсолтного изменения Параметра с 5% частотой сибибок чипа I. ଗୋଷ୍ଠୀ ଆକାର ବାଛିବା ପାଇଁ ଶକ୍ତି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହାକି 5% ପ୍ରକାର I ତ୍ରୁଟି ହାର ସହିତ 10% ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପାରାମିଟର ପରିବର୍ତ୍ତନ ଚିହ୍ନଟ କରିବାକୁ 80% ଶକ୍ତି ପ୍ରଦାନ କରିବ |进行 功效 分析 80 80 80> 80 ％ 功效 以 中 中 10 ％ 绝对 和 ％ 5 ％ I 型 错误 率。。。进行 功效 分析 80 80 80> 80 ％ 功效 以 中 中 10 ％ 绝对 和 ％ 5 ％ I 型 错误 率。。。 Был проведен Ма мощности для выбора размера группы, который обеспечил бы> 80% мощности для обнаружения 10% абсолтного изменения Параметров һәм 5% частоты акибок чипа I. ଏକ ଗୋଷ୍ଠୀ ଆକାର ବାଛିବା ପାଇଁ ଏକ ଶକ୍ତି ବିଶ୍ଳେଷଣ କରାଯାଇଥିଲା ଯାହାକି 10% ସଂପୂର୍ଣ୍ଣ ପାରାମିଟର ପରିବର୍ତ୍ତନ ଏବଂ 5% ପ୍ରକାର I ତ୍ରୁଟି ହାର ଚିହ୍ନଟ କରିବାକୁ> 80% ଶକ୍ତି ପ୍ରଦାନ କରିବ |ପରୀକ୍ଷଣ ପୂର୍ବରୁ ଟିସୁ ବିଭାଗଗୁଡିକ ମନଇଚ୍ଛା ଚୟନ କରାଯାଇଥିଲା |ସମସ୍ତ ବିଶ୍ଳେଷଣ ଅବସ୍ଥା ଅନ୍ଧ ଥିଲା ଏବଂ ସମସ୍ତ ତଥ୍ୟ ବିଶ୍ଳେଷଣ ହେବା ପରେ ନମୁନାଗୁଡିକ ଡିକୋଡ୍ କରାଯାଇଥିଲା |ସମସ୍ତ ପରିସଂଖ୍ୟାନ ବିଶ୍ଳେଷଣ କରିବାକୁ ଗ୍ରାଫପ୍ୟାଡ୍ ପ୍ରିଜିମ୍ ସଫ୍ଟୱେର୍ (ସାନ ଡିଏଗୋ, CA) ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା | ସମସ୍ତ ପରିସଂଖ୍ୟାନ ପାଇଁ, p- ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ <0.05 ମୂଲ୍ୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବିବେଚନା କରାଯାଉଥିଲା | ସମସ୍ତ ପରିସଂଖ୍ୟାନ ପାଇଁ, p- ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ <0.05 ମୂଲ୍ୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବିବେଚନା କରାଯାଉଥିଲା | Для всей стати пи-значения считались значимыми при значениях <0,05 ସମସ୍ତ ପରିସଂଖ୍ୟାନ ପାଇଁ, p- ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ <0.05 ମୂଲ୍ୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବିବେଚନା କରାଯାଉଥିଲା |对于 所有 统计 ， p p 值 0.05 <0.05 时 被 认为 是 着。。对于 所有 统计 ， p p 值 0.05 <0.05 时 被 认为 是 着。。 Для всей стати пи-значения считались значимыми при значениях <0,05 ସମସ୍ତ ପରିସଂଖ୍ୟାନ ପାଇଁ, p- ମୂଲ୍ୟଗୁଡ଼ିକ <0.05 ମୂଲ୍ୟରେ ଗୁରୁତ୍ୱପୂର୍ଣ୍ଣ ବିବେଚନା କରାଯାଉଥିଲା |କେବଳ 2 ଟି ତୁଳନାତ୍ମକ ତଥ୍ୟ ଉପରେ ଦୁଇ-ଲାଞ୍ଜର ଛାତ୍ରଙ୍କ ଟି-ଟେଷ୍ଟ କରାଯାଇଥିଲା |ଏକାଧିକ ଗୋଷ୍ଠୀ ମଧ୍ୟରେ ମହତ୍ତ୍ୱ ନିର୍ଣ୍ଣୟ କରିବାକୁ ଏକ-ବା ଦୁଇ-ମାର୍ଗ ANOVA ବ୍ୟବହୃତ ହୋଇଥିଲା |ପୋଷ୍ଟ ହକ୍ ପରୀକ୍ଷଣ କରିବା ସମୟରେ, ଏକାଧିକ ତୁଳନା ପାଇଁ ଆକାଉଣ୍ଟ୍ ପାଇଁ ଟୁକିଙ୍କ ସଂଶୋଧନ ପ୍ରୟୋଗ କରାଯାଇଥିଲା |ପଦ୍ଧତି ବିଭାଗରେ ବର୍ଣ୍ଣନା କରାଯାଇଥିବା ପରି FDR ଏବଂ p.adjust ଗଣନା କରିବା ସମୟରେ RNAsec ତଥ୍ୟର ବିଶେଷ ପରିସଂଖ୍ୟାନିକ ବିଚାର ରହିଛି |
ଅଧ୍ୟୟନ ଡିଜାଇନ୍ ବିଷୟରେ ଅଧିକ ସୂଚନା ପାଇଁ, ଏହି ଆର୍ଟିକିଲ୍ ସହିତ ଲିଙ୍କ୍ ହୋଇଥିବା ପ୍ରକୃତି ଅନୁସନ୍ଧାନ ରିପୋର୍ଟର ଅବକ୍ଷୟ ଦେଖନ୍ତୁ |