Mauruuru koe mo te toro ki Nature.com.Ko te putanga pūtirotiro e whakamahia ana e koe he iti te tautoko CSS.Mo te wheako pai rawa atu, e taunaki ana matou me whakamahi koe i tetahi kaitirotiro kua whakahoutia (me monohia ranei te Aratau Hototahi ki Internet Explorer).I tenei wa, hei whakarite i te tautoko tonu, ka tukuna e matou te waahi kaore he momo me te JavaScript.
He hiahia mo te punaha in vitro pono ka taea te whakaputa tika i te taiao whaiaroaro o te ngakau mo te whakamatautau tarukino.Na te iti o te waatea o nga punaha ahurea kikokiko ngakau tangata kua he te whakamaoritanga o nga paanga tarukino ngakau.I konei, kua whakawhanakehia e matou he tauira ahurea kikokiko ngakau (CTCM) e whakaihiihi hikoi ana i nga poro o te ngakau me te toronga tinana i roto i nga waahanga systolic me te diastolic o te huringa ngakau.I muri i nga ra 12 o te ahurea, ko tenei huarahi i whakapai ake i te oranga o nga waahanga ngakau, engari kaore i tino tiakina to raatau hanganga.Na reira, i muri i te tirotiro i te ngota ngota iti, i kitea e matou ko te taapiri o te 100 nM triiodothyronine (T3) me te 1 μM dexamethasone (Dex) ki to maatau reo i pupuri i te microstructure o nga waahanga mo nga ra 12.I te whakakotahitanga me te maimoatanga T3/Dex, ka mau tonu te punaha CTCM i nga tuhinga tuhi, te kaha, te mahi metabolic, me te hangai tika i te taumata rite ki te kiko ngakau hou mo nga ra 12.I tua atu, ko te nui o te toronga o te kiko o te ngakau i roto i te ahurea ka akiaki i te tohu tohu hypertrophic cardiac, e whakaatu ana i te kaha o te CTCM ki te whakatauira i nga tikanga hypertrophic i whakaawehia e te toronga ngakau.Hei whakamutunga, ka taea e CTCM te whakatauira i te ahuwhenua me te pathophysiology o te ngakau i roto i te ahurea mo nga wa roa, ka taea te tirotiro rongoa pono.
I mua i te rangahau haumanu, e hiahiatia ana nga punaha in vitro pono ka taea te whakaputa tika i te taiao whaiaroaro o te ngakau tangata.Ko enei punaha me whakatauira i te totoro miihini rereke, te tere o te ngakau, me nga ahuatanga hiko.Ko nga tauira kararehe ka whakamahia hei papa tirotiro mo te tinana o te ngakau me te iti o te pono ki te whakaata i nga paanga o nga raau taero ki te ngakau tangata1,2.I te mutunga ake, ko te Tauira Whakamātautau Tikanga Tikanga Taonga Pai (CTCM) he tauira tino tairongo me te motuhake mo nga momo wawaotanga rongoa me te rongoa, e whakaputa tika ana i te ahuwhenua me te pathophysiology o te ngakau tangata3.Ko te kore o taua punaha ka whakawhäitihia te kitenga o nga maimoatanga hou mo te ngoikore o te ngakau4,5 a na te mate ngakau o te tarukino te take nui mo te puta atu i te maakete6.
I roto i nga tau tekau kua hori, e waru nga raau taero kore-cardiovascular kua tangohia mai i te whakamahinga haumanu na te mea ka whakaroahia te wa o te QT ka pa atu ki te arrhythmias ventricular me te mate ohorere7.No reira, kei te piki haere te hiahia mo nga rautaki tirotiro a-mua ki te aromatawai i te kaha o te ngakau me te paitini.Ko te whakamahinga o nga cardiomyocytes (hiPS-CM) i ahu mai i te tangata i te tangata i roto i te tirotiro tarukino me te whakamatautau paitini ka puta he otinga mo tenei raru.Heoi, ko te ahua pakeke o te hiPS-CMs me te kore o te matatini maha o te kiko o te ngakau he tino herenga o tenei tikanga.Kua whakaatuhia e nga rangahau o tata nei ka taea te whakakore i tetahi waahanga ma te whakamahi i te hiPS-CM moata ki te hanga hydrogels kiko ngakau i muri tata mai i te tiimatanga o te whakaheke ohorere me te piki haere o te whakaongaonga hiko i roto i te waa.Engari, ko enei hiPS-CM microtissues kaore i te ahua o te electrophysiological me te kirimana o te myocardium pakeke.I tua atu, he hanganga uaua ake te kiko o te ngakau o te tangata, kei roto i te ranunga rereke o nga momo pūtau rereke, tae atu ki nga pūtau endothelial, neurons, me nga fibroblasts stromal, e honoa ana e nga huinga motuhake o nga pūmua matrix extracellular.Ko tenei rerekeetanga o nga taupori kore-cardiomyocyte11,12,13 i roto i te ngakau maminga pakeke he arai nui ki te whakatauira i te kiko ngakau ma te whakamahi i nga momo pūtau takitahi.Ko enei herenga nui e whakanui ana i te hiranga o te whakawhanake tikanga mo te whakatipu i te kiko o te ngakau i raro i nga ahuatanga o te tinana me te pathological.
Ko nga waahanga angiangi (300 µm) o te ngakau o te tangata kua kitea he tauira pai mo te miokardium tangata.Ma tenei tikanga ka uru atu ki te punaha 3D multicellular tino rite ki te kiko ngakau tangata.Heoi, tae noa ki te tau 2019, ko te whakamahinga o nga waahanga o te ngakau i whakawhäitihia e te poto (24 h) te oranga ahurea.Ko tenei na te maha o nga take tae atu ki te kore o te toronga-a-tinana-miihini, te atanga hau-wai, me te whakamahi i nga korero ngawari e kore e tautoko i nga hiahia o te kiko ngakau.I te tau 2019, he maha nga roopu rangahau i whakaatu ko te whakauru i nga mea miihini ki roto i nga punaha ahurea kikokiko ngakau ka taea te whakanui i te oranga ahurea, te whakapai ake i te ahua o te ngakau, me te peehi i te mate ngakau.E rua nga rangahau huatau 17 me 18 e whakaatu ana ko te utaina miihini uniaxial he painga pai ki te tohu tohu ngakau i te waa ahurea.Heoi, karekau enei rangahau i whakamahi i te utaina tinana-ahua-toru hihiko o te huringa ngakau, na te mea i utaina nga wahanga o te ngakau ki nga kaha toka inerite 17, ki te uta auxotonic linear 18 ranei.Ko enei tikanga mo te toronga o te kiko i peehia ai te maha o nga ira ngakau, i te kaha o te whakaputanga o nga ira e pa ana ki nga urupare totoro rerekee.Ko Pitoulis et al.I whakawhanakehia e 19 he pati ahurea tapatapahi ngakau hihiri mo te hanga huringa o te ngakau ma te whakamahi i nga urupare a te kaiwhakawhitinga kaha me nga puku taumaha.Ahakoa ka taea e tenei punaha te whakatauira tika ake i roto i te vitro cardiac cycle, na te uaua me te iti o te whakaputanga o te tikanga ka whakawhäitihia te whakamahinga o tenei punaha.No tata nei ta maatau taiwhanga i hanga he punaha ahurea ngawari ma te whakamahi i te whakaihiihi hiko me te huarahi pai hei pupuri i te oranga o nga waahanga o te porcine me te kiko ngakau tangata mo te 6 ra20,21.
I roto i te tuhinga o naianei, ka whakaahuahia e matou he tauira tikanga ahurea o te ngakau (CTCM) ma te whakamahi i nga waahanga o te ngakau porcine e whakauru ana i nga tohu whakakatakata ki te whakahoki ano i te ahu-toru-a-roto o te ngakau me te paheketanga pathophysiological i te huringa o te ngakau.Ka taea e tenei CTCM te whakanui ake i te tika o te matapae tarukino i mua i te haumanu ki te taumata kaore ano kia tutuki i mua ma te whakarato i te punaha o te ngakau whai hua, waenga-waenganui e whakataurite ana i te ahuwhenua / pathophysiology o te ngakau maminga mo te whakamatautau tarukino i mua i te haumanu.
Ko nga tohu miihini hemodynamic he mahi nui ki te pupuri i te mahi cardiomyocyte in vitro 22,23,24.I roto i te tuhinga o naianei, kua whakawhanakehia e matou he CTCM (Whakaahua 1a) ka taea te whakatauira i te taiao ngakau pakeke ma te whakauru i te whakaongaonga hiko me te miihini i nga iarere whaiaroaro (1.2 Hz, 72 nga patu i ia meneti).Hei karo i te totoro o te kiko i te wa o te diastole, i whakamahia he taputapu ta 3D hei whakanui ake i te rahi o te kiko ma te 25% (Fig. 1b).Ko te hikoi hiko na te punaha C-PACE i whakatauhia ki te tiimata i te 100 ms i mua i te systole ma te whakamahi i te punaha tango raraunga hei whakaputa katoa i te huringa ngakau.Ka whakamahia e te punaha ahurea kikokiko he kaiwhakatere pneumatic ka taea te whakarite (LB Engineering, Tiamana) ki te whakawhänui i te kirikiri kirikiri ngawari kia puta te roha o nga poro o te ngakau ki te ruuma o runga.I honohia te punaha ki tetahi raina hau o waho na roto i te whakawhiti pehanga, i taea ai te whakatika tika i te pehanga (± 1 mmHg) me te wa (± 1 ms) (Fig. 1c).
a Whakapiria te wahanga kiko ki te mowhiti tautoko 7 mm, ka whakaatuhia ki te puru, ki roto i te ruma ahurea o te taputapu.Ka wehea te ruuma ahurea mai i te ruuma hau e te kiriuhi silicone angiangi ngawari.Whakanohoia he pene ki waenga i ia ruma kia kore ai e pakaru.Kei roto i te taupoki o te taputapu nga hiko kauwhata hei whakaihiihi hiko.b He tohu hoahoa o te taputapu kiko nui, te mowhiti kaiarahi me te mowhiti tautoko.Ko nga waahanga kiko (parauri) ka whakanohohia ki runga i te taputapu nui me te mowhiti kaiarahi i tuu ki roto i te riu ki te taha o waho o te taputapu.Ma te whakamahi i te aratohu, ata whakanohohia te mowhiti tautoko kua pania ki te whakapiri kiriaku kiko ki runga i te waahanga o te kiko ngakau.c Te kauwhata e whakaatu ana i te wa o te whakaihiihi hiko hei mahi o te pehanga o te ruma hau e whakahaeretia ana e te kaiwhakatere pneumatic programmable (PPD).I whakamahia he taputapu tango raraunga ki te tukutahi i te whakaihiihi hiko ma te whakamahi i nga pukoro pehanga.Ka tae te pehanga o te ruma ahurea ki te paepae kua whakaritea, ka tukuna he tohu pupuhi ki te C-PACE-EM hei whakaoho i te whakaihiihi hiko.d te ahua o nga CTCM e wha kua tuu ki runga i te whata incubator.E wha nga taputapu e hono ana ki tetahi PPD na roto i te iahiko pneumatic, a ka whakauruhia nga puoro pehanga ki roto i te waahi hemostatic hei aroturuki i te pehanga i roto i te iahiko pneumatic.Kei ia taputapu e ono nga waahanga kiko.
Ma te whakamahi i tetahi kaitahuri pneumatic kotahi, ka taea e matou te whakahaere i nga taputapu 4 CTCM, ka taea e ia te pupuri i nga waahanga kiko 6 (Fig. 1d).I roto i te CTCM, ka huri te pehanga hau i roto i te ruuma hau ki te pehanga tukutahi i roto i te ruuma wai me te whakaawe i te whakawhänui-a-tinana o te poro o te ngakau (Whakaahua 2a me te Whitiāhua Tāpiri 1).Aromātai o te toronga kiko i te 80 mm Hg.Toi.i whakaatu te toronga o nga wahanga kiko e 25% (Fig. 2b).Kua whakaatuhia tenei paheketanga totoro ki te roa o te sarcomere ahupūngao o te 2.2-2.3 µm mo te kaha o te wehenga ngakau noa17,19,25.I aromatawaihia te nekehanga o te kopa ma te whakamahi i nga tautuhinga kamera ritenga (Whakaahua 1).Ko te kaha me te tere o te nekehanga o te kiko (Fig. 2c, d) i rite ki te totoro i te wa o te huringa ngakau me te wa i te systole me te diastole (Fig. 2b).Ko te toronga me te tere o te kiko ngakau i te wa e whakaheke ana me te whakangawari ka noho tonu mo nga ra 12 i roto i te ahurea (Fig. 2f).Hei arotake i te painga o te whakaihiihi hiko i runga i te kirimana i te wa o te ahurea, i hangaia e matou he tikanga mo te whakatau i te ahua o te kaha o te mahi ma te whakamahi i te algorithm whakamarumaru (Taupiri Fig. 2a, b) ka taea te wehewehe i nga rereketanga me te kore o te whakaihiihi hiko.Ko taua wahanga o te ngakau (Fig. 2f).I roto i te rohe neke o te tapahi (R6-9), ko te ngaohiko i te wa o te whakaihiihi hiko he 20% teitei ake i te kore o te hikohiko hiko, e tohu ana i te takoha o te hiko hiko ki te mahi kirimana.
Ko nga tohu o te pehanga o te ruma hau, te pehanga o te ruuma wai, me nga inenga nekehanga kiko e whakapumau ana ka huri te pehanga o te ruma i te pehanga o te ruma wai, ka puta he nekehanga o te poro kiko.b He tohu o te ōrau totoro (puru) o nga wahanga kiko e rite ana ki te ōrau totoro (karaka).c He rite tonu te nekehanga ine o te poro ngakau ki te tere o te neke ine.(d) Ko nga ahuatanga o te nekehanga porohita (raina kikorangi) me te tere (raina iraira karaka) i roto i tetahi poro o te ngakau.e Te inenga o te wa hurihanga (n = 19 poro mo ia roopu, mai i nga poaka rereke), te wa whakaheke (n = 19 poro mo ia roopu), te wa whakangawari (n = 19 poro mo ia roopu, mai i nga poaka rereke), te nekehanga o te kiko (n = 25).poro)/rōpū mai i nga poaka rereke), te tere tere systolic (n = 24(D0), 25(D12) poro/rōpū mai i nga poaka rereke) me te tere whakangawari (n=24(D0), 25(D12) poro/rōpū mai i nga poaka rereke).Ko te whakamatautau-t-a-a-akonga rua-hiku karekau he rereketanga nui i roto i tetahi tawhā.f Ko te tātari riaka mangai nga tohu o nga waahanga kiko me te (whero) me te kore (puru) whakaihiihi hiko, tekau nga rohe rohe o nga waahanga kiko mai i te waahanga kotahi.Ko nga panui o raro e whakaatu ana i te inenga o te paheketanga o te rereketanga o te riipene i roto i nga waahanga kiko me te kore whakaihiihi hiko i roto i nga waahi tekau mai i nga waahanga rereke. (n = 8 poro/rōpū mai i nga poaka rereke, Ka mahia te whakamatautau-t-a-akonga-rua; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05). (n = 8 poro/rōpū mai i nga poaka rereke, Ka mahia te whakamatautau-t-a-akonga-rua; ****p <0.0001, **p <0.01, *p <0.05). (n = 8 срезов/группу от разных свиней, проводится двусторонний t-критерий Стьюдента; ****p<0,0001, **p<0,01, *p<0,05). (n = 8 nga wahanga/rōpū mai i nga poaka rereke, te whakamatautau-t a te tauira-rua; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05). （n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；****p < 0.0001，**p < 0.01，*p < 0.05）。 （n = 8 片/组，来自不同的猪，进行双尾学生t 检验；****p < 0.0001，**p < 0.01，*p < 0.05）。 (n = 8 срезов/группу, от разных свиней, двусторонний критерий Стьюдента; ****p <0,0001, **p <0,01, *p <0,05). (n = 8 wahanga/rōpū, mai i nga poaka rereke, te whakamatautau-t a te tauira-rua; ****p<0.0001, **p<0.01, *p<0.05).Ko nga pae hapa e tohu ana i te toharite ± inenga paerewa.
I roto i ta maatau punaha ahurea tapahi ngakau biomimetic o mua [20, 21], i mau tonu taatau i te kaha, te mahi, me te tika o te hanganga o nga poro ngakau mo nga ra 6 ma te whakamahi i te whakaongaonga hiko me te arotau i te hanganga reo.Heoi, i muri i nga ra 10, ka tino heke enei tatauranga.Ka korero matou ki nga waahanga kua whakatipuhia i roto i ta maatau punaha ahurea koiora o mua 20, 21 tikanga whakahaere (Ctrl) a ka whakamahia e matou to maatau reo kua arotauhia i mua hei tikanga MC me te ahurea i raro i te whakaihiihi miihini me te hiko hiko (CTCM).ka karangahia.Tuatahi, i whakatauhia e matou ko te whakaihiihi miihini me te kore o te hiko hiko he iti rawa ki te pupuri i te oranga o te kiko mo nga ra 6 (Taupiri Fig. 3a, b).Ko te mea whakamiharo, me te whakauru o te whakaihiihi tinana me te hiko hiko ma te whakamahi i te STCM, ko te kaha o nga waahanga ngakau 12-ra i noho rite tonu ki nga waahanga ngakau hou i raro i nga tikanga MS, engari kaore i raro i nga tikanga Ctrl, e whakaatuhia ana e te MTT tātaritanga (Fig. 1).3a).E tohu ana tenei ka taea e te whakaihiihi miihini me te whaihanga o te huringa ngakau te pupuri i nga waahanga kiko mo te rua o te roa o te korero i roto i ta maatau punaha ahurea pateko o mua.Engari, ko te aromatawai i te hanganga hanganga o nga waahanga kiko ma te immunolabeling o te cardiac troponin T me te connexin 43 i whakaatu ko te whakaaturanga connexin 43 he tino teitei ake i roto i nga kopa MC i te ra 12 i nga mana whakahaere i te ra kotahi.Engari, kaore i tino tiakina te whakaaturanga connexin 43 me te hanganga Z-disc (Fig. 3b).Ka whakamahia e matou he anga mahi mohio (AI) ki te ine i te tika o te hanganga kiko26, he paipa ako hohonu e ahu mai ana i te ahua i runga i te troponin-T me te paninga hono43 hei tatau aunoa i te tika o te hanganga me te rere o nga poro o te ngakau i runga i te kaha o te waahi.Ka whakamahia e tenei tikanga he Convolutional Neural Network (CNN) me te anga ako hohonu kia pono te ine i te hanganga o te kiko ngakau i roto i te tikanga aunoa me te kore noa, pera i te korero i roto i te tohutoro.26. Ko te kiko o te MC kua pai ake te ahua o te hanganga ki te ra 0 ka whakaritea ki nga waahanga mana pateko.I tua atu, i whakaatuhia e te taatai ​​trichrome a Masson he iti iho te paheketanga o te fibrosis i raro i nga tikanga MS ka whakaritea ki nga tikanga whakahaere i te ra 12 o te ahurea (Fig. 3c).Ahakoa i whakanuia e te CTCM te kaha o nga waahanga o te ngakau i te ra 12 ki te taumata e rite ana ki te kiko o te ngakau hou, kaore i tino pai te whakapai ake i te hanganga o nga waahanga o te ngakau.
Ko te kauwhata Pae e whakaatu ana i te inenga o te oranga o te MTT o nga poro ngakau hou (D0) me te ahurea poro ngakau mo nga ra 12 ahakoa i roto i te ahurea pateko (D12 Ctrl) ranei i roto i te CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl), 12 (D12 MC) poro/rōpū/rōpū mai i te poaka rereke o te D##0, he <1 te huarahi whakamatautau AN##0, me te <1 te poaka o AN##0. **p <0.01 whakaritea ki D12 Ctrl). Ko te kauwhata Pae e whakaatu ana i te inenga o te oranga o te MTT o nga poro ngakau hou (D0) me te ahurea poro ngakau mo nga ra 12 ahakoa i roto i te ahurea pateko (D12 Ctrl), i roto ranei i te CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl ), 12 (D12 MC) nga waahanga/rōpū ka mahia he whakamatautau/rōpū mai i te D##0. me **p <0.01 i whakaritea ki D12 Ctrl).e whakaatu ana te histogram te inenga o te oranga o nga wahanga ngakau hou MTT (D0) me te ahurea o nga wahanga ngakau mo nga ra 12 i roto i te ahurea pateko (mana D12) ranei CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (mana D12).####p < 0,0001 по сравнению с D0 и **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 whakaritea ki D0 me **p <0.01 whakaritea ki D12 Ctrl). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切幇(D12 MC)幇(D0)幇12 天的MTT 活力的量化)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 ，与D0 ， tr000 D0 ，tr000相比，**p < 0.01). a 条形图显示在静态培养(D12 Ctrl) 或CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl) 中新鲜心脏切片(D12)片(D12)猇(D0) 12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；与D0 相比，####p < 0.0001，与D12 Ctrl 相比，**p。)histogram e whakaatu ana i te inenga o te oranga o te MTT i roto i nga waahanga ngakau hou (D0) i nga waahanga ngakau ranei i whakatipuhia mo nga ra 12 i roto i te ahurea pateko (mana D12) ranei CTCM (D12 MC) (n = 18 (D0), 15 (mana D12)), 12 (D12 MC) waahanga/rōpū mai i nga poaka rereke, kotahi-ara whakamatautau ANOVA;####p < 0,0001 по сравнению с D0, **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). ####p <0.0001 whakaritea ki D0, **p <0.01 whakaritea ki D12 Ctrl).b Troponin-T (matomato), connexin 43 (whero) me DAPI (puru) i roto i nga waahanga ngakau hou (D0), nga waahanga ngakau ranei i whakatipuhia i raro i nga tikanga pateko (Ctrl) me nga tikanga CTCM (MC) mo nga ra 12) o nga whakaahua immunofluorescence (tauine patea = 100 µm). Ko te inenga o te mohiotanga o te ngakau o te kiko o te ngakau (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) poro / roopu mai i te poaka rereke, ka mahia te whakamatautau ANOVA kotahi; ####p <0.0001 i whakaritea ki te D0 me te ****p <0.0001 ki te D12 Ctrl). Ko te ine inenga mohio o te kiko o te ngakau (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) poro / roopu mai i nga poaka rereke, ka mahia te whakamatautau ANOVA kotahi; ####p <0.0001 whakaritea ki D0 me ****p <0.0001 ki te D12 Ctrl). Количественная оценка структурной целостности сердечной тпкани искусственным интеллектом (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl2), MC52 Ctrl2 зных свиней, проводится однофакторный тест ANOVA; ####p < 0,0001 по сравнению с D0 и ****p < 0,0001 по сравнению Ctrlс D12). Ko te inenga o te hanganga hanganga o te kiko ngakau na roto i te mohio mohio (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) nga waahanga / roopu mai i nga poaka rereke, i mahia te whakamatautau ANOVA kotahi; ####p <0.0001 vs. me D0 me ****p <0.0001 Ctrl).人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) poro/rōpū o ia poaka rereke, kotahi-ara whakamatautau ANOVA;####p01 ，####p01 ，####p01 ，0.****p01 ，####p01 ，0.****p01 ，0.****p01 ，0. 001 与D12 Ctrl 相比）.人工智能量化心脏组织结构完整性（n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) poro/rōpū ia o nga poaka rereke, kotahi-ara whakamatautau ANOVA;##p0 ，0##p 0.0. 001 与D12 Ctrl 相比）. Искусственный интеллект для количественной оценки структурной целостности сердечной ткани (n = 7 (D0), срl2 (D12) Ctrl (D12) у каждой из разных свиней, односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001 vs. D0 Для сравнения ****p < 0,0001 по сравнению с D12). Maramatanga Artificial ki te ine i te hanganga o te kiko o te ngakau (n = 7 (D0), 7 (D12 Ctrl), 5 (D12 MC) nga waahanga / roopu o ia poaka rereke, whakamatautau ANOVA kotahi; c Ko nga whakaahua (maui) me te inenga (matau) mo nga poro ngakau kua pokea ki te paru trichrome a Masson (Tauine kore = 500 µm) (n = 10 poro/rōpū mai ia poaka rereke, ka mahia te whakamatautau ANOVA kotahi-ara; ####p <0.0001 whakaritea ki te D0 me te ***p1 <0.001 ki te D0 me te ***pl <0.00). c Ko nga whakaahua kanohi (taha maui) me te ine (matau) mo nga poro ngakau kua pokea ki te paru trichrome a Masson (Tauine kore = 500 µm) (n = 10 poro/rōpū ia mai i nga poaka rereke, ka mahia te whakamatautau ANOVA kotahi; #### p <0.0001 ki te D0 me te ***ptr <0.0001 ki te D0 me te ***ptr <0.0. c Репрезентативные изображения (слева) и количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашенных трихромным количественная оценка (справа) срезов сердца, окрашенных трихромным красимбсите ытия = 500 мкм) (n = 10 срезов/группу от разных свиней, выполняется односторонний тест ANOVA; #### p < 0,0001 D по синей, выполняется односторонний тест ANOVA; #### p < 0,0001 D по синей нию с D12 Ctrl). c Ko nga whakaahua kanohi (taha maui) me te ine (matau) o nga wahanga ngakau kua pokea ki te maaka trichrome a Masson (tauine kore = 500 µm) (n = 10 nga waahanga/rōpū mai i nga poaka rereke, i mahia te whakamatautau ANOVA kotahi; #### p <0 .0001 i whakaritea ki te D0 me te ***p <0.001 ki te D1 me te ***p <0.001). c 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像（左）和量化（右）（裸尺度（裸尺度 （裸尺度 （裸尺度 （裸尺度 （尺0 度 = 50n片/组，每组来自不同的猪，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 相比，***p < 0.001 与D1 。 C 用 masson 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 （左 左） 量化 （右） 裸尺度 裸尺度 裸尺度 裸度500 µm） （n = 10 个 切片 组 每 组 来自 不同 猪 ， 进行 单向 单向 Anova 测##00；中文 ，0*##试p < 0.001 与 D12 Ctrl 相比）。 c Репрезентативные изображения (слева) и количественный анализ (справа) срезов сердца, окрашенных трихроямным красител50ста мкм) (n = 10 срезов/группа, каждый от другой свиньи, протестировано с помощью однофакторного дисперсиой;#0,0 сио;## нению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c Ko nga whakaahua kanohi (taha maui) me te ine (matau) o nga wahanga ngakau kua pokea ki te maaka trichrome a Masson (patea = 500 µm) (n = 10 nga wahanga/rōpū, ia tangata mai i te poaka rereke, i whakamatauria e te wetewete huarahi kotahi o te rereketanga ;### # p <0.0001 whakaritea ki D0, ***p < 0.1).Ko nga pae hapa e tohu ana i te toharite ± inenga paerewa.
I whakapae matou ma te taapiri i nga ngota ngota iti ki te tikanga ahurea, ka taea te whakapai ake te pono o te cardiomyocyte me te whakaheke i te whanaketanga fibrosis i te wa o te ahurea CTCM.Na reira i tirotirohia e matou mo nga ngota ngota iti ma te whakamahi i o maatau ahurea whakahaere pateko20,21 na te iti o nga mea whakararu.Ko te Dexamethasone (Dex), te triiodothyronine (T3), me te SB431542 (SB) i whiriwhiria mo tenei mata.Ko enei ngota ngota iti kua whakamahia i mua i roto i nga ahurea hiPSC-CM ki te whakatairanga i te maoatanga o nga cardiomyocytes ma te whakanui ake i te roa o te sarcomere, T-tubules, me te tere tere.I tua atu, ko te Dex (he glucocorticoid) me te SB e mohiotia ana ki te whakakore i te mumura29,30.Na reira, i whakamatauria e matou mehemea ko te whakaurunga o te kotahi, o te whakakotahitanga ranei o enei ngota ngota iti ka pai ake te tika o te hanganga o nga wahanga ngakau.Mo te tirotiro tuatahi, i tohua te horopeta o ia puhui i runga i nga kuhanga e whakamahia nuitia ana i roto i nga tauira ahurea pūtau (1 μM Dex27, 100 nM T327, me te 2.5 μM SB31).I muri i nga ra 12 o te ahurea, ko te whakakotahitanga o te T3 me te Dex i hua mai i te tino pai o te hanganga o te cardiomyocyte me te whakarereketanga iti o te kiko (Taupiri 4 me te 5).I tua atu, ko te whakamahi i te rua, te rua ranei o enei kuhanga o T3 me Dex ka puta nga paanga kino ki te whakataurite ki nga kohinga noa (Taapiri Fig. 6a,b).
I muri i te tirotiro tuatahi, i mahia e matou he whakataurite mahunga ki te upoko o nga tikanga ahurea e 4 (Whakaahua 4a): Ctrl: nga waahanga ngakau i mahia i roto i ta maatau tikanga pateko i whakaahuahia i mua ma te whakamahi i to maatau reo papai;20.21 TD: T3 me Ctrl s Added Dex i te Wenerei;MC: nga waahanga ngakau i whakatipuria i roto i te CTCM ma te whakamahi i to maatau reo kua arotauhia i mua;me MT: CTCM me te T3 me te Dex i taapiri atu ki te reo.I muri i nga ra 12 o te maara, ka noho tonu te oranga o nga kopa MS me te MT ki nga kopa hou i aromatawaihia e te MTT assay (Fig. 4b).Ko te mea whakamiharo, ko te taapiri o te T3 me te Dex ki nga ahurea whakawhiti (TD) kaore i tino pai ake te kaha ki te whakarite ki nga tikanga Ctrl, e tohu ana i te mahi nui o te whakaihiihi miihini ki te pupuri i te oranga o nga waahanga ngakau.
he hoahoa hoahoa whakamatautau e whakaatu ana i nga tikanga ahurea e wha i whakamahia hei arotake i nga paanga o te whakaihiihi miihini me te taapiri T3/Dex ki te reo mo te 12 ra. b Ko te kauwhata pae e whakaatu ana i te inenga o te oranga 12 ra i muri mai i te ahurea i roto i nga tikanga ahurea 4 katoa (Ctrl, TD, MC, me MT) ka whakaritea ki nga poro ngakau hou (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD me D12 MT), 12 (D12 MC) porowhita/rōpū-whakamatautau-a-tahi ###0, AN##0, AN###0. p <0.001 whakaritea ki D0 me **p <0.01 whakaritea ki D12 Ctrl). b Ko te kauwhata pae e whakaatu ana i te inenga o te oranga 12 ra i muri mai i te ahurea i roto i nga tikanga ahurea 4 katoa (Ctrl, TD, MC, me MT) ka whakaritea ki nga poro ngakau hou (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD me D12 MT), 12 (D12 MC) porowhita/rōpū-whakamatautau-a-tahi ###0, AN##0, AN###0. p <0.001 whakaritea ki D0 me **p <0.01 whakaritea ki D12 ctrl). b Гистограмма показывает количественную оценку жизнеспособности через 12 дней после культивирования во вселоникрот 4 роль, TD, MC me MT) na roto i te сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD me D12 MT), 12 (D12 MC) усра. й, проводится односторонний тест ANOVA; ####p < 0,0001, ##p < 0,001 по сравнению с D0 me **p < 0,01 по сравнению с D12 Ctrl). b Ko te kauwhata pae e whakaatu ana i te inenga o te oranga i nga ra 12 i muri i te ahurea i roto i nga tikanga ahurea 4 katoa (mana, TD, MC, me MT) i whakaritea ki nga waahanga ngakau hou (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD, me D12 MT), 12 (D12 MC, me te MT) nga waahanga whakamatautau / ###0 poaka rereke; p <0.001 ki D0 me **p <0.01 i whakaritea ki D12 Ctrl). b 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) (n = 18 (Dl5)、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) (n = 18 (Dl5)、D0、 12 MT)，来自不同猪的12 (D12 MC) 切片/组，进行单向ANOVA 测试；####p < 0.0001，###p < 0.001 与我物 ，D0 . ）.b 4 12 (D12 MC) b Гистограмма, показывающая все 4 условия культивирования (контроль, TD, MC и MT) по сравнению со свежими (сердими серди) (8 DIRI) (8 D) 12 Ctrl, D12 TD me D12 MT), na te разных свиней 12 (D12 MC) срезы/группа, односторонний тест ANOVA; ####p <0,0001, ####p <0,001 по внению с контролем D12). b Histogram e whakaatu ana i nga tikanga ahurea 4 katoa (mana, TD, MC me MT) i whakaritea ki nga waahanga ngakau hou (D0) (n = 18 (D0), 15 (D12 Ctrl, D12 TD me D12 MT), mai i nga poaka rereke 12 (D12 MC) nga waahanga / roopu, kotahi-ara ANOVA whakamatautau; #####p<0.0. 1 me te mana D12). c Ko te kauwhata pae e whakaatu ana i te inenga o te rere o te huka 12 ra i muri i te ahurea i roto i nga tikanga ahurea 4 katoa (Ctrl, TD, MC, me MT) i whakaritea ki nga poro ngakau hou (D0) (n = 6 poro/rōpū mai i nga poaka rereke, ka mahia te whakamatautau ANOVA kotahi; ###p <0.001, whakaritea ki D0 me ***p <0.001). c Ko te kauwhata pae e whakaatu ana i te inenga o te rere o te huka 12 ra i muri i te ahurea i roto i nga tikanga ahurea 4 katoa (Ctrl, TD, MC, me MT) i whakaritea ki nga poro ngakau hou (D0) (n = 6 poro/rōpū mai i nga poaka rereke, ka mahia te whakamatautau ANOVA kotahi; ###p <0.001, whakaritea ki D0 me ***p <0.001). c Гистограмма показывает количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивирования в всех 4 лухник ь, TD, MC me MT) he сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группу от разных свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группу от разных свиней, одностотялнин0, одностотялнин0, одностотялнин0, одностотялнин 0 по сравнению с D0 и ***p < 0,001 по сравнению с D12 Ctrl). c whakaatu ana te Histogram te inenga o te rere o te glucose 12 ra i muri i te ahurea i raro i nga tikanga ahurea 4 katoa (mana, TD, MC me MT) ka whakaritea ki nga waahanga ngakau hou (D0) (n = 6 nga waahanga / roopu mai i nga poaka rereke, i mahia te whakamatautau ANOVA kotahi; ###p <0.001 ki te D0 me te ***p <0.001 Ctrl ki te D1). c 条形图显示所有4 种培养条件（Ctrl、TD、MC 和MT）与新鲜心脏切片(D0) 相比 的城吹通量定量（n = 6 片/组，来自不同猪，单向执行ANOVA 测试；###p < 0.001，与D0 相比， tr***p 1.***p 。 C 条形图 显示 所有 4 种 条件 （（ctrl 、 td 、 mc 和 mt） 新鲜 心脏 切片 切片 ， 切片后 后 12 天 的 通量 定量 （n = 6 片/组 ， 来自 猪 ， ， ， ， ， ， ， 猪 猪单向执 猪单向执 ，丌行向0.相比，***p < 0.001 与D12 Ctrl 相比）。 c Гистограмма, показывающая количественную оценку потока глюкозы через 12 дней после культивирования для вселькования нтроль, TD, MC, me MT) по сравнению со свежими срезами сердца (D0) (n = 6 срезов/группа, от разных свиней, тердностров; ##p < 0,001 по сравнению с D0, ***p < 0,001 по сравнению с D12 (контроль). c Histogram e whakaatu ana i te inenga o te rere o te glucose i nga ra 12 i muri i te ahurea mo nga tikanga ahurea 4 katoa (mana, TD, MC, me MT) i whakaritea ki nga waahanga ngakau hou (D0) (n = 6 nga waahanga / roopu, mai i nga poaka rereke, unilateral I mahia nga whakamatautau ANOVA, ###p <0.001 i whakaritea ki te D0, ***p <0.001 ki D0, ***p <0.d Ko nga mahinga tātaritanga o nga papanga hou (puru), ra 12 MC (matomato), me te ra 12 MT (whero) i nga waahanga waahanga kiko-a-rohe tekau (n = 4 poro / roopu, whakamatautau ANOVA kotahi; kaore he rereketanga nui i waenga i nga roopu).e Mahinga puia e whakaatu ana i nga ira rerekee i roto i nga wahanga ngakau hou (D0) ka whakatauritea ki nga wahanga ngakau i whakatipuria i raro i nga tikanga pateko (Ctrl), i raro ranei i nga tikanga MT (MT) mo te 10-12 ra.f Mahere wera o nga ira sarcomere mo nga wahanga ngakau i whakatipuria i raro i ia tikanga tikanga.Ko nga pae hapa e tohu ana i te toharite ± inenga paerewa.
Ko te ti'aturi o te metabolic ki te whakawhiti mai i te waikawa waikawa ngako ki te glycolysis he tohu o te wehenga cardiomyocyte.Ko nga cardiomyocytes pakeke e whakamahi ana i te hukahuka mo te hanga ATP me te whai mitochondria hypoplastic me te iti o te cristae5,32.I whakaatuhia e nga tātaritanga whakamahi huka i raro i nga tikanga MC me MT, he rite te whakamahinga o te huka ki tera i nga ra 0 o nga kopa (Whakaahua 4c).Heoi, i whakaatu nga tauira Ctrl i te pikinga nui o te whakamahi hukahuka ki te kiko hou.Ko tenei e tohu ana ko te whakakotahitanga o te CTCM me te T3/Dex ka whakanui ake i te oranga o te kiko me te pupuri i te tohu tohu o te 12-ra nga waahanga ngakau whakatipu.I tua atu, i whakaatuhia e te tātari riaka he rite tonu nga taumata riaka ki te kiko ngakau hou mo nga ra 12 i raro i nga tikanga MT me MS (Fig. 4d).
Hei tātari i te paanga katoa o te CTCM me te T3/Dex ki runga i te whenua whakamaoritanga o te ao o te kikokiko poro ngakau, i mahia e matou te RNAseq ki nga poro ngakau mai i nga tikanga ahurea rereke e wha (Raraunga Tāpiri 1).Ko te mea whakamiharo, ko nga waahanga MT i whakaatu i te ahua o te whakamaoritanga nui ki te kiko ngakau hou, me te 16 anake te whakaatu rereke mai i nga ira 13,642.Heoi ano, pera i ta maatau i whakaatu i mua, ka whakaatuhia e nga poro Ctrl 1229 nga momo ira rereke i muri i nga ra 10-12 i roto i te ahurea (Fig. 4e).Ko enei raraunga i whakapumautia e te qRT-PCR o nga ira ngakau me te fibroblast (Taupiri Fig. 7a-c).He mea whakamiharo, ko nga waahanga Ctrl i whakaatu i te whakahekenga o nga ira o te ngakau me te huringa o te pūtau me te whakahohe i nga kaupapa ira mumura.Ko enei korero e kii ana ko te wehewehenga, ka puta i muri i te whakatoranga mo te wa roa, ka tino whakahekehia i raro i nga tikanga MT (Taupiri Fig. 8a,b).Ko te ata tirotiro i nga ira sarcomere i whakaatu i raro noa i nga tikanga MT ko nga ira e whakawaehere ana i te sarcomere (Fig. 4f) me te hongere katote (Taupiri 9) ka tiakina, ka tiakina mai i te aukati i raro i nga tikanga Ctrl, TD, me MC.Ko enei raraunga e whakaatu ana me te whakakotahitanga o te whakaihiihi miihini me te whakakatakata (T3/Dex), ka noho rite tonu te tuhinga o te poro o te ngakau ki nga poro ngakau hou i muri i nga ra 12 i te ahurea.
Ko enei kitenga whakawhitinga e tautokohia ana e te mea ko te hanganga o te hanganga o te cardiomyocytes i roto i nga waahanga o te ngakau ka tino tiakina i raro i nga tikanga MT mo nga ra 12, e whakaatuhia ana e te connexin 43 tonu me te waahi (Fig. 5a).I tua atu, ko te fibrosis i roto i nga waahanga ngakau i raro i nga tikanga MT i tino whakahekehia ki te Ctrl me te rite ki nga waahanga ngakau hou (Fig. 5b).Ko enei raraunga e whakaatu ana ko te whakakotahitanga o te whakaihiihi miihini me te maimoatanga T3 / Dex he pai te tiaki i te hanganga ngakau i roto i nga waahanga ngakau i roto i te ahurea.
he whakaahua immunofluorescence māngai o te troponin-T (matomato), connexin 43 (whero), me DAPI (puru) i roto i nga waahanga ngakau hou (D0) i whakatohia ranei mo nga ra 12 i roto i nga tikanga ahurea o te wahanga ngakau e wha (papa tauine = 100 µm).). Ko te inenga mohio artificial mo te hanganga o te hanganga o te ngakau (n = 7 (D0 me D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC me D12 MT) poro / roopu mai i nga poaka rereke, ka mahia te whakamatautau ANOVA kotahi; ####p <0.0001 i whakaritea ki te D0 me te *p <0.00tr <0.05 ranei). Ko te ine inenga mohio o te hanganga o te ngakau o te ngakau (n = 7 (D0 me D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC me D12 MT) nga poro / roopu mai i nga poaka rereke, ka mahia te whakamatautau ANOVA kotahi; #### p <0.0001 i whakaritea ki te D0 me te *p <0****p <0.05 ranei). Количественная оценка структурной целостности ткани сердца с помощью искусственного интеллекта (n = 7 (D0 2 D12) MC (D0 2 D15) срезов/группу от разных свиней, проведен однофакторный тест ANOVA; 2 Ctrl). Ko te ine i te hanganga o te hanganga o te kiko o te ngakau ma te whakamahi i te mohio mohio (n = 7 (D0 me D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC me D12 MT) nga waahanga / roopu mai i nga poaka rereke, i mahia te whakamatautau ANOVA kotahi; #### p <0.0001 i whakaritea ki te D0 me te *p <****p <0.05 ranei.对不同猪的心脏组织结构完整性（n = 7（D0 和D12 Ctrl）、5（D12 TD、D12 MC 和人/廇至）智能量化，进行单向ANOVA 测试；#### p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或****p < 0.0001 与缉所。对 不同 猪 的 心脏 结构 完整性 （n = 7 （d0 和 d12 ctrl） （5 （d12 td 、 d12 mc 和 d1量 化 进行 单向 单向 单向 测试 ； ########## p < 0.0001 与D0 和*p < 0.05 相比，或****p 1；或****p < 2.Te inenga o te hanganga o te kiko o te ngakau ma te whakamahi i te mohio mohio i roto i nga poaka rereke (n = 7 (D0 me D12 Ctrl), 5 (D12 TD, D12 MC me D12 MT) nga waahanga / roopu) me te whakamatautau ANOVA kotahi;#### p <0,0001 по сравнению с D0 и *p <0,05 ranei ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). #### p <0.0001 whakaritea ki D0 me *p <0.05 ranei ****p <0.0001 whakaritea ki D12 Ctrl). b Ko nga whakaahua me te inenga mo nga poro ngakau kua pokea ki te paru trichrome a Masson (Pae tauine = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, me D12 MC), 9 (D12 MT) poro/rōpū mai i nga poaka rereke, ka mahia te whakamatautau ANOVA kotahi-ara <0.##0##0 <1 *** ki te ##0##0; ***0; 1, ranei ****p <0.0001 whakaritea ki D12 Ctrl). b Ko nga whakaahua me te inenga mo nga poro ngakau kua pokea ki te paru trichrome a Masson (Pae tauine = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD, me D12 MC), 9 (D12 MT) poro/rōpū mai i nga poaka rereke, ka mahia te whakamatautau ANOVA kotahi-ara <0.##0##0 <1 *** ki te ##0##0; ***0; 1, ranei ****p <0.0001 whakaritea ki D12 Ctrl). b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромным красителем Массона (массона) = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD и D12 MC), 9 (D12 MT) срезов/группу от разных свиней, выполняется односторонний тест01 ,##0 тест ANOVA; ##0. ***p <0,001 ranei ****p <0,0001 по сравнению с D12 Ctrl). b Ko nga whakaahua tohu me te ine o nga waahanga ngakau kua pania ki te maaka trichrome a Masson (pae tauine = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD me D12 MC), 9 (D12 MT) nga waahanga/rōpū mai i nga poaka rereke, i mahia <1p ##0.<1p ##0. p <0.0001 me D12 Ctrl). b 用Masson 三色染料染色的心脏切片的代表性图像和量化（比例尺= 500 µm）！n = 2、D0）（n = 10（D 10） D12 MC），来自不同猪的9 个（D12 MT）切片/组，进行单因素方差分析；##****##p < 0.0001 ，*p01 ，*p01 ，*p*** 0.0001 与D12 Ctrl 相比）. b 用 masson 三 色 染料 的 心脏 切片 的 代表性 和 量化 （比例 尺 尺 尺 = 500 µm） = 500 µm） ） 、 d12 td 和 d12 mc） 来自 不同 的 9 个 d12 mt 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片切片 切片 切片 切片 切片 切片 切片/组，进行单因素方差分析；####p < 0.0001 ， 曾001， 盠方差分析；####p < 0.0001 ， 曾001， 曾001， 与是****p < 0.0001 与D12 Ctrl 相比）。 b Репрезентативные изображения и количественная оценка срезов сердца, окрашенных трихромом Массона (масштабная = 1,000) D. 2 Ctrl, D12 TD me D12 MC), 9 (D12 MT) срезов от разных свиней / группы, один- способ ANOVA; по сравнению с D12 Ctrl). b Ko nga whakaahua tohu me te ine o nga waahanga ngakau kua pokea ki te trichrome a Masson (pae tauine = 500 µm) (n = 10 (D0, D12 Ctrl, D12 TD me D12 MC), 9 (D12 MT) nga waahanga mai i nga poaka rereke/rōpū, kotahi tikanga ANOVA; ####00 <0. .0001 whakaritea ki D12 Ctrl).Ko nga pae hapa e tohu ana i te toharite ± inenga paerewa.
Ka mutu, ko te kaha o te CTCM ki te peehi i te hypertrophy ngakau i aromatawaihia ma te whakanui ake i te toronga o te kiko ngakau.I roto i te CTCM, ka piki ake te pehanga o te ruma hau teitei mai i te 80 mmHg ki te 80 mmHg.Toi.(totoro noa) ki te 140 mmHg Art.(Whakaahua 6a).He rite tenei ki te 32% te piki ake o te toronga (Fig. 6b), i whakaatuhia i mua ko te totoro paheketanga e tika ana mo nga wahanga ngakau ki te whakatutuki i te roa o te sarcomere rite ki tera i kitea i te hypertrophy.Ko te toronga me te tere o te kiko ngakau i te wa e whakaheke ana me te whakangawari ka noho tonu i roto i nga ra e ono o te ahurea (Fig. 6c).Ko te kiko o te ngakau mai i nga tikanga MT i tukuna ki te totoro noa (MT (Normal)) me nga tikanga overstretch (MT (OS)) mo nga ra e ono.I muri i nga ra e wha i roto i te ahurea, ko te hypertrophic biomarker NT-ProBNP i tino whakanuia i roto i te reo i raro i nga tikanga MT (OS) i whakaritea ki nga tikanga MT (noa) (Fig. 7a).I tua atu, i muri i nga ra e ono o te whakatipu, ka tino piki ake te rahi o te pūtau i roto i te MT (OS) (Fig. 7b) ki nga waahanga o te ngakau MT (noa).I tua atu, ko te whakawhitinga karihi NFATC4 i tino piki ake i roto i nga kopa kua pakaru (Fig. 7c).Ko enei hua e whakaatu ana i te ahunga whakamua o te whakatikatika pathological i muri i te hyperdistension me te tautoko i te ariā ka taea te whakamahi i te taputapu CTCM hei turanga ki te ako i te tohu tohu hypertrophy cardiac totoro.
Ko nga tohu o te pehanga o te ruma hau, te pehanga o te ruuma wai, me nga inenga nekehanga kiko e whakapumau ana ka huri te pehanga o te ruma i te pehanga o te ruma wai, ka puta he nekehanga o te poro kiko.b E tohu ana i te ōrau totoro me nga ānau tere toronga mo nga wahanga kiko totoro (karaka) me te toronga nui (puru).c Te kauwhata pae e whakaatu ana i te wa huringa (n = 19 poro mo ia roopu, mai i nga poaka rereke), te wa whakaheke (n = 18-19 nga poro mo ia roopu, mai i nga poaka rereke), te wa whakangawari (n = 19 nga poro mo ia roopu, mai i nga poaka rereke) ), te kaha o te nekehanga o te kiko (n = 14 poro/rōpū, mai i nga poaka rereke, te tere o te poaka) n = 14 (D0), 15 (D6) ) nga waahanga/rōpū) mai i nga poaka rereke), te whakamatautau-t-a-akonga e rua-hiku kaore he rereketanga nui i roto i tetahi tawhā, e tohu ana ka noho tonu enei tawhā i roto i nga ra 6 o te ahurea me te ngaohiko.Ko nga pae hapa e tohu ana i te toharite ± inenga paerewa.
he kauwhata Pae te inenga o te kukū NT-ProBNP i roto i te pāpāho ahurea mai i nga poro o te ngakau i whakatipuhia i raro i te MT totoro noa (Norm) me te overstretching (OS) tikanga (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, me D4 MTOS) poro/rōpū mai i nga poaka rereke, Ka mahia te ANOVA e rua; **p <0.01 he kauwhata Pae te inenga o te kukū NT-ProBNP i roto i te pāpāho ahurea mai i nga poro ngakau i whakatipuhia i raro i te MT totoro noa (Norm) me te overstretching (OS) tikanga (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, me D4 MTOS) poro/rōpū mai i nga poaka rereke, Ka mahia te ANOVA e rua-ara; **p <0.01 ki te totoro noa).Histogram ine o te kukū NT-ProBNP i roto i te reo ahurea mai i nga poro o te ngakau i mahia i raro i nga tikanga o te toronga MT noa (noa) ranei overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm, me D4) .MTOS) poro / roopu mai i nga poaka rereke, ka mahia te tātaritanga-rua o te rereketanga;**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p <0.01 ka whakaritea ki te totoro noa). a 在MT 正常拉伸(Norm) 或过度拉伸(OS) 条件下培养的心脏切片培养基中NT-ProBNP 浓度的浓度的心脏切片培养基中NT-ProBNP 浓度的浓度的2 Norm)、3（D2 MTOS、D4 MTNorm 和D4 MTOS）来自不同猪的切片/组，进行双向方差分析；**与正伔；**与正伔；**与正伔）与正伔，与正帉。 he inenga o te kukū NT-ProBNP i roto i nga poro o te ngakau i mahia i raro i te MT toronga noa (Norm) ranei nga tikanga whakaroa (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm和D4 MTOS) mai i nga momo 猪的切片/组，可以双可受可受可以双合, p <0.01).histogram Te inenga o nga kuhanga NT-ProBNP i roto i nga poro o te ngakau i whakatipuhia i raro i nga tikanga o te toronga MT noa (tikanga) ranei overstretch (OS) (n = 4 (D2 MTNorm), 3 (D2 MTOS, D4 MTNorm) me D4 MTOS) poro/rōpū mai i nga poaka rereke, te tātaritanga-rua o te rereketanga;**p < 0,01 по сравнению с нормальным растяжением). **p <0.01 ka whakaritea ki te totoro noa). b He whakaahua kanohi mo nga poro ngakau kua pokea ki te troponin-T me te WGA (maui) me te ine rahi o te pūtau (matau) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) pūtau/rōpū mai i nga poro 10 rereke mai i nga poaka rereke, Ka mahia te whakamatautau-t-a-akonga-rua; ****p <0.0001 ki te totoro noa). b Ko nga whakaahua mo nga poro o te ngakau kua pokea ki te troponin-T me te WGA (taha maui) me te ine rahi o te pūtau (matau) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) pūtau/rōpū mai i nga poro 10 rereke mai i nga poaka rereke, Ka mahia te whakamatautau-t-a-akonga-rua; ****p <0.0001 ki te totoro noa). b Репрезентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) и количественного опленик (раследца) 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) клеток/группу из 10 разных срезов от разных свиней, два- проводится хвостовой срезов от разных свиней, два- проводится хвостовой t-крид **** ; сравнению с нормальным растяжением). b Ko nga whakaahua o nga wahanga ngakau kua pokea ki te troponin-T me te AZP (taha maui) me te ine rahi o te pūtau (matau) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) pūtau/rōpū mai i nga waahanga 10 rereke mai i nga poaka rereke, i mahia te whakamatautau-t a te tauira; ****p <0.001 ki te riaka noa). b 用肌钙蛋白-T 和WGA（左）和细胞大小量化（右）染色的心脏切片的代表性（小量化（右）染色的心脏切片的代表性（（n（图图）自不同猪的10 个不同切片的369（D6 MTNorm）细胞/组，两进行有尾学生t 检验；与曉正0. ）. b Ko nga whakaahua o nga poro o te ngakau kua pokea ki te calcarein-T me te WGA (maui) me te rahi o te pūtau (matau) (n = 330 (D6 MTOS), 369 mai i nga poro rereke 10 (D6 MTNorm)) Pūtau/组，两方法有尾学生t whakamātautau；00 noa). b Репрезентативные изображения срезов сердца, окрашенных тропонином-Т и АЗП (слева) и количественная оцленная оцленка (расленка) 6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) из 10 различных срезов от разных свиней Клетки/группа, двусторонние критерий Стьюдента0, ****0p Стьюдента; льным растяжением). b Ko nga whakaahua o nga wahanga ngakau kua pokea ki te troponin-T me te AZP (taha maui) me te inenga o te rahi o te pūtau (matau) (n = 330 (D6 MTOS), 369 (D6 MTNorm) mai i te 10 nga waahanga rereke mai i nga poaka rereke) Nga pūtau/rōpū, te paearu rua-hiku Te tauira t;****p <0.0001 whakaritea ki te riaka noa). c Nga whakaahua kanohi mo te ra 0 me te ra 6 Nga poro o te ngakau MTOS kua tohuhia mo te troponin-T me te NFATC4 me te inenga o te whakawhitinga o te NFATC4 ki te karihi o CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) poro/rōpū mai i nga poaka rereke, Ka mahia te whakamatautau-t-a-akonga-rua; *p <0.05). c Nga whakaahua kanohi mo te ra 0 me te ra 6 Nga poro ngakau MTOS kua immunolabeled mo te troponin-T me te NFATC4 me te inenga o te whakawhiti o te NFATC4 ki te karihi o CMs (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) poro/rōpū mai i nga poaka rereke , Ka mahia te whakamatautau-t-a-aakonga-rua; *p <0.05). c Репрезентативные изображения для срезов сердца 0 и 6 дней MTOS, иммуномеченых для тропонина-Т и NFATC4, и колкацяч FATC4 в ядра кавернозных клеток (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срезов/группу от разных свиней , выполняется двустонюнид двустонюнид *t. c Ko nga whakaahua kanohi mo nga wahanga ngakau i nga ra 0 me te 6 MTOS, kua tohuhia mo te troponin-T me te NFATC4, me te inenga o te whakawhitinga NFATC4 i roto i te karihi o nga ruma o te ana (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) poro/rōpū mai i nga poaka rereke) i mahi i te whakamatautau-t a te tauira;*p <0.05). c 用于肌钙蛋白-T 和NFATC4 免疫标记的第0 天和第6 天MTOS 心脏切片的代表性图像，代表性图像，于中中文中文易位至CM 细胞核的量化（n = 4 (D0)、3 (D6 MTOS) 切片/组, 进行双尾学生t 检验；*p < 。 c Ko nga whakaahua o te calcanin-T me te NFATC4 immunolabeling 第0天和第6天MTOS poro maau, me te NFATC4 mai i nga rereke NFATC4 易位至CM pūtau karihi的 quantity化 (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) 制生et 电影；*p < 0.05). c Репрезентативные изображения срезов сердца MTOS ki te 0 me te 6 o nga ra ki te иммуномаркировки трононином-Т и NFATC4 me te NFATC4 столка колицнч FATC4 i roto i te CM mai i te разных свиней (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) срез/группа, два- хвостатый t-критерий Стьюдента; *p <0,05). c Ko nga whakaahua o nga porohanga ngakau MTOS i te ra 0 me te 6 mo te troponin-T me te NFATC4 immunolabeling me te inenga o te whakawhitinga NFATC4 i roto i te karihi o CM mai i nga poaka rereke (n = 4 (D0), 3 (D6 MTOS) poro/rōpū, rua-tailed t -criterion Student's; *p <0.05).Ko nga pae hapa e tohu ana i te toharite ± inenga paerewa.
Ko te rangahau mo te whakamaoritanga ngakau e hiahia ana ki nga tauira pūkoro e whakaputa tika ana i te taiao ngakau.I roto i tenei rangahau, i hangaia he taputapu CTCM me te tohu ka taea te whakaihiihi i nga waahanga ultrathin o te ngakau.Kei roto i te punaha CTCM te whakaihiihi hiko hiko me te whakarangatira T3 me te Dex.I te wa e pa ana nga wahanga ngakau porcine ki enei mea, ko to ratau oranga, te tika o te hanganga, te mahi metabolic, me te whakaputanga korero i noho rite tonu ki te kiko o te ngakau hou i muri i nga ra 12 o te ahurea.I tua atu, ko te nui o te toronga o te kiko o te ngakau ka puta te hypertrophy o te ngakau na te hyperextension.I roto i te katoa, ko enei hua ka tautoko i te mahi nui o nga tikanga ahurea ahuwhenua ki te pupuri i te ahua o te ahua o te ngakau me te whakarato i tetahi papa mo te tirotiro tarukino.
He maha nga mea ka whai waahi ki te hanga i tetahi taiao tino pai mo te mahi me te oranga o nga cardiomyocytes.Ko nga mea tino kitea o enei mea e pa ana ki te (1) nga taunekeneke i waenga i nga waea, (2) te whakaongaonga hikohiko, (3) nga mea whakakatakata, me te (4) nga taputapu metabolic.Ko nga taunekeneke-a-tinana-a-tinana-a-a-roto e hiahia ana i nga whatunga ahu-toru uaua o nga momo pūtau maha e tautokona ana e te matrix extracellular.He uaua ki te hanga ano i roto i te vitro nga momo tauwhitinga waea uaua, engari ka taea te whakatutuki ma te whakamahi i te ahua organotypic o nga wahanga ngakau.
Ko te toronga miihini me te whakaihiihi hiko o te cardiomyocytes he mea tino nui mo te pupuri i te ahua o te ngakau33,34,35.Ahakoa kua whakamahia nuitia te whakaihiihi miihini mo te hiPSC-CM te whakamaarama me te matuatanga, he maha nga rangahau huatau i whakamatau i nga mahi whakaihiihi miihini o nga poro ngakau i roto i te ahurea ma te whakamahi i te uta uniaxial.Ko enei rangahau e whakaatu ana ko te utaina miihini uniaxial 2D he painga pai ki te ahua o te ngakau i te wa o te ahurea.I roto i enei rangahau, i utaina nga wahanga o te ngakau ki nga tohanga riipene inerite17, te uta auxotonic raina18, i hangaia ano ranei te huringa ngakau ma te whakamahi i nga urupare a te kaiwhakawhiti kaha me nga puku taumaha.Heoi ano, ka whakamahia e enei tikanga te toronga kiko uniaxial me te kore arotautanga o te taiao, na te mea ka peehia te maha o nga ira ngakau, te kaha o nga ira e pa ana ki nga urupare totoro rerekee.Ko te CTCM e whakaahuatia ana i konei e whakarato ana i te whakaihiihi hiko 3D e whakataurite ana i te huringa ngakau maori i runga i te waa huringa me te toronga tinana (25% totoro, 40% systole, 60% diastole, me te 72 pao ia meneti).Ahakoa ko tenei whakaihiihi miihini e toru-ahua anake kaore i te rawaka ki te pupuri i te pono o te kiko, ko te whakakotahitanga o te whakakatakata me te whakaihiihi miihini ma te whakamahi i te T3 / Dex e tika ana kia mau tonu te oranga o te kiko, te mahi, me te pono.
Ka whai waahi nui nga mea whakakatakata ki te whakarereke i te ahua o te ngakau pakeke.I tohuhia tenei i roto i nga rangahau HiPS-CM i whakaurua a T3 me Dex ki nga paapori ahurea hei whakatere i te maoatanga o nga pūtau.Ka awe pea a T3 i te kawe o nga waikawa amino, te huka me te konupūmā puta noa i nga kiriuhi pūtau36.I tua atu, ko te T3 e whakatairanga ana i te whakaaturanga MHC-α me te whakahekenga MHC-β, e whakatairanga ana i te hanganga o nga myofibrils tere tere i roto i nga cardiomyocytes pakeke i whakaritea ki nga myofibrils puhoi i roto i te CM fetal.Ko te ngoikoretanga o te T3 i roto i nga turoro hypothyroid ka hua te ngaro o nga roopu myofibrillar me te heke o te whanaketanga o te reo37.Ka mahi a Dex i runga i nga kaiwhakawhiwhi glucocorticoid, a kua whakaatuhia ki te whakanui ake i te whakahekenga o te myocardial i roto i nga ngakau parani motuhake;38 ko tenei whakapainga e whakaarohia ana e pa ana ki te paanga ki te urunga a te konupūmā (SOCE) 39,40.I tua atu, ka herea a Dex ki ona kaiwhakawhiwhi, ka puta he urupare intracellular whanui e pehi ana i te mahi aukati me te mumura30.
Ko o maatau hua e tohu ana ko te whakaihiihi a-tinana (MS) i pai ake te mahi ahurea katoa i whakaritea ki a Ctrl, engari i rahua ki te pupuri i te oranga, te hanga tika, me te whakaputa ngakau mo nga ra 12 i roto i te ahurea.Ka whakatauritea ki te Ctrl, ko te taapiri o T3 me Dex ki nga ahurea CTCM (MT) i pai ake te oranga me te pupuri i nga tuhinga tuhi rite, te tika o te hanganga, me te mahi metabolic me te kiko ngakau hou mo nga ra 12.I tua atu, na te whakahaere i te tohu o te toronga o te kiko, i hangaia he tauira hypertrophy cardiac hyperextension-induced ma te whakamahi i te STCM, e whakaatu ana i te kaha o te punaha STCM.Me tohuhia ahakoa ko te whakarereketanga o te ngakau me te fibrosis te nuinga o nga wa ka uru mai nga whekau totika ka taea e nga pūtau hurihanga te whakarato i nga cytokines e tika ana tae atu ki te phagocytosis me etahi atu mea whakahou, ka taea tonu e nga waahanga o te ngakau te ahua o te tukanga fibrotic hei whakautu i te ahotea me te mamae.ki te myofibroblasts.Kua arotakea i mua i tenei tauira porohanga ngakau.Me tohu ka taea te whakarereke i nga tawhā CTCM ma te whakarereke i te pehanga / te kaha hiko me te auau ki te whakataurite i nga ahuatanga maha penei i te tachycardia, bradycardia, me te tautoko tohanga miihini (ngakau kore i utaina).Na tenei ka waiho te punaha hei huarahi mo te whakamatautau tarukino.Ko te kaha o te CTCM ki te whakatauira i te hypertrophy o te ngakau na te kaha o te whakapau kaha ki te whakamatau i tenei punaha mo te rongoa whaiaro.Hei mutunga, ko te rangahau o naianei e whakaatu ana he mea nui te totoro miihini me te whakaihiihi whakakatakata mo te pupuri i te ahurea o nga waahanga kiko ngakau.
Ahakoa ko nga raraunga e whakaatuhia ana i konei ko te CTCM he papa tino pai mo te whakatauira i te myocardium mau tonu, he herenga tenei tikanga ahurea.Ko te herenga matua o te ahurea CTCM ko te tuku i nga taumahatanga miihini hihiko tonu ki runga i nga poro, e aukati ana i te kaha ki te aro turuki i nga wehenga porohanga ngakau i ia huringa.I tua atu, na te iti o nga waahanga o te ngakau (7 mm), he iti te kaha ki te arotake i te mahi systolic i waho o nga punaha ahurea ma te whakamahi i nga puoro kaha tuku iho.I roto i te tuhinga o naianei, ka taea e matou tenei waahanga ma te arotake i te ngaohiko whatu hei tohu mo te mahi kirimana.Heoi ano, me mahi ano tenei herenga, ka whakatikahia pea a muri ake nei ma te whakauru i nga tikanga mo te aro turuki i nga mahi o nga poro ngakau i roto i te ahurea, penei i te mapi whatu ma te whakamahi i nga waikano konupūmā me te ngaohiko-tairongo.Ko tetahi atu herenga o te CTCM ko te tauira mahi karekau e raweke i te ahotea-a-tinana (i mua i te uta me muri mai).I roto i te CTCM, i tukuna te pehanga ki nga huarahi rereke ki te whakaputa i te 25% te toronga tinana i roto i te diastole (te toronga katoa) me te systole (te roa o te whakahekenga i te wa o te whakaongaonga hiko) i roto i nga kopa tino nui.Me whakakorehia tenei herenga i roto i nga hoahoa CTCM a meake nei ma te kaha o te pehanga ki te kiko ngakau mai i nga taha e rua me te whakamahi i nga hononga pehanga-rahi e puta ana i roto i nga ruma o te ngakau.
Ko te whakarereketanga o te totoro-a-roto e whakaatuhia ana i roto i tenei tuhinga he iti noa ki te peehi i nga tohu hyperstretch hypertrophic.No reira, ka taea e tenei tauira te awhina i roto i te ako o te tohu hypertrophic totoro-whakaawehia me te kore e hiahiatia nga ahuatanga whakakatakata, neural ranei (kaore i te noho i tenei punaha).Ko etahi atu rangahau e hiahiatia ana hei whakanui ake i te maha o te CTCM, hei tauira, te mahi tahi me nga pūtau aukati, te hurihanga i nga ahuatanga whakakatakata plasma, me te whakauru i te wa e mahi tahi ana me nga pūtau neuronal ka pai ake te ahua o te whakatauira mate me te CTCM.
Tekau ma toru nga poaka i whakamahia i roto i tenei rangahau.Ko nga mahinga kararehe katoa i mahia i runga i nga aratohu a te umanga, a i whakaaetia e te Whare Wananga o Louisville Institutional Animal Care and Use Committee.Ko te kikorangi aortic i rawhi, ka whakangiha te ngakau ki te 1 L o te cardioplegia horomata (110 mM NaCl, 1.2 mM CaCl2, 16 mM KCl, 16 mM MgCl2, 10 mM NaHCO3, 5 U/mL heparin, pH ki te 7.4); i tiakina nga ngakau i roto i te wairewa cardioplegic tio-makariri tae noa ki te kawe ki te taiwhanga i runga i te hukapapa ko te tikanga <10 min. i tiakina nga ngakau i roto i te wairewa cardioplegic tio-makariri tae noa ki te kawe ki te taiwhanga i runga i te hukapapa ko te tikanga <10 min. сердца хранили в ледяном кардиоплегическом растворе до транспортировки в лабораторию на льду, что обычно занимает <. ka rongoa nga ngakau ki roto i te wairewa cardioplegic tio-makariri tae noa ki te kawe ki te taiwhanga i runga i te hukapapa, ka roa <10 min.将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。将心脏保存在冰冷的心脏停搏液中，直到冰上运送到实验室，通常<10分钟。 Держите сердца в ледяной кардиоплегии до транспортировки в лабораторию на льду, обычно <10 min. Puritia nga ngakau ki runga i te hukapapa mate huka tae noa ki te kawe ki te taiwhanga i runga i te hukapapa, te tikanga <10 min.
I whakawhanakehia te taputapu CTCM i roto i te rorohiko SolidWorks hoahoa awhina rorohiko (CAD).Ko nga ruma ahurea, wehewehe me nga ruma hau he mea hanga ki te kirihou kiriaku kiriaku CNC.Ko te whakakai whakamuri 7mm te whanui he mea hanga ki te polyethylene kiato teitei (HDPE) kei waenganui, he riu o-mowhiti hei whakauru i te whakakai o-mowhiti i whakamahia hei hiri i te panui kei raro.He kirikiri kirika angiangi ka wehe i te ruma ahurea mai i te pereti wehenga.Ko te kiriuhi silicone he tapahi taiaho mai i te pepa silicone matotoru 0.02″, he 35A te pakeke.Ko nga peeke silicone o raro me runga he tapahi taiaho mai i te pepa silicone matotoru 1/16″ me te 50A te pakeke.316L kowiri tira me nga nati pakau ka whakamahia hei whakamau i te paraka me te hanga hiri hau.
He papa taiawhio (PCB) kua whakatapua kia whakauruhia ki te punaha C-PACE-EM.Ko nga turanga honohono miihini Swiss i runga i te PCB e hono ana ki nga hiko kauwhata e nga waea parahi whakakikoruatia ki te hiriwa me nga tira parahi 0-60 kua werohia ki roto i nga hiko.Ka tuuhia te papa taiawhio kua taia ki te uhi o te kaituhi 3D.
Ko te taputapu CTCM e whakahaeretia ana e te kaiwhakatere pneumatic programmable (PPD) e hanga ana i te pehanga tohanga e rite ana ki te huringa ngakau.I te pikinga o te pehanga o roto i te ruma hau, ka piki ake te kiriuhi silicone ngawari, ka pehia te reo i raro i te papanga kiko.Ko te waahi o te kiko ka totorohia e tenei pananga o te wai, ka peehia te roha tinana o te ngakau i te wa o te diastole.I te tihi o te whakangā, ka whakamahia te whakaihiihi hiko i roto i nga hiko graphite, i whakaitihia te pehanga i roto i te ruma hau me te whakaheke i nga waahanga kiko.Kei roto i te putorino he paera hemostatic me te pukoro pehanga kia kitea te pehanga o te punaha hau.Ko te pehanga ka rongohia e te pukoro pehanga ka tukuna ki tetahi kaikohi raraunga e hono ana ki te pona.Ka taea e tenei te aroturuki tonu i te pehanga i roto i te ruma hau.I te wa i tae atu ai te pehanga nui o te ruma (paerewa 80 mmHg, 140 mmHg OS), ka whakahaua te taputapu tango raraunga ki te tuku tohu ki te punaha C-PACE-EM hei whakaputa i te tohu ngaohiko biphasic mo te 2 ms, kua whakaritea ki te 4 V.
I whiwhihia nga wahanga o te ngakau me nga tikanga ahurea i roto i nga puna e 6 i mahia penei: Whakawhitihia nga ngakau hauhake mai i te ipu whakawhiti ki te paepae kei roto te makariri (4° C.) cardioplegia.Ka wehea te ventricle maui ki te mata parakore ka tapahia kia 1-2 cm3.Ko enei poraka kiko i piri ki nga tautoko kiko me te whakapiri kiko ka whakanohoia ki roto i te pati microtome wiriwiri kei roto ko te otinga a Tyrode me te hāora tonu (3 g/L 2,3-butanedione monooxime (BDM), 140 mM NaCl (8.18 g) . ), 6 mM KCl (0.407 M), 6 mM KCl (0.447 m) (0.447 mM) . PES (2.38 g), 1 mM MgCl2 (1 ml 1 M otinga), 1.8 mM CaCl2 (1.8 ml 1 M otinga), tae atu ki te 1 L ddH2O).I whakaritea te microtome wiri ki te tapahi 300 µm poroporo matotoru i te auau o te 80 Hz, te tiwera wiri whakapae o te 2 mm, me te tere o mua o te 0.03 mm/s.I karapotia te kaukau kiko ki te hukapapa kia whakamatao ai te otinga, ka mau tonu te mahana ki te 4°C.Whakawhitihia nga waahanga kiko mai i te pati microtome ki te pati hekitanga kei roto i te wairewa Tyrode whai hāora tonu i runga i te hukapapa tae noa ki te nui o nga waahanga mo te pereti ahurea kotahi.Mo nga ahurea transwell, i piri nga waahanga kiko ki nga tautoko polyurethane 6 mm te whanui me te whakanoho ki te 6 ml o te reo papai (199 reo, 1x ITS taapiri, 10% FBS, 5 ng/ml VEGF, 10 ng/ml FGF-alkaline me te 2X antibiotic-antifungal).Ko te whakaihiihi hiko (10 V, auau 1.2 Hz) i whakamahia ki nga waahanga kiko ma te C-Pace.Mo nga tikanga TD, ka taapirihia te T3 me te Dex hou ki te 100 nM me te 1 μM i ia huringa reo.Ka kukū te reo ki te hāora i mua i te whakakapinga kia toru nga wa ia ra.I whakatipuhia nga waahanga o te kopa i roto i te incubator i te 37°C me te 5% CO2.
Mo nga ahurea CTCM, i tuuhia nga waahanga kiko ki runga i te miihini 3D i hangaia i roto i te rihi Petri kei roto te otinga a Tyrode kua whakarereketia.I hangaia te taputapu ki te whakanui ake i te rahi o te waahanga o te ngakau ma te 25% o te waahi o te mowhiti tautoko.Ka mahia tenei kia kore ai nga wahanga o te ngakau e totoro i muri i te whakawhiti mai i te otinga a Tyrode ki te reo me te wa diastole.Ma te whakamahi i te kapia histoacrylic, ka mau nga waahanga 300 µm te matotoru ki runga i te mowhiti tautoko 7 mm te whanui.Whai muri i te whakapiringa o nga wahanga kiko ki te mowhiti tautoko, tapahia nga waahanga kiko o te taikaha ka whakahoki ano i nga waahanga kiko ki roto i te pati o te otinga Tyrode i runga i te hukapapa (4°C) kia rite ra ano nga waahanga mo te taputapu kotahi.Ko te tapeke wa tukatuka mo nga taputapu katoa kaua e neke ake i te 2 haora.I muri i te whakapiringa o nga wahanga kiko e 6 ki o ratou mowhiti tautoko, ka huihuia te taputapu CTCM.Ko te ruma ahurea CTCM kua whakakiia i mua ki te 21 ml i mua i te waiora.Whakawhitihia nga waahanga kiko ki te ruma ahurea ka ata tango i nga mirumiru hau me te paipa.Ka arahina te wahanga kiko ki roto i te poka ka pehia ata ki te waahi.Hei whakamutunga, tuuhia te potae hiko ki runga i te taputapu ka whakawhiti i te taputapu ki te incubator.Na ka honoa te CTCM ki te ngongo hau me te punaha C-PACE-EM.Ka tuwhera te kaitahuri pneumatic, ka whakatuwherahia e te hiko hau te CTCM.I whirihorahia te punaha C-PACE-EM ki te tuku i te 4 V i te 1.2 Hz i te wa o te tere biphasic mo te 2 ms.E rua nga wa i whakarereketia te reo i te ra, ka huri nga hiko kotahi i te ra kia kore ai e kohia te kauwhata ki runga i nga hiko.Mena e tika ana, ka taea te tango i nga waahanga kiko mai i o raatau puna ahurea ki te pana i nga mirumiru hau kua taka ki raro.Mo nga tikanga maimoatanga MT, i taapiri hou a T3/Dex me ia huringa reo me te 100 nM T3 me te 1 μM Dex.I whakatipuhia nga taputapu CTCM i roto i te incubator i te 37 ° C me te 5% CO2.
Ki te whiwhi i nga huarahi totoro o nga poro o te ngakau, i hangaia he punaha kamera motuhake.He kamera SLR (Canon Rebel T7i, Canon, Tokyo, Japan) i whakamahia me te Navitar Zoom 7000 18-108mm arotahi tonotono (Navitar, San Francisco, CA).I mahia te tirohanga ki te pāmahana rūma i muri i te whakakapi i te reo ki te reo hou.Ka noho te kaamera ki te koki 51°, ka hopukina te ataata ki te 30 papa mo ia hekona.Tuatahi, i whakamahia te rorohiko tuwhera (MUSCLEMOTION43) me te Image-J hei tatau i te nekehanga o nga poro o te ngakau.I hangaia te kanohi ma te whakamahi i te MATLAB (MathWorks, Natick, MA, USA) ki te tautuhi i nga rohe e pai ana ki te patu i nga poro o te ngakau kia kore ai e ngangau.Ko nga kopare kua wehea-a-ringa ka tukuna ki nga whakaahua katoa i roto i te raupapa anga, katahi ka tukuna ki te mono-mai MUSCLEMOTION.Ka whakamahia e te Muscle Motion te kaha toharite o nga pika i ia anga ki te ine i tana nekehanga e pa ana ki te anga tohutoro.I tuhia nga raraunga, i tātarihia, ka whakamahia ki te ine i te wa huringa me te aromatawai i te toronga o te kiko i te wa o te huringa ngakau.Ko te ataata i tuhia i muri i te tukatuka ma te whakamahi i te tātari mamati ota-kore tuatahi.Hei ine i te toronga kiko (peak-to-peak), i mahia te tātaritanga o te tihi-ki-te-te-rangi ki te wehewehe i waenga i nga tihi me nga waka i roto i te tohu kua tuhia.I tua atu, ka mahia te whakamaarama ma te whakamahi i te 6th ota polynomial ki te whakakore i te heke tohu.I whakawhanakehia te waehere papatono i roto i te MATLAB hei whakatau i te nekehanga o te kiko o te ao, te huringa huringa, te wa whakangā, me te wa whakaheke (Waehere Papatono 44).
Mo te wetewete riaka, ma te whakamahi i nga riipene whakaata i hangaia mo te aromatawai totoro miihini, i te tuatahi i tirotirohia e matou nga whakaahua e rua e tohu ana i nga tihi nekehanga (te teitei (runga) me te iti rawa (raro) o te nekehanga) e ai ki te rorohiko MUSCLEMOTION.Na ka wehea e matou nga rohe kiko me te whakamahi i te ahua o te whakamarumaru algorithm ki te kiko kua wehea (Taupiri Pikitia 2a).Ka wehea te kiko kua wehea kia tekau nga papa o raro, ka tatauhia te ahotea o ia mata ma te whakamahi i te wharite e whai ake nei: Riki = (Sup-Sdown)/Sdown, ko te Sup me te Sdown ko nga tawhiti o te ahua mai i te atarangi o runga me raro o te papanga, ia (Taupiri Fig.2b).
Ko nga wahanga o te ngakau i whakaritea ki te 4% paraformaldehyde mo te 48 haora.I whakamarokehia nga kopa pumau i roto i te 10% me te 20% sucrose mo te 1 haora, katahi ki te 30% sucrose mo te po.Ka mau nga wahanga ki roto i te puhui pāmahana tapahi tino pai (OCT pūhui) ka āta whakatotoka i roto i te kaukau isopentane/tio maroke.Whakaorangia nga poraka whakauru OCT ki te -80 °C tae noa ki te wehenga.I whakaritea nga kiriata hei waahanga me te 8 μm te matotoru.
Hei tango i te OCT mai i nga wahanga ngakau, whakamahana i nga kiriata i runga i te poraka whakamahana i te 95 °C mo te 5 meneti.Tāpirihia te 1 ml PBS ki ia kiriata me te whakamomi mo te 30 meneti i te pāmahana rūma, ka uru ki nga waahanga ma te whakanoho i te 0.1% Triton-X ki te PBS mo te 15 meneti i te pāmahana rūma.Hei aukati i nga paturopi kore-motuhake kia herea ki te tauira, taapirihia te 1 ml o te otinga BSA 3% ki nga kiriata me te whakawhao mo te 1 haora i te pāmahana rūma.Ka tangohia te BSA ka horoia nga kiriata ki te PBS.Tohua ia tauira ki te pene.Ko nga antibodies tuatahi (diluted 1:200 i roto i te 1% BSA) (connexin 43 (Abcam; #AB11370), NFATC4 (Abcam; #AB99431) me te troponin-T (Thermo Scientific; #MA5-12960) i tapirihia i roto i te 90 meneti, katahi ka whakauruhia ki te 1 kiore tuarua (%2000) kiore i te 100000000000000. Thermo Scientific; #A16079), ki te rapeti Alexa Fluor 594 (Thermo Scientific; #T6391) mo tetahi atu 90 meneti I horoia kia 3 nga wa ki te PBS Hei wehewehe i te tae o te whainga mai i te papamuri, ka whakamahia e matou ko te antibody tuarua anake hei mana. Ka mutu, ka taapirihia he paru karihi DAPI me te whakamarumaru raima. te whakanui) me te karu a Keyence me te 40x te whakanui.
Ko te WGA-Alexa Fluor 555 (Thermo Scientific; #W32464) i te 5 μg / ml i roto i te PBS i whakamahia mo te taatai ​​WGA me te tono ki nga waahanga kua whakaritea mo te 30 meneti i te pāmahana rūma.Ka horoia nga kiriata ki te PBS, ka tapirihia te pango Sudan ki ia kiriata, ka whakamakuku mo te 30 meneti.Ka horoia nga kiriata ki te PBS me te whakaurunga whakaurunga vectashield.I whakaatahia nga kiriata i runga i te miihini Keyence i te 40x te whakanui.
I tangohia te OCT mai i nga tauira i whakaahuatia i runga ake nei.Whai muri i te tango i te OCT, rukuhia nga kiriata ki te otinga a Bouin mo te po.Ka horoia nga kiriata ki te wai makuku mo te 1 haora katahi ka tuu ki roto i te wairewa fuchsin waikawa aloe Bibrich mo te 10 meneti.Na ka horoia nga kiriata ki te wai makuku ka whakanohoia ki roto i te otinga o te 5% phosphomolybdenum/5% waikawa phosphotungstic mo te 10 meneti.Ki te kore e horoi, whakawhiti tika nga kiriata ki te wairewa puru aniline mo te 15 meneti.Katahi ka horoia nga kiriata ki te wai makuku, ka maka ki roto i te wairewa waikawa acetic 1% mo te 2 meneti.I whakamarokehia nga kiriata ki te 200 N te waihano, ka whakawhitia ki te xylene.I whakaatahia nga kiriata ma te whakamahi i te miihini Keyence me te whainga 10x.I inehia te paheketanga o te rohe fibrosis ma te whakamahi i te rorohiko Keyence Analyzer.
CyQUANT™ MTT Cell Viability Assay (Invitrogen, Carlsbad, CA), nama putumōhio V13154, e ai ki te kawa a te kaihanga me etahi whakarereketanga.Ina koa, i whakamahia he whiu pokanga e 6 mm te diameter hei whakarite kia rite te rahi o te kiko i te wa o te tātaritanga MTT.I whakakikoruatia takitahi nga kopa ki roto i nga puna o te pereti 12-puna kei roto te tïpako MTT e ai ki nga tikanga a te kaihanga.Ka whakakororia nga wahanga ki te 37° C. mo te 3 haora, ka whakakorikori te kiko ora i te tïpako MTT hei hanga i te puhui formazan papura.Whakakapia te wairewa MTT ki te 1 ml DMSO ka whakamakuku ki te 37 °C mo te 15 meneti hei tango i te formazan papura mai i nga wahanga ngakau.I diluted tauira 1:10 i DMSO i roto i te 96-pai marama pereti raro, me te kaha tae papura i whanganga i 570 nm te whakamahi i te kaipānui pereti Cytation (BioTek).I whakaritea nga panui ki te taumaha o ia wahanga o te ngakau.
I whakakapihia nga papaaaaaaaa maaa maaa ki te paanui kei roto te 1 μCi/ml [5-3H]-glucose (Moravek Biochemicals, Brea, CA, USA) mo te whakamaarama mo te whakamahi huka pera i te korero o mua.I muri i te 4 haora o te hekitanga, tāpirihia te 100 µl o te reo ki te ngongo microcentrifuge tuwhera kei roto te 100 µl o te 0.2 N HCl.Katahi ka tuuhia te ngongo ki roto i te ngongo ngongo e 500 μl o te dH2O hei whakaeto [3H]2O mo te 72 haora i te 37°C.Na ka tango i te ngongo microcentrifuge mai i te ngongo scintillation me te tapiri 10 ml o te wai scintillation.I mahia nga tatauranga whakahiatotanga ma te whakamahi i te Tri-Carb 2900TR kaaatari whakamaarama wai (Packard Bioscience Company, Meriden, CT, USA).Ko te whakamahinga o te huka ka tatauhia ma te whai whakaaro ki te mahi motuhake [5-3H]-glucose, te taurite kore me te papamuri, te waimehatanga o te [5-3H]-ki te huka kore tapanga, me te pai o te whakaatete ki te scintillation.Ko nga raraunga ka whakatauhia ki te papatipu o nga waahanga o te ngakau.
Whai muri i te whakakotahitanga o te kiko i Trizol, i wehea te RNA mai i nga wahanga ngakau ma te whakamahi i te Qiagen miRNeasy Micro Kit #210874 e ai ki te kawa a te kaihanga.Ko te whakarite whare pukapuka RNAsec, te raupapa me te tātari raraunga i mahia penei:
Ko te 1 μg o te RNA mo ia tauira i whakamahia hei rauemi timatanga mo te whakarite i te whare pukapuka RNA.I hangaia nga whare pukapuka raupapa ma te whakamahi i te NEBNext UltraTM RNA Library Preparation Kit mo Illumina (NEB, USA) i muri i nga taunakitanga a te kaihanga, me te taapiri i nga tohu tohu ki nga raupapa huanga mo ia tauira.I te wa poto, i purea te mRNA mai i te RNA katoa ma te whakamahi i nga pirepire autō e piri ana ki te poly-T oligonucleotides.Ka whakahaeretia te wehewehenga ma te whakamahi i nga katoonare i te pāmahana teitei i roto i te NEBNext First Strand Synthesis Reaction Buffer (5X).I whakahiatotia te whenu tuatahi cDNA ma te whakamahi i nga matapae hexamer tuatahi me te M-MuLV whakamuri transcriptase (RNase H-).Ko te whenu tuarua cDNA ka whakahiatotia ma te whakamahi i te DNA polymerase I me te RNase H. Ko nga toenga o runga ka huri ki nga pito puhuki na te mahi exonuclease/polymerase.I muri i te adenylation o te 3′ mutunga o te wahanga DNA, ka piri he NEBNext Adapter me te hanga makawe makawe ki a ia hei whakarite mo te whakakotahitanga.Mo te whiriwhiringa o nga kongakonga cDNA o te roa pai ake 150-200 bp.i purea nga kongakonga whare pukapuka ma te whakamahi i te punaha AMPure XP (Beckman Coulter, Beverly, USA).Na, 3 μl USER Enzyme (NEB, USA) me te cDNA kua tohua te rahi kua herea me te urutau ka whakamahia mo te 15 meneti i te 37°C ka 5 meneti i te 95°C i mua i te PCR.Ka mahia te PCR ma te whakamahi i te Phusion High-Fidelity DNA polymerase, nga tohu tuatahi PCR mo te ao, me nga tohu tuatahi (X).Ka mutu, ka purea nga hua PCR (Pūnaha AMPure XP) ka aromatawaihia te kounga o te whare pukapuka i runga i te punaha Agilent Bioanalyzer 2100.Ko te whare pukapuka cDNA ka raupapahia ma te whakamahi i te raupapa Novaseq.Ko nga konae atahanga raw mai i Illumina i hurihia ki nga panui mata ma te whakamahi i te Waea Papanga CASAVA.Ka penapenahia nga raraunga mata ki roto i nga konae whakatakotoranga FASTQ(fq) kei roto nga raupapa panui me nga kounga turanga e rite ana.Tīpakohia HISAT2 ki te whakataurite i te raupapa raupapa kua tātarihia ki te tohutoro tohutoro Sscrofa11.1.I te nuinga o te waa, kei te tautoko a HISAT2 i nga momo momo momo, tae atu ki nga momo ira nui ake i te 4 piriona nga turanga, ka whakatauhia nga uara taunoa mo te nuinga o nga tawhā.Ka taea te whakahāngai i nga panui mai i nga raraunga RNA Seq ma te whakamahi i te HISAT2, te punaha tere e waatea ana i tenei wa, he rite, he pai ake ranei te tika i era atu tikanga.
Ko te nui o nga tuhinga e whakaatu tika ana i te taumata o te whakaaturanga ira.Ka aromatawaihia nga taumata whakaputanga ira ma te maha o nga tuhinga (te tatau raupapa) e hono ana ki te ira, exons ranei.He rite te maha o nga panui ki nga taumata whakaputanga ira, te roa o te ira, me te hohonu o te raupapa.Ko te FPKM (nga kongakonga mo ia mano takirua takirua o nga tuhinga kua raupapahia mo ia miriona takirua turanga) i tatauhia ka whakatauhia nga uara-P o te korero rereke ma te whakamahi i te kete DESeq2.Na ka tatauhia e matou te reiti kitenga teka (FDR) mo ia uara P ma te whakamahi i te tikanga Benjamini-Hochberg9 i runga i te hanga-R-mahi "p.adjust".
Ko te RNA i wehea mai i nga waahanga ngakau i hurihia ki te cDNA i te kukū o te 200 ng / μl ma te whakamahi i te SuperScript IV Vilo Master mix mai i Thermo (Thermo, cat. No. 11756050).I mahia RT-PCR ine ma te whakamahi i te Applied Biosystems Endura Plate Microamp 384-pai maramara pereti tauhohenga (Thermo, cat. No. 4483319) me te microamp whatu adhesive (Thermo, cat. No. 4311971).Ko te ranunga tauhohenga he 5 µl Taqman Fast Advanced Master mix (Thermo, cat # 4444557), 0.5 µl Taqman Primer me te 3.5 µl H2O i konatunatua mo ia puna.I whakahaerehia nga huringa qPCR paerewa, ka inehia nga uara CT ma te whakamahi i te Applied Biosystems Quantstudio 5 taputapu PCR-wa-tuu (384-poka kōwae; hua # A28135).I hokona mai nga papa tuatahi o Taqman mai i Thermo (GAPDH (Ss03375629_u1), PARP12 (Ss06908795_m1), PKDCC (Ss06903874_m1), CYGB (Ss06900188_m1), RGL1 (Ss09_1000_m1) ), GATA4 (Ss03383805_u1), GJA1 (Ss03374839_u1), COL1A2 (Ss03375009_u1 ), COL3A1 (Ss04323794_m1), ACTA2 (Ss04245588_m1) Ko nga ira tauira katoa o te CTkeeping ira.
Ko te tukunga pāpāho o NT-ProBNP i aromatawaihia ma te whakamahi i te kete NT-ProBNP (poaka) (Cat. Nama MBS2086979, MyBioSource) e ai ki te kawa a te kaihanga.He poto, 250 µl o ia tauira me te paerewa ka taapirihia ki ia puna.I muri tonu i te taapiri i te tauira, taapirihia te 50 µl o Assay Reagent A ki ia puna.Me ruru ata te pereti ka hiri ki te hiri.Katahi ka whakakororia nga papa ki te 37°C mo te 1 haora.Na ka whakapoipohia te wairewa ka horoi i nga puna kia 4 nga wa ki te 350 µl o te wairewa horoi horoi 1X, ka whakamakuku i te wairewa horoi mo te 1-2 meneti ia wa.Katahi ka tapirihia te 100 µl o Assay Reagent B mo ia poka ka hiritia ki te pereti hiri.I wiriwiri marietia te papa, ka whakakororia i te 37°C mo te 30 meneti.Horoihia te wairewa ka horoi kia 5 nga wa ki te 350 µl o te wairewa horoi 1X.Taapirihia te 90 µl o te otinga tïpako ki ia puna ka hiritia te pereti.Whakanuia te pereti i te 37°C mo te 10-20 meneti.Taapirihia he 50 µl Whakamutu Whakamutua ki ia puna.I ine tonu te pereti ma te whakamahi i te Cytation (BioTek) panui pereti kua whakaritea ki te 450 nm.
I mahia nga tātari hiko ki te whiriwhiri i nga rahi o nga roopu ka whai mana >80% ki te kite i te huringa tino 10% o te tawhā me te reiti hapa Momo I 5%. I mahia nga tātari hiko ki te whiriwhiri i nga rahi o nga roopu ka whai mana >80% ki te kite i te huringa tino 10% o te tawhā me te reiti hapa Momo I 5%. Анализ мощности был выполнен для выбора размеров групп, которые обеспечат >80% мощности для обнаружения 10% раметра с 5% частотой ошибок типа I. I mahia te wetewete hiko ki te kowhiri i nga rahinga roopu ka whai mana >80% ki te kite i te 10% huringa tawhā tino me te reiti hapa Momo I 5%.进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I功效以检测参数中10％绝对变化和5％I小田金。进行功效分析以选择将提供> 80％功效以检测参数中10％绝对变化和5％I功效以检测参数中10％绝对变化和5％I小田金。 Был проведен анализ мощности для выбора размера группы, который обеспечил бы > 80% мощности для обнарузлегения обнаругеления я параметров и 5% частоты ошибок типа I. I mahia he tātari hiko ki te kowhiri i te rahi o te roopu ka whai mana > 80% ki te kite i te 10% huringa tawhā tino me te 5% te reeti hapa momo I.I whiriwhiria matapōkeretia i mua i te whakamātautau.He matapo nga tātaritanga katoa, ka wetewetehia nga tauira i muri i te tātaritanga o nga raraunga katoa.I whakamahia te rorohiko GraphPad Prism (San Diego, CA) ki te mahi i nga tātari tatauranga katoa. Mo nga tatauranga katoa, i whakaarohia nga uara-p he mea nui ki nga uara <0.05. Mo nga tatauranga katoa, i kiia nga uara-p he mea nui ki nga uara <0.05. Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Mo nga tatauranga katoa, i kiia nga uara-p he mea nui ki nga uara <0.05.对于所有统计数据，p 值在会<0.05 时被认为是显着的。对于所有统计数据，p 值在会<0.05 时被认为是显着的。 Для всей статистики p-значения считались значимыми при значениях <0,05. Mo nga tatauranga katoa, i kiia nga uara-p he mea nui ki nga uara <0.05.I mahia te whakamatautau-t a te tauira-rua ki runga i nga raraunga me nga whakataurite e 2 anake.I whakamahia te ANOVA kotahi-ara, rua-ara ranei hei whakatau i te hiranga i waenga i nga roopu maha.I te wa e mahi ana i nga whakamatautau post hoc, i whakamahia te whakatikatika a Tukey ki te whakaatu mo nga whakataurite maha.Ko nga raraunga RNAsec he whakaaro tauanga motuhake ina tatau ana i te FDR me te p.adjust pera i te korero i te waahanga Tikanga.
Mo te roanga atu o nga korero mo te hoahoa ako, tirohia te Ripoata Rangahau Taiao e hono ana ki tenei tuhinga.